JP2005515242A - リン脂質本体ならびに炎症性疾患および自己免疫疾患の処置におけるその使用 - Google Patents

Abstract

本発明は、生物学的活性を有する、合成組成物および半合成組成物、ならびに哺乳動物患者における種々の障害の処置および／または予防におけるそれらの使用に関する。より詳細には、本発明は、患者の本体への導入後に、有益な抗炎症性の、器官保護および免疫調節効果を生じる、合成本体および半合成本体の調製および使用に関する。本発明はまた、炎症性疾患および自己免疫疾患ならびにそれらの徴候を緩和するための、処置および組成物に関する。

Description

（発明の分野）
本発明は、生物学的活性を有する合成組成物および半合成組成物、ならびに哺乳動物患者における種々の障害の処置および／または予防におけるそれらの使用に関する。より詳細には、本発明は、患者の体内に導入された後、有益な抗炎症性の、器官保護効果および免疫調節効果を生じる合成体および半合成体の調製および使用に関する。本発明はまた、炎症性疾患および自己免疫疾患ならびにそれらの徴候を緩和するための処置および組成物に関する。

（発明の背景）
樹状細胞（ＤＣ）およびマクロファージ（Ｍｐｈ）を含む、専門的な抗原提示細胞（ＡＰＣ）は、抗原（Ａｇ）を能動的に捕捉および処理し、そして感染性生物、細胞片、および死滅細胞（死滅細胞由来の残骸を含む）を除去する細胞型である。このプロセスの間、ＡＰＣは、遭遇したＡｇまたは細胞残骸の性質およびＡＰＣの成熟／活性化レベルに依存して、炎症誘発性（ｐｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ）Ｔｈ１サイトカイン（ＩＬ−１２、ＩＬ−１、ＩＮＦ−γ、ＴＮＦ−αなど）または調節／抗炎症性Ｔｈ２／Ｔｈ３サイトカイン（例えば、ＩＬ−１０、ＴＧＦ−β、ＩＬ−４など）のいずれかにより支配される応答の生成を刺激し得る。

ＡＰＣは、細胞片を除去する。そのうちのいくつかは、身体の細胞膜に由来し、いくらかは細菌および寄生虫の感染および共生生物（例えば、腸細菌）に由来する。この細胞片には、炎症誘発性応答を開始するものもあり、保護および抗炎症性応答を開始するものもある。

正常に機能する免疫系は、外来侵入生物の抗原（非自己）と「自己」由来の組織または残骸の抗原とを区別し得、外来抗原に対してのみ免疫応答を惹起する。患者の免疫系が、自己と非自己を区別できない場合、自己免疫障害が生じる。

（発明の要旨）
本発明は、リン酸セリンおよびリン酸グリセロール以外の特定の反応性化学基（例えば、アニオン性リン脂質基）を含む、リポソーム、ビーズ、または類似の粒子のような本体が、哺乳動物患者に投与された際に、抗炎症効果を引き起こし、従って多くの疾患を処置するのに使用され得るという発見に関する。これらの本体はまた、それらの表面上の微量成分として、不活性構成成分、および／または異なる機構を通して活性な構成成分をさらに含む。

好ましい実施形態において、本発明は、哺乳動物においてインビボで抗炎症性応答を生成し得る組成物に関する。この組成物は、約２０ナノメートル（ｎｍ）〜５００マイクロメートル（μｍ）の大きさの薬学的に受容可能な本体を含み、リン酸セリンおよびリン酸グリセロール以外の、哺乳動物免疫系の細胞上のレセプターと反応し、抗炎症に有利に免疫系のサイトカインプロフィールを変更する複数の反応性化学基（本明細書中以降で、「抗炎症促進基」）を含む。抗炎症促進基としては、リン酸セリンおよびリン酸グリセロール以外の、特定のアニオン性および他のリン脂質の活性基、特定のペプチドおよびその合成模倣物、アダプタータンパク質、脂質、リポタンパク質などが挙げられる（以下により詳細に記載される）。この本体は、この基を通して、哺乳動物への投与後にその哺乳動物の免疫系と相互作用し、この哺乳動物においてインビボで抗炎症性応答を生成すると考えられる。好ましくは、この本体は、非脂質性の薬学的に活性な実体を本質的に含まない。好ましくは、この基は、本体上の活性な表面基の６０〜１００％を構成する。この本体はまた、いくつかの徴候においては、それらの表面上の微量成分として、不活性構成成分（例えば、ホスフェート−コリン）を、または別の機構を通して活性である構成成分（例えば、リン酸セリン）を保有し得る。

別の実施形態において、本発明は、主要成分として、少なくとも１つの抗炎症促進リガンドを含むよう改変されている三次元的な合成、半合成、または天然の本体（別途、本明細書中で、薬学的に受容可能な本体として言及される）に関する。このリガンドは、ＰＧまたはＰＳ以外のアニオン性リン脂質であり、ＰＧおよびＰＳは以下に規定される通りである。

なお別の実施形態において、本発明は、２０ｎｍ〜５００μｍの範囲の大きさを有し、そしてそれらの表面上にリン酸グリセロールおよびリン酸セリン以外の抗炎症促進基を有する三次元的な合成、半合成、または天然の本体（別途、本明細書中で、薬学的に受容可能な本体として言及される）に関する。

別の局面において、本発明は、Ｔ細胞機能により媒介される障害を処置するための方法に関する。この方法は、Ｔ細胞機能により媒介される障害の進行を阻害および／または低減するのに有効数の抗炎症促進基を有する有効量の薬学的に受容可能な本体を哺乳動物患者に投与する工程を包含する。

本発明はさらに、炎症性障害を処置する方法に関する。この方法は、炎症障害の進行を阻害および／または低減するのに有効数の抗炎症促進基を有する有効量の薬学的に受容可能な本体を患者に投与する工程を包含する。

本発明のなお別の実施形態は、内皮機能障害を処置する方法である。この方法は、内皮機能障害の進行を阻害および／または低減するのに有効数の抗炎症促進基を有する有効量の薬学的に受容可能な本体を哺乳動物患者に投与する工程を包含する。

別の実施形態は、不適切なサイトカイン発現により特徴付けられる免疫障害を処置する方法である。この方法は、免疫障害の進行を阻害および／または低減するのに有効数の抗炎症促進基を有する有効量の薬学的に受容可能な本体を哺乳動物患者に投与する工程を包含する。

本発明はさらに、哺乳動物心臓障害、患者の心電図における延長されたＱＴ−ｃ間隔を観察することにより検出可能な感受性の存在の処置または予防のためのプロセスに関する。この方法は、それに罹患しているかまたはそれに対して感受性の患者に、薬学的に受容可能な生体適合性の合成、半合成、または天然の本体（別途、本明細書中で薬学的に受容可能な本体と言及される）および薬学的に受容可能なキャリアを含む薬学的組成物を投与する工程を包含する。この本体の少なくとも一部は、約２０ｎｍ〜５００μｍの範囲であり、そしてこの本体の表面は、主要成分として、少なくとも１つの抗炎症促進基を有するよう改変されており、この基は、リン酸グリセロールおよびリン酸セリン以外の抗炎症性基である。

本発明の別の実施形態は、哺乳動物患者への投与のための、単回投薬形態での薬学的組成物である。この薬学的組成物は、薬学的に受容可能な本体および薬学的に受容可能なキャリアを含み、この本体の少なくとも一部は、約２０ｎｍ〜５００μｍの範囲の大きさを有し、そしてこの本体の表面は、抗炎症促進基を有し、単回投薬量は、５００〜２．５×１０^９個の本体を含み、この基は、リン酸グリセロールおよびリン酸セリン以外の抗炎症促進基である。

本発明のさらなる実施形態は、薬学的に受容可能な生体適合性の合成、半合成、または天然の本体（別途、本明細書中で薬学的に受容可能な本体として言及される）および薬学的に受容可能なキャリアを含む薬学的組成物に関する。この本体の少なくとも一部は、約２０ｎｍ〜５００μｍの大きさを有し、そしてこの本体の表面は、主要成分として、少なくとも１つの抗炎症促進基を有するよう改変されており、この基は、リン酸グリセロールおよびリン酸セリン以外の抗炎症促進基である。

必要に応じて、上記の本体は、さらに、不活性構成要素表面基または別の機構によって活性である構成要素表面基（例えば、ホスファチジルセリン）を保有し得る（例えば、Ｆａｄｏｋら，国際公開ＷＯ ０１／６６７８５を参照のこと）。

別の実施形態では、本発明は、結合基として抗炎症促進性のリガンド基を保有する、凍結乾燥またはフリーズドライされた薬学的に受容可能な本体、ならびに抗炎症促進基または抗炎症促進基へと変換され得る基を保有する、凍結乾燥またはフリーズドライされた本体、および薬学的に受容可能なキャリアを含む、キットに関し、ここで、この基は、リン酸グリセロールおよびリン酸セリン以外の抗炎症促進基である。

別の局面では、本発明は、Ｔ細胞機能媒介障害を処置するための方法に関し、この方法は、Ｔ細胞機能媒介障害に罹患しているかまたはその危険性がある哺乳動物患者に、薬学的に受容可能な本体を含む有効量の組成物を投与する工程を包含し、この本体は、約２０ｎｍ〜約５００μｍのサイズを有し、その表面に、リン酸グリセロールもしくはリン酸セリン以外の複数の抗炎症促進基、またはこの抗炎症促進基へと変換され得る基を含み、その結果、投与されると、Ｔ細胞機能媒介障害の進行が阻害および／または低減される。

本発明のなお別の実施形態は、内皮機能の障害を処置するための方法に関し、この方法は、内皮機能の障害に罹患しているかまたはその危険性がある哺乳動物患者に、薬学的に受容可能な本体を含む有効量の組成物を投与する工程を包含し、この本体は、約２０ｎｍ〜約５００μｍのサイズを有し、その表面に、リン酸グリセロールもしくはリン酸セリン以外の複数の抗炎症促進基、またはこの抗炎症促進基へと変換され得る基を含み、その結果、投与されると、内皮機能媒介障害の進行が阻害および／または低減される。

本発明の別の実施形態は、免疫障害を処置するための方法に関し、この方法は、免疫障害に罹患しているかまたはその危険性がある哺乳動物患者に、薬学的に受容可能な本体を含む有効量の組成物を投与する工程を包含し、この本体は、約２０ｎｍ〜約５００μｍのサイズを有し、その表面に、リン酸グリセロールもしくはリン酸セリン以外の複数の抗炎症促進基、またはこの抗炎症促進基へと変換され得る基を含み、その結果、投与されると、免疫障害の進行が阻害および／または低減される。

本発明の別の実施形態は、炎症障害を処置するための方法に関し、この方法は、炎症障害に罹患しているかまたはその危険性がある哺乳動物患者に、薬学的に受容可能な本体を含む有効量の組成物を投与する工程を包含し、この本体は、約２０ｎｍ〜約５００μｍのサイズを有し、その表面に、リン酸グリセロールもしくはリン酸セリン以外の複数の抗炎症促進基、またはこの抗炎症促進基へと変換され得る基を含み、その結果、投与されると、炎症障害の進行が阻害および／または低減される。

（好ましい実施形態の説明）
本発明によれば、抗炎症促進性のリガンド基をその表面に保有する薬学的に受容可能な本体が患者に投与される。何らかの１つの理論に限定されることを望まないが、これらの本体は、インビボでの炎症誘発性サイトカインの阻害および／または抗炎症性サイトカインの促進のような有益な効果を伴って、患者の免疫系と相互作用すると考えられる。反応性細胞は、免疫細胞（例えば、プロフェッショナル（ｐｒｏｆｅｓｓｉｏｎａｌ）抗原提示細胞または非プロフェッショナル抗原提示細胞）、内皮細胞、調節細胞（例えば、ＮＫ−Ｔ細胞）などであり得る。

これらの薬学的に受容可能な本体としては、代表的には回転楕円体、円筒体、楕円体（扁平楕円回転楕円体および長楕円回転楕円体を含む）、蛇行状、腎臓型などであるがこれらに限定されない形状を有する、合成、半合成および天然の本体が挙げられ、そして直径（好ましくは、その長軸に沿って測定される）が約２０ｎｍ〜約５００μｍのサイズである。

薬学的に受容可能な本体は、１つの実施形態では、ＰＳレセプターまたはＰＧレセプターを排他的に除いたインビボで抗原提示細胞上の適切なレセプターと相互作用し得る様式で、外表面に、所定の特徴のうちの１以上の抗炎症促進基を有する。これらの基の構造は、合成的に変更され得、そして元の抗炎症促進基のすべて、一部または改変版を含み得る。

本明細書中で用いられる場合、用語「ＰＧ」は、広範囲の少なくとも１つの脂肪酸鎖を有するリン酸グリセロール基を保有するリン脂質を包含することが意図される。ただし、得られるＰＧ実体は、リポソームの構成成分として関与し得る。好ましくは、このようなＰＧ化合物は、式Ｉによって表され得る：

ここで、ＲおよびＲ^１は、飽和または不飽和の、直鎖または限定された量の分枝を含む、Ｃ_１〜Ｃ_２４炭化水素鎖から独立して選択され、ここで、少なくとも１つの鎖は、１０〜２４の炭素原子を有する。本質的に、脂質鎖ＲおよびＲ^１は、活性成分というよりむしろ、リポソームの構成成分を形成する。従って、これらは、構造的な機能を満たしさえすれば同じであっても異なっていてもよい、２つまたは１つのこのような脂質鎖を含むように変動し得る。好ましくは、脂質鎖は、飽和、一不飽和または多価不飽和の、直鎖であるか、または制限された量の分枝を有する、約１０〜約２４炭素原子長であり得る。ラウレート（Ｃ１２）、ミリステート（Ｃ１４）、パルミテート（Ｃ１６）、ステアレート（Ｃ１８）、アラキデート（Ｃ２０）、ベヘネート（Ｃ２２）およびリグノセレート（Ｃ２４）は、本発明において使用するためのＰＧについて有用な飽和脂肪鎖の例である。パルミトレエート（Ｃ１６）、オレエート（Ｃ１８）は、適切な一不飽和脂肪鎖の例である。リノレエート（Ｃ１８）、リノレネート（Ｃ１８）およびアリキドネート（ａｒｉｃｈｉｄｏｎａｔｅ）（Ｃ２０）は、本発明のリポソームにおけるＰＧの使用に適切な多価不飽和脂肪鎖の例である。本発明においても有用な、このような脂肪鎖を１つ有するリン脂質は、リゾリン脂質（ｌｙｓｏｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ）として公知である。本発明はまた、活性成分が二量体形態のＰＧ（すなわち、カルジオリピンであるが、式Ｉの他の二量体もまた適切である）であるリポソームの使用を包含するように拡大される。好ましくは、このような二量体は、合成架橋剤（例えば、マレイミド）と合成的に架橋されず、むしろ、Ｌｅｈｎｉｇｅｒ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，５２５頁（１９７０）によって記載され、そして以下の反応によって図示されるようなグリセロール単位の除去によって架橋される：

ここで、各ＲおよびＲ^１は、独立して、上記で定義した通りである。

本明細書中で用いられる場合、用語「ＰＳ」は、ホスファチジルセリンおよびそれらのアナログ／誘導体を包含するが、ただし、このようなアナログ／誘導体は、ホスファチジルセリンレセプターの活性を増強または刺激することが意図される。

好ましい実施形態では、これらの抗炎症促進基は、リン酸グリセロールまたはリン酸セリン以外のアニオン性リン脂質である。最も好ましい実施形態では、アニオン性リン脂質は、リン酸イノシトールである。イノシトール（ヘキサヒドロキシシクロヘキサン）は、そのヒドロキシル基のうちの１つを通して、ホスファチジルイノシトールＰＩ中のホスフェート基へと化学的に連結する。核と比較してのヒドロキシル基の配置に関して、イノシトールの種々の立体異性体が存在する。このような立体異性体形態のＰＩの全ては、本明細書中で用いられる場合の用語ホスファチジルイノシトールおよびＰＩの範囲内に含まれる。

改変された活性基を有する、ホスファチジルイノシトールアナログ（これはまた、抗原提示細胞上のＰＩレセプターと相互作用するか、さもなければ、レシピエント体において抗炎症性反応をもたらす）は、用語ホスファチジルイノシトールの範囲内であることが意図される。これは、ヒドロキシル基および／もしくはホスフェート基のうちの１以上が誘導体化されているかまたは塩の形態にある化合物を包含するがこれらに限定されない。多くのこのような化合物は、投与の際または投与後にインビボで、遊離のヒドロキシル基を形成する。

天然に存在するホスファチジルイノシトール（ＰＩ）は、細胞膜中のマイナーな天然のリン脂質である。化学的に、これは、ホスホ−イノシトール基、グリセロール基および類似するが異なる一対のＣ_１８〜Ｃ_２０脂肪酸鎖を有し、その結果、これは、以下の化学式によって表され得る：

ここで、Ｒは、アリキドネート（Ｃ_２０、Δ５，８，１１，１４）を表し、そしてＲ^１は、ステアレート（Ｃ_１８，飽和）を表す。上記の通りの天然のＰＩ化合物は、本発明において用いられるリポソームのうちの最も好ましい活性な構成要素を構成するが、脂質鎖の性質および数のバリエーションは、範囲内である。本質的に、脂質鎖は、活性成分というよりむしろ、リポソームの構成成分を形成する。従って、これらは、構造機能を満たす限り、同じであっても異なっていてもよい、２または１つのこのような脂質鎖を含むように変更され得る。一般に、脂質鎖は、飽和、一不飽和または多価不飽和の、直鎖であるか、または制限された量の分枝を有する、約１０〜約２４炭素原子長であり得る。ラウレート（Ｃ１２）、ミリステート（Ｃ１４）、パルミテート（Ｃ１６）、ステアレート（Ｃ１８）、アラキデート（Ｃ２０）、ベヘネート（Ｃ２２）およびリグノセレート（Ｃ２４）は、本発明において使用するためのＰＩについての有用な飽和脂質鎖の例である。パルミトレエート（Ｃ１６）、オレエート（Ｃ１８）は、適切な一不飽和脂質鎖の例である。リノレート（Ｃ１８）、リノレネート（Ｃ１８）およびアリキドネート（Ｃ２０）は、本発明のリポソームにおけるＰＩに使用するための適切な多価不飽和脂質鎖の例である。脂質鎖の立体構造は重要ではなく、そしてこのような全ての立体異性体は、本発明の定義内に包含される。

単一のこのような脂質鎖を有するリン脂質（本発明においても有用）は、リゾリン脂質として公知である。このような全てのバリエーションは、ＰＩの定義内に含まれる。

本発明はまた、別の局面から、ホスフェート−イノシトール基へ特異的に結合する、哺乳動物免疫系の細胞（例えば、マクロファージ）上のレセプターの使用として、見られ得る。本発明は、リガンド、およびこのようなレセプターに結合して、結果として抗炎症応答を生じる基を含む本体を包含する。従って、本発明は、抗原提示細胞による本明細書中に記載されるようなホスフェート−イノシトール発現本体の結合または取り込みと競合するリガンドまたはその活性基を含む本体して規定され得る。当業者は、特定の本体が、単純な試験実験を実行することによって競合するものであるか否かを容易に決定し得る。例えば、本体は、容易に入手可能な単核細胞株（例えば、Ｕ９３７細胞）を用いて試験され得る。第１の実施形態において、Ｕ９３７細胞は、蛍光標識されたＰＩリポソーム単独とともにインキュベートされ、そして他の実験において、Ｕ９３７細胞は、蛍光標識されたＰＩリポソームおよび異なる量の試験化合物の両方の存在下でインキュベートされる。他の実験における蛍光標識されたＰＩリポソームの取り込みが、第１の実験の取り込みと比較して減少される場合、試験化合物は、特定のレセプターについて競合し、そして本発明の範囲内の化合物である。

化学活性基を有する上記リン脂質の混合物を有する本体を使用することもまた、本発明の範囲内であり、この混合物は、少なくとも１０％、好ましくは、少なくとも５０％、そして最も好ましくは、６０〜９０％の上記活性リン脂質（例えば、ＰＩ）を含む。不活性成分である少量の成分の代わりに、これは、別の機構によって活性であり得る。

「３次元本体部分」または「薬学的に受容可能な本体」の例としては、薬学の工業において通常使用されるような、天然または合成の生体適合性材料のリポソーム、中実ビーズ、中空ビーズ、充填ビーズ、粒子、顆粒およびミクロスフェアのような生体適合性の合成、半合成実体または天然の（例えば、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、ポリスチレン、ポリ（メチルメタクリレート）、など、ポリサッカリド（例えば、ヒドロキシエチルデンプン、ヒドロキシエチルセルロース、アガロースなど）が挙げられる。ビーズは、中実または中空であり得るか、生体適合性材料で充填され得る。用語「生体適合性」とは、使用される量において、非毒性であるか、または受容可能な毒性プロフィールを有さず、その結果、インビボでのそれらの使用が受容可能である物質をいう。このような本体としては、脂質から形成されるリポソームが挙げられ得、この１つは、例えば、ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）である。あるいは、薬学的に受容可能な本体は、生体適合性材料の、中実ビーズ、中空ビーズ、充填ビーズ、粒子、顆粒およびミクロスフェアであり得、これは、ポリエチレングリコール、ポリ（メチルメタクリレート）、ポリビニルピロリドン、ポリスチレンおよび幅広い範囲の他の天然、半合成および合成の材料のような１つ以上の生体適合性材料を、それらに結合されるホスフェート−グリセロールまたはホスフェートセリン以外の抗炎症促進基とともに含む。

上記のように、改変活性基を有するホスファチジルイノシトールのアナログ（これはまた、ＰＩと同じレセプター経路によって抗原提示細胞のＰＩレセプターと相互作用するか、またはそれ以外で、レシピエント身体において抗炎症性反応を生じる）は、用語ホスファチジルイノシトールの範囲内に企図される。これには、１つ以上のヒドロキシル基および／またはホスフェート基が誘導される化合物、またはその塩の形態が挙げられるが、限定されない。多くのこのような化合物は、投与の際にまたは投与に続いて、インビボで遊離ヒドロキシル基を形成し、従って、変換可能なＰＩ基を含む。

好ましい組成物は、リポソームであり、これは、種々の脂質から構成され得る。好ましくは、リポソームは、正に荷電しない。リポソーム、または脂質ビヒクルは、ミクロンの範囲またはサブミクロンの範囲の密封された嚢（ｓａｃ）であり、この壁は、適切な両親媒性物質からなる。これらは、通常、水性媒体を含む。一般的に、リポソームは、ホスファチジルコリン、ジアステロイルホスファチジルコリン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジン酸、リゾホスファチジン酸、リゾホスファチジルイノシトール、レシチン、ケファリン、セレブロシド（スフィンゴミエリン、およびスフィンゴシンを含む）から構成される。このようなリポソームは、活性極性基がリポソーム本体上に外面的に提示されるように調製および処理される。従って、本発明の好ましい実施形態は、合成または半合成または天然の本体を提供し、これは、１つ以上のリン脂質リガンドから誘導される活性抗炎症促進基をその表面に露出するか、または露出するように処理もしくは誘導され得る。これらのリン脂質は、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジン酸、リゾホスファチジン酸、リゾホスファチジルイノシトール、リゾホスファチジルコリン、リゾホスファチジルエタノールアミン、スフィンゴシルホスホリルコリン、スフィンゴシン−１−ホスフェート、セラミド、スフィンゴミエリン、およびこれらの２つ以上の組み合わせに見出される。これらのうちのいくつかは、活性であり、これらのうちの他のもの（例えば、ホスファチジルコリン）は、大部分の適用において不活性であると考えられるが、リポソームに構造を提供する。

リポソーム、または脂質ビヒクルは、ミクロンの範囲またはサブミクロンの範囲の密封された嚢（ｓａｃ）であり、この壁（単層または多層）は、適切な両親媒性物質を含む。これらは、通常、水性媒体を含むが、本発明のために、内部の内容物は、重要ではなく、そして一般的に、不活性である。従って、好ましい実施形態において、リポソーム、ならびに他の薬学的に受容可能な本体は、非脂質性の薬学的に重要な実体を本質的に含まず（例えば、＜１％）、より好ましくは、非脂質性の薬学的に重要な実体を含まない。このようなリポソームは、活性基がリポソーム本体上に外面的に提示されるように調製および処理される。本発明の好ましい実施形態のリン脂質は、このように、リガンドおよびリポソーム自体の構造成分として役立つ。

従って、本発明の好ましい実施形態は、１つ以上の基（好ましくは、ホスフェート−イノシトール）を結合基として作用するように露出するか、または露出するように処理もしくは誘導され得るリポソーム本体を提供する。非ＰＳ／非ＰＧ活性リン脂質は、１０％〜１００％のリポソームを構成し、残りは、不活性成分（例えば、ホスファチジルコリン）または異なる機構を介して作用するもの（例えば、ホスファチジルセリン）またはこのようなものの混合物である。ＰＣのような不活性成分が好ましい。

このようなリポソームの少なくとも１０重量％は、活性抗炎症促進基を有する１つ以上の非ＰＳ／ＰＧリン脂質から構成され、好ましくは、少なくとも５０％、より好ましくは、６０〜１００％、そして最も好ましくは、７０〜９０％がこの非ＰＳ／ＰＧリン脂質から構成され、１つの最も好ましい実施形態は、約７５重量％の活性リン脂質である。

本発明の使用のための好ましいリン脂質は、ホスファチジルイノシトールおよびホスファチジン酸であり、必要に応じて、少量部分（５０重量％未満まで）の別の不活性成分および／または別の機構により活性な成分（すなわち、ホスファチジルセリン）を伴う。本発明で使用される最も好ましい活性リン脂質は、ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）であり、さらにより好ましくは、リポソームは、約７０〜９０％の程度のＰＩで構成され、残りは、不活性リン脂質である。

化学的活性な基を有する異なる上記リン脂質のリポソーム混合物、およびこのようなリン脂質と不活性リポソームおよび／または異なる機構を介して作用するリン脂質のリポソームとの混合物もまた、使用され得るが、但し、活性リン脂質の合計量は、約１０％の最小量より上のままであり、好ましくは、混合物の合計の６０％より上のままである。

本発明における使用のための非リポソーム本体に関して、これらは、適切なサイズの生体適合性の中実または中空ビーズを含むことが注記される。生体適合性非リポソーム合成または半合成本体は、ポリエチレングリコール、ポリ（メチルメタクリレート）、ポリビニルピロリドン、ポリスチレンおよび幅広い範囲の他の天然、半合成および合成の材料から選択され得る。このような材料としては、生分解性ポリマーが挙げられ、これは、例えば、Ｄｒｕｍら、米国特許第４，９３８，７６３号（これは、その全体が本明細書によって参考として援用される）によって開示される。

生分解性ポリマーは、当該分野において開示され、これには、例えば、ポリラクチド、ポリグリコリド、ポリカプロラクトン、ポリ無水物、ポリアミド、ポリウレタン、ポリエステルアミド、ポリオルトエステル、ポリジオキサノン、ポリアセタール、ポリケタール、ポリカーボネート、ポリオルトカーボネート、ポリホスファゼン、ポリヒドロキシブチレート、ポリヒドロキシバレレート、ポリアルキレンオキサレート、ポリアルキレンスクシネート、ポリ（リンゴ酸）、ポリ（アミノ酸）、ポリビニルピロリドン、ポリエチレングリコール、ポリヒドロキシセルロース、キチン、キトサン、ならびにこれらのコポリマー、ターポリマーおよび組み合わせのような直鎖ポリマーが挙げられる。他の生分解性ポリマーとしては、例えば、ゼラチン、コラーゲンなどが挙げられる。

３次元本体に、基または結合基を有するリン脂質またはその一部を結合するための誘導化に適切な物質は、市販される（例えば、Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｉｎｃ．，４００ Ｖａｌｌｅｙ Ｒｏａｄ，Ｗａｒｒｉｎｇｔｏｎ，ＰＡ １８９７６、またはＳｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ Ｆｉｎｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓから）。それらの誘導体化のための方法は、当該分野において公知である。特定の好ましい例は、国際特許出願ＰＣＴ／ＣＡ０２／０１３９８ Ｖａｓｏｇｅｎ Ｉｒｅｌａｎｄ Ｌｉｍｉｔｅｄ（これは、本明細書中において参考として援用される）に開示される。

患者が、哺乳動物（ヒトおよび家畜（例えば、ウシ、ウマ、ブタ、イヌ、ネコなど）が挙げられるが、これらに制限されない）であり得ることが企図される。

リン脂質は、両親媒性分子（すなわち、両親媒性物質）であり、これは、この化合物が、水不溶性炭化水素鎖に結合された極性水溶性基を有する分子を含むことを意味する。マトリクスの層として役立つ両親媒性物質は、規定された極性および非極性領域を有する。両親媒性物質としては、本発明のプロセスにおいて活性基を提供するリン脂質に加えて、活性基を有するリン脂質とともに単独で、または別のものとの混合物で使用される他の天然に存在する脂質が挙げられ得る。リポソームの層として役立つ両親媒性物質は、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンアルキルエステルおよびサッカロースジエステルのような、不活性な構造を与える合成化合物であり得る。

適切なサイズのリポソームを調製する方法は、当該分野において公知であり、そして本発明の一部を形成しない。この問題についての種々の教科書および論文（例えば、Ｙｅｃｈｅｚｋｅｌ Ｂａｒｅｎｈｏｌｚ ａｎｄ Ｄａａｎ Ｊ．Ａ．Ｃｈｒｏｍｍｅｌｉｎによる、総説論文「Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ ａｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ」、およびそこに引用される文献、例えば、Ｎｅｗ，Ｒ．Ｃ．「Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ」、ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ ａｔ Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ（１９９０））に対して、参照がなされ得る。

本発明の好ましい実施形態のリポソームおよび他の薬学的に受容可能な本体の直径は、約２０ｎｍ〜約５００μｍ、より好ましくは、約２０ｎｍ〜約１０００ｎｍ、より好ましくは、約５０ｎｍ〜約５００ｎｍ、最も好ましくは、約８０ｎｍ〜約１２０ｎｍ（好ましくは、その最も長い軸に沿って測定される）である。

薬学的に受容可能な本体は、薬学的に受容可能なキャリア（例えば、生理学的滅菌生理食塩水、滅菌水、発熱物質を含まない水、等張滅菌生理食塩水およびリン酸緩衝化生理食塩水溶液、ならびに薬学的処方物中で使用される他の非毒性適合性物質）中に、懸濁され得る。好ましくは、この薬学的に受容可能な本体は、生体適合性の液体（例えば、緩衝化滅菌生理食塩水）中の液体懸濁物へと構成され、そして免疫系にこれを導入する任意の適切な経路（例えば、動脈内、静脈内、または最も好ましくは筋内もしくは皮下）で、患者に投与される。

薬学的に受容可能な本体は、後に投与のために再懸濁され得るように、凍結乾燥（ｆｒｅｅｚｅ−ｄｒｉｅｄまたはｌｙｏｐｈｉｌｉｚｅｄ）され得ることが意図される。本発明はまた、抗炎症促進基を有する凍結乾燥本体、および薬学的に受容可能なキャリア（例えば、生理学的滅菌生理食塩水、滅菌水、発熱物質を含まない水、等張滅菌生理食塩水およびリン酸緩衝化生理食塩水溶液、ならびに薬学的処方物中で使用される他の非毒性適合性物質）を含む部分のキットに関する。

患者に薬学的に受容可能な本体を投与する好ましい様式は、一週間〜数ヶ月の範囲の期間にわたって、毎日、一週間に数回、毎週、毎月、患者に投与される注射の過程である。投与過程の頻度および持続時間は、患者によって、ならびに処置される状態、その重篤度、およびその処置が予防としてか、治療としてか、または治癒として意図されているかに従って、おそらく変動する。その設計および最適化は、十分に担当医の技術範囲内である。筋内注射、特に殿部筋肉を介した筋内注射は、最も好ましい。１つの特定の注射スケジュールは、本発明の適応症の少なくともいくつかについて、１日目に適切な量の本体、２日目にさらなる注射、１４日目にさらなる注射、次いで必要な場合、一月間隔での「追加」注射の、殿部筋肉を介した注射である。

本発明の多くの実施形態において、抗炎症促進基をその表面に含む、薬学的に受容可能な本体は、ワクチンと類似の様式で、患者の免疫系の調節因子として作用していると推定される。従って、これらは、導入部位におけるこの本体の十分な局在化濃度を提供するような量で、そのような投与方法によって、使用される。免疫系改変物質に適切なこのような本体の量は、一般に、レシピエントの身体サイズとは直接相関せず、従って、患者の血流および組織において治療レベルの活性物質を提供するように設計された薬物投薬量とは、明らかに識別され得る。従って、薬物投薬量は、免疫系改変投薬量よりもおそらくかなり多い。

リポソームの重量とリポソームの数との間の相関は、リポソーム処方の分野の当業者によって受け入れられた知識から誘導可能であり、１００ｎｍの直径の二層ビヒクルは、ビヒクル当たり８１，２３０個の脂質分子を有し、約５０：５０で、層間に分布している（Ｒｉｃｈａｒｄ Ｈａｒｒｉｇａｎ−１９９２ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｃｏｌｕｍｂｉａ ＰｈＤ Ｔｈｅｓｉｓ「Ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ ｐＨ ｇｒａｄｉｅｎｔｓ ｉｎ ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ（ｍｉｃｒｏｆｏｒｍ）：ｄｒｕｇ−ｖｅｓｉｃｌｅ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ ａｎｄ ｐｒｏｔｏｎ ｆｌｕｘ」，ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ ｂｙ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｌｉｂｒａｒｙ ｏｆ Ｃａｎａｄａ，Ｏｔｔａｗａ，Ｃａｎａｄａ（１９９３）；Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｍｉｃｒｏｆｉｌｍｓ ｏｒｄｅｒ ｎｏ．ＵＭＩ００４０６７５６；Ｃａｎａｄａ ｎｏ．９４２０４２２２０，ＩＳＢＮ ０３１５７９６９３６を参照のこと）。このことから、例えば、以下の特定のインビボ実施例において使用される用量のオーダーの、５×１０^８個のビヒクルの用量が、４．０６×１０^１３個の脂質分子と等価であることを、計算し得る。１グラムの分子中の脂質分子の数のアボガドロ数（モル）である６．０２３×１０^２３を使用して、これが、６．７４×１０^−１１モルを示し、これは、ＰＩについての８５７の分子量で、このような投薬量について、約５．７８×１０^−８ｇ、すなわち５７．８ｎｇのＰＩであることを、決定する。

投与される薬学的に受容可能な本体の量は、処置が意図される哺乳動物疾患の性質、ならびに患者の正体および特徴に依存して、変化する。有効量の本体は、患者に対して非毒性であり、かつ免疫系を圧倒するほど大きくはないことが、重要である。本体の液体懸濁物の、動脈内投与、静脈内投与、皮下投与または筋内投与を使用する場合、各用量において、等量の全血において通常見出される白血球の数の１０％〜１０００％と一般に等しい本体の量を含む、約０．１〜５０ｍｌの液体を投与することが好ましい。一般に、ヒト患者への送達１回当たり投与される本体の数は、約５００〜約２．５×１０^９（リポソームの場合、本体の他の実施形態についての異なる密度について比例して、＜２５０ｎｇの本体）の範囲、より好ましくは約１，０００〜１，５００，０００，０００、なおより好ましくは１０，０００〜約１００，０００，０００、そして最も好ましくは約２００，０００〜約２，０００，０００の範囲である。

薬学的に受容可能な本体は、本発明のプロセスにおいて、ワクチンの性質で免疫系調節剤として作用しているので、各投与についての注射部位に投与されるこのような本体の数は、患者の体重単位当たりの本体の数または質量よりも、より意味のある定量である。同じ理由のために、小動物についての本体の有効量または有効数は、より大きい動物（すなわち、５ｋｇより大きい）についての体重比基準の有効量へと直接変換されない可能性があることが、ここで企図される。

本発明は、Ｔ細胞機能、炎症、内皮細胞機能不全および不適切なサイトカイン発現が関与する、広範な種々の哺乳動物障害の予防および／または処置における使用のために示される。このような障害を有する患者または有すると疑われる患者が、処置のために選択され得る。「処置」は、症状の減少（例えば、特定の疾患の症状の重篤度もしくは数の低減、または症状のさらなる進行に対する制限が挙げられるが、これらに限定されない）をいう。

Ｔ細胞機能（Ｔ細胞媒介性）障害に関して、これらは、潰瘍および創傷、ならびに自己免疫疾患（糖尿病、強皮症、乾癬および慢性関節リウマチが挙げられるが、これらに限定されない）であり得る。

本発明は、炎症性アレルギー反応、器官および細胞移植反応障害、ならびに炎症反応を生じる微生物感染との使用のために示される。本発明はまた、酸化的ストレスおよび／または虚血再灌流損傷、毒物摂取、毒性化学物質への曝露、放射線損傷、ならびに風媒および水媒の刺激性物質への曝露など（これらは、損傷炎症を引き起こす）に対する予防における使用についても、示される。本発明はまた、内部器官（例えば、腎臓、肝臓、心臓など）の炎症、アレルギーおよびＴ細胞媒介性障害についても示される。

本発明が示される、不適切なサイトカイン発現を含む障害に関して、これらには、神経変性疾患が挙げられる。ダウン症候群、アルツハイマー病およびパーキンソン病を含む神経変性疾患は、インターロイキン−１β（ＩＬ−１β）を含む特定のサイトカインのレベルの増大と関連する（Ｇｒｉｆｆｉｎら（１９８９）；Ｍｏｇｉら（１９９６）を参照のこと）。ＩＬ−ｌβが、海馬における長期増強を阻害することもまた、示される（Ｍｕｒｒａｙ，Ｃ．Ａ．ら（１９９８））。海馬における長期増強は、シナプス可塑性の形態であり、そして一般に、記憶および学習についての適切なモデルであるとみなされている（Ｂｌｉｓｓ，Ｔ．Ｖ．Ｐ．ら（１９９３））。従って、脳における不適切なサイトカイン発現は、現在、神経変性疾患の発症および進行に関与すると考えられている。

従って、本発明は、哺乳動物神経炎症、神経変性障害および他の神経学的障害（ダウン症候群、アルツハイマー病、パーキンソン病、老年痴呆、うつ、ハンティングトン病、末梢ニューロパシー、ギヤン−バレー症候群、脊髄疾患、神経障害性関節症疾患、慢性炎症性脱髄疾患、モノニューロパシー、多発性ニューロパシー、対称性遠位性感覚ニューロパシー、神経筋接合部障害、筋無力症および筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）を含むニューロパシーが挙げられる）の処置および予防のために示される。これらの神経変性疾患の処置および予防は、本発明の特に好ましい実施形態を示し、アルツハイマー病、ＡＬＳおよびパーキンソン病の処置が特に好ましい。

内皮機能不全を含む障害に関して、本発明は、広範な種々のこのような哺乳動物障害（以下が挙げられるが、これらに限定されない：心血管疾患（例えば、アテローム硬化症、末梢動脈および動脈閉塞疾患、うっ血性心不全、脳血管疾患（発作）、心筋梗塞、アンギナ、高血圧など）、血管痙攣障害（例えば、レーノー病、心臓症候群Ｘ、片頭痛など）および虚血から生じる損傷（虚血損傷または虚血再灌流損傷））の処置および予防のために示される。まとめると、これは、その病理が不適切に機能する内皮細胞を含む、実質的に任意の障害であり得る。

本発明の組成物およびプロセスのためにさらに示されるものとしては、創傷治癒および潰瘍治癒の速度を加速するための患者の処置、手術からの回復速度（外科的創傷および切開の治癒速度を含む）を加速するための外科手術前の患者の処置、が挙げられる。

「心疾患」に関して、本発明は、広範な種々のこのような哺乳動物障害（心臓に関する任意および全ての障害を含み、これには、例えば、心室不整脈（心室の頻脈または細動）および心疾患からの突然死が挙げられる）の処置および予防のために示される。心臓障害（例えば、不整脈および突然心臓死）に対する患者の感受性は、しばしば、心臓の拍動リズムにおけるＱＴ−ｃ間隔の延長によって示される。本発明の好ましい実施形態に従う組成物の投与は、哺乳動物患者においてＱＴ−ｃ間隔を低下させると考えられ、これは、不整脈および突然心臓死に対する感受性の低下を示す。

本発明は、以下の非限定的実施例において、例示目的のためにさらに記載される。

以下の実施例において、以下の略号は、以下の意味を有する。略号が定義されていない場合、それは、その一般的に受容可能な意味を有する。
μＬ＝マイクロリットル
μＭ＝マイクロモル濃度
ＣＨＳ＝接触過敏症
ＤＮＦＢ＝２，４−ジニトロフルオロベンゼン
ＤＨＳ＝遅延型過敏症
ＥｔＯＨ＝エタノール
ｇ＝グラム
ＩＭ＝筋内
ｋｇ＝キログラム
ＬＰＳ＝リポポリサッカリド
ｍｌ＝ミリリットル
ｍＭ＝ミリモル濃度
ｍｍ＝ミリメートル
ｎｇ＝ナノグラム
ｎｍ＝ナノメートル
ｎＭ＝ナノモル濃度
ＰＢＳ＝リン酸緩衝化生理食塩水
ｐｇ＝ピコグラム。

（実施例１）
平均直径１００±２０ｎｍのサイズのリポソームを、当該分野で公知の標準的方法に従って調製した。このリポソームは、以下の組成を有した：
群Ａ−１００％ ＰＯＰＳ（１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−［ホスホ−Ｌ−セリン］（実施例において、他に示されない限り、ホスファチジルセリンまたはＰＳと称する））
群Ｂ−１００％ ＰＯＰＡ（１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスフェート（実施例において、他に示されない限り、ホスファチジン酸またはＰＡと称する）
群Ｃ−コントロール、リポソームなし。

１ｍｌ当たり４．８×１０^１４個のリポソームを含む、各リポソーム組成物のストック懸濁物を、ＰＢＳで希釈して、１ｍｌ当たり６×１０^６個の粒子を含む注射懸濁物を得た。リポソーム懸濁物を、６〜８週齢かつ体重１９〜２３ｇのメスＢＡＬＢ／ｃマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）に注射して、マウス接触過敏症（ＣＨＳ）モデルにおける耳腫脹に対する影響を決定した。ＣＨＳモデルは、Ｔｈ１媒介性炎症反応について試験する。

動物を、各群５匹の動物で、３群のうちの１つに割り当てた。群ＡおよびＢは、約３×１０^５の上記特定されたリポソーム（すなわち、それぞれ、１００％ ＰＳおよび１００％ ＰＡ）を、約５０μｌの容量で受けた。群Ｃは、リポソームを受けないコントロール群であった。

（プロトコル）
以下の実験を行った：

１〜６日目に、Ａ群およびＢ群のマウスにそれぞれのリポソームを注入した。リポソームを、筋肉内（ＩＭ）注入を介して５０μｌ容量（すなわち、１注入あたり３００，０００リポソーム）を注入した。試験期間に渡っての総投与は、１，８００，０００リポソームであった。コントロール群（Ｃ群）のマウスにはリポソームを与えなかったが、以下に記載するように他の群のマウスと同じ方法で、感作し、チャレンジし、そして試験した。

（感作）
１日目に、その日のリポソーム注入の後、マウスを、５ｍｇ／ｍｌのペントバルビタールナトリウムの０．２ｍｌ腹腔内（ＩＰ）注入を使用して麻酔した。これらのマウスの腹部皮膚に７０％ＥｔＯＨをスプレーした。剃刀を使用して腹部から直径約１インチの毛を剃髪した。剥き出しの領域に、ピペットチップを使用して、２５μｌの４：１ アセトン：オリーブ油中０．５％ ２，４−ジニトロフルオロベンゼン（ＤＮＦＢ）を塗布した。

（チャレンジ）
６日目に、その日のリポソーム注入の後、マウスを以下のようにＤＮＦＢでチャレンジした：１０μｌの０．２％ ＤＮＦＢをピペットチップを用いて右耳の背部表面に塗布し、１０μｌのビヒクルをピペットチップを用いて左耳に塗布した。

（結果）
７日目に、チャレンジの２４時間後、各動物をハロタンで麻酔し、Ｐｅａｃｏｃｋバネ式マイクロメーターを用いて耳の厚さ（μｍ）を測定した。耳腫脹の増加を、ＣＨＳ応答の指標として使用する。データは、処置した右耳の厚さ−ビヒクル処置した左耳の厚さの差異として表す。実験を、異なるが類似の動物で３回繰り返した。種々の群間の有意差を、ｓｔｕｄｅｎｔの両側ｔ検定により決定する。ｐ＜０．０５の値を、有意であるとみなす。

結果を、添付の図１に図式的に示す（耳腫脹（μｍで）の棒グラフ）。各実験からの平均値を用いてグラフを作成した。

図１は、耳腫脹（×１０^−２ｍｍ）の有意な減少が、本発明に従うリポソームの注入により達成されることを示す。１００％ ＰＡリポソームで達成される減少は、抗炎症剤として以前に報告されている１００％ ＰＳリポソームからの減少と実質的に同じである。

（実施例２）
７５％のＬ−α−ホスファチジルイノシトール（他に示されない限り、実施例においてホスファチジルイノシトールまたはＰＩと称される）および２５％の１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンすなわちＰＯＰＣ（他に示されない限り、実施例においてホスファチジルコリンまたはＰＣと称される）から本質的になるリポソームを調製し、上記のマウス接触過敏症モデルにおいて試験した。１０匹のマウスの２群を１日目に感作した。１群には１、２、３、４、５および６日目に７５％ ＰＩ：２５％ ＰＣリポソーム（各注入について、５０μＬの懸濁液中６００，０００ビヒクル）を注入した。リポソーム注入の６日後、マウスを実施例１に記載のように左耳にＤＮＦＢ塗布してチャレンジした。第２のコントロール群には、同じスケジュールにしたがって５０μＬのＰＢＳを投与し、同様にチャレンジした。耳の厚さの測定を７日目に行った。結果（棒グラフの形態による）を図２に示す。これらのデータは、耳の平均厚さ（×１０^−２ｍｍ）変化±平均の標準誤差（ＳＥＭ）を表す。ＰＢＳコントロール群と比較して、ＰＩリポソームを注入したマウスにおいて、接触過敏症（ＣＨＳ）の有意な抑制が存在する（ｐ＜０．０１）。

（実施例３）
７５％ ＰＩおよび２５％ ＰＣの処方で平均サイズが１００±２０ｎｍのリポソームを標準の方法にしたがって比較した。１０匹のマウスの５群（Ａ〜Ｅ）を、実施例１に記載の手順およびスケジュールに従って感作、注入およびチャレンジした。以下の数のリポソームを５０μｌの懸濁液中にて送達した：
Ａ群 ６×１０^１０
Ｂ群 ６×１０^８
Ｃ群 ６×１０^７
Ｄ群 ６×１０^６
Ｅ群 ６×１０^５
Ｆ群 ６×１０^４。

結果を、ＰＢＳコントロール群とともに、正味の耳の腫脹（×１０^−２ｍｍ）±ＳＥＭとして図３に棒グラフの形態で示す。コントロール群と比較して、耳の腫脹の有意な用量依存性の減少が、Ｃ群（６×１０^７）（ｐ＝０．０５）、Ｄ群（６×１０^６）（ｐ＝０．０１）、そして、最も有意には、Ｅ群（ｐ＜０．００１）について見られた。他の群とコントロールとの間には有意差はなかった（対Ｔ検定により統計的有意差を計算した）。

（実施例４）
１ｍｌあたり４．８×１０^１４個のリポソームを含むサイズ１００±２０ｎｍの７５％ ＰＩリポソームのストック懸濁液を希釈し、１ｍｌあたり６×１０^６個のリポソームを含む注入懸濁液を得た。このリポソーム懸濁液を使用してマウスに注入し、マウスＤＨＳモデルにおける耳腫脹への効果を決定した。実施例１のように、雌ＢＡＬＢ／ｃマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）（６〜８週齢、体重１９〜２３ｇ）を使用した。

動物を各群１０匹ずつの２群のうちの１つに割り当てた。一方の群にリポソームを注入した。他方はコントロール群であり、ＰＢＳを注入した。各試験動物に６×１０^５個のリポソームを含む５０μｌの懸濁液を注入した。

（プロトコル）
マウスを１日目に感作し、６日目にチャレンジし、１２日目に２回目のチャレンジをし、そして、１３、１４、１５、１６、１７および１８日目に、以下に示すように７５％ ＰＩリポソームを注入した。リポソーム注入後１８日目に、マウスをチャレンジした。リポソームを、ＩＭ注入を介して５０μｌ容量（すなわち、１注入あたり６００，０００リポソーム）にて注入した。試験期間に渡っての総投与は、３，６００，０００リポソームであった。感作およびチャレンジを実施例１に記載のように行った。耳の厚さを１９日目に測定した。

（結果）
結果を、添付の図４に棒グラフの形態で示す。結果を正味の耳の腫脹（×１０^−２ｍｍ）として示す。これらは、１９日目に、３回目の注入とその後の３回目のチャレンジの２４時間後に、７５％ ＰＩリポソームがＤＨＳモデルにおいて有効であることを示す。

（実施例５）
Ｕ９３７は、ホルボールエステルの投与によりマクロファージに分化し得る単球白血病細胞株である。グラム陰性細菌の細胞壁の成分である、リポポリサッカリド（ＬＰＳ）を用いる処理は、Ｕ９３７細胞における炎症性応答を刺激し、ＴＮＦαを含む多数の炎症性分子発現をアップレギュレートする。このことは、抗炎症性治療の評価についての実験系を提供する。マクロファージは、推定抗炎症性組成物の存在下で培養培地中で増殖され得、そしてＴＮＦαの発現を測定した。

当該分野で公知の標準的な方法に従って１００±２０ｎｍのサイズのリポソームを調製し、このリポソームは、７５％ ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）、２５％ ホスファチジルコリン（ＰＣ）の組成を有した。リポソームのストック濃度は３９．５ｍＭ脂質であり、アッセイにおいて以下の最終濃度に希釈した：
１００μＭ ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）
３９．８μＭ ＰＩ
１０μＭ ＰＩ
３．９８μＭ ＰＩ
１μＭ ＰＩ。

Ｕ９３７細胞を１０％ウシ胎仔血清（ＦＣＳ）および１％ペニシリン／ストレプトマイシンを含有するＲＰＭＩ培地（ＧＩＢＣＯ ＢＲＬ）中にて、５％ ＣＯ_２を含有する大気中で、３７℃で増殖させることにより、培養した。これらを６ウェルプレートに１ｍｌあたり５×１０^５細胞の濃度で、１ウェルあたり２ｍｌの細胞を添加して撒き、そして１５０ｎＭのホルボールミリステートアセテート（ＰＭＡ）で２〜３日処理することによりマクロファージに分化させた。次いで、Ｕ９３７細胞がマクロファージに分化した後、細胞培地を完全培地と交換した。リポソームを添加する前に、細胞をさらに２４時間インキュベートし、その結果、ＰＭＡにより誘導されるあらゆる遺伝子／タンパク質アップレギュレーションを減少させた。

次いで、細胞を以下のいずれかとインキュベートした：
リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ） −ネガティブコントロールとして、
１０ｎｇ／ｍｌ リポポリサッカリド（ＬＰＳ） −ポジティブコントロールとして、
１０ｎｇ／ｍｌ ＬＰＳ＋１００μＭ ＰＩ、
１０ｎｇ／ｍｌ ＬＰＳ＋３９．８μＭ ＰＩ、
１０ｎｇ／ｍｌ ＬＰＳ＋１０μＭ ＰＩ、
１０ｎｇ／ｍｌ ＬＰＳ＋３．９８μＭ ＰＩ、または
１０ｎｇ／ｍｌ ＬＰＳ＋１μＭ ＰＩ。

これらの細胞を３７℃、５％ＣＯ_２でインキュベートした。１８時間後、各処理物からの上清を回収し、標準的なＱｕａｎｔｉｋｉｎｅ Ｅｎｚｙｍｅ−ｌｉｎｋｅｄ Ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂａｎｔ Ａｓｓａｙ（ＥＬＩＳＡ）キット（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＵＳＡ）を用いてＴＮＦ−αについてアッセイした。

図５は、分泌されたＴＮＦ−αの量（ｐｇ／ｍｌ）を示す。これらの結果は、Ｕ９３７分化マクロファージ細胞が、通常の条件下で非常に低いレベルのＴＮＦ−αを発現することを示す。しかし、一旦ＬＰＳに曝露されると、これらの細胞は、周囲の培地に大量のＴＮＦ−αを分泌し、これは、生じる細胞内ストレスの指標である。ＰＩリポソームとのインキュベーションは、ＴＮＦ−αのＬＰＳ誘導発現を用量依存的に減少させる。

（実施例６）
スフィンゴ脂質代謝は、動態プロセスであることが明らかとなり、スフィンゴ脂質代謝物（セラミド、スフィンゴシンおよびスフィンゴシン−１−リン酸を含む）がここで、細胞の増殖、生存および死亡において必須の役割を果たすメッセンジャーとして認識される（Ｋｏｌｅｓｎｉｃｋ Ｒ，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ １１０：３〜８（２００２））。７５％のスフィンゴミエリンおよび２５％のＰＣから本質的になるリポソームを、標準的な方法（Ｋａｔｒａｇａｄｄａ Ａら、Ｃｅｌｌｕｌａｒ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｌｅｔｔｅｒｓ ５；４８３〜４９３（２０００）を参照のこと）に従って調製し、接触過敏症マウスモデルにおいて試験した。使用した方法論は、実施例１と同様であり、サイズは、以前の実施例において使用されたリポソームのもの（すなわち１００±２０ｎｍ）と一致した。

添付の図面の図１は、上記の実施例１において得られた結果の、棒グラフによる表示である。 図２は、上記の実施例２に従って得られた結果の、棒グラフによる表示である。 図３は、上記の実施例３に従って得られた結果を同様に提示する。 図４は、上記の実施例４に従って得られた結果を同様に提示する。 図５は、上記の実施例５に従って得られた結果を同様に提示する。

Claims (51)

1. 複数の反応性化学基を有する本体を含む組成物であって、該複数の反応性化学基は、抗炎症に有利に哺乳動物免疫系のサイトカインプロフィールを変更するように、該哺乳動物免疫系の細胞上のレセプターと相互作用し得、該本体は、２０〜１０００ｎｍのサイズを有し、但し、該基が全て同じ型である場合、該基は、リン酸セリンでもリン酸グリセロールでもない、組成物。
2. 請求項１に記載の組成物であって、前記本体は、リン酸イノシトール、リン酸エタノールアミン、ホスファチジン酸、リゾホスファチド酸、リゾリン酸イノシトール、リゾリン酸エタノールアミン、スフィンゴシン−１−ホスフェート、セラミド、スフィンゴミエリン、またはそれらの組み合わせの特徴を有する反応性化学基を有する、組成物。
3. 前記本体は、活性基として、リン酸イノシトール基を有する、請求項２に記載の組成物。
4. 前記本体は、リポソームである、請求項２に記載の組成物。
5. 前記組成物は、非脂質性の薬学的に受容可能な実体を本質的に含まない、請求項４に記載の組成物。
6. 請求項５に記載の組成物であって、前記リポソームは、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジン酸、ジステアロイルホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコリン、リゾホスファチド酸、リゾホスファチジルイノシトール、リゾホスファチジルコリン、リゾホスファチジルエタノールアミン、スフィンゴシルホスホリルコリン、スフィンゴシン−１−ホスフェート、セラミド、スフィンゴミエリン、またはそれらの組み合わせからなる群より選択される、リン脂質またはグリコリン脂質を含む、組成物。
7. 前記リポソームは、ホスファチジルイノシトールを含む、請求項６に記載の組成物。
8. 前記リポソームは、約６０〜１００％のホスファチジルイノシトールを含む、請求項７に記載の組成物。
9. 前記リポソームは、約６０〜９０％のホスファチジルイノシトールを含む、請求項７に記載の組成物。
10. 前記リポソームの残りは、ホスファチジルコリンである、請求項８または９に記載の組成物。
11. 前記リポソームは、約８０〜１２０ｎｍのサイズを有する、請求項９に記載の組成物。
12. 前記組成物は、１回の投与単位あたり、約１０，０００〜２，５００，０００，０００個の前記リポソームを含む、請求項４〜１１に記載の組成物。
13. Ｔ細胞機能により媒介される障害の処置のための医薬の製造における組成物の使用であって、該組成物は、約２０ｎｍ〜５００μｍの範囲のサイズを有し、かつ複数のＰＩヘッド基を本体表面上で発現するかまたは発現可能である、薬学的に受容可能な生体適合性の本体を含有する、使用。
14. 前記ＰＩヘッド基は、前記本体の表面上で発現され、ＰＩリガンドのヘッド基である、請求項１３に記載の使用。
15. 前記本体は、リポソームである、請求項１３または１４に記載の使用。
16. 前記リポソームは、６０重量％〜１００重量％のホスファチジルイノシトールで構成される、請求項１２に記載の使用。
17. 前記リポソームは、６０重量％〜９０重量％のホスファチジルグリセロールで構成される、請求項１６に記載の使用。
18. 前記リポソームは、約２０ｎｍ〜約１０００ｎｍの直径を有する、請求項１５、１６または１７に記載の使用。
19. 前記組成物の単位投薬量は、約５０〜約２．５×１０^９個の本体を含む、請求項１８に記載の使用。
20. 前記組成物の単位投薬量は、約１０，０００〜約５０，０００，０００個の本体を含む、請求項１８に記載の使用。
21. 炎症障害の処置のための医薬の製造における組成物の使用であって、該組成物は、約２０ｎｍ〜５００μｍの範囲のサイズを有し、かつ複数のリン酸イノシトール基を本体表面上で発現するかまたは発現可能である、薬学的に受容可能な生体適合性の本体を含有する、使用。
22. 前記リン酸イノシトール基は、前記本体の表面上で発現され、ＰＩリガンドのヘッド基である、請求項２１に記載の使用。
23. 前記本体は、リポソームである、請求項２１または２２に記載の使用。
24. 前記リポソームは、６０重量％〜１００重量％のホスファチジルイノシトールで構成される、請求項２３に記載の使用。
25. 前記リポソームは、６０重量％〜９０重量％のホスファチジルイノシトールで構成される、請求項２３に記載の使用。
26. 前記リポソームは、約２０ｎｍ〜約１０００ｎｍの直径を有する、請求項２３〜２５のいずれかに記載の使用。
27. 前記組成物の単位投薬量は、約５０〜約２．５×１０^９個の本体を含む、請求項２３〜２６に記載の使用。
28. 内皮機能障害の処置のための医薬の製造における組成物の使用であって、該組成物は、約２０ｎｍ〜５００μｍの範囲のサイズを有し、かつ複数のリン酸イノシトール基を本体表面上で発現するかまたは発現可能である、薬学的に受容可能な生体適合性の本体を含有する、使用。
29. 前記リン酸イノシトール基は、前記本体の表面上で発現され、ＰＩリガンドのヘッド基である、請求項２８に記載の使用。
30. 前記本体は、リポソームである、請求項２８または２９に記載の使用。
31. 前記リポソームは、６０重量％〜１００重量％のホスファチジルイノシトールで構成される、請求項３０に記載の使用。
32. 前記リポソームは、６０重量％〜９０重量％のホスファチジルイノシトールで構成される、請求項３０に記載の使用。
33. 前記リポソームは、約２０ｎｍ〜約１０００ｎｍの直径を有する、請求項３０、３１または３２に記載の使用。
34. 前記組成物の単位投薬量は、約５０〜約２．５×１０^９個の本体を含む、請求項３０〜３３のいずれかに記載の使用。
35. 前記組成物の単位投薬量は、約１０，０００〜約５０，０００，０００個の本体を含む、請求項３に記載の使用。
36. 前記組成物の単位投薬量は、約１０，０００〜約５０，０００，０００個の本体を含む、請求項３４に記載の使用。
37. 不適切なサイトカイン発現によって特徴付けられる免疫障害の処置のための医薬の製造における組成物の使用であって、該組成物は、約２０ｎｍ〜５００μｍの範囲のサイズを有し、リン酸イノシトール基を本体表面上で発現するかまたは発現可能である、薬学的に受容可能な生体適合性の本体を含有する、使用。
38. 前記リン酸イノシトール基は、前記本体の表面上で発現され、ＰＩリガンドのヘッド基である、請求項３７に記載の使用。
39. 前記本体は、リポソームである、請求項３７または３８に記載の使用。
40. 前記リポソームは、６０重量％〜１００重量％のホスファチジルイノシトールで構成される、請求項３９に記載の使用。
41. 前記リポソームは、６０重量％〜９０重量％のホスファチジルイノシトールで構成される、請求項４０に記載の使用。
42. 前記リポソームは、約２０ｎｍ〜約１０００ｎｍの直径を有する、請求項３９、４０または４１に記載の使用。
43. 前記組成物の単位投薬量は、約５０〜約２．５×１０^９個の本体を含む、請求項３９〜４２のいずれかに記載の使用。
44. 前記組成物の単位投薬量は、約１０，０００から約５０，０００，０００個の本体を含む、請求項４３に記載の使用。
45. 前記組成物の単位投薬量は、約１０，０００〜約５０，０００，０００個の本体を含む、請求項４４に記載の使用。
46. 前記障害は、神経障害である、請求項３９〜４５に記載の使用。
47. 哺乳動物患者に投与するための、単位投薬形態の薬学的組成物であって、該組成物は、薬学的に受容可能な本体および薬学的に受容可能なキャリアを含有し、ここで、該本体の少なくとも一部は、約２０ｎｍ〜５００μｍの範囲のサイズを有し、そして該本体の表面は、リン酸イノシトールに転換可能なリン酸イノシトール基を含み、該単位投薬量は、約５００から約２．５×１０^９個の本体を含む、薬学的組成物。
48. 前記本体は、リポソームである、請求項４７に記載の薬学的組成物。
49. 非脂質性の薬学的に受容可能な実体を本質的に含まない、請求項４８に記載の薬学的組成物。
50. 前記リポソームは、７０〜９０％のＰＩを含む、請求項４９に記載の薬学的組成物。
51. 請求項４７に記載の薬学的組成物であって、前記本体は、リン酸イノシトール基の結合に特異的な哺乳動物免疫系の細胞上のレセプターに特異的に結合する表面基を含む、薬学的組成物。

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