EA007426B1 - Фармацевтически приемлемые тельца, несущие фосфат глицерина - Google Patents

Фармацевтически приемлемые тельца, несущие фосфат глицерина Download PDF

Info

Publication number
EA007426B1
EA007426B1 EA200400888A EA200400888A EA007426B1 EA 007426 B1 EA007426 B1 EA 007426B1 EA 200400888 A EA200400888 A EA 200400888A EA 200400888 A EA200400888 A EA 200400888A EA 007426 B1 EA007426 B1 EA 007426B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
liposomes
groups
bodies
phosphoglyceride
disorder
Prior art date
Application number
EA200400888A
Other languages
English (en)
Other versions
EA200400888A1 (ru
Inventor
Энтони Болтон
Аркадий Мэндел
Original Assignee
Васоджен Аеленд Лимитед
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Васоджен Аеленд Лимитед filed Critical Васоджен Аеленд Лимитед
Publication of EA200400888A1 publication Critical patent/EA200400888A1/ru
Publication of EA007426B1 publication Critical patent/EA007426B1/ru

Links

Classifications

    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B82—NANOTECHNOLOGY
    • B82Y—SPECIFIC USES OR APPLICATIONS OF NANOSTRUCTURES; MEASUREMENT OR ANALYSIS OF NANOSTRUCTURES; MANUFACTURE OR TREATMENT OF NANOSTRUCTURES
    • B82Y5/00—Nanobiotechnology or nanomedicine, e.g. protein engineering or drug delivery
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C01—INORGANIC CHEMISTRY
    • C01G—COMPOUNDS CONTAINING METALS NOT COVERED BY SUBCLASSES C01D OR C01F
    • C01G19/00—Compounds of tin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/66—Phosphorus compounds
    • A61K31/683—Diesters of a phosphorus acid with two hydroxy compounds, e.g. phosphatidylinositols
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/66—Phosphorus compounds
    • A61K31/683—Diesters of a phosphorus acid with two hydroxy compounds, e.g. phosphatidylinositols
    • A61K31/685—Diesters of a phosphorus acid with two hydroxy compounds, e.g. phosphatidylinositols one of the hydroxy compounds having nitrogen atoms, e.g. phosphatidylserine, lecithin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
    • A61K47/6905—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a colloid or an emulsion
    • A61K47/6911—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a colloid or an emulsion the form being a liposome
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Liposomes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A61P21/04—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system for myasthenia gravis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/02—Drugs for disorders of the nervous system for peripheral neuropathies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/06—Antimigraine agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/24—Antidepressants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P39/00—General protective or antinoxious agents
    • A61P39/02—Antidotes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/04—Inotropic agents, i.e. stimulants of cardiac contraction; Drugs for heart failure
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/06—Antiarrhythmics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/12—Antihypertensives
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B82—NANOTECHNOLOGY
    • B82B—NANOSTRUCTURES FORMED BY MANIPULATION OF INDIVIDUAL ATOMS, MOLECULES, OR LIMITED COLLECTIONS OF ATOMS OR MOLECULES AS DISCRETE UNITS; MANUFACTURE OR TREATMENT THEREOF
    • B82B3/00—Manufacture or treatment of nanostructures by manipulation of individual atoms or molecules, or limited collections of atoms or molecules as discrete units
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C01—INORGANIC CHEMISTRY
    • C01G—COMPOUNDS CONTAINING METALS NOT COVERED BY SUBCLASSES C01D OR C01F
    • C01G15/00—Compounds of gallium, indium or thallium
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
    • C09D—COATING COMPOSITIONS, e.g. PAINTS, VARNISHES OR LACQUERS; FILLING PASTES; CHEMICAL PAINT OR INK REMOVERS; INKS; CORRECTING FLUIDS; WOODSTAINS; PASTES OR SOLIDS FOR COLOURING OR PRINTING; USE OF MATERIALS THEREFOR
    • C09D5/00—Coating compositions, e.g. paints, varnishes or lacquers, characterised by their physical nature or the effects produced; Filling pastes
    • C09D5/24—Electrically-conducting paints

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Nanotechnology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Psychology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Hematology (AREA)

Abstract

Настоящее изобретение относится к трёхмерным синтетическим и полусинтетическим композициям, обладающим биологической активностью, и к их применениям для лечения и/или профилактики различных нарушений у пациентов-млекопитающих. Более конкретно оно относится к приготовлению и применению синтетических и полусинтетических телец, таких как липосомы, которые после введения в организм пациента дают полезные противовоспалительные, органозащищающие и иммунорегуляторные эффекты. Изобретение относится также к лечению и композициям для облегчения воспалительных и аутоиммунных заболеваний и их симптомов.

Description

Настоящее изобретение относится к трёхмерным синтетическим и полусинтетическим композициям, имеющим биологическую активность, и к их применениям для лечения и/или профилактики различных расстройств у пациентов-млекопитающих. Более конкретно оно относится к способам приготовления и применения синтетических и полусинтетических телец, которые после введения в организм пациента вызывают полезные противовоспалительные, органо-защищающие и иммуно-регуляторные эффекты. Изобретение относится также к способам лечения и к композициям для облегчения воспалительных и аутоиммунных заболеваний и симптомов.
Предшествующий уровень техники
Специализированные антиген-предъявляющие клетки (АПК), в том числе дендритные клетки (ДК) и макрофаги (МФ), активно захватывают и обрабатывают антигены (Аг), разрушают обломки клеток и удаляют инфекционные организмы и погибшие клетки, в том числе остатки погибших клеток. В ходе этого процесса АПК могут стимулировать продукцию либо провоспалительных цитокинов воспалительного пути ТЫ (1Б-12, 1Ь-1, ΙΡΝ-γ, ΤΝΡ-α и т.д.) либо регуляторных цитокинов пути Т112/Т113 (таких как ΙΚ-10, ΤΟΡ-β, 1Ь-4 и т.д.), причём доминирующий ответ зависит от природы антигена (Аг) или подвергающегося фагоцитозу материала и от уровня созревания/активации АПК.
АПК удаляют обломки клеток, некоторые из которых являются обрывками клеточных мембран организма, некоторые ведут происхождение от бактериальных и паразитных инфицирующих и от сосуществующих организмов, таких как бактерии кишечника. Некоторые из этих обломков клеток инициируют провоспалительную реакцию (ответ), а некоторые инициируют защитную и противовоспалительную реакцию.
Нормально функционирующая иммунная система способна отличать антигены чужеродных внедрившихся организмов («чужие») от тканей и обломков, происходящих от собственных («своих»), мобилизуя иммунный ответ только против чужеродных антигенов. Если иммунная система пациента утрачивает способность отличать «своего» от «чужого», возникают аутоиммунные расстройства.
Сущность изобретения
Настоящее изобретение основано на открытии того, что фармацевтически приемлемые тельца, такие как липосомы, гранулы или подобные частицы, содержащие фосфоглицеридные группы, при введении пациенту-млекопитающему будут обладать противовоспалительным действием и вследствие этого могут быть использованы для лечения многих заболеваний. Эти тельца могут дополнительно содержать в качестве минорного компонента неактивную составную часть и/или составную часть, активность которой осуществляется по другому механизму.
В предпочтительном варианте осуществления изобретение направлено на имеющую отношение к данной проблеме композицию, способную вызывать у млекопитающего противовоспалительный ответ ίη νίνο, причём указанная композиция содержит фармацевтически приемлемые тельца размером от приблизительно 20 нанометров (нм) до 500 микрометров (мкм), несущие множество фосфоглицеридных групп или групп, которые могут быть превращены в такие группы. Предпочтительно, чтобы тельца были, по существу, свободны от нелипидных фармацевтически активных компонентов. Предпочтительно, чтобы фосфоглицеридные группы составляли 60-100% активных групп телец. Полагают, что после введения млекопитающему тельца взаимодействуют с иммунной системой при посредстве фосфоглицеридных групп. В результате такое введение вызывает противовоспалительную реакцию.
В другом варианте осуществления данное изобретение направлено на трёхмерные синтетические или полусинтетические тельца, иначе называемые здесь фармацевтически приемлемыми тельцами, имеющие размер в интервале от 20 нм до 500 мкм и модифицированные таким образом, чтобы они содержали в качестве основного компонента по меньшей мере один вызывающий противовоспалительную реакцию лиганд, причём указанный лиганд имеет фосфоглицеридные группы.
Ещё в одном примере осуществления данное изобретение направлено на трёхмерные синтетические или полусинтетические тельца, иначе называемые здесь фармацевтически приемлемыми тельцами, имеющие размер в интервале от 20 нм до 500 мкм и имеющие фосфоглицеридные группы на их поверхности.
В другом примере осуществления данное изобретение направлено на способ лечения опосредованного функцией Т-клеток расстройства, включающий введение пациенту-млекопитающему эффективного количества фармацевтически приемлемых телец, несущих эффективное число фосфоглицеридных групп, чтобы ингибировать и/или уменьшить развитие опосредованного функцией Т-клеток расстройства.
Далее изобретение направлено на способ лечения воспалительного расстройства, включающий введение пациенту эффективного количества фармацевтически приемлемых телец, несущих эффективное число фосфоглицеридных групп, чтобы ингибировать и/или уменьшить развитие воспалительного расстройства.
Ещё одна форма осуществления настоящего изобретения представляет собой способ лечения расстройства функции эндотелия, включающий введение пациенту-млекопитающему эффективного количе
- 1 007426 ства фармацевтически приемлемых телец, несущих эффективное число фосфоглицеридных групп, чтобы ингибировать и/или уменьшить развитие расстройства функции эндотелия.
Другая форма осуществления представляет собой способ лечения иммунного расстройства, характеризуемого неадекватной экспрессией цитокинов, включающий введение пациенту-млекопитающему эффективного количества фармацевтически приемлемых телец, несущих эффективное число фосфоглицеридных групп, чтобы ингибировать и/или уменьшить развитие иммунного расстройства.
Далее настоящее изобретение направлено на способ лечения или профилактики сердечного расстройства у млекопитающих, наличие которого или предрасположенность к которому определяются по наличию на электрокардиограмме пациента пролонгированного интервала ОТ-е. причём этот способ включает введение пациенту-млекопитающему, страдающему от такого сердечного расстройства или предрасположенного к нему, фармацевтической композиции, содержащей фармацевтически приемлемые биосовместимые синтетические или полусинтетические тельца, иначе называемые здесь фармацевтически приемлемыми тельцами, и фармацевтически приемлемый носитель, при этом, по меньшей мере, часть указанных телец имеет размер от приблизительно 20 нм до 500 мкм, а поверхности указанных телец модифицированы так, чтобы они несли в качестве основного компонента по меньшей мере одну обладающую противовоспалительным действием группу, причём указанной группой является фосфоглицеридная группа.
Другим вариантом осуществления изобретения является фармацевтическая композиция, в форме разовых доз, для введения пациенту-млекопитающему, содержащая фармацевтически приемлемые тельца и фармацевтически приемлемый носитель, причём, по меньшей мере, часть указанных телец имеет размер от приблизительно 20 нм до 500 мкм, а поверхности указанных телец содержат фосфоглицеридные группы или группы, которые можно преобразовать в фосфоглицеридные группы, и при этом указанная разовая доза содержит от приблизительно 500 до приблизительно 2,5х109 телец.
Еще один вариант осуществления настоящего изобретения - это фармацевтическая композиция, содержащая фармацевтически приемлемые биосовместимые синтетические или полусинтетические тельца (иначе называемые здесь фармацевтически приемлемыми тельцами) и фармацевтически приемлемый носитель, причём, по меньшей мере, часть указанных телец имеет размер от приблизительно 20 нм до 500 мкм, а поверхности указанных телец модифицированы так, чтобы они несли в качестве основного компонента по меньшей мере одну обладающую противовоспалительным действием группу, и при этом указанной группой является фосфоглицеридная группа.
Ещё одна форма осуществления настоящего изобретения - это фармацевтическая композиция, содержащая фармацевтически приемлемые биосовместимые синтетические или полусинтетические тельца (иначе называемые здесь фармацевтически приемлемыми тельцами) и фармацевтически приемлемый носитель, причём, по меньшей мере, часть указанных телец имеет размер от приблизительно 20 нм до 500 мкм и содержит кардиолипин.
По усмотрению, описанные выше тельца могут дополнительно содержать в качестве составной части неактивные поверхностные группы и/или являющиеся составной частью поверхностные группы, проявляющие активность по другому механизму, например, фосфатидилсерин. (См., например, Еабок и др. Международная публикация \УО 01/66785).
В другом варианте осуществления настоящее изобретение направлено на лиофилизованные или высушенные в замороженном состоянии фармацевтически приемлемые тельца, несущие фосфоглицеридные группы или группы, которые можно превратить в фосфоглицеридные группы, и комплекты, содержащие лиофилизованные или высушенные в замороженном состоянии фармацевтически приемлемые тельца, несущие фосфоглицеридные группы или группы, которые можно превратить в фосфоглицеридные группы, и фармацевтически приемлемый носитель.
В другом аспекте данное изобретение направлено на способ лечения опосредованного функцией Т-клеток расстройства, включающий введение пациенту-млекопитающему, страдающему опосредованным функцией Т-клеток расстройством или подверженному риску иметь такое расстройство, эффективного количества композиции, содержащей фармацевтически приемлемые тельца, имеющие размер от приблизительно 20 нм до приблизительно 500 мкм, содержащие на своей поверхности множество фосфоглицеридных групп или групп, которые можно превратить в фосфоглицеридные группы, так что в результате введения развитие опосредованного функцией Т-клеток расстройства ингибируется и/или ослабляется.
Ещё один вариант осуществления настоящего изобретения направлен на способ лечения расстройства функции эндотелия, включающий введение пациенту-млекопитающему, страдающему расстройством функции эндотелия или подверженному риску иметь такое расстройство, эффективного количества композиции, содержащей фармацевтически приемлемые тельца, имеющие размер от приблизительно 20 нм до приблизительно 500 мкм, содержащие на своей поверхности множество фосфоглицеридных групп или групп, которые можно превратить в фосфоглицеридные группы, так что в результате введения развитие расстройства функции эндотелия ингибируется и/или ослабляется.
Другой вариант осуществления настоящего изобретения направлен на способ лечения иммунного расстройства у пациента-млекопитающего, страдающего иммунным расстройством или подверженного
- 2 007426 риску иметь такое расстройство, включающий введение такому пациенту-млекопитающему эффективного количества композиции, содержащей фармацевтически приемлемые тельца, имеющие размер от приблизительно 20 нм до приблизительно 500 мкм, содержащие на своей поверхности множество фосфоглицеридных групп или групп, которые можно превратить в фосфоглицеридные группы, так что в результате введения развитие иммунного расстройства ингибируется и/или ослабляется.
Настоящее изобретение может быть также рассмотрено в ином аспекте, как использование рецепторов на клетках иммунной системы млекопитающих-например, макрофагах, которые специфически связываются с фосфоглицеридными группами. Изобретение охватывает тельца, содержащие лиганды и группы, которые будут связываться с такими рецепторами и, как следствие, вызывать противовоспалительную реакцию. Поэтому настоящее изобретение может быть определено как тельца, содержащие лиганды или их активные группы, которые конкурируют за связывание или захват экспрессирующих фосфоглицериды телец, как описано здесь для антиген-предъявляющих клеток. Специалист в данной области легко может определить, является ли конкретное тельце таким, которое будет так конкурировать, с помощью простых проверочных опытов. Например, тельца можно испытать с помощью легко доступной линии моноцитных клеток, таких как клетки И937. В первом эксперименте клетки И937 инкубируют только с флуоресцентно мечеными фосфоглицеридными липосомами, а в других экспериментах клетки И937 инкубируют в присутствии и флуоресцентно меченых фосфоглицеридных липосом, и различных количеств испытываемого соединения. Если связывание флуоресцентно меченых липосом в этих других экспериментах снижается по сравнению со связыванием в первом эксперименте, то испытываемое соединение является конкурирующим за специфический рецептор и является соединением, попадающим в объем настоящего изобретения.
Краткое описание графических материалов
Фиг. 1 даёт представление в виде гистограммы результатов приведённых ниже в примере 1 опытов по контактной гиперчувствительности у мышей (КГЧ, модель с опосредованным Т-клетками острым воспалением) с применением липосом в соответствии с предпочтительным осуществлением изобретения, в сравнении с другими липосомами и контролями.
Фиг. 2 даёт подобное графическое представление, показывающее применение липосом с различным содержанием фосфатидил-глицерина (ФГ) в мышиной модели КГЧ; в приведённом ниже примере 2.
Фиг. 3 даёт подобное графическое представление результатов приведённого ниже примера 3, где в мышиной модели КГЧ были применены различные концентрации липосом с 75% ФГ.
Фиг. 4 даёт подобное графическое представление результатов приведённого ниже примера 4, где в мышиной модели КГЧ были применены различные концентрации липосом с 100% ФГ.
Фиг. 5 даёт подобное графическое представление результатов приведённого ниже примера 5, где в мышиной модели КГЧ были применены липосомы различного размера.
Фиг. 6 даёт подобное графическое представление результатов приведённого ниже примера 6, где была применена мышиная модель аллергической реакции замедленного типа (АРЗТ, модель опосредованного Т-клетками хронического воспаления).
Фиг. 7 даёт подобное графическое представление результатов приведённого ниже примера 7, где в мышиной модели АРЗТ были применены кардиолипиновые липосомы.
Фиг. 8 даёт подобное графическое представление результатов приведённого ниже примера 8, где кардиолипиновые липосомы были применены в мышиной модели КГЧ.
Фиг. 9 показывает изменение (в процентах) наклона возбуждаемого постсинаптического потенциала у контрольных и обработанных мышей, что указывает на эффект длительной потенциации (ДП) (пример 9).
На фиг. 10 данные, приведённые на фиг. 9 (приведённый ниже пример 9), представлены в формате гистограммы.
Фиг. 11 показывает различия в концентрации антивоспалительного цитокина 1Ь-4 в гиппокампе контрольных и опытных мышей (приведённый ниже пример 10).
Фиг. 12 показывает различия в концентрации провоспалительного цитокина ΙΕ-1β в суспензиях одиночных клеток селезёнки контрольных и опытных мышей (приведённый ниже пример 11).
Фиг. 13 показывает различия в концентрации ΤΝΡ-α в линии моноцитных клеток И937, обработанных различными концентрациями липосом с 75% ФГ (приведённый ниже пример 12).
Фиг. 14 даёт графическое представление результатов приведённого ниже примера 13, где исследовали, в сравнении с контролем, содержание эндотелина-1 в ушах мышей, подвергнутых лечению в соответствии с предпочтительным осуществлением настоящего изобретения.
Фиг. 15 даёт графическое представление результатов приведённого ниже примера 14, где определяли число позитивных по молекулам-1 межклеточной адгезии (1САМ-1) клеток культур НИУЕС (клетки эндотелия пупочной вены человека) в присутствии и отсутствии композиций предпочтительного осуществления изобретения.
- 3 007426
Сведения, подтверждающие вожможность осуществления изобретения
Согласно настоящему изобретению, пациентам вводят фармацевтически приемлемые тельца, несущие на своей поверхности фосфоглицеридные группы. Не будучи связаны с какой-либо одной теорией, полагают, что эти тельца взаимодействуют с иммунной системой пациента, что сопровождается полезными эффектами, такими как ингибирование провоспалительных цитокинов ίη νίνο и/или стимуляция противовоспалительных цитокинов. Реагирующими клетками могут быть клетки иммунной системы, такие как специализированные или неспециализированные антиген-предъявляющие клетки, клетки эндотелия, регуляторные клетки, такие как ΝΚ-Τ-клетки - натуральные киллеры и другие.
Эти фармацевтически приемлемые тельца включают синтетические и полусинтетические тельца, имеющие обычно (но не исключительно) сфероидную, (в том числе сплющенную и вытянутую сфероидную), цилиндрическую, эллипсоидную, змеевидную, почковидную и прочую форму, и диаметр от приблизительно 20 нм до приблизительно 500 мкм, предпочтительно измеренный вдоль их длинной оси, и содержащие на своей поверхности фосфоглицеридные группы.
Фармацевтически приемлемые тельца имеют на своей внешней поверхности фосфоглицеридные группы с предварительно заданными характеристиками. Не будучи связаны с какой-либо одной теорией, полагают, что эти группы способны взаимодействовать ίη νίνο с соответствующим рецептором (рецепторами), иным, чем исключительно рецептор фосфатидил-серина (ФС), или с антиген-предъявляющими клетками. Структура этих групп может быть изменена синтетическим путём, и включает полностью или частично исходную фосфоглицеридную группу или её модифицированную версию. Например, отрицательно заряженный атом кислорода фосфатной группы в фосфоглицеридной группе может быть преобразован в фосфоэфирную группу (например, Г-ОР(О)(ОК')(ОК), где Ь - остаток фосфоглицеридной группы, К' - это -СН2СН(ОН)СН2ОН, а К - это алкил с 1-4 атомами углерода или гидроксизамещённый алкил с 2-4 атомами углерода и 1-3 гидроксильными группами, при условии, что группа К легче гидролизуется ίη νίνο, чем группа К'); в дифосфатную группу, включая дифосфатные эфиры (например, ЬОР(О)(ОК')ОР(О)(ОК)2, где Ь и К' - таковы, как они определены выше, а каждый К - это независимо атом водорода, алкил с 1-4 атомами углерода или гидроксизамещённый алкил с 2-4 атомами углерода и 1-3 гидроксильными группами, при условии, что вторая фосфатная группа [-Р(О)(ОК)2] легче гидролизуется ίη νίνο, чем группа К'); или в трифосфатную группу, в том числе трифосфатные эфиры (например, Ь-(ОР)(О)(ОК')ОР(О)(ОК)ОР(О)(ОК)2, где Ь и К' таковы, как определено выше, а каждый К - это независимо атом водорода, алкил с 1-4 атомами углерода или гидроксизамещённый алкил с 2-4 атомами углерода и 1-3 гидроксильными группами, при условии, что вторая и третья фосфатные группы легче гидролизуются ίη νίνο, чем группа К'); и в подобные этому. Такие синтетически модифицированные фосфоглицеридные группы способны ίη νίνο проявлять фосфоглицеридные свойства и, следовательно, такие модифицированные группы являются группами, превращаемыми в фосфоглицеридные группы.
Фосфатидилглицерин - это известное соединение. Оно может быть получено, например, обработкой природной димерной формы фосфатидилглицерина, кардиолипина, фосфолипазой Ό. Он может быть также получен ферментативным синтезом из фосфатидилхолина с помощью фосфолипазы Ό - см., например, патент США № 5188951, авторы ТгешЫау и др. По химической структуре он содержит фосфоглицеридную группу и две похожих, но различных цепи С18-С20 жирных кислот.
Подразумевается, что термин «ФГ», как он использован здесь, охватывает фосфолипиды, имеющие фосфоглицеридную группу и широкое разнообразие цепей жирной кислоты по меньшей мере одной цепи, при условии, что получаемая ФГ часть молекулы является структурным компонентом липосомы. Предпочтительно, такие ФГ соединения могут быть представлены формулой 1 к—со—о—сн2
К'—со—о—сн о сн2—О--Р—о—снрн(онхзнрн о
где К и К' независимо выбраны из С1-С24 углеводородных цепей (насыщенных или ненасыщенных, прямых цепей или содержащих ограниченное число разветвлений), причём по меньшей мере одна цепь имеет от 10 до 24 атомов углерода. Существенно, что липидные цепи К и К' образуют скорее не активный компонент, а структурный компонент липосом. Поэтому они могут варьироваться, включая две или одну из таких липидных цепей, одинаковых или различных, при условии, что они выполняют структурную функцию. Предпочтительно, липидные цепи могут быть длиной от приблизительно 10 до приблизительно 24 атомов углерода, насыщенными, мононенасыщенными или полиненасыщенными, линейными или с ограниченным числом разветвлений. Примерами пригодных насыщенных липидных цепей ФГ для применения в настоящем изобретении являются лаурат (С 12), миристат (С 14), пальмитат (С 16), стеарат
- 4 007426 (С18), арахидат (С20), бегенат (С22) и лигноцерат (С24). Примерами подходящих мононенасыщенных липидных цепей являются пальмитолеат (С16) и олеат (С18). Примерами подходящих полиненасыщенных липидных цепей для использования в ФГ в липосомах настоящего изобретения являются линолеат (С 18), линоленат (С 18) и арихидонат (С20). Фосфолипиды с такой одиночной липидной цепью, также пригодные для использования в настоящем изобретении, известны как лизофосфолипиды. Настоящее изобретение охватывает также использование липосом, в которых активным компонентом является димерная форма ФГ, а именно кардиолипин, но и другие димеры формулы 1 также пригодны. Предпочти тельно, такие димеры не сшиты синтетическим путём с помощью синтетического сшивающего агента такого, как малеимид, но скорее сшиты путём удаления глицериновой единицы, как описано Ьепшдег (Вюсйеш18£гу, 1970, Р. 525) (русский перевод: Ленинджер А. Биохимия. Под ред. А.А.Баева и Я.М. Варшавского. «Мир». М., 1974. с. 607-608) и изображено в приведённой ниже реакции
Р-----<
Р'-------1 о
II р--О--СН£Н(ОН)СН£Н
ФГ сн—о—со—р
Р'-сн о
I II сн2—о—Р—О-СН£Н(ОН)СНр· сн—о— со— Р' о
кардиолипин носнсн(он)снрн где К и К' независимо таковы, как они определены выше.
Как указывалось выше, и снова не ограничиваясь какой-либо одной теорией, полагают, что группа ФГ (и её димер) является лигандом, поскольку есть уверенность, что она связывается со специфическим участком в белке или другой молекуле («ФГ-рецептор») и поэтому эта молекула фосфатидилглицерина (и её димерная форма) иногда носит здесь название «лиганд» или «связывающаяся группа». Полагают, что такое связывание происходит через посредство фосфоглицеридной группы -О-Р(=О)(ОН)-О-СН2СН(ОН)-СН2-ОН, которая иногда носит здесь название «головная группа», «активная группа» или «связывающаяся группа». В свете вышесказанного, ссылка здесь на «связывание», «связывающуюся группу» или «лиганд» не подразумевает какого-либо механизма или способа действия. Тем не менее, полагают, что указанные выше фосфоглицеридные группы представлены на внешних поверхностях телец настоящего изобретения для взаимодействия с компонентами иммунной системы пациента. Следует отметить, что это взаимодействие отличается от специфического взаимодействия апоптозных клеток с фосфатидил-сериновым рецептором на антиген-предъявляющих клетках.
Примеры «фракций трёхмерных телец» или «фармацевтически приемлемых телец» включают биосовместимые синтетические или полусинтетические образования, такие как липосомы, твёрдые шарики («бусины»), полые бусины, заполненные бусины, частицы, гранулы и микросферы из биосовместимых материалов, природных или синтетических, которые обычно используются в фармацевтической промышленности. Бусины (шарики) могут быть твёрдыми или полыми, или могут быть заполнены биосовместимым материалом. Термин «биосовместимый» относится к веществам, которые в применённых количествах или нетоксичны, или имеют приемлемые параметры токсичности, так что их применение ίπ νίνο допустимо. Подобным же образом термин «фармацевтически приемлемый», применённый в отношении «фармацевтически приемлемых телец», относится к тельцам, включающим один или более материалов, которые фармацевтически приемлемы и пригодны для применения ίπ νίνο. Такие тельца могут включать липосомы, образованные липидами, одним из которых является ФГ. В качестве альтернативы, фармацевтически приемлемыми тельцами могут быть твёрдые бусины, полые бусины, заполненные бусины, частицы, гранулы и микросферы из биосовместимых материалов, которые могут представлять собой один или же один или более биосовместимых материалов, таких как полиэтиленгликоль, поли(метилметакрилат), поливинилпирролидон, полистирол и широкий круг других природных, полусинтетических и синтетических материалов, с присоединёнными к ним фосфоглицеридными группами.
- 5 007426
Как указано выше, предполагается, что термином «фосфатидилглицерин» охватываются аналоги фосфатидилглицерина с модифицированными активными группами, которые также взаимодействуют с ФГ -рецепторами на антиген-предъявляющих клетках, по тем же самым рецепторным путям, что и ФГ, или иным образом вызывают противовоспалительную реакцию. Они включают (без ограничения приведённым) соединения, в которых одна или более гидроксильных групп и/или фосфатная группа модифицированы (дериватизированы), или соединения в форме соли. Многие из таких соединений образуют ίη νίνο (либо в процессе введения, либо после введения) свободные гидроксильные группы и поэтому представляют собой способные к преобразованию ФГ группы.
Относящимися к данному вопросу предпочтительными композициями являются липосомы, которые могут иметь в составе различные липиды. Однако предпочтительно, чтобы никакие из липидов не были положительно заряжены. В случае липосом фосфатидилглицерин ФГ может составлять основную часть слоя (слоев) или стенки (стенок) липосом или их полностью, и ориентироваться таким образом, чтобы его часть с фосфоглицеридными группами была направлена наружу, для действия в качестве связывающейся группы, а липидная цепь или липидные цепи образовывали бы структуру стенки.
Липосомы, или липидные пузырьки, представляют собой закупоренные мешочки микронного или субмикронного размера, стенки которых (монослойные или многослойные) содержат подходящие амфипатические соединения. В норме они содержат водную среду, хотя для настоящего изобретения внутреннее содержание не имеет значения, и обычно неактивны. Поэтому в предпочтительном варианте осуществления липосомы, а также другие фармацевтически приемлемые тельца, в основном не содержат нелипидных фармацевтически активных частей (например, их меньше 1%), а более предпочтительно не содержат нелипидных фармацевтически активных частей. Такие липосомы готовят и обрабатывают таким образом, чтобы активные группы располагались на внешней поверхности тела липосомы. Таким образом, ФГ в липосомах предпочтительных форм осуществления настоящего изобретения служит и лигандом, и структурным компонентом самой липосомы.
Таким образом, предпочтительная форма осуществления настоящего изобретения предусматривает липосомные тельца, которые имеют на своих поверхностях, или могут быть обработаны или индуцированы таким образом, чтобы иметь на своих поверхностях одну или более фосфоглицеридных групп, способных действовать в качестве связывающихся групп. Предпочтительным ФГ лигандом является фосфатидилглицерин, и такие липиды составляют от 10 до 100% липосомы, а остальное является неактивным компонентом (например, фосфатидилхолин - ФХ) или таким компонентом, который действует по другому механизму (например, фосфатидилсерин - ФС), или смесями таких компонентов. Предпочтительны неактивные сокомпоненты, такие как ФХ.
По меньшей мере 10% по массе такой липосомы состоит из ФГ, предпочтительно по меньшей мере 50%, более предпочтительно от 60 до 100% и наиболее предпочтительно от 70 до 90%, причём в одном наиболее предпочтительном варианте осуществления ФГ составляет по массе около 75%.
Могут быть использованы также смеси ФГ липосом с неактивными липосомами и/или с липосомами из фосфолипидов, действующих по другим механизмам, при условии, что общее количество ФГ остаётся выше минимума в приблизительно 10% и предпочтительно выше 60% от всей смеси.
Что касается нелипосомных телец для использования в настоящем изобретении, отмечено, что они включают биосовместимые твёрдые или полые бусины соответствующего размера. Биосовместимые нелипосомные синтетические или полусинтетические тельца могут быть выбраны из полиэтиленгликоля, поли(метилметакрилата), поливинилпирролидона, полистирола и широкого круга других природных, полусинтетических и синтетических материалов с фосфоглицеридными группами, прикреплёнными к их поверхности. Такие материалы включают биоразлагаемые полимеры, такие как раскрыты Эипп и др. в патенте США № 4938763, который включён в настоящее описание посредством ссылки во всей его полноте.
Биоразлагаемые полимеры известны в данной области и включают, например, линейно-цепные полимеры - такие как полилактиды, полигликолиды, поликапролактоны, полиангидриды, полиамиды, полиуретаны, полиэфирамиды, полиортоэфиры, полидиоксаноны, полиацетали, поликетали, поликарбонаты, полиортокарбонаты, полифосфазены, полиоксибутираты, полиоксивалераты, полиалкилен-оксалаты, полиалкен-сукцинаты, поли(яблочную кислоту), поли(аминокислоты), поливинилпирролидон, полиэтиленгликоль, полиоксицеллюлозу, хитин, хитозан и их сополимеры, трёхкомпонентные сополимеры, и их комбинации. Другие биоразлагаемые полимеры включают, например, желатин, коллаген и др.
Вещества, пригодные для модификации (дериватизации), направленной на прикрепление фосфолипидов, или их частей с группами или со связывающимися группами, к трёхмерным тельцам, являются коммерчески доступными продуктами, например, Ро1у5С1Спес5 1пс., 400 Уа11еу Роаб. \Уаггтд1оп, РА 18976 или Б1дша А16пс11 Рше СйешкаК Способы их дериватизации (модификации) известны в данной области. Характерные предпочтительные примеры таких способов раскрыты в международной заявке № РСТ/СА02/01398 Уакодеп 1те1ап6 Ышйеб, которая включена в настоящее описание посредством ссылки.
Предполагается, что пациенты могут быть млекопитающими, в том числе (но не ограничиваясь ими) людьми и домашними животными, такими как коровы, лошади, свиньи, собаки, кошки и подобные им.
- 6 007426
Фосфолипиды являются амфипатическими молекулами (то есть амфифилами), что означает, что такое соединение представляет собой молекулы, имеющие полярную водорастворимую группу, прикреплённую к водонерастворимой углеводородной цепи. Амфифилы, служащие слоями матрикса, имеют чётко очерченные полярные и неполярные области. Амфифилы могут включать, кроме ФГ в настоящем изобретении, другие, существующие в природе липиды, используемые вместе с фосфолипидом, несущим активную группу, или в смеси с другим компонентом. Амфифилы, служащие слоем (слоями) липосом, могут быть инертными, создающими структуру синтетическими соединениями, такими как алкильные простые эфиры полиоксиэтилена, алкильные сложные эфиры полиоксиэтилена и диэфиры сахарозы.
Способы приготовления липосом подходящего размера известны в данной области и не являются частью настоящего изобретения. Можно сослаться на различные учебники и научные статьи по этому вопросу, например на обзорную статью «Ырозотез аз Рйаттасеийса1 Бозаде Еогтз» авторов Усе11схкс1 Ватеийок апй Бааи ТА.Сйтоттейп, и на цитированную здесь литературу, например Ыете Р.С. «Ырозотез: А Ртасйса1 Арргоасй». 1ВБ Ргезз. ОхГогй Ишуегзйу Ргезз, 1990.
Диаметр липосом, а также других фармацевтически приемлемых телец в предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения составляет от приблизительно 20 нм до приблизительно 500 мкм, более предпочтительно от приблизительно 20 нм до приблизительно 1000 нм, ещё более предпочтительно от приблизительно 50 нм до приблизительно 500 нм, и наиболее предпочтительно от приблизительно 80 нм до приблизительно 120 нм (диаметр предпочтительно измерен вдоль длинной оси). В одном из вариантов осуществления диаметр липосом находится в пределах от 60 нм до 500 мкм.
Фармацевтически приемлемые тельца могут быть суспендированы в фармацевтически приемлемом носителе, таком как стерильный физиологический солевой раствор, стерильная вода, апирогенная вода, изотонический солевой раствор и растворы на основе фосфатного буфера (например, стерильные водные растворы, содержащие фосфатный буфер), а также другие нетоксичные совместимые вещества, используемые в фармацевтических составах, такие как, например, адъюванты, буферы, консерванты и подобные им. Предпочтительно, фармацевтически приемлемые тельца оформлены в виде жидкой суспензии в стерильной биосовместимой жидкости, такой как содержащий буфер солевой раствор, и вводятся пациенту любым подходящим путём, который обеспечивает их контакт с одним или более компонентами иммунной системы, таким как внутриартериальный, внутривенный или, что наиболее предпочтительно, внутримышечный или подкожный пути.
Предполагается, что фармацевтически приемлемые тельца могут быть высушены в замороженном состоянии или лиофилизованы, так что их можно позднее ресуспендировать для введения. Настоящее изобретение направлено также на комплект, состоящий из части, содержащей лиофилизованные или высушенные в замороженном состоянии тельца, несущие связывающиеся группы, и фармацевтически приемлемого носителя, такого как стерильный физиологический солевой раствор, стерильная вода, апирогенная вода, изотонический солевой раствор и растворы на основе фосфатного буфера (например, стерильные водные растворы, содержащие фосфатный буфер), а также другие нетоксичные совместимые вещества, используемые в фармацевтических составах, такие как, например, адъюванты, буферы, консерванты и подобные им. Могут быть также включены защитные вещества для сушки в замороженном состоянии, известные в данной области, например лактоза или сахароза.
Предпочтительный способ введения фармацевтически приемлемых телец пациенту - это курс инъекций, производимых ежедневно, несколько раз в неделю, еженедельно или ежемесячно, в течение периода времени от недели до нескольких месяцев. Частота и длительность курса введения может, повидимому, меняться от пациента к пациенту, в зависимости от подлежащего лечению болезненного состояния, его тяжести, и того, каким предназначено быть воздействие - профилактическим, терапевтическим или поддерживающим. Его планирование и оптимизация целиком зависят от мастерства лечащего врача. Наиболее предпочтительна внутримышечная инъекция, особенно в ягодичную мышцу. Одним из конкретных режимов инъекций, по меньшей мере, при некоторых показаниях к применению настоящего изобретения, является следующий: инъекция в ягодичную мышцу подходящего количества телец в день № 1, затем инъекция в день № 2, после этого инъекция в день № 14, а затем «бустерные» инъекции с месячными интервалами, если это необходимо.
Постулируется, что во многих вариантах осуществления настоящего изобретения фармацевтически приемлемые тельца, содержащие в качестве связывающихся групп на своей поверхности ФГ группы, действуют как модификаторы иммунной системы пациента, в манере, подобной действию вакцины. Поэтому их применяют в количествах и при таких способах введения, чтобы обеспечить достаточные локальные концентрации телец в месте введения. Количества таких телец, подходящие для модификации иммунной системы, могут не находиться в прямой корреляции с размером тела реципиента и могут поэтому отличаться от дозировок лекарств, которые предписываются для обеспечения терапевтических уровней активных веществ в кровотоке и тканях пациента. Таким образом, дозировки лекарственных препаратов могут, по-видимому, быть намного большими, чем дозировки препаратов, модифицирующих иммунную систему.
Корреляцию между массой липосом и числом липосом можно извлечь из принятого специалистами в области липосомных составов соотношения, гласящего, что одна двухслойная везикула диаметром 100
- 7 007426 нм содержит 81230 липидных молекул, распределённых в соотношении приблизительно 50:50 между слоями (см. Шсйатй Натдап. ТтапвтетЬтапе рН дтаЛеик ίη крохотен (т1стоГотт): йгид-уе81с1е т1етасΐίοηδ апй рго!оп Г1их. Диссертация на соискание степени РйЭ. Университет Британской Колумбии, 1992. Публикация Ыайопа1 ЫЬгату оГ Сапайа, Ойа^а, Сапайа, 1993; Ишуегайу МктоГйтз огйег Ыо. ИМ100406756; Сапай1апа Ыо. 942042220, Ι8ΒΝ 0315796936). Отсюда можно рассчитать, например, что доза 5х108 везикул (по порядку соответствующая дозе, используемой в приведённых ниже конкретных примерах применения ш У1уо), эквивалентна 4,06х1013 липидных молекул. Используя число Авогадро 6,023х1023 для количества молекул липида в грамм-молекуле (моле), можно определить, что это составляет 6,74х10-11 молей, что при молекулярной массе ФГ, равной 729, даёт приблизительно 3,83х10-8 г или 38,3 нг ФГ в такой дозе.
Подлежащие введению количества фармацевтически приемлемых телец будут варьироваться в зависимости от природы расстройства у млекопитающего, которое намереваются лечить, и от индивидуальности и характеристик пациента. Предпочтительно, чтобы эффективное количество фармацевтически приемлемых телец было нетоксично для пациента, и не было бы слишком большим, чтобы не перегрузить иммунную систему. При применении внутриартериального, внутривенного, подкожного или внутримышечного введения стерильной водной суспензии фармацевтически приемлемых телец предпочтительно вводить в каждой дозе от приблизительно 0,1 до 50 мл жидкости, содержащей количество телец, эквивалентное, как правило, 10-1000% от количества лейкоцитов, имеющегося в норме в эквивалентном объёме цельной крови. Предпочтительно, чтобы количество телец, вводимых за один раз человеческому пациенту, было в интервале от приблизительно 500 до приблизительно 2,5х109 (в случае липосом менее 250 нг телец, это количество пропорционально корректируется с учетом разницы в плотностях для других вариантов осуществления телец), более предпочтительно от приблизительно 1000 до приблизительно 1500000000, ещё предпочтительнее от 10000 до приблизительно 50000000 и наиболее предпочтительно от приблизительно 200000 до приблизительно 2000000.
Поскольку фармацевтически приемлемые тельца действуют в процессе применения изобретения как модификаторы иммунной системы, подобно вакцине, то число таких телец, вводимое в место инъекции за каждое введение, может быть более осмысленной количественной характеристикой, чем число или масса телец на единицу массы тела пациента. По той же самой причине теперь предполагают, что эффективные дозы или количества телец для небольшого животного нельзя прямо пересчитать в эффективные количества для более крупных животных (то есть массой более 5 кг) просто на основании соотношений массы.
Настоящее изобретение предназначено для применения в профилактике и/или лечении широкого спектра расстройств у млекопитающих, которые связаны с функциями Т-клеток, воспалением, дисфункцией эндотелия и неадекватной экспрессией цитокинов. Пациент, имеющий или предположительно имеющий такое расстройство, может быть выбран для лечения. «Лечением» называется ослабление симптомов, такое как (но не ограничивающееся этими примерами) уменьшение остроты или числа симптомов конкретного заболевания или ограничение дальнейшего развития симптомов.
Что касается расстройств, связанных с функцией Т-клеток (опосредованных Т-клетками), эти расстройства включают любые и все расстройства, опосредованные, по меньшей мере, частично, Тклетками, и включают, для примера, язвы, раны и аутоиммунные расстройства, в том числе (но не ограничиваясь ими) диабет, склеродермию, псориаз и ревматоидный артрит.
Настоящее изобретение предназначено для применения в случае воспалительных аллергических реакций, расстройств, связанных с реакцией органов и клеток при трансплантации, и микробных инфекций, вызывающих воспалительные реакции. Оно также предназначено для применения в профилактической защите от окислительного стресса и/или ишемии вследствие повреждений при повторной перфузии, от проглатывания ядов, от воздействия токсических химических веществ, радиационных повреждений и воздействия происходящих из воздуха или воды веществ, вызывающих раздражение, и других факторов, вызывающих разрушающее воспаление. Оно предназначено также для применения в случае воспалительных, аллергических и опосредованных Т-клетками расстройств внутренних органов, таких как почки, печень, сердце и т. д.
Что касается расстройств, включающих неадекватную экспрессию цитокинов, для которых предназначено настоящее изобретение, то они включают любые и все расстройства, при которых имеет место неадекватная экспрессия цитокинов, и включают, например, нейродегенеративные заболевания. Нейродегенеративные заболевания, в том числе синдром Дауна, болезнь Альцгеймера и болезнь Паркинсона, связаны с повышенным уровнем содержания определённых цитокинов, в том числе интерлейкина-1 β (1Ь1β) (см. ОпГГш ЭД.8.Т. и др. (1989); Мод М. и др. (1996)). Было также установлено, что 1Ь-1 β ингибирует длительную потенциацию в гиппокампе (Миггау С.А. и др. (1998)). Длительная потенциация в гиппокампе - это форма синаптической пластичности, она обычно рассматривается как подходящая модель памяти и обучения (Β1188 Т.У.Р. и др. (1993)). Поэтому в настоящее время считается, что неадекватная экспрессия цитокинов в мозгу участвует в проявлении и развитии нейродегенеративных заболеваний и нейровоспалительных расстройств.
- 8 007426
Поэтому настоящее изобретение предназначено для лечения и профилактики у млекопитающих большого числа нейродегенеративных и других неврологических расстройств, включая синдром Дауна, болезнь Альцгеймера, болезнь Паркинсона, старческое слабоумие, депрессию, болезнь Хантингтона, заболевания периферической нервной системы, синдром Гийена-Барре, заболевания спинного мозга, заболевания, связанные с невропатологией суставов, хронические заболевания с воспалительной демиелинизацией, невропатии, в том числе мононевропатию, полиневропатию, симметричную периферическую сенсорную невропатию, расстройства нервно-мышечных соединений, миастении и боковой амиотрофический склероз (БАС). Лечение и профилактика этих нейродегенеративных заболеваний являются особенно предпочтительным примером осуществления настоящего изобретения, при особенно предпочтительном лечении болезни Альцгеймера, болезни Паркинсона и БАС.
Что касается расстройств с участием дисфункции эндотелия, настоящее изобретение предназначено для лечения и профилактики широкого круга таких расстройств у млекопитающих, включающих любые и все расстройства, по меньшей мере, частично опосредованные дисфункцией эндотелия, и включающих, например, сердечно-сосудистые заболевания, такие как атеросклероз, окклюзионное поражение периферических артерий или вообще артерий, застойную сердечную недостаточность, заболевание сосудов головного мозга («удар»), инфаркт миокарда, стенокардию, гипертензию и т.д., расстройства, связанные со спазмом сосудов, такие как болезнь Рейно, кардиальный синдром X, мигрень и т.д., и нарушения, вызванные ишемией (ишемические повреждения или ишемические повреждения, связанные с повторной перфузией). В итоге, это может быть любое расстройство, в патологии которого участвует неадекватное функционирование эндотелия.
Далее предназначения композиций и способов настоящего изобретения включают воздействие на пациентов с целью ускорения заживления их ран и язв, а также воздействие на пациентов перед хирургическими операциями с целью ускорения их послеоперационного восстановления, в том числе ускорения заживления у них хирургических ран и рассечений.
В отношении «сердечных расстройств», настоящее изобретение предназначается для лечения и профилактики широкого круга таких расстройств у млекопитающих, в том числе любых и всех расстройств, связанных с сердцем, и включающих, например, желудочковую аритмию (желудочковую тахикардию или фибрилляцию) и внезапную смерть от сердечного расстройства. На восприимчивость пациентов к сердечным расстройствам, таким как аритмии и внезапная смерть от сердечного расстройства, часто указывают удлинённые интервалы рТ-с в ритме сердечного биения. Полагают, что введение композиций согласно предпочтительным формам осуществления изобретения сокращает интервалы рТ-с у пациентов - млекопитающих, что указывает на снижение их предрасположенности к аритмии и внезапной смерти от сердечного расстройства.
Далее изобретение описывается, в целях иллюстрации, в нижеследующих не ограничивающих примерах.
Примеры
В приведённых ниже примерах использованы расшифрованные далее сокращения. Если сокращение не обозначено, оно имеет общепринятый смысл.
АРЗТ = аллергическая реакция замедленного типа
ВБ = внутрибрюшинный
ВМ = внутримышечный
г = грамм
Гц = герц
ДМСО = диметилсульфоксид
ДНФБ = 2,4-динитрофторбензол
дп = длительная потенциация
- 9 007426
КГЧ = контактная гиперчувствительность кг = килограмм
КЛ = кардиолипин
Л ПС = липополисахарид мг = миллиграмм мин = минута мкг = микрограмм мкл = микролитр мкм = микрометр мкМ = микромолярный мл = миллилитр мМ = миллимолярный мс = миллисекунда нг = нанограмм нм = нанометр нМ = наномолярный об/мин = обороты в минуту
ПЦР = полимеразная цепная реакция пг = пикограмм см = сантиметр ч = час с = секунда
ФГ = фосфатидилглицерин
ФС = фосфатидилсерин
ФХ = фосфатидилхолин
ЕЮН = этанол
РВ8 = физиологический солевой раствор в фосфатном буфере
РОФХ = 1-пальмитоил-2-олеоил-зп-глицеро-3-фосфохолин, называемый здесь ФХ
РОФГ = 1-пальмитоил-2-олеоил-8п-глицеро-3-[фосфо-рац-(1-глицерин)], называемый здесь ФГ
РОФС = 1-пальмитоил-2-олеоил-зп-глицеро-3-[фосфо-1_-серин], называемый здесь ФС
Если не указано иное, точная форма липидов, использованных в опытах, была РОФС, РОФГ и РОФХ, как изложено выше.
Пример 1.
Липосомы со средним диаметром 100 ± 20 нм были приготовлены согласно стандартным методам, известным в данной области, и имели следующий состав:
группа А - 100% ФС;
группа В - 100% ФГ;
группа С - контроль, без липосом.
Базовый раствор каждой липосомной композиции, содержащий 4,8х1014 липосом в мл, разбавляли РБ8, чтобы получить инъекционную суспензию, содержащую 6х106 частиц в мл. Липосомные суспензии вводили инъекцией мышам-самкам линии БАЕБ/с (Таскзоп ЬаБогаЮпез) в возрасте 6-8 недель и весом 19-23 г, чтобы определить влияние на опухание ушей в мышиной модели контактной гиперчувствительности (КГЧ). Модель КГЧ служит тестом на воспалительные реакции, опосредованные ТЬ-1.
Мышей распределяли по 3 группам, в каждой группе по 5 животных. Группы А и В получали приблизительно по 3х105 определённых выше липосом (т.е. соответственно 100% ФС или 100% ФГ) в объёме приблизительно 50 мкл. Мыши в группе С служили контролем и не получали липосом.
- 10 007426
Протокол опыта
Опыт был проведён следующим образом.
Таблица 1
Группа Липосомы День 1 День 2 День 3 День 4 День 5 День 6 День 7 (24 ч)
А 100% ФС Инъекция, затем сенсибилизация Инъекция Инъекция Инъекция Инъекция Инъекция, затем проба Измерение ушей
В 100% ФГ Инъекция, затем сенсибилизация Инъекция Инъекция Инъекция Инъекция Инъекция, затем проба Измерение ушей
В дни с 1-го по 6-й мышам групп А и В вводили соответственные препараты липосом. Приблизительно 300000 липосом вводили в объёме 50 мкл путём внутримышечной (ВМ) инъекции, с суммарным введением за период испытаний около 1800000 липосом. Мыши контрольной группы (группа С) не получали липосом, но были сенсибилизированы, им вводили провокационную пробу и обследовали так же, как и мышей групп А и В, как описано выше.
Сенсибилизация
В 1-й день, после инъекции в этот день липосом, мышей анестезировали ВБ инъекцией 0,2 мл раствора фенобарбитала натрия 5 мг/мл. Кожу на животе мышей опрыскивали 70% Ε1ΟΗ и лезвием скальпеля выбривали на животе участок диаметром около 1 дюйма. Затем на выбритую область с помощью пипетки наносили 25 мкл 0,5% раствора 2,4-динитрофторбензола (ДНФБ) в смеси ацетона с оливковым маслом (4:1).
Провокационная проба
На 6-й день, после инъекции липосом, мышам вводили провокационную пробу ДНФБ нанесением с помощью пипетки 10 мкл 0,2% раствора ДНФБ на тыльную поверхность правого уха; на левое ухо с помощью пипетки наносили 10 мкл носителя (плацебо).
Результаты
На 7-й день, через 24 ч после нанесения провокационной пробы, каждое животное анестезировали галотаном и измеряли толщину ушей с помощью пружинного микрометра Реасоск. Данные представляли в виде разницы в толщине между правым ухом с внесённой пробой и левым ухом, обработанным носителем (плацебо). Опыты повторяли 3 раза на одинаковых животных. Увеличение опухания ушей использовали как меру реакции на ДНФБ. Достоверность данных устанавливали по 2-параметрическому I-критерию Стьюдента. Достоверным считали различие с р <0,05.
Результаты приведены на фиг. 1 - гистограммном представлении средних величин из трёх опытов по измерению опухания ушей, представленного в мкм.
Фиг. 1 показывает существенное уменьшение опухания ушей, которое обеспечивает инъекция липосом в соответствии с настоящим изобретением. Липосомы с 100% ФГ давали достоверно большее снижение опухания, чем липосомы с 100% ФС.
Пример 2.
Липосомы со средним диаметром 100 ± 20 нм были приготовлены согласно стандартным методам, известным в данной области, и имели следующий состав:
группа А - 100% ФГ;
группа В - 75% ФГ,25% ФХ;
группа С - 50% ФГ, 50% ФХ;
группа Ό - 25% ФГ, 75% ФХ;
группа Е - только РВ8;
группа Р - без инъекции.
Базовый раствор каждой липосомной композиции, содержащий 4,8х1014 липосом в мл, разбавляли, чтобы получить инъекционную суспензию, содержащую 12х106 частиц в мл. Липосомные суспензии были использованы для инъекции мышам, чтобы определить воздействие на опухание ушей в мышиной модели КГЧ - биологической системе, пригодной для оценки опосредованных ΤΙ1-1 воспалительных реакций. Для этих опытов использовали мышей-самок линии ВАЬВ/с (басккоп ЕаЬогаФпек) в возрасте 6-8 недель и весом 19-23 г.
Мышей определяли в одну из 6 групп (группы А-Р, указанные выше) по 10 мышей в каждой группе. Также были включены контрольные группы без инъекций (группа Р) или с инъекциями РВ8 без липосом (группа Е). Животным в группах А-0 вводили инъекцией по 50 мкл определённых выше суспензий липосом, причём каждая порция содержала приблизительно 6х105 липосом.
- 11 007426
Протокол опыта
Тест включает сенсибилизацию (Сенс) потенциально вызывающим воспаление веществом, инъекцию липосом (Ин) подопытным животным или РВЗ контрольным животным и введение провокационной пробы (Провок) потенциально вызывающего воспаление вещества, с последующим измерением (Изм), чтобы определить, эффективно ли инъекция липосом противодействует развитию воспаления под действием провокационной пробы.
Опыт был проведён следующим образом.
Таблица 2
Группа Липосомы День 1 День 2 День 3 День 4 День 5 День 6 День 7
А 100 %ФГ Сенс + Ин Ин Ин Ин Ин Провок + Ин Изм
В 75% ФГ Сенс + Ин Ин Ин Ин Ин Провок + Ин Изм
С 50% ФГ Сенс + Ин Ин Ин Ин Ин Провок + Ин Изм
ϋ 25% ФГ Сенс + Ин Ин Ин Ин Ин Провок + Ин Изм
Е нет (только РВ8) Сенс + Ин Ин Ин Ин Ин Провок + Ин Изм
Е нет Сенс Провок Изм
В дни с 1-го по 6-й проводили инъекцию мышам соответственных препаратов липосом, как указано выше. Проводили ВМ инъекцию липосом в объёме 50 мкл, т.е. в каждой инъекции вводили 600000 липосом, за весь период испытаний было введено всего 3600000 липосом. Мыши в контрольной группе не получали липосом, но сенсибилизацию, введение провокационной пробы и обследование проводили так же, как и в других группах мышей, как описано выше.
Сенсибилизация («Сенс»)
На 1-й день, после инъекции в этот день липосом, мышей анестезировали ВБ инъекцией 0,2 мл раствора фенобарбитала натрия 5 мг/мл. Кожу на животе мышей опрыскивали 70% ЕЮН и лезвием выбривали на животе участок диаметром около 1 дюйма. На выбритую область с помощью пипетки наносили 25 мкл 0,5% раствора 2,4-динитрофторбензола (ДНФБ) в смеси ацетона с оливковым маслом (4:1).
Провокационная проба («Провок»)
На 6-й день, после инъекции в этот день липосом, мышам вводили провокационную пробу («Провок») ДНФБ следующим образом: 10 мкл 0,2% раствора ДНФБ наносили на тыльную поверхность правого уха; на левое ухо с помощью пипетки наносили 10 мкл носителя (плацебо).
Результаты
На 7-й день, через 24 ч после нанесения провокационной пробы, каждое животное анестезировали галотаном и измеряли толщину ушей («Изм») с помощью пружинного микрометра Реасоск. Увеличение опухания ушей использовали как меру реакции на ДНФБ. Данные представляли в виде разницы в толщине между правым ухом с внесённой пробой и левым ухом, обработанным носителем (плацебо). Достоверность различия между двумя группами устанавливали по 2-параметрическому ΐ-критерию Стьюдента. Достоверным считали различие с р < 0,05.
Результаты представлены графически на фиг. 2 - гистограммном представлении, показывающем величину опухания ушей в мкм. В построении графика использованы средние значения из соответствующих опытов.
Фиг. 2 показывает, что достоверное уменьшение опухания ушей достигалось при введении липосом с 100 и 75% ФГ. Это указывает на то, что обе эти концентрации защищают от развития воспаления, вызванного контактом с аллергенным веществом ДНФБ. Липосомы с 50 и 25% ФГ показывали также уменьшение опухания по сравнению с обоими контролями, но в этих опытах различие не было статистически достоверным.
Пример 3.
Липосомы со средним диаметром 100 ± 20 нм были приготовлены согласно стандартным методам, известным в данной области, и имели состав 75% ФГ, 25% ФХ. Базовую суспензию, содержащую 4,8х1014 липосом в мл, использовали, как указано выше, и разбавляли в РВЗ, чтобы получить инъекционную суспензию, содержащую приведённые ниже концентрации липосом:
- 12 007426
Таблица 3
Мышей линии ВАБВ/с разделили на 6 групп (группы А-Р), включая контрольную группу, где мыши не получали липосом, но им вводили инъекцией 50 мкл РБ8 (группа Р). Мышей сенсибилизировали введением аллергена в бок, затем проводили инъекцию выбранной для них дозы липосом (внутримышечно в мышцу правой ноги) в тот же день, что и сенсибилизация, но после неё (день 1) и затем в дни 2й, 3-й, 4-й и 5-й. На 6-й день им и проводили инъекцию, и вводили в ухо провокационную пробу, как описано в примере 1. Толщину ушей измеряли, как описано выше, через 24 ч после провокационной пробы.
Результаты (фиг. 3) показывают достоверную разницу между контрольной группой (группа Р) и группой С (12х108 липосом в мл), между контрольной группой и группой Б (12х107 липосом в мл) и между контрольной группой и группой Е (12x10*} липосом в мл). Наблюдалась небольшая разница между контрольной группой и группами А и В (соответственно 12Х1011 и 12х109 липосом в мл), что позволяет предположить, что существует оптимальный интервал концентраций липосом, выше которого полезный эффект может быть снижен. В других опытах наблюдалось также уменьшение защитного эффекта, когда концентрация липосом была ниже 12х104 липосом в мл.
Пример 4.
Липосомы состава 100% ФГ со средним диаметром 100 ± 20 нм были приготовлены в соответствии со стандартными методами. В четырёх группах мышей по 10 мышей в каждой (группы А-Б) проводили сенсибилизацию, инъекции и введение провокационной пробы в соответствии с описанными в примере 3 процедурой и расписанием, со следующим количеством 100% ФГ липосом, введённым в 50 мкл суспен зии:
группа А - 6х107;
группа В - 6х106;
группа С - 6х105;
группа Б - 6х104.
Результаты примера 4, вместе с данными контрольной группы с РВ8, представлены также в форме гистограммы на фиг. 4. Для каждой из опытных групп наблюдалось достоверное уменьшение опухания ушей по сравнению с контрольной группой, однако с небольшой разницей между различными группами.
Пример 5.
Липосомы состава 75% ФГ, 25% ФХ и со средним диаметром 50, 100, 200 или 400 нм готовили стандартными методами. Их испытывали в мышиной модели КГЧ, как в примерах 3 и 4, используя для каждой инъекции 6х105 липосом в 50 мкл суспензии, причём расписание действий сенсибилизацияинъекции-провокация и методика были такими же, как в примере 3. Группы были следующими:
группа А - липосомы диаметром 50 нм;
группа В - липосомы диаметром 100 нм;
группа С - липосомы диаметром 200 нм;
группа Б - липосомы диаметром 400 нм;
группа Е - без липосом.
Результаты представлены на фиг. 5. Результат группы Б, в которой применялись липосомы диаметром 400 нм, не имел достоверного различия с результатом контрольной группы (группа Е), что указывает на возможную критичность диапазона размеров в этой модели.
Пример 6.
Базовую суспензию 75% ФГ липосом со средним диаметром 100 ± 20 нм, содержащую 4,8х1014 липосом в мл, разбавляли, чтобы получить инъекционную суспензию, содержащую 6х105 липосом в 50 мкл. Липосомные суспензии использовали для инъекций мышам, чтобы определить влияние на опухание ушей в мышиной модели КГЧ. Как и в примере 1, использовали мышей-самок линии ВАБВ/с (баскзоп БаЬогаГОпез) в возрасте 6-8 недель и весом 19-23 г.
- 13 007426
Животных распределяли в одну из 3 групп по 10 мышей в каждой группе. Мыши в контрольной группе (группа С) получали только инъекции РБ8. Животным в группах А и В делали инъекции по 50 мкл суспензии, содержавшей 6х105 липосом.
Протокол опыта
В дни с 13-го по 18-й мышам производили инъекцию 75% ФГ липосом, как указано ниже. Липосомы вводили ВМ инъекцией в объёме 50 мкл, т.е 600 000 липосом за каждую инъекцию, а за весь период испытания полное количество составило 3 600 000 липосом. Сенсибилизацию и провокацию проводили, как описано в примере 2.
Таблица 4
День Воздействие
1 Сенсибилизация
6 Провокация
7 Измерение
12 Провокация
13 Измерение + инъекция
14 Инъекция
15 Инъекция
16 Измерение + инъекция
17 Инъекция
18 Инъекция + провокация
19 Измерение
Результаты
Результаты представлены в графической форме на сопровождающей фиг. 6 и показывают эффективность 75% ФГ липосом в модели ГЧЗТ, проявляющуюся на 16-й день через 24 ч после третьей инъекции, следующей за вторым введением провокационной пробы.
Пример 7.
Липосомы, образованные 100% кардиолипином (КЛ) и имеющие средний диаметр 100 ± 20 нм, готовили стандартными методами. Они были использованы в дозировке 6х105 липосом в 50 мкл в каждой инъекции в мышиной модели ГЧЗТ, описанной в примере 6. Данные полученные на мышах, которым производилась инъекция КЛ липосом (группа А, 10 мышей), сравнивали с данными, полученными на мышах, получавших только РБ8 (группа В, 10 мышей). Процедуры сенсибилизации, инъекции и провокации были такими, как описаны в примере 2. Результаты измерения толщины ушей, полученные на 19-й день (через 24 ч после 6-й инъекции), приведены на фиг. 7. Результаты показывают значительное уменьшение опухания ушей в результате инъекции мышам КЛ липосом (группа А).
Пример 8.
Липосомы со средним диаметром 100 нм, содержащие либо 100% кардиолипина, либо 75% кардиолипина и 25% ФХ, готовили стандартными методами. Три группы по 10 мышей (группы А-С) сенсибилизировали в 1-й день. Мыши в контрольной группе получали инъекции РВ8 в дни 1-й, 2-й и 6-й (группа С). Мыши в остальных двух группах получали инъекции липосом в объёме 50 мкл в каждой инъекции по той же схеме. В каждой инъекции вводили 6х105 липосом со 100% кардиолипина (группа А) или 6х105 липосом с 75% кардиолипина (группа В). Провокационную пробу вводили мышам на 7-й день и измеряли толщину ушей, как описано в предыдущих примерах.
На фиг. 8 приведены средние результаты измерений в каждой группе. В обеих группах, получавших КЛ липосомы, отмечено статистически достоверное подавление КГЧ по сравнению с контрольной группой.
Пример 9.
Чтобы изучить клеточные и молекулярные механизмы, лежащие в основе когнитивной функции, используют животную модель длительной потенциации (ДП). ДП - это форма синаптической пластичности, проявляющаяся при формировании гиппокампа, который, как полагают, является биологическим субстратом для обучения и запоминания (В1188 и др. // №Шге. 1990. Т. 361. С. 31-39). ДП у крыс определяется электрофизиологическими методами, хорошо известными специалистам в данной области. Затем животных забивают, чтобы исследовать биохимические изменения в тканях гиппокампа. Сравнение результатов электрофизиологического исследования с биохимическими изменениями в гиппокампе полезно для определения того, как можно изменить клеточные события, лежащие в основе ДП, у животных,
- 14 007426 страдающих заболеваниями или расстройствами, связанными с воспалительными процессами в нервной системе, такими как старение, стресс, болезнь Альцгеймера и бактериальная инфекция.
Системное введение липополисахарида (ЛПС), компонента клеточной стенки грамотрицательных бактерий, вызывает активацию иммунной системы, индуцируя повышение содержания провоспалительных цитокинов, таких как ΙΕ-1β. Как указывалось выше, одним из примеров индуцированного ЛПС и 1Ь1β нейронного дефицита является ослабление ДП в гиппокампе. Индикатором ДП является средний наклон возбуждаемого популяционного постсинаптического потенциала (ВПСП). При тетанической стимуляции наклон ВПСП (в %) резко увеличивается, указывая на повышение синаптической активности. Индуцированное ЛПС подавление ДП уменьшает скачок ВПСП и/или заставляет наклон ВПСП быстрее возвращаться к базовой линии, что указывает на то, что повышенная синаптическая активность является короткоживущей. Поэтому измерения наклона ВПСП (в %) через определённые интервалы времени после тетанической стимуляции можно использовать для тестирования памяти и её утраты после действия воспалительного раздражителя, а также воспаления в гиппокампе мозга.
Липосомы со средним диаметром 100 ± 20 нм были приготовлены согласно стандартным методам, известным в данной области, и содержали 75% ФГ и 25% ФХ. Базовую суспензию липосом, содержащую приблизительно 2,9х1014 липосом в мл, разбавляли РВ8, чтобы получить инъекционную суспензию, содержащую приблизительно 1,2х107 липосом в мл. Эта суспензия была использована для инъекций крысам, чтобы определить влияние на индуцированное ЛПС снижение ДП. Для этих опытов использовали крыс-самцов линии \У151аг (ВюКекошъек Ипй, Тпийу Со11еде, ΌιιΝίη) весом около 300 г.
Животных распределяли в одну из 4 групп, по 8 крыс в каждой группе, для воздействия по следующей схеме:
группа А - солевой физиологический раствор + контроль;
группа В - солевой физиологический раствор + ФГ липосомы;
группа С - ЛПС + контроль;
группа Ό - ЛПС + ФГ липосомы.
Каждый идентифицированный выше препарат в объёме 150 мкл вводили ВМ инъекцией в дни 1-й, 13-й и 14-й. Мыши в группах В и Ό получали всего по 5 400 000 липосом (по 1800000 липосом за одну инъекцию). Процедуры ДП и приготовления ткани выполняли в день 0.
Процедура ДП
Крыс анестезировали ВБ введением уретана (1,5 г/кг). Крысам вводили ВБ либо ЛПС (100 мкг/кг), либо стерильный физиологический раствор. Через три часа в проводящий путь и в область тела дорсальной клетки зубчатой извилины вводили соответственно биполярный стимулирующий электрод и однополярный регистрирующий электрод. Производили 10 шоковых импульсов с частотой 0,033 Гц, а реакцию измеряли за 10 мин до и через 45 мин после высокочастотной стимуляции (подавали 3 вереницы импульсов с интервалами 30 с, 250 Гц в течение 200 мс).
Крыс забивали обезглавливанием. Гиппокамп, тетанизированные и нететанизированные зубчатые извилины, кору и обонятельную кору измельчали на льду, разделяли на порции и замораживали в 1 мл раствора Кребса, содержащего 10% ДМСО (состав раствора Кребса в мМ: №С1 - 136, КС1 - 2,54, КН2РО4 - 1,18, Мд8О4.7Н2О - 1,18, ЫаНСО3 - 16, глюкоза - 10, СаС12- 1,13).
Результаты
Результаты приведены на фиг. 9. График показывает разницу в возбуждаемом постсинаптическом потенциале (ВПСП), зарегистрированном в клеточных телах тучных клеток (гепариноцитов). Представленные данные являются средними из 7-8 наблюдений в каждой подвергнутой воздействию группе и выражены как среднее процентное изменение в наклоне ВПСП в каждые 30 с, нормированное к среднему значению за 5 мин. до тетанической стимуляции. Фиг. 9 показывает, что индуцированное ЛПС ингибирование ДП в синапсах проводящего пути с тучной клеткой преодолевается предварительной обработкой ФГ липосомами. Сплошные треугольники представляют группу А (солевой физиологический раствор + контроль), незаполненные треугольники представляют группу В (солевой физиологический раствор + ФГ липосомы), сплошные квадраты представляют группу С (ЛПС + контроль), а незаполненные квадраты представляют группу Ό (ЛПС + ФГ липосомы).
Фиг. 10 показывает, что анализ средних значений через 40-45 мин после тетанической стимуляции указывает на то, что популяционный наклон ВПСП уменьшился в группе контроль-ЛПС (незаполненные столбики) и что ФГ липосомы (заштрихованные столбики) достоверно снимают этот эффект (*р < 0,01). В качестве индекса способности к функционированию памяти и обучения, продемонстрированное в этом примере улучшение восстанавливаемости ДП указывает на пригодность такого воздействия для лечения состояний слабоумия, например болезни Альцгеймера и ослабления памяти.
Пример 10.
1Ь-4 - один из большого числа цитокинов, секретируемых Т112 субклассом лимфоцитов, известный благодаря своему противовоспалительному действию. Фиг. 11 показывает, что концентрация 1Ь-4 в гиппокампе была достоверно повышена в группе ЛПС, которую предварительно обрабатывали ФГ липосомами (*р < 0,05). Незаполненные столбики представляют контрольную группу (группа Е), а заштрихо
- 15 007426 ванные столбики представляют группу, которой вводили ФГ липосомы (группа Ε). Количество 1Ь-4 измеряли методом твердофазного иммуноферментного анализа ЕЫ8А и выражали в пикограммах 1Ь-4 на мг общего белка. Эта регуляция с возрастанием противовоспалительного цитокина 1Ь-4 в мозгу указывает на полезность применения способа и композиции предпочтительных осуществлений настоящего изобретения в лечении широкого круга нейровоспалительных расстройств, включая болезнь Паркинсона, БАС, хроническое воспалительное демиелинизирующее заболевание С4РЭ и синдром Гийена-Барре (острый первичный идиопатический полиневрит).
Пример 11.
ΣΒ-1β - один из большого числа цитокинов, секретируемых Τ111 подклассом лимфоцитов, известный благодаря своему провоспалительному действию. Извлекали селезёнки у животных, подвергнутых воздействиям, описанным в примере 9 (группы С и Ό), и собирали селезёночные клетки. Их готовили следующим образом.
Фиг. 12 показывает, что концентрация ΣΒ-1β в селезёночных клетках была достоверно снижена в группе ЛПС, которая предварительно была обработана ФГ липосомами (*р < 0,05). Количество ΣΒ-1β измеряли методом твердофазного иммуноферментного анализа ЕЫ8А и выражали в пикограммах ΣΒ-1β на мг общего белка. Результаты указывают на системное провоспалительное действие способа и композиций предпочтительных форм осуществления настоящего изобретения.
Пример 12.
И937 - это линия моноцитных клеток лейкемии, которые можно дифференцировать в макрофаги введением форболовых эфиров. Обработка липополисахаридом (ЛПС), компонентом клеточной стенки грамотрицательных бактерий, стимулирует воспалительную реакцию в клетках И937, со стимулирующей регуляцией экспрессии большого числа провоспалительных молекул, включая ΤΝΕα. Эта модель предоставляет экспериментальную систему для оценки противовоспалительной терапии. Макрофаги можно выращивать в культуральной среде в присутствии композиции с предполагаемым противовоспалительным действием, и можно измерять экспрессию ΤΝΕα.
Липосомы со средним диаметром 100 ± 20 нм были приготовлены согласно стандартным методам, известным в данной области, и имели состав: 75% фосфатидилглицерина (ФГ) и 25% фосфатидилхолина (ФХ). Базовую суспензию с концентрацией липида около 40 мМ разбавляли до следующей конечной концентрацией для испытаний:
100 мкМ фосфатидилглицерина (ФГ), мкМ ФГ, мкМ ФГ,
4,0 мкМ ФГ, мкМ ФГ.
Клетки И937 культивировали выращиванием в среде ΚΡΜΣ (ΟΣΒΟΟ ВКБ) с добавкой 10% сыворотки плода коровы (Ге!а1 Ьоуше зетит, ΕΒ8) и 1% пенициллина/стрептомицина и растили при 37°С в атмосфере с 5% СО2. 5х105 клеток высевали в ячейки планшетов на 6 ячеек и вызывали их превращение в макрофаги обработкой 150 нМ форболмиристатацетата (ФМА) в течение 2-3 дней. Затем, после дифференцировки клеток И937 в макрофаги, клеточную среду заменяли полной средой. После этого клетки инкубировали в течение ещё 24 ч для минимизации плейотропных эффектов воздействия ФМА.
После этого клетки инкубировали в присутствии:
группа А - ΡΒ8, негативный контроль, группа В - 10 нг/мл ЛПС, позитивный контроль, группа С - 10 нг/мл ЛПС + 100 мкМ ФГ, группа Ό - 10 нг/мл ЛПС + 40 мкМ ФГ, группа Е - 10 нг/мл ЛПС + 10 мкМ ФГ, группа Е - 10 нг/мл ЛПС + 4,0 мкМ ФГ, группа О - 10 нг/мл ЛПС + 1 мкМ ФГ.
Клетки инкубировали, как описано выше, при 37°С в атмосфере с 5% СО2. Через 18 ч надосадочные жидкости в каждой группе клеток собирали и анализировали на содержание ΤΝΕα с помощью стандартного набора ОиапНкте для анализа с помощью сшитого с ферментом иммуносорбента ЕЫ8А (Β&Ό зуз1етз, М1ппеаро118, И8А).
Результаты
Фиг. 13 показывает количество секретируемого ΤΝΕα в пикограммах в мл. Результаты показывают, что клетки макрофагов, полученные дифференцировкой клеток И937, при нормальных условиях экспрессируют очень низкие уровни ΤΝΕα. Однако, будучи экспонированными с ЛПС, они секретируют в окружающую среду большие количества ΤΝΕα, что является указанием на имевший место клеточный стресс. Инкубация клеток с ФГ липосомами ингибирует секрецию ΤΝΕα с дозовой зависимостью. При этом наивысшая концентрация 100 мкМ приводит к 98% снижению, и даже самая низкая концентрация 1 мкМ вызывает 58% снижение экспрессии ΤΝΕα.
- 16 007426
Пример 13.
Чтобы установить влияние ФГ липосом предпочтительного осуществления настоящего изобретения на функцию эндотелия, определяли содержание эндотелина-1 (ЕТ-1) в ушах мышей, которые были подвергнуты исследованию КГЧ, как описано в примере 3. Эндотелин-1 - это активный сосудосокращающий агент, он обладает инотропным и митогенным действием, моделирует солевой и водяной гомеостаз и играет важную роль в поддержании тонуса сосудов и кровяного давления. Имеются различные доказательства того, что эндогенный ЕТ-1 может участвовать в патофизиологии болезненных состояний, связанных с продолжительным сокращением сосудов, таких как сердечная недостаточность. При сердечной недостаточности наблюдали повышенные уровни содержания циркулирующего ЕТ-1 и «большого» эндотелина (Ыд-ЕТ-1) (О1аппе81 Ό., Эе1 Ку 8., Уйа1е К.1. Тйе го1е оГ епбоШейпз апб Шей гесер(огз ίη КеаП ГаПиге // Рйагтасо1. Кез. 2001. Т. 43, № 2. С 111-126). Вследствие этого ЕТ-1 является индикатором функционирования эндотелия, а повышенная продукция ЕТ-1 в ткани указывает на ослабление функции эндотелия.
Чтобы установить уровень экспрессии ЕТ-1, в опытах по КГЧ у мышей, через 24 ч после введения провокационной пробы в правое ухо, эти правые уши удаляли.
Уши забирали у мышей, которым в течение 6 дней проводили ВМ инъекцию РВ8 (группа А), и у мышей, которым проводили ВМ инъекцию липосом состава 75% ФГ/25% ФХ (600000 липосом в каждой инъекции; группа В). Уши хранили в устройстве для работы с РНК при -20°С до выделения РНК. Выделяли РНК и с помощью обратной транкриптазы (ОТ) получали комплементарную ДНК (кДНК), используя специфичные для ЕТ-1 праймеры. В качестве внутреннего контроля осуществляли также ПЦР с праймерами, специфичными для β-актина. Продукты ПЦР разделяли электрофорезом в геле 1,5% агарозы, линии ДНК количественно оценивали с помощью денситометрического анализа. Рассчитывали соотношение ЕТ-1ф-актин.
Выполнение ПЦР:
Смесь для ПЦР (ЕТ-1) Смесь для ПЦР (β-актин)
5 мкл ПЦР-буфера (10-кратного) 1.5 мкл МдС12 (50 мМ) 1 мкл дНТФ (10 мМ) 0,5 мкл праймера 1 (25 мкМ) 0,5 мкл праймера 2 (25 мкМ) 0,25 мкл ДНК-полимеразы Тая 2.5 мкл кДНК 38,75 мкл воды 5 мкл ПЦР-буфера (10-кратного) 1.5 мкл МдС12 (50 мМ) 1 мкл дНТФ (10 мМ) 1 мкл праймера 1 (25 мкМ) 1 мкл праймера 2 (25 мкМ) 0,25 мкл ДНК-полимеразы Тая 2.5 мкп кДНК 37,75 мкл воды
50 мкл всего 50 мкл всего
(дНТФ - смесь дезоксинуклеозид-трифосфатов)
Праймеры (в соответствии с имеющимися описаниями - см., например, работу Уапд I., Низат М., 81е\таП Ό.Ι. Сопбйюпа1 сагШас ονе^еxр^е88^οη оГ епбоШе1т-1 т йапздетс тюе // РА8ЕВ I. 2001 (Маг 8).
Т. 15, № 5. С. А1138):
ЕТ-1 (обратный): 5'-САО САС ТТС ТТО ТСТ ТТТ ТОО-3'
ЕТ-1 (прямой): 5'-ССА АОО АОС ТСС АОА ААС АО-3' β-актин (обратный): 5'-ОТО ООС СОС ТСТ АОО САС САА-3' β-актин (прямой): 5'-СТС ТТТ ОАТ
ОТС АСО САС ОАТ ТТС-3'
Параметры ПЦР:
94°С - 5 мин.
94°С - 30 с
60°С - 30 с циклов
72°С - 60 с Л
72°С-10мин.
4°С - впитывание
После 6 ежедневных инъекций мышам 75% ФГ липосом уровень ЕТ-1 у них снижался на 36% по сравнению с контрольными мышами, получавшими РВ8 по такому же расписанию инъекций. Результаты представлены в графическом виде на фиг. 14. Это снижение указывает на полезное воздействие на функцию эндотелия пациента-млекопитающего путём опосредованного Тй1 уменьшения воспаления в результате инъекции липосом по предпочтительному осуществлению настоящего изобретения.
Пример 14.
Молекула-1 межклеточной адгезии (т(егсе11и1аг абйезюп то1еси1е-1, 1САМ-1) - это молекула клеточной поверхности, экспрессируемая некоторыми типами клеток, в том числе лейкоцитами и клетками эндотелия. Она участвует в адгезии моноцитов на клетках эндотелия и играет роль в воспалительных
- 17 007426 процессах и в опосредованной Т-клетками системе защиты организма-хозяина. Экспрессия 1САМ-1, возможно, даёт вклад в клиническое проявление различных заболеваний, главным образо, препятствуя проявлению нормальной иммунной функции. Эти заболевания включают злокачественные новообразования (например, меланомы и лимфомы), многие воспалительные расстройства (например, астму и аутоиммунные расстройства), атеросклероз, ишемию, некоторые неврологические расстройства и осложнения при трансплантации аллогенных органов (Уап кс §Ю1ре А., Уап кег 8аад Ρ.Τ. 1и!егсе11и1аг акйекюп то1еси1е1 // 1. Мо1. Мек. 1996. Τ. 74, № 1. С 13-33).
Клетки эндотелия пупочной вены человека (йитаи итЫ11са1 ует еико!йе11а1 се1к, НИУЕС) - это первичная клеточная линия клеток эндотелия, выделенных из тяжей пупочной вены, как описано далее.
Флаконы Т75 подготавливали, обрабатывая их 0,2% раствором желатина (5-7 мл на флакон) в течение как минимум 15/20 мин или в течение ночи. Избыток раствора затем удаляли. Пупочный жгут перед процедурой выделения опрыскивали 70% этанолом и отрезали все остатки плаценты, ещё остававшиеся прикреплёнными к жгуту. Затем жгут нарезали на куски длиной приблизительно 5-6 дюймов. Жгут имеет две толстостенные артерии и одну вену, большей толщины и тонкостенную. Вену локализовали и вводили в неё зазубренный конец пробки. Затем жгут привязывали к пробке куском нити длиной около 20 см.
После этого жгут многократно промывали, пропуская сквозь него забуференный фосфатом солевой физиологический раствор (ΡΒ8) (буферный раствор, состоящий из солевого физиологического раствора (ΡΒ8) и фосфатного буфера), пока ΡΒ8 не выходил прозрачным. После этого в жгут вводили 15-20 мл раствора коллагеназы, его заворачивали в фольгу и инкубировали в течение 15 мин при 37°С. После инкубации привязанный конец жгута отрезали и давали раствору коллагеназы стечь в 50 мл пробирку. Затем снова сквозь жгут пропускали раствор коллагеназы, жгут массировали для высвобождения клеток эндотелия, после этого через жгут пропускали ΡΒ8 и собирали его в ту же пробирку, в которой был раствор коллагеназы. Раствор центрифугировали при 1600 об/мин, надосадочную жидкость сливали, а осадок ресуспедировали в 10-12 мл полной среды М199. В конце операции среду, содержащую клетки, помещали в желатинизированные флаконы.
Липосомы со средним диаметром 100 ± 20 нм были приготовлены согласно стандартным методам, известным в данной области, и имели состав: 75% фосфатидилглицерина (ФГ) и 25% фосфатидилхолина (ФХ). Базовую суспензию с концентрацией липида 40 мМ разбавляли для испытаний до концентрации липида 100 мкМ.
Клетки НИУЕС распределяли в несколько флаконов для культуры ткани, давали им прикрепиться к поверхности флаконов и затем проводили следующие воздействия:
группа А - ΡΒ8 (негативный контроль), группа В - 500 нг/мл ЛПС (позитивный контроль), группа С - 500 нг/мл ЛПС + 100 мкМ ФГ, группа Ό - 500 нг/мл ЛПС + 100 мкМ ФХ.
Клетки инкубировали при 37°С с 5% СО2. Через 18 ч надосадочные жидкости в каждой группе клеток собирали и анализировали на содержание ЕТ-1, используя стандартный набор для ЕБ18А (полученный от Аккау Эекщик), а клетки собирали для анализа 1САМ-1, как указано далее.
Клетки вначале промывали ΡΒ8, затем инкубировали в буфере для диссоциации клеток при 37°С в течение 25-30 мин. После этого клетки промывали центрифугированием и инкубировали с антителами к СЭ54 (1САМ-1) в течение 30 мин. Затем добавляли вторичные антитела с флуоресцентным зондом (Р1ТС) и инкубировали их с клетками, как описано выше. Наконец клетки ресуспендировали в 1 мл ΡΒ8 и анализировали их флуоресценцию в проточном цитометре.
Результаты
Результаты представлены на фиг. 15, в графическом виде, дающем процентное содержание в соответствующих культурах клеток, позитивных по окраске в отношении 1САМ-1. Следует отметить, что количество клеток, позитивных по окраске, в культурах с ФГ липосомами снижено по сравнению с уровнем в негативном контроле и намного ниже, чем уровень в позитивном контроле.
Пример 15.
Микроглиальные клетки (макрофаги мозга) культивировали, затем измеряли производимый ими воспалительный цитокин - ΤΝΡα. Клетки стимулировали иммуноглобулином (1дС) от пациентов, страдающих БАС, и в результате этого выход ΤΝΡα возрастал приблизительно в 800 раз. Если такие же клетки выращивали в присутствии и 1дО БАС, и ФГ липосом, выход ΤΝΡα снижался приблизительно на 75%, что указывает на перспективность предпочтительного варианта осуществления настоящего изобретения для лечения БАС. Результаты представлены на фиг. 16.

Claims (41)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Фармацевтическая композиция в форме разовых дозировок для введения пациентумлекопитающему, содержащая фармацевтически приемлемые тельца и фармацевтически приемлемый носитель, характеризующаяся тем, что по меньшей мере часть телец имеет размер в интервале приблизи
    - 18 007426 тельно от 20 нм до 500 мкм, и при этом поверхности указанных телец содержат фосфоглицеридные группы или группы, способные к преобразованию в фосфоглицеридные группы, а указанная разовая дозировка содержит от приблизительно 500 до приблизительно 2,5»109 телец.
  2. 2. Фармацевтическая композиция по п.1, отличающаяся тем, что тельца являются липосомами.
  3. 3. Фармацевтическая композиция по п.1 или 2, отличающаяся тем, что композиция существенно свободна от нелипидных фармацевтически активных форм.
  4. 4. Фармацевтическая композиция по п.3, отличающаяся тем, что композиция свободна от нелипидных фармацевтически активных форм.
  5. 5. Фармацевтическая композиция по любому из пп.2-4, отличающаяся тем, что липосомы содержат от приблизительно 60 до 100% фосфатидилглицерина, причём его головные фосфоглицеридные группы представлены на внешних поверхностях липосом.
  6. 6. Фармацевтическая композиция по п.5, отличающаяся тем, что липосомы содержат от 70 до 90% фосфатидилглицерина.
  7. 7. Фармацевтическая композиция по п.5 или 6, отличающаяся тем, что вся остальная часть липосомы является фосфатидилхолином.
  8. 8. Фармацевтическая композиция по п.1, отличающаяся тем, что указанные тельца содержат поверхностные группы, которые специфически связываются с рецепторами на клетках иммунной системы млекопитающего, специфически предназначенных для связывания фосфоглицеридных групп.
  9. 9. Фармацевтическая композиция по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что единичная дозировка содержит от приблизительно 10000 до приблизительно 50000000 телец.
  10. 10. Применение композиции, содержащей фармацевтически приемлемые биосовместимые тельца, имеющие размер в интервале от приблизительно 20 нм до 500 мкм и имеющие множество экспрессированных или способных к экспрессии на поверхности фосфоглицеридных активных групп, причём указанная композиция существенно свободна от фармацевтически активных нелипидных форм, в производстве лекарственного средства для лечения или профилактики расстройства, выбранного из опосредованного функцией Т-клеток расстройства, воспалительного расстройства и иммунного расстройства, характеризуемого неадекватной экспрессией цитокинов.
  11. 11. Применение по п.10, отличающееся тем, что на поверхности телец экспрессированы фосфоглицеридные группы.
  12. 12. Применение по п.10 или 11, отличающееся тем, что фосфоглицеридные активные группы составляют от 60 до 100% активных групп на тельцах.
  13. 13. Применение по любому из пп.10-12, отличающееся тем, что фосфоглицеридные активные группы являются головными группами фосфатидилглицериновых (ФГ) лигандов.
  14. 14. Применение по любому из пп.10-13, отличающееся тем, что тельцами являются липосомы.
  15. 15. Применение по п.14, отличающееся тем, что липосомы на 50-100 мас.% состоят из фосфатидилглицерина.
  16. 16. Применение по п.14 или 15, отличающееся тем, что липосомы на 65-90 мас.% состоят из фосфатидилглицерина.
  17. 17. Применение по любому из пп.12-16, отличающееся тем, что липосомы имеют диаметр от приблизительно 20 до приблизительно 1000 нм.
  18. 18. Применение по любому из пп.10-17, отличающееся тем, что форма разовой дозы указанной композиции содержит от приблизительно 500 до приблизительно 2,5»109 телец.
  19. 19. Применение по п.18, отличающееся тем, что форма разовой дозы указанной композиции содержит от приблизительно 10 000 до приблизительно 50 миллионов телец.
  20. 20. Применение по любому из пп.10-19, отличающееся тем, что расстройство представляет собой опосредованное функцией Т-клеток расстройство, выбранное из язв и аутоиммунных расстройств.
  21. 21. Применение по п.20, отличающееся тем, что расстройство представляет собой аутоиммунное расстройство, выбранное из склеродермии, псориаза и ревматоидного артрита.
  22. 22. Применение по любому из пп.10-19, отличающееся тем, что расстройство представляет собой воспалительную аллергическую реакцию.
  23. 23. Применение по п.22, отличающееся тем, что расстройство представляет собой контактную гиперчувствительность.
  24. 24. Применение по п.23, отличающееся тем, что расстройство представляет собой аллергическую реакцию замедленного типа.
  25. 25. Применение композиции, содержащей фармацевтически приемлемые биосовместимые тельца, имеющие размер в интервале от приблизительно 20 нм до приблизительно 500 мкм и несущие на себе активные группы, представляющие собой, в основном, фосфоглицеридные группы или группы, способные к превращению в фосфоглицеридные группы, причём указанная композиция существенно свободна от фармацевтически активных нелипидных форм, в производстве лекарственного средства для лечения или профилактики расстройства, связанного с дисфункцией эндотелия, выбранного из болезни закупорки периферических артерий, застойной сердечной недостаточности, желудочковой экстрасистолии, смерти от внезапной остановки сердца, удара, инфаркта миокарда, стенокардии, гипертензии, вазоспастического
    - 19 007426 расстройства, ишемического повреждения и ишемического повреждения вследствие повторной перфузии.
  26. 26. Применение по любому из пп.10-19, отличающееся тем, что оно направлено на производство лекарственного средства для лечения или профилактики расстройства, в котором участвует неадекватная экспрессия цитокинов.
  27. 27. Применение по п.26, отличающееся тем, что расстройство представляет собой нейродегенеративное заболевание.
  28. 28. Применение по п.27, отличающееся тем, что нейродегенеративное заболевание выбрано из синдрома Дауна, болезни Альцгеймера, болезни Паркинсона, старческого слабоумия, депрессии, болезни Хантингтона, заболеваний периферической нервной системы, синдрома Гийена-Барре, заболеваний спинного мозга, заболеваний, связанных с невропатологией суставов, хронических заболеваний с воспалительной демиелинизацией, мононевропатии, полиневропатии, симметричной периферической сенсорной невропатии, расстройств нервно-мышечных соединений, миастений и бокового амиотрофического склероза (БАС).
  29. 29. Применение по п.28, отличающееся тем, что нейродегенеративное заболевание представляет собой болезнь Альцгеймера, болезнь Паркинсона или БАС.
  30. 30. Применение композиции в форме разовых дозировок, содержащей фармацевтически приемлемые биосовместимые тельца, имеющие размер в интервале от приблизительно 20 нм до приблизительно 500 мкм, в количестве от приблизительно 500 до приблизительно 2,5»109 телец, причём указанные тельца имеют на своей поверхности активные группы, представляющие собой фосфоглицеридные группы или группы, способные к превращению в фосфоглицеридные группы, и при этом указанная композиция существенно свободна от фармацевтически активных нелипидных форм, в производстве лекарственного средства для лечения или профилактики атеросклероза.
  31. 31. Применение по п.30, отличающееся тем, что тельца представляют собой содержащие фосфатидилглицерин липосомы.
  32. 32. Применение по п.31, отличающееся тем, что липосомы на 50-90% состоят из фосфатидилглицерина.
  33. 33. Композиция, способная вызывать у млекопитающего противовоспалительную реакцию ίη νΐνο, характеризующаяся тем, что указанная композиция содержит фармацевтически приемлемые липосомы, имеющие размер от приблизительно 20 нм до приблизительно 500 мкм, причём липосомы содержат по массе от 50 до 90% фосфатидилглицерина с его фосфоглицеридными активными группами, расположенными на их внешней стороне, и при этом липосомы существенно свободны от нелипидных фармацевтически активных форм.
  34. 34. Композиция по п.33, отличающаяся тем, что липосомы содержат по меньшей мере 60 мас.% фосфатидилглицерина.
  35. 35. Композиция по п.34, отличающаяся тем, что липосомы содержат приблизительно 70-90% из фосфатидилглицерина.
  36. 36. Композиция по любому из пп.33-35, отличающаяся тем, что остальная часть липосомы представляет собой неактивный сокомпонент.
  37. 37. Композиция по п.36, отличающаяся тем, что неактивный сокомпонент представляет собой фосфатидилхолин.
  38. 38. Композиция по любому из пп.33-37, отличающаяся тем, что указанная композиция свободна от нелипидных фармацевтически активных форм.
  39. 39. Композиция по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что липосомы имеют размер приблизительно от 50 до 500 нм.
  40. 40. Композиция по п.39, отличающаяся тем, что липосомы имеют размер приблизительно от 80 до 120 нм.
  41. 41. Композиция по любому из пп.33-40, отличающаяся тем, что содержит смесь указанных содержащих фосфатидилглицерин (ФГ) липосом с неактивными липосомами и/или липосомами, состоящими из фосфолипидов, действующих по другому механизму, причём ФГ липосомы составляют по меньшей мере 10% от всей смеси.
EA200400888A 2002-01-21 2003-01-21 Фармацевтически приемлемые тельца, несущие фосфат глицерина EA007426B1 (ru)

Applications Claiming Priority (7)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CA002368656A CA2368656A1 (en) 2002-01-21 2002-01-21 Receptor-ligand pairing for anti-inflammatory response
US5138102A 2002-01-22 2002-01-22
US35142702P 2002-01-28 2002-01-28
US36462002P 2002-03-18 2002-03-18
US37210602P 2002-04-15 2002-04-15
US40085702P 2002-08-02 2002-08-02
PCT/CA2003/000065 WO2003061667A1 (en) 2002-01-21 2003-01-21 Pharmaceutically acceptable phosphate-glycerol carrying bodies

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA200400888A1 EA200400888A1 (ru) 2005-04-28
EA007426B1 true EA007426B1 (ru) 2006-10-27

Family

ID=27617925

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA200400888A EA007426B1 (ru) 2002-01-21 2003-01-21 Фармацевтически приемлемые тельца, несущие фосфат глицерина

Country Status (14)

Country Link
US (3) US20030175334A1 (ru)
EP (2) EP1467740A1 (ru)
JP (2) JP2005515243A (ru)
KR (1) KR20040089118A (ru)
CN (1) CN1620301A (ru)
AR (2) AR038203A1 (ru)
BR (2) BR0307018A (ru)
CA (5) CA2368656A1 (ru)
EA (1) EA007426B1 (ru)
MA (1) MA27168A1 (ru)
MX (1) MXPA04007042A (ru)
PE (1) PE20030973A1 (ru)
TW (2) TW200302281A (ru)
WO (3) WO2003061667A1 (ru)

Families Citing this family (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20050058698A1 (en) * 2002-01-21 2005-03-17 Nolan Yvonne Mairead Pharmaceutically acceptable phosphate-glycerol carrying bodies and uses relating to Parkinson's Disease
WO2004082688A1 (en) * 2003-03-20 2004-09-30 Vasogen Ireland Limited Phosphatidylglycerol (pg) receptor agonists and antagonists
EP1658086A2 (en) * 2003-07-21 2006-05-24 Vasogen Ireland Limited Liposomes containing phosphate glycerol groups for treating acute inflammatory condition
US20060008517A1 (en) * 2004-07-09 2006-01-12 Lynch Marina A Treatment of age-related memory impairment
US20060105032A1 (en) * 2004-09-15 2006-05-18 Lynch Marina A Multiple sclerosis treatment
WO2006107107A1 (ja) * 2005-04-01 2006-10-12 Fumitaka Ohsuzu リン脂質小胞体を含む心筋保護剤および虚血・再潅流時の心筋障害を予防する方法
AU2006294756A1 (en) * 2005-09-26 2007-04-05 Vasogen Ireland Limited Treatment of inflammation and vascular abnormalities of the eye
WO2007044748A2 (en) * 2005-10-11 2007-04-19 University Of Pittsburgh Sphingomyelin liposomes for the treatment of hyperactive bladder disorders
WO2007131329A1 (en) * 2006-05-12 2007-11-22 Vasogen Ireland Limited Treatment of ubiquitin-proteasome system dysfunction related disorders
GB2486371A (en) * 2009-08-21 2012-06-13 Targeted Delivery Technologies Ltd Vesicular formulations
GB201205642D0 (en) 2012-03-29 2012-05-16 Sequessome Technology Holdings Ltd Vesicular formulations
BR112014031278B1 (pt) * 2012-06-14 2020-12-01 Universitaet Bern uso de lipossomos vazios, mistura de lipossomos vazios, bicamadas lipídicas ou monocamadas lipídicas, bem como mistura de lipossomos vazios
JP6417648B2 (ja) * 2013-07-30 2018-11-07 株式会社豊田中央研究所 エタノールアミンリン酸の利用
JP6139781B2 (ja) * 2014-04-04 2017-05-31 国立大学法人大阪大学 リゾリン脂質受容体を活性化する物質を含有する薬剤送達促進剤
WO2016185816A1 (ja) * 2015-05-18 2016-11-24 不二製油グループ本社株式会社 ＩＬ－１β産生抑制作用を有する食品添加用組成物
EP3954361A1 (en) 2015-06-30 2022-02-16 Sequessome Technology Holdings Limited Multiphasic compositions
CN116549393A (zh) * 2017-03-02 2023-08-08 康柏辛股份有限公司 抑制生物膜形成的脂质体
CN115531399A (zh) * 2022-09-15 2022-12-30 首都医科大学 溶血磷脂酰胆碱在治疗阿尔茨海默病中的应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1990011781A1 (en) * 1989-04-04 1990-10-18 Alcon Laboratories, Inc. The use of liposomes for the delivery of therapeutic agents to wounds, cuts and abrasions
US5262405A (en) * 1990-02-20 1993-11-16 Synthelabo Method of improving bronchial mucus transport
WO1995023592A1 (en) * 1994-03-04 1995-09-08 The University Of British Columbia Liposome compositions and methods for the treatment of atherosclerosis

Family Cites Families (34)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2518718A1 (fr) * 1981-12-23 1983-06-24 Djelalian Madeleine Procede pour capter et exploiter au maximum le rayonnement solaire global, dispositifs pour la mise en oeuvre de ce procede et capteurs solaires en resultant
US4485054A (en) * 1982-10-04 1984-11-27 Lipoderm Pharmaceuticals Limited Method of encapsulating biologically active materials in multilamellar lipid vesicles (MLV)
US4789633A (en) * 1984-04-19 1988-12-06 University Of Tennessee Research Corporation Fused liposome and acid induced method for liposome fusion
US4946787A (en) * 1985-01-07 1990-08-07 Syntex (U.S.A.) Inc. N-(ω,(ω-1)-dialkyloxy)- and N-(ω,(ω-1)-dialkenyloxy)-alk-1-yl-N,N,N-tetrasubstituted ammonium lipids and uses therefor
US5192528A (en) * 1985-05-22 1993-03-09 Liposome Technology, Inc. Corticosteroid inhalation treatment method
US4812314A (en) * 1986-02-24 1989-03-14 Yissum Research & Dev. Co. Of The Hebrew Univ. Of Jerusalem And Hadassah Medical Organization Lipid replacement therapy
US5252263A (en) * 1986-06-16 1993-10-12 The Liposome Company, Inc. Induction of asymmetry in vesicles
US5229376A (en) * 1986-09-25 1993-07-20 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army Encapsulated plant-derived phosphatidylinositol (PI) compositions for the prevention of mitogenically induced cell proliferation
US4963297A (en) * 1987-12-22 1990-10-16 The Liposome Company, Inc. Spontaneous vesticulation of multilamellar liposomes
US4863739A (en) * 1987-05-19 1989-09-05 Board Of Regents, The University Of Texas System Liposome compositions of anthracycline derivatives
FR2617170B1 (fr) * 1987-06-25 1989-12-22 Inst Nat Sante Rech Med Nouveaux derives peptidiques et leur application notamment en therapeutique
EP0469082B1 (en) * 1989-04-18 1995-04-05 Vestar, Inc. Liposomal targeting of ischemic tissue
US5188951A (en) * 1990-04-17 1993-02-23 The Liposome Company, Inc. Enzymatic synthesis of soluble phosphatides from phospholipids
DE4018767A1 (de) * 1990-06-12 1991-12-19 Braun Melsungen Ag Wirkstofffreie liposomen zur behandlung von atherosklerose
US5556637A (en) * 1990-08-06 1996-09-17 A. Nattermann & Cie. Gmbh Water containing liposome system
IT1249063B (it) * 1991-05-28 1995-02-11 Fidia Spa Impiego di derivati fosfolipidici per la preparazione di composizioni farmaceutiche aventi attivita' immunosoppressiva
EP0673384A4 (en) * 1992-12-10 1996-10-09 Univ Minnesota POLYPEPTIDES USEFUL IN TREATING INFLAMMABLE DISEASES.
US5637315A (en) * 1993-01-04 1997-06-10 Thomas Jefferson University Treatment of disease states induced by oxidative stress
ES2072223B1 (es) * 1993-11-25 1996-03-16 Lipotec Sa Liposomas encapsulando doxorubicina.
US6312719B1 (en) * 1994-03-04 2001-11-06 The University Of British Columbia Liposome compositions and methods for the treatment of atherosclerosis
US6139871A (en) * 1995-07-26 2000-10-31 The University Of British Columbia Liposome compositions and methods for the treatment of atherosclerosis
US6773719B2 (en) * 1994-03-04 2004-08-10 Esperion Luv Development, Inc. Liposomal compositions, and methods of using liposomal compositions to treat dislipidemias
US5746223A (en) * 1996-10-11 1998-05-05 Williams; Kevin Jon Method of forcing the reverse transport of cholesterol from a body part to the liver while avoiding harmful disruptions of hepatic cholesterol homeostasis
JPH08183740A (ja) * 1994-12-28 1996-07-16 Nippon Steel Corp 細胞接着阻害剤及び該阻害剤を含む抗炎症剤
US5643599A (en) * 1995-06-07 1997-07-01 President And Fellows Of Harvard College Intracellular delivery of macromolecules
US5741514A (en) * 1995-08-31 1998-04-21 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Method for reducing serum lipoprotein(a) concentration
CN1200036A (zh) * 1995-09-14 1998-11-25 Lxr生物技术有限公司 含有磷脂混合物并具有抗细胞程序死亡活性的组合物
US6080422A (en) * 1995-10-11 2000-06-27 Talaria Therapeutics, Inc. Methods of angioplasty and cardiac catheterization
US6491922B1 (en) * 1996-02-09 2002-12-10 Cornell Research Foundation, Inc. Methods and compounds for treating autoimmune and vascular disease
AU2549297A (en) * 1996-03-28 1997-10-17 Board Of Trustees Of The University Of Illinois, The Materials and methods for making improved echogenic liposome compositions
US20020115609A1 (en) * 1997-07-14 2002-08-22 Hayat Onyuksel Materials and methods for making improved micelle compositions
JPH11308562A (ja) * 1998-04-20 1999-11-05 Minolta Co Ltd デジタルカメラシステム
US6251932B1 (en) * 1998-09-25 2001-06-26 Asta Medica Ag Immunophilin ligands
AU2001278336B2 (en) * 2000-07-31 2007-01-18 Ottawa Heart Institute Research Corporation Charged phospholipid compositions and methods for their use

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1990011781A1 (en) * 1989-04-04 1990-10-18 Alcon Laboratories, Inc. The use of liposomes for the delivery of therapeutic agents to wounds, cuts and abrasions
US5262405A (en) * 1990-02-20 1993-11-16 Synthelabo Method of improving bronchial mucus transport
WO1995023592A1 (en) * 1994-03-04 1995-09-08 The University Of British Columbia Liposome compositions and methods for the treatment of atherosclerosis

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
HAMMEL MICHAL ET AL.: "Mechanism of the interaction of beta2-glycoprotein I with negatively charged phospholipid membranes." 27 November 2001 (2001-11-27), BIOCHEMISTRY, VOL. 40, NR. 47, PAGE(S) 14173-14181, XP002237429, ISSN: 0006-2960, page 14173, paragraph 1 abstract *

Also Published As

Publication number Publication date
JP2005515242A (ja) 2005-05-26
WO2003061620A2 (en) 2003-07-31
MXPA04007042A (es) 2005-06-20
WO2003061667A1 (en) 2003-07-31
TW200302735A (en) 2003-08-16
EA200400888A1 (ru) 2005-04-28
CN1620301A (zh) 2005-05-25
AR047005A1 (es) 2006-01-04
WO2003061666A1 (en) 2003-07-31
AR038203A1 (es) 2005-01-05
BR0307018A (pt) 2005-02-09
TWI283181B (en) 2007-07-01
KR20040089118A (ko) 2004-10-20
EP1467740A1 (en) 2004-10-20
MA27168A1 (fr) 2005-01-03
CA2368656A1 (en) 2003-07-21
CA2416791A1 (en) 2003-07-21
WO2003061620A3 (en) 2003-10-16
PE20030973A1 (es) 2003-12-09
TW200302281A (en) 2003-08-01
CA2473490A1 (en) 2003-07-31
EP1467741A1 (en) 2004-10-20
US20030175334A1 (en) 2003-09-18
CA2471740A1 (en) 2003-07-31
US20040013718A1 (en) 2004-01-22
JP2005515243A (ja) 2005-05-26
US20080160074A1 (en) 2008-07-03
BR0307041A (pt) 2004-10-26
CA2473395A1 (en) 2003-07-31

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA007426B1 (ru) Фармацевтически приемлемые тельца, несущие фосфат глицерина
US6953591B2 (en) Apoptosis-mimicking synthetic entities and use thereof in medical treatment
US7597906B2 (en) Apoptosis-mimicking synthetic entities and use thereof in medical treatment
US20060008517A1 (en) Treatment of age-related memory impairment
US20070238708A1 (en) Acute Inflammatory Condition Treatment
Domingos et al. Influence of sphingomyelin and TNF-α release on lethality and local inflammatory reaction induced by Loxosceles gaucho spider venom in mice
AU2003201569B2 (en) Pharmaceutically acceptable phosphate-glycerol carrying bodies
US20050058698A1 (en) Pharmaceutically acceptable phosphate-glycerol carrying bodies and uses relating to Parkinson&#39;s Disease
US20080075764A1 (en) Pharmaceutically acceptable phosphate-glycerol carrying bodies
Bird et al. The reactivity of neutrophils at the site of an acute inflammatory reaction as measured by chemiluminescence
ZA200405702B (en) Pharmaceutically acceptable phosphate-glycerol carrying bodies
AU2003201569A1 (en) Pharmaceutically acceptable phosphate-glycerol carrying bodies
UA80111C2 (en) Pharmaceutically acceptable phosphate-glycerol carrying bodies (variants)
AU2003201568A1 (en) Phospholipid bodies and use thereof in the treatment of inflammatory and autoimmune diseases
MXPA04007041A (es) Cuerpos de inclusion de fosfolipidos y uso de los mismos en tratamientos medicos.

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM

MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): RU