EA011932B1 - Производные замещенного пропенилпиперазина в качестве новых ингибиторов гистондеацетилазы - Google Patents

Производные замещенного пропенилпиперазина в качестве новых ингибиторов гистондеацетилазы Download PDF

Info

Publication number
EA011932B1
EA011932B1 EA200700143A EA200700143A EA011932B1 EA 011932 B1 EA011932 B1 EA 011932B1 EA 200700143 A EA200700143 A EA 200700143A EA 200700143 A EA200700143 A EA 200700143A EA 011932 B1 EA011932 B1 EA 011932B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
compound
formula
compounds
alkyl
mol
Prior art date
Application number
EA200700143A
Other languages
English (en)
Other versions
EA200700143A1 (ru
Inventor
Свен Францискус Анна Ван Брандт
Кристоф Ван Эмелен
Патрик Рене Анжибо
Лоранс Франсуаз Бернадетт Марконне-Декран
Янине Артс
Original Assignee
Янссен Фармацевтика Н.В.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=39294123&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=EA011932(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Янссен Фармацевтика Н.В. filed Critical Янссен Фармацевтика Н.В.
Publication of EA200700143A1 publication Critical patent/EA200700143A1/ru
Publication of EA011932B1 publication Critical patent/EA011932B1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/04—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D239/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings
    • C07D239/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings
    • C07D239/24—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D239/28—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D239/32—One oxygen, sulfur or nitrogen atom
    • C07D239/42—One nitrogen atom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D239/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings
    • C07D239/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings
    • C07D239/24—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D239/28—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D239/46—Two or more oxygen, sulphur or nitrogen atoms
    • C07D239/52—Two oxygen atoms
    • C07D239/54—Two oxygen atoms as doubly bound oxygen atoms or as unsubstituted hydroxy radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D413/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D413/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing three or more hetero rings

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Pyridine Compounds (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Hydrogenated Pyridines (AREA)

Abstract

Изобретение относится к новым соединениям формулы (I), где R, R, R, Rи X имеют определенные значения, обладающим ферментативной активностью, ингибирующей гистондеацетилазу; их получению, композициям, содержащим указанные соединения, и к их применению в качестве лекарственного средства.

Description

Настоящее изобретение относится к соединениям, обладающим ферментативной активностью, ингибирующей гистондеацетилазу (НОАС). Кроме того, оно относится к способам получения указанных соединений, к композициям, содержащим эти соединения, а также к их применению как ίη νίίτο, так и ίη νίνο, для ингибирования НОАС и в качестве лекарственного средства, например в качестве лекарства для ингибирования пролиферативных состояний, таких как рак и псориаз.
Ядерные гистоны известны как интегральные и динамические компоненты комплекса, ответственного за регуляцию транскрипции генов и другие ДНК-матричные процессы, такие как репликация, репарация, рекомбинация и сегрегация хромосом. Они являются предметом посттрансляционных модификаций, включающих ацетилирование, фосфорилирование, метилирование, убикитинирование и АДФрибозилирование.
Гистондеацетилаза(ы), называемая(ые) здесь НОАС, представляют собой ферменты, которые катализируют удаление ацетильной модификации из лизиновых остатков белков, включая коровые нуклеосомные гистоны Н2А, Н2В, Н3 и Н4. Вместе с гистонацетилтрансферазой(ами), называемыми здесь НАТ, НОАС регулируют степень ацетилирования гистонов. Баланс ацетилирования нуклеосомных гистонов играет важную роль в транскрипции многих генов. Гипоацетилирование гистонов связано с конденсированной хроматиновой структурой, которая в результате приводит к подавлению транскрипции генов, тогда как ацетилированные гистоны связаны с более открытой хроматиновой структурой и активацией транскрипции.
Одиннадцать близких по структуре гистонов НОАС описаны и делятся на два класса. Класс I НОАС состоит из НОАС 1, 2, 3, 8 и 11, тогда как класс II НОАС состоит из НОАС 4, 5, 6, 7, 9 и 10. Члены третьего класса НОАС не являются близкими по структуре к НОАС, относящимся к классам I и II НОАС. НОАС классов действуют по цинкзависимым механизмам, тогда как НОАС класса III являются ΝΑΌ-зависимыми.
Другие белки, кроме гистонов, также являются субстратом для ацетилирования, конкретно, транскрипционные факторы, такие как р53, ОАТА-1 и Е2Б; ядерные рецепторы, например, такие как глюкокортикоидный рецептор, тироидные рецепторы, эстрогеновые рецепторы; и регуляторные белки клеточного цикла, такие как рВЬ. Ацетилирование белков связано с их стабилизацией, например стабилизацией р53, рекрутингом кофакторов и увеличенным связыванием ДНК. р53 представляет собой супрессор опухолей, который может вызывать блокирование клеточного цикла и апоптоз в ответ на множество стресссигналов, таких как повреждение ДНК. Главной мишенью блокирования р53-индуцированного клеточного цикла, по-видимому, является ген р21. После его активации геном р53, р21 идентифицирован благодаря его ассоциации с циклин/циклинзависимыми комплексами киназы, приводящей к блокированию клеточного цикла как в 01, так и 02 фазах, позитивной регуляции во время старения и его взаимодействию с ядерным антигеном пролиферирующих клеток.
Исследование ингибиторов НОАС указывает на их важную роль в блокировании клеточного цикла, дифференцировке клеток, апоптозе и реверсии трансформированных фенотипов.
Например, ингибитор трихостатин А (ТЗА) вызывает блокирование клеточного цикла как в 01, так и 02 фазах, реверсирует трансформированный фенотип различных клеточных линий и индуцирует дифференцировку клеток лейкемии Фрейнда и др. Сообщают, что ТЗА (и субероиланилид гидроксамовой кислоты ЗАНА) ингибируют рост клеток, индуцируют терминальную дифференцировку и предотвращают образование опухолей у мышей (Είηηίη е! а1., ЫаШге, 401: 188-193, 1999).
Сообщают также, что трихостатин А (ТЗА) применим при лечении фиброза, например фиброза печени и цирроза печени. (ОеегП е! а1., Еигореаи Ра!еШ Λρρίίοαίίοη ЕР 0827742, риЬШйеб 11 Магсй, 1998).
Фармакофор для ингибиторов НОАС состоит из домена, связывающего металл, который взаимодействует с цинксодержащим активным сайтом НОАС, линкерным доменом и поверхностным доменом распознавания или кэпирующей областью, которая взаимодействует с остатками на краю активного сайта.
Имеются также сообщения о том, что ингибиторы НОАС индуцируют экспрессию р21 гена. Транскрипционная активация р21 гена указанными ингибиторами ускоряется перестраиванием хроматина, затем ацетилированием гистонов Н3 и Н4 в области промотирования р21 гена. Упомянутая активация р21 происходит независимо от р53 и, следовательно, НОАС ингибиторы работают в клетках с мутированными генами р53, отличительным признаком многочисленных опухолей.
Кроме того, НОАС ингибиторы могут обладать косвенными видами активности, такими как усиление иммунных ответов «хозяина» и ингибирование ангиогенеза опухолей и, следовательно, они могут подавлять рост первичных опухолей и препятствовать образованию метастаз (Ма1 е! а1., Ме01ста1 Векеагсй Ве\зе\\ъ. 25. 261-309).
Ввиду вышеизложенного ингибиторы НОАС могут обладать большим потенциалом в лечении клеточных пролиферативных заболеваний или состояний, в том числе опухолей с мутированными генами р53.
В заявке ЕР 1472216, опубликованной 14 августа 2003 г., описаны бициклические гидроксаматы в качестве ингибиторов гистондеацетилазы.
В патентных заявках ЕР 1485099, ЕР 1485348, ЕР 1485353, ЕР 1485354, ЕР 1485364, ЕР 1485365, ЕР
- 1 011932
1485370, ЕР 1485378, опубликованных 18 сентября 2003 г., среди других соединений описаны замещенные пиперазинилпиримидинилгидроксамовые кислоты в качестве ингибиторов гистондеацетилазы, кроме того, в заявке ЕР 1485365 описан К306465.
В патентной заявке ЕР 1492534, опубликованной 9 октября 2003 г., описаны производные карбаминовой кислоты, содержащие пиперазиновый фрагмент, в качестве ингибиторов НЭАС. В патентной заявке ЕР 1495002, опубликованной 23 октября 2003 г., описаны замещенные производные пиперазинилфенилбензамида в качестве ингибиторов гистондеацетилазы.
В патентной заявке ^О 04/009536, опубликованной 29 января 2004 г., описаны производные, содержащие алкильный линкер между арильной группой и гидроксаматом, в качестве ингибиторов гистондеацетилазы.
В патентной заявке ЕР 1525199, опубликованной 12 февраля 2004 г., описаны (гетеро)арилалкенилзамещенные бициклические гидроксаматы в качестве ингибиторов гистондеацетилазы.
В патентной заявке ^О 04/063146, опубликованной 29 июля 2004 г., описаны производные Νгидроксибензамидов с противовоспалительной и противоопухолевой активностью.
В патентной заявке ^О 04/063169, опубликованной 29 июля 2004 г., описаны производные замещенных арилгидроксаматов в качестве ингибиторов гистондеацетилазы.
В патентной заявке ^О 04/072047, опубликованной 26 августа 2004 г., описаны индолы, бензимидазолы и нафтимидазолы в качестве ингибиторов гистондеацетилазы.
В патентной заявке ^О 04/082638, опубликованной 30 сентября 2004 г., описаны гидроксаматы, соединенные с неароматическими гетероциклическими кольцевыми системами, в качестве ингибиторов гистондеацетилазы.
В патентной заявке ^О 04/092115, опубликованной 28 октября 2004 г., описаны производные гидроксаматов в качестве ингибиторов гистондеацетилазы.
В патентной заявке ^О 05/028447, опубликованной 31 марта 2005 г., описаны бензимидазолы в качестве ингибиторов гистондеацетилазы.
В патентных заявках ^О 05/030704 и ^О 05/030705, опубликованных 7 апреля 2005 г., описаны бензамиды в качестве ингибиторов гистондеацетилазы.
В патентной заявке ^О 05/040101, опубликованной 6 мая 2005 г., описаны гидроксаматы, связанные с ацилмочевиной и сульфонилмочевиной, в качестве ингибиторов гистондеацетилазы.
В патентной заявке ^О 05/040161, также опубликованной 6 мая 2005 г., описаны биарильные производные гидроксаматов в качестве ингибиторов гистондеацетилазы.
Соединения по настоящему изобретению отличаются от соединений предшествующего уровня техники по своей структуре, фармакологической активности и/или фармакологической эффективности.
Проблема, которая должна быть решена, состоит в создании ингибиторов гистондеацетилазы с высокой ферментативной и клеточной активностью, которые обладают повышенной биодоступностью и/или эффективностью ίη νίνο.
Новые соединения по настоящему изобретению решают вышеописанную проблему. Соединения по настоящему изобретению проявляют превосходную ферментативную и клеточную активность, ингибирующую гистондеацетилазу. Они имеют высокий потенциал для активации гена р21 как на клеточном, так и на ίη νίνο уровне. Они обладают требуемым фармакокинетическим профилем и низкой аффинностью в отношении Р450 ферментов, что снижает риск нежелательного взаимодействия лекарстволекарство и позволяет также расширить пределы безопасности.
Преимуществами соединений по настоящему изобретению являются метаболическая стабильность, растворимость и/или индуцирующая способность р21. В частности, многие соединения по настоящему изобретению обладают увеличенным периодом полувыведения в гепатоцитах крыс, имеют повышенную растворимость/стабильность в водных растворах и/или обладают повышенной ίη νίνο способностью индуцировать промотор р21.
Данное изобретение относится к соединениям формулы (I)
их Ν-оксидным формам, их фармацевтически приемлемым кислотно-аддитивным солям и их стереохимически изомерным формам, где каждый X независимо представляет собой N или СН;
К1 представляет собой фенил, нафталинил или гетероциклил; где каждый указанный фенил или нафталинил необязательно замещен одним или двумя заместителями, каждый из которых независимо выбран из галогена, С1-6алкила, С1-6алкокси, полигалогенС1-6алкила, арила, гидрокси, циано, амино, С1-6 алкилкарбониламино, С1-6алкилсульфониламино, гидроксикарбонила, С1-6алкоксикарбонила, гидроксиС1-6 алкила, С1-6алкилоксиметила, аминометила, С1-6алкиламинометила, С1-6алкилкарбониламинометила, С1-6 алкилсульфониламинометила, аминосульфонила, С1-6алкиламиносульфонила или гетероциклила;
К2 представляет собой водород, -СН2-К5, трифторметил, -С(=О)-К6 или -(Ή2-ΝΊ<Ί<8, где каждый К5
- 2 011932 независимо выбран из водорода, гидрокси, С1_балкилокси, С1_балкилоксиС1_балкилокси, С1-6алкилкарбонилокси, пиперазинила, Ν-метилпиперазинила, морфолинила, тиоморфолинила, имидазолила или триазолила;
каждый К6 независимо выбран из гидрокси, С1-6алкилокси, амино или моно- или ди(С1-6алкил)амино, С1-6циклоалкиламино, гидроксиС1-6алкиламино, пиперазинила, моно- или ди(С1-6алкил)аминоС1-6алкиламино, Ν-метилпиперазинила, морфолинила или тиоморфолинила;
каждый К7 и К8 независимо выбраны из водорода, С1-6алкила, С1-6алкилкарбонила, С1-6алкилсульфонила или моно- или ди(С1-4алкил)аминосульфонила,
К3 представляет собой водород, гидроксиметил, аминометил или моно- или ди(С1-6алкил)аминометил;
К4 представляет собой водород или С1-6алкил;
вышеуказанный арил представляет собой фенил или нафталинил, причем каждый указанный фенил или нафталинил необязательно замещен одним или двумя заместителями, каждый из которых независимо выбран из галогена, С1-6алкила, С1-6алкокси, трифторметила, циано или гидроксикарбонила; и вышеуказанный гетероциклил представляет собой фуранил, тиенил, пирролил, пирролинил, пирролидинил, диоксолил, оксазолил, тиазолил, имидазолил, имидазолинил, имидазолидинил, пиразолил, пиразолинил, пиразолидинил, изоксазолил, изотиазолил, оксадиазолил, триазолил, тиадиазолил, пиранил, пиридинил, пиперидинил, диоксанил, морфолинил, дитианил, тиоморфолинил, пиридазинил, пиримидинил, пиразинил, пиперазинил, триазинил, тритианил, индолизинил, индолил, индолинил, бензофуранил, бензотиофенил, индазолил, бензимидазолил, бензтиазолил, пуринил, хинолизинил, хинолинил, циннолинил, фталазинил, хиназолинил, хиноксалинил или нафтиридинил, где каждый из указанных гетероциклов необязательно замещен одним или двумя заместителями, каждый из которых независимо выбран из галогена, С1-6алкила, С1-6алкокси, циано, амино, моно- или ди(С1-4алкил)амино.
Термин ингибитор гистондеацетилазы используют для идентификации соединения, которое способно взаимодействовать с гистондеацетилазой и ингибировать ее активность, более конкретно, ингибировать его ферментативную активность. Ингибирование ферментативной активности гистондеацетилазы означает уменьшение способности гистондеацетилазы удалять ацетильную группу из гистона. Такое ингибирование предпочтительно является специфичным, т.е. ингибитор гистондеацетилазы уменьшает способность гистондеацетилазы удалять ацетильную группу из гистона при концентрации ниже, чем концентрация ингибитора, которая требуется для получения другого, не связанного с указанным выше, биологического эффекта.
В приведенных выше и ниже определениях термин «галоген» является родовым термином для фтора, хлора, брома и йода; термин С1-4алкил обозначает насыщенные углеводородные радикалы с линейной или разветвленной цепью, содержащие от 1 до 4 атомов углерода, такие как, например, метил, этил, пропил, бутил, 1-метилэтил, 2-метилпропил и т.п.; термин С1-6алкил включает С1-4алкил и более сложные гомологи, содержащие 5-6 атомов углерода, такие как, например, пентил, 2-метилбутил, гексил, 2метилпентил и т.п., полигалогенС1-6алкил обозначает С1-6алкил, содержащий три одинаковых или различных атомов галогена в качестве заместителей, например, трифторметил; и С3-6циклоалкил включает циклические углеводородные группы, содержащие от 3 до 6 атомов углерода, такие как циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклопентенил, циклогексил и т. п.
Термин «фармацевтически приемлемые аддитивные соли» охватывает фармацевтически приемлемые кислотно-аддитивные соли и фармацевтически приемлемые основно-аддитивные соли. Подразумевается, что фармацевтически приемлемые кислотно-аддитивные соли, как указано выше, включают терапевтически активные нетоксичные кислотно-аддитивные типы солей, которые способны образовывать соединения формулы (I). Соединения формулы (I), которые обладают основными свойствами, можно превратить в их фармацевтически приемлемые кислотно-аддитивные соли обработкой указанной основной формы соответствующей кислотой. Подходящие кислоты включают, например, неорганические кислоты, такие как галогеноводородные кислоты, например хлористо-водородная кислота или бромистоводородная кислота; серная, азотная, фосфорная и им подобные кислоты; или органические кислоты, такие как, например, уксусная, трифторуксусная, пропановая, гидроксиуксусная, молочная, пировиноградная, щавелевая, малоновая, янтарная (т.е. бутандиовая кислота), малеиновая, фумаровая, яблочная, винная, лимонная, метансульфоновая, этансульфоновая, бензолсульфоновая, толуолсульфоновая, цикламовая, салициловая, п-аминосалициловая, памовая кислоты и им подобные.
Соединения формулы (I), которые обладают кислотными свойствами, можно превратить в их фармацевтически приемлемые основно-аддитивные соли обработкой указанной кислотной формы подходящим органическим или неорганическим основанием. Подходящие типы основных солей включают, например, аммониевые соли, соли щелочных и щелочно-земельных металлов, например соли лития, натрия, калия, магния, кальция и т.п., соли, образованные с органическими основаниями, например соли бензатина, Ν-метил-Э-глюкамина, соли гидрабамина и соли, образованные с аминокислотами, такими как, например, аргинин, лизин и им подобные.
Термин кислотно- или основно-аддитивные соли также включает гидраты и продукты присоединения растворителя, которые способны образовывать соединения формулы (I). Примерами таких форм
- 3 011932 являются гидраты, алкоголяты и т.п.
Термин стереохимически изомерные формы соединения формулы (I) используется здесь для обозначения всех возможных соединений, состоящих из одних и тех же атомов, связанных одинаковыми связями в одинаковой последовательности, но имеющих разные трехмерные структуры, не являющиеся взаимозаменяемыми, которые могут иметь соединения формулы (I). Если не упомянуто или не указано иное, химическое обозначение соединения охватывает смесь всех возможных стереохимически изомерных форм, которые может иметь указанное соединение. Упомянутая смесь может содержать все диастереомеры и/или энантиомеры основной молекулярной структуры указанного соединения. Подразумевается, что все стереохимически изомерные формы соединения формулы (I) как в чистом виде, так и виде смеси друг с другом охватываются объемом настоящего изобретения.
Подразумевается, что Ν-оксидные формы соединения формулы (I) включают те соединения формулы (I), в которых один или несколько атомов азота окислены в так называемый Ν-оксид, конкретно, те Νоксиды, в которых один или несколько атомов азота в пиперидин-, пиперазин- или пиридазинильных остатках являются Ν-окисленными.
Некоторые из соединений формулы (I) могут также существовать в таутомерных формах. Подразумевается, что такие формы, хотя на них нет точных указаний в вышеупомянутой формуле, включены в объем настоящего изобретения.
Подразумевается, что везде в данной заявке, где используют термин соединения формулы (I), он включает также их фармацевтически приемлемые аддитивные соли и все их стереоизомерные формы.
Термины гистондеацетилаза и НОАС, используемые здесь, предназначены для обозначения любого семейства ферментов, которые удаляют ацетильные группы из ε-аминогрупп остатков лизина Νконцевой части гистона. Если в контексте не указано иное, подразумевается, что термин гистон относится к любому белку-гистону, включая Н1, Н2А, Н2В, Н3, Н4 и Н5, любых разновидностей. Человеческие белки НОАС или генные продукты включают, но не ограничены ими, НЭАС-1, НЭАС-2, НЭАС-3, НЭАС-4. НОАС-5, НОАС-6, НПАС-7, НПАС-8, НПАС-9, НПАС-10 и НОАС-11.
Гистондеацетилазу можно также получить из простейших и грибов.
Первая группа соединений, представляющих интерес, состоит из тех соединений формулы (I), к которым применимы одно или несколько следующих ограничений:
a) Я1 представляет собой фенил или нафталинил, где каждый указанный фенил или нафталинил замещен одним или двумя заместителями, каждый из которых независимо выбран из С1-6алкилсульфониламино, гидроксикарбонила, С1-6алкилоксиметила, С1-6алкиламинометила, С1-6алкилкарбониламинометила, С1-6алкилсульфониламинометила, аминосульфонила или С1-6алкиламиносульфонила; или
b) Я2 представляет собой -СН2-Я5, трифторметил, -С(=О)-Я6 или -СН2-ХЯ7Я8;
c) Я4 представляет собой С1-6алкил.
Вторая группа соединений, представляющих интерес, состоит из тех соединений формулы (I), к которым применимы одно или несколько следующих ограничений:
a) Я1 представляет собой фенил, нафталинил или гетероциклил; где каждый указанный фенил замещен одним или двумя заместителями, каждый из которых независимо выбран из арила, гидрокси, амино, С1-6алкилкарбониламино, С1-6алкилсульфониламино, С1-6алкоксикарбонила, гидроксиС1-6алкила, С1-6алкилоксиметила, аминометила, С1-6алкиламинометила, С1-6алкилкарбониламинометила, С1-6алкилсульфониламинометила, аминосульфонила, С1-6алкиламиносульфонила или гетероциклила; или
b) Я2 представляет собой -СН2-Я5, трифторметил, -С(=О)-Я6 или -СН2-ХЯ7Я8;
c) Я4 представляет собой С1-6алкил.
Третья группа соединений, представляющих интерес, состоит из тех соединений формулы (I), к которым применимы одно или несколько следующих ограничений:
a) Я1 представляет собой фенил, нафталинил или гетероциклил; где каждый указанный фенил или нафталинил замещен одним или двумя заместителями, каждый из которых независимо выбран из С1-6алкилсульфониламино, С1-6алкилоксиметила, аминометила, С1-6алкиламинометила, С1-6алкилкарбониламинометила, С1-6алкилсульфониламинометила, аминосульфонила или С1-6алкиламиносульфонила; или
b) Я2 представляет собой -СН2-Я5, трифторметил, -С(=О)-Я6 или -СН2-ХЯ7Я8;
c) Я4 представляет собой С1-6алкил.
Четвертая группа соединений, представляющих интерес, состоит из тех соединений формулы (I), к которым применимы одно или несколько следующих ограничений:
a) каждый Я5 независимо выбран из водорода, гидрокси, С1-6алкилокси, пиперазинила, Νметилпиперазинила, морфолинила, тиоморфолинила, имидазолила или триазолила;
b) каждый Я6 независимо выбран из гидрокси, С1-6алкилокси, амино или моно- или ди(С1-6алкил) амино, С1-6циклоалкиламино, пиперазинила, Ν-метилпиперазинила, морфолинила или тиоморфолинила;
c) Я4 представляет собой водород.
Пятая группа соединений, представляющих интерес, состоит из тех соединений формулы (I), к которым применимы одно или несколько следующих ограничений:
а) каждый X представляет собой Ν;
- 4 011932
b) К1 представляет собой фенил или фенил, замещенный галогеном, С1-6алкилом, С1-6алкилокси, полигалогенС1-6алкилом или арилом;
c) К2 представляет собой -СН2-К5 или -С(=О)-К6;
б) каждый К5 независимо выбран из водорода, гидрокси, С1-6алкилокси, С1-6алкилоксиС1-6алкилокси, С1-6алкилкарбонилокси, Ν-метилпиперазинила, морфолинила или имидазолила;
е) каждый К6 независимо выбран из С1-6алкиламино, С1-6циклоалкиламино, гидроксиС1-6алкиламино, ди(С1-6алкил)аминоС1-6алкиламино или морфолинила;
ί) К3 представляет собой водород; или
д) К4 представляет собой водород или С1-6алкил.
Шестая группа соединений, представляющих интерес, состоит из тех соединений формулы (I), к которым применимы одно или несколько следующих ограничений:
а) каждый К6 независимо выбран из С1-6алкиламино, С1-6циклоалкиламино, ди(С1-6алкил)аминоС1-6 алкиламино или морфолинила.
Седьмая группа соединений, представляющих интерес, состоит из тех соединений формулы (I), к которым применимы одно или несколько следующих ограничений:
a) каждый X представляет собой Ν;
b) К1 представляет собой фенил или фенил, замещенный галогеном;
c) К2 представляет собой -СН2-К5;
б) каждый К5 независимо выбран из водорода, гидрокси, С1-6алкилокси или С1-6алкилкарбонилокси;
е) К3 представляет собой водород;
д) К4 представляет собой водород.
Группа предпочтительных соединений состоит из тех соединений формулы (I), в которых каждый X представляет собой Ν, К1 представляет собой фенил или фенил, необязательно замещенный галогеном, С1-6алкилом, С1-6алкилокси, полигалогенС1-6алкилом или арилом; К2 представляет собой -СН2-К5 или -С(=О)-К6; каждый К5 независимо выбран из водорода, гидрокси, С1-6алкилокси, С1-6алкилоксиС1-6алкилокси, С1-6алкилкарбонилокси, Ν-метилпиперазинила, морфолинила или имидазолила; каждый К6 независимо выбран из С1-6алкиламино, С1-6циклоалкиламино, гидроксиС1-6алкиламино, ди(С1-6алкил)аминоС1-6 алкиламино или морфолинила; К3 представляет собой водород и К4 представляет собой водород или С1-6 алкил.
Еще одна группа предпочтительных соединений состоит из соединений формулы (I), в которых К2 представляет собой -СН2-К5, трифторметил, -С(=О)-К6 или -СН2АК7К8.
Еще одна группа предпочтительных соединений состоит из соединений формулы (I), в которых каждый X представляет собой Ν, К1 представляет собой фенил или фенил, замещенный галогеном; К2 представляет собой -СН2-К5; каждый К5 независимо выбран из водорода, гидрокси, С1-6алкилокси или С1-6 алкилкарбонилокси; К3 представляет собой водород и К4 представляет собой водород.
Наиболее предпочтительными соединениями являются соединение № 1, соединение № 8, соединение № 11, соединение № 9, соединение № 33, соединение № 34, соединение № 7 и соединение № 25.
>3Η
“гуд
Ν Ν η А,
''он 0
Соединение Νο.1 Соединение Νο. 8
ί Ν о г <ΧΝγ^4χ4
.Ν^ ^.Ν
но' γ4*' А
Соединение Νο. 11 Соединение Νο. 9
χΟΗ г Χχγ » к λ
Соединение Νο. 33; .НС1; энантиомер А Соединение^. 34;. НС1; энантиомерВ
УП-Л- η°Ύι ’-Λρ X
ΗΟ-ΝΗ V-Ν ( )
Ан
СоединениеΝο. 7; С2НР3О2; (Ε) Соединение Νο. 25; энантиомер А
- 5 011932
Соединения формулы (I), их фармацевтически приемлемые соли, их Ν-оксиды и стереохимически изомерные формы могут быть получены общепринятыми способами. Исходные вещества и некоторые промежуточные соединения представляют собой известные вещества, которые имеются в продаже или могут быть получены по традиционным методикам, обычно известным на предшествующем уровне техники.
Некоторые препаративные способы будут более подробно описаны ниже. В примерах описаны другие способы для получения конечных продуктов формулы (I).
а) Гидроксамовые кислоты формулы (I) могут быть получены взаимодействием промежуточного соединения формулы (II) с соответствующей кислотой, такой, например, как трифторуксусная кислота. Указанное взаимодействие осуществляют в соответствующем растворителе, таком, например, как метанол или дихлорметан.
(П) (I)
Ь) Промежуточные соединения формулы (II) могут быть получены взаимодействием промежуточного соединения формулы (III) с промежуточным соединением формулы (IV) в присутствии соответствующих реагентов, таких как моногидрохлорид И-(этилкарбонимидоил)-Н№диметил-'1,3-пропандиамин (ЕИС) и 1-гидрокси-1Н-бензотриазол (НОВТ). Реакцию можно проводить в присутствии основания, такого как триэтиламин, в подходящем растворителе, таком как смесь дихлорметана и тетрагидрофурана.
(П>
с) В альтернативном способе промежуточные соединения формулы (II), где К4 представляет собой водород, которые здесь называют промежуточные соединения формулы (П-а), могут быть получены в одну стадию взаимодействием промежуточного соединения формулы (XI) с 1,4-диоксан-2,5-диолом и соответствующей бороновой кислотой формулы (VII), где К1 такой, как определено выше, в подходящем растворителе, например спирте, таком как этанол.
ά) Промежуточные соединения формулы (III) могут быть получены взаимодействием промежуточного соединения формулы (V) с соответствующим кислым раствором, например раствором соляной кислоты, или основным раствором, например, бромида водорода или гидроксида натрия, в подходящем растворителе, например спирте, таком как этанол или пропанол.
- 6 011932
Настоящее изобретение также относится к соединениям формулы (V)
их Ν-оксидным формам, их фармацевтически приемлемым кислотно-аддитивным солям, их стереохимически изомерным формам, где каждый X представляет собой независимо N или СН;
Я1 представляет собой фенил, нафталинил или гетероциклил; где каждый указанный фенил или нафталинил необязательно замещен одним или двумя заместителями, каждый из которых независимо выбран из галогена, С1-6алкила, С1-6алкокси, полигалогенС1-6алкила, арила, гидрокси, циано, амино, С1-6 алкилкарбониламино, С1-6алкилсульфониламино, гидроксикарбонила, С1-6алкоксикарбонила, гидроксиС1-6 алкила, С1-6алкилоксиметила, аминометила, С1-6алкиламинометила, С1-6алкилкарбониламинометила, С1-6 алкилсульфониламинометила, аминосульфонила, С1-6алкиламиносульфонила или гетероциклила;
Я2 представляет собой водород, -СН2-Я5, трифторметил, -С(=О)-Я6 или -ί.Ή2-ΝΚΥχ; где каждый Я5 независимо выбран из водорода, гидрокси, С1-6алкилокси, С1-6алкилоксиС1-6алкилокси, С1-6алкилкарбонилокси, пиперазинила, Ν-метилпиперазинила, морфолинила, тиоморфолинила, имидазолила или триазолила;
каждый Я6 независимо выбран из гидрокси, С1-6алкилокси, амино или моно- или ди(С1-6алкил)амино, С1-6циклоалкиламино, гидроксиС1-6алкиламино, пиперазинила, моно- или ди(С1-6алкил)аминоС1-6алкиламино, Ν-метилпиперазинила, морфолинила или тиоморфолинила;
каждый Я7 и Я8 независимо выбран из водорода, С1-6алкила, С1-6алкилкарбонила, С1-6алкилсульфонила или моно- или ди(С1-4алкил)аминосульфонила,
Я3 представляет собой водород, гидроксиметил, аминометил или моно- или ди(С1-6алкил)аминометил;
Я4 представляет собой водород или С1-6алкил;
вышеуказанный арил представляет собой фенил или нафталинил, причем каждый указанный фенил или нафталинил необязательно замещен одним или двумя заместителями, каждый из которых независимо выбран из галогена, С1-6алкила, С1-6алкокси, трифторметила, циано или гидроксикарбонила; и вышеуказанный гетероциклил представляет собой фуранил, тиенил, пирролил, пирролинил, пирролидинил, диоксолил, оксазолил, тиазолил, имидазолил, имидазолинил, имидазолидинил, пиразолил, пиразолинил, пиразолидинил, изоксазолил, изотиазолил, оксадиазолил, триазолил, тиадиазолил, пиранил, пиридинил, пиперидинил, диоксанил, морфолинил, дитианил, тиоморфолинил, пиридазинил, пиримидинил, пиразинил, пиперазинил, триазинил, тритианил, индолизинил, индолил, индолинил, бензофуранил, бензотиофенил, индазолил, бензимидазолил, бензтиазолил, пуринил, хинолизинил, хинолинил, циннолинил, фталазинил, хиназолинил, хиноксалинил или нафтиридинил, где каждый из указанных гетероциклов необязательно замещен одним или двумя заместителями, каждый из которых независимо выбран из галогена, С1-6алкила, С1-6алкокси, циано, амино, моно- или ди(С1-4 алкил)амино.
Группы соединений, представляющих интерес, предпочтительных, более предпочтительных и самых предпочтительных соединений могут быть определены для соединений формулы (V) в соответствии с группами, определенными для соединений формулы (I).
Новые промежуточные соединения (V) могут быть получены:
а) превращением промежуточных соединений формулы (V), где Я2 представляет собой -СН2ОН и Я4 представляет собой водород, которые здесь называют промежуточными соединениями формулы ^-а), в промежуточные соединения формулы (V), где Я2 представляет собой заместитель, отличающийся от -СН2ОН, которые здесь называют промежуточными соединениями формулы (Ϋ-Ь), по реакциям, известным в данной области техники, или путем трансформаций функциональных групп. Например, спирты формулы (У-а) можно превратить в амины, сложные и простые эфиры. Амины можно превратить в соответствующие амиды, а первичные амины можно превратить во вторичные и третичные амины.
- 7 011932
Ь) Новые промежуточные соединения формулы (У-а) могут быть получены в одну стадию взаимодействием промежуточного соединения формулы (VI) с 1,4-диоксан-2,5-диолом и соответствующей бороновой кислотой формулы (VII), где К1 такой, как определено выше, в подходящем растворителе, например в спирте, таком как этанол.
с) Новые промежуточные соединения формулы (У-Ь) могут быть получены взаимодействием промежуточных соединений формулы (VI) с соответствующим кетоном формулы (VIII) в присутствии соответствующего реагента, такого как тетракис(этанолато)титан или боргидрид натрия, в подходящем растворителе, например в 1,2-дихлорэтане.
б) Новые промежуточные соединения формулы (V), где К2 представляет собой -СООН, которые здесь называют соединениями формулы ^-е), могут быть получены в одну стадию взаимодействием промежуточных соединений формулы (VI) с 2-оксопропановой кислотой и соответствующей бороновой кислотой формулы (VII), где К1 такой, как определено выше, в подходящем растворителе, например 1,2дихлорметане.
Промежуточные соединения формулы ^-е), где К2 представляет собой -СООН, могут быть превращены в промежуточные соединения формулы (V), где К2 представляет собой -С(=О)-К6, используя реакции, известные в данной области техники, или путем трансформаций функциональных групп, например, превращением в амины и амиды.
Промежуточные соединения формулы (XI) могут быть получены взаимодействием промежуточного
- 8 011932 соединения формулы (IX) с пиперидином в подходящем растворителе, например дихлорметане.
Промежуточные соединения формулы (IX) могут быть получены взаимодействием промежуточного соединения формулы (X) с промежуточным соединением формулы (IV), в присутствии соответствующих реагентов, таких как моногидрохлорид Х'-(этилкарбонимидоил)-Л,Х-диметил-1,3-пропандиамина (ЕЭС) и 1-гидрокси-1Н-бензотриазол (НОВТ). Реакцию можно проводить в присутствии основания, такого как триэтиламин, в подходящем растворителе, таком как смесь дихлорметана и тетрагидрофурана.
Промежуточные соединения формулы (X) могут быть получены взаимодействием промежуточного соединения формулы (VI) с промежуточным соединением формулы (XII) в присутствии гидроксида натрия в подходящем растворителе, таком как тетрагидрофуран, с последующей нейтрализацией соляной кислотой и прибавлением карбоната натрия.
Соединения формулы (I) и некоторые промежуточные соединения могут содержать по меньшей мере один стереогенный центр в структуре. Указанный стереогенный центр может иметь К или 8 конфигурацию.
Соединения формулы (I), полученные вышеописанными способами, обычно представляют собой рацемическую смесь энантиомеров, которые могут быть разделены с помощью следующих методик разделения, известных в данной области техники. Рацемические соединения формулы (I) могут быть превращены в соответствующие диастереомерные соли реакцией с подходящей хиральной кислотой. Указанные диастереомерные соли затем разделяют, например, селективной или фракционной кристаллизацией, а энантиомеры выделяют действием щелочей. Альтернативный способ разделения энантиомерных форм соединения формулы (I) заключается в применении жидкостной хроматографии с хиральной неподвижной фазой. Указанные стереохимически чистые изомерные формы можно также получить из соответствующих стереохимически чистых изомерных форм подходящих исходных веществ, при условии, что реакция происходит стереоспецифически. Если требуется конкретный стереоизомер, предпочтительно синтезировать указанное соединение стереоспецифическими способами. В указанных способах будет выгодно применять энантиомерно чистые исходные вещества.
Соединения формулы (I), их фармацевтически приемлемые кислотно-аддитивные соли и их стереоизомерные формы обладают ценными фармакологическими свойствами, заключающимися в том, что они оказывают ингибирующее действие на гистондеацетилазу (I ЮАС).
Рассматриваемое изобретение относится к способу ингибирования аномального роста клеток, включая рост трансформированных клеток, путем введения эффективного количества соединения по изобретению. Аномальным ростом клеток называют рост клеток, который не зависит от нормальных регуляторных механизмов (например, ингибирование из-за нарушения контакта). Изобретение включает как непосредственное ингибирование роста опухолей, которое вызывает остановку роста, терминальную
- 9 011932 дифференцировку и/или апоптоз раковых клеток, так и косвенное ингибирование путем неоваскуляризации опухолей.
Настоящее изобретение также относится к способу ингибирования роста опухолей введением эффективного количества соединения по настоящему изобретению субъекту, например млекопитающему (и более конкретно, человеку), которому требуется такое лечение. Конкретно, изобретение относится к способу ингибирования роста опухолей введением эффективного количества соединения по настоящему изобретению. Примерами опухолей, рост которых может быть ингибирован, являются, но не ограничены ими, рак легких (например, аденокарцинома и немелкоклеточная карцинома легкого), рак поджелудочной железы (например, карцинома поджелудочной железы, такая как, например, экзокринная карцинома поджелудочной железы), разновидности рака толстой кишки (например, колоректальные карциномы, такие как, например, аденокарцинома толстой кишки и аденома толстой кишки), рак предстательной железы, включая позднюю стадию заболевания, опухоли кроветворных органов лимфоидного происхождения (например, острый лимфолейкоз, В-клеточная лимфома, лимфома Беркитта), миелоидные лейкемии (например, острый миелобластный лейкоз (ЛМЬ), фолликулярный рак щитовидной железы, миелодиспластический синдром (МО8), опухоли мезенхимального происхождения (например, фибросаркомы и рабдомиосаркомы), меланомы, тератокарциномы, нейробластомы, глиомы, доброкачественные опухоли кожи (например, кератоакантома), карцинома молочной железы (например, запущенный рак молочной железы), карцинома почек, карцинома яичника, карцинома мочевого пузыря и эпидермальная карцинома.
Соединение по изобретению можно применять и для других лечебных целей, например, для
a) повышения чувствительности опухолей к радиотерапии путем введения соединения по изобретению перед облучением опухоли для лечения рака, во время облучения или после него;
b) лечения артропатий и остеопатологических состояний, таких как ревматоидный артрит, остеоартрит, ювенильный артрит, подагра, полиартрит, псориатический артрит, анкилозирующий спондилоартрит и системная эритематозная волчанка;
c) ингибирования пролиферации клеток гладких мышц, включая сосудистые пролиферативные нарушения, атеросклероз и рестеноз;
й) лечения воспалительных состояний и кожных заболеваний, таких как язвенный колит, болезнь Крона, аллергический ринит, реакция трансплантат против хозяина, конъюктивит, астма, АКО 8 (синдром острой дыхательной недостаточности), болезнь Бехчета, отторжение трансплантата, инфекция мочевых путей, аллергический дерматит, очаговая алопеция, склеродермия, экзантема, экзема, дерматомиозит, акне, диабет, системная красная волчанка, синдром Кавасаки, множественный склероз, эмфизема, муковисцидоз и хронический бронхит;
е) лечения эндометриоза, фиброзов матки, дисфункционального маточного кровотечения и эндометриальной гиперплазии;
I) лечения глазной васкуляризации, включающей васкулопатию, влияющую на сетчатку и хориоидальные сосуды;
д) лечения сердечной дисфункции;
II) ингибирования иммунодепрессивных состояний, таких, например, как ВИЧ инфекции;
ί) лечения почечной дисфункции;
.)) устранения эндокринных нарушений;
k) ингибирования дисфункции глюконеогенеза;
l) лечения невропатологии, например болезни Паркинсона, или невропатологии, которая приводит к когнитивным расстройствам, например болезни Альцгеймера, или неврональных заболеваний, связанных с полиглутамином;
т) лечения психиатрических заболеваний, например шизофрении, биполярного расстройства, депрессии, тревожных состояний и психоза;
п) ингибирования нейромышечной патологии, например бокового амиотрофического склероза;
о) лечения спинальной мышечной атрофии;
р) лечения других патологических состояний, подлежащих лечению путем усиления экспрессии гена;
с|) усиления генной терапии;
г) ингибирования адипогенеза;
5) лечения паразитарных заболеваний, таких как малярия.
Следовательно, в настоящем изобретении описаны соединения формулы (I) для применения в качестве лекарственного средства, а также применение указанных соединений формулы (I) для производства лекарственного препарата для лечения одного или нескольких вышеупомянутых заболеваний.
Соединения формулы (I), их фармацевтически приемлемые кислотно-аддитивные соли и их стереоизомерные формы могут обладать ценными диагностическими свойствами, поэтому их можно применять для детектирования и идентификации НОАС в биологическом образце, включая детектирование или измерение образования комплекса между меченым соединением и НОАС.
В методах детектирования или идентификации можно использовать меченые соединения, которые
- 10 011932 получают действием агентов для введения метки, таких как радиоизотопы, ферменты, флуоресцентные вещества, люминесцирующие вещества и т.п. Примеры радиоизотопов включают 1251, 1311, 3Н и 14С. Ферменты обычно делают определимыми путем конъюгирования соответствующего субстрата, который, в свою очередь, катализирует детектируемую реакцию. Примеры ферментов включают, например, бетагалактозидазу, бета-глюкозидазу, щелочную фосфатазу, пероксидазу и малатдегидрогеназу, предпочтительно пероксидазу хрена. Люминесцирующие вещества включают, например, люминал, производные люминала, люциферин, экворин и люциферазу. Биологические образцы можно определить как ткани организма или жидкости организма. Примерами жидкостей организма являются спинно-мозговая жидкость, кровь, плазма, сыворотка, моча, мокрота, слюна и т.п.
Ввиду их полезных фармакологических свойств рассматриваемые соединения могут быть включены в состав различных фармацевтических форм, предназначенных для введения.
Для получения фармацевтических композиций по настоящему изобретению эффективное количество конкретного соединения в виде кислотно-аддитивной или основно-аддитивной соли в качестве активного ингредиента объединяют с фармацевтически приемлемым носителем, причем носитель может быть разнообразных видов, в зависимости от формы препарата, который требуется для введения. Указанные фармацевтические композиции желательно получать в стандартной лекарственной форме, подходящей для введения перорально, ректально, чрескожно или путем парентеральной инъекции. Например, при получении композиций в виде лекарственной формы для перорального введения можно использовать любую из обычных фармацевтических сред, например воду, гликоли, масла, спирты и т.п., в случае жидких препаратов для перорального введения, такие как суспензии, сиропы, эликсиры и растворы; или твердые носители, такие как крахмалы, сахара, каолин, вещества, способствующие скольжению, связующие, разрыхлители и т.п., в случае порошков, пилюль, капсул и таблеток.
Благодаря легкости введения, таблетки и капсулы представляют собой наиболее выгодную стандартную лекарственную форму для перорального введения, в случае которой несомненно используют твердые фармацевтические носители. Носитель в композициях для парентерального введения обычно содержит стерильную воду, по меньшей мере в основном воду, хотя могут быть включены и другие ингредиенты, например, способствующие повышению растворимости. Возможно получение растворов для инъекций, в которых носитель содержит, например, физиологический раствор, раствор глюкозы или смесь физиологического раствора и раствора глюкозы. Возможно также получение суспензий для инъекций, в случае которых могут быть использованы соответствующие жидкие носители, суспендирующие средства и т.п. В композициях, подходящих для подкожного введения, носитель необязательно содержит вещество, способствующее проникновению, и/или подходящее увлажняющее средство, необязательно объединенные с подходящими добавками любой природы в незначительной дозировке, причем добавки не оказывают вредного действия на кожу. Указанные добавки могут способствовать введению через кожу и/или могут быть полезны для приготовления нужных композиций. Указанные композиции можно вводить различными путями, например, в виде трансдермального пластыря, κροΐ-οη или мази.
Особенно выгодно для удобства введения и дозировки составлять вышеупомянутые фармацевтические композиции в виде стандартной лекарственной формы. В описании и формуле изобретения настоящей заявки термин стандартная лекарственная форма относится к физически изолированным единицам, подходящим в качестве однократных доз, причем каждая единица содержит заданное количество активного ингредиента, рассчитанного для получения требуемого лечебного эффекта, вместе с необходимым фармацевтическим носителем. Примерами таких стандартных лекарственных форм являются таблетки (включая делимые таблетки и таблетки с покрытием), капсулы, пилюли, пакеты с порошком, облатки, растворы или суспензии для инъекций, формы для введения столовыми или чайными ложками и им подобные и разнообразные сложные формы.
Специалисты в данной области техники могут легко определить эффективное количество по результатам испытаний, представленным ниже. Обычно считается, что терапевтически эффективное количество составляет от 0,005 до 100 мг/кг массы тела и конкретно от 0,005 до 10 мг/кг массы тела. Возможно, целесообразно вводить необходимую дозу в виде двух, трех, четырех или более субдоз через соответствующие интервалы времени в течение дня. Указанные субдозы могут быть изготовлены в виде стандартных лекарственных форм, например, содержащих 0,5-500 мг и конкретно 10-500 мг активного ингредиента на единицу лекарственной формы.
В качестве еще одного объекта настоящего изобретения рассматривают комбинацию ингибитора ΗΌΛ( с еще одним противораковым средством, особенно для применения в качестве лекарственного препарата, более конкретно для лечения рака или родственных заболеваний.
Для лечения вышеуказанных заболеваний соединения по изобретению можно с пользой применять в сочетании с одним или несколькими лекарственными средствами, более конкретно с другими противораковыми средствами. Примерами противораковых средств являются координационные соединения платины, например цисплатин, карбоплатин или оксалиплатин; соединения таксана, например паклитаксел или доксетаксел;
ингибиторы топоизомеразы I, такие как соединения камптотецина, например иринотекан или топотекан;
- 11 011932 ингибиторы топоизомеразы II, такие как производные противоопухолевого средства подофиллотоксина, например этопозид или тенипозид;
противоопухолевые винкаалкалоиды, например винбластин, винкристин или винорелбин;
противоопухолевые производные нуклеозидов, например 5-фторурацил, гемцитабин или капецитабин;
алкилирующие агенты, такие как нитроиприт или нитрозомочевина, например циклофосфамид, хлорамбуцил, кармустин или ломустин;
противоопухолевые производные антрациклина, например даунорубицин, доксорубицин, идарубицин или митоксантрон;
антитела НЕК2, например трастузумаб;
антагонисты эстрогеновых рецепторов или селективные модуляторы эстрогеновых рецепторов, например тамоксифен, торемифен, дролоксифен, фаслодекс или ралоксифен;
ингибиторы ароматазы, такие как экземестан, анастрозол, летразол и ворозол; дифференцировочные агенты, такие как ретиноиды, витамин Ό и блокаторы метаболизма ретиноевой кислоты (ΚΑΜΒΆ), например аккутан;
ингибиторы ДНК метилтрансферазы, например азатидин;
ингибиторы киназы, например флавоперидол, мезилат иматиниба или гефитиниб;
ингибиторы фарнезилтрансферазы;
другие ингибиторы НЭАС;
ингибиторы пути убиквитин-протеасом, например Велкад; или
Υοηάοΐίδ.
Термин координационное соединение платины используют здесь для обозначения любого координационного соединения платины, ингибирующего рост опухолевых клеток, которое предоставляет платину в виде иона.
Термин соединения таксана указывает на класс соединений, содержащих циклическую систему таксана и имеющих отношение к экстрактам некоторых видов тисового дерева (Тахик) или извлеченным из них.
Термин ингибиторы топоизомеразы применяют для обозначения ферментов, которые способны изменять топологию ДНК в эукариотических клетках. Они являются крайне необходимыми для важных клеточных функций и пролиферации клеток. В эукариотических клетках существует два типа топоизомераз, которые называются топоизомеразами типа I и типа II. Топоизомераза типа I представляет собой мономерный фермент, молекулярная масса которого составляет приблизительно 100000. Указанный фермент связывает ДНК и вводит транзиторный однониточный разрыв, развертывает двойную спираль (или позволяет ей развернуться) и затем вновь ликвидирует разрыв перед диссоциацией из нитей ДНК. Топоизомераза II имеет аналогичный механизм действия, который заключается во введении разрывов нитей ДНК или образовании свободных радикалов.
Термин соединения камптотецина используется для обозначения соединений, родственных исходному соединению камптотецину или являющихся его производными, камптотецин представляет собой не растворимый в воде алкалоид, извлекаемый из китайского дерева Сатр1о1йест асит1па1а и индийского дерева Мо1йаробу1ек Гоейба.
Термин соединения подофиллотоксина используют для обозначения соединений, родственных исходному подофиллотоксину (который извлекают из растения мандрагоры), или являющихся его производными.
Термин противоопухолевые винкаалкалоиды используют для обозначения соединений, родственных соединениям, извлекаемым из экстрактов растения барвинок (Ушса гокеа), или являющихся их производными.
Термин алкилирующие агенты относится к группе различных химикатов, общим свойством которых является способность вводить алкильные группы в биологически жизненно важные макромолекулы, такие как ДНК, в физиологических условиях. Большая часть наиболее важных алкилирующих агентов, таких как нитроиприт и нитрозомочевины, генерирует активные алкилирующие остатки ίη νί\Ό после сложных реакций разложения, некоторые из которых являются ферментативными. Наиболее важными фармакологическими эффектами алкилирующих агентов являются эффекты, которые нарушают основные механизмы, связанные с пролиферацией клеток, в частности, механизмы синтеза ДНК и деления клеток.
Способность алкилирующих агентов нарушать функцию ДНК и целостность в быстропролиферирующих тканях создает основу для их применения в терапии и для многих их токсических свойств.
Термин противоопухолевые производные антрациклина включает антибиотики, полученные из гриба 81гер, реийсик уаг. саекшк и их производные, отличающиеся тем, что в их структуре содержится тетрациклиновый цикл, соединенный гликозидной связью с необычным сахаром, даунозамином.
Показано, что амплификация белка 2 рецепторов человеческого эпидермального фактора роста (НЕК2) в первичных карциномах молочной железы коррелирует с плохим клиническим прогнозом для некоторых больных. Трастузумаб представляет собой рекомбинантное гуманизированное моноклональ
- 12 011932 ное ДНК-производное 1дО1 каппа-антитело высокой очистки, которое связывается внеклеточным доменом рецептора НЕК2 с высокой аффинностью и специфичностью.
Многие виды рака молочной железы обладают эстрогенными рецепторами и рост указанных опухолей может быть стимулирован эстрогеном. Термины антагонисты эстрогеновых рецепторов и селективные модуляторы эстрогеновых рецепторов используют для обозначения конкурирующих ингибиторов связывания эстродиола с эстрогеновым рецептором (ЕК). Селективные модуляторы эстрогеновых рецепторов при связывании с ЕК, вызывают изменение пространственной формы рецептора, модулируя его связывание с эстрогенчувствительным элементом (ЕКЕ) на ДНК.
У женщин в постменопаузе основным источником циркулирующего эстрогена является превращение адренальных и овариальных андрогенов (андростендиона и тестостерона) в эстрогены (эстрон и эстрадиол) под действием фермента ароматазы в периферических органах. Депривация эстрогена в результате ингибирования или инактивации ароматазы представляет собой эффективное и селективное лечение гормонозависимого рака молочной железы для некоторых больных в периоде постменопаузы.
Термин антиэстрогенный агент используют здесь для обозначения не только антагонистов эстрогеновых рецепторов и селективных модуляторов эстрогеновых рецепторов, но также и ингибиторов ароматазы, как обсуждалось выше.
Термин дифференцировочные агенты охватывает соединения, которые могут различными путями ингибировать пролиферацию клеток и индуцировать дифференцировку. Как известно, витамин Ό и ретиноиды играют главную роль в регуляции роста и дифференцировке множества типов нормальных и злокачественных клеток. Блокаторы метаболизма ретиноевой кислоты (КАМВА) увеличивают уровни эндогенных ретиноевых кислот, ингибируя катаболизм ретиноевых кислот, индуцированный цитохромом Р450.
Изменения в метилировании ДНК относятся к наиболее распространенным аномалиям в неоплазме человека. Гиперметилирование в промоторах выбранных генов обычно связано с инактивацией участвующих генов. Термин ингибиторы ДНК метилтрансферазы используется для обозначения соединений, которые действуют через фармакологическое ингибирование ДНК метилтрансферазы и повторную активацию экспрессии гена-супрессора опухолей.
Термин ингибиторы киназы включает сильные ингибиторы киназ, которые участвуют в прогрессии клеточного цикла и запрограммированной гибели клеток (апоптоз).
Термин ингибиторы фарнезилтрансферазы используют для обозначения соединений, которые предназначены для того, чтобы предотвратить фарнезилирование Как и других внутриклеточных белков. Показано, что они оказывают действие на пролиферацию злокачественных клеток и выживаемость.
Термин другие ингибиторы НЭАС включает, но не ограничивается перечисленными ниже, карбоксилаты, например бутират, коричную кислоту, 4-фенилбутират или валпроевую кислоту; гидроксамовые кислоты, например субероиланилид гидроксамовой кислоты (8АНА), аналоги 8АНА, содержащие пиперазин, биарилгидроксамат А-161906 и его карбозолиловый простой эфир, тетрагидропиридиновый и тетралоновый аналоги, бициклические арил-И-гидроксикарбоксамиды, пироксамид, СС-1521, ΡΧΌ-101, сульфонамид гидроксамовой кислоты, ГАО-824. ЬВН-589, трихостатин А (Т8А), оксамфлатин, скриптаид, родственные скриптаиду трициклические молекулы, мкарбоксикоричную кислоту, бисгидроксамовую кислоту (СВНА), гидроксамовые кислоты, подобные СВНА, трапоксиновый аналог гидроксамовой кислоты, К306465 и родственные бензоил- и гетероарилгидроксамовые кислоты, аминосубераты и малонилдиамиды;
циклические тетрапептиды, например трапоксин, апидицин, депсипептид, соединения, родственные спирухостатину, КебГК-228, сульфгидрилсодержащие циклические тетрапептиды (8СОР), циклические тетрапептиды, содержащие гидроксамовую кислоту (СНАР), ΤΛΝ-1748 и азумамиды;
бензамиды, например М8-275 или С1-994, или депудецин.
Термин ингибиторы цикла убиквитин-протеасома используют для идентификации соединений, которые ингибируют целенаправленное разрушение клеточных белков в протеасоме, включая регуляторные белки клеточного цикла.
Для лечения рака соединения по настоящему изобретению можно вводить больному, как описано выше, в сочетании с облучением. Облучение подразумевает применение ионизирующего излучения, конкретно гамма-излучения, главным образом излучения, испускаемого линейными ускорителями или радионуклидами, широко используемыми в настоящее время. Облучение опухоли радионуклидами может быть наружным или внутренним.
Настоящее изобретение также относится к комбинации по изобретению противоракового средства и ингибитора НОАС по изобретению.
Настоящее изобретение также относится к комбинации по изобретению для применения в лекарственной терапии, например для ингибирования роста опухолевых клеток.
Настоящее изобретение также относится к комбинации по изобретению для ингибирования роста опухолевых клеток.
Настоящее изобретение также относится к способу ингибирования аномального роста опухолевых
- 13 011932 клеток у испытуемого субъекта (человека), который включает введение субъекту эффективного количества комбинации по изобретению.
Кроме того, настоящее изобретение относится к способу ингибирования аномального роста клеток, включающих трансформированные клетки, путем введения эффективного количества комбинации по изобретению.
Ингибитор НИАС и еще одно лекарственное средство можно вводить одновременно (например, в виде отдельных композиций или в виде единой композиции) или последовательно в любом порядке. В последнем случае два соединения должны вводиться в течение того периода времени, в таком количестве и таким способом, при которых достигается предпочтительный или синергистический эффект. Следует понимать, что предпочтительные способ и порядок введения и соответствующие дозы и схемы лечения для каждого компонента комбинации будут зависеть от вводимых конкретных соединений - ингибитора НИАС и лекарственного средства, конкретного пути их введения, конкретной опухоли, подлежащей лечению, и конкретного «хозяина», подлежащего лечению. Специалисты в данной области техники могут легко определить оптимальные способ и порядок введения, дозировку и схему лечения, используя общепринятые методы и имея в виду информацию, изложенную в данной заявке.
Координационные соединения платины эффективно вводят в дозе, составляющей 1-500 мг на квадратный метр (мг/м2) площади поверхности тела, например 50-400 мг/м2, конкретно доза для цисплатина составляет около 75 мг/м2, а доза для карбоплатина составляет около 300 мг/м2 на курс лечения.
Соединение таксана эффективно вводят в дозе, составляющей 50-400 мг на квадратный метр (мг/м2) площади поверхности тела, например 75-250 мг/м2, конкретно доза для паклитакселя составляет около 175-250 мг/м2, а доза для доцетакселя составляет около 75-150 мг/м2 на курс лечения.
Соединение камптотецина эффективно вводят в дозе, составляющей 0,1-400 мг на квадратный метр (мг/м2) площади поверхности тела, например 1-300 мг/м2, конкретно доза иринотекана составляет около 100-350 мг/м2, а доза топотекана составляет около 1-2 мг/м2 на курс лечения.
Производное подофиллотоксина с противоопухолевой активностью эффективно вводят в дозе, составляющей 30-300 мг на квадратный метр (мг/м2) площади поверхности тела, например 50-250 мг/м2, конкретно доза этопозида составляет около 35-100 мг/м2, а доза тенипозида составляет около 50-250 мг/м2 на курс лечения.
Винкаалкалоиды с противоопухолевой активностью эффективно вводят в дозе, составляющей 2-30 мг на квадратный метр (мг/м2) площади поверхности тела, конкретно доза винбластина составляет около 3-12 мг/м2, доза винкристина составляет около 1-2 мг/м2 и доза винорелбина составляет около 10-30 мг/м2 на курс лечения.
Производные нуклеозидов с противоопухолевой активностью эффективно вводят в дозе, составляющей 200-2500 мг на квадратный метр (мг/м2) площади поверхности тела, например 700-1500 мг/м2, конкретно доза 5-ЕИ составляет около 200-500 мг/м2, доза гемцитабина составляет около 800-1200 мг/м2 и доза капецитабина составляет около 1000-2500 мг/м2 на курс лечения.
Алкилирующие агенты, такие как нитроиприт или нитрозомочевина, эффективно вводят в дозе, составляющей 100-500 мг на квадратный метр (мг/м2) площади поверхности тела, например 120-200 мг/м2, конкретно доза для циклофосфамида составляет около 100-500 мг/м2, доза для хлорамбуцила составляет около 0,1-0,2 мг/м2, доза для кармустина составляет около 150-200 мг/м2 и доза для ломустина составляет около 100-150 мг/м2 на курс лечения.
Производные антрациклина с противоопухолевой активностью эффективно вводят в дозе, составляющей 10-75 мг на квадратный метр (мг/м2) площади поверхности тела, например 15-60 мг/м2, конкретно доза для доксорубицина составляет около 40-75 мг/м2, доза для даунорубицина составляет около 2545 мг/м2 и доза идарубицина составляет около 10-15 мг/м2 на курс лечения.
Трастузумаб эффективно вводят в дозе, составляющей 1-5 мг на квадратный метр (мг/м2) площади поверхности тела, конкретно 2-4 мг/м2 на курс лечения.
Антиэстрогенный агент эффективно вводят в дозе, составляющей 1-100 мг ежедневно в зависимости от конкретного агента и заболевания, которое лечат. Тамоксифен эффективно вводят перорально в дозе, составляющей 5-50 мг, предпочтительно 10-20 мг два раза в день, продолжая лечение в течение времени, достаточного для достижения и сохранения терапевтического эффекта. Торемифен эффективно вводят перорально в дозе, составляющей около 60 мг один раз в день, продолжая лечение в течение времени, достаточного для достижения и сохранения терапевтического эффекта. Анастрозол эффективно вводят перорально в дозе, составляющей 1 мг один раз в день. Дролоксифен эффективно вводят перорально в дозе, составляющей около 20-100 мг один раз в день. Ралоксифен эффективно вводят перорально в дозе, составляющей около 60 мг один раз в день. Экземестан эффективно вводят перорально в дозе, составляющей около 25 мг один раз в день.
Указанные дозы можно вводить, например, один раз, два раза или больше за курс лечения, который можно повторять, например, каждые 7, 14, 21 или 28 дней.
Благодаря их полезным фармакологическим свойствам компоненты комбинаций по изобретению, т.е. ингибитор НИАС и другое лекарственное средство, могут входить в состав различных фармацевтических форм, предназначенных для введения. Указанные компоненты могут по отдельности входить в
- 14 011932 состав индивидуальных фармацевтических композиций или в состав единой фармацевтической композиции, содержащей оба компонента.
Поэтому настоящее изобретение также относится к фармацевтической композиции, содержащей ингибитор НЭАС и другое лекарственное средство вместе с одним или несколькими фармацевтическими носителями.
Настоящее изобретение также относится к комбинации в форме фармацевтической композиции, включающей противораковый агент и НЭЛС-ингибитор в соответствии с изобретением вместе с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми носителями.
Настоящее изобретение, кроме того, также относится к применению комбинации по изобретению в производстве фармацевтической композиции для ингибирования роста опухолевых клеток.
Кроме того, настоящее изобретение относится к продукту, содержащему в качестве первого активного ингредиента ингибитор НЭЛС по изобретению и в качестве второго активного ингредиента противораковое средство, в виде комбинированного препарата для одновременного, раздельного или последовательного применения в лечении больных, страдающих раком.
Экспериментальная часть
Нижеследующие примеры приведены для иллюстрации.
Сокращение БОС обозначает моногидрохлорид №-(этилкарбонимилоил)-^№диметил-1,3пропандиамина, сокращение ΌΟΜ обозначает дихлорметан, ΌΙΡΕ обозначает простой диизопропиловый эфир, ДМФА обозначает ΝΝ-диметилформамид, ЕЮАс обозначает этилацетат, Е1ОН обозначает этанол, НОВТ обозначает 1-гидрокси-1Н-бензотиазол, МеОН обозначает метанол, ТФУ обозначает трифторуксусную кислоту и ТГФ обозначает тетрагидрофуран.
А. Получение промежуточных соединений.
Пример А1.
а) Получение промежуточного соединения 1
Смесь этилового эфира 2-(1-пиперазинил)-5-пиримидинкарбоновой кислоты (0,016 моль), (2фенилэтенил)бороновой кислоты (0,016 моль) и 1,4-диоксан-2,5-диола (0,016 моль) в Е1ОН (250 мл) перемешивают в течение 2 дней при комнатной температуре и затем растворитель выпаривают в вакууме. Остаток помещают в ΌΟΜ и воду, органический слой отделяют, сушат (Мд§О4), фильтруют и выпаривают растворитель. Остаток очищают колоночной хроматографией на силикагеле (15-40 мкм) (элюент: смесь ЭСМ/МеОН 97/1). Чистые фракции упаривают, получая 4 г (61%) промежуточного соединения 1, т.пл. 128°С.
Сложные эфиры, соответствующие промежуточному соединению 1, могут быть разделены хиральной хроматографией.
Ь) Получение промежуточного соединения 2
Смесь промежуточного соединения 1 (0,0007 моль) в 1н. растворе гидроксида натрия (10 мл) и ТГФ (20 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение 48 ч. Добавляют 1н. соляную кислоту (10 мл). Растворитель выпаривают, осадок отфильтровывают, промывают водой, затем ΌΙΡΕ и сушат, получая 0,2 г (72%) промежуточного соединения 2, т.пл. 232°С.
с) Получение промежуточного соединения 3
Триэтиламин (0,012 моль), №-(этилкарбонимидоил)-^№диметил-1,3-пропандиамин (0,00593
- 15 011932 моль), 1-гидрокси-1Н-бензотриазол (0,00593 моль) и О-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)гидроксиламин (0,00593 моль) добавляют к смеси промежуточного соединения 2 (0,00395 моль) в смеси ЭСМ (70 мл) и ТГФ (70 мл), затем реакционную смесь перемешивают в течение 3 дней при комнатной температуре. Добавляют Н2О. Органический слой отделяют, сушат (Мд§О4), фильтруют и выпаривают растворитель. Остаток очищают колоночной хроматографией (градиент элюирования: ПСМ/МеОН/ЯН4ОН 97/3/0,1). Фракции продукта собирают, выпаривают органический растворитель и получают 1,5 г (84%) промежуточного соединения 3.
Пример А2.
а) Получение промежуточного соединения 4
Смесь этилового эфира 2-(1-пиперазинил)-5-пиримидинкарбоновой кислоты (0,0042 моль), 1,4диоксан-2,5-диола (0,0042 моль) и (Е)-[2-(4-хлорфенил)этенил]бороновой кислоты (0,0042 моль) в Е1ОН (100 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение 72 ч, выливают в воду и экстрагируют ЭСМ. Органический слой отделяют, сушат (Мд§О4), фильтруют и выпаривают растворитель. Остаток (1,8 г) очищают колоночной хроматографией на силикагеле (15-40 мкм) (элюент: смесь
ПСМ/МеОН/ЫН4ОН 97/3/0,1). Две фракции собирают и выпаривают растворитель, получая 0,85 г Е1 (масло) и 0,25 г Е2 (общий выход: 63%). Е1 кристаллизуют из смеси 2-пропанон/О!РЕ. Осадок отфильтровывают и сушат, получая 0,6 г промежуточного соединения 4, т.пл. 110°С.
Ь) Получение промежуточного соединения 5
Метансульфонилхлорид (0,0012 моль) при 5°С добавляют к раствору промежуточного соединения 4 (0,0006 моль) и триэтиламина (0,0024 моль) в ТГФ (15 мл) в токе Ν2. Температуру смеси доводят до комнатной, затем перемешивают в течение 1 ч и выливают в ледяную воду. Смесь экстрагируют ЭСМ. Органический слой отделяют, сушат (Мд§О4), фильтруют и выпаривают растворитель, получая 0,3 г промежуточного соединения 5. Полученный продукт сразу же используют на следующей стадии реакции.
с) Получение промежуточного соединения 6
Смесь промежуточного соединения 5 (0,0006 моль), морфолина (0,0009 моль) и карбоната калия (0,0018 моль) в ацетонитриле (30 мл) перемешивают при 80°С в течение 15 ч, выливают в воду и экстрагируют ЭСМ. Органический слой отделяют, сушат (Мд§О4), фильтруют и выпаривают растворитель. Остаток (0,27 г) очищают колоночной хроматографией на силикагеле (5 мкм) (элюент: смесь ЭСМ/МеОН от 100/0 до 90/10). Чистые фракции собирают и выпаривают растворитель, получая 0,085 г (29%) промежуточного соединения 6.
б) Получение промежуточного соединения 7
- 16 011932
Смесь промежуточного соединения 6 (0,0002 моль) в 1н. растворе гидроксида натрия (1,5 мл) и ТГФ (3 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение 72 ч. Добавляют 1н. соляную кислоту (1,5 мл). Смесь упаривают досуха, получая промежуточное соединение 7. Полученный продукт сразу же используют на следующей стадии реакции.
е) Получение промежуточного соединения 8
Смесь промежуточного соединения 7 (0,0002 моль), О-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)гидроксиламина (0,0002 моль), ЕЭС (0,0002 моль), НОВТ (0,0002 моль) и триэтиламина (0,0002 моль) в смеси ЭСМ/ТГФ (10 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение 48 ч, выливают в воду и экстрагируют ЕЮАс. Органический слой отделяют, сушат (М§8О4), фильтруют и выпаривают растворитель. Остаток (0,095 г) очищают колоночной хроматографией на силикагеле (5 мкм) (элюент: смесь
ЭСМ/МеОН^Н4ОН 97/3/0,1). Чистые фракции собирают, растворитель выпаривают, получая 0,04 г (41%) промежуточного соединения 8.
Пример Α3.
а) Получение промежуточного соединения 11
Этилат титана (0,0085 моль) добавляют при комнатной температуре к раствору этилового эфира 2(1-пиперазинил)-5-пиримидинкарбоновой кислоты (0,0042 моль) и 4-фенил-3-бутен-2-она (0,0051 моль) в 1,2-дихлорэтане (45 мл) в токе Ν2. Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 24 ч. Добавляют №ВН(ОАс)3 (0,0085 моль). Полученную смесь перемешивают в течение 5 ч, выливают в ледяную воду. Добавляют ЭСМ. Смесь фильтруют через целит. Органический слой отделяют, сушат (М§8О4), фильтруют и растворитель выпаривают. Остаток (1,16 г) очищают колоночной хроматографией на кромасиле (5 мкм) (элюент: смесь ЭСМ/МеОН от 100/0 до 95/5). Чистые фракции собирают и растворитель выпаривают, получая 0,12 г (8%) промежуточного соединения 11.
Ь) Получение промежуточного соединения 12
Смесь промежуточного соединения 11 (0,0003 моль) и гидроксида натрия (0,0013 моль) в ЕЮН (15 мл) перемешивают и кипятят с обратным холодильником в течение 3 ч, затем охлаждают до комнатной температуры и упаривают досуха. Остаток смешивают с простым диэтиловым эфиром. Осадок отфильтровывают и сушат, получая 0,12 г (100%) промежуточного соединения 12, т.пл. >260°С.
с) Получение промежуточного соединения 13
ЕЭС (0,0006 моль) и НОВТ (0,0006 моль) добавляют при комнатной температуре к раствору промежуточного соединения 12 (0,0003 моль) в ТГФ (15 мл) и ЭСМ (15 мл) в токе Ν2. Смесь перемешивают
- 17 011932 в течение 15 мин. Добавляют О-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)гидроксиламин (0,0006 моль). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 48 ч, выливают в ледяную воду и экстрагируют ϋ(Μ. Органический слой отделяют, сушат (Мд8О4), фильтруют и выпаривают растворитель. Остаток (0,25 г) очищают колоночной хроматографией на кромасиле (5 мкм) (элюент: смесь ОСМ/МеОН от 100/0 до 95/5). Чистые фракции собирают и растворитель выпаривают, получая 0,1 г (70%) промежуточного соединения 13.
Пример А4.
а) Получение промежуточного соединения 14
Смесь этилового эфира 2-(1-пиперазинил)-5-пиримидинкарбоновой кислоты (0,059 моль) в ТГФ (300 мл) и 1н. раствора гидроксида натрия (300 мл) оставляют на ночь при комнатной температуре и затем перемешивают. Добавляют 1н. соляную кислоту (300 мл) и смесь перемешивают в течение 10 мин. Добавляют карбонат натрия (0,178 моль) и полученную смесь перемешивают в течение 10 мин при комнатной температуре, затем небольшими порциями добавляют 1-[[(9Н-флуорен-9-илметокси)карбонил]окси]-2,5-пирролидиндион (0,059 моль) и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 15 ч. Смесь подкисляют концентрированной НС1, осадок отфильтровывают и сушат (в вакууме), получая 22,5 г (90%) промежуточного соединения 14, т.пл. 218,5-221,2°С.
Ь) Получение промежуточного соединения 15
К смеси промежуточного соединения 14 (0,0233 моль) в ОСМ/ТГФ (500 мл) добавляют триэтиламин (0,069 моль), затем Е1)С (0,0303 моль) и НОВТ (0,0303 моль), затем добавляют О-(тетрагидро-2Нпиран-2-ил)гидроксиламин (0,0303 моль) и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 18 ч. Смесь разбавляют ОСМ и промывают водой. Органический слой отделяют и промывают 10% раствором карбоната натрия. Отделенный органический слой сушат (Мд8О4), фильтруют и выпаривают растворитель. Остаток очищают флэш-хроматографией на колонке (элюент: смесь □СМ/МеОН от 100/0 до 97,5/2,5 через 100 мин). Фракции продукта собирают, растворитель выпаривают, получая 8,4 г (68%) промежуточного соединения 15.
с) Получение промежуточного соединения 16
Смесь промежуточного соединения 15 (0,016 моль) в пиридине (0,040 моль) и ОСМ (200 мл) перемешивают в течение ночи при комнатной температуре и реакционную смесь экстрагируют водой, затем водный слой концентрируют и выпаривают совместно с ацетонитрилом. Остаток (3,5 г) очищают флэшхроматографией на колонке (элюент: смесь 1)СМ/МеО1 ΕΝΙ13, 95/5/0,5). Фракции продукта собирают, растворитель выпаривают, получая 2,5 г (50%) промежуточного соединения 16, т.пл. 70,8-93,9°С.
й) Получение промежуточного соединения 17
Смесь промежуточного соединения 16 (0,002 моль), (Е)-[2-(4-фторфенил)этенил]бороновой кислоты (0,002 моль) и 1,4-диоксан-2,5-диола (0,002 моль) в Е1ОН (25 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение 15 ч и выливают на лед. Добавляют №НСО3. Смесь экстрагируют ОСМ. Органиче- 18 011932 ский слой отделяют, сушат (М§804), фильтруют и выпаривают растворитель. Остаток (0,68 г) очищают флэш-хроматографией на колонке на кромасиле (5 мкм) (элюент: смесь ЭСМ/Ме0Н от 100/0 до 90/10). Чистые фракции собирают и выпаривают растворитель, получая 0,27 г (29%) промежуточного соединения 17, т.пл. 90°С.
К раствору [2-(4-фторфенил)этенил]бороновой кислоты (0,0169 моль) в ЭСМ (150 мл) добавляют 2оксопропановую кислоту (0,0169 моль), затем этиловый эфир 2-(1-пиперазинил)-5-пиримидинкарбоновой кислоты (0,0169 моль). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 15 ч. Добавляют 2-оксопропановую кислоту (0,4 экв.) и [2-(4-фторфенил)этенил]бороновую кислоту (0,1 экв.). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 15 ч. Органический слой промывают водой, сушат (М§804), фильтруют и выпаривают растворитель. Остаток (7,7 г) очищают колоночной хроматографией на силикагеле (15-40 мкм) (элюент: смесь ЭСМ/Ме0НЖН40Н 92/8/0,1). Чистые фракции собирают и выпаривают растворитель. Полученный остаток (6 г) растворяют в 3н. соляной кислоте. Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 ч. Осадок отфильтровывают, промывают водой (минимум) и сушат, получая 2,8 г (36%) промежуточного соединения 18.
Ь) Получение промежуточного соединения 19
К раствору промежуточного соединения 18 (0,0015 моль), Ν-метилметанамина (0,0022 моль) и триэтиламина (0,0075 моль) в смеси ЭСМ/ТГФ (40 мл) добавляют Н0ВТ (0,0022 моль), затем ЕЭС (0,0022 моль). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 24 ч, выливают в воду и экстрагируют ЭСМ. Органический слой отделяют, сушат (М§804), фильтруют и выпаривают растворитель. Остаток смешивают с ΏΙΡΕ. Осадок отфильтровывают и сушат, получая 0,58 г (85%) промежуточного соединения 19, т.пл. 195°С.
с) Получение промежуточного соединения 20
Смесь промежуточного соединения 19 (0,0011 моль) и гидроксида лития (0,0023 моль) в ТГФ (20 мл) и воде (10 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение 15 ч. Добавляют 3н. НС1. Выпаривают ТГФ. Осадок отфильтровывают, промывают водой, затем простым диэтиловым эфиром и сушат, получая 0,45 г (82%) промежуточного соединения 20.
й) Получение промежуточного соединения 21
К раствору промежуточного соединения 20 (0,0009 моль), 0-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)гидроксиламина (0,0014 моль) и триэтиламина (0,0043 моль) в смеси ЭСМ/ТГФ (50/50) (75 мл) добавляют Н0ВТ (0,0014 моль), затем ЕЭС (0,0014 моль) при комнатной температуре. Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 48 ч, выливают в воду и экстрагируют ЭСМ. Органический слой отделяют,
- 19 011932 сушат (Мд§О4), фильтруют и растворитель выпаривают. Остаток (0,7 г) очищают колоночной хроматографией на силикагеле (5 мкм) (элюент: смесь ОСМ/МсОН/ΝΗ.-ιΟΗ 99/1/0,1 до 94/6/0,6). Чистые фракции собирают и растворитель выпаривают, получая 0,38 г (75%) промежуточного соединения 21.
Пример А6.
а) Получение промежуточного соединения 22
о
К раствору промежуточного соединения 1 (0,0065 моль) в ТГФ (60 мл) добавляют порциями гидрид натрия 60% (0,0085 моль) при 5°С в токе N2. Смесь перемешивают при 5°С в течение 15 мин. Затем по каплям добавляют раствор иодметана (0,0078 моль) в ТГФ (5 мл). Смесь перемешивают при 5°С в течение 1 ч и при комнатной температуре в течение 5 ч, выливают на лед и экстрагируют Е1ОАс. Органический слой отделяют, сушат (Мд§О4), фильтруют и выпаривают растворитель. Остаток (1,75 г) очищают колоночной хроматографией на силикагеле (15-40 мкм) (элюент: смесь ЭСМ/МсОН 99/1). Чистые фракции собирают и растворитель выпаривают, получая 0,87 г (34%) промежуточного соединения 22.
Ь) Получение промежуточного соединения 23
Смесь промежуточного соединения 22 (0,0027 моль) и моногидрата гидроксида лития (0,0055 моль) в ТГФ (40 мл) и воде (20 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение 48 ч, подкисляют 1н. НС1. ТГФ упаривают. Осадок отфильтровывают, промывают минимальным количеством воды и сушат, получая 0,91 г (83%) промежуточного соединения 23.
с) Получение промежуточного соединения 24
о
К раствору промежуточного соединения 23 (0,0022 моль), О-(тетрагидро-2Н-пиран-2ил)гидроксиламина (0,0033 моль) и триэтиламина (0,01 моль) в смеси ЭСМ/ТГФ (90 мл) добавляют при комнатной температуре НОВТ (0,0033 моль), затем ЕЭС (0,0033 моль) в токе азота. Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 48 ч, выливают в воду и экстрагируют ЭСМ. Органический слой отделяют, сушат (Мд§О4), фильтруют и растворитель выпаривают. Остаток (1,3 г) очищают колоночной хроматографией на силикагеле (15-40 мкм) (элюент: смесь ЭСМ/МсОНАН-ОН 97/3/0,1). Чистые фракции собирают и растворитель выпаривают, получая 0,93 г (89%) промежуточного соединения 24.
Пример А7.
а) Получение промежуточного соединения 25
Смесь этилового эфира 2-(1-пиперазинил)-5-пиридилкарбоновой кислоты (0,0085 моль), 1,4диоксан-2,5-диола (0,0093 моль) и (Е)-[2-(4-фторфенил)этенил]бороновой кислоты (0,0042 моль) в ЕЮН (200 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение 15 ч, затем фильтруют. Фильтрат упаривают. Остаток смешивают с Е1ОАс. Органический слой промывают насыщенным раствором №С1, сушат (Мд§О4), фильтруют и растворитель выпаривают. Остаток (3,3 г) растворяют в простом диэтиловом эфире и подкисляют, прибавляя по каплям 5-6н. НС1 в изопропаноле (2 мл) при 5°С. Осадок отфильтровы
- 20 011932 вают, промывают простым диэтиловым эфиром и сушат. Полученную фракцию смешивают с водой. Добавляют К2СО3 и смесь экстрагируют ЭСМ. Органический слой отделяют, сушат (Мд§О4), фильтруют и растворитель упаривают, получая 2,7 г (79%) промежуточного соединения 25.
Ь) Получение промежуточного соединения 26
Смесь промежуточного соединения 25 (0,002 моль), гидроксида лития (0,004 моль) в воде (20 мл) и ТГФ (40 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение 15 ч. Смесь концентрируют и добавляют 3н. соляную кислоту. Осадок отфильтровывают, промывают водой, затем простым диэтиловым эфиром и сушат, получая 0,52 г (63%) промежуточного соединения 26.
с) Получение промежуточного соединения 27
К смеси промежуточного соединения 26 (0,0012 моль) в смеси ЭСМ (50 мл) и ТГФ (50 мл) добавляют триэтиламин (0,0057 моль), №-(этилкарбонимидоил)-^№диметил-1,3-пропандиамин (0,0019 моль), 1-гидрокси-1Н-бензотриазол (0,0019 моль) и О-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)гидроксиламин (0,0019 моль). Реакционную смесь перемешивают в течение 24 ч при комнатной температуре, затем выливают в Н2О и экстрагируют ЭСМ. Органический слой отделяют, сушат (Мд§О4), фильтруют и выпаривают растворитель. Остаток очищают колоночной хроматографией на силикагеле (градиент элюирования: смесь ОС’М/МсОНАН4ОН 95/5/0,2). Фракции продукта собирают и органический растворитель выпаривают, получая 0,55 г (91%). Остаток смешивают с простым диэтиловым эфиром, осадок отфильтровывают и сушат, получая 0,5 г промежуточного соединения 27, т.пл. 133°С.
Пример А8.
Получение промежуточных соединений 28 и 29
промежуточное соединение 28: свободное основание, промежуточное соединение 29: С2Н2О4 (1:1).
Уксусный ангидрид (0,014 моль) добавляют по каплям при 5°С к смеси промежуточного соединения 3 (0,0014 моль), 4-№№диметиламинопиридина (0,0095 г) и пиридина (2,5 мл) в ЭСМ (14 мл). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 24 ч, концентрируют, смешивают с водой и экстрагируют зтилацетатом. Органический слой сушат (Мд§О4), фильтруют и растворитель выпаривают. Остаток очищают колоночной хроматографией на силикагеле (5 мкм) (градиент элюирования: смесь ЭСМ/МсОН 95/5). Чистые фракции собирают и органический растворитель выпаривают, получая 0,48 г (58%) промежуточного соединения 28. Из фракции (0,05 г) получают оксалатную соль и кристаллизуют из смеси 2-пропанон/диэтиловый эфир. Осадок отфильтровывают и сушат, получая 0,042 г промежуточного соединения 29, т.пл. 154°С.
В табл. Р-1 перечислены промежуточные соединения, полученные согласно одному из вышеуказанных примеров.
- 21 011932
Таблица Р-1 (промежуточные соединения)
η ЧхЧ/Ч/М ΌΗ Аскх?
Промеж, соед.1; Пр. [А1]; т.пл.128°С Промеж, соед. 9; Пр. [А1]
и Ν о гг ЮЖх'ЧхЧх’ ΌΗ юн - г
Промеж, соед. 4; Пр. [А1]; т.пл. 110.4°С (Е); Промеж, соед. 10; Пр. [А1]; т.пл.139°С
ρ-0-О-С ГТР ХлЧх'ЧхЧх’
Промеж, соед. Ц; Пр. [АЗ] Промеж, соед.19; Пр.[А5]; т.пл.195°С
Члсххг сА-ьг·''
Промеж, соед. 30; Пр. [А5] Промеж, соед. 31; Пр. [А5]; т.пл.196°С
\х<\Ак ,^сАо О
Промеж, соед. 32; Пр. [А5]; т.пл. 221°С Промеж, соед. 33; Пр.[А5]
χ^οΑ^ν ло Χχ°γΑΝ
Промеж, соед. 34; Пр. [А5] Промеж, соед. 35; Пр. [А5]
- 22 011932
χΝγ'Κ® О О 0^0 0
Промеж соед.36; Пр. [А5]; т.пл.144°С Промеж, соед. 37; Пр. [А5]
го О гу 0
Промеж, соед. 38; Пр. [А2] Промеж, соед. 39; Пр. [А2]
г-Х ,ψεΛχι О 0
Промеж, соед. 40; Пр. [А2] Промеж, соед. 22; Пр. [А6]
СъО) V4 юн
Соед. Νο. 41; Пр. [А6] Промеж, соед. 42; Пр. [А1] (энантиомер А)
“ η . η /'ο'γ® Λη . £Ί ПОН
Промеж, соед. 43; Пр. [А1]; т.пл.146°С (энантиомер В) Промеж, соед. 44; Пр. [А1]; т.пл.167°С (энантиомер А)
ГТ -ОН
ромеж. соед. 45; Пр. [А 1] (энантиомер В) Промеж, соед. 25; Пр. [А7]
О
Промеж, соед. 46; т.пл. [А61
В. Получение конечных продуктов.
Пример В1.
Получение соединения 1
Смесь промежуточного соединения 3 (0,00121 моль) в ТФУ (2,5 мл) и МеОН (50 мл) перемешивают в течение 48 ч и затем выпаривают растворитель. Остаток очищают колоночной хроматографией на силикагеле ЫСйгоргер® Ν42 (25-40 мкм) (элюент: смесь ЭСМ/МеОН/Н2О 80/20/2). Чистые фракции соби
- 23 011932 рают и растворитель выпаривают. Остаток смешивают с простым диэтиловым эфиром, осадок затем отфильтровывают и сушат (в вакууме) при 50°С, получая 0,26 г (64%) соединения 1, температура плавления 187°С.
Пример В2.
Получение соединения 2
Смесь промежуточного соединения 8 (0,00007 моль) в трифторуксусной кислоте (0,2 мл) и МеОН (4,5 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение 96 ч. Растворитель упаривают досуха. Остаток кристаллизуют из смеси простой диэтиловый эфир/2-пропанон. Осадок отфильтровывают и сушат, получая 0,025 г (57%) соединения 2, температура плавления 135°С.
Пример В3.
Получение соединения 7
(Е) .С2НР3О2
Смесь промежуточного соединения 13 (0,0002 моль) в ТФУ (0,5 мл) и МеОН (10 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение 48 ч, затем упаривают досуха. Остаток кристаллизуют из простого диэтилового эфира. Осадок отфильтровывают и сушат, получая 0,044 г (44%) соединения 7, температура плавления 161°С.
Пример В4.
Получение соединения 8
Смесь промежуточного соединения 17 (0,0005 моль) в ТФУ (1,2 мл) и МеОН (24 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение 5 дней. Растворитель упаривают досуха. Остаток (0,26 г) очищают колоночной хроматографией на силикагеле ЫСИгоргер® ΝΗ2 (25-40 мкм) (элюент: смесь
ЭСМ/МеОН/Н2О 70/30/3). Чистые фракции собирают и растворитель выпаривают. Остаток (0,16 г) кристаллизуют из простого диэтилового эфира. Осадок отфильтровывают и сушат, получая 0,13 г (66%) соединения 8, температура плавления 180°С.
Пример В5.
Получение соединения 9
Смесь промежуточного соединения 28 (0,0004 моль) в ТФУ (1 мл) и МеОН (20 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение 96 ч, затем упаривают. Остаток (0,23 г) очищают колоночной хроматографией на силикагеле ЫСИгоргер® ΝΗ2 (25-40 мкм) (элюент: смесь ЭСМ/МеОН/Н2О 80/20/2). Чистые фракции собирают и растворитель выпаривают. Остаток (0,106 г) кристаллизуют из простого диэтилового эфира/ОГРЕ. Осадок отфильтровывают и сушат, получая 0,067 г (34%) соединения 9, температура плавления 161°С.
- 24 011932
Пример В6.
Получение соединения 10
К раствору промежуточного соединения 21 (0,0007 моль) в МеОН (38 мл) добавляют по каплям ТФУ (1,9 мл) при 5°С. Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 48 ч, затем упаривают досуха. Остаток кристаллизуют из смеси простой диэтиловый эфир/СН3С№ Осадок отфильтровывают, промывают простым диэтиловым эфиром и сушат, получая 0,24 г (62%) соединения 10, температура плавления 146°С.
Пример В7.
Получение соединения 11
Смесь промежуточного соединения 24 (0,0018 моль) в ТФУ (4,4 мл) и МеОН (87 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение 4 дней, затем упаривают досуха. Остаток (1,05 г) очищают колоночной хроматографией на силикагеле ЫСйгоргер® ΝΠ2 (25-40 мкм) (элюент: смесь ОСМ/МеОН/Н2О 80/20/2). Чистые фракции собирают и сушат, растворитель выпаривают. Полученную фракцию (0,634 г) помещают в простой диэтиловый эфир. Осадок отфильтровывают и сушат, получая 0,43 г соединения 11, температура плавления 212°С.
Пример В8.
Получение соединения 31
Смесь промежуточного соединения 27 (0,0011 моль) в трифторуксусной кислоте (3 мл) и МеОН (60 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение 48 ч. Растворитель выпаривают досуха. Остаток кристаллизуют из простого диэтилового эфира. Осадок отфильтровывают и сушат, получая 0,515 г (89%) соединения 31, температура плавления 145°С.
В табл. Р-2 перечислены соединения, полученные согласно одному из вышеуказанных примеров. В таблицах используют следующее сокращение: С2НР3О2 обозначает трифторацетатную соль.
- 25 011932
Таблица Р-2 (конечные соединения)
ΌΗ го но у О
Ссед. Νο. 1; пр. [В1]; т.пл.187°С С2НЕ3О2 ,Н2О; Соед.№2; Пр. [В2]; т.пл. 135°С
НО-ЫН «—N \—' \— А юн <Άύί. «ο-γ^
(Е).СгНРзО2. НгО; Соед.№ 3; Пр. [В 1]; т.пл. 1бО°С (Е) .С2НР3О2; Соед.№4; Пр. [В1]; т.пл. 156°С
0 он ΗΟ'ΝΗ
С2НР3О2 .НгО; Соед.№5; пр. [В1]; т.пл. 185°С С2НР3О2.Н2О; Соед.ыеб; Пр. [В1]; т.пл. 160°С
ККН ΗΟ-ΝΗ ^—N '—' '“к О юн О
С2НР3О2; (Е); Соед.№7; Пр. [ВЗ]; т.пл. 161°С Соед.№ 8; Пр. [В4]; т.пл. 180°С
Ν ολ
Соед.№ 9; Пр. [В5]; т.пл. 161°С С2НЕ3О2. Н20;Соед.№ Ю; Пр. [Вб]; т.пл. 146°С
- 26 011932
и ίΥ^ м Ηθ'ΝΥ^Χίί’Ν 2)И ^ΝΗ НО
Соед.№ π; пр. [В7];т.пл.212°С .С2НР3О2. Н20 (Е); Соед.№12; Пр. [В4]; т.пл. 128°С
0 ϊ\ΧΗΫίΥγ'
Соед.№ 13; пр. [Вб]; т.пл. 130°С ,С2НР3О2. Н20; Соед.№14; Пр. [Вб]; т.пл.134°с
°γΜ , ίΎΝχ> Η0'ΝΥ^Ν -Λη ιγ Л ΥΥΥΥ °лг
.С2НР3О2. Н2О; Соед.№ 15; пР. [Вб]; т.пл. 159°С С2НР3О2; Соед.№ 16; Пр. [Вб]; т.пл. 131°С
“^Сс^О сАр <>0 н
Соед.№ 17; пр. [В6];т.пл.209°С Соед.№ 18; Пр. [Вб]; т.пл. 130°С
у-, ^«γΜ Η0Άγ. ΛΟιΥθ
,С2НР3О2. Н20; Соед.№ 19; Пр. [Вб];: т.пл. 130°С С2НР3О2; Соед.№ 20; пр. [Вб]; т.пл. 128°С
го γγ Ηθ''Ν’4^ρχ>>Ν 0
Соед № 21; Пр. [В2]; т.пл. 1 Ю°С (Е); Соед.№22; Пр. [В2]; т.пл.115°С
- 27 011932
о Η0'ΝγΛ^Ν О ΗΟ'νΛ^ν Ххо_о
.С2НР3О2. Н2О; Соед.№ 23; Пр. [В2]; т.пл. Юб°С Соед.№ 24; Пр. [В7]; т.пл. 170°С
н 1 ш. ''ОН
Соед.№ 25; Пр. [В1]; т.пл. 203°С; Соед.№ 26; Пр. [В1]; т.пл. 207°С;
энантиомер А энантиомер в
”^0^0 ΌΗ .ОН О
Соед.№ 27; Пр. (В1); т.пл.218°С; Соед.№ 28; Пр. [В1]; т.пл.214°С;
энантиомер д энантиомер в
г»уО'СС ,,ΝΗ НО ДЭН .ΝΗ НО
Соед.№ 29; Пр. [В1]; т.пл.1б6°С Соед.№ 30; Пр. [В1]; т.пл. 190°С
^ОН ,ΝΗ НО О
Соед.№31; пр. [В8]; т.пл.145°С Соед.№ 32; Пр. [В7];т.пл.217°С
'-Лр ху ''он ^ОН О
.НС1; Соед.№33; Пр. [В1]; т.пл. 256°С; •НС1; Соед.№34; пР. [В1]; т.пл.254°С;
энантиомер д энантиомер В |
„УО-СН.
О (Е); Соед.№ 35; Пр. [ВЗ]; т.пл. 202°С
С. Фармакологический пример.
В ίη νίΐτο анализе ингибирования гистондеацетилазы (см. пример С.1) определяют ингибирование ферментативной активности НОЛС, вызванное соединением формулы (I).
Клеточную активность соединения формулы (I) определяют на опухолевых клетках А2780 колориметрическим анализом токсичности или выживаемости клеток ^οδοαηη Т1ш, Шита! ο£ ^οπηο^^α! Ме^йз 65: 55-63, 1983) (см. пример С.2).
Растворимость соединения определяет способность соединения находиться в растворе. В первом способе измеряют способность соединения оставаться в водном растворе при разбавлении (см. пример С.3.а). Исходные растворы в ДМСО разводят водным буферным растворителем в три последовательные стадии. Для каждого разведения нефелометром измеряют мутность.
Вторым способом можно измерять растворимость соединения при различных значениях рН, используя хемилюминесцентный детектор азота (см. пример С.3.Ь).
Проникающая способность лекарственного средства выражает его способность переходить из од
- 28 011932 ной среды в другую или проникать через другую. В частности, способность лекарственного средства переходить через интестинальную мембрану в кровоток и/или из кровотока в мишень. Проникающую способность (см. пример С.4) можно определить посредством образования иммобилизованной на фильтре искусственной мембраны фосфолипидного двойного слоя. В анализе с иммобилизованной на фильтре искусственной мембраной образуется сэндвич из 96-луночного микротитрационного планшета и 96луночной фильтрующей пластины таким образом, что каждая составная лунка разделена на 2 камеры с раствором-донором на дне и раствором-акцептором в верхней части, которые разделены дисковым микрофильтром (125 мкм с порами 0,45 мкм), на который нанесен 2% (мас./об.) раствор диолеоилфосфатидилхолина в додекане, в условиях, где многослойные двойные слои образуют каналы внутри фильтра, когда система соприкасается с водным буферным раствором. Способность соединений проникать через упомянутую искусственную мембрану измеряют в см/с. Цель состоит в том, чтобы определить способность лекарственных средств проникать через параллельную искусственную мембрану при 2 разных значениях рН 4,0 и 7,4. Соединение детектируют УФ-спектрометрией при оптимальной длине волны от 250 до 500 нм.
Метаболизм лекарственных средств означает, что растворимое в липидах ксенобиотическое или эндобиотическое соединение энзиматически трансформируется в (а) полярные, растворимые в воде и экскретируемые метаболит(ы). Главным органом для метаболизма лекарств является печень. Продукты метаболизма часто менее активны, чем исходные лекарственные средства, или вообще неактивны. Однако некоторые метаболиты, возможно, обладают повышенной активностью или повышенным токсическим действием. Следовательно, метаболизм лекарственных средств может включать как детоксикацию, так и интоксикацию. Одна из основных ферментных систем, которая определяет способность организма справляться с лекарственными средствами и химикатами, представлена цитохром Р450-зависимыми монооксигеназами, которые являются ферментами, зависимыми от ΝΆΌΡΗ. Метаболическую стабильность соединений можно определить ίπ νίΐτο, используя субклеточные ткани человека. (см. пример С.5.а). Здесь метаболическая стабильность соединений выражается в % лекарственного средства, метаболизированного после инкубирования указанных соединений микросомами в течение 15 мин. Количественный анализ соединений осуществляют ЖХ-МС. Метаболическую стабильность соединений также можно определить, рассчитывая полупериод распада соединений в гепатоцитах крыс (см. пример С.5.Ь).
Показано, что разнообразные противоопухолевые средства активируют белок р21, в том числе средства, повреждающие ДНК, и ингибиторы гистондеацетилазы. Средства, повреждающие ДНК, активируют ген р21 через опухолевый супрессор р53, тогда как ингибиторы гистондеацетилазы транскрипционально активируют ген р21 посредством транскрипционного фактора 8р1. Следовательно, средства, повреждающие ДНК, активируют промотор р21 через р53-зависимый элемент, тогда как ингибиторы гистондеацетилазы активируют промотор р21 через сайты §р1 (расположенные в области от -60 до +40 п.н. относительно ТАТА бокса), причем как первые, так и вторые приводят к увеличенной экспрессии белка р21. Когда промотор р21 в клетках состоит из фрагмента промотора р21 1300 п.н., который не содержит р53-зависимых элементов, он соответственно не дает ответа на средства, повреждающие ДНК. Способность соединений индуцировать р21 можно оценивать несколькими методами. Первый метод состоит в том, чтобы обработать опухолевые клетки соединением, представляющим интерес, и после лизиса клеток определить индукцию р21 твердофазным иммуноферментным анализом р21 (\УАР1 ЕЫ8А оГ Опсодепе). Анализ р21 представляет собой сэндвич иммуноферментный анализ, в котором используют как моноклональные антитела мыши, так и поликлональные антитела кролика. Поликлональные антитела кролика, специфичные для человеческого белка р21, иммобилизуются на поверхности пластмассовых лунок, имеющихся в наборе. Любой белок р21 присутствующий в анализируемом образце, будет связываться с иммобилизованным антителом. Биотинилированное идентифицирующее моноклональное антитело также распознает человеческий белок р21 и будет связываться любым р21, который сохраняется иммобилизованным антителом. Идентифицирующее антитело, в свою очередь, связывается стрептавидином, конъюгированным с пероксидазой хрена. Пероксидаза хрена катализирует превращение хромогенного субстрата тетраметилбензидина из бесцветного раствора в синий раствор (или желтый после прибавления стоп-реагента), интенсивность которого пропорциональна количеству протеина р21, связанного с планшетом. Окрашенный продукт реакции определяют количественно с помощью спектрофотометра. Количественный анализ выполняют путем построения стандартной кривой известных концентраций р21 (при условии его лиофилизации). Указанный анализ позволяет измерять индукцию р21 как следствие повреждения ДНК или как следствие ингибирования гистондеацетилазы (см. пример С.6.а).
Способность соединений индуцировать р21 как результат ингибирования НИАС на клеточном уровне определяют другим методом. Клетки могут быть стабильно трансфицированы вектором экспрессии, содержащим фрагмент промотора р21 1300 п.н., который не содержит р53-зависимых элементов и где увеличение экспрессии гена-репортера по сравнению с уровнями контроля идентифицирует соединение как способное индуцировать р21. Ген-репортер представляет собой флуоресцирующий белок, и экспрессию гена-репортера измеряют как количество испускаемого флуоресцентного излучения (см. пример С.6.Ь). Последний метод представляет собой ίη νίνο метод, где используют мышей для скрининга фармацевтической активности соединения. Вышеописанные стабильно трансформированные опухолевые
- 29 011932 клетки можно вводить мышам в количестве, достаточном, чтобы осуществить продуцирование опухоли. После того как опухолевые клетки имели достаточно времени для формирования опухоли, животным можно вводить потенциально активное соединение, и действие указанного соединения на опухолевые клетки оценивают, измеряя экспрессию гена-репортера. Инкубирование фармацевтически активными соединениями будет приводить к увеличению экспрессии гена-репортера по сравнению с контрольными уровнями (см. пример С.6.с).
Специфические ингибиторы НИАС не должны ингибировать другие ферменты, подобно распространенным белкам СУР Р450. Белки СУР Ρ450 (Е.соб экспрессированные) 3А4, 2Ό6 еп 2С9 превращают свои специфические субстраты в флуоресцентные молекулы. Белок СУР3А4 превращает 7бензилокситрифторметилкумарин (ВБС) в 7-гидрокситрифторметилкумарин. Белок СУР2И6 превращает 3-[2-(^№диэтил-Ы-метиламино)этил]-7-метокси-4-метилкумарин (АММС) в гидрохлорид 3-[2-(Ν,Νдиэтиламино)этил]-7-гидрокси-4-метилкумарина и белок СУР2С9 превращает 7-метокси-4трифторметилкумарин (МБС) в 7-гидрокситрифторметилкумарин. Соединения, ингибирующие ферментативную реакцию будут приводить к уменьшению флуоресцентного сигнала (см. пример С.7).
Пример С.1. Ιη νίίτο анализ ингибирования гистондеацетилазы.
Используют флуоресцентный анализ активности НИАС/Огид ^^8сονе^у Кб о£ Вюто1 (номер в каталоге АК-500-0001). Флуоресцентный анализ активности НИАС базируется на комбинации субстрата Б1иог бе Ьук (Ииогодешс НЫоп бе Лсе1у1а5е Ьуку1) и проявителя. Субстрат Б1иог бе Ьук содержит боковую цепь ацетилированного лизина. Деацетилирование субстрата сенсибилизирует субстрат таким образом, что на второй стадии обработка проявителем Б1иог бе Ьук дает флуорофор.
Ядерные экстракты НеЬа (поставщик - Вюто1) инкубируют при 60 мкг/мл с 75 мкМ субстрата. Субстрат Б1иог бе Ьук добавляют в буфер, содержащий 25 мМ ТгЬ. 137 мМ №С1, 2,7 мМ КС1 и 1 мМ МдС12-6Н2О при рН 7,4. Через 30 мин добавляют 1 об. проявителя. Флуорофор возбуждают светом 355 нм и испускаемый свет (450 нм) определяют на флуорометрическом планшет-ридере. Для каждого эксперимента параллельно проводят контрольные опыты (содержащие ядерные экстракты НеЬа и буфер) и «холостые» опыты по инкубированию клеток (содержащие буфер без ядерного экстракта НеЬа) и опыты с образцами (содержащие соединение, растворенное в ДМСО и дополнительно разведенное в буфере, и ядерный экстракт НеЬа). В первом примере соединения испытывают при концентрации 10-5 М. Когда соединения проявляют активность при концентрации 10-5 М, строят кривую концентрация-ответ, для которой соединения испытывают в концентрациях от 10-5 до 10-9 М. Все образцы испытывают по 4 раза. В каждом тесте значение холостых опытов вычитают из значений, полученных в контрольных опытах и в опытах с образцом. Контрольный образец представляет собой 100% деацилированный субстрат. Для каждого образца флуоресценцию выражают в процентах от среднего значения контрольных опытов. Когда это целесообразно, рассчитывают значения 1С50 (концентрация лекарственного средства, необходимая для уменьшения роста клеток на 50% по сравнению с контролем), применяя пробит-анализ для количественных данных. В настоящей заявке эффекты испытываемых соединений выражены в р1С50 (отрицательная величина логарифма значения 1С50) (см. табл. Р-3).
Пример С.2. Определение антипролиферативной активности на клетках А2780.
Все испытываемые соединения растворяют в ДМСО и делают дальнейшие разведения в питательной среде. При определении пролиферации клеток конечные концентрации ДМСО никогда не превышали 0,1% (об./об.). Контрольные опыты содержали клетки А2780 и ДМСО без соединения, и холостые опыты содержали ДМСО, но не содержали клеток. МТТ растворяют при 5 мг/мл в РВ8. Приготавливают глициновый буфер, содержащий 0,1 М глицина и 0,1 М №С1, забуференный раствором 1н. №1ОН до рН 10,5 (все реагенты поставляются Мегск).
Клетки А2780 карциномы яичника человека (любезно предоставленные в дар доктором Т.С. Натб1оп [Рох Сбаке Сапсег Сеп1ге, Реппкукаша, И8А]) культивируют в среде ВРМ1 1640, к которой добавлены 2 мМ Ь-глутамина, 50 мкг/мл гентамицина и 10% фетальная телячья сыворотка. По стандартной методике клетки фетальной телячьей сыворотки выдерживают как монослойные культуры при 37°С в увлажненной атмосфере с 5% СО2. Клетки пересевают 1 раз в неделю, используя раствор трипсин/ЕИТА при индексе разведения 1:40. Все среды и вспомогательные средства получают от компании Ьбе Тесбпо1од1ек. Клетки не загрязнены микоплазмой, как определено с помощью набора Сеп-РгоЬе Мусор1акта Т188ие Сибиге кб (поставщик: ВюМепеих).
Клетки высевают в ΝϋΝΟ™ 96-луночные планшеты (поставщик: Ьбе Тесбпо1од1ек) и в течение ночи дают возможность клеткам «прилипнуть» к пластмассе. Плотности, используемые для культивирования, составляли 1500 клеток на лунку при общем объеме среды 200 мкл. После адгезии клеток к планшетам среду изменяют и добавляют лекарства и/или растворители к конечному объему 200 мкм. В последующие четыре дня инкубирования среду заменяют 200 мкм свежей среды и плотность и жизнеспособность клеток оценивают анализом, основанным на МТТ. В каждую лунку добавляют 25 мкл раствора МТТ и клетки дополнительно инкубируют в течение 2 ч при 37°С. Среду затем осторожно отсасывают и синий продукт МТТ-формазан солюбилизируют прибавлением 2 мкл глицинового буфера, затем 100 мкл ДМСО. Микропланшеты для анализа встряхивают в течение 10 мин на микропланшетном шейкере и из
- 30 011932 меряют поглощение при 540 нм с помощью Етах 96-луночного спектрофотометра (поставщик: ЗорасЬет). В рамках одного эксперимента результаты для каждого типа условий эксперимента представляют собой среднее значение из 3 воспроизводимых лунок. Для первоначального скрининга соединения испытывают при одной фиксированной концентрации 10-6 М. Для активных соединений эксперименты повторяют, чтобы построить полные кривые концентрация-ответ. Для каждого эксперимента параллельно проводят контрольные опыты (не содержащие лекарств) и «холостые» опыты по инкубированию (не содержащие клеток и лекарств). Значение для холостых опытов вычитают из всех значений, полученных в контрольных опытах и опытах с образцами. Для каждого образца среднее значение роста клеток (в единицах поглощения) выражают в процентах от среднего значения роста клеток в контроле. Когда это целесообразно, рассчитывают значения 1С50 (концентрация лекарственного средства, необходимая для уменьшения роста клеток на 50% по сравнению с контролем), применяя пробит-анализ для количественных данных [Ешпеу, ΌΙ, РгоЬб Апа1узез, 2'1 Еб. СЬар1ег 10, Сгабеб Резропзез. СатЬпбде Ишуегзбу Ргезз, СатЬпбде 1962]. В настоящей заявке эффекты испытываемых соединений выражены в р1С50 (отрицательная величина логарифма значения 1С50) (см. табл. Е-3).
Пример С.3. Растворимость/стабильность.
С.3.а. Кинетическая растворимость в водных средах.
На первой стадии разведения 10 мкл концентрированного исходного раствора активного соединения, солюбилизированного в ДМСО (5 мМ), добавляют к 100 мкл фосфат-цитратного буфера с рН 7,4 и смешивают. На второй стадии разведения аликвоту (20 мкл) раствора после первой стадии разведения дополнительно распределяют в 100 мкл фосфат-цитратного буфера с рН 7,4 и смешивают. В заключение, на третьей стадии разведения образец (20 мкл) раствора после второй стадии разведения дополнительно распределяют в 100 мкл фосфат-цитратного буфера с рН 7,4 и смешивают. Все разведения осуществляют в 96-луночных планшетах.
Сразу же после последней стадии разведения нефелометром измеряют мутность растворов трех последовательных стадий разведения. Разведение повторяют по 3 раза для каждого соединения, чтобы исключить случайные ошибки. На основании измерений мутности соединения делят на 3 класса. Соединения с высокой растворимостью получают 3 балла, и для этих соединений при первом разведении получают прозрачный раствор. Соединения со средней растворимостью получают 2 балла, и для этих соединений первое разведение дает непрозрачный раствор, а после второго разведения раствор прозрачный. Соединения с низкой растворимостью получают 1 балл, и для этих соединений и первое, и второе разведения не дают прозрачного раствора (см. табл. Е-3).
С.3.Ь. Растворимость.
Растворимость соединения при различных значениях рН также можно измерить с помощью хемилюминесцентного детектора азота (см. табл. Е-3).
Пример С.4. Анализ проницаемости параллельной искусственной мембраны.
Исходные образцы (аликвоты 10 мкл исходного раствора 5 мМ в 100% ДМСО) разводят в планшете с глубокими лунками или Рге-т1х планшете, содержащем 2 мл водной буферной системы с рН 4 или рН 7,4 (Р8В4 8уз1ет 8о1ибоп СопсеШпИе (ρΙΟΝ)).
До прибавления образцов к эталону 150 мкл буфера добавляют в лунки и осуществляют «холостое» УФ-измерение. Затем буфер отбрасывают, и планшет используют в качестве эталонного. Все измерения проводят в планшетах, устойчивых к УФ-облучению (поставщик: Соз!аг или Сгетег).
После холостого измерения 150 мкл разведенных образцов добавляют в эталонный планшет и 200 мкл разведенных образцов добавляют в планшет-донор 1. На акцептор-фильтр-пластину 1 (поставщик: М1Шроге, тип: МА1Р N45) наносят покрытие из 4 мкл раствора, образующего искусственную мембрану (1,2-диолеоил-зп-глицер-3-фосфохолин в додекане, содержащий 0,1% 2,6-ди-трет-бутил-4-метилфенола) и помещают на верхнюю часть планшета-донора 1, образуя сэндвич. Буфер (200 мкл) распределяют в лунках-акцепторах в верхней части. Сэндвич закрывают крышкой и хранят в течение 18 ч при комнатной температуре в темноте.
«Холостое» измерение планшета-акцептора 2 осуществляют путем прибавления 150 мкл буфера в лунки с последующим УФ-измерением. После «холостого» измерения планшет-акцептора 2 буфер отбрасывают и 150 мкл раствора акцептора переносят из акцептор-фильтр-пластины 1 на планшетакцептор 2. Затем акцептор-фильтр-пластину 1 удаляют из «сэндвича». После холостого измерения планшета-донора 2 (см. выше) 150 мкл раствора донора переносят из планшета-донора 1 в планшетдонор 2. УФ-спектры лунок планшета-донора 2, планшет-акцептора 2 и эталонного планшета сканируют (8рес!гаМАХ 190). Все спектры обрабатывают для расчета проницаемости с помощью программы Р8Р4р Соттапб. Для всех соединений измерения осуществляют по три раза. В каждом опыте в качестве стандартов используют карбамазепин, гризеофулвин, ациклогуанизин, атенолол, фуросемид и хлортриазид. Соединения делят на три категории: соединения с низкой проникающей способностью (средний эффект <0,5х10-6 см/с, количество баллов 1), соединения со средней проникающей способностью (1х10-6 см/с > средний эффект >0,5х10-6 см/с, количество баллов 2) или соединения с высокой проникающей способностью (>1х10-6 см/с, количество баллов 3).
- 31 011932
Пример С.5. Метаболическая стабильность.
Пример С.5.а.
Препараты субклеточной ткани получают по методике Горрода [Ооггой е! а1., ХепоЫойса 5: 453462, 1975] разделением на центрифуге после механической гомогенизации ткани. Ткань печени промывают охлажденным (0°С) 0,1 Μ трис-НС1 буфером (рН 7,4), чтобы отмыть избыточную кровь. Затем ткань подвергают блоттингу, сушат, взвешивают и измельчают с помощью хирургических ножниц. Кусочки ткани гомогенизируют в 3 об. охлажденного (0°С) фосфатного буфера (рН 7,4), используя или Ро!!ег-8 (Вгаип, Италия) гомогенизатор, снабженный пестиком из тефлона, или 8огуа11 Отш-Μίχ гомогенизатор, для 7x10 с. В обоих случаях сосуд выдерживают в/на льде во время гомогенизации.
Гомогенаты ткани центрифугируют при 9000хд в течение 20 мин при 4°С на центрифуге 8огуа11 или ультрацентрифуге Весктап. Полученный супернатант хранят при -80°С и обозначают '89'.
Фракцию 89 можно дополнительно центрифугировать при 100000хд в течение 60 мин (4°С) на ультрацентрифуге Весктап. Полученный супернатант осторожно отсасывают, определяют количество и называют 'цитозол'. Таблетку повторно суспендируют в 0,1 Μ фосфатном буфере (рН 7,4) в окончательном объеме 1 мл на 0,5 г исходной массы ткани и называют «микросомы».
Все субклеточные фракции делят и немедленно замораживают в жидком азоте и хранят при -80°С до использования.
Для испытываемых образцов смесь для инкубирования содержала РВ8 (0,1Μ), соединение (5 мкМ), микросомы (1 мг/мл) и ΝΑΏΡΗ-генерирующую систему (0,8 мМ глюкоза-6-фосфата, 0,8 мМ хлорида магния и 0,8 единиц глюкоза-6-фосфатдегидрогеназы). Контрольные образцы содержали те же вещества, но микросомы были заменены инактивированными нагреванием микросомами (10 мин при 95°С). Возврат соединений в контрольных образцах всегда составлял 100%.
Смеси предварительно инкубируют в течение 5 мин при 37°С. Реакцию начинают в нулевой момент времени (!=0) прибавлением 0,8 мМ ΝΑΌΡ и образцы инкубируют в течение 15 мин (1=15). Реакцию прекращают прибавлением 2 об. ДМСО. Затем образцы центрифугируют в течение 10 мин при 900хд и супернатанты хранят при комнатной температуре перед анализом не более 24 ч. Все опыты по инкубированию осуществляют по два раза. Анализ супернатантов проводят ^-Μ8. Элюирование образцов осуществляют на Х!егга Μ8 С18 (50x4,6 мм, 5 мкм, Аа1егк, И8). Используют ВЭЖХ систему АШапсе 2790 (8иррйег: Аа1егк, И8). Элюирование проводят буфером А (25 мМ ацетата аммония (рН 5,2) в смеси Н2О/ацетонитрил (95/5)), причем растворителем В является ацетонитрил, а растворителем С - метанол при скорости потока 2,4 мл/мин. Используемым градиентом явилось линейное увеличение концентрации органической фазы от 0 до свыше 50% В и 50% С за 5 мин и до 100% за 1 мин и концентрацию органической фазы поддерживают неизменной в течение дополнительных 1,5 мин.
Общий объем вводимых образцов составлял 25 мкл.
Для детектирования используют Риайго (поставщик: Μ^с^ота88, Манчестер, Великобритания) массспектрометр с тремя квадрупольными линзами, снабженный Е8I источником. Температуру источника и температуру десольватации устанавливают 120 и 350°С соответственно и в качестве небулайзера и газаосушителя используют азот. Данные получают в положительном режиме сканирования (реакция одиночного иона). Конус напряжения установлен при 10 В и время пребывания в системе составляло 1 с.
Метаболическую стабильность выражают как % метаболизма соединения после инкубирования в течение 15 мин в присутствии активных микросом
Е(акт)) (% метаболизма = 100% ((
Соединения, которые имели % метаболизма меньше 20% определяют как соединения с высокой метаболической стабильностью. Соединения с метаболизмом от 20 до 70% определяют как соединения с промежуточной метаболической стабильностью и соединения с метаболизмом выше 70% определяют как соединения с низкой метаболической стабильностью. Три соединения-эталона включают всегда, когда осуществляют скрининг метаболической стабильности. Верапамил включают в качестве соединения с низкой метаболической стабильностью (% метаболизма = 73%). Цисаприд включают в качестве соединения с промежуточной метаболической стабильностью (% метаболизма 45%) и пропанол включают в качестве соединения с высокой метаболической стабильностью (метаболизм 25%). Указанные эталонные соединения используют для того, чтобы подтвердить результаты анализа метаболической стабильности.
С.5.Ь. Метаболическая стабильность с культурой клеток гепатоцитов крыс.
Гепатоциты крыс выделяют из крыс-самцов 8ргадие Эо^1еу. Соединения растворяют в 5 мМ исходного раствора в 100% ДМСО и инкубируют при конечной концентрации 5 мкМ для времени 0, 15, 30, 60 и 120 мин с культурами клеток гепатоцитов крыс (0,5 млн жизнеспособных клеток/0,5 мл) в 24луночных планшетах.
Образцы для ЖХ-МС приготавливают прибавлением двух объемов ДМСО. Образцы тщательно встряхивают и затем центрифугируют при 900 д в течение 10 мин (комнатная температура). Все экспе
- 32 011932 рименты проводят по три раза. Полученный супернатант (5 мкл) анализируют ЖХ-МС.
Для ЖХ-МС элюирование образцов осуществляют на колонке Нурегкй ВЭ8 С18 (50x4,6 мм, 5 мкм, Тйегтойурегкб, Великобритания). ВЭЖХ система включает систему доставки 8игуеуог (8игуеуог 1пс., 8ап 1оке, США), снабженную автосэмплером 8игуеуог. Элюирование проводят буфером А (10 мМ ацетата аммония (рН 6,9) в смеси Н2О/ацетонитрил (95:5)) и растворителем В (ацетонитрил) при скорости потока 1,2 мл/мин. Используемый градиент составлял 0,5 мин растворитель А в качестве начальных условий с последующим линейным увеличением концентрации органической фазы от 0% В до 95% В в течение 2 мин. Указанную фазу сохраняют стационарной в течение следующих 2 мин и вновь уменьшают В до 0% в течение 0,5 мин.
Общий объем введенных образцов составлял 50 мкл. Температуру нагрева колонки поддерживают при 40°С. Поток ГХ расщепляется для МС детектирования и 0,1 мл подается в источник. Массспектрометр с тремя квадрупольными линзами Т8Ц ОнапЦнп (Тйегтойпшдап, Ьа1о11а, США), массспектрометр, снабженный Е81 источником, используют для детектирования. Напряжение источника устанавливают 3800 В, температуру капилляра - 300°С. Масс-спектрометр используют в режиме положительных ионов в 81М, отрегулированном для массы М+Н с шириной сканирования 1 Эа для количественных целей. Регулирование прибора, получение и обработку данных осуществляют с помощью программ ХсайЬиг (ТйегтоИпшдап, 8ап 1оке, СА, США). Метаболическую стабильность соединений в гепатоцитах крыс выражают как полупериоды распада ш νίΙΐΌ.
В качестве эталона используют соединение К306465 (\УО 03/76422) (ш тбго полупериод распада 8 мин). Соединение 4 по настоящей заявке испытывали, и его полупериод распада составляет 23 мин.
Пример С.6. Индуцирующая способность р21.
Пример С.6.а. Твердофазный иммуноферментный анализ белка р21.
Нижеследующую методику применяют для определения уровня экспрессии белка р21 в клетках А2780 карциномы яичника человека. Клетки А2780 (20000 клеток/180 мкл) высевают в 96-луночные микропланшеты в среде КРМ1 1640 с добавлением 2 мМ Ь-глутамина, 50 мкг/мл гентамицина и 10% фетальной телячьей сыворотки. За 24 ч до лизиса клеток добавляют соединения в конечных концентрациях 10-5, 10-6, 10-7 и 10-8 М. Все испытываемые соединения растворяют в ДМСО и дальнейшие разведения осуществляют в питательной среде. Через 24 ч после прибавления соединения супернатанты удаляют из клеток. Клетки промывают 200 мкл охлажденного на льду РВ8. Лунки аспирируют и добавляют 30 мкл лизисного буфера (50 мМ ТЙ5.НС1 (рН 7,6), 150 мМ ИаС1, 1% Иошбе! р40 и 10% глицерин). Планшеты инкубируют в течение ночи при -70°С.
Соответствующее число микротитровальных лунок удаляют из мешка из фольги и помещают в пустую камеру для лунок. Готовят рабочий раствор (1х) промывного буфера (20 х планшет промывной концентрат: 100 мл раствора РВ8 20-кратной концентрации и поверхностно-активного вещества. Содержит 2% хлорацетамида). Лиофилизованный стандарт р21^АР разбавляют дистиллированной Н2О и дополнительно разводят разбавителем образцов (поставляемым в наборе).
Приготавливают образцы разведением их в разбавителе для образцов (1:4). Образцы (100 мкл) и стандарты р21^АР1 (100 мкл) отбирают пипеткой в соответствующие лунки и инкубируют при комнатной температуре в течение 2 ч. Лунки 3 раза промывают 1х промывным буфером и затем 100 мкл реагента для определения антител (раствор биотинилированных моноклональных антител р21^АР1) вносят пипеткой в каждую лунку. Лунки инкубируют при комнатной температуре в течение 1 ч и затем три раза промывают 1х промывным буфером. 400х конъюгат (конъюгат пероксидазы стрептовидина: 400кратный концентрированный раствор) разбавляют и добавляют 100 мкл 1х раствора в лунки. Лунки инкубируют при комнатной температуре в течение 30 мин и затем 3 раза промывают 1х промывным буфером и 1 раз дистиллированной Н2О. Раствор субстрата (хромогенный субстрат) (100 мкл) добавляют в лунки и лунки инкубируют в течение 30 мин в темноте при комнатной температуре. Добавляют раствор стоп-реагента в каждую лунку в том же порядке, что и ранее прибавленный раствор субстрата. В каждой лунке измеряют поглощение двухволновым спектрофотометрическим планшет-ридером при 450/595 нм. Для каждого эксперимента параллельно осуществляют контрольные опыты (в которых не содержится лекарственного средства) и холостые опыты по инкубированию (в которых отсутствуют клетки и лекарственные средства). Значение для холостого опыта вычитают из значений, полученных в контрольных опытах и опытах с образцами. Для каждого образца значение индукции для р21^АР1 (в единицах поглощения) выражают в виде процентного отношения значения для р21^АР1 в контроле. Процентное отношение индукции выше 130% определяют как значительную индукцию. Испытывали четыре соединения и все показали значительную индукцию.
Пример С.6.Ь. Клеточный метод.
Клетки А2780 (АТСС) культивируют в среде КРМ1 1640, к которой добавлены 10% РС8, 2 мМ Ьглутамина и гентамицина при 37°С во влажном инкубаторе с 5% СО2. Все растворы культур клеток предоставлены 61Ьсо-ВКЬ (бабйегкЬигд, МЭ). Другие вещества поставлены компанией Иипс.
Геномную ДНК экстрагируют из пролиферирующих А2780 клеток и используют в качестве матрицы для внутригенного РСК выделения промотора р21. Первую амплификацию осуществляют за 20 цик
- 33 011932 лов при температуре ренатурации 55°С, используя пару нуклеотидов САССССССССТССТТСС И ТССССССССТСТСТСАСС с геномной ДНК в качестве матрицы. Полученный фрагмент (4,5 т.п.н.), содержащий от -4551 до +88 фрагмент относительно ТАТА бокса (бокса Хогнесса), реамплифицируют олигонуклеотидами ТССССТАСССАССССССССТССТТСС и АТАСТССАСТССССССССТСТСТСАСС за 20 циклов при температуре ренатурации 88°С и получают фрагмент (4,5 т.п.н.) и затем олигонуклеотидной парой
ТССССТАССССТАСАТСССАССССАТАСАСАСАТСи
АТАСТССАСТССССССССТСТСТСАСС за 20 циклов при температуре отжига 88°С и получают фрагмент (1,3 т.п.н.), содержащий от -1300 до +88 фрагмент относительно ТАТА бокса. Сайты рестрикции Х1ю! и Крп[, имеющиеся в олигонуклеотидах (подчеркнутые последовательности), используют для субклонирования.
Репортер люциферазы удаляют из вектора рСЬ3-Ьа81с и заменяют репортером 2§Сгееп (из плазмиды р25Сгееп 1-Ν1) на сайтах рестрикции Крп! и ХЬаГ рСЬ3-Ьа81с-28Сгееп-1300 создают посредством вставки в область вышеупомянутого фрагмента 1,3 т.п.н. промотора белка человека р21 в рСЬ3-Ьа81с2§Сгееп на сайтах ХНсй и Крп!. Все рестрикционные ферменты получены от Воейгшдег Мап11еип (Германия). Клетки А2780 культивируют в 6-луночном планшете при плотности 2х105 клеток, инкубируют 24 ч и трансфицируют 2 ид рСЬ3-Ьа81с-28Сгееп-1300 и 0,2 ид вектора р8У2пео, используя липофектамин 2000 Дпуйгодеп, Вги55е15. Бельгия), как описано производителем.
Трансфицированные клетки выбирают в течение 10 дней с помощью С418 (С1Ьсо-ВКБ, СаййегаЬигд, МО) и выращивают суспензии отдельных клеток. Через три недели получают отдельные клоны.
Выбранные клоны А2780 размножают и высевают 10000 клеток на лунку в 96-луночных планшетах. Через 24 ч после посева клетки обрабатывают соединениями в течение дополнительных 24 ч (оказывая влияние на сайты 8р1 в проксимальной области промотора р21). Затем клетки фиксируют 4% РРА для 30' и окрашивают контрастным веществом (красителем Хехста). Активацию промотором р21, которая приводит к продуцированию 2§Сгееп и, следовательно, к флуоресценции, контролируют прибором Аксеп! Ииогоккап (Тйегшо ЬаЬкуйетк, Вги88е18, Бельгия).
Для каждого эксперимента параллельно проводят контрольные опыты (в которых отсутствует лекарственное средство) и холостые опыты по инкубированию (в которых отсутствуют клетки или лекарственные средства). Значение для холостого опыта вычитают из значений, полученных в контрольных опытах и опытах с образцами. Для каждого образца значение индукции для р21 выражают в виде процентного отношения значения для р21 в контроле. Процентное отношение индукции выше 130% определяют как значительную индукцию.
Испытывали двадцать шесть соединений, которые показали значительную индукцию.
Пример С.6.с. Ση у1уо метод.
Выбранный клон вводят подкожно (107 клеток/200 мкл) в бок «голых» мышей и через 12 дней получают опухоль, которую можно измерить кронциркулем. Начиная с 12 дня животным каждый день вводят перорально или внутривенно в течение 6 дней растворитель и 20-40 трк соединения (4-10 животных в каждой группе). Опухоли оценивают по флуоресценции с помощью системы собственной разработки Аи1ота1еб \У1ю1е Вобу Бпадшд 8ук1ет (флуоресцентный стереомикроскоп типа О1утрц§® 8ΖΧ 12, снабженный фильтром СРР и соединенный с ССЭ камерой типа 1А[® СУ-М90, управляемый пакетом программ на основе ИМЛС Уыоп 8оП\гаге от №бопа1 Iη8ί^итеηΐ8®). В качестве эталона используют соединение Я306465 (\УО 03/76422). Соединения классифицируют как неактивные (отсутствует флуоресценция, которую можно измерить), более слабые, чем Я306465, идентичные Я306465 и более активные, чем Я306465. Испытывали соединение 1, и оно более активно после перорального введения, чем Я306465.
Пример С.7. Способность ингибировать Р450.
Все испытываемые соединения растворяют в ДМСО (5 мМ) и дополнительное разведение до 5х10-4 М проводят в ацетонитриле. Дальнейшие разведения проводят в буфере для анализа (0,1М NаКфосфатный буфер, рН 7,4) и конечная концентрация растворителя никогда не превышает 2%.
Анализ белка СУР3А4 включает на лунку 15 пмоль белка Р450/мг (в 0,01М NаК-фосфатном буфере +1,15% КС1), систему, генерирующую ХАЭРН (3,3 мМ глюкоза-6-фосфата, 0,4 Е/мл глюкоза-6фосфатдегидрогеназы, 1,3 мМ ХАЭР и 3,3 мМ МдС12-6Н2О в буфере для анализа), и испытываемое соединение в общем объеме для анализа 100 мкл. После 5 мин предварительного инкубирования при 37°С начинают ферментативную реакцию прибавлением 150 мкМ субстрата ВРС флуоресцентного зонда в буфере для анализа. После инкубирования в течение 30 мин при комнатной температуре реакцию прекращают после прибавления 2 об. ацетонитрила. Флуоресцентные анализы проводят при длине волны возбуждения 405 нм и длине волны испускания 535 нм. Кетоконазол (значение Κ\0=3χ 10-8 М) включен в качестве эталонного соединения в указанный эксперимент.
Анализ белка СУР2Э6 содержит на лунку 6 пмоль белка Р450/мг (в 0,01М NаК-фосфатном буфере + 1,15% КС1), систему, генерирующую ХАЭРН (0,41 мМ глюкоза-6-фосфата, 0,4 Е/мл глюкоза-6
- 34 011932 фосфатдегидрогеназы, 0,0082 мМ ΝΑΌΡ и 0,41 мМ МдС12-6Н2О в буфере для анализа), и испытываемое соединение в общем объеме для анализа 100 мкл. После 5 мин предварительного инкубирования при 37°С начинают ферментативную реакцию прибавлением 3 мкМ субстрата АММС флуоресцентного зонда в буфере для анализа. После инкубирования в течение 45 мин при комнатной температуре реакцию прекращают после прибавления 2 об. ацетонитрила. Флуоресцентные анализы проводят при длине волны возбуждения 405 нм и длине волны испускания 460 нм. Хинидин (значение 1С50=5х10-8 М) включен в качестве эталонного соединения в указанный эксперимент.
Анализ белка СУР2С9 содержит на лунку 15 пмоль белка Р450/мг (в 0,01М №К-фосфатном буфере +1,15% КС1), NА^ΡН-генерирующую систему (3,3 мМ глюкоза-6-фосфата, 0,4 Е/мл глюкоза-6фосфатдегидрогеназы, 1,3 мМ ΝΑΏΡ и 3,3 мМ МдС12-6Н2О в буфере для анализа), и испытываемое соединение в общем объеме для анализа 100 мкл. После предварительного инкубирования в течение 5 мин при 37°С начинают ферментативную реакцию прибавлением 200 мкМ субстрата МРС флуоресцентного зонда в буфере для анализа. После инкубирования в течение 30 мин при комнатной температуре реакцию прекращают после прибавления 3 об. ацетонитрила. Флуоресцентные анализы проводят при длине волны возбуждения 405 нм и длине волны испускания 535 нм. Сульфафеназол (значение 1С50=6,8х10-7 М) включен в качестве эталонного соединения в указанный эксперимент.
Для целей первичного скрининга соединения испытывают при одной фиксированной концентрации 1 х105 М. Для активных соединений эксперименты повторяют для построения полных кривых концентрация-ответ. Для каждого эксперимента параллельно проводят контрольные опыты (в которых отсутствует лекарственное средство) и холостые опыты по инкубированию (в которых отсутствуют ферменты и лекарственные средства). Все соединеия испытывают четырехкратно. Значение из холостого опыта вычитают из значений, полученных в контрольных опытах и опытах с образцами. Для каждого образца среднее значение Р450 активности образца (в относительных единицах флуоресценции) выражают в виде процентного отношения среднего значения Р450 активности контроля. Ингибирование в процентах выражают как 100% минус среднее значение активности образца в отношении Р450. Когда это целесообразно, рассчитывают величины 1С50 (концентрация лекарственного средства, необходимая для уменьшения активности Р450 до 50% от контрольной).
Таблица Р-3
Приведены результаты для соединений, которые были испытаны в соответствии с примерами С.1, С.2, С.3.а и С.3.Ь.__
Номер соединения Ферментативная активность р1С50 С.1 Клеточная активность р1С50 С.2 Растворимость С.3.Ь. рН=2,3 мг/мл Раствори- мость С.З.а
1 8,2 7,9 3
2 7,4 6, 5 3
3 СО 7,5 3
4 8,2 7,5 3
5 7,9 7,4 1
6 7,6 7,4 3
7 >9 7,5 2,0
8 СО со 7,9 2,9
- 35 011932
9 9,4 7,6
10 8,4 7,5 3,0
11 9,4 8,0 3,1
12 9,0 7,5 2,1
13 оо со 7,0 3,7
14 8,5 7,4 2,8
15 7,6 7, 0 3
16 7,4 7,1 2,8
17 ОО 00 6,7 2,2
18 8,5 7,0 3,6
19 8,4 6, 3 2,6
20 7,7 7,3
21 7,9 6, 8 2,1
22 7,9 6, 8 4,2
23 о со 6, 6
24 8,8 7,5 4,0
25 7,9 7,6 3,4
26 8,3 7,2 3,5
27 >9 7,5
28 >9 7,5
31 8,5 7,4
32 >9 >7,5
33 >9 8,2
34 8,8 7,9
35 9, 6 7,8
Ό. Пример композиции: таблетки с пленочным покрытием.
Получение ядра таблетки.
Смесь 100 г соединения формулы (I), 570 г лактозы и 200 г крахмала хорошо перемешивают и затем увлажняют раствором 5 г додецилсульфата натрия и 10 г поливинилпирролидона в примерно 200 мл воды. Влажную порошкообразную смесь просеивают, сушат и вновь просеивают. Затем добавляют 100 г микрокристаллической целлюлозы и 15 г гидрогенизированного растительного масла. Полученную смесь хорошо перемешивают и прессуют в таблетки, получая 10000 таблеток, каждая из которых содержит 10 мг соединения формулы (I).
Нанесение покрытия.
К раствору 10 г метилцеллюлозы в 75 мл денатурированного этанола добавляют раствор 5 г этилцеллюлозы в 150 мл дихлорметана. Затем добавляют 75 мл дихлорметана и 2,5 мл 1,2,3-пропантриола, 10 г полиэтиленгликоля расплавляют и растворяют в 75 мл дихлорметана. Последний раствор добавляют к предшествующему и затем добавляют 2,5 г октадеканоата магния, 5 г поливинилпирролидона и 30 мл концентрированной суспензии красителя и всю полученную смесь гомогенизируют. На ядра таблеток наносят покрытие из полученной таким образом смеси в машине для нанесения покрытия.

Claims (15)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Соединение формулы (I)
    - 36 011932 его Ν-оксидные формы, его фармацевтически приемлемые кислотно-аддитивные соли и стереохимически изомерные формы, где каждый X независимо представляет собой N или СН;
    К1 представляет собой фенил или фенил, необязательно замещенный галогеном, С1-6алкилом, С1-6 алкилокси, полигалогенС1-6алкилом или арилом;
    К2 представляет собой СН2-К5 или -С(=О)-К6 7 8 9 10, каждый К5 независимо выбран из водорода, гидрокси, С1-6алкилокси, С1-6алкилоксиС1-6алкилокси, С1-6алкилкарбонилокси, Ν-метилпиперазинила, морфолинила или имидазолила; каждый К6 независимо выбран из С1-6алкиламино, С1-6циклоалкиламино, гидроксиС1-6 алкиламино, ди(С1-6алкил)аминоС1-6алкиламино или морфолинила;
    К3 представляет собой водород и
    К4 представляет собой водород или С1-6алкил, вышеуказанный арил представляет собой фенил.
  2. 2. Соединение по п.1, где каждый X представляет собой Ν.
  3. 3. Соединение по пп.1 и 2, где каждый X представляет собой Ν, К1 представляет собой фенил или фенил, замещенный галогеном; К2 представляет собой -СН2-К5; каждый К5 независимо выбран из водорода, гидрокси, С1-6алкилокси или С1-6алкилкарбонилокси; К3 представляет собой водород и К4 представляет собой водород.
  4. 4. Соединение по пп.1-3, где указанное соединение представляет собой соединение № 1, соединение № 8, соединение № 11, соединение № 9, соединение № 33, соединение № 34, соединение № 7 или соеди нение № 25.
    ΌΗ ^ОН Ηο'Νγ^Ν Соединение № 1 Соединение № 8 Γ'Α'^ι н 1 л н Ч/ - О А Соединение № Ц Соединение № 9 ΌΗ „ >γθ «а, Η<Αγ^Ν 0 Соединение № 33; .НС1; энантиомер д Соединение № 34; .НС); энантиомер В У<НХ - \>н Соединение № 7; .С2НР3О2; (Е) Соединение № 25;энантиомер д
  5. 5. Фармацевтическая композиция, содержащая фармацевтически приемлемые носители и в качестве активного ингредиента терапевтически эффективное количество соединения по пп.1-4.
  6. 6. Способ получения фармацевтической композиции по п.5, в котором фармацевтически приемлемые носители и соединение по пп.1 -4 тщательно смешивают.
  7. 7. Применение соединения по любому из пп.1-4 в качестве лекарственного средства.
  8. 8. Применение соединения по любому из пп.1-4 для производства лекарственного средства для лечения пролиферативных заболеваний.
  9. 9. Комбинация противоракового средства и ингибитора НОАС по любому из пп.1-4.
  10. 10. Способ получения соединения по п.1, отличающийся взаимодействием промежуточного соединения формулы (II) с соответствующей кислотой с образованием гидроксамовой кислоты формулы (I)
    - 37 011932
  11. 11. Соединение формулы (V) его Ν-оксидные формы, его фармацевтически приемлемые кислотно-аддитивные соли и стереохимически изомерные формы, где каждый X независимо представляет собой Ν или СН;
    Я1 представляет собой фенил или фенил, необязательно замещенный галогеном, С1-6алкилом, С1-6 алкилокси, полигалогенС1-6алкилом или арилом;
    Я2 представляет собой СН2-Я5 или -С(=О)-Я6, каждый Я5 независимо выбран из водорода, гидрокси, С1-6алкилокси, С1-6алкилоксиС1-6алкилокси, С1-6алкилкарбонилокси, Ν-метилпиперазинила, морфолинила или имидазолила; каждый Я6 независимо выбран из С1-6алкиламино, С1-6циклоалкиламино, гидроксиС1-6 алкиламино, ди(С1-6алкил)аминоС1-6алкиламино или морфолинила;
    Я3 представляет собой водород и
    Я4 представляет собой водород или С1-6алкил, вышеуказанный арил представляет собой фенил.
  12. 12. Способ получения соединения по п.11, отличающийся тем, что включает превращение соединений формулы (V), где Я2 представляет собой -СН2ОН и Я4 представляет собой водород, называемых здесь соединениями формулы ^-а), в соединения формулы (V), где Я2 представляет собой заместитель, отличающийся от -СН2ОН, называемых здесь соединениями формулы (Υ-Ь), по реакциям, известным в данной области техники, или путем трансформаций функциональных групп
  13. 13. Способ получения соединения по п.11, отличающийся тем, что включает получение соединений формулы ^-а) в одну стадию взаимодействием промежуточного соединения формулы (VI) с 1,4диоксан-2,5-диолом и соответствующей бороновой кислотой формулы (VII), где Я1 такой, как определено выше, или
  14. 14. Способ получения соединения по п.11, отличающийся тем, что включает получение соединений формулы (Υ-Ь) взаимодействием промежуточного соединения (VI) с соответствующим кетоном формулы (VIII), где Я1 и Я2 такие, как определено выше
    - 38 011932
  15. 15. Способ получения соединения по п.11, отличающийся тем, что включает получение соединений формулы (V), где К2 представляет собой -СООН, называемых здесь соединениями формулы (У-с), в одну стадию взаимодействием промежуточного соединения формулы (VI) с 2-оксопропановой кислотой и соответствующей бороновой кислотой формулы (VII), где К1 такой, как определено выше, в подходящем растворителе и дальнейшим превращением в промежуточные соединения формулы (V), где К2 представляет собой -С(=О)-К6, по реакциям, известным в данной области техники, или путем трансформаций функциональных групп.
EA200700143A 2004-07-28 2005-07-25 Производные замещенного пропенилпиперазина в качестве новых ингибиторов гистондеацетилазы EA011932B1 (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP04077171 2004-07-28
US59235704P 2004-07-29 2004-07-29
PCT/EP2005/053611 WO2006010749A2 (en) 2004-07-28 2005-07-25 Substituted propenyl piperazine derivatives as novel inhibitors of histone deacetylase

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA200700143A1 EA200700143A1 (ru) 2007-06-29
EA011932B1 true EA011932B1 (ru) 2009-06-30

Family

ID=39294123

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA200700143A EA011932B1 (ru) 2004-07-28 2005-07-25 Производные замещенного пропенилпиперазина в качестве новых ингибиторов гистондеацетилазы

Country Status (26)

Country Link
EP (1) EP1776358B1 (ru)
JP (1) JP5279268B2 (ru)
KR (1) KR101282833B1 (ru)
CN (1) CN1993356B (ru)
AR (1) AR050189A1 (ru)
AT (1) ATE432274T1 (ru)
AU (1) AU2005266311B2 (ru)
BR (1) BRPI0513891B8 (ru)
CA (1) CA2572971C (ru)
CY (1) CY1110358T1 (ru)
DE (1) DE602005014646D1 (ru)
DK (1) DK1776358T3 (ru)
EA (1) EA011932B1 (ru)
ES (1) ES2327253T3 (ru)
HK (1) HK1106236A1 (ru)
HR (1) HRP20090439T1 (ru)
IL (1) IL180961A0 (ru)
MX (1) MX2007001119A (ru)
MY (1) MY142831A (ru)
NO (1) NO20071117L (ru)
NZ (1) NZ552758A (ru)
PL (1) PL1776358T3 (ru)
PT (1) PT1776358E (ru)
SI (1) SI1776358T1 (ru)
TW (1) TWI394752B (ru)
WO (1) WO2006010749A2 (ru)

Families Citing this family (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MXPA04007776A (es) 2002-03-13 2004-10-15 Janssen Pharmaceutica Nv Derivados de sulfonilamino como nuevos inhibidores de histona deacetilasa.
BR0307606A (pt) 2002-03-13 2004-12-21 Janssen Pharmaceutica Nv Derivados de piperazinila, piperidinila e morfolinila como inibidores de histona desacetilase
EA007272B1 (ru) 2002-03-13 2006-08-25 Янссен Фармацевтика Н. В. Новые ингибиторы гистондеацетилазы
SG156687A1 (en) 2004-07-28 2009-11-26 Janssen Pharmaceutica Nv Substituted indolyl alkyl amino derivatives as novel inhibitors of histone deacetylase
EP1885710B1 (en) 2005-05-18 2015-08-19 Janssen Pharmaceutica N.V. Substituted aminopropenyl piperidine or morpholine derivatives as novel inhibitors of histone deacetylase
WO2007049262A1 (en) * 2005-10-27 2007-05-03 Berand Limited Methods and compositions for the promotion of neuronal growth and the treatment of asociality and affective disorders
JP5225104B2 (ja) 2006-01-19 2013-07-03 ジヤンセン・フアーマシユーチカ・ナームローゼ・フエンノートシヤツプ 新しい、ヒストンデアセチラーゼのインヒビターとしてのアミノフェニル誘導体
CN101370803B (zh) 2006-01-19 2012-12-12 詹森药业有限公司 作为组蛋白脱乙酰酶抑制剂的取代的吲哚基-烷基-氨基衍生物
US8101616B2 (en) 2006-01-19 2012-01-24 Janssen Pharmaceutica N.V. Pyridine and pyrimidine derivatives as inhibitors of histone deacetylase
JP5247470B2 (ja) * 2006-01-19 2013-07-24 ジヤンセン・フアーマシユーチカ・ナームローゼ・フエンノートシヤツプ ヒストンデアセチラーゼのインヒビターとしてのピリジン及びピリミジン誘導体
EP1839656A1 (en) * 2006-03-31 2007-10-03 TopoTarget Germany AG Use of valproic acid for the topical treatment of mild to moderate acne vulgaris
KR20100095430A (ko) * 2007-11-02 2010-08-30 메틸진 인크. 히스톤 탈아세틸화효소의 저해물질
CN101723896B (zh) * 2009-11-03 2012-10-31 山东大学 酪氨酸衍生物类组蛋白去乙酰化酶抑制剂及其应用
WO2012117421A1 (en) 2011-03-02 2012-09-07 Orchid Research Laboratories Ltd Histone deacetylase inhibitors
KR101419836B1 (ko) * 2012-05-10 2014-07-16 서울대학교산학협력단 Δ5-2-옥소피페라진 유도체를 포함하는 중간엽 줄기세포의 연골세포로의 분화 유도용 조성물
KR101586045B1 (ko) 2013-07-30 2016-01-15 충북대학교 산학협력단 신규 페닐티아졸 기반 히드록삼산 및 이를 유효성분으로 포함하는 항암용 조성물
KR102132078B1 (ko) 2018-09-20 2020-07-08 원광대학교산학협력단 방향족 화합물, 아민 및 친핵체를 이용한 3가지 성분 반응으로 1-에틸-4-페닐피페라진 유도체를 제조하는 방법
KR20230155311A (ko) 2022-05-03 2023-11-10 충북대학교 산학협력단 신규한 n-히드록시프로펜아미드 화합물 및 이를 유효성분으로 포함하는 암 예방 또는 치료용 약학적 조성물
KR20230155310A (ko) 2022-05-03 2023-11-10 충북대학교 산학협력단 신규한 n-히드록시프로펜아미드 화합물 및 이를 유효성분으로 포함하는 암 예방 또는 치료용 약학적 조성물

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4455422A (en) * 1980-03-06 1984-06-19 Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd. Carbostyril derivatives and pharmaceutical composition containing the same
WO2003075929A1 (en) * 2002-03-13 2003-09-18 Janssen Pharmaceutica N.V. Inhibitors of histone deacetylase
WO2003076438A1 (en) * 2002-03-13 2003-09-18 Janssen Pharmaceutica N.V. Piperazinyl-, piperidinyl- and morpholinyl-derivatives as novel inhibitors of histone deacetylase
WO2003082288A1 (en) * 2002-04-03 2003-10-09 Topotarget Uk Limited Carbamic acid compounds comprising a piperazine linkage as hdac inhibitors

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4455422A (en) * 1980-03-06 1984-06-19 Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd. Carbostyril derivatives and pharmaceutical composition containing the same
WO2003075929A1 (en) * 2002-03-13 2003-09-18 Janssen Pharmaceutica N.V. Inhibitors of histone deacetylase
WO2003076438A1 (en) * 2002-03-13 2003-09-18 Janssen Pharmaceutica N.V. Piperazinyl-, piperidinyl- and morpholinyl-derivatives as novel inhibitors of histone deacetylase
WO2003082288A1 (en) * 2002-04-03 2003-10-09 Topotarget Uk Limited Carbamic acid compounds comprising a piperazine linkage as hdac inhibitors

Also Published As

Publication number Publication date
KR101282833B1 (ko) 2013-07-08
KR20070043978A (ko) 2007-04-26
HRP20090439T1 (hr) 2009-09-30
BRPI0513891B1 (pt) 2020-09-29
MY142831A (en) 2011-01-14
JP2008508234A (ja) 2008-03-21
TWI394752B (zh) 2013-05-01
BRPI0513891B8 (pt) 2021-05-25
EP1776358A2 (en) 2007-04-25
JP5279268B2 (ja) 2013-09-04
NZ552758A (en) 2009-08-28
WO2006010749A3 (en) 2006-06-08
DE602005014646D1 (de) 2009-07-09
ES2327253T3 (es) 2009-10-27
AR050189A1 (es) 2006-10-04
AU2005266311A1 (en) 2006-02-02
AU2005266311B2 (en) 2011-08-11
MX2007001119A (es) 2007-03-15
CN1993356A (zh) 2007-07-04
TW200616998A (en) 2006-06-01
WO2006010749A2 (en) 2006-02-02
IL180961A0 (en) 2007-07-04
PL1776358T3 (pl) 2009-10-30
SI1776358T1 (sl) 2009-10-31
CN1993356B (zh) 2010-10-27
BRPI0513891A (pt) 2008-05-20
HK1106236A1 (en) 2008-03-07
NO20071117L (no) 2007-02-27
CA2572971C (en) 2013-01-15
DK1776358T3 (da) 2009-09-07
EA200700143A1 (ru) 2007-06-29
CA2572971A1 (en) 2006-02-02
EP1776358B1 (en) 2009-05-27
PT1776358E (pt) 2009-08-13
CY1110358T1 (el) 2015-04-29
ATE432274T1 (de) 2009-06-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA011932B1 (ru) Производные замещенного пропенилпиперазина в качестве новых ингибиторов гистондеацетилазы
JP5261192B2 (ja) ヒストンデアセチラーゼのインヒビターとしてのピリジン及びピリミジン誘導体
JP4948403B2 (ja) ヒストン・デアセチラーゼの新インヒビターとしての置換インドリルアルキルアミノ誘導体
JP5137849B2 (ja) ヒストンデアセチラーゼのインヒビターとしての置換インドリル−アルキル−アミノ−誘導体
JP5225104B2 (ja) 新しい、ヒストンデアセチラーゼのインヒビターとしてのアミノフェニル誘導体
JP5137848B2 (ja) ヒストンデアセチラーゼのインヒビターとしてのピリジン及びピリミジン誘導体
JP5225103B2 (ja) ヒストン・デアセチラーゼの新規なインヒビターとしてのヘテロシクリルアルキル誘導体
JP5247470B2 (ja) ヒストンデアセチラーゼのインヒビターとしてのピリジン及びピリミジン誘導体
JP5047168B2 (ja) ヒストン・デアセチラーゼの新インヒビターとしてのイミダゾリノン及びヒダントイン誘導体
JP5055268B2 (ja) ヒストンデアセチラーゼの新規な阻害剤としての置換されたアミノプロペニルピペリジンまたはモルホリン誘導体
EA007908B1 (ru) Карбониламинопроизводные как новые ингибиторы гистондеацетилазы
EA008245B1 (ru) Ингибиторы гистондеацетилазы
EA006707B1 (ru) Сульфонилпроизводные в качестве новых ингибиторов гистон-деацетилазы
EA007099B1 (ru) Сульфонилпроизводные в качестве ингибиторов гистон-деацетилазы
EA007270B1 (ru) Пиперазинил-, пиперидинил- и морфолинилпроизводные как новые ингибиторы гистондеацетилазы
EP2598508B1 (en) Isoxazolo-quinazolines as modulators of protein kinase activity
JP5564033B2 (ja) ヒストンデアセチラーゼの新規インヒビターとしてのアザ−ビシクロヘキシル置換インドリルアルキルアミノ誘導体