MXPA04007042A - Cuerpos de inclusion que transportan glicerol-fosfato aceptables para uso farmaceutico. - Google Patents

Cuerpos de inclusion que transportan glicerol-fosfato aceptables para uso farmaceutico.

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MXPA04007042A
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Abstract

Composiciones sinteticas y semi-sinteticas tridimensionales que presentan actividad biologica y usos de las mismas en el tratamiento y/o la profilaxis de numerosos trastornos en pacientes mamiferos. Mas particularmente se relaciona con preparaciones y usos de cuerpos de inclusion sinteticos y semi-sinteticos, tal como liposomas, que despues de su introduccion en el cuerpo de un paciente, produce efectos beneficos anti-inflamatorios, protector de organos e inmunoreguladores. La invencion tambien se relaciona con tratamientos y composiciones para aliviar enfermedades inflamatorias y autoinmunes y los sintomas de los mismos.

Description

CUERPOS DE INCLUSION QUB TRANSPORTAN GLICEROL- FOSFATO ACEPTABLES PARA USO FARMACÉUTICO ANTECEDENTES DE LA INVENCION Campo de la invención Esta invención se relaciona con composiciones sintéticas y semi-sintéticas tridimensionales que presentan actividad biológica y con usos de las mismas en el tratamiento y/o la profilaxis de diversos trastornos en pacientes mamíferos. Más particularmente se relaciona con preparaciones y usos de cuerpos de inclusión sintéticos y semi-sintéticos , que después de su introducción en el cuerpo de un paciente, produce efectos benéficos anti- inflamatorios , protectores de órganos e inmunoreguladores . La invención también se relaciona con tratamientos y composiciones para aliviar enfermedades inflamatorias y autoinmunes y los síntomas de las mismas .
Antecedentes de la invención Las células presentadoras de antígenos (APC) profesionales, inclusive células dendríticas (DC) y macrófagos (Mph) , capturan y procesan de forma activa los antígenos (Ags) , eliminan los desechos celulares y los organismos infecciosos y las células moribundas, incluyendo los r-esiduo3—de—la-s—celular moribundas-^—Durante—e-&t-e—p-r-ccescs-las APC pueden estimular la producción de respuestas dominadas ya sea por citoquinas pro- inflamatorias Thl inflamatorias (IL-12, IL-1, INF-?, TNF-a, etc.); o por citoquinas Th2/Th3 reguladoras (tal como IL-10, TGF- ß , IL-4 etc.); dependiendo de la naturaleza del antígeno (Ag) o del material fagocitado y del nivel de maduración/activación de las APC . Las APC eliminan los desechos celulares, algunos de los cuales derivan de las membranas de las células del cuerpo, algunos de infecciones bacterianas y parasitarias y de organismos comensales, tal como las bacterias intestinales. En tanto parte de estos desechos celulares iniciarán una respuesta pro-inflamatoria, parte iniciará una respuesta protectora y anti-inflamatoria . Un sistema inmunológico que funciona normalmente puede distinguir entre los antígenos de organismos invasores extraños (no propios) y tejidos o desechos derivados de material "propio", montando una respuesta inmune solamente por aquellos antígenos que son extraños. Cuando el sistema inmunológico de un paciente no puede discriminar entre materiales propios y no propios, surgen los trastornos autoinmunes .
Sumario de la invención Esta invención está dirigida al descubrimiento que los cuerpos de inclusión aceptables para uso farmacéutico, tal como liposomas, perlas o partículas similares, que comprenden grupos glicerol- fosfato causarán, después de su administración a un paciente mamífero, un efecto antiinflamatorio y por ello se pueden usar en el tratamiento de numerosas enfermedades. Estos cuerpos de inclusión pueden comprender además como componente menor un constituyente inactivo y/o un constituyente que sea activo pero a través de un mecanismo diferente. En una realización preferida, la invención está dirigida a una composición de un material capaz de producir una respuesta anti- inflamatoria in vivo en un mamífero, donde dicha composición comprende cuerpos de inclusión aceptables para uso farmacéutico de un tamaño que comprende entre 20 nanómetros (nm) y 500 micrómetros (µp) aproximadamente, que comprende una pluralidad de grupos glicerol-fosfato o grupos que se puedan convertir a su vez en dichos grupos. Preferentemente, los cuerpos de inclusión están esencialmente libres de entidades no lipídicas farmacéuticamente activas. Preferentemente los grupos de glicerol-fosfato constituyen un 60% - 100% de los grupos activos sobre los cuerpos de inclusión. Después de su administración a un mamífero, se considera que los cuerpos de—inclusirón—inLera^iruañT; a trav s de los grupos glicerol-fosfato, con el sistema inmune. Como resultado de ello, cuando se administran de esta manera se genera una respuesta anti-inflamatoria. En otra realización, esta invención está dirigida a un cuerpo sintético o semi-sintético tridimensional, denominado aquí cuerpo de inclusión aceptable para uso farmacéutico, que es de un tamaño que varía en un rango entre 20 nm y 500 µt? y que ha sido modificado para comprender, como componente principal, al menos un ligando promotor de respuestas anti-inf lamatorias donde dicho ligando posee grupos glicerol-fosfato . En aún otra realización, esta invención está dirigida a cuerpos de inclusión sintéticos y semi-sintéticos tridimensionales, denominados también cuerpos de inclusión aceptables para uso farmacéutico en este documento, que tienen tamaños que varían en un rango entre 20 nm y 500 µta y que poseen grupos glicerol-fosfato sobre la superficie de los mismos . En otro aspecto, la invención está dirigida a un método para el tratamiento de un trastorno mediado por el funcionamiento de las células T que comprende la administración a un paciente mamífero de una cantidad eficaz de cuerpos de inclusión aceptab_les_j^ a^_us£> farmacéutico que transportan una cantidad eficaz de grupos g -e^-iul-Iubl Lu—para mnicir y/o reducir el avance del trastorno mediado por el funcionamiento de células T. Esta invención está dirigida además a un método para el tratamiento de un trastorno inflamatorio que comprende la administración a un paciente de una cantidad eficaz de cuerpos de inclusión aceptables para uso farmacéutico que transportan una cantidad eficaz de grupos glicerol-fosfato para inhibir y/o reducir el avance de dicho trastorno inflamatorio. Aún otra realización de esta invención es un método para el tratamiento de un trastorno de la función endocrina que comprende la administración a un paciente mamífero de una cantidad eficaz de cuerpos de inclusión aceptables para uso farmacéutico que transportan una cantidad eficaz de grupos glicerol- fosfato para inhibir y/o reducir el avance de dicho trastorno de la función endocrina. Otra realización es un método para el tratamiento de un trastorno inmunológico caracterizado por una expresión inapropiada de citoquinas que comprende la administración a un paciente mamífero de una cantidad eficaz de cuerpos de inclusión aceptables para uso farmacéutico que transportan una cantidad eficaz de grupos glicerol-fosfato para inhibir y/o reducir el avance de dicho trastorno inmunológico. Esta invención está dirigida además a un proceso para el tratamiento o la profilaxis de un trastorno cardíaco en TTiFim i f Rro.q , niya prsssnr.ia n . .qn g; r:p t- -i hi 1 i ñ a ñ a la mi-Sma e_S_ detectable mediante observación de un intervalo prolongado de QT-c en el electrocardiograma del paciente, donde dicho proceso comprende la administración a un paciente mamífero que padece del mismo o que es susceptible al mismo de una composición farmacéutica que comprende cuerpos de inclusión sintéticos o semi-sintéticos biocompatibles aceptable para uso farmacéutico, también denominados cuerpos de inclusión aceptables para uso farmacéutico en este documento, y un vehículo aceptable para uso farmacéutico, donde al menos una porción de dichos cuerpos de inclusión tiene un tamaño que se encuentra en el rango entre 20 nm y 500 µt? aproximadamen e, y donde las superficies de dichos cuerpos de inclusión han sido modificadas para transportar, como componente principal, al menos un grupo promotor de respuestas anti-inflamatorias , donde dicho grupo es glicerol-fosfato . Otra realización de la invención es una composición farmacéutica, en una forma de dosificación unitaria, para su administración a un paciente mamífero, que comprende cuerpos de inclusión aceptables para uso farmacéutico y un vehículo aceptable para uso farmacéutico, donde al menos una porción de los cuerpos de inclusión tienen un tamaño en el rango entre 20 nm y 500 µp? aproximadamente y donde la superficie de dichos cuerpos de inclusión comprenden grupos glieesoi—&ersfrectx)—o—grupos que se pueden convertir a su vez en grupos glicerol-fosfato, donde dicha dosificación unitaria comprende entre 500 y 2,5 x 109 cuerpos de inclusión aproximadamente. Una realización adicional de esta invención es una composición farmacéutica que comprende cuerpos de inclusión sintéticos o semi-sintéticos biocompatibles aceptable para uso farmacéutico (también denominados cuerpos de inclusión aceptables para uso farmacéutico en este documento) y un vehículo aceptable para uso farmacéutico, donde al menos una porción de dichos cuerpos de inclusión tiene un tamaño entre 20 nm y 500 µp? aproximadamente y donde las superficies de dichos cuerpos de inclusión han sido modificadas para comprender, como componente principal, al menos un grupo promotor de respuestas anti-inflamatorias , donde dicho grupo es glicerol-fosfato . Aún otra realización de esta invención es una composición farmacéutica que comprende cuerpos de inclusión sintéticos o semi-sintéticos biocompatibles aceptables para uso farmacéutico (también denominados cuerpos de inclusión aceptables para uso farmacéutico en este documento) y un vehículo aceptable para uso farmacéutico, donde al menos una porción de dichos cuerpos de inclusión tienen entre 20 nm y 500 µt? aproximadamente y comprende cardiolipina .
Optativamente, los cuerpos de inclusión descriptos mderr- además—on—coTret^tr errt¾ que~" es un grupo tensioactivo inactivo y/o un constituyente que es un grupo tensioactivo, que es activo mediante otro mecanismo, por ejemplo fosfatidilserina . (Véase, por ejemplo Fadok et al., Publicación Internacional WO 01/66785) . En otra realización, esta invención está dirigida a cuerpos de inclusión aceptables para uso farmacéutico liofilizados o secados por congelamiento que transportan grupos glicerol-fosfato o grupos que se pueden convertir a su vez en grupos glicerol-fosfato y conjuntos de elementos [kits] que comprenden cuerpos de inclusión liofilizados o secados por congelamiento que comprenden grupos glícerol-fosfato, o grupos que se pueden convertir a su vez en grupos glicerol-fosfato, y un vehículo aceptable para uso farmacéutico. En otro aspecto, esta invención está dirigida a un método para el tratamiento de un trastorno mediado por el funcionamiento de células T que comprende la administración a un paciente mamífero que padece o que tiene riesgo de padecer un trastorno mediado por el funcionamiento de células T, una cantidad eficaz de una composición que comprende cuerpos de inclusión aceptables para uso farmacéutico que son de un tamaño entre 20 nm aproximadamente y 500 µp? aproximadamente, que comprenden sobre la superficie de los mismos una pluralidad de grupos glicerol-fosfato o grupos que se pueden convertir en dichos grupos glicerol-fosfato, de modo que después de su administración, se inhibe y/o reduce el avance de dicho trastorno mediado por el funcionamiento de células T. Aún otra realización de esta invención está dirigida a un método para el tratamiento de un trastorno de la función endocrina que comprende la administración a un paciente mamífero, que padece o que tiene riesgo de padecer un trastorno de la función endocrina, de una cantidad eficaz de una composición que comprende cuerpos de inclusión aceptables para uso farmacéutico que son de un tamaño entre 20 nm aproximadamente y 500 µt? aproximadamente, que comprenden sobre la superficie de los mismos una pluralidad de grupos glicerol-fosfato, o grupos que se pueden convertir a su vez en dichos grupos glicerol-fosfato, de manera que luego de su administración, se inhibe y/o reduce el avance de dicho trastorno de la función endocrina. Otra realización de esta invención está dirigida a un método para el tratamiento de un trastorno inmunológico en un paciente mamífero que padece o que tiene riesgo de padecer un trastorno inmunológico, que comprende la administración a dicho paciente mamífero de una cantidad eficaz de una composición que comprende cuerpos de inclusión aceptables para uso farmacéutico que son de un tamaño entre 20 nm aproximadamente y 500 µp? aproximadamente, que comprenden sobre la superficie de los mismos una pluralidad de grupos glicerol-fosfato, o grupos que se pueden convertir a su vez en dichos grupos glicerol-fosfato, de modo tal que luego de su administración, se inhibe y/o reduce el avance de dicho trastorno inmunológico .
Descripción breve de las figuras La FIG. 1 es una presentación como gráfico de barras de los resultados del Ejemplo 1 descripto más adelante, de experimentos de hipersensibilidad de contacto en murinos (CHS, modelo inflamatorio agudo mediado por células T) usando liposomas de acuerdo con una realización preferida de la invención, en comparación con otros liposomas y controles . La FIG. 2 es una presentación gráfica similar, que muestra el uso de liposomas de diversos contenidos de fosfatidilglicerol (PG) , en el modelo CHS de murinos, más adelante en el Ejemplo 2. La FIG. 3 es una presentación gráfica similar de los resultados del Ejemplo 3 que se describe más adelante en el cual se usaron concentraciones diferentes de liposomas PG 75% en el modelo CHS de murinos.
La FIG. 4 es una presentación gráfica similar de los r-ea¾ífe¾dos—del—Bj-emplo 4 descripLu má adelantre-; en-e~l crral se usaron concentraciones diferentes de liposomas PG 100% en el modelo CHS de murinos. La FIG. 5 es una presentación gráfica similar de los resultados del Ejemplo 5 descripto más adelante, usando liposomas de diferentes tamaños en el modelo CHS. La FIG. 6 es una presentación gráfica similar de los resultados del Ejemplo 6 descripto más adelante, usando un modelo en murinos de hipersensibilidad de tipo tardía (DHS, modelo inflamatorio crónico mediado por células T) . La FIG. 7 es una presentación gráfica similar de los resultados del Ejemplo 7 descripto más adelante, con liposomas de cardiolipina en un modelo DHS de murinos. La FIG. 8 es una presentación gráfica similar de los resultados del Ejemplo 8 descripto más adelante, con liposomas de cardiolipina en el modelo CHS de murinos. La FIG. 9 muestra el cambio porcentual en la pendiente del potencial post-sináptico excitatorio (EPSP) en ratones control y tratados, que es indicativo del efecto de la potenciación a largo plazo (LTP) , véase el Ejemplo 9. La FIG. 10 muestra los datos que se mostraron en la FIG. 9 en el formato un gráfico de barras, véase el Ejemplo 9 descripto más adelante. La FIG. 11 muestra la diferencia en la concentración de la citoquina IL-4 anti-inflaraatoria en el hipocampo de animales control y tratados, véase el Ejemplo 10 descripto más adelante. La FIG. 12 muestra la diferencia en la concentración de la citoquina IL-?ß pro- inflamatoria en una suspensión de células individuales de esplenocitos de animales control y tratados, véase el Ejemplo 11 descripto más adelante. La FIG. 13 muestra la diferencia en la concentración de TNF-cc en la línea de células monocíticas U937 tratada con concentraciones variables de liposomas PG 75%, véase el Ejemplo 12 descripto más adelante. La FIG. 14 es una presentación gráfica de los resultados del Ejemplo 13 descripto más adelante, del contenido de endotelina-1 en orejas de ratones tratados de acuerdo con una realización preferida de la invención versus el control . La FIG. 15 es una presentación gráfica de los resultados del Ejemplo 14, de células positivas para ICAM-1 de cultivos de HUVEC en presencia y ausencia de las composiciones de la realización preferida de la invención.
Descripción de las realizaciones preferidas De acuerdo con la presente invención, se administran a pacientes cuerpos de inclusión aceptables para us-o. farmacéutico que transportan grupos glicerol-fosfato sobre la superficie de los mismos. Sin tener en cuenta una teoría particular, se cree que estos cuerpos de inclusión interactúan con el sistema inmune del paciente obteniéndose con ello efectos benéficos, tal como inhibición de las citoquinas pro-inflamatorias in vivo y/o promoción de citoquinas anti- inflamatorias . Las células que reaccionan pueden ser células inmunes, tal como células presentadoras de antígenos profesionales o no profesionales, células endoteliales , células reguladoras, tal como células NK-T y otras . Estos cuerpos de inclusión aceptables para uso farmacéutico incluyen cuerpos de inclusión sintéticos y semi-sintéticos cuyos contornos son típicamente, pero no exclusivamente, esféricas, cilindricas, elipsoides, incluyendo esféricas achatadas y alargadas, serpenteadas, reniformes, etc., y tamaños entre 20 nm aproximadamente y 500 µt? aproximadamente de diámetro, preferentemente medido por el eje mayor, y que comprenden grupos glicerol-fosfato sobre la superficie de los mismos. Los cuerpos de inclusión aceptables para uso farmacéutico poseen grupos glicerol-fosfato de características predeterminadas sobre la superficie exterior. Sin tener en cuenta una teoría particular, se cree que estos grupos tienen la capacidad de interactuar con el o los receptores apropiados, distintos del receptor PS exclusivamente, sobre las células presentadoras de antígenos in vivo. La estructura de estos grupos puede ser alterada por síntesis y puede incluir todo, parte o una versión modificada del grupo glicerol-fosfato original. Por ejemplo, el oxígeno con carga negativa del grupo fosfato dentro del grupo glicerol-fosfato se puede convertir en un grupo éster fosfato (por ejemplo, L-OP(O) (0' ) (0''), donde L es el resto del grupo glicerol-fosfato, R es -CH2CH (OH) CH20H y R' ' es alquilo con 1 a 4 átomos de carbono o alquilo con 2 a 4 átomos de carbono sustituido con hidroxilo y 1 a 3 grupos hídroxilo, siempre que R' ' sea más fácil de hidrolizar in vivo que el grupo R' ; en un grupo difosfato, incluyendo ésteres difosfato (por ejemplo, L-OP (O) (0' ) OP (0) (O' ' ) 2, donde L y R' es como se definió previamente y cada R' ' es, independientemente hidrógeno, alquilo con 1 a 4 átomos de carbono, o un alquilo de 2 a 4 átomos de carbono sustituido con hidroxilo y 1 a 3 grupos hidroxilo siempre que el segundo grupo fosfato [-P (0) (0' ' ) 2] sea más fácilmente hidrolizable in vivo que el grupo R' ; o en un grupo trifosfato, incluyendo ésteres trifosfato (por ejemplo, L-OP (0) (0')0P(0) (0'') 0P (O) (0' ' ) 2 donde L y R' son como se definieron previamente y cada R' ' es, independientemente, hidrógeno, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, o un alquilo de 2 a 4 átomos de carbono sustituido con hidroxilo y 1 a 3 grupos hidroxilo siempre que el segundo y tercer grupo fosfato sea más fácilmente hidrolizable in vivo que el grupo R' ; y semejantes. Dichos grupos glicerol -fosfato alterados por síntesis pueden expresar glicerol-fosfato in vivo y, por consiguiente, dichos grupos alterados son grupos que se pueden convertir en glicerol-fcsfato. El fosfatidilglicerol es un compuesto conocido. Se puede producir, por ejemplo, mediante tratamiento de una forma dimérica natural de fosfatidilglicerol , cardiolipina, con fosfolipasa D. También se puede preparar por síntesis enzimática a partir de fosfatidilcolina usando fosfolipasa D; véase, por ejemplo, la Patente de EE.UU. N° : 5.188.951, Tremblay, et al. Desde un punto de vista químico, posee un grupo glicerol-fosfato y un par de cadenas de ácidos grasos de Cia-C2o similares pero diferentes. Tal como se usa aquí, el término "PG" pretende abarcar los fosfolípidos que transportan un grupo glicerol-fosfato con un amplio rango de al menos una cadena de ácido graso, siempre que la entidad PG resultante pueda participar como un componente estructural de un liposoma. Preferentemente, dichos compuestos PG se pueden representar con la siguiente Fórmula I : donde R y R se seleccionan independientemente entre cadenas hidrocarbonadas de C1.-C24, saturadas o ínsaturáüaST" de cadena lineal o que contienen una cantidad limitada de ramificaciones, donde al menos una cadena tiene entre 10 y 24 átomos de carbono. Esencialmente, las cadenas de lípidos R y R1 forman el componente estructural de los liposomas, en lugar del componente activo. Por consiguiente, se pueden variar para que incluyan dos o una de dichas cadenas de lípidos, ya sean iguales o diferentes, siempre que cumplan con dicha función estructural. Preferentemente, las cadenas de lípidos pueden ser de 10 a 24 átomos de carbono de longitud aproximadamente, saturados, monoinsaturados o poliinsaturados , de cadena lineal o con una cantidad limitada de ramificaciones. Como ejemplos de cadenas de lípidos saturados que son de utilidad se puede mencionar laurato (C12) , miristato (C14) , palmitato (C16) , estearato (C18) , araquidato (C20) , behenato (C22) y lignocerato (C24) para la PG en la presente invención. El palmitoleato (C16) y oleato (C18) son ejemplos de cadenas de lípidos monoinsaturados adecuadas. El linoleato (C18) , linolenato (C18) y ariquidonato (C20) son ejemplos de cadenas de lípidos poliinsaturados adecuados para su uso en PG en los liposomas de la presente invención. Los fosfolípidos con una sola de dichas cadenas de lípidos, que también son de utilidad en la presente invención, se conocen como lisofosfolípidos . La presente invención también abarca el uso~~cte tlpoiscinas-erraros cxrte~3 el rom oneTit^ activo ey rar forma dimérica de PG, es decir, cardiolipina, pero también hay otros dímeros de la Fórmula I que son adecuados . Preferentemente, dichos dímeros no están entrecruzados sintéticamente con un agente de entrecruzamiento de síntesis, tal como maleimida sino que en realidad están entrecruzados por eliminación de una unidad de glicerol como describió Lehninger, Eiochemistry, pág. 525 (1970) y como se muestra en la siguiente reacción: -co- -CH, -co- -O CH O -IpI- -O CH2CH(OH)CH2OH O" PG CO O CH2 CH, -CO R CO O CH O CH O CO- C IH2 O IPI OCH2CH(OH)CH20 -O CH2 O" cardiolipin donde cada R y R1 son, independientemente, como se definieron previamente. Como se indicó previamente y nuevamente sin tener en cuenta una teoría particular, se cree que el grupo PG y su dímero constituyen un ligando dado que se considera que se une a un sitio específico sobre una proteína u otra molécula ("receptor de PG") y, por consiguiente, esta molécula de fosfatidilglicerol (y su forma dimérica) a menudo se denomina "ligando" o "grupo de unión" en este documento. Se cree que dicha unión tiene lugar ,. ,. "'o del grupo cardiolipina glicerol-fosfato -O-P (=0) (OH) -0-CH2-CH (OH) -CH2-0H, que a veces se denomina "grupo principal", "grupo activo" o "grupo de unión" en este documento. En vista de lo mencionado anteriormente, la referencia que se hace aquí a "unión" , "grupo de unión" o "ligando" no debe interferir con ningún mecanismo o modo de acción. No obstante, se considera que los grupos mencionados de glicerol-fosfato son presentados sobre las superficies externas de los cuerpos de inclusión de la presente invención para su interacción con los componentes del sistema inmune del paciente. Cabe destacar que esta interacción no es la misma que la interacción específica de las células apoptóticas con el receptor de fosfatidilserina sobre las células presentadoras de antígenos. Los ejemplos de "porciones tridimensionales de los cuerpos de inclusión" o "cuerpos de inclusión aceptables para uso farmacéutico" incluyen las entidades sintéticas o—semi— sintéticas biocompatibles , tal como liposomas, perlas sólidas, perlas huecas, perlas rellenas, partículas, gránulos y microesferas de materiales biocompatibles, naturales o sintéticos, que se utilizan habitualmente en la industria farmacéutica. Las perlas pueden ser sólidas o huecas o pueden estar rellenas de un material biocompatible . El término "biocompatible" se refiere a sustancias que, en la cantidad empleada, no son tóxicas o presentan perfiles de toxicidad aceptables de modo que su uso in vivo sea aceptable. Asimismo, el término "aceptable para uso farmacéutico" utilizado con relación a los "cuerpos de inclusión aceptables para uso farmacéutico" se refiere a cuerpos de inclusión compuestos de uno o varios materiales que son aceptables para uso farmacéutico y adecuados para una distribución in vivo. Dichos cuerpos de inclusión pueden incluir los liposomas formados por lípidos, uno de los cuales es PG. Como alternativa, los cuerpos de inclusión aceptables para uso farmacéutico pueden ser perlas sólidas, perlas huecas, perlas rellenas, partículas, gránulos y microesferas de materiales biocompatibles, que comprenden uno o varios materiales biocompatibles tal como polietilenglicol , poli (metilmetacrilato) , polivinilpirrolidona, poliestireno y un amplio rango de otros materiales naturales, semi-sintéticos y sintéticos, con grupos glicerol- fos ato unidos- a los mismos . Como se indicó previamente, los análogos de fosfatidilglicerol con grupos activos modificados, que también interactúan con los receptores de PG sobre las células presentadoras de antígenos, a través de la misma vía receptora que PG o que de otra manera dan como resultado una reacción anti- inflamatoria en el cuerpo receptor, están contemplados dentro del alcance del término fosfatidilglicerol . Estos incluyen, por ejemplo, compuestos en los cuales se han derivatizado uno o varios de los grupos hidroxilo y/o el grupo fosfato, o que se encuentran en la forma de una sal. Muchos de dichos compuestos forman grupos hidroxilo libres in vivo, en el momento o después de su administración y, por lo tanto comprenden grupos convertibles en PG. Las composiciones preferidas de material son liposomas, que pueden consistir de diversos lípidos. Sin embargo, se prefiere que ninguno de los lípidos sean de carga positiva. En el caso de liposomas, el PG fosfatidil glicerol puede constituir la porción principal o toda la porción de la o las capas o paredes que conforman el liposoma, orientado de manera tal que la porción del grupo glicerol-fosfato del mismo se muestra hacia el exterior, con el fin de actuar como grupo de unión y la o las cadenas de lipidos conforman la pared estructural. Los liposomas, o vesículas de lipidos, son sacos sellados, en el rango de micrones o submicrones, cuyas paredes (de una sola capa o de múltiples capas) comprenden anfifilos adecuados. Habitualmente contienen un medio acuoso, aunque para la presente invención el contenido interior no es importante y en general es inactivo. Por consiguiente, en una realización preferida, los liposomas, así como otros cuerpos de inclusión aceptables para uso farmacéutico, están esencialmente libres de entidades no lipídicas farmacéuticamente activas (por ejemplo <1%) y más preferentemente están libres de entidades no lipídicas aceptables para uso farmacéutico. Dichos liposomas se preparan y tratan de manera tal que los grupos activos se presentan hacia el exterior sobre el cuerpo del liposoma. El PG en los liposomas de las realizaciones preferidas de esta invención sirven entonces como ligando y como componente estructural del propio liposoma. Así, una realización preferida de esta invención provee cuerpos de inclusión liposomales que exponen o que pueden ser tratados o inducidos para exponer, sobre las superficies de los mismos, uno o varios grupos de glicerol-fosfato que actuarán como grupos de unión. El fosfatidilglicerol es un ligando PG preferido y dichos lípidos deberían comprender un 10% - 100% del liposoma, siendo el equilibrio un constituyente inactivo, por e "em ±O-fosfatidilcolina PC, o un constituyente que actúa a través de un mecanismo diferente, por ejemplo fosfatidilserina PS, o mezclas de los mismos. Se prefieren los co-constituyentes inactivos, tal como PC. Al menos un 10% en peso de dicho liposoma está compuesto de PG, preferentemente al menos un 50%, más preferentemente un 60-100% y con mayor preferencia un 70-90%, siendo la realización más preferida de aproximadamente un 75% en peso de PG. También se pueden usar mezclas de liposomas PG con liposomas inactivas y/o con liposomas de fosfolípidos que actúan a través de un mecanismo diferente, siempre que la cantidad total de PG sea superior a un valor mínimo de aproximadamen e un 10% y con preferencia superior a un 60% en la mezcla total . Con respecto a los cuerpos de inclusión no liposomales que se pueden utilizar en la presente invención, pueden incluir perlas bioco patibles sólidas o huecas del tamaño apropiado. Los cuerpos de inclusión sintéticos o semi-sintéticos biocompatibles no liposomales se pueden seleccionar entre polietilenglicol, poli (metilmetacrilato) , polivinilpirrolidona , poliestireno y un amplio rango de otros materiales naturales, semi-sintéticos y sintéticos, con los grupos glicerol-fosfato unidos a las superficies de los mismo. Dichos materiales incluyen pcrtfm r©s biodegradables, tal como los que fueron descriptos por Dunn, et al., Patente de EE.UU. N° : 4.938.763, cuyo contenido se incorpora por completo en este documento a modo de referencia. Los polímeros biodegradables están descriptos en el arte e incluyen, por ejemplo, polímeros de cadena lineal tal como poliláctidos , poliglicólidos, policaprolactonas , polianhídridos , poliamidas, poliuretanos , poliesteramidas , poliortoésteres , polidioxanonas ; poliacetales , policetales, policarbonatos , poliortocarbonatos , polifosfazenos , polihidroxibutiratos , polihidroxivaleratos , oxalatos de polialquileno, succinatos de polialquileno , ácido poli (málico) , ácidos poli (amino) , polivinilpirrolidona, polietilenglicol , polihidroxicelulosa , quitina, quitosan y copolímeros, terpolímeros y combinaciones de los mismos. Otros polímeros biodegradables incluyen, por ejemplo, gelatina, colágeno, etc. Las sustancias adecuadas para la derivatización para unir el o los fosfolípidos , o porciones de los mismos, con grupos o grupos de unión, a los cuerpos de inclusión tridimensionales se encuentran disponibles comercialmente por ejemplo de Polisciences Inc., 400 Valley Road, Warrington, PA 18976, o de Sigma Aldrich Fine Chemicals.
Los métodos para su derivatización son conocidos en el arte. Los ejemplos específicos preferidos de d cncrs se describen en la Solicitud de Patente Internacional PCT/CA02/01398 , Vasogen Ireland Limited, cuyo contenido se incorpora en este documento a modo de referencia. Se contempla que el paciente puede ser un mamífero, incluyendo, por ejemplo, seres humanos y animales domésticos tal como vacas, caballos, cerdos, perros, gatos y semejantes. Los fosfolípidos son moléculas anfifílicas (es decir, son anfifilos) , lo que significa que el compuesto comprende moléculas que poseen un grupo polar soluble en agua unido a una cadena hidrocarbonada insoluble en agua. Los anfifilos que constituyen las capas de la matriz tienen regiones polares y apolares definidas. Los anfifilos pueden incluir, además de PG, en esta invención, otros lípidos naturales usados solos con el fosfolípido que transportan al grupo activo o en mezclas con otros. Los anfifilos que constituyen la o las capas de los liposomas pueden ser compuestos sintéticos que confieren estructura, inertes, tal como alquiléteres de polioxietileno, alquilésteres de polioxietileno y diésteres de sacarosa. Los métodos para preparar liposomas del tamaño apropiado son conocidos en el arte y no forman parte de esta invención. Se pueden consultar numerosos libros de texto y artículos en la literatura sobre este tema, por ejemplo, la revisión "Liposomes as Pharmaceutical Dosage Forms" , Se" Yechezkel Barenholz y Daan J. A. Chrommelin, y la literatura citada en la misma, por ejemplo New, R. C. "Liposomes: A Practical Approach" , IRL Press de Oxford University Press (1990) . El diámetro de los liposomas, así como de los demás cuerpos de inclusión aceptables para uso farmacéutico, de la realización preferida de esta invención comprende entre 20 nm aproximadamente y 500 µt? aproximadamen e, más preferentemente entre 20 nm aproximadamente y 1000 nm aproximadamente, con preferencia entre 50 nm aproximadamente y 500 nm aproximadamente y con mayor preferencia entre 80 nm aproximadamente y 120 nm aproximadamente (preferentemente se mide por el eje mayor) . En una realización, el diámetro del liposoma comprende entre 60 nm y 500 µ??. Los cuerpos de inclusión aceptables para uso farmacéutico se pueden suspender en un vehículo aceptable para uso farmacéutico, tal como solución salina estéril fisiológica, agua estéril, agua libre de pirógenos, solución salina isotónica y soluciones amortiguadoras de fosfato (por ejemplo soluciones acuosas estériles que comprenden solución amortiguadora de fosfato) , así como otras sustancias compatibles no tóxicas usadas en las formulaciones farmacéuticas, tal como, por ejemplo, adyuvantes, soluciones amor iguadoras , conservantes y semejantes. Preferentemente, los cuerpos de inclusión aceptables para uso farmacéutico están conformados en una suspensión líquida en un líquido biocompatible estéril, tal como solución amortiguadora salina, y se administran al paciente por cualquier ruta apropiada que lo exponga a uno o varios componentes del sistema inmune, tal como por vía intra-arterial , intravenosa o, más preferentemente, intramuscular o subcutánea. Se contempla que los cuerpos de inclusión aceptables para uso farmacéutico se pueden secar por congelamiento o liofilizar para que puedan ser resuspendidas posteriormente para su administración. Esta invención también está dirigida a un conjunto de elementos que comprende cuerpos de inclusión que transportan grupos de unión liofilizados o secados por congelamiento y un vehículo aceptable para uso farmacéutico, tal como solución salina estéril fisiológica, agua estéril, agua libre de pirógenos, solución salina isotónica y soluciones amortiguadoras de fosfato (por ejemplo soluciones acuosas estériles que comprenden solución amortiguadora de fosfato) , así como otras sustancias no tóxicas compatibles usadas en las formulaciones farmacéuticas, tal como, por ejemplo, adyuvantes, soluciones amortiguadoras, conservantes y semejantes. También se pueden incluir protectores para el lactosa o sacarosa. Una manera preferida de administrar los cuerpos de inclusión aceptables para uso farmacéutico al paciente es una serie de inyecciones, administrados diariamente, varias veces por semana, semanalmente o mensualmente al paciente, sobre un período que varía en un rango entre una semana a varios meses. La frecuencia y duración del desarrollo de la administración varía de un paciente a otro y según la afección en tratamiento, su severidad y si el tratamiento será profiláctico, terapéutico o curativo. El diseño y la optimización de los mismos son habilidades propias del profesional a cargo. Se prefiere la inyección intramuscular, en especial la vía del músculo glúteo. Un programa particular de inyecciones, en al menos algunas de las indicaciones de la invención, comprende la inyección, en el músculo glúteo, de una cantidad apropiada de cuerpos de inclusión el día 1, otra inyección el día 2, otra inyección el día 14 y luego inyecciones de "refuerzo" a intervalos mensuales, si fuera apropiado. Se postula que, en muchas realizaciones de la presente invención, los cuerpos de inclusión aceptables para uso farmacéutico que comprenden grupos PG como grupos de unión sobre la superficie de los mismos están actuando como modificadores del sistema inmune del paciente, de manera similar a la de una vacuna. Por consiguiente se utilizan eir las cantidades y los métodos de administración suficientes como para proveer una concentración localizada de los cuerpos de inclusión en el sitio de la introducción. Las cantidades de dichos cuerpos de inclusión que son apropiadas para una modificación del sistema inmune posiblemente no se correlacionen directamente con el tamaño corporal del receptor y por ello se pueden distinguir claramente de las dosificaciones de fármacos, que están diseñados para proveer niveles terapéuticos de sustancias activas en el torrente sanguíneo y los tejidos del paciente. Entonces, las dosificaciones de fármacos serán probablemente mucho mayores que las dosificaciones que modifican el sistema inmune. La correlación entre el peso de los liposomas y la cantidad de liposomas deriva del hecho, aceptado por los especialistas en el arte de formulaciones liposomales, una vesícula de dos capas de 100 nm de diámetro contiene 81.230 moléculas de lípido por vesícula, distribuidas aproximadamente 50:50 entre las dos capas (véase Richard Harrigan - 1992 Universidad de British Columbia, Tesis PhD "Transmembrane pH gradients in liposomes (microform) : drug-vesicle interactions and protón flux", publicado por National Library of Canadá, Ottawa, Canadá (1993); N° Orden de University Microfilms UMI00406756 ,- N° Canadiana G??t?S?G,—ISBN 0315796936) . A partir de esto es posible calcular, por ejemplo, que una dosis de 5 x 103 vesículas, en el orden de la dosis usada en los ejemplos específicos in vivo más adelante en este documento, es equivalente a 4,06 x 1013 moléculas de lípido. Usando el número de Avogadro para la cantidad de moléculas de lípido en una molécula gramo (mol), 6,023 x 1023, se puede determinar que esto representa 6,74 x 10"11 moles que, con un peso molecular de 729 para PG equivale aproximadamente a 3,83 x 10"8 g o 38,3 ng de PG para dicha dosificación. La cantidad de cuerpos de inclusión acepta les para uso farmacéutico que será administrada varía según la naturaleza del trastorno de mamífero que se pretende tratar y según la identidad y las características del paciente. Preferentemente, la cantidad eficaz de cuerpos de inclusión aceptables para uso farmacéutico no debe ser tóxica para el paciente y no debe ser tan grande como para superar al sistema inmune. Cuando se utiliza una administración intra-arterial, intravenosa, subcutánea o intramuscular de una suspensión acuosa estéril de cuerpos de inclusión aceptables para uso farmacéutico, se prefiere administra, para cada dosis, entre 0,1-50 mi aproximadamente de líquido, que contiene una cantidad de cuerpos de inclusión equivalentes en general a 10% - 1000% de la cantidad de leucocitos habitualmente presentes en un volumen equivalente de sangre completa . Preferentemente , Ta" cantidad de cuerpos de inclusión administrada por vez a un paciente humano se encuentra en el rango entre aproximadamente 500 y aproximadamente 2,5 x 109 (<250 ng de cuerpos de inclusión, en el caso de liposomas, prorrateada para las diferencias de densidad en otras realizaciones de cuerpos de inclusión) , más preferentemente entre aproximadamente 1.000 y aproximadamente 1.500.000.000, con preferencia entre 10.000 y 100.000.000 aproximadamen e y con mayor preferencia entre aproximadamente 200.000 y aproximadamente 2.000.000. Dado que los cuerpos de inclusión aceptables para uso farmacéutico actúan, en el proceso de la invención, como modificadores del sistema inmune, en la naturaleza de una vacuna, la cantidad de dichos cuerpos de inclusión administrada en el sitio de inyección para cada administración puede constituir una cuantificación más significativa que la cantidad o el peso de cuerpos de inclusión por unidad de peso corporal del paciente. Por el mismo motivo, ahora se considera que las cantidades eficaces o la cantidad de cuerpos de inclusión para animales pequeños no se traducen directamente en cantidades eficaces para mamíferos más grandes (es decir, más de 5 kg) sobre una base de relación de pesos.
La presente invención está indicada para su uso en la protilaxis y/o el tratamiento de una amplia variedad 3e~ trastornos en mamíferos en los cuales están comprometidos el funcionamiento de células T, la inflamación, la disfunción endotelial y la expresión inapropiada de citoquinas . Los pacientes que padecen o sospechados de padecer dichos trastornos pueden ser seleccionados para el tratamiento. El término "tratamiento" se refiere a una reducción de los síntomas, tal como, por ejemplo, una disminución en la severidad o en la cantidad de síntomas de la enfermedad particular o una limitación del avance progresivo de los síntomas. Con respecto a los trastornos debidos a la función de las células T (mediados por células T) , estos trastornos incluyen cualquier y todos los trastornos mediados al menos en parte por células T e incluyen, por ejemplo, úlceras, heridas y trastornos autoinmunológicos incluyendo, por ejemplo, diabetes, escleroderma, psoriasis y artritis reumatoidea . La invención está indicada para su uso con reacciones alérgicas inflamatorias, trastornos por reacciones en transplantes de órganos y células e infecciones microbianas que originan reacciones inflamatorias. También está indicado para su uso en la profilaxis contra el estrés oxidativo y/o las lesiones de reperfusión isquémica, ingesta de venenos, exposición a sustancias químicas toxicas , lesiones por radiación y exposición a sust nci s irritantes transportadas por aire y por agua, etc., causantes de una inflamación perjudicial. También está indicado para los trastornos inflamatorios, alérgicos y mediados por células T de órganos internos, tal como riñon, hígado, corazón, etc. Con respecto a los trastornos que involucran una expresión inapropiada de citoquinas para la cual está indicada la presente invención, incluyen cualquier y todos los trastornos que comprenden una expresión inapropiada de citoquinas e incluyen, por ejemplo, enfermedades neurodegenerativas. Las enfermedades neurodegenerativas, incluyendo el síndrome de Down, el mal de Alzheimer y el mal de Parkinson, están asociadas con niveles incrementados de ciertas citoquinas, incluyendo la interleuquina-?ß (IL-1ß) (véase Griffin WST et al. (1989) ; Mogi M. et al. (1996) ) . También se ha demostrado que la IL-?ß inhibe la potenciación a largo plazo en el hipocampo ( urray, C. A. et al. (1998)) . La potenciación a largo plazo en el hipocampo es una forma de plasticidad sináptica y se considera en general que es un modelo apropiado para la memoria y el aprendizaje (Bliss, T.V.P. et al. (1993)) . Entonces, actualmente se cree que una expresión inapropiada de citoquinas en el cerebro está comprometida en el desarrollo y el avance de las enfermedades urodcgcnoÍ a-tÍvaü y los rrasTOrnos neuroin Tamatorios . Por consiguiente, la invención está indicado para el tratamiento y la profilaxis de una amplia variedad de trastornos neurodegenerativos y otros trastornos neurológicos en mamíferos, incluyendo síndrome de Down, mal de Alzheimer, mal de Parkinson, demencia senil, depresión, enfermedad de Huntingdon, neuropatías periféricas, síndrome de Guillain Barr, enfermedades de la médula espinal, enfermedades neuropáticas de las articulaciones, enfermedad desmielinizante inflamatoria crónica, neuropatías incluyendo mononeuropatía, polineuropatía, neuropatía sensorial simétrica distal, trastornos de la unión neuromuscular , miastenias y esclerosis amiotrófica lateral (ALS) . El tratamiento y la profilaxis de estas enfermedades neurodegenerativas representan una realización particularmente preferida de la invención, siendo especialmente preferido el tratamiento del mal de Alzheimer, mal de Parkinson y ALS. Con respecto a los trastornos que comprenden una disfunción endotelial, la presente invención está indicada para el tratamiento y la profilaxis de una amplia variedad de dichos trastornos en mamíferos incluyendo cualquiera y todos los trastornos mediados al menos en parte por una disfunción endotelial e incluyen, por ejemplo, enfermedades cardiovasculares, tal como ateroesclerosis , enfermedad cardíaca congestiva, enfermedad cerebrovascular (apoplejía), infarto de miocardio, angina, hipertensión, etc., trastornos vasoespásticos tal como enfermedad de Raynaud, síndrome cardíaco X, migraña, etc., y las lesiones que se producen como resultado de una isquemia (lesión isquémica o lesión por reperfusión- isquemia) . En resumen, puede ser prácticamente cualquier trastorno cuya patología comprenda el funcionamiento inapropiado del endotelio. Otras indicaciones para las composiciones y los procesos de la presente invención incluyen el tratamiento de pacientes para acelerar la velocidad de cicatrización de heridas y úlceras y el tratamiento de pacientes antes de una intervención quirúrgica, con el fin de acelerar la velocidad de recuperación de la cirugía, inclusive la velocidad de cicatrización de las lesiones e incisiones quirúrgicas . Con respecto a los "trastornos cardíacos", la presente invención está indicada para el tratamiento y la profilaxis de una amplia variedad de dichos trastornos en mamíferos incluyendo cualquiera y todos los trastornos relacionados con el corazón e incluyen, por ejemplo, arritmias ventriculares (taquicardia o fibrilación ventricular) y muerte súbita por una enfermedad del corazón. La susceptibilidad de los pacientes a los trastornos cardiacos-,—a-1—como—arrét-mi rs—y—mrrerte sütuta cardlacá a menudo está indicada por intervalos QT-c prolongados en el ritmo de latidos del corazón. Se considera que la administración de las composiciones acordes con las realizaciones preferidas de la invención reduce los intervalos QT-c en pacientes mamíferos, lo cual sería indicativo de una susceptibilidad reducida a arritmias y muerte cardíaca súbita. La invención se describirá a continuación, a efectos ilustrativos, en los siguientes ejemplos no limitantes. EJEMPLOS En los ejemplos que se describirán más adelante, las siguientes abreviaturas tienen el significado que se detalla a continuación. Si no está definida una abreviatura, tiene el significado aceptado en general.
Microgramo Microlitro µp? = icrómetro µ = Micromolar CHS = hipersensibilidad de conté Cm Centímetro DMSO = dimetilsulfóxido DNFB = 2 , 4-dinitrofluorobenceno DHS = hipersensibilidad de tipo tardía EtOH = etanol G = Gramo Hs = Horas Hz = Hertz IM = intramuscular IP = intraperitoneal Kg = kilogramo LPS = lipopolisacárido LTP = potenciación a largo plazo Mg = miligramo Min = minutos Mi = mililitro MM = milimolar Ms = milisegundo Ng = nanogramo Nm = Nanómetro NM = Nanomolar PBS = Solución amortiguadora fosfato salina PCR = reacción en cadena de la polimerasa l-palmitoíl-2 -oleoí1- sn-glicero- 3 [fosfo-L-serina] , denominado PS este documento l-palmitoíl-2 -oleoí1 -sn-glicero- 3 [fosfo-rac- (1-glicerol) ] ] , denominado PG en este documento 1-palmitoíl -2 -oleoí1- sn-glicero- 3 fosfocolina, denominado PC en documento revoluciones por minuto segundo A menos que se indique lo contrario, la forma precisa de los lípidos usados en los experimentos era POPS, POPG y POPC como se definió previamente. Ejemplo 1 Se prepararon liposomas con un diámetro promedio de 100 ± 20 nm de acuerdo con los métodos estándar conocidos en el arte y la composición de los mismos era: Grupo A - PS 100% Grupo B - PG 100% Grupo C - control, sin liposomas.
Se diluyó una suspensión madre de cada composición de üpesemas-;—que— unLerrfa ¾ 8 x TJ14 iiposomas por mT^ con PBS para obtener una suspensión inyectable que contenía 6 x 106 partículas por ral. Las suspensiones liposomales se inyectaron en ratones hembra BALB/c (Jackson Laboratories) de 6-8 semanas y con un peso de 19-23 g, con el fin de determinar el efecto sobre la hinchazón de oreja en el modelo de hipersensibilidad de contacto (CHS) en murinos. Se utilizaron las pruebas para el modelo CHS para las reacciones inflamatorias mediadas por Thl . Los animales fueron asignados a 3 grupos, con 5 animales en cada uno. Los grupos A y B recibieron aproximadamente 3 x 105 de los Iiposomas identificados previamente (es decir, PC 100% y PG 100%, respectivamente) , en un volumen de 50 µ? aproximadamente. El grupo C era un grupo control, que no recibió Iiposomas. Protocolo Se llevaron a cabo los siguientes experimentos: TABLA I Grupo Liposomas Día 1 Día 2 Día 3 Día 4 Día 5 Día 6 Día 7 (24 horas) A 100% PS Inyectad Inyecta Inyect Inyecta Inyect Inyectad Medición o luego do ado do ado o luego en oreja sensibil estimula izado do B PG 100% Inyectad Inyecta Inyect Inyecta Inyect Inyectad Medición o luego do ado do ado o luego en oreja sensibil estimula izado do Los días 1-6, los ratones de los grupos A y B recibieron inyeeeirenes—de—ras rBB ertívas preparaciones de liposomas . Se inyectaron aproximadamente 300.000 liposomas en un volumen de 50 µ? por inyección intramuscular (I ) , con una administración total durante todo el período de prueba de aproximadamente 1.800.000 liposomas. A los ratones del grupo control (grupo C) no se les administraron liposomas, pero fueron sensibilizados, estimulados y evaluados de la misma manera que los grupos A y B, como se describirá a continuación. Sensibilización El día 1, después de la inyección de liposomas correspondiente a ese día, los ratones fueron anestesiados con 0,2 mi de pentobarbital sódico 5 mg/ml mediante inyección IP. Se roció la piel del abdomen de los ratones con EtOH 70% y luego se utilizó una hoja de escalpelo para eliminar aproximadamente un parche de una pulgada de diámetro de pelo del abdomen. El área rasurada se pintó luego con 25 µ? de 2 , 4 -dinitrofluorobenceno (DNFB) 0,5% en una mezcla 4:1 de acetona: aceite de oliva usando una punta de pipeta. Estímulo El día 6 después de la inyección de liposomas, los ratones fueron estimulados con DNFB esparciendo 10 µ? de DNFB 0,2% sobre la superficie dorsal de la oreja derecha con una punta de pipeta y esparciendo 10 µ? de vehículo sobre la u'x ja i qui ida uun una purta—de-pip&fca-: - Resultados El día 7, 24 horas después del estímulo, cada animal fue anestesiado con halotano y se midió el espesor de la oreja usando un micrómetro accionado por resorte Peacock. Los datos obtenidos se expresaron como la diferencia entre la espesor de la oreja derecha tratada y el espesor de la oreja izquierda tratada con vehículo. Los experimentos se repitieron tres veces, con animales de características similares. El incremento de hinchazón de oreja se usó como una medida de la respuesta CHS. El grado de significación de los datos se determinó con la prueba de t de Student de dos colas. Se consideró significativo un valor P <0,05. Los resultados se muestran en la FIG. 1, que es un gráfico de barras que muestra los valores medios de los tres experimentos de hinchazón de oreja, expresados en µtt?. En la FIG. 1 se muestra que se logró una reducción significativa en la hinchazón de oreja con la inyección de los liposomas acordes con la presente invención. La reducción lograda con los liposomas con PG 100% es sustancialmente mayor que la obtenida con los liposomas con PS 100%. Ejemplo 2 Se prepararon liposomas con un diámetro promedio de 100 ± 20 nm de acuerdo con los métodos estándar conocidos en el arto y de las si uierrtre~s composiciones : Grupo A - PG 100% Grupo B - PG 75%, PC 25% Grupo C - PG 50%, PC 50% Grupo D - PG 25%, PC 75% Grupo E - PBS sólo Grupo F - ninguna inyección Se diluyó una suspensión madre de cada composición de liposomas, que contenía 4,8 x 1014 liposomas por mi, para obtener una suspensión inyectable que contenía 12 x 10s liposomas por mi. Las suspensiones liposomales se inyectaron en ratones para determinar el efecto sobre la hinchazón de oreja en el modelo CHS de murinos, un sistema biológico que es de utilidad para evaluar reacciones inflamatorias mediadas por Thl . Para estos experimentos, se usaron ratones hembra BALB/c (Jackson Laboratories) de 6-8 semanas y con un peso de 19-23 g. Los animales fueron asignados a 6 grupos (los grupos A-F, indicados previamente) con 10 animales en cada grupo. También se incluyeron grupos control que no recibieron inyecciones (grupo F) o inyecciones de PBS sin liposomas (grupo E) . Los animales de los grupos A-D recibieron inyecciones de 50 µ? de las suspensiones de liposomas identificadas previamente, cada una de las cuales c^rrte"nxar 6 x 105 liposomas aproximadamente. Protocolo La prueba comprende una sensibilización (Sens) con una sustancia potencialmente causante de inflamación, inyección de liposomas (Iny) en los animales de prueba o PBS en los controles y estímulo (Est) con dicha sustancia potencialmente causante de inflamación después de medición (Med) para determinar si la inyección de liposomas era eficaz contra el desarrollo de inflamación ocasionado por el estímulo. Se llevaron a cabo los siguientes experimentos: Grupo Liposoraas Día 1 Día 2 Día 3 Día 4 Día 5 Día 6 Día 7 A PG 100% Sens Iny Iny Iny Iny Est e Med e Iny Iny B PG 75% Sens Iny Iny Iny Iny Est e ed e Iny Iny C PG 50% Sens Iny Iny Iny Iny Est e Med e Iny Iny D PG 25% Sens Iny Iny Iny Iny Est e Med e Iny Iny E Ninguno, Sens Iny Iny Iny Iny Est e Med {PBS e Iny Iny sólo) F Ninguno Sens Est Med Los días 1-6 los ratones recibieron inyecciones con los respectivos liposomas indicados previamente. Los liposomas fueron inyectados en un volumen de 50 µ? por inyección IM, es decir, 600.000 liposomas por ¦ inyección, para una administración total sobre todo el período de prueba de 3.600.000 liposomas. Los ratones del grupo control no recibieron liposomas pero fueron sensibilizados, estimulados y evaluados de la misma manera que los demás grupos de ratones, como se describirá a continuación.
Sensibilización (Sens) "El dTa ~, después de la inyección de liposomas correspondiente a ese día, los ratones fueron anestesiados con 0,2 mi de fenobarbital sódico 5 mg/ml mediante inyección IP. La piel del abdomen de los ratones fue rociada con EtOH 70% y se usó una hoja de bisturí para eliminar el pelo de un parche de aproximadamente una pulgada diámetro del abdomen. Sobre el área descubierta se esparcieron 25 µ? de 2 , 4 -dinitrofluorobenceno (DNFB) 0,5% en una mezcla 4:1 de acetona: aceite de oliva usando una punta de pipeta. Estímulo (Est) El día 6, después de la inyección de liposomas correspondiente a ese día, los ratones fueron estimulados (Est) con DNFB de la siguiente manera: se esparcieron 10 µ? de DNFB 0,2% sobre la superficie dorsal de la oreja derecha con una punta de pipeta y se esparcieron 10 µ? de vehículo sobre la oreja izquierda con una punta de pipeta. Resultados El día 7, 24 horas después del estímulo, cada animal fue anestesiado con Halotano y luego se midió (Med) el espesor de la oreja usando un micrómetro accionado por resorte Peacock. El incremento de la hinchazón de oreja se usó como una medida de la respuesta CHS. Los datos se expresaron como la diferencia en el espesor de la orej a derecha. tratada menos el espesor de la oreja izquierda tratada con vehículo . al grado de signiricaciOn entre los dos grupos se determinó con la prueba t de Student de dos colas . Se consideró significativo un valor P <0,05. Los resultados se muestran gráficamente en la FIG. 2, un gráfico de barras que muestra la hinchazón de oreja en µ?t?. Se usó el valor medio de los experimentos respectivos para representar el gráfico. En la FIG. 2 se muestra que se logró una reducción significativa en la hinchazón de oreja con PG 100% y 75%, lo cual demuestra que ambas concentraciones ofrecían protección contra el desarrollo de inflamación como resultado del contacto con la sustancia alergénica, DNFB.
Los liposomas con PG 50% y 25% también produjeron reducciones en comparación con ambos controles, pero las diferencias no alcanzaron un grado de significación estadístico en este experimento. Ejemplo 3 Se prepararon liposomas con un diámetro promedio de 100 ± 20 nm de acuerdo con los métodos estándar conocidos en el arte y estaban compuestos de PG 75%, PC 25%. Se usó una suspensión madre que contenía 4,8 x 1014 liposomas por mi igual que antes y se diluyó en PBS para obtener una suspensión inyectable que contenía las siguientes concentraciones de liposomas: Grupo Liposomas Concentración Liposomas Animales (liposomas por por en el mi) inyección grupo A PG 75%, PC 12 x 1011 6 x 10lü 10 25% B PG 75%, PC 12 x 109 6 x 108 10 25% C PG 75%, PC 12 x 10B 6 x 10v 16 25% D PG 75%, PC 12 x 10v 6 x 106 16 25% E PG 75%, PC 12 x 106 6 x 105 16 25% F Ninguno (PBS 16 sólo) Se agruparon ratones BALB-c en seis grupos (grupos A-F) incluyendo un grupo control que no recibió liposomas pero sí una inyección con 50 mi de PBS (grupo F) . Los ratones fueron sensibilizados en el flanco, se les inyectó la dosis de liposomas seleccionada, por vía intramuscular en el músculo de la pata derecha, el mismo día, aunque después de la sensibilización (día 1), y los días 2, 3, 4 y 5. El día 6 recibieron inyecciones y estímulos sobre la oreja como se describió en el Ejemplo 1. El espesor de la oreja se midió como ya se describió 24 horas después de aplicar eT estímulo . Los resultados (FIG. 3) muestran una diferencia significativa entre el grupo control (grupo F) y el grupo C (12 x 10s liposomas por mi) y entre el grupo control y el grupo D (12 x 107 liposomas por mi) y entre el grupo control y el grupo E (12 x 10s liposomas por mi) . Se observó poca diferencia entre el grupo control y los grupos A o B (12 x 1011 y 12 x 109 liposomas por mi, respectivamente) , lo cual sugiere que existe un rango óptimo de concentración de liposomas por encima del cual puede haber una reducción en los efectos benéficos. En otros experimentos, también se observó una disminución en el efecto debido a que la concentración de los liposomas se disminuyó por debajo de un valor de 12 x 104 liposomas por mi. Ej emplo 4 Se prepararon liposomas de la formulación PG 100% y con un tamaño promedio de 100 + 20 nm de acuerdo con los métodos estándar. Se sensibilizaron, inyectaron y estimularon cuatro grupos (grupos A-D) de 10 ratones de acuerdo con el procedimiento y el programa descriptos en el Ejemplo 3, con las siguientes cantidades de liposomas de PG 100% administrados en una suspensión de 50 µ?.
Grupo A - 6 x 107 Grupo B - 6 x 106 Grupo C - 6 x 105 Grupo D - 6 x 104 Los resultados, junto con el control PBS del Ejemplo 4, se muestran en la FIG. 4 en la forma de un gráfico de barras similar. Cabe destacar una reducción significativa en la hinchazón de oreja, en comparación con el grupo control para cada uno de los grupos de prueba, pero con poca diferencia entre los distintos grupos. Ejemplo 5 Se prepararon liposomas con una composición de PG 75%, PC 25% y con un diámetro promedio de 50, 100, 200 o 400 nm utilizando los métodos estándar. Fueron evaluados en el modelo CHS de murinos, como en los Ejemplos 3 y 4, usando 6 x 105 liposomas en suspensiones de 50 µ? para cada inyección, y el programa y procedimiento de sensibilización-inyección-estímulo como en el Ejemplo 3. Los grupos utilizados fueron: Grupo A - Liposomas de 50 nm Grupo B Liposomas de 100 nm Grupo C Liposomas de 200 nm Grupo D Liposomas de 400 nm Grupo E Sin liposomas Los resultados se muestran en la FIG. 5. El resultado con el grupo D, usando liposomas de 400 nm de diámetro, no es significativamente diferente del grupo control (grupo E) , lo cual es indicativo de un rango crítico probable de tamaño para este modelo. Ejemplo 6 Se diluyó una suspensión madre de liposomas de PG 75% con un diámetro promedio de 100 ± 20 nm que contenía 4,8 x 101¾ liposomas por mi para obtener una suspensión inyectable que contenía 6 x 105 liposomas por mi. Las suspensiones liposomales se usaron para inyecciones en ratones, con el fin de determinar el efecto sobre la hinchazón de oreja en el modelo DHS en murinos . Al igual que en el Ejemplo 1, se usaron ratones hembra BALB/c (Jackson Laboratories) de 6-8 semanas y con un peso de 19-23 g. Los animales fueron asignados a 3 grupos con 10 animales en cada uno. El grupo control (grupo C) recibió inyecciones con PBS solamente. Los animales de los grupos A y B recibieron inyecciones con 50 µ? de una suspensión que contenía 6 x 105 liposomas. Protocolo Los días 13-18, los ratones recibieron inyecciones con los liposomas de PG 75% como se indicará más adelante. Los liposomas fueron inyectados en un volumen de 50 µ? por inyección IM, es decir, 600.000 liposomas por inyección, para una administración total sobre todo el período de prueba de 3.600.000 liposomas. Los procedimientos de sensibilización y estímulo tuvieron lugar como se describió en el Ejemplo 2.
DIA TRATAMIENTO 1 Sensibilizados 6 Estimulados 7 Medidos 12 Estimulados 13 Medidos e inyectados 14 Inyectados 15 Inyectados 16 Medidos e inyectados 17 Inyectados 18 Inyectados y estimulados 19 Medidos Resultados Los rfísul toados—se—muestran—gráficamente—en—3ra —??tT^ 6~ adjunta y muestran que el PG 75% es eficaz en el modelo DHS el día 16, 24 horas después de la tercera inyección después del segundo estímulo. Ejemplo 7 Se prepararon liposomas compuestos de cardiolipina 100% (CL) y con un diámetro promedio de 100 ± 20 nm, utilizando métodos estándar. Se utilizaron a una dosificación de 6 x 105 liposomas por cada 50 µ? por inyección en el modelo DHS de murinos como se describió en el Ejemplo 6. Se compararon los datos obtenidos con los animales inyectados con liposomas CL (grupo A; 10 animales) con los datos obtenidos con los animales que solamente recibieron PBS (grupo B; 10 animales) . Los procedimientos de sensibilización, inyección y estímulo fueron como se describió en el Ejemplo 2. Los resultados de la medición del espesor de la oreja, efectuada el día 19, 24 hs después de la 6a inyección, se muestran en la FIG. 7. Los resultados muestran una reducción significativa en la hinchazón de oreja en el grupo de prueba inyectado con CL (Grupo A) . Ejemplo 8 Se prepararon liposomas de 100 nm de diámetro promedio y que comprendían ya sea cardiolipina 100% o cardiolipina 75% y PC 25%, mediante métodos estándar. Se sensibilizaron tres grupos (grupos A-C) de 10 ratones el día 1. El grupo unLzul l ibió inyecciones—de—PSS—Íes díaa 1,—2 y 6- gr¾ o-C) . Los otros dos grupos recibieron inyecciones de 6 x 105 liposomas de cardiolipina 100% (grupo A) o de 6 x 105 liposomas de cardiolipina 75% (grupo B) , todos los liposomas en 50 µ? por inyección de acuerdo con el mismo programa. Los ratones fueron estimulados el día 7 y se midió el espesor de la oreja como se describió en los ejemplos anteriores. En la FIG. 8 se muestran las mediciones medias de cada grupo. Ambos grupos que recibieron liposomas CL muestran una supresión estadísticamente significativa de CHS en comparación con el grupo control. Ejemplo 9 Con el fin de estudiar los mecanismos celulares y moleculares responsables de la función cognitiva, se utilizó el modelo de potenciación a largo plazo (LTP) en animales. La LTP es una forma de la plasticidad sináptica que tiene lugar en el hipocampo, que ha sido propuesto como el sustrato biológico para el aprendizaje y la memoria (Bliss et al. Nature 361: 31-39 (1990)) . En ratas, la LTP se puede monitorear electrofisiológicamente mediante métodos bien conocidos por los especialistas en el arte. Los animales son sacrificados después con el fin de investigar los cambios bioquímicos en los tejidos del hipocampo. La comparación de los resultados de los datos electrofisiológicos con los cambios bioquímicos eñ~ eT hipocampo es de utilidad para determinar la manera en que se pueden alterar los sucesos celulares responsables de la LTP en los animales que padecen enfermedades o trastornos asociados con una neuroinflamación, tal como envejecimiento, estrés, mal de Alzheimer y una infección bacteriana . La administración sistémica de lipopolisacáridos (LPS) , un componente de la pared celular de las bacterias Gram negativas, provoca activación del sistema inmune porque induce un incremento de las citoquinas pro- inflamatorias , tal como IL-?ß. Como se indicó previamente, un ejemplo de un déficit neuronal inducido por LPS y IL-?ß es el deterioro de la LTP en el hipocampo. Un indicador de la LTP es la pendiente promedio del conjunto de potenciales excitatorios post-sinápticos (epsp) . Con la estimulación tetánica, la pendiente epsp (%) aumenta marcadamente lo cual es indicativo de una mayor actividad sináptica. La inhibición de la LTP inducida por LPS reduce el incremento de la pendiente y/o hace que la pendiente epsp se revierta más rápidamente hacia la línea basal, lo cual indica que la mayor actividad sináptica es breve. Por consiguiente, se pueden usar las mediciones de la pendiente epsp (%) a intervalos de tiempo determinados después de un estímulo tetánico para reflejar la memoria y la pérdida de la misma é s tt s de un estímulo inrlamatorfcT, asi como Ta inflamación en el hipocampo del cerebro. Se prepararon liposomas con un diámetro promedio de 100 ± 20 nm de acuerdo con los métodos estándar conocidos en el arte y estaban compuestos de PG 75% y PC 25%. Se diluyó una suspensión madre de los liposomas que contenían aproximadamente 2,9 x 1014 liposomas por mi con PBS para obtener una suspensión inyectable que contenía aproximadamente 1,2 x 107 liposomas por mi. Esta suspensión se utilizó después para inyectar en ratas, con el fin de determinar el efecto sobre el deterioro de la LTP inducida por LPS. Para estos experimentos, se utilizaron ratas macho Wistar (BioResources Unit, Trinity College, Dublin) , que pesaban unos 300 g aproximadamente. Los animales fueron asignados a cuatros grupos, de 8 animales en cada grupo, que fueron tratados de la siguiente manera : Grupo A salina + control Grupo B salina + PG Grupo C LPS + control Grupo D LPS + PG inyectaron 150 µ? de cada una de las preparaciones identificadas previamente mediante inyección IM los días 1, 13 y 14.—Los grupos B y~D~re"ciSieron un total ~de S.400.000" liposomas (1.800.000 liposomas por inyección) . El procedimiento de LTP y el procedimiento de preparación de tejidos se llevaron a cabo el día 0. Procedimiento de LTP Las ratas fueron anestesiadas por inyección IP de uretano (1,5 g/kg) . Las ratas recibieron LPS (100 µg/kg) o salina por vía intraperitoneal . Tres horas después se les colocó un electrodo estimulador bipolar y un electrodo de registro unipolar en la vía perforante y en la región del cuerpo celular dorsal del giro dentado, respectivamente. Se aplicaron pulsos de prueba de 0,033 Hz y las respuestas se registraron durante 10 min antes y 45 min después de una estimulación de frecuencia alta (3 tandas de estímulos aplicados a intervalos de 30 seg, 250 Hz para 200 ms) . Las ratas fueron sacrificadas por decapitación. Se disecaron las siguientes piezas: el hipocampo, el giro dentado tetanizado y no tetanizado, la corteza y la corteza entorhinal sobre hielo, luego fueron seccionadas y congeladas en 1 mi de solución de Krebs (composición de Krebs, mM: NaCl 136, KC1 2,54, KH2P04 1,18, gS04.7H20 1,18, NaHC03 16, glucosa 10, CaCl2 1,13) que contenía DMSO 10%. Resultados Los resultados se muestran en la FIG. 9. El gráfico muestra la diferencia en el potencial excitatorio pos -sináptico (epsp)—en los—cuerpos—celulares—de—ías—células—granulosas .
Los datos son la media de siete a ocho observaciones para cada grupo de tratamiento y se expresan como el cambio porcentual medio en la pendiente epsp cada 30 s normalizada con respecto al valor medio de los 5 minutos inmediatamente previos a la estimulación tetánica. En la FIG. 9 se muestra que la inhibición de la LTP inducida por LP£ en las sinapsis de las células granulosas de la vía perforante era superada por el pre- tratamiento con los liposomas PG. Los triángulos negros representan al grupo A (salina + control) , los triángulos abiertos representan al grupo B (salina + PG) , los cuadrados negros representan al grupo C (LPS + control) y los cuadrados abiertos representan al grupo D (LPS + PG) . En la FIG. 10 se muestra que el análisis de los valores medios 40-45 minutos después del estímulo post-tetánico indica que el conjunto de la pendiente epsp había disminuido en el grupo control-LPS (barras abiertas) y que los liposomas PG (barras a' rayas) habían revertido significativamente este efecto (*p<0,01) . Como un índice de la funcionalidad de la memoria y el aprendizaje, la mejora en la capacidad para mantener la LTP demostrada con este Ejemplo indica que el tratamiento es adecuado para demencias, por ejemplo el mal de Alzheimer y para el trastorno de la memoria. Ejemplo 10 La IL-4 es una de las numerosas citoquinas que son secretadas por la subclase Th2 de linfocitos y es conocida por sus efectos anti-inflamatorios . En la FIG. 11 se muestra que la concentración de IL-4 en el hipocampo había aumentado significativamente en el grupo LPS que había sido tratado previamente con los liposomas PG (*p<0,05). Las barras abiertas representan el grupo control (grupo E) y las barras a rayas representan al grupo tratado con PG (grupo F) . La IL-4 se midió con un ELISA y se expresa como PG de IL-4 por mg de proteína total. Esta sensibilización de la citoquina anti-inflamatoria IL-4 en el cerebro es indicativo del uso del proceso y de la composición de las realizaciones preferidas de la presente invención en el tratamiento de un amplio rango de trastornos neuroinflamatorios , incluyendo mal de Parkinson, ALS, enfermedad desmielinizante inflamatorias crónica CIPD y síndrome de Guillain Barr. Ejemplo 11 La IL-?ß es una de las numerosas citoquinas secretadas por la subclase de linfocitos Thl y es conocida por sus efectos proinflamatorios . Se extrajeron los bazos de animales tratados como se describió en el Ejemplo 9, los grupos C y D del mismo, y se recolectaron los esplenocitos . Luego se prepararon de la siguiente manera: En la FIG. 12 se muestra que la concentración dé TL^ p-en" los esplenocitos era reducida significativamente en el grupo LPS que había sido pretratado con los liposomas PG (*p<0,05) . La IL-?ß se midió con un ELISA y se expresó como picogramos de IL-?ß por mg de proteína total. Esto es indicativo de un efecto inflamatorio sistémico del proceso y de las composiciones de las realizaciones preferidas de la presente invención. Ejemplo 12 La línea U937 es una línea celular de leucemia monocítica que se puede diferenciar en macrófagos con la administración de ésteres de forbol. El tratamiento con lipopolisacáridos (LPS) , un componente de la pared celular de bacterias Gram negativas, estimula una respuesta inflamatoria en las células U937, con subsiguiente sensibilización de la expresión de numerosas moléculas inflamatorias, incluyendo TNFcc . Este modelo provee un sistema experimental para evaluar las terapias anti-inflamatorias. Los macrófagos se pueden cultivar en un medio de cultivo en presencia de una composición sospechada de ser anti-inflamatoria y luego se puede medir la expresión de TNFa. Se prepararon liposomas con un diámetro promedio de 100 ± 20 nm de acuerdo con los métodos estándar conocidos en el arte y tenían una composición de fosfatidilglicerol 75¥~ (PG) , fosfatidilcolina 25% (PC) . La concentración de la composición madre de liposomas era de aproximadamente 40 mM de lípidos y se diluyó hasta obtener las siguientes concentraciones finales en el ensayo: fosfatidilglicerol (PG) 100 µ? PG 40 µ? PG 10 µ? PG 4,0 µ? PG 1 µ? Las células U937 se cultivaron mediante crecimiento en medio RPMI (GIBCO BRL) suplementado con suero fetal bovino (FBS) 10% y penicilina/estreptomicina 1% y luego se cultivaron a 37 °C en una atmósfera que contenía C02 5%. Se sembraron 5 x 105 células en las cavidades de placas de 6 cavidades y fueron diferenciadas en macrófagos mediante tratamiento con acetato miristato de forbol (PMA) 150 nM durante 2-3 días. Después se sustituyó el medio celular por medio completo una vez que las células U937 se habían diferenciado en macrófagos. Las células se cultivaron luego durante otras 24 hs con el fin de minimizar los efectos pleotrópicos debidos al tratamiento con PMA. A continuación, las células fueron sometidas a incubación de la siguiente manera: Las células se incubaron como se describió previamente a 37 °C en C02 5%. Después de 18 hs, se recolectaron los sobrenadantes de cada tratamiento y fueron evaluados por su contenido de TNF-a usando el conjunto de elementos del ensayo de inmunoabsorcion ligado a enzimas estándar (ELISA) Quantikine (R&D systems, Minneapolis, EE.UU.) . Resultados En la FIG. 13 se muestra la cantidad de TNF-a secretada en PG por mi. Los resultados demuestran que las células U937 diferenciadas en macrófagos expresan niveles muy bajos de TNF-a bajo condiciones normales. Sin embargo, una vez que eran expuestas a LPS, secretaban grandes cantidades de TNF- hacia el medio circundante, lo cual es indicativo de estrés celular. La incubación de las células con liposomas PG inhibe la secreción de TNF-ct de una manera dependiente de la dosis, donde la concentración más alta de 100 µ? dio como resultado una disminución del 98% y aún la concentración más baja de 1 µ? causó una disminución del 58% en la expresión de TNF- . Ejemplo 13 Con el fin de determinar el efecto de los liposomas PG de la realización preferida de la presente invención sobre la función endotelial, se determinó el contenido de endotelina-1 (ET-1) en las orejas de ratones sometidos a los estudios CHS, como se describió en el Ejemplo 3. La endotelina-1 es un poderoso agente vasoconstrictor, que presenta acciones inotrópicas y mitogénicas, modula la homeostasis de sales y agua y cumple una función importante en el mantenimiento del tono vascular y la presión sanguínea. Varias líneas de evidencia indican que la ET-1 endógena puede contribuir en la fisiopatología de las afecciones asociadas con una vasoconstricción sostenida, tal como una insuficiencia cardíaca. En la insuficiencia cardíaca, se observan niveles elevados de ET-1 y big-ET-1 [proendotelina] en circulación (Giannessi D, Del Ry S , Vitale RL. "The role of endothelins and their receptores in heart failure", Pharmacol Res 2001 Feb 43: 2 111-26) . Por c sTgureTite- ra ??-?- — e-s—un—ma-r-cado —de la función. endotelial y un incremento en la producción de ET-1 en los tej idos es indicativo de una función elTd teííat" deteriorada. Con el fin de determinar la expresión de ET-1, se recolectaron orejas de ratón (oreja derecha estimulada) 24 hs después del estímulo en los experimentos CHS. Se obtuvieron orejas de los ratones inyectados por vía intramuscular con PBS durante 6 días (grupo A) y de los ratones inyectados por vía intramuscular con liposomas de PG 75%/PC 25% (600.000 liposomas/inyección ; grupo B) . Las orejas se guardaron en NAlater a -20 °C hasta la extracción del ARN. Se extrajo el ARN y se generó ADNc usando la transcriptasa inversa (RT) junto con cebadores específicos para ET-1, como control interno. La PCR también se realizó usando cebadores específicos de -actina. Los productos de la PCR se resolvieron sobre un gel de agarosa 1,5% y las bandas de ADN fueron cuantificadas mediante análisis densitométrico . Se calculó la relación de ??-1/ß-actina . Preparación de la PCR: Mezcla para PCR (ET-1) Mezcla para PCR (ß-actina) 5µ1 de solución amortiguadora 5 µ? de solución para PCR (10 x) amortiguadora para PCR (10 X) 1,5 µ? de MgCl2 (50 mM) 1,5 µ? de MgCl2 (50 mM) 1 µ? de dNTP (10 mM) 1 µ? de dNTP (10 mM) 0,5 µ? de Cebador 1 (25 M) 1 µ? de Cebador 1 (10 M) 0,5 µ? de Cebador 2 (25 M) 1 µ? de Cebador 2 (10 M) 0,25 µ? de TAQ 0,25 µ? de TAQ 2,5 µ? de ADNc 2,5 µ? de ADNc 38 µ? de agua 37,75 µ? de agua 50 µ? en total 50 µ? en total Cebadores : ET-l(r) 5'-CAG CAC TTC TTG TCT TTT TGG-3' ET-l(f) 5'-CCA AGG AGC TCC AGA AAC AG-3' -Actina(f) 5'-GTG GGC CGC TCT AGG CAC CAA-3' ß-Actinair) 5'-CTC TTT GAT GTC ACG CAC GAT TTC-3' Ajustes de la PCR: 94°C: 5 minutos 94 °C: 30 seg 60 °C: 30 seg Este ciclo se repitió por 30 ciclos 72 °C: 60 seg 72 °C: 10 minutos ' 4 °C: Embebimiento Después de 6 inyecciones diarias de los liposomas PG 75%, el nivel de ET-1 había disminuido en un 36% con relación a los ratones control que habían recibido PBS durante el mismo régimen de inyecciones. Los resultados se muestran gráficamente en la FIG. 14. Esta disminución indica un efecto benéfico que es el resultado de la inyección de los liposomas de la realización preferida de la invención sobre la función endotelial en un paciente mamífero, a través de una reducción en la inflamación mediada por Thl . Ejemplo 14 La molécula de adhesión intercelular 1 (ICAM-1) es una molécula de la superficie celular que es expresada por diversos tipos celulares, incluyendo leucocitos y células endoteliales . Está comprometida en la adhesión de los monocitos a las células endoteliales y cumple una función en los procesos inflamatorios y en el sistema de defensa del huésped mediada por células T. La expresión de ICAM-1 probablemente contribuya en las manifestaciones clínicas de diversas enfermedades, predominantemente porque interfiere con la función inmune normal. Entre ellas se pueden mencionar las formas malignas (por ejemplo, melanoma y linfomas) , muchos trastornos inflamatorios (por ejemplo, asma y trastornos autoinmunológicos) , ateroesclerosis , isquemia, algunos trastornos neurológicos y trans lante—de-órganos alogénicos (Van de Stolpe A, van der Saag PT, "Intercellular adhesión molecule-1" J. Mol. Med. (1996) 74: 1 13-33) . Las células endoteliales de la vena umbilical humana (HUVEC) constituyen una línea celular primaria de células endoteliales que se aislan de la vena del cordón umbilical de la siguiente manera. Se prepararon frascos T75 por recubrimiento con gelatina 0,2% (5-7 ml/frasco) por un mínimo de 15/20 minutos o durante la noche. Después se eliminó el exceso. El cordón umbilical se roció con etanol 70% antes del procedimiento y se recortó toda porción de placenta que aún permanecía unida al cordón. A continuación, el cordón se cortó hasta una longitud de aproximadamente 5-6 pulgadas. El cordón tiene dos arterias que son de pared gruesa y una vena que es más grande y de pared delgada. Se localizó la vena y luego se introdujo el borde aserrado de un tapón en la misma. Luego se utilizaron aproximadamente 20 cm de hilo para atar el cordón sobre el tapón. A continuación el cordón se lavó varias veces con solución amortiguadora de fosfato salina (PBS) hasta que el PBS salía traslúcido. A continuación, se introdujeron 15-20 mi de solución de colagenasa en el cordón; se envolvió en papel metalizado y se incubó todo durante 15 minutos a 37 °C. Después de la incubación Ise recortó el extremo atado del cordón y se drenó la colagenasa en un tubo de 50 mi. Después la colagenasa se volvió a pasar a través del cordón, se manipuleo al cordón con el fin de desprender las células endoteliales y luego se pasó PBS por el cordón y se recolectó en el mismo tubo que contenía la solución de colagenasa. Esta solución se centrifugó a 1600 RPM, se retiró el sobrenadante y el pelet se volvió a suspender en 10-12 mi de medio completo M199. Finalmente el medio que contenía las células se introdujo en los frascos gelatinizados . Se prepararon liposomas con un diámetro promedio de 100 ± 20 nm de acuerdo con los métodos estándar conocidos en el arte y con una composición de fosfatidilglicerol (PG) 75%, fosfatidilcolina (PC) 25%. La concentración de la composición madre de liposomas era de 40 mM de lípidos y se diluyó hasta 100 µ? en el ensayo. Las HUVEC se separaron en varios frascos para cultivo de tejidos, se dejó que se adhirieran a la superficie de los frascos y luego se trataron de la siguiente manera: Grupo A PBS, como control negativo Grupo B LPS 500 ng/ml, como control positivo Grupo C LPS 500 ng/ml + PG 100 µ? Grupo D LPS 500 ng/ml + PC 100 µ? Las células se incubaron a 37 °C, C02, 5%. Después de 18 hs , se recolectaron los sobrenadantes de cada tratamiento y se evaluó el contenido de ET-1 usando un conjunto de elementos estándar para ELISA (obtenido de Assay Designs) y las células se cosecharon para analizar la ICAM-1 de la siguiente manera. Las células se lavaron primero con PBS y luego se incubaron con una solución amortiguadora de disociación de células a 37 °C durante 25-30 min. A continuación, las células se lavaron por centrifugación y se incubaron con un anticuerpo anti-CD54 (ICAM-1) durante 30 minutos. Luego se agregó un anticuerpo secundario FITC y se incubó con las células igual que antes. Finalmente, las células se resuspendieron en 1 mi de PBS y se analizó el contenido de fluorescencia con un citómetro de flujo. Resultados Los resultados se muestran en la FIG. 15, una representación gráfica del porcentaje de células de cnloxación r^o£3Ítiva_ para ICAM-1 en los respectivos cultivos. Cabe destacar que la cantidad de células de coloración positiva en el cultivo que contrietre-lipuiuuias PG-se había reducido al nivel del control negativo y era mucho menor que el nivel del control positivo. Ejemplo 15 Se cultivaron células microgliales (macrófagos de cerebro) y se midió la secreción de TNF-ct, una citoquina inflamatoria. Las células fueron estimuladas con la inmunoglobulina (IgG) de pacientes que padecían ALS y como resultado de ello la secreción de TNF- aumentó aproximadamente en 800 veces. Cuando las mismas células eran cultivadas en presencia de IgG ALS y de liposomas PG, la secreción de TNF-a disminuyó aproximadamente en un 75%, indicativo del potencial de las realizaciones preferidas de la presente invención en el tratamiento de ALS. Los resultados se muestran en la FIG. 16.

Claims (27)

NOVEDAD DE LA INVENCIÓN Habiéndose descrito la invención como antecede se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes REIVINDICACIONES
1. Una composición de material capaz de producir una respuesta anti-inflamatoria in vivo en un mamífero, caracterizada porque comprende cuerpos de inclusión aceptables para uso farmacéutico de un tamaño que comprende entre 20 nanómetros (nm) y 500 micrómetros (µt?) aproximadamente, que comprenden una pluralidad de grupos glicerol-fosfato o grupos que se pueden convertir a su vez en grupos glicerol-fosfato.
2. La composición acorde con la cláusula 1, caracterizada porque los cuerpos de inclusión son liposomas.
3. La composición acorde con la cláusula 2, caracterizada porque dicha composición está esencialmente libre de entidades no lipídicas aceptables para uso farmacéutico.
4. La composición acorde con la cláusula 2, caracterizada porque dicha composición está libre de entidades no lipídicas aceptables para uso farmacéutico.
5. La composición acorde con la cláusula 2, 3 ó 4, caracterizada porque los liposomas comprenden entre 60 y 100% aproximadamente—de--^©sfatidtlalicerol (PG) .
6. La composición acorde con la cláusula 5, caracterizada oique ios lipusuiiid-s comprenden—entre—un XQ- = 3Q¾ aproximadamente de fosfatidilglicerol .
7. La composición acorde con la cláusula 5 ó 6, caracterizada porgue el resto del liposoma comprende fosfatidilcolina .
8. La composición acorde con cualquiera de las cláusulas 2-7, caracterizada porque los liposomas tienen un tamaño entre 50-500 nanómetros aproximadamente.
9. La composición acorde con la cláusula 8, caracterizada porque los liposomas tienen un tamaño entre 80-120 nanómetros aproximadamente.
10. Un método de tratamiento de un trastorno mediado por el funcionamiento de células T, caracterizada porque comprende la administración a un paciente mamífero de una cantidad eficaz de cuerpos de inclusión que transportan una cantidad eficaz de grupos glicerol-fosfato para inhibir y/o reducir el avance de dicho trastorno mediado por el funcionamiento de células T.
11. Un método para el tratamiento de un trastorno inflamatorio, caracterizada porque comprende la administración a un paciente de una cantidad eficaz de cuerpos de inclusión que transportan una cantidad eficaz de grupos glicerol-fosfato para inhibir y/o reducir el avance de dicho trastorno inflamatorio.
12. Un método para el tratamiento de un trastorno de la función endocrina , caracterizada porque csn rerrdB ra- administración a un paciente mamífero de una cantidad eficaz de cuerpos de inclusión que transportan una cantidad eficaz de grupos glicerol-fosfato para inhibir y/o reducir el avance de dicho trastorno de la función endocrina.
13. Un método para el tratamiento de un trastorno inmunológico caracterizado por la expresión inapropiada de citoquinas, caracterizada porque comprende la administración a un paciente mamífero de una cantidad eficaz de cuerpos de inclusión que transportan una cantidad eficaz de grupos glicerol-fosfato para inhibir y/o reducir el avance de dicho trastorno de la función endocrina.
14. Un método para el tratamiento o la profilaxis de un trastorno cardíaco en mamíferos, cuya presencia o susceptibilidad a la misma es detectable por observación de un intervalo QT-c prolongado en el electrocardiograma del paciente, caracterizada porque comprende la administración a un paciente mamífero, que padece o que es susceptible de padecer un trastorno cardíaco de mamíferos, de una composición farmacéutica que comprende cuerpos de inclusión aceptables para uso farmacéutico y un vehículo aceptable para uso farmacéutico, donde la superficie de dichos cuerpos de inclusión transportan, como componente principal, grupos glicerol-fosfato .
15. El método acorde con cualquiera de las cláusulas 10-? , caracterizada porqué los grupos gTtcerO't^tosfaLo comprenden entre un 60 y 100% aproximadamente de grupos sobre dichos cuerpos de inclusión.
16. El método acorde con la cláusula 15, caracterizada porque los grupos glicerol- fosfato comprenden un 70-90% aproximadamente de los grupos sobre dichos cuerpos de inclusión.
17. El método de cualquiera de las cláusulas 10-16, caracterizada porque los cuerpos de inclusión están esencialmente libres de entidades no lipídicas aceptables para uso farmacéutico.
18. El método de cualquiera de las cláusulas 10-17, caracterizada porque los cuerpos de inclusión están libres de entidades no lipídicas aceptables para uso farmacéutico.
19. El método de cualquiera de las cláusulas 10-18, caracterizada porque los grupos restantes comprenden fosfatidilcolina .
20. Una composición farmacéu ica, en forma de dosificación unitaria, para administrar a un paciente mamífero, caracterizada porque comprende cuerpos de inclusión aceptables para uso farmacéutico y un vehículo aceptable para uso farmacéutico, donde al menos una porción de los cuerpos de inclusión tienen un tamaño en el rango entre 20 nm y 500 µt? aproximadamente y donde las superficies de dichos cuerpos de inclusión comprenden grupos glicerol-f-esfato o grupos que se pueden uuu eiLii a u vez en iupos glicerol-fosfato, donde dicha dosificación unitaria comprende entre aproximadamente 500 y aproximadamente 2,5 x 109 cuerpos de inclusión.
21. La composición farmacéutica de la cláusula 20, caracterizada porque los cuerpos de inclusión son liposomas .
22. La composición farmacéutica de la cláusula 21, caracterizada porque la composición está esencialmente libre de entidades no lipídicas aceptables para uso farmacéutico .
23. La composición farmacéutica de la cláusula 21, caracterizada porque la composición está libre de entidades no lipídicas aceptables para uso farmacéutico.
24. La composición farmacéutica de la cláusula 21, 22 ó 23, caracterizada porque los liposomas comprenden grupos glicerol-fosfato que comprenden entre un 60 y 100% aproximadamente de fosfatidilglicerol , PG.
25. La composición farmacéutica de la cláusula 24, caracterizada porque los liposomas comprenden un 70-90% de PG.
26. La composición farmacéutica de la cláusula 25, caracterizada porque el resto del liposoma es fosfatidilcolina .
27. El uso en la preparación de un medicamento para el tratamiento de üñ trastorno inflamatorio, üñ trastorno inmunológico, un trastorno mediado por células T, un trastorno de la función endocrina, un trastorno neurodegenerativo o un trastorno neuroinflamatorio en un paciente mamífero, caracterizada porque es para la composición farmacéutica reivindicada en cualquiera de las cláusulas 20-26.
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Families Citing this family (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20050058698A1 (en) * 2002-01-21 2005-03-17 Nolan Yvonne Mairead Pharmaceutically acceptable phosphate-glycerol carrying bodies and uses relating to Parkinson's Disease
WO2004082688A1 (en) * 2003-03-20 2004-09-30 Vasogen Ireland Limited Phosphatidylglycerol (pg) receptor agonists and antagonists
EA200600297A1 (ru) * 2003-07-21 2006-08-25 Васоджен Айеленд Лимитед Лечение острого воспалительного состояния
US20060008517A1 (en) * 2004-07-09 2006-01-12 Lynch Marina A Treatment of age-related memory impairment
WO2006029886A1 (en) * 2004-09-15 2006-03-23 Vasogen Ireland Limited Multiple sclerosis treatment
WO2006107107A1 (ja) * 2005-04-01 2006-10-12 Fumitaka Ohsuzu リン脂質小胞体を含む心筋保護剤および虚血・再潅流時の心筋障害を予防する方法
EP1928420A1 (en) * 2005-09-26 2008-06-11 Vasogen Ireland Limited Treatment of inflammation and vascular abnormalities of the eye
WO2007044748A2 (en) * 2005-10-11 2007-04-19 University Of Pittsburgh Sphingomyelin liposomes for the treatment of hyperactive bladder disorders
WO2007131329A1 (en) * 2006-05-12 2007-11-22 Vasogen Ireland Limited Treatment of ubiquitin-proteasome system dysfunction related disorders
BR112012003834A2 (pt) * 2009-08-21 2017-08-08 Targeted Delivery Tech Limited métodos para tratamento de distúrbios e para tratamentos de deficiências em ácidos graxos, hipertrigliceridemia ou hipercolesterolemia e pacote
GB201205642D0 (en) 2012-03-29 2012-05-16 Sequessome Technology Holdings Ltd Vesicular formulations
HUE051761T2 (hu) * 2012-06-14 2021-03-29 Univ Bern Testreszabott liposzómák bakteriális fertõzések kezelésére
JP6417648B2 (ja) * 2013-07-30 2018-11-07 株式会社豊田中央研究所 エタノールアミンリン酸の利用
EP3135297A4 (en) * 2014-04-04 2018-02-07 Osaka University Drug delivery promoter containing substance for activating lysophospholipid receptors
JP6103143B1 (ja) * 2015-05-18 2017-03-29 不二製油株式会社 ＩＬ−１β産生抑制作用を有する食品添加用組成物
PL3316856T3 (pl) 2015-06-30 2021-10-25 Sequessome Technology Holdings Limited Zmieszane formulacje
US20200230055A1 (en) * 2017-03-02 2020-07-23 Combioxin Sa Liposomes for inhibiting biofilm formation
CN115531399A (zh) * 2022-09-15 2022-12-30 首都医科大学 溶血磷脂酰胆碱在治疗阿尔茨海默病中的应用

Family Cites Families (37)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2518718A1 (fr) * 1981-12-23 1983-06-24 Djelalian Madeleine Procede pour capter et exploiter au maximum le rayonnement solaire global, dispositifs pour la mise en oeuvre de ce procede et capteurs solaires en resultant
US4485054A (en) * 1982-10-04 1984-11-27 Lipoderm Pharmaceuticals Limited Method of encapsulating biologically active materials in multilamellar lipid vesicles (MLV)
US4789633A (en) * 1984-04-19 1988-12-06 University Of Tennessee Research Corporation Fused liposome and acid induced method for liposome fusion
US4946787A (en) * 1985-01-07 1990-08-07 Syntex (U.S.A.) Inc. N-(ω,(ω-1)-dialkyloxy)- and N-(ω,(ω-1)-dialkenyloxy)-alk-1-yl-N,N,N-tetrasubstituted ammonium lipids and uses therefor
US5192528A (en) * 1985-05-22 1993-03-09 Liposome Technology, Inc. Corticosteroid inhalation treatment method
US4812314A (en) * 1986-02-24 1989-03-14 Yissum Research & Dev. Co. Of The Hebrew Univ. Of Jerusalem And Hadassah Medical Organization Lipid replacement therapy
US5252263A (en) * 1986-06-16 1993-10-12 The Liposome Company, Inc. Induction of asymmetry in vesicles
US5229376A (en) * 1986-09-25 1993-07-20 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army Encapsulated plant-derived phosphatidylinositol (PI) compositions for the prevention of mitogenically induced cell proliferation
US4963297A (en) * 1987-12-22 1990-10-16 The Liposome Company, Inc. Spontaneous vesticulation of multilamellar liposomes
US4863739A (en) * 1987-05-19 1989-09-05 Board Of Regents, The University Of Texas System Liposome compositions of anthracycline derivatives
FR2617170B1 (fr) * 1987-06-25 1989-12-22 Inst Nat Sante Rech Med Nouveaux derives peptidiques et leur application notamment en therapeutique
JPH04505319A (ja) * 1989-04-04 1992-09-17 アルコン　ラボラトリーズ　インコーポレイテッド 創傷、切傷および擦傷に対する治療剤のデリバリーとしてのリポソームの使用
JP3010500B2 (ja) * 1989-04-18 2000-02-21 ネクスター・フアーマシユーテイカルズ・インコーポレイテツド 虚血性組織のリポゾームターゲッティング
FR2658418B1 (fr) * 1990-02-20 1994-09-02 Synthelabo Compositions pharmaceutiques a base de phospholipides.
US5188951A (en) * 1990-04-17 1993-02-23 The Liposome Company, Inc. Enzymatic synthesis of soluble phosphatides from phospholipids
DE4018767A1 (de) * 1990-06-12 1991-12-19 Braun Melsungen Ag Wirkstofffreie liposomen zur behandlung von atherosklerose
US5556637A (en) * 1990-08-06 1996-09-17 A. Nattermann & Cie. Gmbh Water containing liposome system
IT1249063B (it) * 1991-05-28 1995-02-11 Fidia Spa Impiego di derivati fosfolipidici per la preparazione di composizioni farmaceutiche aventi attivita' immunosoppressiva
WO1994013692A1 (en) * 1992-12-10 1994-06-23 Regents Of The University Of Minnesota Polypeptides useful for treating inflammatory disorders
US5637315A (en) * 1993-01-04 1997-06-10 Thomas Jefferson University Treatment of disease states induced by oxidative stress
ES2072223B1 (es) * 1993-11-25 1996-03-16 Lipotec Sa Liposomas encapsulando doxorubicina.
US6139871A (en) * 1995-07-26 2000-10-31 The University Of British Columbia Liposome compositions and methods for the treatment of atherosclerosis
US6312719B1 (en) * 1994-03-04 2001-11-06 The University Of British Columbia Liposome compositions and methods for the treatment of atherosclerosis
US6773719B2 (en) * 1994-03-04 2004-08-10 Esperion Luv Development, Inc. Liposomal compositions, and methods of using liposomal compositions to treat dislipidemias
US5746223A (en) * 1996-10-11 1998-05-05 Williams; Kevin Jon Method of forcing the reverse transport of cholesterol from a body part to the liver while avoiding harmful disruptions of hepatic cholesterol homeostasis
AU1751795A (en) * 1994-03-04 1995-09-18 University Of British Columbia, The Liposome compositions and methods for the treatment of atherosclerosis
JPH08183740A (ja) * 1994-12-28 1996-07-16 Nippon Steel Corp 細胞接着阻害剤及び該阻害剤を含む抗炎症剤
US5643599A (en) * 1995-06-07 1997-07-01 President And Fellows Of Harvard College Intracellular delivery of macromolecules
US5741514A (en) * 1995-08-31 1998-04-21 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Method for reducing serum lipoprotein(a) concentration
EP0850064A1 (en) * 1995-09-14 1998-07-01 Lxr Biotechnology Inc. Compositions with anti-apoptotic activity, containing a mixture of phospholipids
CN1119145C (zh) * 1995-10-11 2003-08-27 埃斯佩里安Luv发展公司 脂质体组合物及其使用方法
US6491922B1 (en) * 1996-02-09 2002-12-10 Cornell Research Foundation, Inc. Methods and compounds for treating autoimmune and vascular disease
US6197333B1 (en) * 1996-03-28 2001-03-06 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois Materials and methods for making improved liposome compositions
US20020115609A1 (en) * 1997-07-14 2002-08-22 Hayat Onyuksel Materials and methods for making improved micelle compositions
JPH11308562A (ja) * 1998-04-20 1999-11-05 Minolta Co Ltd デジタルカメラシステム
US6251932B1 (en) * 1998-09-25 2001-06-26 Asta Medica Ag Immunophilin ligands
WO2002009678A2 (en) * 2000-07-31 2002-02-07 Ottawa Heart Institute Research Corporation Charged phospholipid compositions and methods for their use

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