EA014384B1 - Промывочный буровой раствор, содержащий гидрофобин - Google Patents

Промывочный буровой раствор, содержащий гидрофобин Download PDF

Info

Publication number
EA014384B1
EA014384B1 EA200702157A EA200702157A EA014384B1 EA 014384 B1 EA014384 B1 EA 014384B1 EA 200702157 A EA200702157 A EA 200702157A EA 200702157 A EA200702157 A EA 200702157A EA 014384 B1 EA014384 B1 EA 014384B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
bie
hydrophobin
zeg
azp
thr
Prior art date
Application number
EA200702157A
Other languages
English (en)
Other versions
EA200702157A1 (ru
Inventor
Маркус Гуцманн
Якиан Лиу
Ульф Баус
Original Assignee
Басф Акциенгезелльшафт
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Басф Акциенгезелльшафт filed Critical Басф Акциенгезелльшафт
Priority claimed from PCT/EP2006/061134 external-priority patent/WO2006103253A2/de
Publication of EA200702157A1 publication Critical patent/EA200702157A1/ru
Publication of EA014384B1 publication Critical patent/EA014384B1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C10—PETROLEUM, GAS OR COKE INDUSTRIES; TECHNICAL GASES CONTAINING CARBON MONOXIDE; FUELS; LUBRICANTS; PEAT
    • C10G—CRACKING HYDROCARBON OILS; PRODUCTION OF LIQUID HYDROCARBON MIXTURES, e.g. BY DESTRUCTIVE HYDROGENATION, OLIGOMERISATION, POLYMERISATION; RECOVERY OF HYDROCARBON OILS FROM OIL-SHALE, OIL-SAND, OR GASES; REFINING MIXTURES MAINLY CONSISTING OF HYDROCARBONS; REFORMING OF NAPHTHA; MINERAL WAXES
    • C10G33/00—Dewatering or demulsification of hydrocarbon oils
    • C10G33/04—Dewatering or demulsification of hydrocarbon oils with chemical means
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D17/00—Separation of liquids, not provided for elsewhere, e.g. by thermal diffusion
    • B01D17/02—Separation of non-miscible liquids
    • B01D17/04—Breaking emulsions
    • B01D17/042—Breaking emulsions by changing the temperature
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D17/00—Separation of liquids, not provided for elsewhere, e.g. by thermal diffusion
    • B01D17/02—Separation of non-miscible liquids
    • B01D17/04—Breaking emulsions
    • B01D17/047—Breaking emulsions with separation aids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/37—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from fungi
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C10—PETROLEUM, GAS OR COKE INDUSTRIES; TECHNICAL GASES CONTAINING CARBON MONOXIDE; FUELS; LUBRICANTS; PEAT
    • C10L—FUELS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NATURAL GAS; SYNTHETIC NATURAL GAS OBTAINED BY PROCESSES NOT COVERED BY SUBCLASSES C10G, C10K; LIQUEFIED PETROLEUM GAS; ADDING MATERIALS TO FUELS OR FIRES TO REDUCE SMOKE OR UNDESIRABLE DEPOSITS OR TO FACILITATE SOOT REMOVAL; FIRELIGHTERS
    • C10L1/00—Liquid carbonaceous fuels
    • C10L1/10—Liquid carbonaceous fuels containing additives
    • C10L1/14—Organic compounds
    • C10L1/22—Organic compounds containing nitrogen
    • C10L1/234—Macromolecular compounds
    • C10L1/238—Macromolecular compounds obtained otherwise than by reactions involving only carbon-to-carbon unsaturated bonds
    • C10L1/2381—Macromolecular compounds obtained otherwise than by reactions involving only carbon-to-carbon unsaturated bonds polyamides; polyamide-esters; polyurethane, polyureas
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C10—PETROLEUM, GAS OR COKE INDUSTRIES; TECHNICAL GASES CONTAINING CARBON MONOXIDE; FUELS; LUBRICANTS; PEAT
    • C10L—FUELS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NATURAL GAS; SYNTHETIC NATURAL GAS OBTAINED BY PROCESSES NOT COVERED BY SUBCLASSES C10G, C10K; LIQUEFIED PETROLEUM GAS; ADDING MATERIALS TO FUELS OR FIRES TO REDUCE SMOKE OR UNDESIRABLE DEPOSITS OR TO FACILITATE SOOT REMOVAL; FIRELIGHTERS
    • C10L1/00—Liquid carbonaceous fuels
    • C10L1/10—Liquid carbonaceous fuels containing additives
    • C10L1/14—Organic compounds
    • C10L1/24—Organic compounds containing sulfur, selenium and/or tellurium
    • C10L1/2462—Organic compounds containing sulfur, selenium and/or tellurium macromolecular compounds
    • C10L1/2475—Organic compounds containing sulfur, selenium and/or tellurium macromolecular compounds obtained otherwise than by reactions only involving unsaturated carbon to carbon bonds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C10—PETROLEUM, GAS OR COKE INDUSTRIES; TECHNICAL GASES CONTAINING CARBON MONOXIDE; FUELS; LUBRICANTS; PEAT
    • C10L—FUELS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NATURAL GAS; SYNTHETIC NATURAL GAS OBTAINED BY PROCESSES NOT COVERED BY SUBCLASSES C10G, C10K; LIQUEFIED PETROLEUM GAS; ADDING MATERIALS TO FUELS OR FIRES TO REDUCE SMOKE OR UNDESIRABLE DEPOSITS OR TO FACILITATE SOOT REMOVAL; FIRELIGHTERS
    • C10L1/00—Liquid carbonaceous fuels
    • C10L1/10—Liquid carbonaceous fuels containing additives
    • C10L1/14—Organic compounds
    • C10L1/26—Organic compounds containing phosphorus
    • C10L1/2666—Organic compounds containing phosphorus macromolecular compounds
    • C10L1/2683—Organic compounds containing phosphorus macromolecular compounds obtained otherwise than by reactions only involving unsaturated carbon to carbon bonds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Thermal Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Production Of Liquid Hydrocarbon Mixture For Refining Petroleum (AREA)
  • Extraction Or Liquid Replacement (AREA)
  • Detergent Compositions (AREA)
  • Earth Drilling (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)

Abstract

Данное изобретение относится к применению по меньшей мере одного гидрофобина или по меньшей мере одного производного гидрофобина в качестве вспомогательного средства для промывочного бурового раствора.

Description

Данное изобретение относится к промывочному буровому раствору, содержащему гидрофобии или его производное, а также к применению гидрофобина в качестве вспомогательного средства для промывочного бурового раствора.
Промывочные буровые растворы в целом имеют задачей упрощать трудный процесс бурения при освоении новых месторождений, например, нефти или природного газа. При этом должно оказываться содействие как собственно процессу бурения, так и перемещению получающихся при этом кусочков горных пород. Буровое долото и буровые штанги нужно смазывать и охлаждать. Далее, гидростатическое давление месторождения нужно компенсировать, отчего зачастую используются промывочные буровые растворы с повышенным удельным весом. Также стенки буровой скважины должны закрепляться обсадными трубами.
Важными свойствами используемых коммерческих промывочных буровых растворов являются также подходящие вязкость и реологические свойства, плотность, термостабильность, способность к эмульгированию и диспергированию, рН-контроль, а также не в последнюю очередь в высокой степени экологическая чистота.
Так как поиски новых источников сырья продолжаются на земле в различных местах, причем часто нужно осуществлять глубокое бурение также и в недоступных местностях, например далеко от морского берега или посреди дремучего леса, существует потребность в новых вспомогательных средствах для бурения, в частности вспомогательных средствах для промывочного бурового раствора, которые отвечали бы высоким техническим требованиям, а также получение которых не требовало бы больших затрат и могло бы осуществляться на месте, Исходя из этого, промывочный буровой раствор должен также быть устойчивым при хранении и может использоваться спустя продолжительное время.
Далее, особое значение имеет то, чтобы промывочный буровой раствор при попадании в окружающую среду не приводил к стойкому повреждению флоры и фауны.
Гидрофобины представляют собой белки с небольшим молекулярным весом, состоящие из 100-150 аминокислот, которые могут быть получены из филаментозных грибов, например, из δοϊιίζορίινίΐιιιη соттипе. Они имеют, как правило, 8 цистеиновых звеньев в молекуле.
Гидрофобины имеют заметно выраженное химическое сродство к поверхности раздела фаз и годятся поэтому для нанесения покрытий на поверхности, например, с целью изменения свойств граничных поверхностей за счет образования амфифатических мембран. Так, например, гидрофобинами можно покрывать полимер тефлон, получая при этом гидрофильную поверхность.
Гидрофобины могут выделяться из природных источников. Далее, известны синтетические способы получения гидрофобинов и их производных.
Например, в немецкой патентной заявке ΌΕ 102005007480.4 описан способ получения гидрофобинов и их производных.
К настоящему времени уже предложено использование гидрофобинов для различных целей.
Так в ЕР-А 05016962 описывается применение белков для улучшения разделения фаз в смесях масло/вода или топливо/вода. Специалисту известно, что некоторые амфифильные молекулы в зависимости от используемой концентрации и окружающей среды могут действовать на границу раздела фаз как стабилизирующим образом, так и дестабилизирующим образом.
В XVО 96/41882 сообщается о применении гидрофобинов в качестве эмульгаторов, загустителей, поверхностно-активных веществ, для гидрофилирования гидрофобных поверхностей, для улучшения водостойкости гидрофильных субстратов, для приготовления эмульсий масло-в-воде и вода-в-масле. Далее, предлагается использование в фармацевтике, например, для приготовления мазей или кремов, а также применение в косметических целях, например, для защиты кожи или для изготовления шампуней для волос или ополаскивателей для волос. Кроме того, в νθ 96/41882 описаны композиции, например, для фармацевтического использования, содержащие гидрофобии.
В ЕР-А 1252516 сообщается о нанесении покрытий на окна, контактные линзы, биосенсоры, медицинское оборудование, емкости для проведения экспериментов или емкости для хранения, корпуса судов, твердых частиц или рамы или кузова легковых автомобилей с помощью содержащего гидрофобии раствора при температуре 30-80°С,
В νθ 03/53383 описано применение гидрофобина для обработки кератиновых материалов в косметических целях.
В νθ 03/10331 сообщается, что гидрофобины обладают поверхностно-активными свойствами. Так сообщается о покрытом гидрофобином сенсоре, например, измерительном электроде, с которым связаны не ковалентно другие вещества, например, электроактивные вещества, антитела или энзимы.
В νθ 2004/000880 сообщается о покрытиях поверхностей гидрофобином или гидрофобиноподобными веществами. Далее сообщается о том, что эмульсии масло-в-воде или вода-в-масле могут стабилизироваться добавлением гидрофобинов.
Также в νθ 01/74864, относящемся к гидрофобиноподобным белкам, сообщается, что эти белки могут использоваться для стабилизации дисперсий и эмульсий.
Применение белков для разделения фаз в принципе известно. Так в ОВ 195876 описан способ для расслоения эмульсий вода-в-масле с применением коллоидов. В качестве коллоидов названы, например,
- 1 014384 белки, такие как желатин, казеин, альбумин, или полисахариды, такие как гуммиарабик или трагакантовая камедь.
В 1Р-А 11-169177 сообщается о применении белков с липазной активностью для расслоения эмульсий.
В \νϋ 01/60916 сообщается о применении смесей, не содержащих поверхностно-активные вещества, состоящих по меньшей мере из одного растворимого в воде белка, по меньшей мере одного растворимого в воде полисахарида, а также по меньшей мере одного растворимого в воде полимера, такого как, например, полиэтиленоксид, для различных целей, среди которых было также деэмульгирование сырой нефти.
Однако ни один из процитированных выше источников не упоминал о применении гидрофобинов в качестве вспомогательного средства для промывочных буровых растворов.
Предметом данного изобретения является применение гидрофобина в качестве вспомогательного средства для промывочного бурового раствора, причем гидрофобии, в частности, используется в промывочной жидкости как эмульгатор.
Используемый гидрофобии предпочтительно является при этом слитым гидрофобином, в частности слитым гидрофобином, выбранным из групп, о которых будет сказано ниже: уааб-Ха-бе^А-Ык (8ЕО ΙΌ N0: 20), уааб-Ха-тобА-Ык (8Е0 ΙΌ N0: 22) или уааб-Ха-ЬакП-Ык (8Е0 ΙΌ N0: 24), причем в случае уааб речь может идти также об укороченном партнере слияния уааб' с 20-293 аминокислотами.
Промывочные буровые растворы состоят, как правило, из одной или нескольких жидкостей, таких как, например, вода, сырая нефть и органические добавки или растворители, а также из суспендированных или растворенных твердых веществ. В зависимости от вида главных жидких компонентов различают водные промывочные буровые растворы, промывочные буровые растворы на масляной основе и синтетические промывочные буровые растворы.
В случае промывочных буровых растворов согласно изобретению предпочтительно используется промывочный буровой раствор на масляной основе (например, дизельное топливо, минеральное масло). Также предпочтительно гидрофобии (могут одновременно использоваться также несколько гидрофобинов) используется в количестве от 0,1 до 10.000 част./млн, предпочтительно 1 - 1000 част./млн, наиболее предпочтительно 1-600 част./млн, соответственно, в расчете на всю композицию. Это является одним из преимуществ, что используемые количества гидрофобина заметно меньше, чем у обычных эмульгаторов, которые используются в количестве от 2 до 10 вес.%.
Предпочтительно речь идет о промывочных буровых растворах на масляной основе, которые содержат 40-95, предпочтительно 70-95 вес.% по меньшей мере одного масляного компонента, 2-80, предпочтительно 2-30 вес.% воды, а также при необходимости другие компоненты.
В качестве других компонентов подходят, например, следующие вещества:
a) соли (такие как, например, хлориды, бромиды, карбонаты щелочных и щелочно-земельных металлов; эти соли часто служат для рН-контроля),
b) добавки для компенсации потерь жидкости (например, бентониты, крахмал, целлюлоза или ее производные),
c) смачиватели (для того, чтобы вышеупомянутые добавки, например бентониты, смогли быть смоченными маслом),
б) вещества, улучшающие текучесть (которые уменьшают сопротивление течению, например, акриловые смолы, полисилоксаны, полиуретаны),
е) добавки для увеличения удельного веса промывочного бурового раствора (например, барит, гематит, магнетит, ильменит, сидерит, доломит, кальцит, поваренная соль),
1) эмульгаторы (например, соли жирных кислот; полиамиды),
д) прочие добавки, такие как, например, диспергаторы, понизители водоотдачи, полимеры или сополимеры, амины (например, полиакриламиды),
1) повышающие вязкость добавки (например, бентонит, аттапульгит).
В предпочтительном варианте осуществления изобретения наряду с гидрофобином используют по меньшей мере еще одно, другое соединение, которое улучшает образование эмульсии.
Изобретение относится также к способу бурения скважин, в частности для освоения подземных месторождений, в особенности месторождений нефти и газа, при котором используется промывочный буровой раствор, который содержит по меньшей мере один гидрофобии или его производное. При этом предпочтительно используют названный выше слитый гидрофобин.
При бурении используется преимущественно промывочный буровой раствор на масляной основе, который содержит 40-95 вес.% по меньшей мере одного масляного компонента, такого как, например, биодизель, 2-60 вес.% воды (например, пресная или морская вода), а также при необходимости другие компоненты.
Далее, сам промывочный буровой раствор, содержащий по меньшей мере один гидрофобии, представляет собой предмет данного изобретения.
В специальном варианте осуществления изобретения промывочный буровой раствор содержит 7095 вес.% по меньшей мере одного масляного компонента (например, биодизель), 2-30 вес.% воды, а так
- 2 014384 же при необходимости до 13 вес.% других компонентов (например, бентонита и/или хлорида кальция).
Изобретение относится также к способу приготовления промывочного бурового раствора, при котором тщательно смешивают компонент гидрофобии и прочие компоненты промывочного бурового раствора. Это может происходить на промышленных производственных площадях, а также и на месте, например на буровой платформе.
Применение белков, таких как гидрофобин: в качестве вспомогательного средства при бурении имеет преимуществом то, что речь идет о веществах природного происхождения или веществах, аналогичных натуральным, которые способны к биологическому расщеплению и тем самым не вызывают стойкую нагрузку на окружающую среду.
При использовании в крупных масштабах, например, при бурении после нахождения нефти, большое значение придается как можно более продолжительной пригодности используемого вспомогательного средства. Задача изобретения заключалась в предоставлении улучшенного способа выполнения буровых работ с использованием специальных белков.
Под понятием гидрофобии в рамках данного изобретения понимают также его производные или модифицированный гидрофобии. В случае модифицированного гидрофобина или производных гидрофобина речь идет, например, о слитых гидрофобин-белках или о белках, имеющих последовательность аминокислот, которая обладает по меньшей мере 60%, например, по меньшей мере 70%, предпочтительно не менее чем 80%, особенно предпочтительно не менее чем 90%, наиболее предпочтительно не менее чем 95% последовательности, идентичной с последовательностью гидрофобина, и которая сохраняет до 50%, предпочтительно до 60%, особенно предпочтительно до 70%, наиболее предпочтительно до 80% биологических свойств гидрофобина, в частности того, что свойства поверхности за счет покрытия ее этим белком изменяются таким образом, что краевой угол капли воды до и после нанесения белкового покрытия на стеклянную поверхность возрастает не менее чем на 20°, предпочтительно не менее чем на 25°, наиболее предпочтительно не менее чем на 30°.
Был обнаружен поразительный факт, что гидрофобины или их производные улучшают производительность бурения при разведке и освоении месторождений. Это основывается на том, что не происходит быстрого разделения фаз в промывочном буровом растворе и транспортируемом материале. При этом чрезвычайно эффективными являются даже небольшие количества гидрофобина.
Для определения гидрофобинов решающим является при этом структура, а не специфичность последовательности в гидрофобине. Последовательности аминокислот в природном гидрофобине очень различны, но они все же обладают очень характерным участком из 8 постоянно присутствующих цистеиновых остатков. Эти остатки образуют четыре внутримолекулярных дисульфидных мостика. Ν-конец и С-конец являются вариабельными в широком диапазоне. Здесь с помощью известных специалисту методов молекулярной биологии могут быть присоединены белки партнеров слияния с длиной от 10 до 500 аминокислот. Исходя из этого, под понятием гидрофобины и их производные следует понимать в смысле данного изобретения белки с аналогичной структурой и функциональной эквивалентностью.
Под понятием «гидрофобины» в смысле данного изобретения следует понимать в дальнейшем полипептиды общей формулы (I)
причем X может означать любую из 20 аминокислот природного происхождения (Р1е, Ьеи, 8ег, Туг,
Суз, Тгр, Рго, Ηίδ, 61и, Агд, 11е Ме!, ТЬг, Азп, Ьуз, Уа1, А1а, Азр, 61и, С1у). При этом Х соответственно могут быть одинаковыми или различными. При этом стоящие у X индексы соответственно представляют собой число аминокислот, С означает цистеин, аланин, серин, глицин, метионин или треонин, причем по меньшей мере четыре из обозначенных С-остатков означают цистеин, а индексы п и т независимо друг от друга означают натуральные числа от 0 до 500, предпочтительно от 15 до 300.
Далее полипептиды формулы (I) характеризуются следующим свойством: при комнатной температуре после их нанесения на стеклянную поверхность они вызывают увеличение краевого угла водяной капли не менее чем на 20°, предпочтительно не менее чем на 25° и наиболее предпочтительно не менее чем на 30°, соответственно по сравнению с краевым углом такой же по величине капли воды на стеклянной поверхности без покрытия.
Аминокислоты, обозначенные как С1 до С8, предпочтительно являются цистеином; но они могут заменяться другими аминокислотами с аналогичным плотностью упаковки, предпочтительно аланином, серином, треонином, метионином или глицином. Правда, не менее четырех, предпочтительно не менее 5, особенно предпочтительно не менее 6 и наиболее предпочтительно не менее 7 позиций от С1 до С8 должны быть цистеинами. Цистеины в белках согласно изобретению могут быть либо редуцированными, либо могут образовывать друг с другом дисульфидные мостики. Наиболее предпочтительным является внутримолекулярное образование С-С-мостиков, в особенности по меньшей мере одного, предпочтительно двух, особенно предпочтительно 3 и наиболее предпочтительно 4 внутримолекулярных дисульфидных мостиков. При описанной выше замене цистеинов другими аминокислотами с аналогичным объемом попарно заменяются предпочтительно такие С-позиции, которые могут образовывать между собой внутримолекулярные дисульфидные мостики.
- 3 014384
В случае, если в обозначенных X позициях также используются цистеин, серии, аланин, глицин, метионин или треонин, может изменяться соответствующим образом нумерация отдельных С-позиций в общей формуле.
Предпочтительно для осуществления данного изобретения используются гидрофобины общей формулы (II)
причем X, С и индексы, стоящие при X и С, имеют указанные выше значения, индексы η и т означают числа от 0 до 300, и далее белки отличаются вышеупомянутым изменением краевого угла, далее, для по меньшей мере 6 обозначенных как С остатков речь идет о цистеине. Наиболее предпочтительно для всех остатков речь идет о цистеине.
Наиболее предпочтительно используются гидрофобины общей формулы (III) Хп-С1-Х5-9-С2-С3-Х1ьз9-С4-Х2-23-С5-Х5.9-Сй-С,-Хб.18-С8-ХП1 (Ш), причем X, С и индексы, стоящие при X, имеют указанные выше значения, индексы η и т означают числа от 0 до 200, и, далее, белки отличаются вышеупомянутым изменением краевого угла, далее, для по меньшей мере 6 обозначенных как С остатков речь идет о цистеине. Наиболее предпочтительно для всех остатков речь идет о цистеине.
В случае остатков Xη и Xт речь может идти о последовательностях пептидов, которые также соединены естественно с гидрофобином. Однако в случае одного или обоих остатков может идти речь также о последовательностях пептидов, которые не соединены естественно с гидрофобином. Под такими остатками следует понимать остатки Xη и/или Xт, у которых встречающиеся в природе в гидрофобине последовательности пептидов удлиняются последовательностями пептидов, не встречающимися в гидрофобине в природе.
В случае, если для Xη и/или Xт речь идет о не соединенных естественно в гидрофобине последовательностях пептидов, такого рода последовательности имеют, как правило, длину не менее 20, предпочтительно не менее 35, особенно предпочтительно не менее 50 и наиболее предпочтительно не менее 100 аминокислот. Такой остаток, не соединенный естественно с гидрофобином, в дальнейшем будет обозначаться также как партнер слияния. Этим будет выражаться то, что белки могут состоять по меньшей мере из гидрофобиновой части и части партнера слияния, которые в природе в таком виде вместе не существуют.
Часть - партнер слияния может быть выбрана из множества белков. С гидрофобиновой частью могут также соединяться несколько партнеров слияния, например, у аминного конца (X,) и у карбоксиконца ^т) гидрофобиновой части. Однако с позициями (X, или Xт) белка согласно данному изобретению могут соединяться также, например, два партнера слияния.
Наиболее подходящими партнерами слияния являются белки, которые в природе встречаются в микроорганизмах, например в Е. Сой или ВаеШик щЬЫб. Примерами таких партнеров слияния являются последовательности уааб (8ЕО Ю N0: 15 и 16), уаае (8ЕО Ю N0: 17 и 18) и тиоредоксин.
Подходят также фрагменты или производные этих вышеназванных последовательностей, которые охватывают только часть, например 70-99%, предпочтительно 5-50% и наиболее предпочтительно 1040% названных последовательностей, или у которых отдельные аминокислоты или, точнее говоря, нуклеотиды изменены по сравнению с названной последовательностью, причем процентные данные соответственно относятся к числу аминокислот.
В другом предпочтительном варианте осуществления фузионный гидрофобии имеет кроме партнера слияния в качестве группы X,, или Xт еще так называемые домены сродства (аГГ1П11у 1ад/аГПпЦу 1ай). При этом речь идет в принципе об известных якорных группах, которые могут взаимодействовать с некоторыми комплементарными группами и предназначаться для облегчения обработки и очистки белков. Примерами таких доменов сродства служат (Нк)к-, (Агд)к-, (Акр)к-, (Рйе)к- или (Сук)к-группы, причем к означает в общем случае натуральное число от 1 до 10. Предпочтительно может идти речь о (Нк)кгруппе, причем к означает 4-6.
Согласно изобретению белки, используемые в качестве гидрофобинов или производных гидрофобинов, могут также быть модифицированными в их полипептидной последовательности, например, путем гликозирования, ацетилирования или также за счет химической сшивки, например, глутаровым альдегидом.
Свойством используемых согласно изобретению гидрофобинов или их производных является изменение свойств поверхностей, если поверхности покрываются белками. Изменение поверхностных свойств можно определить экспериментально, например, измеряя краевой угол капли воды до нанесения покрытия и после нанесения покрытия с белками на поверхность и определяя разницу между этими двумя измерениями.
Метод измерения краевых углов в принципе известен специалисту. Измерения проводятся при комнатной температуре на капле воды в 5 мкл при использовании в качестве субстрата стеклянных пластинок. Точные экспериментальные условия пригодного метода измерения краевого угла указаны в экспериментальной части. При названных там условиях используемые согласно данному изобретению слитые
- 4 014384 белки обладают свойством увеличивать краевой угол капли воды не менее чем на 20°, предпочтительно не менее чем на 25°, наиболее предпочтительно не менее чем на 30°, соответственно, по сравнению с краевым углом равной по величине капли воды на стеклянной поверхности без покрытия.
Наиболее предпочтительными гидрофобинами для осуществления данного изобретения являются гидрофобины типа 6с\\'Л. гобА, НурЛ. НурВ. зс3, Ьаб11, Ьав12, которые структурно охарактеризованы в нижеследующем протоколе последовательностей. Однако речь может идти только о части или производном. Также несколько гидрофобиновых частей, предпочтительно 2 или 3, с одинаковой или различной структурой могут соединяться друг с другом и с соответствующей подходящей последовательностью полипептидов, которая не связана естественно с гидрофобином.
Наиболее подходящими для данного изобретения являются слитые белки уааб-Ха-бе^А-Ыз (БЕО ΙΌ N0: 20), уааб-Ха-гобА-Ыз (БЕО ΙΌ N0: 22) или уааб-Ха-ЬазН-Ыб (БЕО ΙΌ N0: 24) с указанными в скобках последовательностями полипептидов, а также кодирующими для них последовательностями нуклеиновых кислот, в особенности последовательности в соответствии с БЕО ΙΌ N0: 19, 21, 23. Наиболее предпочтительные варианты осуществления представляют собой также белки, которые получаются, исходя из представленных в БЕО ΙΌ N0: 20, 22 или 24 последовательностей полипептидов, путем замещения, вставки или делеции по меньшей мере одной аминокислоты, до 10, предпочтительно 5, в особенности 5% всех аминокислот, и которые обладают биологическими свойствами исходного белка еще по меньшей мере на 50%. Под биологическими свойствами белков следует понимать уже описанное изменение краевого угла по меньшей мере на 20°.
Наиболее подходящими для осуществления изобретения производными являются уааб-Ха-бе^Л-Ык (БЕр ΙΌ N0: 20), уааб-Ха-тобА-Ыз (БЕО ΙΌ N0: 22) или уааб-Ха-ЬазН-Ыб (БЕО ΙΌ N0: 24) за счет сокращения остатка, имеющего происхождение от уааб-партнера слияния. Вместо полного уааб-партнера слияния (БЕО ΙΌ N0: 16) с 294 аминокислотами с успехом может использоваться укороченный уаабостаток. Но укороченный остаток должен включать по меньшей мере 20, предпочтительно не менее 35 аминокислот. Например, может использоваться укороченный остаток с 20-293, предпочтительно с 25- 50, особенно предпочтительно с 35-150 и наиболее предпочтительно с 35-100 аминокислотами.
Место разрыва между гидрофобином и партнером слияния или слитыми партнерами может использоваться для того, чтобы высвободить чистый гидрофобии в неизмененном виде (например, путем ВгС№ расщепления у метионина, расщепления фактором Ха, расщепления энтерокиназой, тромбинового расщепления, ТЕУ-расщепления и т.п.).
Далее, можно получать поочередно слитые белки из партнера слияния, например уааб или уаае, и нескольких гидрофобинов, также с различными последовательностями, например, □е\\'Л-Во6Л или Бс3Ое^А, Бс3-К.о6Л). Также можно использовать гидрофобиновые фрагменты (например, укороченные с N или С-концов) или мутеины, которые имеют до 70% гомологии. Выбор оптимальных конструктов происходит в расчете на соответствующее использование, т.е. применительно к разделяемым жидким фазам.
Используемые согласно данному изобретению гидрофобины, иначе гидрофобины, содержащиеся в композициях согласно данному изобретению, можно получать химическим путем с помощью известных методов синтеза пептидов, например твердофазным синтезом по Меррифилду.
Встречающиеся в природе гидрофобины можно выделить из природных источников с помощью подходящих методов. Сошлемся, например, на работу \Уо81еп е1. а1., Еиг. 1 Се11 Вю. 63, 122-129 (1994) или \\'0 96/41882.
Получение слитых белков предпочтительно может осуществляться методами генной инженерии, при которых последовательности нуклеиновых кислот, кодирующие для партнера слияния и для гидрофобиновой части, в частности последовательности ДНК, комбинируются таким образом, что в организме хозяина путем экспрессии генов комбинированной последовательности нуклеиновых кислот получается желаемый белок. Такой метод получения описан, например, в ЭЕ 10 2005 007 480.4.
Подходящими организмами-хозяевами для названного метода получения могут быть при этом прокариоты (включая АгсНаеа) или эукариоты, особенно бактерии, включая галобактерии и метанококки, грибы, клетки насекомых, растений и млекопитающих, наиболее предпочтительны ЕзсНепсЫа сой, ВасП1и8 зиЫШб, ВасШиз теда!егшт, АбрегдШиб оту/еа, АбретдШиб ш6и1апб, АбретдШиб шдет, РюЫа ра81от18, Рзеиботопаб зрес, Ьас1оЬасШеп, Напбепи1а ро1утогрНа, ТпсНобегта геебе1, БЕ9 (или родственные клетки) и др.
Кроме того, предметом изобретения является применение экспрессионных конструктов, содержащих кодирующую последовательность нуклеиновых кислот для используемого согласно изобретению полипептида, находящихся под генетическим контролем регуляторных последовательностей нуклеиновых кислот, а также векторы, включающие хотя бы один из таких экспрессионных конструктов. Использованные конструкты предпочтительно охватывают выше 5'-конца от соответствующей промоторной кодирующей последовательности и ниже 3'-конца терминаторной последовательности, а также при необходимости другие обычные регуляторные элементы, а именно соответственно оперативно соединенные с кодирующей последовательностью. Под понятием оперативное соединение в рамках данного изобретения понимают последовательное расположение промотора, кодирующей последовательности, терминатора и при необходимости других регуляторных элементов таким образом, что каждый из регулятор
- 5 014384 ных элементов может выполнять по назначению свои функции при экспрессии кодирующей последовательности.
Примерами оперативно соединяемых последовательностей являются целевые последовательности, а также энханцеры, сигналы полиаденилирования и тому подобное.
Другие регуляторные элементы включают способные к отбору маркеры, амплификационные сигналы, начала репликации и тому подобное. Подходящие регуляторные последовательности, например, описаны в книге Сосббс1. Сеие Ехртеккюп Тсе11по1оду: МеЙюбк ίη Епхуто1оду 185, Асабетк Ргекк, 8ап П1едо, СА (1990).
В дополнение к этим регуляторным последовательностям может еще иметь место естественная регуляция этих последовательностей от собственных структурных генов и при необходимости генетически она может быть изменена, так чтобы естественная регуляция исключалась и усиливалась экспрессия генов.
Предпочитаемый конструкт из нуклеиновых кислот предпочтительно содержит также один или несколько так называемых «энханцер»-последовательностей, функционально соединенных с промотором, которые дают возможность усиленной экспрессии последовательности нуклеиновых кислот. Также у 3'конца последовательности ДНК могут помещаться дополнительные полезные последовательности, такие как другие регуляторные элементы и терминаторы.
Нуклеиновые кислоты могут содержаться в конструкте в одной или нескольких копиях. В конструкте могут еще содержаться другие маркеры, такие как гены, комплементирующие устойчивость к антибиотикам или ауксотрофии, при необходимости для селекции на конструкте.
Предпочитаемые регулирующие последовательности для получения содержатся, например, в промоторах, таких как сок-, 1ас-, !гр-, !е!-, 1тр-1е1-, Ιρρ-, 1ас-, 1рр-1ас-, 1ас1д-Т7-, Т5-, Т3-, да1-, 1тс-, ага-, гйаР(гйаРВАО) 8Р6-, лямбда-РВ-или в лямбда-Р-промоторе, которые находят применение в грамотрицательных бактериях. Другие предпочтительные регулирующие последовательности содержатся, например, в грам-положительных промоторах ату и 8Р02, в дрожжевых или грибковых промоторах АБС1, МР-альфа, АС, Р-60, СУС1, САРИН, ТЕР, гр28, ΑΌΗ.
Для регуляции могут применяться также искусственные промоторы.
Конструкт нуклеиновых кислот вставляется для экспрессии в организме хозяина предпочтительно в вектор, такой как, например, плазмида или фаг, который позволяет осуществлять оптимальную экспрессию генов в хозяине. Под векторами следует понимать кроме плазмид и фагов также все другие известные специалисту векторы, такие как, например, 8У40, СМУ, бакуловирус и аденовирус, транспозоны, Ι8элементы, фазмиды, космиды, и линейные или кольцевые ДНК, а также системы агробактерий.
Эти векторы могут быть реплицированы в организм хозяина автономно или хромосомно. Подходящими плазмидами являются, например, в Е. сой рЬС338, рАСУС184, рВВ322, рИС18, рИС19, рКС30, рВер4, рН81, рКК223-3, рПНЕ19.2, рН82, рРЬс236, рМВЬ24, рЬС200, рИВ290, р1Ы-1113-В1, 1§111 или рВбС1, в 81тер1отусек р1Л01, рП364, р11702 или р11361, в ВасШик рИВ110, рС194 или рВО214, в СогупеЬас1етшт р8А77 или рА1667, в грибах рАЬ81, р1Ь2 или рВВ116, в дрожжах 2альфа, рАС-1, УЕр6, УЕр13 или рЕМВЕУе23 или в растениях рЬСУ23, рСН1ас+, рВ1Ы19, рАК2004 или рИН51. Названные плазмиды представляют собой небольшую выборку из возможных плазмид. Другие плазмиды известны специалисту и могут быть взяты из книги С1ошпд УесЮгк (Ебк. Роитек Р. Н. е! а1. Е1кеу1ет, Атк1етбат-№те УоткОхЕотб, 1985, 18ВХ 0 444 904018).
Предпочтительно конструкт из нуклеиновых кислот для экспрессии других содержащихся генов содержит еще 3'- и/или 5'-терминальные регуляторные последовательности для усиления экспрессии, которые выбираются для оптимальной экспрессии в зависимости от выбранного организма-хозяина и гена или генов.
Эти регуляторные последовательности должны давать возможность целенаправленной экспрессии генов и экспрессии белков. Это, например, в зависимости от организма-хозяина может означать то, что ген экспримируется или суперэкспримируется только после индукции, или что он экспримируется и/или суперэкспримируется немедленно.
Регуляторные последовательности или факторы при этом могут преимущественно оказывать положительное влияние на экспрессию внедренного гена и тем самым усиливать её. Так, усиление регуляторных элементов может происходить благоприятным образом на транскрипционном участке, тем что применяются сильные транскрипционные сигналы, такие как промоторы и/или энханцеры. Наряду с этим возможно также усиление трансляции тем, что, например, улучшается стабильность мРНК.
В другом варианте вектора содержащий конструкт из нуклеиновых кислот или нуклеиновые кислоты вектор также вводится в микроорганизмы предпочтительно в форме линейной ДНК и интегрируется в геном организма-хозяина через гетерологичную или гомологичную рекомбинацию. Эта линейная ДНК может состоять из линеаризованного вектора, такого как плазмида, или только из конструкта нуклеиновых кислот или из нуклеиновых кислот.
Для оптимальной экспрессии чужеродных генов в организмы предпочтительно следует изменять последовательности нуклеиновых кислот в соответствии с применяемым в организме специфическим
- 6 014384 синонимическим кодоном (собой икаде). Синонимический кодон (Собой икаде) можно легко определить, пользуясь компьютерной оценкой других, известных генов данного организма.
Получение экспрессионной кассеты происходит путем соединения подходящего промотора с подходящей кодирующей последовательностью нуклеотидов, а также сигналом терминатора или сигналом полиаденилирования. Для этого применяют общеупотребительные приемы рекомбинации и клонирования, какие описаны, например, Т. Машабк, Е. Е.Егйксй и 1, 8атЬгоок, Мо1еси1аг С1ошид: А ЬаЬога!огу Маииа1, Со1б 8рпид НагЬог ЬаЬога!огу, Со1б 8ргтд НагЬог, ΝΥ (1989), а также в Т. 1. 8ййауу, М. Ь. Вегтаи и Ь. ^. Еицшк!, Ехрептеи!к \νί11ι Сеие Еикюик, Со1б 8ргтд НагЬог ЬаЬога1огу, Со1б 8ргтд НагЬог, ΝΥ (1984) и в АикиЬе1, Е. М. е1 а1., Сиггеи! Рго!осо1к т Мо1еси1аг Вю1оду, Сгееие РиЬйкЫид Аккос, аиб ^йеу 1и!егкс1еисе (1987),
Рекомбинантный конструкт нуклеиновых кислот или генный конструкт вводится для экспрессии в подходящий организм хозяина, предпочтительно в характерный для хозяина вектор, который дает возможность осуществления оптимальной экспрессии генов в хозяине. Векторы хорошо известны специалисту и могут быть взяты из С1ошид Уес!огк (Рои^е1к Р. Н. е! а1., Нгкд, Е1кеу1ег, Атк1егбат-№\\' УогкОхТогб, 1985).
С помощью векторов получаются рекомбинантные микроорганизмы, какие, например, трансформированы минимум одним вектором и могут использоваться для получения применяемого согласно изобретению гидрофобина или его производных. Вышеописанные рекомбинантные конструкты преимущественно вводятся с подходящую систему-хозяин и экспримируются. При этом используются преимущественно известные специалисту привычные методы клонирования и трансфекции, такие как соосаждение, слияние протопластов, электропорация, ретровиральная трансфекция и тому подобные, чтобы довести до экспрессии названные нуклеиновые кислоты в соответствующей экспрессионной системе. Подходящие системы описаны, например, в Сиггеи! Рго1осо1к ш Мо1еси1аг Вю1оду, Е. АикиЬе1 е! а1., Нгкд., ХСбеу 1и!егкс1еисе, Νονν Уогк 1997, или 8атЬгоок е! а1. Мо1еси1аг С1ошид : А ЬаЬога!огу Маииа1. 2. АиП, Со1б 8ргтд НагЬог ЬаЬога!огу, Со1б 8ргтд НагЬог ЬаЬога!огу Ргекк, Со1б 8ргтд НагЬог, ΝΥ, 1989.
Можно также получать гомологичные рекомбинированные микроорганизмы. Для этого получают вектор, который содержит по меньшей мере участок используемого гена или кодирующей последовательности, в котором при необходимости для изменения последовательности по меньшей мере осуществлено удаление, присоединение или замещение аминокислоты, например, функционального разрыва (нокаутирующий вектор). Введенная последовательность может, например, также быть гомологом из родственного микроорганизма или происходить из клеток млекопитающего, дрожжевых клеток или клеток насекомого. Вектору, применяемому для гомологичной рекомбинации, альтернативно может быть придан такой вид, чтобы эндогенный ген при гомологичной рекомбинации был мутирован или был изменен иным путем, но еще был способен кодировать функциональный белок (например, расположенная выше регуляторная область может изменяться таким образом, что вследствие этого изменяется экспрессия эндогенного белка). Измененный участок использованного согласно изобретению гена находится в гомологичном рекомбинантном векторе. Конструкция подходящих векторов для гомологичной рекомбинации описана, например, в работе Тйотак, К. В. и СарессЫ, М. В. (1987) Се11 51 : 503.
В качестве рекомбинантных организмов-хозяев для такого рода нуклеиновых кислот или такого рода конструктов из нуклеиновых кислот подходят в принципе все организмы, как прокариоты так и эукариоты. Предпочтительно в качестве организмов-хозяев используются такие микроорганизмы, как бактерии, грибы или дрожжи. Преимущественно применяются грамположительные и грамотрицательные бактерии, предпочтительно бактерии семейств Еи!егоЬас!епасеае, Ркеиботоиабасеае, ВЫ/оЫасеае, 81гер!отусе!асеае или №сагб1асеае, наиболее предпочтительны бактерии родов ЕксйепсЫа, Ркеиботоиак, 81гер!отусек, №сагб1а, Вигкйо1бепа, 8а1тоие11а, АдгоЬас!егшт или Вйобососсик.
Организмы, применяемые в описанных выше способах получения слитых белков, разводятся или выращиваются известными специалисту способами в зависимости от организма-хозяина. Микроорганизмы, как правило, выращиваются в жидкой среде, которая содержит источник углерода, чаще всего в форме сахаров, источник азота чаще всего в форме источника органического азота, такого как экстракт дрожжей или соли, такие как сульфат аммония, микроэлементы, такие как соли железа, марганца и магния, а также при необходимости витамины, при температуре от 0 до 100°С, предпочтительно от 10 до 60°С при насыщении кислородом. При этом величина рН в питательной жидкости может поддерживаться на постоянном значении, т. е. во время выращивания регулируется или не регулируется. Выращивание может происходить периодическим способом, полупериодическим способом или непрерывным способом. Питательные вещества могут загружаться полностью к началу ферментации или подаваться полупериодически или непрерывно. Энзимы могут выделяться из организмов в соответствии со способами, описанными в примерах, или могут применяться в реакции в виде неочищенного экстракта.
Применяемые согласно изобретению гидрофобины или функциональные, биологически активные их фрагменты могут формироваться способом рекомбинантного получения, при этом культивируют микроорганизм, продуцирующий полипептиды, при необходимости индуцируют экспрессию белков и выделяют их из культуры. Белки таким способом могут производиться в промышленном масштабе, если
- 7 014384 это будет желательно. Рекомбинантные микроорганизмы могут культивироваться и ферментироваться по известным методикам. Бактерии могут размножаться, например, в ТВ- или ЬВ-среде при температуре от 20 до 40°С и величине рН от 6 до 9. В подробностях подходящие условия культивирования описаны, например, в книге Т. МашаЩ, Е. Е. Етйксй и 1. ЗатЬгоок, Мо1еси1аг С1ошпд : А ЬаЬога1огу Мапиа1, Со1б 8ртшд НагЬог ЬаЬога1огу, Со1б 8рппд НагЬог, ΝΥ (1989).
Затем клетки, если белки не выделяются в питательную среду, подвергаются лизированию и продукт получается из лизата известными способами выделения белков. По выбору клетки могут переводиться в удобное для переработки состояние высокочастотным ультразвуком, высоким давлением, таким как, например, во Егепск-БгискхеИе. осмолизом, воздействием детергентов, литических энзимов или органических растворителей, с помощью гомогенизаторов или комбинацией нескольких из перечисленных способов.
Очистка белков может достигаться с помощью известных хроматографических методов, таких как хроматография на молекулярных ситах (гельфильтрация), хроматография на О-сефарозе, ионообменная хроматография и гидрофобная хроматография, а также с использованием других обычных способов, таких как ультрафильтрация, кристаллизация, высаливание, диализ и естественный гель-электрофорез. Подходящие способы описаны, например, в книгах Соорег, Е. О., Вюсйетщсйе АтЬейктеШобеп, Уег1ад \Уа1ег бе Огиу1ег, Вет1ш, №\ν Υо^к или Зсорек, В., Рто1еш Рштйсайоп, Зрттдет Уег1ад, №\ν Υо^к, Не1бе1Ьегд, Ветйп.
Особенно выгодным может быть, если для облегчения выделения и очистки снабдить слитый гидрофобии специальными якорными группами, которые могут привязываться к соответствующим комплементарным группам твердых носителей, в частности подходящих полимеров. Такого рода твердые носители могут использоваться, например, в качестве наполнителей для хроматографических колонок, и таким способом можно, как правило, заметно повысить эффективность разделения. Такие способы разделения также известны как аффинная хроматография. Для встраивания якорных групп можно использовать при получении белков векторные системы или олигонуклеотиды, которые удлиняют кДНК на определенную последовательность нуклеотидов и тем самым кодируют измененные белки или слитые белки. Для более легкой очистки модифицированные белки включают действующие в качестве якоря так называемые таги (Тадк) (метки), например, известные модификации в виде гексагистидиновых якорей. Модифицированные гистидиновыми якорями слитые гидрофобины можно, например, очищать хроматографически при использовании никель-сефарозы в качестве заполнителя для колонки. После чего слитый гидрофобии с помощью подходящих средств для элюирования, таких как, например, раствор имидазола, снова вымывается с колонки.
В упрощенном способе очистки можно отказаться от хроматографической очистки. Для этого клетки сначала с помощью подходящего метода выделяются из ферментативного бульона, например, путем микрофильтрации или центрифугированием. Затем клетки с помощью подходящих методов, например с использованием уже упомянутых выше методов, переводят в удобное для переработки состояние, и фрагменты разрушенных клеток отделяются от телец включений. Последнее удобно осуществлять путем центрифугирования. Наконец, тельца включений в принципе можно обычным путем переводить в удобное для переработки состояние, чтобы высвободить слитый гидрофобии. Это может, например, происходить с помощью кислот, оснований и/или детергентов. Тельца включений с использованным согласно изобретению слитым гидрофобином, как правило, могут полностью растворяться уже при использовании 0,1 М раствора №ОН в течение примерно 1 ч. Чистота полученного этим упрощенным способом слитого гидрофобина, как правило, составляет 60-80 вес.% по сравнению с количеством всех белков. Растворы, полученные описанным упрощенным способом очистки, могут использоваться без дальнейшей очистки для осуществления этого изобретения.
Гидрофобины, полученные, как описано, могут применяться как непосредственно в качестве слитых белков, так и после отщепления и отделения партнера слияния как чистые гидрофобины.
Если предусмотрено отделение партнера слияния, рекомендуется вводить потенциальное место расщепления в слитом белке (особенное место распознавания для протеаз) между гидрофобиновой частью и частью партнера слияния. В качестве мест расщепления пригодны в частности такие последовательности пептидов, которые не встречаются ни в гидрофобиновой части, ни в части партнера слияния, что легко можно определить с помощью биоинформационных технологий. Наиболее подходящими являются, например, ВгСЖ-расщепление у метионина, или расщепление при посредничестве протеазы с фактором Ха-, расщепление энтерокиназой, тромбином, ТЕУ-расщепление (протеаза ТоЬасса е1с11 У1Ш8).
Согласно изобретению гидрофобины или их производные могут использоваться в промывочных буровых растворах, содержащимися по меньшей мере в одной жидкой фазе. При этом речь может идти о любых составах, если они имеют по меньшей мере одну жидкую фазу, особенно фазу на основе масла. Композиция в рамках данного изобретения может содержать также и другие фазы.
В случае масел в промывочных буровых растворах на основе масел предпочтительно речь идет согласно изобретению о биодизеле, инертном олефине, α-олефине, сложных эфирах растительного происхождения, парафине или их смесях.
- 8 014384
Другими подходящими растворителями являются, например, органические растворители, такие как простые эфиры, ароматические соединения, такие как толуол, спирты, алканы, алкены, циклоалканы, циклоалкены, сложные эфиры, кетоны, нафтены или галогенированные углеводороды.
Промывочный буровой раствор можно устанавливать по типу производимого бурения, а также при необходимости по веществам, имеющимся в грунте (руды, соли, полезные ископаемые), чтобы добиться оптимального эффекта. Бурение с использованием промывочных буровых растворов может дополнительно поддерживаться повышенными температурами, например, температурой от 0 до 400°С, предпочтительно от 30 до 200°С, наиболее предпочтительно от 40 до 150°С.
Количество используемого гидрофобина или его производного может варьировать в широких пределах, причем это количество выгодно настраивать на состав сам по себе и при необходимости на другие компоненты, содержащиеся в композиции.
Промывочный буровой раствор (в особенности его плотность) должен адаптироваться к соответствующим условиям, таким как, например, структура формации, которую подвергают бурению, глубина бурения, давление и температура.
Был обнаружен поразительный факт, что уже небольшие количества гидрофобина или его производного приводят к улучшению стабильности промывочного бурового раствора и, вследствие этого, процесса бурения.
По крайней мере один гидрофобин или его производное согласно изобретению может использоваться в любых подходящих количествах. Как правило, по меньшей мере один гидрофобин или его производное используется в количестве от 0,1 до 10.000 ррт, в расчете на всю композицию; предпочтительно в количестве от 1 до 1000 ррт, особенно предпочтительно 1-600 ррт и наиболее предпочтительно 4500 ррт. В рамках данного сообщения, данные в ррт означают мг на кг.
Промывочные буровые растворы согласно данному изобретению могут комбинироваться с другими обычными компонентами и добавками. Здесь следовало бы назвать, например, масла-основы с выраженными свойствами детергентов или без них.
Подходящими минеральными маслами-основами являются фракции, получающиеся при переработке нефти, такие как брайтсток или базовое масло с вязкостью, например, класса 8Ν 500-2000; но также и ароматические углеводороды, парафиновые углеводороды и алкоксиалканолы. Согласно изобретению пригодны также фракция, известная как гидрокрекинговое масло (йубтостаск ой) и получающаяся при рафинировании минеральных масел (фракция вакуумной перегонки с температурой кипения примерно 360-500°С, получаемая из каталитически гидрированного при высоком давлении и изомеризованного, а также депарафинированного природного минерального масла). Также пригодны смеси из названных выше минеральных масел-основ.
Примеры используемых согласно изобретению синтетических масел-основ выбраны среди следующих: полиолефины (полиальфаолефины или полиинтерналолефин), сложные (поли)эфиры, (поли)алкоксилаты, простые полиэфиры, алифатические полиэфирамины, простые полиэфиры, полученные из алкилфенолов, простые полиэфирамины, полученные из алкилфенолов, и сложные эфиры карбоновых кислот и длинноцепных насыщенных спиртов.
Примерами подходящих полиолефинов являются олефиновые полимеры с Мп -400-1800, прежде всего на основе полибутена или полиизобутена (гидрированные или не гидрированные).
Другие подходящие системы масел-основ описаны, например, в ΌΕ-Ά 3826608, ΌΕ-Ά 4142 241, ΌΕА 4309074, ЕР-А 0452328 и ЕР-А 0548617, на что специально ссылались. Названные масла-основы используются при этом в количествах, пригодных с точки зрения специалиста для соответствующих целей.
Другими обычными добавками являются ингибиторы коррозии, например, на основе способных к пленкообразованию аммонийных солей органических карбоновых кислот или гетероциклических ароматических соединений в случае защиты цветных металлов от коррозии; антиоксиданты или стабилизаторы, например, на основе аминов; другие обычные эмульгаторы; антистатики; металлоцены, такие как ферроцен; средства, улучшающие маслянистость (маслянистые добавки), такие как некоторые жирные кислоты, сложные эфиры алкенилянтарных кислот, алифатические бис(гидроксиалкил)амины, гидроксиацетамид или касторовое масло; красители (маркеры); понизители водоотдачи (например, полимеры), вещества для регулирования плотности, модификаторы реологических свойств, а также вещества, которые образуют фильтровальный осадок (такие как бентонит или глина), известь или другие эмульгаторы. При необходимости добавляются также амины для снижения величины рН.
Изобретение подробнее разъясняется нижеследующими примерами.
Примеры
Пример 1.
Подготовительные работы для клонирования уааб-Нщ6/уааЕ-Нщ6
С помощью олигонуклеотидов На1570 и На1571 (На1 572/ На1 573) осуществляли цепную реакцию полимеразы. В качестве исходного образца ДНК использовали геномную ДНК бактерии ВасШик киЫШк. Полученный фрагмент РСК. содержал кодирующую последовательность гена уааЭ/уааЕ из ВасШик киЬ11118, и на концах по одной рестриционной нуклеазе №о1 и ВдШ. Фрагмент РСК очищали и разрезали с помощью рестрикционных эндонуклеаз №о1 и ВдШ. Этот фрагмент ДНК использовали как вставку, и
- 9 014384 клонировали в ранее линеаризированный с помощью рестрикционных эндонуклеаз Νεοί и Вд111 вектор рСЕ60 фирмы Οίαβοη. Созданные таким образом векторы рСЕ6()УЛЛО#2/рСЕ6()УааЕ#5 могут применяться для экспрессии белков, состоящих из ΥΑΑΌ::ΗΙ86 или УААЕ::Н186.
На15 70: дс§с§ссса1ддс1сааасадд1асгда
На15 71: дса£а1с1сса§сс§с§йсй§са1ас
На15 72: дёсса1§д§айаасаа1১1§1ас1১
На1573: §сада1сиасаад1§ссШ(дс11а1аисс
Пример 2. Клонирование уааб-гидрофобина Όο\νΑ-Ηί56
С помощью олигонуклеотидов КаМ 416 и КаМ 417 осуществляли цепную реакцию полимеразы. В качестве исходного образца ДНК использовали геномную ДНК плесневого грибка ΑφοΓβίΙΙιΐδ шби1ап8. Полученный фрагмент РСК содержал кодирующую последовательность гена гидрофобина 6ο\νΑ и Νконцевое место расщепления фактора Ха протеиназы. Фрагмент РСК очищали и разрезали с помощью рестрикционной эндонуклеазы ВатН1. Этот фрагмент ДНК использовали как вставку и клонировали в ранее линеаризированный с помощью рестрикционной эндонуклеазы Вд111 вектор р^Е60ΥΑΑ^#2 .
Созданный таким образом вектор #508 может применяться для экспрессии слитого белка, состоящего из ΥΑΑΌ::Χη::ώ2\νΑ::ΗΙ86.
КаМ416: ССАССССАТСАОСОАТСССТСАбССТТОСТАССАОСОС
КаМ417: СССОТАССТАСТСОАТССАТТОААССССОСАТОААСТтстссстстссос
Пример 3. Клонирование уааб-гидрофобина ΚοάΑ-Ηίδ6
Клонирование плазмиды #513 происходило аналогично плазмиде #508 с использованием олигонуклеотидов КаМ 434 и КаМ 435.
КаМ434:
ОСТААССООАТССАТТСААСОССССАТОААО'ГГСТССАТТОСТОС
КаМ435: ССААТООССАТССОАООАТОСАСССААСЮО
Пример 4. Клонирование уааб-гидрофобина ВА8Е1-Н156
Клонирование плазмиды #507 происходило аналогично плазмиде #508 с использованием олигонуклеотидов КаМ 417 и КаМ 418.
В качестве исходной ДНК использовали искусственно синтезированную последовательность ДНК гидрофобин ВА8Е1 (см. дополнение, 8ЕЦ ΙΌ N0. 11 и 12).
КаМ417:ССССТАССТАОТООАТССАТТОААСОССССАТСААОТТСТ ссотстссас
КаМ418: СТСССАТТСАССООАТСССАТАТООАССАССОАОАСАО
Пример 5. Клонирование уааб-гидрофобина ΕΑ8Ε2-Ηί56
Клонирование плазмиды #506 происходило аналогично плазмиде #508 с использованием олигонуклеотидов КаМ 417 и КаМ 418.
В качестве исходной ДНК использовали искусственно синтезированную последовательность ДНК гидрофобин ВΑ8Ε2 (см, дополнение, 8ЕЦ ΙΌ N0. 13 и 14).
КаМ417:ССССТАОСТАСТООАТССАТТОААОССС6С АТСАА6ТТСТ ссотстссос
КаМ418: СТОССАТТСАбСООАТСССАТАТООАООАОСОАОАСАО
Пример 6. Клонирование уааб-гидрофобина 8С3-Н|з6
Клонирование плазмиды #526 происходило аналогично плазмиде #508 с использованием олигонуклеотидов КаМ464 и КаМ465.
В качестве исходной ДНК использовали кДНК 8с11у/ор11у11шп соттипе (см. дополнение, 8ЕЦ ΙΌ N0. 9 и 10).
КаМ464: СОТТААООАТСССАООАТОТТОАТОООООТОС
КаМ465: ОСТААСАОАТСТАТОТТСССССОТСТССССОТСОТ
- 10 014384
Пример 7. Ферментация рекомбинантного штамма Е.соБ уааб-гидрофобин ΌανΛ-Ηίχ,·,
Инокуляция 3 мл жидкой ЬВ-среды с экспримирующим штаммом Ε.οοίί уааб-гидрофобин ΌονΆΗί®6 в сосуде Грайнера на 15 мл. Инкубация 8 ч при 37°С на мешалке с 200 об./мин. По две колбы Эрленмейера емкостью 1 л с дефлектором и 250 мл ЬВ-среды (+ 100 мкг/мл ампициллина) засевали 1 мл соответствующей предварительной культуры и инкубировали 9 ч при 37°С на качалке с 200 об./мин.
13,5 л ЬВ-среды (+ 100 мкг/мл ампициллина) засевали в 20 л ферментёре 0,5 л предварительной культуры (ΘΌ600|ΙΙΙΙ 1:10 измерено по сравнению с Η2Ο). При ΘΌ60πιη ~3.5 добавление 140 мл 100 мМ 1РТС. Через 3 ч ферментёр охлаждали до 10°С и ферментативный бульон центрифугировали. Клеточный осадок использовали для последующей очистки.
Пример 8. Очистка рекомбинантного гидрофобин-слитого белка
100 г клеточного осадка (100-500 мг гидрофобина) вместе с 50 мМ натрийфосфатного буфера, рН 7,5 доводили до 200 мл и ресуспендировали. Суспензию обрабатывали с помощью ИИгаФтгах Тур Т25 (.Тапке ипб Кипке1; П<А-ЬаЬог1ес11шк) в течение 10 мин и затем инкубировали в течение 1 ч при комнатной температуре с 500 единицами бензоназы (Мегск, ОагтйаФ; ВеЧ.-ΝΓ. 1.01697.0001) для расщепления нуклеиновых кислот. Перед переведением клеток в удобное для переработки состояние фильтровали с помощью стеклянного фильтрующего элемента (Р1). Для перевода клеток в удобное для переработки состояние и для разрезания остаточных геномных ДНК осуществляли две операции по гомогенизации при 1.500 бар (МктойшФ/ег М-110ЕН; Мютойшбк® Согр.). Гомогенизат центрифугировали (8отуа11 ЕС5В, С8А-Ко1ог, сосуд для центрифуги емкостью 250 мл, 60 мин, 4°С, 12.000 об./мин, 23.000 д), жидкость сверху поставили на лед, а осадок после центрифугирования ресуспендировали в 100 мл натрийфосфатного буфера, рН 7,5. Центрифугирование и ресуспендирование повторяли трижды, причем натрийфосфатный буфер при третьем повторе содержал 1% 8Ό8 (=додецилсульфат натрия). После ресуспендирования перемешивали 1 ч и осуществляли заключительное центрифугирование (8огуа11 К.С-5В, С8А-Ко1ог, сосуд для центрифуги емкостью 250 мл, 60 мин, 4°С, 12000 об./мин, 23000 д). В соответствии с 8Ό8РАСЕ-анализом гидрофобин после заключительного центрифугирования содержится в жидкости (фигура). Опыты показали, что гидрофобин, по видимому, содержится в форме телец включений в соответствующих клетках Е.сой. 50 мл жидкости, содержащей гидрофобии, наносили на колонку с 50 мл никельсефарозы высокого качества 17-5268-02 (Атегайата), которая приведена к равновесию с помощью 50 мМ буфера Тт15-С1 рН 8,0. Колонку промывали 50 мМ буфера Тпх-С1 рН 8,0 и гидрофобин элюировали затем с помощью 50 мМ буфера Тпх-С1 рН 8,0, содержащего 200 мМ имидазола. Для удаления имидазола раствор подвергали диализу против 50 мМ буфера Тпх-С1 рН 8,0.
Фигура показывает очистку полученного гидрофобина:
След А: нанесенный слой никель-сефарозы с колонки (разбавление 1:10)
След В: протекание = элюат стадии промывки
Следы С-Е: ΟΌ 280 максимумы фракций элюирования (^Р1, ^Р2, \УР3)
След Е показывает нанесенные маркеры.
Гидрофобии на фигуре имеет молекулярный вес около 53 кД. Более мелкие полосы представляют отчасти продукты разложения гидрофобина.
Технологические испытания:
Характеристика гидрофобина с помощью изменения краевого угла капли воды на стекле Субстрат:
Стекло (оконное стекло, 8иббеи1хсйе С1а®, Маппйеш):
Использовали очищенный в соответствии с примером 8 гидрофобин.
- Концентрация гидрофобина в растворе: 100 мкг/мл, раствор содержит еще 50 мМ натрийацетатного буфера, а также 0,1% полиоксиэтилен(20)-сорбит-монолаурата (Т\тееп® 20), величина рН раствора: 4
- Погружение стеклянной пластинки в этот раствор на ночь (температура 80°С)
- После чего покрытая гидрофобином стеклянная пластинка извлекается из раствора и промывается дистиллированной водой,
- После этого инкубация 10 мин/80°С/1% раствор 8Ό8 (=додецилсульфата натрия) в дистиллированной воде
- Повторное промывание в дистиллированной воде
Образцы сушили на воздухе и определяли краевой угол (в градусах) между каплей воды в 5 мкл и обработанной стеклянной поверхностью при комнатной температуре.
Измерение краевого угла осуществляли на приборе Оа1ар11У51сх Соп1ас1 Апд1е 8ух1ет ОСА 15+, 8ой\таге 8СА 20.2.0. (№уетЬег 2002). Измерение происходило в соответствии с данными изготовителя.
Необработанное стекло давало краевой угол 30 ± 5°;
Стеклянная пластинка, покрытая гидрофобином в соответствии с примером 8 (уааб-беетА-Ы®6), давала краевой угол 75 ± 5°.
Увеличение краевого угла: 45°
- 11 014384
Пример 10. Приготовление промывочного бурового раствора на масляной основе, содержащего концентрат гидрофобина (уаа6-Ха-6е^А-Н186)
Концентрат гидрофобина добавляется в количестве
a) 0 ррт
b) 10 ррт
c) 100 ррт
б) 10.000 ррт к композиции, содержащей 222 мл биодизеля и 61 мл раствора хлорида калия (25%-ного).
С помощью прибора для эмульгирования ШИга Тиггах Т50) готовили различные эмульсии с использованием следующей последовательности числа оборотов прибора: 2000, 6000 и 10000 об./мин и времени перемешивания 5 и 10 мин.
С пробами промывочных буровых растворов проводили соответствующий эмульсионный тест (аналогично ΌΙΝ 51415).
При этом смешивали компоненты друг с другом, причем условия (время перемешивания и скорость перемешивания) названы выше. После чего наблюдали процесс деэмульгирования в зависимости от времени.
Оценка происходила при помощи стандарта, причем соответствует полному разделению эмульсии, соответствует частичному разделению при высвобождении воды, соответствует не зафиксированному разделению эмульсии.
В табл. 1 сведены результаты опытов для указанных концентраций гидрофобина. Показаны соответствующие оценки разделения фаз через 1 мин, 24 и 48 ч (соответственно при комнатной температуре, т.е. 23°С). Далее, осуществляли также опыты при температуре, остающейся постоянной, 80°С.
Таблица 1
Пример Условия 1 мин 24 ч 48 ч 24 ч,80°С
10а (сравнение) 5 мин, 6000 об/мин 3 1 1 1
10а (сравнение) 10 мин, 6000 об/мин 3 1 1 1
10Ь 5 мин, 6000 об/мин 3 3 3 1
юь 10 мин, 6000 об/мин 3 3 3 1
10с 5 мин, 6000 об/мин 3 3 3 2
Юс 10 мин, 6000 об/мин 3 3 3 2
106 5 мин, 6000 об/мин 3 3 3 2
106 10 мин, 6000 об/мин 3 □ 3
Комментарии:
Без добавления гидрофобина А наблюдается ускоренное расслоение буровой смеси. Оценка 1 для практики масляного бурения не приемлема. Гидрофобины даже в чрезвычайно малых количествах проявляют хороший эмульгирующий эффект. Уже концентрация гидрофобина 10 ррт (менее чем 1 мг) приводит к приемлемому результату. При использовании гидрофобина в более высокой дозировке получают гораздо лучший результат, особенно относительно термостабильности.
- 12 014384
Сопоставление названий последовательностей с последовательностями ДНК и последовательностями полипептидов в протоколе последовательностей
с1е\\'Л последовательность ДНК и последовательность полипептидов 8ЕЦ ГО N0: 1
склуД последовательность полипептидов 8ЕС> ГО N0: 2
τοάΑ последовательность ДНК и последовательность полипептидов 8ЕЦ ГО N0: 3
ΕοάΛ последовательность полипептидов 8ЕЦ ГО N0: 4
ЬурА последовательность ДНК и последовательность полипептидов 8 Ер ГО N0: 5
йурА последовательность полипептидов 8Е<5 ГО N0: 6
ИурВ последовательность ДНК и последовательность полипептидов 8ЕЦ ГО N0: 7
ИурВ последовательность полипептидов 8Ер ГО N0: 8
зсЗ последовательность ДНК и последовательность полипептидов 8Е0 ГО N0: 9
зсЗ последовательность полипептидов 8Εζ> ΙϋΝΟ: 10
ЬазЛ последовательность ДНК и последовательность полипептидов 8Εζ) ГО N0: 11
Ъазк1 последовательность полипептидов 8ЕЦГОЦ0: 12
Ьаз12 последовательность ДНК и последовательность полипептидов 8Εζ>ΙϋΝ0: 13
Ьа$12 последовательность полипептидов 8ΕζΗΒΝ0; 14
уааб последовательность ДНК и последовательность полипептидов ЗЕрГОЫО: 15
уаас! последовательность полипептидов ЗЕЦГОМО: 16
уаае последовательность ДНК и последовательность полипептидов ЗЕС) ГО N0: 17
уаае последовательность полипептидов 8Ер ГО N0: 18
уаа<1-Ха-де\¥А-Ь15 последовательность ДНК и последовательность полипептидов ΒΕζΗϋΝΟ: 19
уаад-Ха-безуА-Ыз последовательность полипептидов 5Εζ)ΙΟΝΟ:2θ
уаай-Ха-гойА-Ыз последовательность ДНК и последовательность полипептидов 8Εζ)Ι0Ν0: 21
уаа0-Ха-гос1А-И15 последовательность полипептидов 8ΕςΐΟΝΟ:22
уаас1-Ха-ЬазП -Ιιίβ последовательность ДНК и последовательность полипептидов 8ЕЦ ГО N0: 23
уаа<:1-Ха-ЬазП -Ыз последовательность полипептидов ЗЕЦГОЫО: 24
- 13 014384
Перечень последовательностей <110> БАСФ Акциенгезелыиафт < 12 0 > Пр им енсн и е бел ков в кач ест в е де му л ь гаторо в <130> АЕ 200500040 <160 24 <170> РаСепЫп уегатоп 3,1 <210> 1 <211> 405 <212> ДНК <213> ЬазС-ЗеиА <220>
<221> СОЗ <222> (!)..(405) <223>
<400> 1
асд МеС 1 сдс Агд еес РЬе аСс Не дСс Уа1 5 СсС Зег сСс Ьеи сСс Ьеи дсс А1а ССс РЬе 10 асе ТЬг дсс А1а дед А1а дсс А1а асе ТЬг 15 дед А1а 48
асе дсс сСс ссд дсс СсС дсс дса аад аас дед аад сСд дсс асе Ссд 96
ТЬг А1а Беи Рго А1а Зег А1а А1а Ьуз Азп А1а Ьуз Ьеи А1а ТЬг Зег
20 25 30
дед дсс ИС дсс аад сад дсс даа ддс асе асе Сдс аас дСс ддс Ссд 144
А1а А1а РЬе А1а Ьуз С1п А1а С1и С1у ТЬг ТЬг Суз Азп Уа1 С1у Зег
35 40 45
аСС дсС Сдс Сдс аас Ссс ссс дсС дад асе аас аас дас адС сСд Нд 192
Не А1а Суз Суз Азп Зег Рго А1а С1и ТЬг Азп Азп Азр Зег Ьеи Ьеи
50 55 60
аде ддс сед сСс ддс дсС ддс ссс ССС аас ддд ссс Ссд ддс аас асе 240
Зег 61у Беи Ьеи С1у А1а С1у Ьеи Ьеи Азп С1у Ьеи Зег Е1у Азп ТЬг
65 70 75 80
ддс аде дсс Сдс дсс аад дед аде ССд асе дас сад сСд ддС сСд сСс 288
С1у Зег А1а Суз А1а Ьуз А1а Зег Ьеи Не Азр 61п Ьеи С1у Ьеи Ьеи
85 90 95
дес сСс дСс дас сас асе дад даа ддс ССС дСс Сдс аад аас асе дСс 336
А1а Ьеи Уа1 Азр Ηί з ТЬг С1и С1и С1у Рго Уа1 Суз Ьуз Азп Не Уа1
100 105 110
дсС Сдс Сдс ссС дад дда асе асе аас СдС дсс дсс дСс дас аас дсС 384
А1а Суз Суз ₽го С1и С1у ТЬг ТЬг Азп Суз Уа1 А1а Уа1 Азр Азп А1а
115 120 125
ддс дсС ддс асе аад дсЬ дад 405
С1у А1а 61у ТЬг Ьуз А1а С1и
- 14 014384
130 135
<210> 2
<211> 135
<212> РКТ
<213> Ьаз£- -ЦеиА
<400> 2
Ме£ Агд 1 РЬе 11е Уа1 5 Зег Ьеи Ьеи
ТЬг А1а Ьеи Рго 20 А1а Зег А1а А1а
А1а А1а РЬе 35 А1а Ьуз С31п А1а 01и 40
Не А1а 50 Суз Суз Аз η Зег Рго 55 А1а
Зег С1у 65 Ьеи Ьеи С1у А1а 70 31у Ьеи
С1у Зег А1а Суэ А1а 35 Ьуз А1а Зег
А1а Ьеи νβΐ АЗр 100 Ηί® ТЬг С1и <31и
А1а Суз Суз 115 Рго 61и е1у ТЬг ТЬг 120
61у А1а 130 е1у ТЬг Ьуз А1а С1и 135
<210> 3
<211> 471
<212> ДНК
<213> Ьаз£- -гойА
<220>
<221> СОЗ
<222> (1) . (471)
А1а РЬе ТЬг А1а А1а А1а ТЬг А1а
10 15
Ьуе 25 Αεη А1а Ьуз Ьеи А1а 30 ТЬг Зег
С1у ТЬг ТЬг Суз Азп 45 Уа1 С1у Зег
С1и ТЬг Азп Азп 60 Азр Зег Ьеи Ьеи
Ьеи Азп 61у 75 ьеи Зег С1у Азп ТЬг 80
Ьеи Не 90 Азр С1п Ьеи С1у Ьеи 95 Ьеи
<31у 105 Рго νβΐ Суз Ьуз Азп 110 Не Уа1
Азп Суз Уа1 А1а Уа1 125 Азр Азп А1а
- 15 014384 <223>
<400> 3
аСд МеГ. 1 аад Ьуз ССс РЬе Ссс Зег аСС Не 5 дсС А1 а дсс А1а дсС А1а дСс Уа1 дСС Уа1 10 дсС А1а ССс РЬе дсс А1а дсс А1а Ссс Зег 15 дСс νβΐ 48
дед дсс ссс сер ССС дсс саС да С Ссс сад ССС дес ддс аас ддс дсс 96
А1а А1а Ьеи Рго Рго А1а ΗίΒ Азр Зег- Е1п РЬе А1а 61у Азп С1у Уа1
20 25 30
ддс аас аад ддс аас аде аас дСс аад ССс ссС дСс ссс даа аас дСд 144
61у Азп Ьуз С1у Азп Зег Азп νβΐ Ьуз РЬе Рго Уа1 Рго □ 1и Азп Уа1
35 40 45
асе дсс аад сад дсс Ссс дас аад Сдс ддь дао сад дсс сад сСс СсС 192
ТЬг νβΐ Ьуз 61п А1а Зег Азр Ьуз Суз С1у Азр 61η А1а 61п Ьеи Зег
50 55 60
Сде Сдс аас аад дсс асд Сас дсс ддь да с асе аса асе дСС даС дад 240
Суз Суз Азп Ьуз А1а ТЬг Туг А1а С1у Азр ТЬг ТЬг ТЬг Уа1 Азр 61и
65 70 75 90
ддс еСС сСд Ось ддС дсс сСс аде ддс ссс асе ддс дсс 990 СсС дд^ 288
61у Ьеи Ьеи Зег 61у А1а Ьеи Зег 61у Ьеи Не С1у А1а С1у Зег 61у
85 90 95
дсс даа ддс есс ддс сСс ССс дас сад Сдс Ссс аад есс дас дсс дсб 336
А1а 61и 61у Ьеи 61у Ьеи РЬе Азр 61п Суз Зег Ьуз Ьеи Азр Уа1 А1а
100 105 110
дСс сСс аСС ддс аСс саа даС есс дСс аас сад аад Сдс аад саа аас 384
νβΐ Ьеи 11е С1у 11е С1п Азр Ьеи Уа1 Азп С1п Ьуз Суз Ьуз С1п Азп
115 120 125
аСС дсс Сдс Сдс сад аас Ссс ссс Ссс аде дед даС ддс аас сСС 432
Не А1а Суз Суз С1п Азп Зег РГО зег Зег А1а Азр С1у Азп Ьеи Не
130 135 140
ддс дес сСс ссС Сдс дсс дсс сСС ддс Ссс асе сСс 471
61у Уа1 61 у Ьеи Рго Суз Уа1 А1а Ьеи 61у Зег Не Ьеи
145 150 155
<210> 4
<211> 157
<212> РКТ
<213> : ЬазС-гойА
<400> 4
Не С Ьуз РЬе Зег 11е А1а А1а А1а Уа1 Уа1 А1а РЬе А1а А1а Зег Уа1
1 5 10 15
А1а А1а Ьеи Рго Рго А1а Н1з Азр Зег 61п РЬе А1а 31у Азп 61у Уа1
20 25 30
- 16 014384
С1у Азп Буз С1у Азп 5ег Азп Уа1 Буз РЬе ЕГО Уа1 Рго С1и Азп Уа1
35 40 45
ТЬг Уа1 Буз 61п А1а 8ег Азр Ьуз Суз С1у Азр С1п А1а С1п Веи Зег
50 55 60
Суз Суз Азп Ьуз А1а ТЬг Туг А1а С1у Азр ТЬг ТЬг ТЬг Уа1 Азр <3111
65 70 75 80
С1у Ьей Беи Зег С1у А1а Беи Зег С1у Ьей 11е С1у А1а С1у Зег С1у
85 90 95
А1а С1и Н1у Ьёи еху Беи РЬе Азр 61п Суз Зег Ьуз Ьей Азр 7а1 А1а
100 105 110
\7а1 Ьей Не 01 у 11е е1п Азр Веи Ча1 Азп С1п Ьуз Суз Буз (31п Азп
115 120 125
Це А1а Суз Суз С1П Азп 5ег Рго Зек Зег А1а Азр С1у Азп Ьей 11е
130 135 140
31у Уа1 е1у Ьей Рго Сув Уа1 А1а Беи С1у Зег Не Ьей
145 150 155
<210> 5
<211> 336
<212> , ДНК
<213> Ьаз£- -НурА
<220
<221> С08
<222> (1) ,. .(336)
<223>
<400 5 ссс Рго дес А1а 15 С иС Ьей 46
а£д Мер 1 а£с 11е СсС Зег сдс Агд дос Уа1 5 Ьей дБс νβΐ дси А1а дсС А1а сС.с Ьей 10 дне Уа1 дсС А1а с£с Ьей
дое асе дса асе ссС дсЬ ссс дда аад ссС ааа дос аде адС сад где 96
Уа1 ТЬг А1а ТЬг Рго А1а Рго С1у Вуз Рго Буз А1а Зег Зег 31п Суз
20 25 30
дас дсс ддо даа а£с саО Ьдс Сдс дас асе сад сад асе ссс дас еас 144
Аар Уа1 О1у Е11Д Не Н13 Суз сув Аар ТЬг С1п 61п ТЬг Рго Азр ΗΪ5
35 40 45
асе аде дес дсс дед есо ддг съд СШ ддс дНЬ ссс асе аас сСР ддь 192
- 17 014384
ТЬг Зег А1а 50 А1а А1а Зег С1у 55 Ьеи Ьеи СЬу Уа1 Рго 60 11е Азп Ьеи С1у
дсб сне ебс ддб ббс дас еде асе ССС абб бее дбе ебб ддс дбе ддб 240
А1а Ьеи С1у РЬе Азр Суз ТЬг Рго 11е Зег Уа1 Ьеи С1у Уа1 С1у
65 70 75 80
ддс аас аас еде дсь дсб сад ссб дбе Где б де аса дда ааб саа Обе 288
С1у А&п Азп Суз А1а А1а С1п Рго Уа1 Суз Суз ТЬг С1у Азп С1п РЬе
85 90 95
асе дса ббд абб аас дер ебб дас бде бсб ссб дбе ааб дбе аас ебс 336
ТЬг А1а Ьеи Не Азп А1а Ьеи Азр Суз Зег Рго Уа1 Азп Уа1 Азп Ьеи
100 105 110
<210? 6
<211? 112
<212> РКТ
<213> ЬазЕ- -НурА
<400> 6 Ьеи
Меб 1 Не Зег Агд Уа1 5 Ьеи Уа1 А1а А1а Ьеи 10 Уа1 А1а Ьеи Рго А1а 15
Уа1 ТЬг А1а ТЬг рго А1а Рго 61у ьуз рго Ьуз А1а Зеб Зег С1п Суз
О А 7 Е Т -Ί
ώ. V Ζ. .>ν
Азр Уа1 С1у 61и 11е Н13 Суз Суз Азр ТЬг С1П С1п ТЬг Рго Азр Н1з
35 40 45
ТЬг Зег А1а А1а А1а Зег С1У Ьеи Ьеи С1у Уа1 Рго 11е Азп Ьеи С1у
50 55 60
А1а РЬе Ьеи б1у РЬе Азр Суз ТЬг Рго Не Зег Уа1 Ьеи С1у Уа1 С1у
65 70 75 80
С1у АЗП Азп Суз А1а А1а е1п Рго Уа1 Суз Суз ТЬг С1у Азп С1п РЬе
85 90 95
ТЬг А1а Ьеи не АЗЬ А1а ьеи Азр Суз Зег Рго Уа1 Азп Уа1 Азп Ьеи
100 105 НО
<210> 7 <211? 357 <212? ДНК <213? Ьаз£~НурВ <220?
- 18 014384
<221> С05
<222> (1) . . (357
<223>
<400 7 аад Ьуз 10 асе ТЬг ссс Ьеи сСс Ьеи дСс Ча1 дед А1а 15 ССС Ьеи 48
аСд МеС 1 дсс Ча1 аде Зег асд ТЬг ССс РЬе 5 аСс Не ас! ТЬг дСс Ча1 дса А1а
ССС ССС дСс ааС аСс ааС аСс дСс дСС ддс асС дса асе асе ддс аад 96
Ьеи РЬе Ча1 Азп 11е Азп Не Ча1 Ча1 С1у ТЬг А1а ТЬг ТЬг 61у Ьуз
20 25 30
сад ьдс аде асе ддО ссС аСе дад Сдс Сдс аад сад дСс аСд даС СсС 144
Нгз Суа Зег ТЬг 61у Рго Не С1и Суз Суз Ьуз С1п Ча1 МеС Азр Зег
35 40 45
аад аде ссс сад дсС асд дад сСС сСС асд аад ааС ддс еСС ддс сСд 192
Ьуз Зег Рго 31п А1а ТЬг С1и Ьеи Ьеи ТЬг Ьуз Азп С1у Ьеи С1у Ьеи
50 55 60
ддД дСс еСС дсс ддс дед аад дд*: есс дСС ддс дед аас Сдс аде ссС 240
01у Ча1 Ьеи А1а С1у Ча1 Ьуз О1у Ьеи Ча1 С1у А1а Азп Суз Зег Рго
65 70 75 80
асе асд дса аСС ддс асе ддс Ссс ддс аде саа Сдс СсС ддс сад асе 288
Не ТЬг А1а 11е С1у Не С1у Зег С1у Зег <31п Суз Зег С1у С1п ТЬг
85 90 95
дСС Оде Оде сад ааС ааС ааС ССс аас ддс дИ дСс дсС аСС ддС Сдс 336
Ча1 Суз Суз Е1П Азп Азп Азп РЬе Азп С!у Ча! Ча! А1а Не С1у Суз
100 105 НО
асС ссс аСС ааС дсс ааС д!д 357
ТЬг Рго 11е Азп А1а Азп Ча!
115
<210 8
<211> 119
<212> РРТ
<213> Ьаз£- -НурЕЗ
<400 8
МеС Ча! Зег ТЬг РЬе Не ТЬг Ча1 А1а Ьуз ТЫ Ьеи Ьеи Ча1 А1а Ьеи
1 5 10 15
Ьеи РЬе Ча1 Азп 11е АЗП Не Ча1 Ча1 С1у ТЬг А1а ТЬг ТЬг С1у Ьуз
20 25 30
ΗΪ3 Суз Зег ТЬг С1у Рго 11е 61и Суз Суз Ьуз С1п Ча1 МеС Азр Зег
35 40 45
- 19 014384
Ьуз Зег 50 Рго 61п А1а ТЬг С1и 55 Ьеи Ьеи ТЬг Ьуз Азп 60 С1у Ьеи С1у Ьеи
С1у Уа1 65 Ьеи А1а С1у Уа1 70 Ьуз С1у Ьеи Уа1 □1у 75 А1а Азп Суз Зег Рго 50
Не ТЬг А1а Не С1у 85 Не 61у Зег С1у Зег 90 С1п Суз Зег С1у С1п 95 ТН1
Уа1 Суз Суз С1п 100 Азп Азп Азп РЬе Азп 105 С1у Уа1 Уа1 А1а Не 110 С1у Суз
тьг Рго 11е 115 АЗП А1а Азп Уа1
<210> 9
<211> 40Θ
<212> ДНК
<213> Ьаз£- -зсЗ
<220>
<221> СОЗ
<222> (1) . (408)
<223>
<400> 9
асд мес 1 ььс РЬе дсс А1а сде Агд ССС Ьеи 5 ссс Рго дос Уа1 дбд Уа 1 ЬЬс РЬе сСс Ьеи 10 Ьас Туг дсс А1а СЬс РЬе дЬс Уа1 дед А1а 15 СГС РЬе
ддс дсс С1С дЬс дес дсс СЬС сса ддь ддс сас ссд ддс асд асе асд
С1у А1а Ьеи Уа1 А1а А1а Ьеи Рго е1у С1у Н13 Рго С1у ТЬг ТЬг ТЬг
20 25 30
ссд ссд дИ асд асд асд д£д асд дСд асе асд ссд ссс 1сд асд асд
Рго Рго Уа1 ТЬг ТЬг ТЬг Уа1 ТЬг Уа1 ТЬг ТЬг Рго Рго Зег ТЬг ТЬг
35 40 45
асе аЬс дсс дсс ддЬ ддс асд едь ась асд ддд Ссд сСс 5с): Ьдс Оде
ТЬг 11е А1а А1а 61у В1у ТЬг Суз ТЬг ТЬг 21у Зег Ьеи Зег Суз Суз
50 55 60
аас сад ди саа Ьсд дед аде аде аде СС5 дЫ: асе дсс сЬс сбс ддс
Азп С1п Уа1 С1п 8ег А1 а Зег Зег Зег Рго Уа1 ТЬг А1а Ьеи Ьеи С1у
65 70 75 80
с5д ебс ддс аОЬ д!с с!с аде дас сЬс аас дсь сСс дЬ5 ддс аЬс аде
Ьеи Ьеи С1у Не Уа 1 Ьеи Зег Азр Ьеи Азп Уа1 Ьеи Уа1 61у 11е Зег
85 90 95
Ьдс ЬсС ссс сЬс асЬ дбе аЬс ддс дЬс дда ддс аде ддс сдс Гсд дед
Суз Зег Рго Ьеи ТЬг Уа1 11е 61у Уа1 61у 61у Зег (31у Суз Зег А1а
- 20 014384
100 105 но
сад асе дСс Сдс Сдс даа аас асе саа ССс аас ддд сед асе аас асе 384
С 1η ТЬг Уа1 Суз Суз С1и Азп ТЬг С1п РЬе Азп Й1у Ьеи 11е Азп Не
115 120 125
ддЬ Сдс асе ссс аСс аас аСс сСс 408
61у Суз ТЬг Рго Не Азп 11е Ьеи
130 135
<210> 10
<211> 136
<212> РРТ
<213> ЬазС-зеЗ
<400> 10
Мес 1 РЬе А1а Агд Ьеи 5 рго Уа1 Уа1 РЬе Ьеи 10 Туг А1а РЬе Уа1 А1а 15 РЬе
С1у А1а Ьеи Уа1 А1а А1а Ьеи Рго С1у 01у Н13 Рго <31у ТЬг ТЬг ТЬг
20 25 30
Рго Рго Уа1 ТЬг ТЬг ТЬг Уа1 ТЬг Уа1 ТЬг ТЬг Рго Рго Зег ТЬг ТЬг
35 40 45
ТЬг 11е А1а А1а С1у С1у ТЬг Суз ТЬг ТЬг С1у Зег Ьеи Зег Суз Суз
50 55 60
Азп Б1п Уа1 С1п Зег А1а Зег Зег Зег Рго Уа1 ТЬг А1а Ьеи Ьеи 61у
65 70 75 80
Ьеи Ьеи е1у Не Уа1 Ьеи Зег АЗр Ьеи Азп νβΐ Ьеи Уа1 С1у Не Зег
85 90 95
Суз Зег Рго Ьеи ТЬг Уа1 Не С1у Уа1 31у С1у Зег С1у Суз Зег А1а
100 105 110
С1п ТЬг Уа1 Суз Суз С1и Азп ТЬг 01п РЬе Азп <31у Ьеи Не Азп Не
115 120 125
С1у Суз ТЬг Рго Не Азп Не Ьеи
130 135
<210> 11
<211> 483
<212> ДНК
<213> ЬазЕ~ВАЗг1
- 21 014384
<220>
<221> СОЗ
<222> (1).(483)
<223>
<400> 11
атд МеЬ 1 аад Ьуз ьгс ₽Ье Усс Зег д(.с Уа1 5 Ьсс Зег дсс А1а дсс А1а дЬс Уа1 сЬс Ьеи 10 дсс А1а :Ёс РЬе дсс А1а дсс А1а Ьсс Зег 15 дЬс Уа1 48
дсс дсс сЬс ССР сад сас дас Ьсс дсс дсс ддс аас ддс аас ддс дЬс 96
А1а А1а Ьеи Рго С1п Н1з Азр Зег А1а А1а 61у Азп С1у Азп 61у Уа1
20 25 30
ддс аас аад Ис сек дЬс ссЬ дас дас дЬс асе дЬс аад сад дсс асе 144
С1у Азп Ьуз РЬе Рго Уа1 Рго Азр Азр Уа1 ТЬг Уа1 Ьуз С1п А1а ТЬг
35 40 45
дас аад Ьдс ддс дас сад дсс сад сЬс Ьсс 5дс Ьдс аас аад дсс асе 192
Азр Ьуз Суз С1у Азр С1п А1а С1п Ьеи Зег Суз Суз Азп Ьуз А1а ТЬг
50 55 60
Ьас дсс ддс дас дес сЬс асе дас аЬс дас дад ддс аре С1С дсс ддс 240
Туг А1а С1у Азр Уа1 Ьеи ТЬг Азр 11е Азр С1и С1у Не Ьеи А1а С1у
65 70 75 80
.. 1 .· л! = 4.^ ООО
аад ЧД (АЧи ддс ддс ддс ΐ-СС ддс дад ддс ддс *- V О
Ьеи Ьеи Ьуз Азп Ьеи Не С1у Б1у С1у Зег С1у Зег С1и С1у Ьеи С1у
85 90 95
сЪс ЬЬс дас сад Оде д£с аад сЬс дас сьс сад аЬс Ьсс дЬс а£с ддс 336
Ьеи РЬе Азр Й1п Суя Уа1 Ьуз Ьеи Азр Ьеи <з1п 11е Зег Уа1 Не 61у
100 105 110
асе се! абс сад дас сЬс СТС аас сад дЬс аас аад сад Ьдс аад сад 384
Не Рго Не <31п Азр Ьеи Ьеи Азп С1п Уа1 Азп Ьуз С1п Суз Ьу® 61п
115 120 125
аас аЬс дсс Ьдс Оде сад аас Ьсс ссЬ Ьсс дас дсс асе ддс ьсс С1С 432
Азп 11е А1а Суз Суз <31п Азп Зег Рго Зег Азр А1а ТЬг С1у Зег Ьеи
130 135 140
дрс аас сЬс ддс сЪс ддс аас ссЬ Ьдс аЬс ссЬ д£с ΐ-СС сРс сЬс саЬ 480
Уа1 Азп Ьеи 61у Ьеи С1у Азп Рго Суз 11е Рго Уа1 Зег Ьеи Ьеи Н1з
145 150 155 160
аЬд 483
МеЪ <210> 12 <211> 161 <212> РКТ <213> Ьаз£-ВАЗР1
- 22 014384 <4О0> 12
МеС. 1 Ьуз РЬе Зег Уа1 5 Зег А1а А1а Уа1 Ьеи А1а 10 РЬе А1а А1а Зег 15 Уа1
А1а А1а Ьеи Рго С1п Н1з Азр Зег А1а А1а С1у Азп С1у Азп С1у Уа1
20 25 30
С1у Азп Ьуз РЬе Рго Уа1 Рго Азр Азр Уа1 ТЬг Уа1 Ьуз 61п А1а ТЬг
35 40 45
Азр Ьуз Суз 61у Азр С1п А1а С1п Ьеи Зег Суз Суз Азп Ьуз А1а ТЬг
50 55 60
Туг А1а С1у Азр Уа1 Ьеи ТЬг Азр Не Азр С1и С1у 11е Ьеи А1а С1у
65 70 75 80
Ьеи Ьеи Ьуз Азп Ьеи 11е С1у Й1у 61у Зег С1у Зег 61и С1у Ьеи е1у
85 90 95
Ьеи РЬе Азр С1п Суз Уа1 Ьуз Ьеи Азр Ьеи С1п 11е Зег Уа1 11е С1у
100 105 110
Не Рго Не <31п Азр Ьеи Ьеи Азп С1п Уа1 Азп Ьуз <31п Суз Ьуз С1п
115 120 125
Азп 11е А1а Суз Суз С1п Азп Зег Рго Зег Азр А1а ТЬг 61у Зег Ьеи
130 135 140
Уа1 Азп. Ьеи С1у Ьеи Е1у Азп Рго Суз Пе Рго Уа1 Зег Ьеи Ьеи ΗΪ3
145 150 155 160
Μβΐ.
<210> 13 <211> 465 <212> ДНК <213> Ьаз£-ВАЗК2 <220>
<221> СОЗ <222> (1),.(465) <2 2 3>
- 23 014384
<400 13
аСд Мес 1 аад Ьуз С Ос РЬе Осс Зег дсс Уа1 5 ОСС Зег дсс А1а дсс А1а до с Уа1
дсс дсс сОс ссЬ сад сас дас Осс дсс
А1а А1а Ьеи Рго 20 С1п Н13 Азр Зег А1а 25
ддс аас аад СОс ссС дОс ссС дас дас
С1у Азп Ьуз 35 РЬе Рго 7а1 Рго Азр 40 Азр
дас аад Сдс ддс дас сад дсс сад СОС
Азр Ьуз 50 Суз 61у Азр С1п А1а 55 С1п Ьеи
Сас дсс ддс дас дО с асе дас аре дас
Туг 65 А1а С1у Азр Уа1 ТЬг 70 Азр 11е Азр
СО с аад аас сОс аос ддс ддс ддс Осс
ьеи Ьуз Азп Ьеи Не 35 61у С1у С1у Зег
СОс дас сад Сдс до с аад сОс дас сОс
РЬе Азр 61п Суз 100 Уа1 Ьуз Ьеи Азр Ьеи 105
ссс асе сад дас сое сОс аас сад сад
Рго 1_е <31п 115 Азр Ьеи Ьеи Азп Е1п 120 Й1п
Г**Й<Т ааг Ь (2 С сс Ъ 0.СС П Сч· аг,„
•5
Суз 61п 130 Азп Зег Рго 5ег Азр 135 А1а ТЬг
аас ссС Сдс аос ССР дОс Осс сОс сОс
Азп 145 Рго Суз Не Рго Уа1 150 Зег Ьеи Ьеи
СОС Ьеи 10 дсс А1а еос РЬе дсс А1а дсс А1а Осс Зег 15 дос Уа1 48
дсс ддс аас ддс аас ддс дОс 96
А1а С1у Азп С1у Азп 30 61у Уа1
дОс асе дОс аад сад дсс асе 144
Уа1 ТЬг Уа1 Ьуз 45 21п А1а ТЬг
Осс Оде Оде аас аад дсс асе 192
Зег Суз Суз 60 Азп Ьуз А1а ТЬг
дад ддс аОс сОс дсс ддс сОс 240
С1и С1у 75 Не Ьеи А1а С1у Ьеи 80
ддс Осс дад ддс сОс ддс СОс 238
Е1у 90 Зег (31и С1у Ьеи С1у 95 Ьеи
сад аОс Осс до с аОс ддс асе 336
С1П Не Зег Уа1 11е 110 С1у Не
Оде аад сад аас аОс дсс Сдс 384
Суз Ьуз С1п Азп 125 Т1е А1а Суз
лгпг· Осс ΟΪ.'' ГГ4-Г- аал с£с ПЛ г· 4 32
З'Э'··'
С1у саО Н13 Зег аОд МеС 155 Ьеи 140 Уа1 Азп Ьеи С1у 465
<210 14 <211> 155 <212> РНТ <213> Ьазг-влзг2
<400 14
мео 1 Ьуз РЬе Зег Уа1 5 Зег А1а А1а Уа1 Ьеи 10 А1а РЬе А1а А1а Зег 15 Уа1
А1а А1а ьеи РГО 20 С1п Н1Э Азр Зег А1а 25 А1а С1у Азп С1у Азп 30 С1у Уа1
61у Азп Ьуз 35 РЬе Рго Уа1 Рго Азр 40 Азр Уа1 ТЬг Уа1 Ьуз 45 □ 1п А1а ТЬг
Азр Ьуз Суз С1у Азр 61п А1а С1п Ьеи Зег Суз Суз Азп Ьуз А1а ТЬг
- 24 014384
50 55 60
Туг А1а СЬу Азр УаЬ ТЬг Азр ЬЬе Азр СЬи СЬу Пе Ьеи АЬа СЬу Ьеи
65 70 75 80
Ьеи Ьуз Азп Ьеи 11е СЬу СЬу СЬу Зег СЬу Зег СЬи СЬу Ьеи СЬу Ьеи
85 90 95
РЬе АЗр С1п Суз УаЬ Ьуз Ьеи Азр Ьеи С1п Ле Ёег УаЬ Ле СЬу Не
юо 105 110
РГО Ле СЬп АЗр ьеи ьеи Азп СЬп СЬп Суз Ьуз С1п Азп Ле АЬа Суз
115 12С 125
Суз СЬп Азп Зег Рго Зег Азр АЬа ТЬг СЬу Зег Ьеи УаЬ Азп Ьеи СЬу
130 135 140
Азп Рго Суз Не Рго УаЬ Зег Ьеи Ьеи НЬз МеЬ
145 150 Ь55
<210> 15 <211> 882 <212> ДНК <213> Ьаз£~уаас1
<220>
<221> СОЗ
<222> (1) . . (882}
<223>
<400> 15 аса ТЬг ддЬ С1у 5 асЬ ТЬг даа (Ни сдЬ Агд дба Уа1 ааа Ьуз 10 сдс Агд дда 61у аНд МеС дса АЬа даа СЬи 15 а£д ИеЪ
аЪд дсЬ МеЪ А1а 1 саа СЬп
саа ааа ддс ддс дьс аНс абд дас дне аНс аан дед даа саа дед ааа
СЬп Ьуз СЬу О1у Уа1 Пе МеЬ Азр УаЬ Не Азп АЬа СЬи СЬп АЬа Туз
20 25 30
аЬс дсЪ даа даа дсЬ дда дсС дЬс дсН дПа аНд дуд сПа даа сдН дЬд
11е АЬа С1и С1и АЬа СЬу АЬа Уа1 АЬа УаЬ МеС АЬа Ьеи СЬи Агд УаЬ
35 40 45
сса дса даН аШ еде дед дсЬ дда дда дНН дсс сдН аНд дсН дас ссН
Рго АЬа Азр 11е Агд А1а А1а СЬу СЬу УаЬ АЬа Агд МеС АЬа Азр Рго
50 55 60
аса аЬс дЬд даа даа дПа аЬд ааЬ дса дПа ЬсН аПс ссд дЬа аНд дса
ТНг Не Уа1 (31и 61и Уа1 МеС Азп А1а УаЬ Зег 11е Рго Уа1 МеН А1а
65 70 75 80
- 25 014384
ааа Ьуз дед А1а сдр Агд аРс Не дда С1у 85 саР Ηί3 аРР Не дЬР Уа1 даа С1и дед А1а 90 сдр Агд дрд 7а1 ср С Ьеи даа Е1и дсР А1а 95 ард Мер 288
ддр дрр да с РаР арр даб даа адр даа дРР сРд асд сед дсР дас даа 336
61у Уа1 Азр Туг Пе Азр (Ии Зех С1и Уа1 Ьеи ТЬг Рго А1а Азр С1и
100 105 110
даа РРР саР РРа ааР ааа ааь даа Рас аса дрр ССР РРР др с рдр ддс 384
(31и РЬе Нгз Ьеи Азп Ьуз Азп (Ии Туг ТЬг Уа1 Рго РЬе Уа1 Суз С31у
115 120 125
Рдс сдР даР сРЬ ддр даа дса аса сдс сдр аРР дед даа ддр дсР РсР 432
Суз Агд Азр Ьеи 61у С1и А1а ТЬг Агд Агд Не А1а С1и <Иу А1а Зег
130 135 140
ард СРР сдс аса ааа ддр дад ССР дда аса ддр ааР аРР дрр дад дсР 480
мер Ьеи Агд ТЬг Ьуз С1у С1и Рго 61у ТЬг Е1у Азп Не Уа1 (Ии А1а
145 150 155 160
дрр сдс саР аРд сдр ааа дрр аас дсР саа дрд сдс ааа дра дрр дед 528
Уа1 Агд ΗΪ3 Мер Агд Ьуз Уа1 Азп А1а □1п Уа1 Агд Ьуз Уа1 7а1 А1а
165 170 175
ард адр дад дар дад сРа ард аса даа дед ааа аас сРа ддр дсР ссР 576
Мер Зег 61и Азр С1и Ьеи МеР ТЬг С1и А1а Ьуз Азп Ьеи Е1у А1а Рго
180 185 190
Рас дад сЫ СРР сРЬ саа аРР ааа ааа дас ддс аад ерр ссР дрс дЬЬ 624
Туг С1и Ьеи Ьеи Ьеи 61п Не Ьуз Ьуз Азр С1у Ьуз Ьеи Рго Уа1 Уа1
195 200 205
аас РРР дсс дсР ддс ддс дра дса асР сса дсР даР дсР дсР сРс аРд 672
Азп РЬе А1а А1а С1у С1у Уа1 А1а ТЬх Рго А1а Азр А1а А1а Ьеи Мер
210 215 220
ард сад СРР ддр дсР дас дда дра РРР дрр ддр РсР ддр аРР РРР ааа 720
Мер 61п Ьеи С1у А1а Азр (Ну Уа1 РЬе Уа1 (Ну Зег б1у Не РЬе Ьуз
225 230 235 240
Рса дас аас ссР дсР ааа РРР дед ааа дса аРР д^д даа дса аса асР 768
Зег Азр Азп РГО А1а Ьуз РЬе А1а Ьуз А1а Не Уа1 Ни А1а ТЬг ТЬг
245 250 255
сас РЫ ас! дар Рас ааа РРа аРс дсР дад Рьд Рса ааа дад ерр ддр 816
ΗΪ5 РЬе ТЬг Азр Туг Ьуз Ьеи Не А1а 01и Ьеи Зег Ьуз (Ии Ьеи <Ну
2 60 265 270
асР дса ард ааа ддд аРР даа арс Рса аас РРа ерр сса даа сад сдр 864
ТЬг А1а Мер Ьуз С1у Пе С1и Не Зег Азп Ьеи Ьеи Рго С1и С1п Агд
275 280 285
ард саа даа сдс ддс Рдд 882
Мер С=1п 61и Агд С1у Тгр
290
<210> 16
<211> 294
<212> РКТ
<213> ЬазГ-уааЦ
- 26 014384 <4005 16
Меб 1 АЬа 61п ТЬг С1у 5 ТЬг СЬи Агд Уа1 Ьуз 10 Агд С1у МеС АЬа СЬи 15 МеС
61п Ьуз 61у 61у УаЬ Не МеС Азр УаЬ Не Азп АЬа 61 и СЬп АЬа Ьуз
20 25 30
Не АЬа 61и Е1и А1а СЬу АЬа Уа1 АЬа Уа1 МеС АЬа Ьеи СЬи Агд УаЬ
35 40 45
Рго АЬа Азр Не Агд АЬа АЬа 61у СЬу УаЬ А1а Агд МеС АЬа Азр Рго
50 55 60
ТЬг Не УаЬ СЬи 61и УаЬ МеС Азп АЬа УаЬ Зег Не Рго УаЬ МеС АЬа
65 70 75 80
Ьуз АЬа Агд Не 61у Шз Не УаЬ 61и А1а Агд УаЬ Ьеи 61и АЬа МеС
85 90 95
СЬу УаЬ Азр Туг Не Азр 61и Зег СЬи УаЬ Ьеи ТЬг Рго АЬа Азр СЬи
100 105 ыо
61и РЬе НЬз Ьеи Азп Ьуз Азп СЬи Тус ТЬг УаЬ Рго РЬе УаЬ Суз 61у
115 120 125
Суз Агд Азр Ьеи 61у СЬи АЬа ТЬг Агд Агд Не АЬа С1и СЬу А1а Зег
130 135 140
Мес Ьеи Агд ТЬг Ьуз С1у СЬи Рго СЬу ТЬг 61 у Азп Не УаЬ С1и АЬа
145 150 155 160
УаЬ Агд Н1з Мес Агд Ьуз УаЬ Азп АЬа 61п УаЬ Агд Ьуз Уа1 Уа1 АЬа
165 170 175
меь 5ег 61и Азр е1и Ьеи МеС ТЬс СЬи АЬа Ьуз Азп Ьеи 61у АЬа Рго
180 1Ξ5 190
Туг 6Ьи Ьеи Ьеи Ьеи С1п 11е Ьуз Ьуз Азр СЬу Ьуз Ьеи Рго УаЬ νβΐ
195 200 205
Азп РЬе АЬа АЬа 61у 61у Уа1 А1а ТЬг Рго АЬа Азр АЬа АЬа Ьеи МеС
210 215 220
МеС 61П Ьеи 61у АЬа Азр СЬу УаЬ РЬе УаЬ СЬу Зег 61у Не РЬе Ьуз
225 230 235 240
Зег Азр Азп Рго АЬа Ьуз РЬе АЬа Ьуз АЬа Не Уа1 61и АЬа ТЬг ТЬг
245 250 255
- 27 014384
Н1з РЬе ТЬг Азр Туг Буз Беи 11е АБа СБи Беи Зег Буз 01 и Беи СБу
2 60 265 270
ТЬг А1а Мес Буз 61у Не 61и 11е Зег Азп Беи Ьеи. Рго С1и 01п Агд
275 280 285
МеС С1п 61и Агд С1у Тгр
290
<210> 17
<211> 591
<212> ДНК
<213> Ьаз£- -уаае
<220>
<221> СОЗ
<222> (1) . . (591)
<223>
<400> 17 дад 61и
аСд Мер 1 дда СБу ССа Беи аса ТЬг аСа 11е 5 ддС СБу дСа Уа1 сСа Беи дда С1у есс Беи 10 саа СБп дда СБу дса АБа дСС УаБ ада Агд 15
сас асе сас дед асе даа дса Сдс ддс дед дес ддс сСС дБ с дса ааа
НБз Пе НБЗ А1а Не СБи А1а Суз СБу АБа А1а СБу Беи УаБ УаБ Буз
20 25 30
сдС ссд дад сад ссд аас даа дБ с дас ддд СБд аСС ССд ссд ддс ддс
Агд Рго СБи 61П Беи Азп СБи νβ1 Азр 01 у Беи Пе Беи Рго СБу СБу
35 40 45
дад аде асд асд аСд сдс сдС СБд аСс дас асд СаС саа ССс аСд дад
СБи Зег ТЬг ТЬг Мес Агд Агд Беи Не Азр ТЬг Туг СБп РЬе МеС СБи
50 55 60
ссд СЙ сдС даа ССс дсС дсБ сад ддс ааа ссд аСд ССС дда аса СдС
Рго Беи Агд С1и РЬе АБа АБа СБп СИу Буз Рго МеС РЬе СБу ТЬг Суз
65 70 75 30
дсс дда ССа асе аСа ССа дса ааа даа аСС дсс ддБ Сса даС ааС ссС
АБа СБу Беи 11е 11е Беи АБа Буз СБи 11е АБа СБу Зег Азр Азп Рго
85 90 95
саС ССа ддь ССС сСд ааС дьд дСС дСа даа сдС ааС Сса ССС ддс сдд
НХ5 Беи СБу Беи Беи Азп УаБ УаБ УаБ СБи Агд Азп Зег РЬе СБу Агд
100 105 но
сад дсс дас аде ССС даа дес дас сса аса аСС ааа ддс ССд дас дад
СБп Уа1 Азр Зег РЬе С1и АБа Азр Беи ТЬг Не Буз СБу Беи Азр СБи
115 120 125
ссЬ ссс асС ддд дБа БСс аСс сдС дсС ссд саС аББ На даа дсБ ддС
Рго РЬе ТЬг СБу УаБ РЬе 1Бе Агд АБа Рго НБз Не Беи СБи АБа СБу
- 28 014384
130 135 140
даа ааС дСС даа дСЬ сСа Ссд дад саС ааЬ ддЬ еде аСС дЬа дсс дед 480
Азп Уа1 61и Уа1 Ьеи Зег С1и Βίε Азп С1у Агд Не Уа1 А1а А1а
145 150 155 160
ааа сад ддд саа нс есс ддс еде Сса есс саС ссд дад сСд аса даа 528
Ьуз 61л 61у С1п РЬе Ьеи С1у Суз Зег РЬе Н15 Рго <31и Ьеи ТЬг С1и
165 170 175
дат; сас еда дСд асд сад сСд с ее дес даа аед дес дад даа сае аад 576
Айр ΗΪ3 Агд Уа1 ТЬг С1п Ьеи РЬе Уа1 61и мее Уа1 С1и Е1и туг Ьуз
180 185 1Э0
саа аад дса деа 591
С1п Ьуз А1а Ьеи Уа1
195
<210> 18
<211> 197
<212> РАТ
<213> ЬазЕ-уаае
<400> 18 61и
Мес 1 61у Ьеи ТЬг Не & Е1у Уа1 Ьеи 61у Ьеи Ί Н X <7 С1П С1у А1а Уа1 Агд Ί С х и
Н15 11е ΗΪ3 А1а Не 61и А1а Суз С1у А1а А1а О1у Ьеи Уа1 Уа1 Ьуз
20 25 30
Агд Рго 61и Й1п Ьеи Азп Е1и Уа1 Азр С1у Ьеи 11е Ьеи Рго С1у <31у
35 40 45
С1и Зег ТЬг ТЬг МеС Агд Агд Ьеи Не Азр ТЬг Туг С1п РЬе Мее Е1и
50 55 60
Рго Ьеи Агд С1и РЬе А1а А1а (31п С1у Ьуз Рго МеС РЬе С1у ТЬг Суз
65 70 75 80
А1а С1у Ьеи Не Не Ьеи А1а Ьуз С1и Не А1а <31у Зег Азр Азп Рго
85 90 95
ΗΪ3 Ьеи С1у Ьеи Ьеи Азп Уа1 Уа1 Уа1 С1и Агд АЗП Зег РЬе С1у Агд
100 105 НО
61п Уа1 Азр Зег РЬе 61и А1а Азр Ьеи ТЬг Не Ьуз С1 у Ьеи Азр 51и
115 120 125
Рго РЬе ТЬг 61у Уа1 РЬе Не Агд А1а Рго В13 Не Ьеи С1и А1а О1у
130 135 140
- 29 014384
С1и Азп 145 Уа1 61ч νβΐ Ьеи 150 Зег 21 и ΗΪ3 Азп С1у 155 Агд Не Уа1 А1а А1а 160
Ьуз С1п (31у С1п РЬе 165 Ьеи С1у Суз Зег РЬе 170 Н1з Рго С1и Ьеи ТЬг 175 С1и
Азр ΗΪ3 Агд Уа1 180 ТЬг 61п Ьеи РЬе Уа1 195 С1и мес Уа1 С1и С1и 190 Туг Ьуз
С1П Ьуз А1а 195 Ьеи Уа1
<210> 19
<211> 1329
<212> ДНК
<213> ЬазЕ- -уаай-Ха- -ОенА-Ыз
<220>
<221> СЦЁ
<222> (1) . .(1329)
<223>
<400> 19 аса ТЬг ддС С1у 5 асС ТЬг даа С1и ед С Агд дса Уа1 ааа Ьуз 10 сдс Агд дда Б1у аСд МеС дса А1а даа 2111 15 аСд МеС 48
аСд дсС МеС А1а 1 саа С1п
саа ааа ддс ддс дСс аСс аСд дас дСс аСс ааС дед даа саа дед ааа 96
Ьуз 21 у С1у Уа1 Не МеС Азр Уа1 Не Азп А1а 21и 21п А1а Ьуз
20 25 30
а1:с дсе даа даа дсС дда дсС дСс дсС дСа аСд дед сСа даа еде дед 144
Не А1а Й1и С1и А1а С1у А1а νβΐ А1а Уа1 МеС А1а Ьеи С1и Асд Уа1
35 40 45
сса дса дас аСС сдс дед дсс дда дда дСС дсс сдс аСд дсС дас ссС 192
Рго А1а Азр Не Агд А1а А1а С1у С1у Уа1 А1а Агд МеС А1а Азр Рго
50 55 ео
аса ТЬг 65 аСс 11е дед Уа1 даа С1и даа С1и дСа Уа1 70 асд МеС ааС Азп дса А1а дСа Уа1 СсС Зег 75 аСс 11е ссд Рго дса Уа1 асд МеС дса А1а 80 240
ааа дед сдС аСс дда саС аСС дСС даа дед сдС дЬд сСС даа дсС аСд 288
Ьуз А1а Агд Не С1у НЬз Не νβΐ 21и А1а Агд Уа1 Ьеи 21и А1а МеС
85 90 95
ддс дсс дас СаС аСС да С даа ад С даа дСС сСд асд ссд дес дас даа 336
С1у Уа1 Азр Туг Не Азр 01и Зег С1и Уа1 Ьеи ТЬг Рго А1а Азр 21и
100 105 но
даа ссс саС ССа аас ааа аас даа Сас аса дсс ССС ССС дСс СдС ддс 384
21и РЬе Н13 Ьеи Азп Ьуз Азп Б1и Туг ТЬг Уа1 Рго РЬе Уа1 Суз 21у
- 30 014384
115 120 125
бдс Суз едб Агд 130 даб Азр сгг Ьеи ддб 31у даа 01 и дса А1а 135 аса ТЬг сдс Агд □дб Агд абб Не дед А1а 140 даа С1и ддб С1у дс £ А1а бсб Зег 432
абд ебб сдс аса ааа ддб дад ссб дда аса ддб ааб абб дбб дад дсб 480
Меб Ьеи Агд ТЪг Ьуз 01 у С1и Рго С1у ТЬг 01у Азп 11е Уа1 Б1и А1а
145 150 155 160
дбб сдс саб абд едб ааа дбб аас деб саа дбд сдс ааа дба дьд дед 528
Уа1 Агд Н13 Меб Агд Ьуз νηΐ Азп А1а С1П Уа1 Агд Ьуз Уа1 Уа1 А1а
165 170 175
абд адб дад даб дад сба абд аса даа дед ЙЙЙ аас оба ддб дсб ссб 576
Меб 5ег 61 и Азр С1и Ьеи Меб ТЬг С1и А1а Ьуз Азп Ьеи С1у А1а Рго
180 165 190
бас дад ебб ебб ебб саа абб ааа ааа дас ддс аад ебб ссб дбе дбб 624
Туг Б1и Ьеи Ьеи Ьеи 01 п 11е Ьуз Ьуз Азр С1у ьуз Ьеи Рго Уа1 Уа1
195 200 205
аас ббб дсс дсб ддс ддс дба дса асб оса дсб даб дсб дсб сбс абд 672
Азп РЬе А1а А1а 51у <31у Уа1 АЬа ТЬг Рго А1а Азр А1а А1а Ьеи Меб
210 215 220
абд сад ебб ддб дсб дас дда дба ббб дбб ддб бсб чдб абб ббб ааа 720
Меб 01п Ьеи <31у А1а Азр С1у Уа1 РЬе Уа1 С1у Зег С1у 11е РЬе Ьуз
225 230 235 240
бса дас аас ссб дсб ааа ббб дед ааа дса абб дбд даа дса аса асб 768
Зег Азр Азп Рго А1а Ьуз РЬе А1а Ьуз А1а Не Уа1 01и А1а ТЬг ТЬг
245 250 255
сас ббб асб даб Сас ааа бба абс дсб дад ббд бса ааа дад ебб ддб 816
Н1е РЬе ТЬг Азр Туг Ьуэ Ьеи Не А1а 61и Ьеи Зег Ьуз 61и Ьеи С1у
260 265 270
асб дса абд ааа ддд абб даа абс бса аас бба ебб сса даа сад едб 864
ТЬг А1а Меб Ьуз С1у Не С1и Не Зег Азп Ьеи Ьеи Рго С1и С1п Агд
275 2Θ0 285
абд саа даа сдс ддс бдд ада бсс абб даа ддс сдс абд сдс ббс абс 912
Меб Б1п 61и Агд 61у Тгр Агд Зет Не 61и Б1у Агд Меб Агд РЬе Не
290 295 300
дбе бсс сбс сбс дсс ббс асб дсс дед дсс асе дед асе дсс сбс ссд 960
Уа1 Зег Ьеи Ьеи А1а РЬе ТЬг А1а А1а А1а ТЬг А1а ТЬг А1а Ьеи Рго
305 310 315 320
дсс бсб дсс дса аад аас дед аад ебд дсс асе бед дед дсс ббс дсс юоэ
А1а Зег А1а А1а Ьуз Азп А1а Ьуз Ьеи А1а ТЬг Зег А1а А1а РЬе А1а
325 330 335
аад сад дсб даа ддс асе асе бде ааб дбе ддс бед абс дсб бде бде 1056
Ьуз <31п А1а С1и С1у ТЬг ТЬг Суз Азп Уа1 Б1у Зег Не А1а Суз Суз
340 345 350
аас бсс ССС дсб дад асе аас аас дас адб ебд ббд аде ддд ебд сбс 1104
Азп Зег РГО А1а 01и ТЬг Азп Аеп Азр Зег Ьеи Ьеи Зег С1у Ьеи Ьеи
355 360 365
ддб дсб ддс ебб сбс аас ддд сбс бед ддс аас асб ддс аде дсс бде 1152
61у А1а 61у Ьеи Ьеи Азп С1у Ьеи Зег С1у Азп ТЬг 61у Зег А1а Суз
370 375 380
дсс аад дед аде ббд абб дас сад ебд ддб ебд сбс дсб сбс дбе дас 1200
- 31 014384
А1а 385 Ьуз А1а Зег Ьеи 11е 390 Азр С1п Ьеи С1у Ьеи 395 Ьеи А1а Ьеи Уа1 Азр 400
сас асС дад даа ддс ссс дес Сдс аад аас аес дес дсе еде еде сс£ 1248
Н13 ТЬг С1и 61и С1у Рго Уа1 Суз Ьуз Азп Не Уа1 А1а Суз Суз Рго
405 410 415
ода асе асе аас еде дее дсс дес дас аас дс£ ддс дсе дде асе 1296
С1и С1у ТЬг ТЬг Азп Суз Уа1 А1а Уа1 Азр Азп А1а С1у А1а С1у ТЬг
420 425 430
аад дсе дад дда гее сае сас сае сас сае сас 1329
Ьуз А1а <31и С1у Зег Н1з Н1з Н1з Н1з Н1з Н1з
435 440 <210> 20 <211> 443 <212> РНТ <213> Ьаз£-уаай-Ха-ЦемА“Ыз <400> 20
мее 1 А1а 61п ТЬг 61у 5 ТЬг 61и Агд Уа1 Ьуз Агд С1у МеГ 10 А1а 61и 15 мее
С1п Ьуз С1у 01у Уа1 11е мее Азр Уа1 Не Азп А1а С1и С1п А1а Ьуз
20 25 30
11е А1а С1и С1и А1а 01у А1а Уа1 А1а Уа1 МеГ А1а Ьеи С1и Агд Уа1
35 40 45
Рго А1а Азр Не Агд А1а А1а е1у <31у Уа1 А1а Агд МеГ А1а Азр Рго
50 55 60
ТЬг Не Уа1 С1и С1и Уа1 МеГ Азп А1а Уа1 Зег Не Рго Уа1 МеГ А1а
65 70 75 80
Ьуз А1а Агд 11е 61у Н13 11а Уа1 С1и А1а Агд Уа1 Ьеи С1и А1а МеГ
85 90 95
61у Уа1 Азр Туг 11е Азр <31и Зег <31и Уа1 Ьеи ТЬг Рго А1а Азр С1и
100 105 НО
61и РЬе Н15 Ьеи Азп Ьуз Азп 61и Туг ТЬг Уа1 Рго РЬе Уа1 Суз С1у
115 120 125
Суз Агд Азр Ьеи С1у 61и А1а ТЬг Агд Агд Не А1а С1и С1у А1а Зег
130 135 140
Меб Ьеи Агд ТЬг Ьуз С1у С1и Рго С1у ТЬг С1у Азп Не Уа1 С1и А1а
145 150 155 160
- 32 014384
Уа1 Агд Ηχε мен Агд 165 Ьуз Уа1 Азп АХа С1п 170 Уа1 Агд Ьуз Уа1 Уа1 175 А1а
Μβΐ Зег С1и Азр С1ц ьей МеЬ ТЬг С1п А1а Ьуз Азп Ьей 61у А1а Рго
130 185 190
Туг 61и Ьей Ьей Ьец С1п Не Ьуз ьуз Азр 61у Ьуз Ьей Рго УаХ Уа1
195 200 205
Азп РЬе А1а А1а С1у С1у Уа1 А1а ТЬг Рго А1а Азр А1а А1а Ьей Мер
210 215 220
Ме5 С1п Ьей С1у А1а Азр С1у Уа1 РЬе Уа1 С1у Зег С1у Не РЬе Ьуз
225 230 235 240
Зег Азр Азп Рго А1а Ьуз РЬе А1а Ьуз А1а 11е Уа1 С1и А1а ТЬг ТЬг
245 250 255
Нгз РЬе ТЬг Азр Туг Ьуз Ьей Не А1а (31и Ьей Зег Ьуз С1и Ьей С1у
2 60 265 270
ТЬг А1а МеЬ Ьуз й1у 11е С1и Не Зег Азп Ьей Ьей Рго С1и С1п Агд
275 280 285
МеЬ 61п 61и Агд С1у Тгр Агд Зег Не С1и б1у Агд Мер Агд РЬе Не
290 295 300
Уа1 Зег Ьей Ьей АХа РЬе ТЬг А1а А1а А1а ТЬг А1а ТЬг А1а Ьеп Рго
305 310 315 320
Р:1а Зег А1а А1а Ьуз Азп А1а Ьуз Ьей А1а ТЬг Зег А1а А1а РЬе А1а
325 330 335
Ьуз 61П А1а С1и С1у ТЬг ТЬг Суз Азп Уа1 С1у Зег Не А1а Суз Суз
340 345 350
АЗП Зег Рго А1а С1и ТЬг АЗП АЗП АЗр Зег Ьей Ьей Зег С1у ьец ьей
355 360 365
С1у А1а С1у Ьей Ьей Азп С1у Ьей Зег С1у Азп ТЬг 61у Зег А1а Суз
370 375 380
А1а Ьуз А1а Зег Ьей Не Азр С1п Ьей С1у Ьей Ьей А1а Ьей Уа1 Азр
385 390 395 400
Нгз ТЬг С1и (31и С1у Рго Уа1 Суз Ьуз Азп Не Уа1 А1а Суз Суз Рго
405 410 415
С1и 61у ТЬг ТЬг Азп Суз Уа1 А1а Уа1 Азр Азп А1а С1у А1а С1у ТЬг
420 425 430
- 33 014384
Ьуз А1а С1и С1у Зег Н1з Шз ΗΪ5 Н1з ΗΪ3 Н1з
435 440
<210> 21
<211> 1395
<212> ДНК
<213> ЬазС- уаай-Ха-гобА-Ыз
<220>
<221> СОЗ <222> (1)..(1395) <223>
<400> 21
аСд МеЕ 1 дсб А1а саа С31п аса ТЬг ддС С1у 5 асС ТЬг даа Е1и еде Агд дСа Уа1 ааа Ьуз 10 сдс Агд дда Е1у аСд МеС дса А1а даа Е1и 15 а£д МеГ 48
саа ааа ддс ддс дСс аСс аСд дас дСс аСс ааС дед даа саа дед ааа 96
61п Ьуз Э1у О1у Уа1 Не НеС Азр Уа1 11е Азп А1а Е1и С1п А1а ьуз
20 25 30
аСс дсС даа даа дсе дда дсС дСс дсС дСа аСд дед сСа даа еде дСд 144
Пе А1а С1и С1и А1а 31у А1а Уа1 А1а Уа1 МеС А1а Ьеи Е1и Агд Уа1
35 40 45
сса дса дае асе сдс дед дсе дда дда дес дсс еде аСд дсе дас ССС 192
РГО А1а Азр 11е Агд А1а А1а Е1у Е1у Уа1 А1а Агд МеС А1а Азр Рго
50 55 60
аса аСс даа даа дса аСд ааС дса дСа СсС аСс ссд дСа аСд дса 240
ТЬг 11е Уа1 С1и С1и Уа1 МеС Азп А1а Уа1 Зег 11е Рго Уа1 Мес А1а
65 70 75 80
ааа дед еде аСс дда саС аее дсе даа дед сд£ дед сСС даа дсе аСд 288
Ьуз А1а Агд 11е С1у Н1з 11е Уа1 С1и А1а Агд Уа1 Ьеи Е1и А1а МеС
85 90 95
дд£ дес дас Сае асе даС даа аде даа дес сСд асд ссд дсе дас даа 336
О1у Уа1 Азр Туг Не Азр С1и Зег 51и Уа1 Ьеи ТЬг Рго А1а Азр Е1и
100 105 но
даа есс саС сеа аае ааа ааС даа Сае аса дес осе ССС дес еде ддс 384
0111 РЬе Нгз Ьеи Азп Ьуз Азп Е1и Туи ТЬг Уа1 Рго РЬе Уа1 Суз С1у
115 120 125
Сдс еде дат есс ддс даа дса аса сдс еде асе дед даа ддс дсе есс 432
Суз Агд Азр Ьеи С1у С1и А1а ТЬг Агд Агд 11е А1а С1и СИу А1а Зег
130 135 140
аСд сее сдс аса ааа ддс дад ссС дда аса ддь ааС асе дсс дад дсС 480
Мес ьеи Агд ТЬг Ьуз 01у С1и Рго С1у ТЬг С1у Азп 11е Уа1 С1и А1а
145 150 155 160
- 34 014384
дСС Ча1 сдс Агд сае Нхз аСд МеС сдС Агд 165 ааа Ьуз дСС Ча1 аас Азл дсС А1а саа С1п 170 дСд Ча1 сдс Агд ааа Ьуз дСа Ча1 дСС ν«ι 175 дед А1а 528
аСд аде дад даС дад сСа аСд аса даа дед ааа аас сСа ддс дсС ссС 576
МеС Зег 3111 Азр 61и Ьеи МеС ТЬг С1и А1а Ьуз Азп Ьеи С1у А1а Рго
130 185 190
Гас дад есс сСС сее саа аСС ааа ааа дас ддс аад сСС ссС дСс дсс 624
Туг С1и Ьеи Ьеи Ьеи С1п Не Ьуз Ьуз Азр С1у Ьуз Ьеи Рго Ча! Ча1
195 200 205
аас ССС дсс дсс ддс ддс дса дса асС сса дсс дас дсс дсС ссс аСд 672
Азп РЬе А1а А1а С1у 21у Ча1 А1а ТЬг Рго А1а Азр А1а А1а Ьеи МеС
210 215 220
асд сад сее ддс дсс дас дда дСа ССС дСС ддс СсС ды аСС ссс ааа 720
МеС. С1п Ьеи 31у А1а Азр С1у Ча! РЬе Ча1 С1у Зег С1у Не РЬе Ьуз
225 230 235 240
Сса дас аас ссС дсС ааа ССС дед ааа дса аСС дед даа дса аса асе 768
Зег Азр Азп Рго А1а Ьуз РЬе А1а Ьуз А1а Не Ча1 С1и А1а ты ТЬг
245 250 255
сас ССС асе дас Сас ааа ССа аСс дсС дад ССд Сса ааа дад есс ддр 816
ΗΪ5 РЬе ТЬг Азр Туг Ьуз Ьеи Не А1а (31и Ьеи Зег Ьуз С1и Ьеи (31у
260 265 270
асС дса аСд ааа ддд аСС даа асе сса аас ССа ОСС сса даа сад сдС 864
ТЬг А1а Мес Ьуз С1у Не С1и Не 5ег Азп Ьеи Ьеи Рго О1и С1п Агд
275 280 285
асд саа даа сдс ддс сдд ада ССС асе даа ддс сдс асд аад ССс Ссс 912
мес С1п С1и Агд С1у Тгр Агд Зег Не С1и С1у Агд МеС Ьуз РЬе Зег
290 295 300
аСС дсс дсс дсс дСс дсс дсс ССС дсс дсс Ссс дСс дед дсс ссс ссе 960
11е А1а А1а А1а Ча1 Уа1 А1а РЬе А1а А1а Зег Ча1 А1а А1а Ьеи Рго
305 310 315 320
ссе дсс сае дас Ссс сад ССс дсС ддс ааС ддс дСС ддс аас аад ддс 1008
Рго А1а ΗΪ3 Азр Зег 61п РЬе А1а 31у Азп С1у Ча1 С1у Азп Ьуз С1у
325 330 335
аас аде аас дсс аад ССс ссс дСс ссс даа аас дед асе дСс аад сад 1056
Азп Зег Азп Уа1 Ьуз РЬе Рго Ча1 Рго С1и АЗП Ча1 ТЬг Ча1 Ьуз С1п
340 345 350
дсс Ссс дас аад Сдс ддс дас сад дсс сад ССС СсС Сдс Сдс аас аад 1104
А1а Зег Азр Ьуз Суз С1у Азр 61п А1а С1п Ьеи Зег Суз Суз Азп. Ьуз
355 360 365
дсс асд Сас дсс ддс дас асе аса асе дЫ дас дад ддс сСС сед СсС 1152
А1а ТЬг Туг А1а С1у Азр ТЬг ТЫ ТЬг Ча1 Азр 31и С1у Ьеи Ьеи Зег
370 375 380
ддЪ дсс сСс аде ддс сСс аСс ддс дсс ддд СсС ддс дсс даа ддс сее 1200
С1у А1а Ьеи Зег С1у Ьеи 11е С1у А1а С1у Зег 31у А1а С1и С1у Ьеи
385 390 395 400
ддс сСс ССс даС сад Сдс Ссс аад сее дас дсс дсс дсс ССс аСС ддс 1248
31у Ьеи РЬе АЗр 61п Суз Зег Ьуз Ьеи Азр ча1 А1а ча1 Ьеи Не С1у
405 410 415
аСс саа даС сСС дСс аас сад аад Сдс аад саа аас аСС дсс Сдс Где 1296
11е С1п Азр Ьеи Ча! Азп 61п Ьуз Суз Ьуз С1п Азп Не А1а Суз Суз
420 425 430
- 35 014384
сад аас Ссс ССС Ссс аде дед дас ддс □ ас сЬС аСС ддС дСс ддС сСс 1344
01η Азп Зег Рго Зег Зег А1а Азр 61у Азп Ьеи Т1е С1у Уа1 61у Ьеи
435 440 445
ссС Сдс дСЬ дсс СЬС ддс Ссс аСс сСс дда СсС саС сас саС сас саС 1392
Рго Суз Уа1 А1а Ьеи 61у Зег Не Ьеи 51у Зег Н13 Н1з Шз Н1з ΗΪ5
450 455 460
сас 1395
ΗΪ3
465
<210> 22
<211> 465
<212> РКТ
<213> 1 Ьаз£- -уаас1-Ха- -гос1А-Ыз
<400> 22
МеС А1а 61п ТЬг С1у ТЬг 61и Агд Уа1 Ьуз Агд С1у МеС А1а С1и мае
1 5 10 15
61п Ьуз С1у 61у Уа1 Не МеС Азр Уа1 Не Азп А1а 61и εΐη А1а Ьуз
20 25 30
Не А1а 61и С1и А1а С1у А1а Уа1 А1а Уа1 МеС А1а Ьеи С1и Агд Уа1
35 40 45
Рго А1а Азр 11е Агд А1а А1а 61у С1у Уа1 А1а Агд МеС А1а Азр Рго
50 55 60
ТЬг 11е Уа1 С1и 51и Уа1 мес АЗП А1а Уа1 Зег Не Рго Уа1 мес А1а
65 70 75 80
Ьуз А1а Агд Не 61у Н1з Не Уа1 С1и А1а Агд Уа1 Ьеи 61и А1а МеС
85 90 95
С1у Уа1 Азр Туг 11е Азр С1и Зег 61и Уа1 Ьеи ТЬг Рго А1а Азр С1и
100 105 110
61ч РЬе ΗΪ3 Ьеи Азп Ьуз Азп 61и Туг ТЬг Уа1 Рго РЬе Уа1 Суз С1у
115 120 125
Суз Агд Азр Ьеи СЬу 61и А1а ТЬг Агд Агд Не А1а 61и С1у А1а Зег
130 135 140
МеС Ьеи Агд ТЬг Ьуз 01у 61и Рго С1у ТЬг С1у Азп Не Уа1 С1и А1а
145 150 155 160
Уа1 Агд Ηί® МеС Агд Ьуз Уа1 Азп А1а <31п Уа1 Агд Ьуз 7а1 Уа1 А1а
- 36 014384
165 170 175
МеН Зег СЬи Азр СЬи 180 Ьеи МеН ТЬг СЬи АЬа 185 Ьуз Азп Ьеи СЬу 190 АЬа Рго
туг 61ц Ьеи Ьеи Ьеи СЬп 11е Ьуз Ьуз Азр СЬу Ьуз Ьеи Рго Уа1 Уа1
195 200 205
Азп РЬе А1а АЬа СЬу СЬу Уа1 А1а ТЫ Рго АЬа Азр АЬа АЬа Ьеи МеН
210 215 220
МеН 61п Ьеи С1у АЬа Азр С1у УаЬ РЬе Уа1 СЬу Зег 61У 11е РЫ Ьуз
225 230 235 240
Зег Азр Азп Рго АЬа Ьуз РЬе АЬа Ьуз АЬа Пе Уа1 СЬи АЬа ТЫ ТЫ
245 250 255
НЬз РЬе ТЬг Азр Туг Ьуз Ьеи Не АЬа СЬи Ьеи Зег Ьуз СЬи Ьеи С1у
260 265 270
ТЬг А1а МеН Ьуз СЬу Не С1и Не Зег Азп Ьеи Ьеи Рго СЬи С1п Агд
275 280 285
Меъ С1п СЬи Агд СЬу Тгр Агд Зег Не СЬи СЬу Агд МеН Ьуз РНе Зег
290 295 300
Не АЬа А1а АЬа Уа1 УаЬ АЬа РЬе А1а АЬа Зег УаЬ АЬа АЬа Ьеи Рго
305 310 315 320
Рго АЬа НЬз Азр Зег Б1п РЬе А1а С1у Азп СЬу УаЬ СЬу Азп Ьуз С1у
325 330 335
Азп Зег Азп УаЬ Ьуз РЬе Рго УаЬ Рго СЬи Азп Уа1 ТЫ УаЬ Ьуз СЬп
340 345 350
АЬа Зег Азр Ьуз Суз С1у Азр СЬп АЬа СЬп Ьеи Зег Суз Суз Азп Ьуз
355 360 365
АЬа ТЫ Туг АЬа СЬу Азр ТЬг ТЬг ТЬг УаЬ Азр СЬи СЬу Ьеи Ьеи Зег
370 375 380
СЬу АЬа Ьеи Зег СЬу Ьеи Не СЬу АЬа СЬу Зег С1у АЬа С1и СЬу Ьеи
385 390 395 400
СЬу Ьеи РЬе Азр С1П Суз Зег Ьуз Ьеи Азр Уа1 А1а Уа1 Ьеи 11е 61у
405 410 415
11е СЬп Азр Ьеи УаЬ Азп СЬп Ьуз Суз Ьуз СЬп Азп ЬЬе АЬа Суз Суз
420 425 430
- 37 014384
С1п Азп Зег Рго Зег Зег А1а Азр С1у Азп
435 440
Беи
Не С1у Уа1 С1у Беи
445
Рго Суз Уа1 А1а Беи СБу Зег Не
450 455
Беи С1у
Зег
Низ Н1з Н1а НЗз НБз
460
Н13
465
<210> 23
<211> 1407
<212> ДНК
<213> Ьаз£“уаас1-Ха-ВА5Р1-Ыз
<220>
<221> СОЗ <222> (1)..(1407) <223>
<400> 23
ард дсБ саа С1п аса ТЬг ддс С1у 5 асС ТЬг даа Й1и сдр Агд дра Уа1 ааа сдс дда 51у аБд мер дса А1а даа е1и 15 аБд МеБ 48
Мес 1 А1а Ьуз 10 Агд
саа ааа ддс ддс дсс аБс аБд дас дБс аРс ааБ дед даа саа дед ааа 96
61п Ьуз е1у 61у Уа1 11е Мер Азр уа1 Не Азп А1а 01и С1п А1а Ьуз
20 25 30
аБс дсБ даа даа дсБ дда дсБ дБс дсБ дБа ард дед сБа даа сдр дБд 144
11е А1а С1и С1и А1а Е1у А1а Уа1 А1а Уа1 МеБ А1а Ьеи С1и Агд Уа1
35 40 45
сса дса даб аББ еде дед дсБ дда дда дББ дсс сде аБд дсБ дас ссБ 192
Рго А1а Азр Не Агд А1а А1а С1у С1у Уа1 А1а Агд Мер А1а Азр Рго
50 55 60
аса аБс дБд даа даа дра аБд ааБ дса дра РсС аБс ссд дСа аБд дса 240
ТЬг 11е Уа1 С1и С1и Уа1 Мер Азп А1а Уа1 Зег Не Рго Уа1 МеБ А1а
65 70 75 80
ааа дед сдС асе дда саБ аБС дСБ даа дед сдр дБд СББ даа дсБ аСд 288
Ьуз А1а Агд Не 61у Н1з Не Уа1 С1и А1а Агд Уа1 Ьеи 61и А1а Мер
85 90 95
ддС дББ дас БаБ аБС дас даа адЕ даа дББ сЕд асд ссд дсБ дас даа 336
61у νβΐ Азр Туг Не АЗР С1и Зег С1и Уа1 Ьеи ТАР Рго А1а Азр С1и
100 105 НО
даа ССС саС БСа ааС ааа ааБ даа Бас аса дББ ССР БРР дБс БдБ ддс 384
С1и РЬе Н1$ Ьеи Азп Буг Агп Е1и Туг ТЬг Уа1 Рго РЬе Уа1 Суз С1у
115 120 125
Бдс сдр даБ СЙ ддь даа дса аса сдс сдБ аББ дед даа ддс дсБ СсБ 432
Суз Агд Азр Беи С1у С1и А1а ТЬг Агд Агд Не А1а 61и С1у А1а Зег
- 38 014384
130 135 140
аСд Меб 14 5 сСС Ьеи еде Агд аса ТЫ ааа Ьуз ддс СЬу 150 дад СЬи ссь Рго дда (31у аса ТЬг ддс СЬу 155 аас Азп аес Не дее УаЬ дад С1и дсС АЬа 160 480
дЬС еде саС аСд сдС ааа дСС аас дсс саа дСд сде ааа дСа ди дед 528
УаЬ Агд ΗΪ3 мес Агд Ьуз УаЬ Азп А1а 61п УаЬ Агд Ьуз УаЬ УаЬ АЬа
165 170 175
аСд аде дад дас дад сСа аСд аса даа дед ааа аас сСа ддс дсС ССГ 576
МеС Зег 61и Азр СЬи Ьеи Мее ТЬг СЬи АЬа Ьуз Азп Ьеи СЬу АЬа Рго
180 185 190
Рас дад есс есс сСС саа асе ааа ааа дас ддс аад сСС сер дСс дСС 624
Туг 61и Ьеи Ьеи Ьеи 31 п Не Ьуз Ьуз Азр СЬу Ьуз Ьеи Рго УаЬ УаЬ
195 200 205
аас есе дсс дсС ддс ддс дСа дса асС сса дсС да! дсС дсЬ сСс аСд 672
Азп РЬе АЬа АЬа 61у ЕЬу УаЬ АЬа ТЬг Рго АЬа Азр АЬа АЬа Ьеи МеС
210 215 220
аСд сад есс ддс дсС дас дда дса гее дес ддс ССС дде асе ССС ааа 720
Мес С1п Ьеи С1у А1а Азр СЬу УаЬ РЬе УаЬ С1у Зег СЬу Не РЬе Ьуз
225 230 235 240
Сса дас аас ссС дсС ааа ссс дед ааа дса аы дрд даа дса аса асС 768
Зег Азр АЗП РГО АЬа Ьуз РЬе А1а Ьуз АЬа Ые УаЬ СЬи АЬа ТЬг ТЬг
245 250 255
сас ссс асе дас Сас ааа ССа аСс дсС дад ССд Сса ааа дад есс ддс 816
ΗίΞ ₽Ие ТЬг Азр Туг Ьуз Ьеи Не АЬа С1и Ьеи Зег Ьуз СЬи Ьеи С1у
2 60 265 270
асе дса аСд ааа ддд асе даа аСс Сса аас с Са сее сса даа сад сдс 864
ТЬг АЬа МеС Ьуз СЬу Не СЬи Не Зег Азп Ьеи Ьеи Рго 61и СЬп Агд
275 280 285
аед саа даа сдс ддс едд ада есс асе даа ддс сдс аед аад нс Ссс 912
МеС СЬп СЬи Агд СЬу Тгр Агд Зег 11е С1и СЬу Агд Мер Ьуз РЬе Зег
290 295 300
дСС Ссс дсс дсс дСс сСс дсс ссс дсс дсс Ссс де с дсс дсс сСс ссе 960
Уа1 Зег АЬа А1а УаЬ Ьеи АЬа РЬе АЬа АЬа Зег УаЬ АЬа АЬа ьеи Рго
305 310 315 320
сад сас дас Ссс дсс дсс ддс аас ддс аас ддс дсс ддс аас аад ССС 1008
С1п НЬз Азр Зег АЬа АЬа СЬу Азп СЬу Азп СЬу Уа1 СЬу Азп Ьуз РЬе
325 330 335
ссС дСс ссС дас дас дСс асе дСс аад сад дсс асе дас аад Сдс ддс 1056
Рго УаЬ Рго Азр Азр УаЬ ТЬг УаЬ Ьуз εΐη АЬа ТЫ Азр Ьуз Суз С1у
340 345 350
дас сад дсс сад сСс Ссс еде еде аас аад дсс асе Сас дсс ддс дас 1104
Азр 31п АЬа 61п Ьеи Зег Суз Суз Азп Ьуз АЬа ТЫ Туг АЬа СЬу Азр
355 360 365
дСс ССС асе дас аСс дас дад ддс аСс ссс дсс ддс сСс сСс аад аас 1152
Уа1 Ьеи ТЬг Азр 11е Азр СЬи СЬу 11е Ьеи АЬа 61у Ьеи Ьеи Ьуз Азп
370 375 380
сСс асе ддс ддс ддс Ссс ддс Ссс дад ддс сес ддс сСс сес дас сад 1200
Ьеи Не С1у С1у С51у Зег СЬу Зег СЬи СЬу Ьеи е1у Ьеи РЬе Аэр С1п
385 390 395 400
Сдс дрс аад сСс дас сСс сад аСс Ссс дес аРс ддс аСс сер аСс сад 1248
- 39 014384
Суз Уа1 Ьуз Ьеи Азр 405 Ьеи С1п Не Зег Уа1 410 Не (31у Не Рго Не 415 Б1п
дас сЪс сСс аас сад дбс аас аад сад Где аад сад аас аЬс дсс Ьдс 1296
Азр Ьеи Ьеи Азп 61п Уа1 Азп Ьуз Е1п Суз Ьуз Й1п Азп Не А1а Суз
420 425 430
Где сад аас Ьсс ССС Ссс дас дсс асе ддс Ссс ССС дСс аас сСс ддс 1344
Суз О1п Αεη Зег Рго Зег Аэр А1а ТЬг Е1у Зег Ьеи Уа1 Азп Ьеи С1у
435 440 445
сСс ддс аас ссС Сдс абс ССС др с Тсс ССс ССс саС аСд дда СсС саС 1392
Ьеи 01у Аэп Рго Суз Не Рго Уа1 Зег Ьеи Ьеи Н.13 Мер 61у Зег Низ
450 455 460
сас саЬ сас саС сас 1407
Ηίε Ηίε НЬе ΗΪ3 Н1з
465
<210> 24
<211> 469
<212> РКТ
<213> Ьаз£-уаай-Ха' -ВАЗЕХ-Ыз
<400> ; 14
мес А1а 61п ТЬг 61у ТЬг С1и Агд 7а1 Ьуз Агд Е1у МеЬ А1а С1и МеС
1 5 10 1 5
С1п Ьуз С1у С1у Уа1 Не МеЬ Азр Уа1 Не Азп Ά1 а С1и 61п А1а Ьуз
20 25 30
Не А1а С1и С1и А1а С1у А1а νβΐ Д1а Уа1 МеС А1а Ьеи <31и Агд Уа1
35 40 45
РГО А1а АЗр Не Агд А1а А1а С1у Е1у Уа1 А1а Агд МеС А1а Азр Рго
50 55 60
тьг Не νβΐ Й1и 61и Уа1 МеС Азп А1а Уа1 Зег 11е Рго Уа1 ИеС А1а
65 70 75 80
Ьуз А1а Агд Не Й1у Низ Не Уа1 С1и А1а Агд Уа1 Ьеи Й1и А1а МеС
85 90 95
<31у 7а1 Азр Туг Не Азр С1и Зег С1и Уа1 Ьеи ТЬг Рго А1а Азр Й1и
100 105 110
Б1и РЬе Н1з Ьеи. Азп Ьуз Азп С1и Туг ТЬг Уа1 Рго РЬе Уа1 Суз Е1у
115 120 125
Суз Агд Азр Ьеи С1у С1и А1а Ткг Агд Агд 11е А1а С1и С1у А1а Зег
130 135 140
- 40 014384
МеБ 145 Беи Агд ТЬг Буз СБу СБи 150 Рго СБу ТЬг СБу 155 Азп 11е УаБ СБи АБа 160
Уа1 Агд НБз МеС Асд Буз Уа1 Азп А1а СБп УаБ Агд Буз УаБ УаБ АБа
165 Б70 175
МеС Зег СБи Азр СБи Беи МеС ТЬг СБи АБа Буз Азп Беи СБу АБа Рго
180 185 190
Туг СБи Беи Беи Беи СБп 11е Буз Буз Азр СБу Буз Беи Рго Уа1 Уа1
195 200 205
Азп РЬе АБа АБа СБу СБу УаБ АБа ТЬг Рго АБа Азр АБа АБа Беи МеЬ
210 215 220
МеС СБп Беи СБу АБа Азр СБу Уа1 РЬе УаБ СБу Зег СБу 11е РЬе Буз
225 230 235 240
Зег Азр Азп Рго АБа Буз РЬе АБа Буз АБа Не УаБ СБи АБа ТЬг ТЬг
245 250 255
НБз РЬе ТЬг Азр Туг Буз Беи Не АБа СБи Беи Зег Буз СБи Беи С1У
260 265 270
ТЬг АБа МеС Буз СБу Пе СБи Не Зег Азп Беи Беи Рго СБи СБп Агд
275 200 285
мес СБп СБи Агд СБу Тгр Агд Зег Не СБи СБу Агд Мер Буз РЬе 5ег
290 295 300
УаБ Зег АБа АБа УаБ Беи АБа РЬе АБа АБа Зег УаБ АБа АБа Беи Рго
305 310 315 320
СБп НБз Азр Зег АБа АБа СБу Азп СБу Азп СБу УаБ СБу Азп Буз РЬе
325 330 335
Рго Уа1 Рго Азр АЗр УаБ ТЬг УаБ Буз СБп АБа ТЬг Азр Буз Суз СБу
340 345 350
Азр СБп АБа СБп Беи Зег Суз Суз Азп Буз АБа ТЬг Тух АБа СБу Азр
355 360 365
УаБ Беи ТЬг Азр Не Азр СБи СБу Не Беи АБа СБу Беи Беи Буз Азп
370 375 380
Беи 11е СБу СБу СБу Зег СБу Зег СБи СБу Беи СБу Беи РЬе Азр <Ип
385 390 395 400
Суз УаБ Ьуз Беи Азр Беи С1п Не Зег УаБ ББе СБу Не Рго Не СБп
405 410 415
Азр Беи Беи АЗП СБп УаБ Азп Буз СБп Суз Буз СБп . АЗП 11е АБа Суз
420 425 430
Суз СБп Азп 8ег Рго Зег Азр АБа ТЬг СБу Зег Беи ' УаБ Азп Беи СБу
435 440 445
Беи С1у Азп Рго Суз Не Рго УаБ Зег Беи Беи НБз : МеС 1 СБу Зег НБз
450 455 460
НБз НБз НБз НБз НБз

Claims (10)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Применение гидрофобина в качестве вспомогательного средства для промывочного бурового раствора.
  2. 2. Применение по п.1, причем использованный гидрофобин представляет собой слитый гидрофобин.
  3. 3. Применение по п.1 или 2, причем использованный гидрофобин представляет собой слитый гидрофобин, выбранный из группы уааб-Ха-бе\\'А-1ик (ЪЕЦ ΙΩ N0: 20), уааб-Ха-гобА-Ык (8ЕЦ ΙΌ N0: 22) или уааб-Ха-Ьак£1-Ык (8ЕЦ ΙΌ N0: 24), причем в случае уааб речь также может идти об укороченном партнере слияния уааб' с 20-293 аминокислотами.
  4. 4. Способ бурения скважины для освоения подземных месторождений, при котором используют промывочный буровой раствор, который содержит по меньшей мере один гидрофобин.
  5. 5. Способ по п.4, причем используемый в промывочном буровом растворе гидрофобин представляет собой слитый гидрофобин, выбранный из группы уааб-Ха-бе\\'А-Ык (ЪЕЦ ΙΌ N0: 20), уааб-Ха-гобА-Ык (ЪЕЦ ΙΌ N0: 22) или уааб-Ха-Ьак£1-Ык (8ЕЦ ΙΌ N0: 24), причем в случае уааб речь также может идти об укороченном партнере слияния уааб' с 20-293 аминокислотами.
  6. 6. Промывочный буровой раствор, содержащий по меньшей мере один гидрофобин.
  7. 7. Промывочный буровой раствор по п.6, причем гидрофобин представляет собой слитый гидрофобин или его производное.
  8. 8. Промывочный буровой раствор по п.7, который содержит гидрофобин в количестве от 0,1 до 10000 ррт в расчете на весь раствор.
  9. 9. Промывочный буровой раствор по п.7, который содержит гидрофобин в количестве от 1 до 1000 ррт в расчете на весь раствор.
  10. 10. Промывочный буровой раствор по п.7, представляющий собой промывочный буровой раствор на масляной основе, который дополнительно к гидрофобину содержит 40-95 вес.% по меньшей мере одного масляного компонента, 2-60 вес.% воды, а также при необходимости другие компоненты, причем сумма всех компонентов составляет 100 вес.%.
EA200702157A 2005-04-01 2006-03-29 Промывочный буровой раствор, содержащий гидрофобин EA014384B1 (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP05007208 2005-04-01
EP05016962 2005-08-04
PCT/EP2006/061134 WO2006103253A2 (de) 2005-04-01 2006-03-29 Bohrspülung enthaltend hydrophobin

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA200702157A1 EA200702157A1 (ru) 2008-04-28
EA014384B1 true EA014384B1 (ru) 2010-10-29

Family

ID=36597884

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA200702157A EA014384B1 (ru) 2005-04-01 2006-03-29 Промывочный буровой раствор, содержащий гидрофобин
EA200702156A EA012800B1 (ru) 2005-04-01 2006-03-29 Применение белков в качестве деэмульгаторов

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA200702156A EA012800B1 (ru) 2005-04-01 2006-03-29 Применение белков в качестве деэмульгаторов

Country Status (10)

Country Link
US (1) US8535535B2 (ru)
EP (1) EP1868700A2 (ru)
JP (1) JP2008534554A (ru)
CN (1) CN101175540B (ru)
BR (1) BRPI0608681A2 (ru)
CA (1) CA2603374C (ru)
EA (2) EA014384B1 (ru)
MX (1) MX2007011955A (ru)
NO (1) NO20075106L (ru)
WO (1) WO2006103252A2 (ru)

Families Citing this family (20)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2596661C (en) 2005-02-07 2013-12-10 Basf Aktiengesellschaft Novel hydrophobin fusion products, production and use thereof
EP1866150B1 (de) * 2005-03-31 2016-10-19 Basf Se Metallische substrate mit polypeptiden als haftvermittler
BRPI0608678A2 (pt) 2005-04-01 2010-11-30 Basf Ag uso de uma hidrofobina, processo para perfurar um furo de sondagem para desenvolver depósitos subterráneos, lama de perfuração, e, processo para produzir uma lama de perfuração
BRPI0609776A2 (pt) * 2005-04-01 2011-10-18 Basf Ag uso de pelo menos uma hidrofobina, processo para separar pelo menos duas fases lìquidas em uma composição, e, formulação
US8535535B2 (en) 2005-04-01 2013-09-17 Basf Se Use of hydrophobin as a phase stabilizer
DE102005027139A1 (de) 2005-06-10 2006-12-28 Basf Ag Neue Cystein-verarmte Hydrophobinfusionsproteine, deren Herstellung und Verwendung
DE102005033002A1 (de) * 2005-07-14 2007-01-18 Basf Ag Wässrige Monomeremulsionen enthaltend Hydrophobin
DE102005048720A1 (de) * 2005-10-12 2007-04-19 Basf Ag Verwendung von Proteinen als Antischaum-Komponente in Kraftstoffen
WO2008019965A1 (de) 2006-08-15 2008-02-21 Basf Se Verfahren zur herstellung von trockenen freifliessenden hydrophobinzubereitungen
KR101455885B1 (ko) * 2007-03-06 2014-11-04 바스프 에스이 하이드로포빈으로 개질된 개방셀 발포체
EP2296772B1 (en) * 2008-07-11 2017-08-02 B.R.A.I.N. Biotechnology Research and Information Network AG Amphiphilic proteins as morphology modifiers
US20110312497A1 (en) * 2009-02-10 2011-12-22 Basf Se Use of hydrophobin as a spreading agent
CA2752808A1 (en) * 2009-03-09 2010-09-16 Basf Se Use of a synergistic mixture of water-soluble polymers and hydrophobins for thickening aqueous phases
EP2371844A1 (en) 2010-03-25 2011-10-05 B.R.A.I.N. Biotechnology Research and Information Network AG Chimeric surface active proteins
EP2536744B1 (en) 2010-02-18 2018-10-17 B.R.A.I.N. Biotechnology Research And Information Network AG Chimeric surface active proteins
MX2013001718A (es) * 2010-08-12 2013-10-28 Unilever Nv Composiciones de cuidado oral.
CN103842487A (zh) 2011-03-29 2014-06-04 富林纳技术有限公司 混合燃料及其制备方法
DE102012220083B3 (de) 2012-11-05 2014-03-06 Technische Universität Dresden Verfahren und System zum direkten, strahlungslosen Energietransfer über flüssige Phasengrenzen
AU2015358565B2 (en) 2014-12-03 2020-11-05 Drexel University Direct incorporation of natural gas into hydrocarbon liquid fuels
RU2652712C1 (ru) * 2017-08-28 2018-04-28 Общество С Ограниченной Ответственностью "Ника-Петротэк" Деэмульгирующая композиция и способ ее использования

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB2235457A (en) * 1989-08-09 1991-03-06 Secr Defence Ochrobactrum surfactant
EP0611824A1 (fr) * 1993-02-16 1994-08-24 Institut Francais Du Petrole Composition comprenant un moût de xanthane et des protéines et application de la composition dans un fluide de forage de puits

Family Cites Families (64)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB195876A (en) * 1922-04-25 1923-04-12 Sharples Specialty Co Process for resolving water-in-oil emulsions
US2399161A (en) * 1942-06-30 1946-04-30 Claude R Wickard Process for producing glues and adhesives from keratin protein materials
GB1278924A (en) * 1970-02-06 1972-06-21 Ici Ltd Improvements in synthetic film materials
DE2609104A1 (de) 1976-03-05 1977-09-15 Basf Ag Verfahren zur herstellung von styrol-suspensionspolymerisaten
DE2638839A1 (de) * 1976-08-28 1978-03-02 Basf Ag Verfahren zur herstellung von styrol-suspensionspolymerisaten
DE2843685C2 (de) * 1978-10-06 1987-04-09 Gesellschaft für Biotechnologische Forschung mbH (GBF), 3300 Braunschweig Verfahren zur Beseitigung von Ölverschmutzungen unter Verwendung mikrobiell erzeugter Glycolipide
JPS60206893A (ja) * 1984-03-31 1985-10-18 Yoshinari Shimada 油中水滴型乳状燃料油の製造方法
US5049504A (en) * 1986-11-24 1991-09-17 Genex Corporation Bioadhesive coding sequences
JPS6323670A (ja) * 1986-04-25 1988-01-30 バイオ−ポリマ−ズ　インコ−ポレ−テツド 接着・被覆組成物とその使用方法
IT1196484B (it) 1986-07-11 1988-11-16 Sclavo Spa Vettore ad espressione e secrezione in lieviti,utile per la preparazione di proteine eterologhe
DE4024871A1 (de) 1990-08-06 1992-02-13 Basf Ag Perlfoermige antistatische expandierbare styrolpolymerisate
DE4220225A1 (de) 1992-06-20 1993-12-23 Basf Ag Verfahren zur Herstellung von perlförmigen expandierbaren Styrolpolymerisaten
AU2751092A (en) * 1992-10-09 1994-05-09 Won Jae Yim A process for preparing emulsified fuel oil
JP3508157B2 (ja) 1993-05-19 2004-03-22 旭硝子株式会社 分裂酵母接合フェロモン前駆体遺伝子
EP0662515B1 (en) 1993-12-10 2000-11-15 Korea Institute Of Science And Technology Signal sequences for secretion of heterologous proteins from yeast
JP3537487B2 (ja) 1994-04-27 2004-06-14 株式会社海洋バイオテクノロジー研究所 ムラサキイガイ接着蛋白質遺伝子
IL110938A (en) * 1994-09-12 2001-01-28 Haber Meir Adhesive proteins isolated from mature macro and microalgae
JP3730256B2 (ja) 1995-02-03 2005-12-21 旭硝子株式会社 分泌シグナル遺伝子およびそれを有する発現ベクター
JPH08266281A (ja) 1995-03-31 1996-10-15 Kaiyo Bio Technol Kenkyusho:Kk イガイ接着蛋白質遺伝子
WO1996041882A1 (en) 1995-06-12 1996-12-27 Proefstation Voor De Champignoncultuur Hydrophobins from edible fungi, genes, nucleotide sequences and dna-fragments encoding for said hydrophobins, and expression thereof
US6093222A (en) 1996-04-04 2000-07-25 Ck Witco Corporation Diesel fuel antifoam composition
EP0972834A4 (en) 1997-10-31 2001-08-16 Asahi Glass Co Ltd INDUCTION PROMOTORGEN AND SECRETORIC SIGNALING FOR USE IN SACCHAROMYCES POMBE, EXPRESSION VECTORS, WHICH CONTAIN THEM AND THEIR USE
JPH11169177A (ja) 1997-12-15 1999-06-29 Tonen Corp 新規リパーゼ及びその利用
US6572845B2 (en) 1998-10-16 2003-06-03 Burt D. Ensley Recombinant hair treatment compositions
CN1249079C (zh) * 1999-03-25 2006-04-05 瓦申泰克尼利南塔基马斯凯斯库斯公司 蛋白质的分配方法
DE19942539A1 (de) 1999-09-07 2001-03-08 Cognis Deutschland Gmbh Waschmittel
DE19956802A1 (de) 1999-11-25 2001-06-13 Cognis Deutschland Gmbh Waschmitteltabletten
GB0002661D0 (en) * 2000-02-04 2000-03-29 Biomade B V Method of stabilizing a hydrophobin-containing solution and a method of coating a surface with a hydrophobin
GB0002663D0 (en) 2000-02-04 2000-03-29 Biomade B V Method of stabalizing a hydrophobin-containing solution and a method of coating a surface with a hydrophobin
GB0002660D0 (en) * 2000-02-04 2000-03-29 Biomade B V Method of stabilizing a hydrophobin-containing solution and a method of coatinga surface with a hydrophobin
FR2805278B1 (fr) * 2000-02-17 2006-09-29 Chalen Papier Europ Service Compositions utiles comme surfactants et leurs utilisations
GB0007770D0 (en) 2000-03-30 2000-05-17 Biomade B V Protein capable of self-assembly at a hydrophobic hydrophillic interface, method of coating a surface, method of stabilizing a dispersion, method of stabilizi
US20030049726A1 (en) * 2000-09-06 2003-03-13 Holloway James L. Human phermone polypeptide
GB0030038D0 (en) 2000-12-08 2001-01-24 Univ Warwick Yeast-based assay
DE10061280A1 (de) 2000-12-08 2002-06-13 Novaprot Gmbh Reinigungswirksame, grenzflächenaktive Kombination aus nachwachsenden Rohstoffen mit hoher Fettlösekraft
US7249256B2 (en) * 2001-07-11 2007-07-24 Anoto Ab Encryption protocol
EP1279742A1 (en) 2001-07-23 2003-01-29 Applied NanoSystems B.V. Method of binding a compound to a sensor surface using hydrophobin
US20030087774A1 (en) 2001-07-26 2003-05-08 Smith Leslie C. Fragrance compositions for the CO2 washing process
JP4302518B2 (ja) 2001-08-31 2009-07-29 ケラテク リミテッド 可溶性ｓ−スルホン化ケラチン誘導体からの生体高分子材料の薄膜、繊維、発泡体又は接着剤の製造
AT410669B (de) 2001-10-11 2003-06-25 Bcd Rohstoffe F Bauchemie Hand Sprühgetrocknete dispersionen, verfahren zu ihrer herstellung und deren anwendung
FR2833490B1 (fr) 2001-12-14 2004-12-10 Oreal Utilisition cosmetique d'au moins une hydrophobine pour le traitement des matieres keratiniques et compositions mises en oeuvre
EP1490122B1 (en) 2002-03-26 2016-03-23 BioPolymer Products of Sweden AB Method for attaching two surfaces to each other using a bioadhesive polyphenolic protein and periodate ions.
ATE315579T1 (de) 2002-06-21 2006-02-15 Applied Nanosystems Bv Verfahren zur bindung einer verbindung an eine oberfläche
DE10342794A1 (de) * 2003-09-16 2005-04-21 Basf Ag Sekretion von Proteinen aus Hefen
CN1909979A (zh) 2004-01-16 2007-02-07 应用超微系统股份有限公司 在低温下用疏水蛋白涂覆物体的方法
NZ551366A (en) 2004-05-24 2009-01-31 Basf Ag Keratin-binding polypeptides
DE102004025805A1 (de) 2004-05-24 2005-12-29 Basf Ag Keratin-bindende Effektormoleküle
MX2007000977A (es) * 2004-07-27 2007-04-10 Unilever Nv Productos alimenticios aireados que contienen hidrofobina.
US7241734B2 (en) * 2004-08-18 2007-07-10 E. I. Du Pont De Nemours And Company Thermophilic hydrophobin proteins and applications for surface modification
CA2596661C (en) 2005-02-07 2013-12-10 Basf Aktiengesellschaft Novel hydrophobin fusion products, production and use thereof
WO2006082253A2 (de) 2005-02-07 2006-08-10 Basf Aktiengesellschaft Verfahren zum beschichten von oberflächen mit hydrophobinen
DE102005007480A1 (de) 2005-02-17 2006-09-21 Basf Ag Neue Hydrophobinfusionsproteine, deren Herstellung und Verwendung
DE502006007035D1 (de) 2005-03-30 2010-07-08 Basf Se Verwendung von hydrophobinen zur oberflächenbehandlung von gehärteten mineralischen baustoffen, naturstein, kunststein und keramiken
ATE483009T1 (de) 2005-03-30 2010-10-15 Basf Se Verwendung von hydrophobinen zur schmutzabweisenden behandlung von harten oberflächen
EP1866150B1 (de) 2005-03-31 2016-10-19 Basf Se Metallische substrate mit polypeptiden als haftvermittler
BRPI0608678A2 (pt) 2005-04-01 2010-11-30 Basf Ag uso de uma hidrofobina, processo para perfurar um furo de sondagem para desenvolver depósitos subterráneos, lama de perfuração, e, processo para produzir uma lama de perfuração
US8535535B2 (en) 2005-04-01 2013-09-17 Basf Se Use of hydrophobin as a phase stabilizer
BRPI0609776A2 (pt) * 2005-04-01 2011-10-18 Basf Ag uso de pelo menos uma hidrofobina, processo para separar pelo menos duas fases lìquidas em uma composição, e, formulação
DE102005027039A1 (de) 2005-06-10 2006-12-21 Basf Ag Hydrophobin als Beschichtungsmittel für expandierbare oder expandierte, thermoplastische Polymerpartikel
DE102005027139A1 (de) 2005-06-10 2006-12-28 Basf Ag Neue Cystein-verarmte Hydrophobinfusionsproteine, deren Herstellung und Verwendung
DE102005029704A1 (de) 2005-06-24 2007-01-11 Basf Ag Verwendung von Hydrophobin-Polypeptiden sowie Konjugaten aus Hydrophobin-Polypeptiden mit Wirk-oder Effektstoffen und ihre Herstellung sowie deren Einsatz in der Kosmetik
DE102005033002A1 (de) 2005-07-14 2007-01-18 Basf Ag Wässrige Monomeremulsionen enthaltend Hydrophobin
EP1913123B1 (de) 2005-08-01 2010-10-20 Basf Se Verwendung von grenzflächenaktiven, nicht-enzymatischen proteinen für die textilwäsche
DE102005048720A1 (de) 2005-10-12 2007-04-19 Basf Ag Verwendung von Proteinen als Antischaum-Komponente in Kraftstoffen

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB2235457A (en) * 1989-08-09 1991-03-06 Secr Defence Ochrobactrum surfactant
EP0611824A1 (fr) * 1993-02-16 1994-08-24 Institut Francais Du Petrole Composition comprenant un moût de xanthane et des protéines et application de la composition dans un fluide de forage de puits

Also Published As

Publication number Publication date
EA200702157A1 (ru) 2008-04-28
US8535535B2 (en) 2013-09-17
EA012800B1 (ru) 2009-12-30
CA2603374A1 (en) 2006-10-05
BRPI0608681A2 (pt) 2010-12-07
JP2008534554A (ja) 2008-08-28
CN101175540B (zh) 2011-03-02
US20090282729A1 (en) 2009-11-19
MX2007011955A (es) 2007-12-05
NO20075106L (no) 2007-12-07
WO2006103252A2 (de) 2006-10-05
CA2603374C (en) 2013-05-28
CN101175540A (zh) 2008-05-07
EA200702156A1 (ru) 2008-04-28
EP1868700A2 (de) 2007-12-26
WO2006103252A3 (de) 2007-04-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA014384B1 (ru) Промывочный буровой раствор, содержащий гидрофобин
Sledjeski et al. The small RNA, DsrA, is essential for the low temperature expression of RpoS during exponential growth in Escherichia coli.
Tsung et al. Identification of the DNA-binding domain of the OmpR protein required for transcriptional activation of the ompF and ompC genes of Escherichia coli by in vivo DNA footprinting
Henche et al. Structure and function of the adhesive type IV pilus of S ulfolobus acidocaldarius
KR20130055571A (ko) 콘드로이틴의 박테리아 생산을 위한 조성물 및 방법
Backert et al. Conjugative plasmid DNA transfer in Helicobacter pylori mediated by chromosomally encoded relaxase and TraG-like proteins
JP6416867B2 (ja) たんぱく質精製の新規な方法
WO2021178934A1 (en) Class ii, type v crispr systems
US20230340481A1 (en) Systems and methods for transposing cargo nucleotide sequences
Molière et al. Role of Hsp100/Clp protease complexes in controlling the regulation of motility in Bacillus subtilis
JPS62181789A (ja) バチルスの制御領域のクロ−ニング及び解析のためのプラスミド
Gregor et al. In vivo analyses of constitutive and regulated promoters in halophilic archaea
EP2284273A9 (en) Vector comprising mannose promoter and mannose promoter
Bakkes et al. Biosensor-based optimization of cutinase secretion by Corynebacterium glutamicum
EP3926039A1 (en) Use of a nuclease for reducing the viscosity and/or preventing an increase in viscosity of a fermentation broth
Calvanese et al. Recombinant protein production in Pseudoalteromonas haloplanktis TAC125 biofilm
Ryan et al. DNA transport through the dynamic type IV secretion system
Ozaki et al. Z-ring-associated proteins regulate clustering of the replication terminus-binding protein ZapT in Caulobacter crescentus
Borgmeier et al. Transcriptome profiling of degU expression reveals unexpected regulatory patterns in Bacillus megaterium and discloses new targets for optimizing expression
Suzuki et al. Enhanced expression of Bacillus subtilis yaaA can restore both the growth and the sporulation defects caused by mutation of rplB, encoding ribosomal protein L2
Bahri et al. Sequence of the Streptomyces thermoviolaceus CUB74 α-amylase-encoding gene and its transcription analysis in Streptomyces lividans
Lindner et al. An extended ToxR POSSYCCAT system for positive and negative selection of self-interacting transmembrane domains
KR20220062230A (ko) 퍼옥시좀에서 변형 단백질의 발현
Juarez et al. Study of regulation and transport of hemolysin by using fusion of the beta-galactosidase gene (lacZ) to hemolysin genes
Masi et al. Folding and trimerization of signal sequence-less mature TolC in the cytoplasm of Escherichia coli

Legal Events

Date Code Title Description
TH4A Publication of the corrected specification to eurasian patent
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KG MD TJ TM

MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): KZ RU