EA007322B1 - Жирные кислоты со средней длиной цепи, глицериды и аналоги как факторы, способствующие выживанию и активации нейтрофилов - Google Patents

Жирные кислоты со средней длиной цепи, глицериды и аналоги как факторы, способствующие выживанию и активации нейтрофилов Download PDF

Info

Publication number
EA007322B1
EA007322B1 EA200301131A EA200301131A EA007322B1 EA 007322 B1 EA007322 B1 EA 007322B1 EA 200301131 A EA200301131 A EA 200301131A EA 200301131 A EA200301131 A EA 200301131A EA 007322 B1 EA007322 B1 EA 007322B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
mct
cells
bone marrow
effect
treatment
Prior art date
Application number
EA200301131A
Other languages
English (en)
Other versions
EA200301131A1 (ru
Inventor
Лин Ганьон
Жан Бараб
Пьер Лорэн
Кристофер Пенни
Було Зашари
Original Assignee
Прометик Байосайенсиз, Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Прометик Байосайенсиз, Инк. filed Critical Прометик Байосайенсиз, Инк.
Publication of EA200301131A1 publication Critical patent/EA200301131A1/ru
Publication of EA007322B1 publication Critical patent/EA007322B1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C237/00—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by amino groups
    • C07C237/02—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by amino groups having the carbon atoms of the carboxamide groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton
    • C07C237/22—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by amino groups having the carbon atoms of the carboxamide groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton having nitrogen atoms of amino groups bound to the carbon skeleton of the acid part, further acylated
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/16—Amides, e.g. hydroxamic acids
    • A61K31/18—Sulfonamides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A61K31/194—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having two or more carboxyl groups, e.g. succinic, maleic or phthalic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A61K31/20—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having a carboxyl group bound to a chain of seven or more carbon atoms, e.g. stearic, palmitic, arachidic acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/21—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates
    • A61K31/215—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids
    • A61K31/22—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids of acyclic acids, e.g. pravastatin
    • A61K31/23—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids of acyclic acids, e.g. pravastatin of acids having a carboxyl group bound to a chain of seven or more carbon atoms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/21—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates
    • A61K31/255—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of sulfoxy acids or sulfur analogues thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7024—Esters of saccharides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/193—Colony stimulating factors [CSF]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/20—Interleukins [IL]
    • A61K38/2013—IL-2
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/20—Interleukins [IL]
    • A61K38/2086—IL-13 to IL-16
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/02—Nutrients, e.g. vitamins, minerals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/06—Antianaemics
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C233/00—Carboxylic acid amides
    • C07C233/01—Carboxylic acid amides having carbon atoms of carboxamide groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms
    • C07C233/16—Carboxylic acid amides having carbon atoms of carboxamide groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms having the nitrogen atom of at least one of the carboxamide groups bound to a carbon atom of a hydrocarbon radical substituted by singly-bound oxygen atoms
    • C07C233/17—Carboxylic acid amides having carbon atoms of carboxamide groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms having the nitrogen atom of at least one of the carboxamide groups bound to a carbon atom of a hydrocarbon radical substituted by singly-bound oxygen atoms with the substituted hydrocarbon radical bound to the nitrogen atom of the carboxamide group by an acyclic carbon atom
    • C07C233/18—Carboxylic acid amides having carbon atoms of carboxamide groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms having the nitrogen atom of at least one of the carboxamide groups bound to a carbon atom of a hydrocarbon radical substituted by singly-bound oxygen atoms with the substituted hydrocarbon radical bound to the nitrogen atom of the carboxamide group by an acyclic carbon atom having the carbon atom of the carboxamide group bound to a hydrogen atom or to a carbon atom of an acyclic saturated carbon skeleton
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C233/00—Carboxylic acid amides
    • C07C233/01—Carboxylic acid amides having carbon atoms of carboxamide groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms
    • C07C233/45—Carboxylic acid amides having carbon atoms of carboxamide groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms having the nitrogen atom of at least one of the carboxamide groups bound to a carbon atom of a hydrocarbon radical substituted by carboxyl groups
    • C07C233/46—Carboxylic acid amides having carbon atoms of carboxamide groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms having the nitrogen atom of at least one of the carboxamide groups bound to a carbon atom of a hydrocarbon radical substituted by carboxyl groups with the substituted hydrocarbon radical bound to the nitrogen atom of the carboxamide group by an acyclic carbon atom
    • C07C233/47—Carboxylic acid amides having carbon atoms of carboxamide groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms having the nitrogen atom of at least one of the carboxamide groups bound to a carbon atom of a hydrocarbon radical substituted by carboxyl groups with the substituted hydrocarbon radical bound to the nitrogen atom of the carboxamide group by an acyclic carbon atom having the carbon atom of the carboxamide group bound to a hydrogen atom or to a carbon atom of an acyclic saturated carbon skeleton
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C235/00—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by oxygen atoms
    • C07C235/02—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by oxygen atoms having carbon atoms of carboxamide groups bound to acyclic carbon atoms and singly-bound oxygen atoms bound to the same carbon skeleton
    • C07C235/04—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by oxygen atoms having carbon atoms of carboxamide groups bound to acyclic carbon atoms and singly-bound oxygen atoms bound to the same carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated
    • C07C235/06—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by oxygen atoms having carbon atoms of carboxamide groups bound to acyclic carbon atoms and singly-bound oxygen atoms bound to the same carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated having the nitrogen atoms of the carboxamide groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C235/00—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by oxygen atoms
    • C07C235/02—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by oxygen atoms having carbon atoms of carboxamide groups bound to acyclic carbon atoms and singly-bound oxygen atoms bound to the same carbon skeleton
    • C07C235/04—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by oxygen atoms having carbon atoms of carboxamide groups bound to acyclic carbon atoms and singly-bound oxygen atoms bound to the same carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated
    • C07C235/08—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by oxygen atoms having carbon atoms of carboxamide groups bound to acyclic carbon atoms and singly-bound oxygen atoms bound to the same carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated having the nitrogen atom of at least one of the carboxamide groups bound to an acyclic carbon atom of a hydrocarbon radical substituted by singly-bound oxygen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
    • C11C—FATTY ACIDS FROM FATS, OILS OR WAXES; CANDLES; FATS, OILS OR FATTY ACIDS BY CHEMICAL MODIFICATION OF FATS, OILS, OR FATTY ACIDS OBTAINED THEREFROM
    • C11C3/00—Fats, oils, or fatty acids by chemical modification of fats, oils, or fatty acids obtained therefrom
    • C11C3/003—Fats, oils, or fatty acids by chemical modification of fats, oils, or fatty acids obtained therefrom by esterification of fatty acids with alcohols
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
    • C11C—FATTY ACIDS FROM FATS, OILS OR WAXES; CANDLES; FATS, OILS OR FATTY ACIDS BY CHEMICAL MODIFICATION OF FATS, OILS, OR FATTY ACIDS OBTAINED THEREFROM
    • C11C3/00—Fats, oils, or fatty acids by chemical modification of fats, oils, or fatty acids obtained therefrom
    • C11C3/02—Fats, oils, or fatty acids by chemical modification of fats, oils, or fatty acids obtained therefrom by esterification of fatty acids with glycerol
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07B—GENERAL METHODS OF ORGANIC CHEMISTRY; APPARATUS THEREFOR
    • C07B2200/00—Indexing scheme relating to specific properties of organic compounds
    • C07B2200/11—Compounds covalently bound to a solid support
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C40—COMBINATORIAL TECHNOLOGY
    • C40B—COMBINATORIAL CHEMISTRY; LIBRARIES, e.g. CHEMICAL LIBRARIES
    • C40B40/00—Libraries per se, e.g. arrays, mixtures
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)

Abstract

Композиция и способ для промотирования сохранности и активации нейтрофилов, такой как лечение нейтропении, развивающейся как нежелательный побочный эффект химиотерапии и лучевой терапии. Композицию, содержащую жирные кислоты со средней длиной цепи, такие как каприновая кислота, или каприловая кислота, или их соли, или триглицериды, или их моно- или диглицериды, или другие аналоги, или триглицериды со средней длиной цепи (МСТ), вводят человеку или животному, нуждающемуся в лечении, в количестве, достаточном, чтобы снизить или устранить нейтропению. Композицию вводят в количестве, эффективном для лечения нарушения. Способы также используют при проведении трансплантации костного мозга и при лечении различных нейтропенических заболеваний.

Description

Данное изобретение имеет отношение к предупреждению и/или лечению нейтропении. Изобретение включает в себя лечение нейтропении, связанной с применением химиотерапии и лучевой терапии, а также лечение нейтропении, возникающей при инфекциях, гематологических заболеваниях и недостаточности питания. Данное изобретение также относится к снижению лекарственной токсичности и повышению эффективности лекарственных средств. В частности, данное изобретение относится к применению жирных кислот со средней длиной цепи, таких как каприновая кислота, каприловая кислота, или их солей, или триглицеридов, или их моно- или диглицеридов, или других аналогов как фактора, способствующего выживанию и активации нейтрофилов, или фактора пролиферации стволовых клеток костного мозга.
При химиотерапии используют цитотоксические агенты, такие как циклофосфамид, доксорубицин, даунорубицин, винбластин, винкристин, блеомицин, этопозид, топотекан, иринотекан, таксотер, таксол, 5-фторурацил, метотрексан, гемцитабин, цисплатин, карбоплатин или хлорамбуцил, не ограничиваясь перечисленным, для уничтожения раковых клеток и опухолей. Однако названные агенты являются неспецифическими и, особенно в высоких дозах, оказывают токсическое действие на нормальные и быстроделящиеся клетки. Часто названные средства приводят к различным побочным эффектам у пациентов, которым проводят химиотерапию и лучевую терапию. Миелосупрессия, значительное снижение образования клеток крови в костном мозге, является одним таким побочным эффектом. Указанный побочный эффект характеризуется лейкопенией, нейтропенией и тромбоцитопенией. Тяжелая хроническая нейтропения (идиопатическая, циклическая и врожденная) также характеризуется избирательным снижением количества циркулирующих нейтрофилов и повышенной чувствительностью к бактериальным инфекциям.
Сущность лечения рака химиотерапевтическими лекарственными средствами заключается в сочетании механизма цитотоксичности с механизмом избирательности относительно опухолевых клеток с высокой степенью пролиферации по сравнению с клетками хозяина. Однако редко получают химиотерапевтические средства, которые характеризуются такой избирательностью. Цитотоксичность химиотерапевтических средств ограничивает вводимые дозы, влияет на терапевтические циклы и серьезно ухудшает общее состояние онкологического пациента.
Хотя на другие нормальные ткани также может оказываться неблагоприятное действие, костный мозг является особенно чувствительным к пролиферация-специфическим воздействиям, таким как химиотерапия или лучевая терапия. Кратковременный и продолжительный токсический эффект на костный мозг является общим побочным действием противораковой терапии, которое приводит к снижению количества клеток крови и анемии, лейкопении, нейтропении, агранулоцитозу и тромбоцитопении. Одной причиной таких эффектов является снижение количества кроветворных клеток (например, полипотентных стволовых клеток и других клеток-предшественников), вызванное как летальным действием цитотоксических средств или излучения на названные клетки, так и дифференцировкой стволовых клеток, спровоцированной механизмом обратной связи, индуцированным истощением компонентов более зрелого костного мозга. Второй причиной является снижение способности стволовых клеток к самовосстановлению, что также имеет отношение как к прямым (мутация), так и косвенным (старение популяции стволовых клеток) эффектам. (ТиЫаиа, М., с1 а1., ВабюШегару апб Опсо1оду 29: 1-17, 1993). Таким образом, противораковые терапии часто приводят к уменьшению полиморфно-ядерных нейтрофилов (ΡΜΝ) или нейтропении. ΡΜΝ представляют собой первую линию защиты против внедрившихся патогенных микроорганизмов и играют центральную роль во время острого воспаления, при этом их главной функцией является фагоцитоз и уничтожение инфекционных агентов. Для выполнения упомянутой роли в ответ на хемотактические факторы ΡΜΝ покидают циркуляцию и проникают в пораженную область, чтобы осуществить свои биологические функции. У индивидуумов, имеющих нормальное количество клеток крови, нейтрофилы составляют приблизительно 60% всех лейкоцитов (81 ИпИк Сопуегмоп Ошбе, 66-67 (1992), Νονν Епд1апб 1оигпа1 о£ Мебюше Воокк). Однако один из трех пациентов, получавших химиотерапию при раке, может страдать от нейтропении. Среднее нормальное количество нейтрофилов у здорового взрослого человека составляет порядка 4400 клеток/мкл с колебаниями в пределах 1800-7700 клеток/мкл. Количество от 1000 до 500 клеток/мкл рассматривают как умеренную нейтропению, а количество 500 клеток/мкл или менее считают тяжелой нейтропенией. Пациенты с миелосупрессивными состояниями склонны к инфекции и часто страдают нарушениями свертывания крови, требующими госпитализации. Недостаток нейтрофилов и тромбоцитов является основной причиной заболеваемости и смертности после лечения рака и приводит к высокой стоимости противораковой терапии. При этих вышеупомянутых условиях применение любого агента, способного ингибировать апоптоз нейтрофилов или стимулировать активацию и мобилизацию нейтрофилов, может иметь терапевтическое значение. Мероприятия по восстановлению иммунной системы пациента после химиотерапии включают применение гемотопозтических факторов роста, чтобы стимулировать сохранившиеся стволовые клетки для пролиферации и дифференцировки в зрелые клетки, защищающие от инфекции.
При трансплантации костного мозга феномен, известный как «мобилизация», также используют для отбора большего количества стволовых клеток/клеток-предшественников из периферической крови. В настоящее время названный способ используют для аутогенной или аллогенной трансплантации костно- 1 007322 го мозга. Факторы роста применяют, чтобы увеличить количество периферических стволовых клетокпредшественников, которые следует собрать до миелоаблативной терапии и инфузии стволовых клетокпредшественников.
Проводимая после лечения трансплантация костного мозга также может быть направлена против нейтропении. Однако такие схемы лечения требуют 10-15-дневной терапии, которая делает пациентов уязвимыми в отношении инфекции. Препараты, способные стимулировать стволовые клетки костного мозга, могут способствовать и ускорять приживание стволовых клеток, таким образом, сокращая нейтропеническое «окно» после трансплантации костного мозга.
Хотя гематопоэтические факторы роста, такие как гранулоцито-макрофагальный колониестимулирующий фактор (ОМ-С8Р) и гранулоцитарный колониестимулирующий фактор (О-С8Р), могут оказывать такое действие, их применение является дорогостоящим, так как их получают с помощью рекомбинантной технологии. Такое пост-терапевтическое, способствующее улучшению лечение становится излишним, если пациенты являются химиозащищенными от супрессии иммунного ответа.
Поэтому существует потребность в новых композициях и способах снижения нежелательных побочных эффектов миелосупрессивных состояний, индуцированных химиотерапией и лучевой терапией.
Краткое изложение изобретения
Данное изобретение удовлетворяет потребность в химиотерапевтических средствах, разработкой нового способа для стимуляции кроветворной системы у млекопитающих, включая человека. Данное изобретение также относится к новому способу лечения миелосупрессивных состояний, индуцированных химиотерапией и лучевой терапией, и любого другого состояния, при котором стимуляция кроветворной системы может иметь терапевтическое значение, такого как трансплантация костного мозга и хроническая нейтропения, а также нейтропения, вызванная инфекциями, гематологическими заболеваниями и недостаточностью питания, не ограничиваясь перечисленным. Названный способ содействует кроветворной системе в противостоянии миелосупрессии, способствуя выживанию и активации нейтрофилов у пациентов, подвергшихся такому лечению.
В соответствии с упомянутым способом, композицию, содержащую одну или более жирных кислот со средней длиной цепи, таких как каприновую кислоту, каприловую кислоту, или их соли, или триглицериды, или моно- или диглицериды, или другие аналоги в фармацевтически приемлемом носителе, вводят млекопитающему, в частности человеку, в количестве, эффективном для предупреждения или лечения нейтропении, например, для снижения побочных эффектов химиотерапии и лучевой терапии и для лечения нейтропении, являющейся результатом инфекций, гематологических заболеваний и недостаточности питания.
Таким образом, аспект данного изобретения заключается в обеспечении композициями, в которых используют каприновую кислоту, каприловую кислоту, лауриновую кислоту, или их соли металлов (натрия, калия, кальция, магния), или их триглицериды, или их моно- или диглицериды, или другие аналоги для получения химиопротективных фармацевтических композиций в виде отдельного агента, или в виде комбинации двух или более агентов и с другими химиотерапевтическими средствами, или такими лекарственными средствами, которые индуцируют состояние миелосупрессии, или без них.
Данное изобретение относится к применению каприновой кислоты, каприловой кислоты или их натриевых солей или триглицеридов, или их моно- или диглицеридов или родственных соединений как фактора, стимулирующего кроветворение.
Кроме того, данное изобретение включает в себя композиции, содержащие каприновую кислоту, каприловую кислоту, или их натриевые соли, или триглицериды, или их моно- или диглицериды, или другие аналоги, и применение таких соединений для лечения миелосупрессии и последующей иммуносупрессии.
Изобретение также относится к применению каприновой кислоты, каприловой кислоты, или их натриевых солей, или триглицеридов, или их моно- или диглицеридов, или других аналогов для лечения пациентов с тяжелой хронической нейтропенией.
Кроме того, данное изобретение относится к применению каприновой кислоты, каприловой кислоты, или их натриевых солей, или триглицеридов, или их моно- или диглицеридов, или других аналогов как фактора, способствующего выживанию и активации нейтрофилов.
Данное изобретение также имеет отношение к применению каприновой кислоты, каприловой кислоты, или их натриевых солей, или триглицеридов, или их моно- или диглицеридов, или других аналогов при состояниях, при которых мобилизация нейтрофилов может иметь терапевтическое значение, таких как аутогенная или аллогенная трансплантация костного мозга.
Данное изобретение относится к способу, пригодному для обеспечения химиопротекции млекопитающего, включая человека.
Другой аспект данного изобретения заключается в создании способа, пригодного для повышения эффективности химиотерапии и лучевой терапии у млекопитающего, включая человека.
Также изобретение относится к способам использования более высоких дозировок, чем обычные, или даже повышения дозы химиотерапевтических композиций, необходимой для достижения лучшего терапевтического эффекта, при этом избегая возрастания побочных эффектов.
- 2 007322
Данное изобретение относится также к способу для снижения или устранения нейтропении, индуцированной химиотерапией, у млекопитающего, включая человека.
Кроме того, данное изобретение относится к способу лечения нейтропении, возникающей при гематологических заболеваниях, таких как хронические идиопатические нейтропении, циклическая нейтропения, синдром «ленивых» лейкоцитов, синдром лейкоза Чедиака-Хигаси и апластическая анемия.
Данное изобретение относится к способу лечения нейтропении, развивающейся в результате инфекционных заболеваний, таких как вирусные (например, ВИЧ, корь, гепатит, желтая лихорадка, мононуклеоз) и бактериальные (например, брюшной тиф, паратифы, бруцеллез) инфекционные заболевания.
Также данное изобретение относится к способу, который вызывает минимальные побочные эффекты или не вызывает вовсе никаких побочных эффектов у реципиента.
Описанные и другие аспекты, особенности и преимущества данного изобретения станут очевидными после рассмотрения следующего подробного описания представленных аспектов и прилагаемой формулы изобретения.
Краткое описание фигур
На фиг. 1 показано влияние МСТ на апоптоз ΡΜΝ.
На фиг. 2 показано влияние МСТ на ΡΜΝ-фагоцитоз.
На фиг. ЗА и 3В показано влияние доксорубицина на апоптоз ΡΜΝ.
На фиг. 4А представлен времязависимый ответ МСТ на нейтрофилы, обработанные доксорубицином.
На фиг. 4В представлен времязависимый ответ доксорубицина на МСТ-обработанные нейтрофилы.
На фиг. 5 показано влияние МСТ и трикаприна на пролиферацию костного мозга.
На фиг. 6 показано влияние МСТ на количество клеток костного мозга у иммуносупрессивных животных.
На фиг. 7 показано влияние МСТ на количество селезеночных клеток у иммуносупрессивных животных.
На фиг. 8 показано влияние МСТ и ОМ-С8Р на массу тимуса у здоровых мышей.
На фиг. 9 показано влияние МСТ, каприлата натрия и капрата натрия на количество клеток костного мозга у иммуносупрессивных животных.
На фиг. 10 продемонстрировано химиопротективное действие и противоопухолевая эффективность МСТ в комбинации с доксорубицином в субтерапевтической концентрации на модели меланомы В16Р10.
На фиг. 11 продемонстрировано химиопротективное действие и противоопухолевая эффективность МСТ в комбинации с циклофосфамидом или таксотером в субтерапевтической концентрации на модели карциномы молочной железы ΌΑ-3.
На фиг. 12 показано химиопротективное действие и противоопухолевая эффективность МСТ в комбинации с циклофосфамидом или таксотером в терапевтической концентрации на модели карциномы молочной железы ΌΑ-3.
Подробное описание изобретения
Химиотерапия и лучевая терапия в высоких дозах разрушают кроветворные клетки в костном мозге, приводя к серьезному снижению нейтрофилов и тромбоцитов у пациентов. После такого лечения пациенты проводят несколько недель в отделениях интенсивной терапии, так как нейтропения приводит к развитию инфекционных заболеваний и лихорадочного состояния.
Тромбоцитопения приводит к увеличению времени свертывания крови и времени кровотечения, что требует переливания тромбоцитов. Миелосупрессия является дозалимитирующим фактором при лечении рака, а недостаточность нейтрофилов и тромбоцитов является основной причиной заболеваемости и смертности вследствие упомянутого лечения рака.
При трансплантации костного мозга можно использовать два подхода. Перед трансплантацией стимуляция костного мозга может увеличить количество периферических стволовых клетокпредшественников. Однако только что трансплантированный костный мозг не содержит достаточного количества зрелых нейтрофилов или нейтрофильных интермедиатов для восстановления иммунной системы пациента. У пациента возникает состояние повышенной чувствительности к инфекциям, и увеличивается время свертывания. Терапия, включающая стимуляцию и активацию нейтрофилов, ускоряет регенерацию после трансплантации костного мозга посредством снижения нейтропении и тромбоцитопении.
Данное изобретение имеет отношение к способу, стимулирующему выживание и активацию нейтрофилов у субъекта. Данные способы направлены на восстановление кроветворной системы пациента. Гематопоэтическими факторами роста, используемыми в настоящее время для такого лечения, являются гранулоцитарный колониестимулирующий фактор (О-С8Р), фактор стволовых клеток (8СР) и гранулицито-макрофагальный колониестимулирующий фактор (ОМ-С8Р). О-С8Р и ОМ-С8Р могут сокращать общий период нейтропении и тромбоцитопении, но еще сохраняется значительное окно, когда у пациента наблюдается нарушение свертывания крови и повышенная чувствительность к инфекциям.
При трансплантации костного мозга также используют «мобилизацию», чтобы собрать больше стволовых клеток/клеток-предшественников из периферической крови. Кроветворные стволовые клетки
- 3 007322 в костном мозге мобилизуются в кровь после терапии ростовыми факторами. Использованные для такой терапии ростовые факторы включают в себя интерлейкин-3 (1Ь-3), О-С8Е, ОМ-С8Е, 8СЕ и рекомбинантный белок слияния, содержащий активные фрагменты как 1Ь-3, так и СМ-С8Е. Затем после терапии ростовыми факторами мобилизованные стволовые клетки собирали и повторно вводили пациенту после следующего цикла химиотерапии или лучевой терапии в высоких дозах, чтобы восстановить количество нейтрофилов и тромбоцитов пациента.
Триглицериды со средней длиной цепи (в описании также называют МСТ) состоят из глицерина, этерифицированного жирными кислотами с длиной углеродной цепи из 8 (С8, октановая кислота или каприловая кислота) и 10 (С10, декановая кислота или каприновая кислота). Обычно МСТ содержит смесь сложных глицериновых эфиров жирных кислот С8 и С10. Однако МСТ также может содержать небольшие количества (2±1% каждого) сложных глицериновых эфиров С6 (гексановая кислота или капроновая кислота) и С12 (додекановая кислота или лауриновая кислота). Кродамол™ (СКОПЛМОЬ™) является МСТ, коммерчески поставляемым фирмой Сгоба Ь!б., Τοτοηΐο (Сапаба). Как видно из примера 1, Кродамол™ представляет собой МСТ, который содержит сложный глицериновый триэфир жирных кислот С8 и С10, присутствующих в варьирующих пропорциях. Однако Кродамол™ не содержит сложных эфиров жирных кислот С6 или С12. С другой стороны, триглицериды с длинной цепью (в описании также называют ЬСТ) состоят из глицерина, этерифицированного жирными кислотами с длиной углеродной цепи более 12. Типичные жирные кислоты, содержащиеся в ЬСТ, включают пальмитиновую (С16) и стеариновую (С18) кислоты. Подобно МСТ, ЬСТ является основным компонентом пищевых жиров. В действительности, МСТ и ЬСТ характеризуются значительно отличающимися биологическими свойствами. Некоторые физиологические различия между МСТ и ЬСТ описаны в Наттщоп'з ΡΓίηοίρΙοκ о£ 1п1етпа1 Мебюше, 84Ь Ебйюп, 1520-1521 (1977), МсОтате Н111 Воок Сотрапу или 154Ь Ебйюп, 1668-1669 (2001) . Например, МСТ, в отличие от ЬСТ, не требует гидролиза панкреатической липазой, так как они всасываются эпителиальными клетками кишечника.
МСТ и составляющие их жирные кислоты со средней длиной цепи являются нетоксичными веществами, которые нашли применение в пищевой и фармацевтической промышленности. Например, К.А. Тгаи1 е! а1., в Еооб апб Сйет1са1 Тох1со1оду 38: 79-98 (2000) сообщил, что МСТ используют для возрастающего числа применений в пищевой и кормовой промышленности, так как они имеют ряд преимуществ по сравнению с ЬСТ. МСТ также используют как эмульгаторы в различных фармацевтических препаратах для человека и в ветеринарии, и в косметологии. Они упоминаются в целом ряде токсикологических исследований, которые подтвердили безопасность МСТ. Например, отмечено, что в клинических испытаниях подтверждена безопасность потребления МСТ в пищу для человека вплоть до 1 г/кг. Жирные кислоты С8 и С10 обладают подобной безопасностью и пользой. Например, как описано в Мегск 1пбех, 114Ь Ебйюп, 266 (1989) , каприловая кислота имеет ГО50 (перорально, крысы)=10,08 г/кг и, по существу, является нетоксичной. В действительности, в разделе 184 Свода Федеральных инструкций (СЕК.) Федерального Управления по контролю медикаментов (ΕΌΑ) США каприловой кислоте дано ΟΚΑδ-подтверждение (общепризнана безопасной). Подобно, в соответствии с разделом 172 (СЕК) свободные жирные кислоты (например, каприновая, каприловая) и их соли металлов рассматриваются как безопасные добавки для применения в пищу. Как отмечено Ό. ОппЦп)е\зс е! а1. в 1оитпа1 о£ Рйаттасу апб Рйаттасо1оду 53: 149-154 (2001), каприновая кислота (натриевая соль) одобрена для применения людям в Японии и Швеции как усилитель абсорбции для ректальных лекарственных средств. В патенте США 4602040 (1986) описывают применение МСТ в виде фармацевтического наполнителя. Позднее в публикации РСТ XV О 01/97799 описали применение жирных кислот со средней длиной цепи, в частности каприловой и каприновой кислот, как противомикробных агентов.
Однако до тех пор, пока в описываемом исследовании не были получены непредвиденные данные, эффективность жирных кислот со средней длиной цепи, таких как каприновая кислота, каприловая кислота, или их соли металлов, или моно-, ди- или триглицериды (МСТ), как фактора, способствующего выживанию и активации нейтрофилов, не была установлена. Как изложено в описании, МСТ содержит триглицериды жирных кислот С8 (каприловой) и С10 (каприновой), которые составляют 98% активности, имеющей отношение к стимуляции кроветворения и созревания нейтрофилов. Ό. ХУайхЬегд е! а1., в Шццюп 13: 128-132 (1997) сообщил, что липидные эмульсии (ЬСТ и МСТ) только умеренно снижают бактерицидную функцию нейтрофилов и не оказывают никакого влияния на моноциты. Действительно, только в публикации, в которой представлены неопределенные указания, что МСТ может влиять на нейтропению, описывают клинические испытания, в которых МСТ все время вводили с ЬСТ и сравнивали с одним ЬСТ. Никаких исследований с одним МСТ не предпринимали и, таким образом, не было установлено влияние МСТ на иммунную функцию. Однако, результаты, описанные 8. Эетйег е! а1. в С11шса1 МЦпйоп 19: 253-258 (2000), указывают, что МСТ усиливают нейтропению, если МСТ комбинировали с ЬСТ и сравнивали с одним ЬСТ. То есть полученные результаты позволяют предположить, что МСТ ингибирует функцию и/или выживание нейтрофилов. До некоторой степени подтверждая сделанное предположение, в публикации РСТ ХУО 95/30413 утверждают, что ненасыщенные жирные кислоты с длинной цепью, такие как линолинеиновая кислота, а также насыщенные жирные кислоты с длинной цепью (С16 или длиннее) могут действовать так, чтобы повысить пролиферацию кроветворных стволовых клеток.
- 4 007322
Данное изобретение относится к применению жирных кислот со средней длиной цепи или их солей металлов или триглицеридов, или их моно- или диглицеридов, или других аналогов, или МСТ как фактора активации или развития кроветворения и фактора, способствующего выживанию и активации нейтрофилов. При использовании в химиотерапии и лучевой терапии композицию, содержащую жирные кислоты со средней длиной цепи, или их соли металлов, или триглицериды, или их моно- или диглицериды, или другие аналоги, или МСТ, вводят перед, во время и/или после лечения для того, чтобы сократить нейтропеническое «окно» и повысить повторное пополнение кроветворной системы. Кроме того, оказывается возможным применять комбинацию жирных кислот со средней длиной цепи вместе с их солями металлов или триглицеридами, или их моно- или диглицеридами или другими аналогами и/или МСТ на разных этапах лечения химиотерапией и лучевой терапией (например, жирные кислоты до лечения и МСТ после). Альтернативно, оказывается возможным вводить одновременно: перед, вовремя и/или после лечения химиотерапией и лучевой терапией. При тяжелой нейтропении композицию, содержащую жирные кислоты со средней длиной цепи, или их соли металлов, или триглицериды, или их моно- или диглицериды, или другие аналоги, или МСТ, используют как терапевтическое средство. При трансплантации костного мозга жирные кислоты со средней длиной цепи, или их соли металлов, или триглицериды, или их моно- или диглицериды, или другие аналоги, или МСТ используют, чтобы увеличить количество периферических стволовых клеток, пригодных для трансплантации после прекращения лучевой терапии или химиотерапии. Жирные кислоты со средней длиной цепи, или их соли металлов, или триглицериды, или их моно- или диглицериды, или другие аналоги, или МСТ также можно использовать после трансплантации костного мозга для того, чтобы стимулировать стволовые клетки костного мозга, таким образом сокращая время восстановления от нейтропении.
Поэтому способ используют для стимуляции кроветворения, чтобы лечить миелосупрессию, являющуюся результатом химиотерапии или лучевой терапии, хроническую или транзиторную нейтропению, нейтропению, индуцированную лекарственными средствами, и нейтропению, развивающуюся в результате гематологического заболевания, недостаточности питания, инфекции или лучевой терапии. Транзиторная нейтропения может быть результатом стресса вследствие перегрузки животного или усиленного движения человека или животного. Способ также используют для стимуляции кроветворения, чтобы способствовать заживлению раны у пациента, и индукции мобилизации нейтрофилов, чтобы способствовать трансплантации костного мозга у пациента.
Используемые в описании термины а или ап могут означать один или более в зависимости от контекста, в котором их используют.
Используемая в описании фраза, «композиция, содержащая жирные кислоты со средней длиной цепи, такие как каприновая кислота, или каприловая кислота, или их соли металлов, или триглицериды, или их моно- или диглицериды, или другие аналоги, или МСТ» подразумевает композицию, содержащую названный активный ингредиент и один или более фармацевтически приемлемых носителей.
Используемый в описании термин «фармацевтически приемлемый носитель» относится к веществу, которое не препятствует физиологическому действию жирных кислот со средней длиной цепи, таких как каприновая кислота, или каприловая кислота, или их солей металлов, или триглицеридов, или их моноили диглицеридов, или других аналогов, или МСТ, и которое является нетоксичным для млекопитающих, включая человека.
Композиции данного изобретения, содержащие каприновую или каприловую кислоту, или ее соли, или триглицериды, или ее моно- или диглицериды, или другие аналоги, или МСТ, получают, используя каприновую или каприловую кислоту, или ее соли, или триглицериды, или ее моно- или диглицериды, или другие аналоги, или МСТ и фармацевтически приемлемые носители, по способам, известным специалистам в данной области (МЕйСК ΙΝΌΕΧ, Мегск & Со, йайгау, N1). Не ограничиваясь, названные композиции включают жидкости, масла, эмульсии, аэрозоли, ингаляционные препараты, капсулы, пилюли, пластыри и суппозитории.
Все способы включают в себя стадию объединения активного ингредиента(ов) с носителем, который представляет собой один или более вспомогательных ингредиентов.
Употребляемый в описании термин «химиотерапия» относится к способу уничтожения пролиферирующих клеток с использованием цитотоксического агента. Фраза «во время химиотерапии» подразумевает период, в течение которого эффект введенного цитотоксического агента продолжается. С другой стороны, под фразой, «после химиотерапии» имеют в виду включение всех ситуаций, при которых композицию вводят после введения цитотоксического агента независимо от любого предшествующего введения того же агента, а также независимо от персистенции эффекта введенного цитотоксического агента.
Если способ данного изобретения применяют с химиотерапией, композицию, содержащую каприновую или каприловую кислоту, или ее соли, или триглицериды, или ее моно- или диглицериды, или другие аналоги, или МСТ, можно вводить до, во время или вслед за химиотерапией (то есть, перед, во время или вслед за введением цитотоксического агента).
Под термином «цитотоксический агент» подразумевают вещество, которое убивает клетки с высокой степенью пролиферации, например опухолевые клетки, инфицированные вирусом клетки, или кроветворные клетки. Примеры цитотоксического агента, который может быть использован при практиче- 5 007322 ском применении изобретения, не ограничиваясь, включают в себя циклофосфамид, доксорубицин, даунорубицин, винбластин, винкристин, блеомицин, этопозид, топотекан, иринотекан, таксотер, таксол, 5фторурацил, метотрексат, гемцитабин, цисплатин, карбоплатин или хлорамбуцил и агониста любого их вышеперечисленных соединений. Цитотоксический агент также может быть противовирусным агентом, например, ΑΖΤ (то есть, 3'-азидо-3'-дезокситимидин) или ЗТС/ламивудин (то есть, 3-тиацитидин).
Используемый в описании термин лейкопения относится к аномальному снижению количества лейкоцитов в крови.
Используемый в описании термин нейтропения относится к присутствию аномально низкого количества нейтрофилов в крови.
В одном предпочтительном аспекте фармацевтическую композицию готовят в виде любой подходящей композиции для перорального, сублингвального введения или ингаляционного (назальный спрей), внутривенного, внутримышечного, подкожного введения для применения при лечении нейтропении, тромбоцитопении или как фактора выживания и активации нейтрофилов.
Следует иметь в виду, что количество композиции изобретения, необходимое для применения при лечении, будет изменяться в зависимости от способа введения, природы состояния, которое лечат, возраста и состояния пациента и будет в конечном счете установлено по усмотрению наблюдающего врача. Обычно требуемая доза может быть в виде однократной дозы или в виде разделенной общей дозы, принимаемой через определенные интервалы времени, например, в виде двух, трех, четырех или более доз в день.
Так как оказалось возможным, что для применения в терапии жирные кислоты со средней длиной цепи, или их соли металлов, или триглицериды, или их моно- или диглицериды, или другие аналоги, или МСТ могут быть введены в виде необработанного химического вещества, является предпочтительным, чтобы активный ингредиент вводили в виде фармацевтического препарата.
В предпочтительном аспекте изобретения количество вводимого активного ингредиента должно быть таким, чтобы концентрация в крови (свободного и/или связанного с сывороточным альбулином) составляла более 1 мкМ. В особенно предпочтительном аспекте концентрация в крови составляет более 1 мМ.
В другом аспекте фармацевтическая композиция находится в форме, пригодной для перорального (включая сублингвальное) или парентерального (включая внутримышечное, подкожное, ректальное или внутривенное) введения. Обычно, когда уместно, препараты могут быть в виде отдельных дозированных форм и могут быть приготовлены по любому из способов, хорошо известных в области фармации. Все способы включают в себя стадию связывания активного соединения с жидкими носителями или мелкоизмельченными твердыми носителями или обоими, а затем, при необходимости, стадию формования в требуемый препарат. Если требуется, можно применять вышеописанные препараты, адаптированные для пролонгированного высвобождения активного ингредиента.
Жирные кислоты со средней длиной цепи, или их соли или триглицериды, или их моно- или диглицериды, или другие аналоги, или МСТ также могут быть использованы в комбинации с другими терапевтически активными агентами, такими как цитотоксические противораковые агенты, или другие противораковые средства (иммуномодулирующие или иммунорегулирующие лекарственные средства, или терапевтические вакцины, или лекарственные средства против антиогенеза и так далее), иммуносупрессивные лекарственные средства (включая противовоспалительные лекарственные средства), фактор роста, такой как колониестимулирующий фактор (предпочтительно ОМ-С8В или О-С8В), цитокин, такой как интерлейкин-2 или интерлейкин-15 или их комбинации. Индивидуальные компоненты из таких комбинаций можно вводить или последовательно (до или после) или одновременно в отдельных или объединенных фармацевтических препаратах. Для применения рассмотренные выше комбинации обычно могут быть в виде фармацевтического препарата и, таким образом, следующий аспект изобретения включает в себя фармацевтические композиции, содержащие описанную выше комбинацию вместе с их фармацевтически приемлемым носителем.
В предпочтительном варианте способа стимулирования кроветворения пациенту, нуждающемуся в лечении, вводят фармакологически эффективное количество композиции, содержащей одно или более из следующих соединений или их комбинаций:
ВО*^ ι υ-ο,νη
о
Ш Ζ О, ΐίΗ» СН^О нуль в которых Щ означает насыщенную или ненасыщенную группу алкила С7-С11 с прямой или разветвленной цепью;
А и В независимо означают водород или ** и
- 6 007322
X означает гидроксильную группу, оксианион с моно- или дикатионным противоионом металла, или алкоксигруппу с алкильным фрагментом С1-С4 с прямой или разветвленной цепью.
Специалистам в данной области будет понятно, что в формуле III термин 7=нуль указывает, что изменяющийся Ζ является необязательным и может быть исключен или замещен водородом.
В альтернативном предпочтительном варианте композиция включает смесь, по крайней мере, двух соединений формулы I, которые являются триглицеридами со средней длиной цепи (МСТ), в которых А, В и В1 являются одинаковыми и представляют собой насыщенные или ненасыщенные алкильные группы с прямыми или разветвленными цепями С7 и С9, соответственно. Альтернативно, композиция включает смесь двух триглицеридов, в которых первый МСТ характеризуется формулой I, в которой А, В и В1 означают СН3(СН2)б, а второй МСТ характеризуется формулой I, в которой А, В и В1 означают СН3(СН2)8. Альтернативно, композиция дополнительно содержит от 0,1 до 3% каждого соединения из третьего соединения формулы I, в которой А, В и В1 означают СН3(СН2)4 и четвертого соединения формулы I, в которой А, В и В1 означают СН3 (СН2)10. Альтернативно, композиция представляет собой смесь, содержащую четыре геометрических изомера триглицеридов жирных кислот С8 и С10 следующей формулы:
же 12 3 4 п-6 6 6 8 6 6 8 8
р - б 8 8 8
В альтернативном предпочтительном варианте композиция содержит одно или более соединений формулы II или формулы III, в которых X означает ОН или X означает оксианион с противоионом металла, такого как кальций, магний, калий и натрий.
В более предпочтительном варианте композиция представляет собой каприловую кислоту, каприновую кислоту, каприлат натрия, капрат натрия, каприлат кальция, капрат кальция, триглицерид каприловой кислоты или триглицерид каприновой кислоты.
Представленные в описании композиции и способы включают в себя следующие аналоги и соединения:
аза-аналоги триглицерида каприловой кислоты или триглицерида каприновой кислоты, предпочтительно, когда аза-аналог представляет собой 1,2,3-О,К,О-триоктаноил-серинол или 1,2,3-Ο,Ν,Οтридеканоил-серинол; соединение формулы IV соединение формулы V
соединение формулы VI, которое образует фармацевтический препарат в результате разложения ίη νίνο с высвобождением активных веществ, описанных выше
VI
Следующие примеры далее иллюстрируют практическое применение данного изобретения, не ограничивая его. Следует отметить, что выбор дозы жирных кислот со средней длиной цепи, или их солей, или триглицеридов, или их моно- или диглицеридов, или других аналогов, или МСТ и связанных фармацевтических препаратов, которые следует вводить любому индивидуальному пациенту (человеку или животному), находится на усмотрении наблюдающего врача, доза будет прописана до известной степени в соответствии с подходящими дозировками и будет зависеть от стадии заболевания и подобных факторов единственно в пределах компетенции наблюдающего врача.
Пример 1. Анализ Кродамола™ (МСТ: триглицерид каприловой/каприновой кислоты).
Кродамол™ ОТСС лот#Т 1033-1299 фирмы Сюда Ь1д (Τοτοηΐο, Сапада) анализировали с помощью газовой хроматографии (ОС). ОС-ЕГО-анализ, условия градиента: 100°С-250°С в течение 10 мин, затем
- 7 007322
250°С в течение 25 мин; ЕГО 250°С. Обнаруживали четыре пика: через 22,04 мин (26%), 25,07 мин (43%),
29,16 мин (25%) и через 34,75 мин (5%).
Образец каприлового триглицерида (трикаприлин), полученного от фирмы 8шта-Ак1пс11 лот#79Н1212, исследовали с помощью газовой хроматографии. ОС-ЕГО-анализ, условия градиента: 100°С-250°С в течение 10 мин, затем 250°С в течение 25 мин; ЕГО - 250°С. Наблюдали, главным образом, один пик на 22,31 минуте (98%).
Пример 2. Ацилирование спирта с использованием хлорангидрида и пиридинового основания
Способ А. Пиридин, СН2С12.
Способ В. ΌΜΑΡ, СН2С12.
Общий способ А. (Пиридин).
Раствор спирта (~0,1М) в сухом СН2С12 и пиридина (4:1) охлаждали до 0°С в атмосфере азота и обрабатывали хлорангидридом (1,2 эквивалента). Реакционную смесь оставляли для медленного нагревания до температуры окружающей среды и перемешивали в течение ночи. Анализ методом Т1.С (ТСХ) (8Ю2, Е1ОАс:гексан 1:9) не выявил никакого оставшегося спирта. Реакционную смесь разбавляли СН2С12 и промывали насыщенным водным раствором \Н4С1. Водную фазу экстрагировали СН2С12 (х 1) и гексаном (х 1) и объединенные органические фазы промывали насыщенным водным раствором №С1, высушивали над Ж28О4, фильтровали и выпаривали в вакууме, чтобы получить неочищенный продукт.
Общий способ В (ΌΜΑΡ).
Раствор спирта (~0,1М) в сухом СН2С12 охлаждали до 0°С в атмосфере азота и обрабатывали ΌΜΑΡ (1,3 эквивалента) и хлорангидридом (1,2 эквивалента). Реакционную смесь оставляли для медленного нагревания до температуры окружающей среды и перемешивали в течение ночи. Анализ методом Т1.С (ТСХ) (8Ю2, Е1ОАс:гексан 1:9) не выявил никакого оставшегося спирта. Реакционную смесь разбавляли СН2С12 и промывали насыщенным водным раствором ХН4С1. Водную фазу экстрагировали СН2С12 (х 1) и гексаном (х 1) и объединенные органические фазы промывали насыщенным водным раствором №С1, высушивали над №28О4, фильтровали и выпаривали в вакууме, чтобы получить неочищенный продукт.
Пример 3. Триглицерид нонаноевой кислоты.
Глицерин (120 мг, 1,30 ммоль) ацилировали нонаноилхлоридом (751 мкл, 4,16 ммоль) в соответствии с общим способом А, пример 2. Очистка методом колоночной хроматографии (1зо1и1е 8Ю2, элюция 0-5% ЕЮАс в гексане) давала два продукта, содержащих фракции, которые упаривали в вакууме, чтобы получить требуемый продукт в виде бесцветной жидкости с чистотой 89% (127 мг, 19%) и 93% (475 мг, 71%), соответственно (ОС/ЕГО). Ю (фактор удержания) 0,46 (8Ю2, 10% этилацетат в гексане); 1Н ЯМР (СЭС1з, 300 МГц) бН = 5,27 (м, 1Н), 4,29 (дд, 2Н), 4,14 (дд, 2Н), 2,31 (м, 6Н), 1,61 (м, 6Н), 1,27 (м, 30Н), 0,88 (т,9Н); Μ8 (ЕАВ+) т/ζ = 510 (М-Н+); ОС-ЕГО-анализ, условия: градиент 100-250°С в течение 10 мин, затем 250°С в течение 25 мин; ЕГО 250°С; 27,25 мин.
Пример 4. Диглицерид и моноглицерид нонаноевой кислоты
а) пиридин, СН2С12.
Глицерин (100 мг, 1,09 ммоль) ацилировали одним эквивалентом нонаноилхлорида (205 мкл, 1,09 ммоль) в соответствии с общим способом А, пример 2. Очистка с использованием Вю1аде™ (408, 8Ю2, элюция смесью 10% этилацетат в гексане-100% этилацетат) давала бесцветное масло. Получали два различных компонента.
Диглицерид нонаноевой кислоты получали (73 мг, 18%) в виде белого твердого вещества. Точка плавления 24-26°С; 0,52 (8Ю2, предварительно обработанный Εΐ3Ν, 30% этилацетат в гексане); 1Н ЯМР (СЭС1з, 300 МГц) бН = 4,17 (м, 5Н), 2,35 (т, 4Н), 1,63 (м, 4Н), 1,27 (м, 20Н), 0,88 (т, 6Н); Μ8 (ЕАВ+) т/ζ = 373 (М+Н+).
Моноглицерид нонаноевой кислоты получали (85 мг, 34%) в виде белого твердого вещества. Точка плавления 37-38,5°С; Ю 0,08 (8Ю2, предварительно обработанный Εΐ3Ν, 30% этилацетат в гексане); 1Н
- 8 007322
Пример 5. 1,2,3-О,Ы,О-Тридеканоил-серинол.
Серинол (51 мг, 0,56 ммоль) ацилировали деканоилхлоридом (372 мкл, 1,76 ммоль) в соответствии с общим способом В, пример 2. Очистка методом МРЬС (8Ю2, элюция посредством 0%, затем 10% ЕЮАс в гексане) давала требуемый продукт в виде белого твердого вещества (301 мг, 97%). Точка плавления 54°С; ТСХ, 1У 0,85 (81О2, ЕЮАс:гексан 2:3); 1Н ЯМР (СЭС1з, 300 МГц) бы 0,84 (9Н, т), 1,20-1,27 (36Н, м), 1,52-1,60 (6Н, м), 2,13 (2Н, т), 2,28 (4Н, т), 4,03 (2Н, 2хА - 2хАВХ), 4,19 (2Н, 2хВ - 2хАВХ), 4,41-4,46 (1Н, м), 5,70 (1Н,д); НКМ8 т/е рассчитано для С33Н63ЫО5 553,4706, обнаружено 553,4713. ОС-РГО-анализ, условия градиента: 100-250°С в течение 10 мин, затем 250°С в течение 25 мин; РГО 250°С. Получен главным образом один пик через 14,80 мин (98%).
Пример 6. 1,3-О,О-Дидеканоил-серинол.
4восод вдеънзмАР, свд,· *>) на
Раствор серинола (1,57 г, 17,2 ммоль) в ацетоне (17 мл) и воды (17 мл) обрабатывали триэтиламином (3,60 мл, 25,9 ммоль) и ВОС-ОЫ (4,67 г, 19,0 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в атмосфере азота в течение ночи. Ацетон упаривали в вакууме, а неочищенную смесь распределяли между ЕЮАс и водой. Водную фазу экстрагировали ЕЮАс (х 3), а объединенные органические экстракты высушивали над Ыа28О4, фильтровали и упаривали в вакууме, чтобы получить желтое твердое вещество. Очистка с использованием МРЕС (8Ю2, элюируя 40-80% ЕЮАс в гексане) давала промежуточный Ν-ВОС-диол в виде белого кристаллического твердого вещества (2,10 г, 64%). ТХС, Ю 0,15 (8Ю2, ЕЮАс:гексан 4:1); 1Н ЯМР (СБС13, 300 МГц) δΗ 1,40 (9Н,с), 3,54-3,56 (5Н, м).
Промежуточный Ν-ВОС-диол (50 мг, 0,26 ммоль) ацилировали деканоилхлоридом (173 мкл, 0,83 ммоль) в соответствии с общим способом В. Очистка с использованием МРЕС (8Ю2, элюируя 0, а затем 10% ЕЮАс в гексане) давала промежуточный Ν-ВОС-диацил в виде бесцветного масла (115 мг, 88%). ТХС, 0,80 (8Ϊ02, ЕЮАс:гексан 2:3); 1Н ЯМР (СЭСЬ, 300 МГц) бн 0,87 (6Н, т), 1,23-1,30 (24Н, м), 1,44 (9Н, с), 1,56-1,70 (4Н, м), 2,31 (4Н, т), 4,04-4,21 (4Н, м), 4,77-4,80 (1Н, м), 6,73 (1Н, д).
Раствор промежуточного Ν-ВОС-диацила (7 6 мг, 0,15 ммоль) в сухом СН2С12 (1/5 мл) охлаждали до 0°С и обрабатывали раствором 4,0 М безводной НС1 в 1,4-диоксане (375 мкл, 1,50 ммоль; конечная концентрация 0,8 М). Реакционную смесь оставляли для нагревания до комнатной температуры и перемешивали в течение 3 ч при той же температуре. Добавляли другую порцию 4,0 М безводной НС1 в 1,4диоксане (375 мкл, 1,50 ммоль), а реакционную смесь перемешивали в течение следующих 2 ч. Упаривание растворителя давало требуемый продукт в виде белого твердого продукта (69 мг, 100%). Точка плавления 101°С; ТСХ, Ю 0,40 (8Ю2, смесь ЕЮАс:гексан 2:3); 1Н ЯМР (СЭС13, 300 МГц) δΗ 0,88 (6Н, т), 1,20-
НКМ8 т/е рассчитано для (М-НС1), С23Н45ЫО4 339,3348, обнаружено 339,3340; ОС-РГО-анализ, условия градиента: 100-250°С в течение 10 мин, затем 250°С в течение 25 мин; РГО 250°С. Получен, главным образом, один пик через 17,14 мин (94%).
Пример 7. α- и 3-1-О-Метил-2,3,4-О,О,О-тридеканоил-Е-фукопираноза
1-О-Метил-Е-фукопиранозу (593 мг, 3,33 ммоль) синтезировали согласно способу Ееуепе & Мизка!
(I. Вю1. Сйет. 105: 431-441, 1934) и ацилировали деканоилхлоридом (2,90 мл, 14,0 ммоль) согласно об- 9 007322 щему способу В, пример 2. Очистка с применением МРЬС (8Ю2, элюция 0-5% ЕЮАс в гексане) давала α (1,18 г, 55%) и β (0,52 г, 24%) аномеры требуемого продукта в виде бесцветного масла.
Данные для а-аномера: ТСХ, Кг 0,45 (8Ю2, смесь ЕЮАс:гексан 1:9); 1Н ЯМР (СИС13, 300 МГц) 5Н 0,87 (9Н, т), 1,14 (3Н, д), 1,20-1,35 (36Н, м), 1,52-1,68 (4Н, м), 2,18 (2Н, т), 2,29 (1Н, А - АВХ2), 2,32 (1Н, А - АВХ2), 2,41 (2Н, т), 3,38 (3Н, с), 4,13 (1Н, кв.д, 16,5), 4,93 (1Н, д), 5,15 (1Н, дд), 5,30 (1Н, дд), 5,36 (1Н, дд); НКМ8 т/е рассчитано для (М-СН3О) С36Н65О7 609,4730, обнаружено 609,4720.
Данные для β-аномера: ТСХ, Кг 0,40 (8Ю2, смесь ЕЮАс:гексан 1:9); 'Н ЯМР (СИС13, 300 МГц) 5Н 0,87 (9Н, т, 16, 5Гц), 1,22 (3Н, д), 1,20-1,35 (36Н, м), 1,49-1,67 (4Н, м), 2,18 (2Н, т), 2,25 (1Н,А - АВХ2), 2,29 (1Н,В - АВХ2) , 2,34 (2Н, т), 3,50 (3Н, с), 3,81 (1Н, кв.д), 4,35 (1Н, д), 5,03 (1Н, дд), 5,19 (1Н, дд), 5,24 (1 Н, дд).
Пример 8. Е-глутамат-капрамид
К раствору каприновой кислоты (7,30 ммоль, 1,26 г) в сухом СН2С12 (60 мл) в атмосфере азота добавляли сложный ди-трет-бутиловый эфир Е-глутаминовой кислоты хлоргидрат (6,09 ммоль, 1,80 г), ИМАР (1,8 ммоль, 0,22 г), диизопропилэтиламин (18 ммоль, 3 мл) и 1-(3-диметиламинопропил)-3этилкарбодиимид хлоргидрат (ЕИС1) (7,30 ммоль, 1,40 г). Полученный бесцветный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 24 ч. Затем растворитель удаляли при пониженном давлении, чтобы получить белый маслянистый остаток. Очистка на Вю1аде™ (408 8Ю2, элюируя смесью 5% этилацетат в гексане-30% этилацетат в гексане) давала бесцветное масло, которое представляло собой капрамид сложного Е-глутамат-ди-трет-бутилового эфира (2,47 г, 98%). К 0,56 (8Ю2, 30% этилацетат в гексане); 'Н ЯМР (СИС13, 300 МГц) 5Н = 6,05 (д, 1Н), 4,45 (м, 1Н), 2,30 (м, 2Н), 2,27 (м, 2Н), 2,16 (т, 2Н), 2,07 (м, 1Н), 1,87 (м, 1Н), 1,58 (м, 2Н), 1,43 (с, 9Н), 1,41 (с, 9Н), 1,23 (м, 12Н, 0,84 (т, 3Н).
Удаление защиты ВОС-группой достигали медленным добавлением раствора 4,0 М НС1 в 1,4диоксане (23 мл) к раствору производного сложного ди-трет-бутилового эфира (5,75 ммоль, 2,38 г) в СН2С12 (35 мл) при 0°С. Бесцветный раствор оставляли для нагревания до комнатной температуры и перемешивали в течение дополнительных 20 ч. Затем растворитель удаляли при пониженном давлении, а полученное белое твердое вещество высушивали, чтобы получить Е-глутаматкапрамид (1,71 г, 99%). Точка плавления 95-96,5°С; ' Н ЯМР (СИ3ОИ, 300 МГц) 5Н = 4,39 (м, 1Н), 3,27 (д, 1Н), 2,36 (т, 2Н), 2,20 (т, 2Н), 2,13 (м, 1Н), 1,90 (м, 1Н), 1,58 (м, 2Н), 1,27 (м, 12Н), 0,86 (т, 3Н); М8 (Е8+) т/ζ = 324 (Μ+Να+), 302 (М+Н+); М8 (Е8-) т/ζ = 300 (М-Н+); ВЭЖХ-анализ, условия: градиент 0,01% ТЕА в 10-70% ацетонитрила в течение 10 мин; скорость 1,0 мл/мин; 210 нм; 8,93 мин.
Пример 9. Сложный Ν,Ν-диметилацетамидный эфир каприновой кислоты.
К раствору каприновой кислоты (8,7 ммоль, 1,5 г) в безводном ЭМЕ (80 мл) в атмосфере азота добавляли иодид натрия (0,87 ммоль, 130 мг) с последующим добавлением диметилхлорацетамида (9,6 ммоль, 985 мкл). Затем добавляли карбонат калия (9,6 ммоль, 1,3 г) и полученную суспензию перемешивали при 90°С в течение 5 дней. Реакционную смесь оставляли для охлаждения при комнатной температуре, а потом смешивали с дистиллированной водой. Продукт экстрагировали этилацетатом (х 3). Объединенные органические фазы промывали водным раствором №НСО3, высушивали Να2804, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Полученную желтую жидкость очищали на Вю1аде™ (40 М, 8Ю2, элюируя смесью 25% этилацетат в гексане-50% этилацетат в гексане). Сложный Ν,Νдиметилацетамидный эфир каприновой кислоты получали (2,03 г, 92%) в виде белого порошка. Точка плавления 42-42,5°С; К 0,55 (8Ю2, этилацетат) ; 'Н ЯМР (СИС13, 300 МГц) 5Н = 4,64 (с, 2Н), 2,92 (с, 3Н), 2,91 (с, 3Н), 2,38 (т, 2Н), 1,62 (кв.т, 2Н), 1,22 (м, 12Н), 0,83 (т, 3Н); М8 (Е8+) т/ζ = 537 (2М-\а ), 280 (М-\а), 258 (М+Н+).
Пример 10. Исследование апоптоза и продолжительности существования нейтрофилов ΐη νίΐΐΌ.
Продолжительность существования нейтрофилов определяли, как описано Еадгаош и Оадпоп (Се11 Мо1. В1о1. 43: 313-318, 1997). Нейтрофилы получали из периферической крови здоровых волонтеров. Кровь подвергали градиентному центрифугированию с Еутрйо1у1е-ро1у (Сейаг1апе, НогпЬу, Сапайа) с последующим гипотоническим лизисом контаминирующих эритроцитов. Клетки суспендировали в КРМ1 (О1Ьсо, Виг1шд1оп, Сапайа), дополненной 10% ЕВ8 (Нус1опе, Еодап И8А). Конечные клеточные препараты состояли из >95% нейтрофилов, что было установлено окрашиванием по методу Райта-Гимза. Жизнеспособность, определенная методом вытеснения трипан голубого, составляла более 97%. Полиморфно-ядерные лейкоциты (РМЩ имели короткий полупериод существования и быстро подвергались характерным изменениям, указывающим на апоптоз. Апоптоз оценивали по способу, описанному ^1со1еШ е! а1., I. 1ттипо1. Ме111. 139: 271-279 (1991). Кратко, свежевыделенные нейтрофилы инкубирова- 10 007322 ли в течение 24 ч при 37°С с различными концентрациями МСТ. После инкубации клетки окрашивали иодидом пропидия (ΡΙ, 81§ша) и анализировали в отношении апоптоза, используя проточный цитометр
XI. (СонЙег). Затем данные выражали как процент апоптотических клеток.
На фиг. 1 представлена компиляция нескольких экспериментов, в которых определяли апоптоз нейтрофилов в отсутствие (контроль) или в присутствии различных концентраций МСТ. Результаты указывают, что в присутствии МСТ ΐη νΐΐίο апоптоз нейтрофилов ингибировался вплоть до 90% и что ингибирование было дозазависимым. Таким образом, МСТ может повышает сохранность нейтрофилов и может применяться как фактор, способствующий выживанию нейтрофилов.
Пример 11. Исследование фагоцитоза ΡΜΝ ΐη νΐΐίο.
Нейтрофилы (2х106/мл) инкубировали в течение 24 ч при 37°С в среде, содержащей 5% СО2 и 95% влажности с различными концентрациями МСТ. Через 24 ч определяли жизнеспособность методом вытеснения трипан голубого и клетки промывали три раза ΡΒ8, содержащим 2 мМ глюкозы, 1 мМ МдС12 и 1 мМ СаС12. Затем концентрацию клеток доводили до 1х106 клеток/мл, инкубировали с микросферами флуоресцирующего карбоксилата (1/10 разведение). После 30 мин инкубации нейтрофилы промывали и фиксировали в 2% параформальдегиде. Исследовали поглощение микросфер фиксированными нейтрофилами, используя проточный цитометр ХЬ (Сон1!ег). Затем данные представляли как процент фагоцитарных клеток.
На фиг. 2 представлены полученные данные нескольких экспериментов, в которых определяли фагоцитарную активность ΡΜΝ в отсутствие (контроль) или в присутствии различных концентраций МСТ. Результаты показывают, что МСТ повышает фагоцитарную активность ΡΜΝ человека. Фагоцитарная активность увеличивалась вплоть до от двух до трех раз от контрольных величин и степень стимуляции зависела от иммунного статуса донора.
Пример 12. Влияние доксорубицина на апоптоз нейтрофилов.
ΡΜΝ выделяли, как описано в примере 10. Клетки (2 х 106/мл) инкубировали в течение 4 ч при 37°С в 5% СО2 и 95% влажности в присутствии различных концентраций химиотерапевтического агента, доксорубицина. Апоптотические клетки оценивали, как описано в примере 10. Данные выражали как процент апоптотических клеток. Данные представленные на фигуре 3А и 3В показывают, что доксорубицин индуцирует апоптоз ΡΜΝ.
Пример 13. МСТ устраняет доксорубицин-индуцированный апоптоз нейтрофилов.
ΡΜΝ выделяли, как описано в примере 10. Клетки (2 х 106/мл) инкубировали в течение 4 ч при 37° С в 5% СО2 и 95% влажности в присутствии различных концентраций доксорубицина в присутствии и без МСТ (2,5% и 5,0%). Апоптотические клетки оценивали, как описано в примере 10. Данные выражали как процент апоптотических клеток.
В табл. 1 представлены данные двух экспериментов, в которых определяли химиопротективное действие МСТ на ΡΜΝ. Результаты представляли как процент апоптотических клеток после 4 ч инкубации в присутствии или в отсутствие доксорубицина в присутствии или без МСТ. Как и в примере 12, доксорубицин индуцировал апоптоз ΡΜΝ ΐη νΐΐίο. Однако, в присутствии МСТ в концентрации 2,5% и 5% (об./об.) апоптотическое действие доксорубицина ингибировалось. Таким образом, МСТ проявляет антиапоптотическое действие на ΡΜΝ. Апоптоз также изучали, используя способ с аннексином VПТС/ΡΙ (иодид пропидия) в соответствии с рекомендациями производителя Вюзоигсез (набор для определения апоптоза с апомеченным аннексином-νΐ·ΊΊΓ #ΡΗΝ 1018). Аннексин V связывается с фосфатидил-серином, который перемещается из внутренней на внешнюю мембрану в период от ранней и до поздней фазы апоптоза. Кратко, нейтрофилы инкубировали в присутствии или в отсутствие различных концентраций доксорубицина и МСТ. Через 24 ч нейтрофилы промывали ΡΒ8 и окрашивали 2 мкл аннексина ν-ПТС и 10 мкл ΡΙ (81§ша, 1 мг/мл) в течение 20 мин. После инкубации окрашенные клетки фиксировали в параформальдегиде (1%) и исследовали относительно апоптоза, используя проточный цитометр ХЬ (СонЙег). Затем данные представляли как процент апоптотических клеток.
На фиг. 4А представлен времязависимый ответ действия МСТ на обработанные доксорубицином нейтрофилы. МСТ устраняет индуцированный доксорубицином апоптоз нейтрофилов в зависимости от времени и дозы.
На фиг. 4В представлен времязависимый ответ действия доксорубицина на обработанные МСТ нейтрофилы. МСТ защищает дозазависимым способом нейтрофилы от доксорубицининдуцированного апоптоза, когда применяли за 4 ч перед введением токсического агента (доксорубицина).
Таблица 1. Защитное действие МСТ на доксорубицин-индуцированный апоптоз нейтрофилов
Концентрация доксорубицина % апоптоза нейтрофилов (ΡΜΝ)
Эксперимент 1 Эксперимент 2
Контроль МСТ 2,5% (об./ об.) МСТ 5% (об./ об.) Контроль МСТ 2,5% (об. / об.) МСТ 5% (об./ об.)
0 12,4 9,5 12,3 49, 6 23,6 4,6
10’1и М 9,3 11,7 7,4 60, 6 14,7 23,9
10 и М 18,7 14,2 8,3 59,2 32,5 14,8
1О’Ь М 23,2 12,7 3,5 55,0 21,6 16, 9
10 ь М 23,8 12,3 8,3 66,2 74,7 12,1
10’4 М 27,5 35,2 17,1 53,2 58,6 55,7
- 11 007322
Пример 14. МСТ устраняет индуцированный доксорубицином апоптоз нейтрофилов: сравнение с
ОМ-С8Р.
В табл. 2 продемонстрировано влияние ОМ-С8Р, МСТ и трикаприлина на индуцированный доксорубицином апоптоз нейтрофилов человека. ОМ-С8Р и МСТ способны спасать или защищать нейтрофилы человека от доксорубицининдуцированного апоптоза. Трикаприлин устраняет доксорубицининдуцированный апоптоз и, кроме того, повышает жизнеспособность нейтрофилов человека в более высокой степени, чем жизнеспособность, наблюдаемая в необработанных нейтрофилах (контроль, отсутствие доксорубицина).
Таблица 2. Защитное действие МСТ и ОМ-С8Р на индуцированный доксорубицином апоптоз нейтрофилов
% жизнеспособности ΡΜΝ
Контроль 35,9±0,71
Доксорубицин (ЦОХ) (10 ь М) 6,82±0,5
СМ-СЗГ (10' М) + цох 16,75±2,05
СМ-СЗГ (1О’а М) + ϋΟΧ 6,99±0,23
МСТ (24 мМ) + цох 14,20+1,98
МСТ (12 мМ) + ООХ 12,37±1,72
Трикаприлин (24 мМ) + ЦОХ 12,13±1,25
Трикаприлин (12 мМ) + ЦОХ 42,95±6,15
Пример 15. МСТ и трикаприн увеличивают пролиферацию костного мозга ίη νΐίΓΟ.
Клетки костного мозга получали из бедра самок мышей С57ВР/6 (в возрасте от 6 до 8 недель). Клетки приливали и промывали РВ8. Собранные клетки центрифугировали и повторно суспендировали при концентрации 2х106 клеток/мл. 100 мкл клеток (2х105 клеток) инкубировали в 96-луночных титрационных микропланшетах в течение 48 ч в присутствии или в отсутствие МСТ или трикаприна. После инкубации клетки подвергали импульсному мечению 1мк Ки [3Н]-тимидина в течение 6 ч. Планшеты собирали на Тош1еек и считали на микробета β-счетчике. Включение [3Н]-тимидина в ДНК является прямым показателем клеточной пролиферации.
На фиг. 5 представлено типичное исследование влияния МСТ и трикаприна на пролиферацию клеток костного мозга. МСТ и трикаприн увеличивают пролиферацию клеток костного мозга в 3-5 раз по сравнению с контролем.
Пример 16. Исследование химиопротекции: Ιη νίνο индукция пролиферации или сохранности иммунных клеток с помощью МСТ.
У самок мышей С57ВБ/6 в возрасте 6-8 недель подавляли иммунную систему воздействием 80 мг 5фторурацила (5-РИ), или 100-200 мг циклофосфамида (СУ), или 12 мг таксотера (ТХ) , которые вводили внутривенно в 0 день. Для исследования иммунопротективного влияния МСТ или других соединений мышам предварительно давали тестируемое соединение перорально на -3, -2 и -1 день или вводили внутривенно в 0 день. Мышей умерщвляли на +5 день проколом сердца и смещением области шеи. Затем клеточную суспензию получали из тимуса, селезенки и костного мозга следующим образом.
Ткани измельчали в РВ8-буфере и контаминирующие эритроциты лизировали в АСК-буфере (155 мМ ИН4С1, 12 мМ ИаНСО3, 0,1 мМ БИТА, рН 7,3) в течение 5 мин. Затем клетки собирали центрифугированием и промывали три раза в РВ8 и повторно суспендировали в тканевой культуральной среде. Клетки считали на гемоцитометре.
Результаты показали, что МСТ значительно увеличивает количество клеток в иммунной ткани нормальных и иммуносупрессивных животных по сравнению с одним наполнителем, что продемонстрировано в следующих таблицах и фигурах. В зависимости от экспериментов и иммунного статуса мышей МСТ может увеличивать количество клеток костного мозга и/или клеток селезенки, и/или клеток тимуса.
На фиг. 6 показано влияние МСТ на количество клеток костного мозга у иммуносупрессивных животных. Только СУ и 5-РИ уменьшали количество клеток костного мозга по сравнению с контролем (нецитотоксическое действие). У мыши введение таксотера не оказывало никакого существенного влияния на количество клеток костного мозга. В супрессивном костном мозге введение МСТ (6,25 мкМоль на мышь) на -3, -2 и -1 дни значительно повышало количество клеток костного мозга.
На фиг. 7 продемонстрировано влияние МСТ на количество клеток селезенки у иммуносупрессивных мышей, которые получали МСТ перорально по схеме предварительного введения. Все цитотоксические лекарственные средства (СУ, 5-РИ и ТХ) значительно снижали количество селезеночных клеток по сравнению с контролем. Введение МСТ (6,25 мкМоль на мышь) на -3, -2 и -1 дни существенно увеличивало количество селезеночных клеток с «Р» менее 0,0017, 0,009 и 0,0036 для СУ, 5-РИ и ТХ, соответственно.
Кроме того, МСТ значительно повышало количество клеток костного мозга у нормальных мышей, когда вводили внутривенно в 0 день (табл. 3). Однако одной внутривенной инъекции МСТ оказалось недостаточно, чтобы повысить количество селезеночных клеток как у нормальных, так и у иммуносупрессивных мышей.
- 12 007322
Таблица 3. Влияние циклофосфамида (СУ) и СУ + МСТ на клетки костного мозга и селезенки (нормальные мыши)
Костный мозг Селезенка
#клетки (х106) Р #клетки (хЮ5) Р
Контроль 16±3,94 94±11 -
СУ 13±3,92 0,17 60±12 0,0014
СУ+МСТ(50мкМоль) 17±4,28 0, 87 53+10 0,0003
мкМоль)
СУ+МСТ (12,5 мкМоль) 17±6,15 0, 95 51±10 0,0002
МСТ (50 мкМоль) 41±6,11 >0,0001 103±7 0,19
МСТ (12,5 мкМоль) 27±4,19 0,0018 101±11 0,31
Пример 17. Исследование химиопротекции: Ιη νίνο зависимость доза-ответ индукции пролиферации иммунных клеток посредством МСТ при введении нормальным мышам в день -3, -2 и -1.
Ιη νίνο оценивали зависимость доза-ответ индукции пролиферации иммунных клеток посредством МСТ по протоколу, описанному в примере 16.
В табл. 4 показана зависимость доза-ответ при лечении МСТ, введенного перорально нормальным мышам в -3, -2 и -1 день. МСТ значительно увеличивал количество клеток костного мозга и селезенки.
Таблица 4.. Влияние МСТ на нормальных мышей
Костный мозг Селезенка
#клетки (х106) Р #клетки (х106) р
Контроль 45±7,3 120±12,9
МСТ (3,15 мкМоль 52±4,3 0, 10 144±15,8 0,018
МСТ (6,25 мкМоль) 59±11,3 0,05 134±13,9 0,129
МСТ (12,5 мкМоль) 54±6 0,04 144±19,8 0,04
МСТ (25 мкМоль) 56±3,9 0,01 127±17,0 0,48
Пример 18. Исследование химиопротекции: Ιη νίνο индукция пролиферации или защиты иммунных клеток: Сравнение действия МСТ с эффектом СМ-С8Е
Сравнительное исследование индукции пролиферации/регенерации или защиты иммунных клеток ιη νίνο проводили, следуя протоколу, описанному в примере 16.
Сравнительное исследование МСТ и СМ-С8Г проводили на нормальных и иммуносупрессивных животных. По сравнению с МСТ, СМ-С8Г не оказывал никакого существенного действия на количество клеток костного мозга и селезенки у иммуносупрессивных животных. Значительное влияние СМ-С8Г наблюдали только на массу тимуса у нормальных мышей (фиг. 8). В этом случае МСТ проявлял эффект, подобный действию СМ-С8Г.
Пример 19. Исследования химиопротекции.
Оценивали влияние каприловой кислоты и каприновой кислоты на индукцию пролиферации или защиты иммунных клеток ιη νίνο по протоколу, описанному в примере 16.
Как видно из табл. 5, только каприновая кислота значительно повышала количество клеток костного мозга. Не выявлено никакого существенного влияния на количество селезеночных клеток по сравнению с мышами, обработанными (леченными) циклофосфамидом.
Таблица 5. Влияние циклофосфамида (СУ), СУ + каприловая кислота и СУ + каприновая кислота на клетки костного мозга и селезенки
Костный мозг Селезенка
#клетки (х106) Р/ контроль Р/СУ #клетки (х10в) Р/ контроль Р/СУ
Контроль СУ 54±5,9 22±5,7 >0,0001 66±7,3 23±4,0 >0,0001
СУ+ Каприловая кислота 26±3,58 0, 001 0,21 28±6,4 >0,0001 0, 17
СУ+ Каприновая кислота 32±2,71 0,0004 0,006 27±8,4 >0,0001 0,27
Пример 20. Исследования химиопротекции.
Оценивали влияние трикаприлина и трикаприна на индукцию пролиферации и защиты иммунных клеток ιη νίνο по протоколу, описанному в примере 16.
Трикаприлин и трикаприн оба оказывают влияние на пролиферацию или защиту количества клеток костного мозга у СУ-обработанных мышей (табл. 6) . Не наблюдали никакого существенного влияния на количество селезеночных клеток по сравнению с мышами, обработанными циклофосфамидом.
- 13 007322
Таблица 6. Влияние циклофосфамида (СУ), СУ + трикаприлина и СУ + трикаприна на клетки костного мозга и селезенки
Костный мозг Селезенка
#клетки (х10е) Р/ контроль Р/СУ #клетки (хЮ6) Р/ контроль Р/СУ
Контроль 55+9,3 113±15,9
СУ 22±5,8 0,0001 36±13,6 >0,0001
СУ+ трикаприлин 34+7,8 0,0033 0,022 37±12,б >0,0001 0,8
СУ+ Трикаприн 31+3,8 0,0008 0,012 38±6,8 >0,0001 0,7
Пример 21. Исследования химиопротекции.
Оценивали влияние нонаноевой кислоты и лауриновой кислоты на индукцию пролиферации и защиты иммунных клеток ΐη νΐνο по протоколу, описанному в примере 16.
У мышей, обработанных СУ, наблюдали значительное увеличение пролиферации или защиты количества клеток костного мозга и селезенки в результате предварительного введения лауриновой кислоты. Однако нонаноевая кислота продемонстрировала слабое (незначительное) влияние на количество иммунных клеток (табл. 7) по сравнению с мышами, обработанными циклофосфамидом.
Таблица 7. Влияние циклофосфамида (СУ), СУ + нонаноевая кислоа и СУ + лауриновая кислота на клетки костного мозга и селезенки
Костный мозг Селезенка
#клетки (хЮ6) Р/ контроль Р/СУ #клетки , (хЮ6) Р/ контроль Р/СУ
Контроль 58±11,8 99±22
СУ 32±6,3 0,0016 1,0 24±6 0,0002
СУ+ Нонаноевая кислота (6,25 мкМоль 36±5,6 0,0044 0,26 28±4 0,0004 0,27
СУ+ Лауриновая кислота (6,25 мкМоль 42±7,8 0,0185 0, 04 32±5 0,0005 0,03
Пример 22. Исследования химиопротекции.
Оценивали влияние трилаурина и тримиристина на индукцию пролиферации и защиту иммунных клеток ΐη νΐνο по протоколу, описанному в примере 16.
Трилаурин и тримиристин оказывали слабое (незначительное) влияние на пролиферацию и защиту количества клеток костного мозга и селезенки у СУ-иммуносупрессивных мышей (табл. 8).
Таблица 8. Влияние циклофосфамида (СУ), СУ + трилаурин и СУ + тримиристин на клетки костного мозга и селезенки
Костный мозг Селезенка
#клетки (хЮ6) Р/ Контроль Р/СУ #клетки (хЮ6) Р/ Контроль Р/СУ
Контроль 49±7,3 105±23
СУ 27±2,8 0,0014 19±6,5 0,0007
СУ+ Трилаурин (6,25 мкМ) 31±6,8 0,0028 0,219 28±19,5 0,0004 0,302
СУ+ Тримиристин (6,25 мкМ) 31±9,9 0, 0067 0,402 15±4,6 0,0007 0,314
Пример 23. Исследования химиопротекции.
Оценивали влияние трикапроина и капроата натрия на индукцию пролиферации или защиту иммунных клеток по протоколу, описанному в примере 16.
Трикапроин и капроат натрия оказывали слабое (незначительное) влияние на пролиферацию и защиту количества клеток костного мозга и селезенки у СУ-иммуносупрессивных мышей (табл. 9).
Таблица 9. Влияние циклофосфамида (СУ), СУ + трикапроин и СУ + капроат натрия на клетки костного мозга и селезенки
Костный мозг Селезенка
#клетки (хЮе) Р/ Контроль Р/СУ #клетки (хЮ6) Р/ Контроль Р/СУ
Контроль 48±4,9 98±24,2
СУ 25±4,9 >0,0001 33+13,2 0,0018
СУ+ Трикапроин 29±4,1 0,0001 0,17 37±8,7 0,0035 0,51
- 14 007322
(6,25 мкМоль)
СУ+ Капроат натрия (6,25 мкМоль) 39±17,9 0,2403 0,09 35±10,6 0,0026 0,77
Пример 24. Исследования химиопротекции.
Оценивали влияние каприлата натрия и капрата натрия на индукцию пролиферации или защиту иммунных клеток по протоколу, описанному в примере 16.
Наблюдали значительное увеличение пролиферации защиту клеток костного мозга у СУиммуносупрессивных мышей в результате предварительного введения каприлата натрия и капрата натрия (фиг. 9).
Пример 25. Исследования химиопротекции: схемы предварительного введения.
Исследования химиопротекции проводили, как описано в примере 16, за исключением того, что мышей подвергали постобработке МСТ, каприлатом натрия, капратом натрия или каприновой кислотой перорально на 1, 2, 3 и 4 день.
Наблюдали значительное увеличение количества клеток костного мозга при постобработке МСТ каприлатом натрия и капратом натрия у СУ-обработанных мышей (табл. 10). Каприновая кислота, когда использовали по схеме постобработки, индуцировала значительное увеличение количества клеток селезенки и небольшое увеличение количества клеток костного мозга (табл. 11).
Таблица 10. Влияние пост-обработки циклофосфамидом (СУ), СУ + МСТ, СУ + каприлат натрия и СУ + капрат натрия на клетки костного мозга и селезенки
Костный, мозг Селезенка
#клетки (хЮ6) Р/ Контроль Р/СУ #клетки (хЮ6) Р/ Контроль Р/СУ
Контроль 52±6,17 110±29,3
СУ 19±4,99 >0,0001 30± 9,5 0,0007
СУ+ МСТ (12,5 МкМ) 26±3,70 >0,0001 0,0189 38±7,2 0,0014 0,163
СУ+ 26±5,33 >0,0001 0,0455 36+12,5 0,0009 0,394
Каприлата натрия (12,5 мкМоль)
СУ+ Капрата натрия (12,5 мкМ) 29±4,45 0,0001 0,0140 28±6,3 0,0007 0,696
Таблица 11. Влияние пост-обработки циклофосфамидом (СУ), СУ + каприновая кислота на клетки костного мозга и селезенки
Костный мозг Селезенка
#клетки (хЮ6) Р/ Контроль Р/СУ #клетки (хЮ6) Р/ Контроль Р/СУ
Контроль 48±7,9 88±15,9
СУ 31±6,7 0,0026 21+4,3 0,0001
СУ+ Каприновая кислота (3,125 МкМоль) 37±7,8 0,0326 0,209 31±8,7 0,0001 0,035
СУ+ Каприновая кислота (6,25 мкМоль) 38±4,6 0,0274 0,066 25±6,3 0,0001 0,187
СУ+ Каприновая кислота (12,5 мкМоль) 38+7,4 0,0412 0,134 36±7,8 0,0002 0,003
Пример 26. Исследования химиопротекции: исследование иммунофенотипирования.
Самкам мышей С57ВБ/6 в возрасте 6-8 недель предварительно вводили в -3, -2 и -1 день перорально или в 0 день внутривенно различные концентрации МСТ. Также иммунофенотипирование проводили на иммуносупрессивных животных. Иммуносупрессию достигали внутривенным введением 80 мг/кг 5фторурацила (5-РИ) или 100-200 мг/кг циклофосфамида (СУ), или 12 мг/кг таксотера (ТХ) в 0 день. Мышей умерщвляли на 5 день проколом сердца. Кровь и селезенки собирали и получали клеточные суспензии, а эритроциты лизировали в АСК-буфере (155 мМ ЫН4С1, 12 мМ ЫаНСО3, 0,1 мМ БЭТА, рН 7,3) в течение 5 мин. Клетки промывали три раза в РВ8, рН 7,4 и повторно суспендировали в тканевой культуральной среде. Затем клетки инкубировали в течение 45 мин на льду с флуоресцеином изотиоцианатом (Р1ТС) или фикоэритрином (РЕ) конъюгированным с маркером клеточной поверхности в соответствии с
- 15 007322 рекомендацией производителя (ОтЪео/ВВЕ, Себаг1апе, ВоеЫпцег Маппйе1ш). Затем клетки промывали в
РВ8, фиксировали 1% параформальдегидом и анализировали на проточном цитометре ХЬ Сои11ег. Анализ клеточных субпопуляций осуществляли посредством определения стандартных маркеров клеточной поверхности, которыми являются следующие: ТСВ (рецептор Т-клеток), С104 (Т-хелпер), СБ8 (Тцитотоксичный агент/супрессор), СБ11Ъ (макрофаг), ΝΚ (ΝΚ-клетки) и Ьу5 (В-клетки).
Клетки костного мозга получали, как описано в примере 15. Клетки окрашивали в результате 45минутной инкубации с Р1ТС или РЕ, конъюгированными с маркером клеточной поверхности в соответствии с рекомендацией производителя. Затем клетки промывали РВ8, фиксировали 1% параформальдегидом и анализировали на проточном цитометре ХЕ СоиЙег. Анализ клеточных субпопуляций осуществляли, определяя стандартные маркеры клеточной поверхности, которыми были следующие: СЮ34 (гемотопоэтические клетки-предшественники), СЮ41 (тромбоциты, мегакариоциты), СЮ13 (миеломоноцитарные стволовые клетки, миелоциты, промоноциты) и СЮ38 (лимфоидные стволовые клетки, про-В, преВ).
В табл. 12 продемонстрировано влияние МСТ на результаты иммунофенотипирования клеток крови и селезенки у нормальных мышей. При иммунофенотипировании клеток крови показано, что МСТ увеличивает клеточные субпопуляции СО8+ и БУ5+. В некоторых экспериментах показано, что МСТ незначительно увеличивает субпопуляцию ЬУ5-ТСВ- (данные не представлены). При иммунофенотипировании клеток селезенки показано, что МСТ значительно повышает относительный процент клеток ЬУ5ТСВ- и СО4+. БУ5-ТСВ- являются ни В- и ни Т-клетками и могут представлять собой нейтрофилы.
При иммунофенотипировании клеток крови и селезенки показано, что, если вводили иммуносупрессивным животным, то МСТ увеличивал относительный процент клеток БУ5-ТСВ- (вероятно нейтрофилы) и СО11+ (макрофаг) по сравнению с одним циклофосфамидом. Названные клеточные субпопуляции происходили от миелоидной клетки-предшественника (табл. 13).
Таблица 12. Влияние МСТ на иммунофенотипирование клеток крови и селезенки у нормальных мышей
Клеточная субпопуляц. Контроль 6,25 мкМ 12,5 мкМ 50 мкМ
Иммунофенотипирование клеток крови
СЦ8 + 12,76±1,23 16,41±1,16 р<0,0004 13,18±2,08 р=0,68
ЦУ5 + 15,57±6,91 24,0±4,92 р<0,037 26,75+4,11 р 0,01
Иммунофенотипирование клеток селезенки
ЪУ5-ТСК- 13,02±2,54 16,84+0,83 р<0,0257
СЭ4 + 19,9±1,09 22,25±1,64 р<0,013 22±0,47 р<0,091
Таблица 13. Влияние МСТ на иммунофенотипирование клеток крови и селезенки у циклофосфамид-иммуносупрессивных нормальных мышей (СУ, 200 мг/кг)
Клеточная субпопуляц. Контроль 6,25 мкМ 12,5 мкМ 50 мкМ
Иммунофенотипирование клеток крови
Цу5-ТСК- 36,82±9,93 - 51, 67±11,10 46,32±5,63
р<0,05 р=0,1254
СВ11 + 26,41±4,54 - 42,12±8,77 42,56±8,62
р<0,0119 р<0,0098
Иммунофенотипирование клеток селезенки
ЦУ5-ТСВ- 20,2±4,05 23,92±1,61 р<0,07 (слабое)
СШ1+ 16,31±4,85 27,47±11,48 р<0,06 (слабое)
Пример 27. Исследования химиопротекции: исследование иммунофенотипирования.
Иммунофенотипирование клеток проводили с применением тримиристина, трилаурина, каприновой кислоты и капроата натрия, следуя протоколу, описанному в примере 26.
В табл. 14 показано влияние названных аналогов МСТ на данные иммунофенотипирования клеток крови и селезенки. Тримиристин и трилаурин не оказывали никакого существенного влияния на клетки крови по сравнению с одним циклофосфамидом. Однако, на клетках селезенки тримиристин и трилаурин повышали относительный процент СИ11+. Кроме того, трилаурин индуцировал значительное увеличение в клеточных субпопуляциях БУ5-ТСВ- и ΝΚ+.
- 16 007322
Интересно, что каприновая кислота и капроат натрия значительно повышали относительный процент ЬУ5-ТСК-клеток в крови. На селезенке каприновая кислота не оказывала никакого существенного влияния по сравнению с одним циклофосфамидом.
Таблица 14. Влияние тримири стина, трилаурина, каприновой кислоты и капроата натрия на иммунофенотипирование клеток крови и селезенки у циклофосфамид-иммуносупрессивных мышей (СУ, 200 мг/кг)
Соединения Клеточная субпопуляц. СУ 6,25 мкМ 12,5 мкМ
Иммунофенотипирование клеток крови
Тримиристин Незначительный эффект
Трилаурин Незначительный эффект
Каприновая ЦУ5-ТСК- 56,36±7,26 61,52±5,16 70,79±3,95
кислота р=0,189 р<0,0029
Капроат натрия ЪУ5-ТСН- 40,91±8,84 52,43±10,16 р=0,063 (слабое)
Иммунофенотипирование клеток селезенки
Тримиристин СО11+ 16,31±4,85 42,94±8,45 р<0,0002
Трилаурин СМ1+ 16,31±4,85 43,94±4,78 р<0,0001
ЬУ5-ТСК- 73,17±1,41 77,86+2,94 р<0,0097
ΝΚ+ 7,53±2,52 17,46±5,80 р<0,0067 —
Каприновая Незначительный эффект
кислота
Капроат натрия Не проводили
Пример 28. Исследования химиопротекции.
Иммунофенотипирование клеток костного мозга. Оценивали влияние МСТ, каприлат натрия, капрата натрия при иммунофенотипировании клеток костного мозга по протоколу, описанному в примере
26. Обработка циклофосфамидом индуцировала значительное увеличение всех исследуемых субпопуляций (СЭ34+, СЭ13+, СЭ14+ и СЭ38+). Добавление МСТ или каприлата натрия, или капрата натрия увеличивало количество линии клеток СЭ13+, которые являются миеломоноцитарными стволовыми клетками, миелоцитами и промоноцитами. Отмеченное увеличение относительного процента СБ 13+ оказалось значительным по сравнению с применением одного циклофосфамида. Результаты четко продемонстрировали, что МСТ и другие родственные соединения индуцируют существенное увеличение количества клеток костного мозга (что приведено в предшествующих примерах) и, кроме того, повышают относительный процент предшественника фагоцитарных клеток (ΡΜΝ и моноцитов). Это может приводить к лучшему восстановлению после цитотоксического лечения или защите от инфекционных агентов (табл. 15).
Таблица 15. Влияние МСТ, каприлата натрия и капрата натрия на иммунофенотипирование клеток костного мозга у циклофосфамидиммуносупрессивных мышей (СУ, 200 мг/кг)
% Клеток СОЗ 4+ СО13+ СО 41 СО 38
Контроль 1,1±0,3 0,8±0,2 1,6±0,2 29,8±6,5
Циклофосфамид (СУ) 10±1,0 3,2±0,5 4,2±0,6 39,6±13,6
СУ + МСТ 11,2±1,3 4,5±0,5 р<0,001 4,5±0,4 42±15,7
СУ + каприлат натрия 11,2±1,3 4,9±1,2 р<0,017 4,6±1,3 36±9,7
СУ + капрат натрия 9,1±3,1 4,7+1,7 р<0,06 3,7+0,7 44,3±22,8
Пример 29. Исследования химиопротекции.
Оценивали влияние тридеканоил-серинола и дидеканоил-серинола на индукцию пролиферации и сохранность иммунных клеток ιη νίνο по протоколу, описанному в примере 16.
Как видно из табл. 16, тридеканоил-серинол значительно повышает количество клеток селезенки. Не выявлено никакого существенного влияния на количество клеток костного мозга.
- 17 007322
Таблица 16. Влияние циклофосфамида (СУ), СУ + тридеканоил-серинол и СУ + дидеканоил-серинол на клетки костного мозга и селезенки
Костный мозг
Контроль
СУ
СУ + тридеканоилсеринол_____
СУ + дидеканоилсеринол #Клетки (хЮ6) 53+4,8 28+3,4 28+4,6
Р/ контроль >0,0001 >0,0001 >0,0001
Ρ/6Υ
0, 95
0,54 ________Селезенка #Клетки (хЮ6)
113±15,5
29±9,2
42±8,4
Р/ контроль >0,0001 >0,0001
Ρ/ϋΥ
0,035
36±9,9 >0,0001
0,27 . Исследования химиопротекции.
Пример 30
Оценивали влияние α-метилтридеканоил-Ь-фукопиранозы и β-метилтридеканоил-Ь-фукопиранозы на индукцию пролиферации и защиту иммунных клеток ΐη νΐνο по протоколу, описанному в примере 16.
Как видно из таблицы 17, β-метилтридеканоил-Ь-фукопираноза оказывала слабое (незначительное) действие на количество клеток костного мозга по сравнению с циклофосфамидобработанными мышами. Отсутствие активности α-метиланомера предполагали ввиду известной нестабильности αалкилпиранозидов.
Таблица 17. Влияние циклофосфамида (СУ), СУ + α-метилтридеканоил-Ьфукопираноза и СУ + β-метилтридеканоил-Ь-фукопираноза на костный мозг
Костный мозг
# клетки (х 10е) Р/контроль Р/СУ
Контроль 53±8,0
СУ 26,2±2,6 0,0058
СУ + а-метил-тридеканоил-Ьфукопираноза 30,4±9,3 0,0133 0,334
СУ + β-метил-тридеканоил-Ъфукопираноза 34,6±8,5 0,0068 0,061
Пример 31: Исследования химиопротекции.
Оценивали влияние этилкапрата и сложного Ν,Ν-диметилацетамидного эфира каприновой кислоты на индукцию пролиферации и защиты иммунных клеток ίη νΐνο по протоколу, описанному в примере 16.
Как показано в табл. 18, только Ν,Ν-диметилацетамид каприновой кислоты значительно увеличивал количество клеток костного мозга. Не обнаружено никакого существенного влияния на количество клеток селезенки.
Таблица 18. Влияние циклофосфамида (СУ), СУ + этилкапрат и СУ + Ν,Νдиметилацетамид каприновой кислоты на костный мозг
Контроль
СУ
СУ + этилкапрат
СУ + Ν,Ν-диметилацетамид каприновой кислоты _________Костный мозг # клетки (х 10е)
50,2±4,8
27,5±8,0
27,5±4,4
37,4+5,9
Р/контроль
0,0031
0,0032
0,042
Р/СУ
1,0
0, 036
Пример 32. Противоопухолевая активность.
Самкам мышей С57ВЬ/6 в возрасте 6-8 недель внутривенно вводили в 0 день 1 х 105 клеток меланомы В16Р10 из АТСС (источник клеточная культура, Эг. Ι.Ρ Рйбег). Затем животным производили внутривенную инъекцию с или без МСТ (25 мкМоль/мышь) на 7, 9, 14, и 16 день и 10 мг/кг доксорубицина на 10 и 17 день. Мышей умерщвляли на 22 день. Регистрировали массу тела и объем опухоли. Окончательный объем опухоли получали посредством определения двумерного размера кронциркулем, используя формулу 0,4 (ахВ2) , где а означает основной размер опухоли и Ь означает минорный перпендикулярный размер.
Описываемый эксперимент проводили, чтобы проверить, не является ли МСТ стимулирующим или защищающим раковые клетки агентом скорее, чем иммунные клетки.
На фиг. 10 продемонстрировано химиопротективное действие и противоопухолевая эффективность МСТ в комбинации с субтерапевтической концентрацией доксорубицина на модели меланомы В16Р10. МСТ индуцирует небольшое уменьшение (Т/С /лечение по сравнению с контролем/ около 20%) объема опухоли настолько, насколько снижала субтерапевтическая концентрация доксорубицина (Т/С около 25% снижения), когда применяли один доксорубицин. Наблюдали аддитивный эффект, когда МСТ применяли в сочетании с доксорубицином (Т/С около 45-50%). Приведенные данные указывают, что оказы- 18 007322 вается возможным достижение терапевтического действия, когда МСТ комбинируют с субтерапевтической концентрацией цитотоксических лекарственных средств.
Пример 33: Противоопухолевая активность.
Сингенная опухоль ΌΜΒΑ3 (ΌΑ-3, модель карциномы молочной железы) развивалась из предракового поражения, обработанного 7,12-диметилбензантраценом у самок мышей ВАЬВ/с. Клетки ΌΑ-3 выращивали в виде монослойных культур в пластиковых флаконах в ВРМ1-1640, содержащей 0,1 мМ заменимых аминокислот, 0,1 мкМ пирувата натрия, 2 мМ Ь-глутамина и 100 мкг/мл гентамицина сульфата. Кроме того, среда была дополнена 50 мкМ 2-меркаптоэтанолом и 10% фетальной бычьей сывороткой. Опухоли ΌΑ-3 серийно пассировали ш у1уо посредством подкожной инокуляции 5х105 жизнеспособных опухолевых клеток, чтобы продуцировать локализованные опухоли у мышей ΒΑΕΒ/с в возрасте 6-8 недель. Затем животных периодически обследовали посредством ручной пальпации для выявления опухоли. Окончательный объем опухоли получали в результате определения двумерного размера кронциркулем, используя формулу 0,4 (ахЬ2), где а означает основной размер опухоли и Ь означает минорный перпендикулярный размер. Опухоли становились пальпируемыми обычно на 7-10 день после инокуляции.
Две схемы лечения использовали для оценки противоопухолевой эффективности и предупреждения опухоли МСТ в комбинации с циклофосфамидом (СУ, 100 мг/кг) и таксотером (ТХ, 20 мг/кг) на модели опухоли ΌΑ-3. Мышам ΒΑΕΒ/с вводили опухолевые клетки в 0 день. Лечение МСТ производили перорально на 6, 7 и 8 день; 13, 14 и 15 дни; 20, 21 и 23 дни с последующим лечением посредством СУ или ТХ, вводимых внутривенно в виде однократной болюсной инъекции на 9 и 16 дни. Массу тела и объем опухоли регистировали с 4 дня до 23 дня. На 23 день всех животных умерщвляли. %Т/С (лечение по сравнению с контролем) рассчитывали как соотношение опухолевых объемов в завершающем периоде у леченой группы, разделенных на соответствующие объемы у контрольной группы, множимого на 100. По критериям ΝΟ продукт считают эффективным, если %Т/С составляет <40%.
Описанные эксперименты проводили, чтобы установить, не являются ли МСТ усиливающими или защищающими раковые клетки агентами скорее, чем иммунные клетки. На фиг. 11 показано химиопротективное действие и противоопухолевая эффективность МСТ в комбинации с субтерапевтической концентрацией СУ и ТХ на модели карциномы молочной железы ΌΑ-3. МСТ индуцировал небольшое снижение (Т/С около 18%) объема опухоли по сравнению с контролем. Когда МСТ применяли в комбинации с СУ или ТХ, не наблюдали никакого увеличения объема опухоли. Однако когда МСТ применяли в комбинации с СУ, наблюдали терапевтический ответ (Т/С=39,4%). Полученные результаты показывают, что терапевтическая активность может быть достигнута, когда МСТ комбинируют с субтерапевтической концентрацией СУ. Описанный эффект является следствием общего увеличения эффективности иммунных клеток у животных, леченых МСТ (фиг. 11 и табл. 19).
Таблица 19. Влияние МСТ на объем опухоли в комбинации с субтерапевтической концентрации циклофосфамида (СУ, 100 мг/кг) и таксотера (ТХ, 20 мг/кг)
Объем опухоли Лечение/контроль (%)
Контроль 58,8±60,1
СУ 27,5±15,9 46,8
ТХ 37,9±41,5 64,5
СУ + МСТ 23,2±13,1 39,4
ТХ + МСТ 38,8±31,0 66,1
МСТ 48,5±35,2 82,5
Пример 34. Противоопухолевая активность.
Оценивали противоопухолевую и химиопротективную эффективность по протоколу, описанному в примере 30 за исключением применения терапевтической концентрации цитотоксических лекарственных средств (циклофосфамид, 200 мг/кг; таксотер, 30 мг/кг).
Описанный эксперимент проводили, чтобы проверить, не является ли МСТ стимулирующим или защищающим раковые клетки агентом скорее, чем иммунные клетки. На фиг. 12 продемонстрировано химиопротективное действие и противоопухолевая эффективность МСТ в комбинации с терапевтической концентрацией СУ и ТХ на модели карциномы молочной железы ΌΑ-3. МСТ индуцирует небольшое уменьшение объема опухоли по сравнению с контролем. Когда МСТ применяли в комбинации с СУ или ТХ, не наблюдали никакого увеличения объема опухоли. Когда лечили СУ или СУ+МСТ, наблюдали значительное уменьшение объема опухоли. Кроме того, при лечении МСТ в сочетании с ТХ (р<0,0327) достигали многозначительного ответа в виде снижения объема опухоли по сравнению с применением одного ТХ, которое не оказалось значимым по сравнению с контрольными мышами (р=0,1211) (табл. 20). Полученные результаты указывают, что можно достигнуть терапевтической активности, когда МСТ комбинируют с незначительной терапевтической концентрацией ТХ. Названный эффект может быть следствием общего увеличения эффективности иммунных клеток у животных, леченных МСТ.
- 19 007322
Таблица 20. Влияние МСТ в комбинации с терапевтической концентрацией циклофосфамида (ΌΥ, 200 мг/кг) и таксотера (ТХ, 30 мг/кг), на объем опухоли
Лечение Т/С (%) Р/контроль Р/СУ Р/ТХ
Контроль
МСТ 0,4299
СУ 18,8 0,0337
СУ-МСТ 22,1 0,0022 0,2928 .
ТХ 64,7 0,1211
ТХ-МСТ 46,7 0,0327 0,5468
Все ссылки, цитируемые в данном документе, включены в описание цитированием в их полном объеме.
Модификации и изменения композиций и способов, описанных в изобретении, станут очевидными специалистам в данной области из предшествующего описания. Такие модификации и изменения входят в объем прилагаемой формулы изобретения.

Claims (10)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Применение соединения для производства лекарственного средства для лечения состояний, выбранных из миелосупрессии, ранений, трансплантации костного мозга и нейропении, причем указанное соединение имеет любую из формул I, II, 11а, III и 111а
    К1СОО-1 ΑΥ1 во-> I К.ГСО-ОК2 11 (В^-СО-ОУМ Па ις-ζ-ΞΟ,-οκ. 111 цц-г-зоз-оул Ша
    в которых Кд означает С7-11 алкил;
    о И
    А и В означают независимо водород или г
    К2 означает Н или С1-4 алкил,
    М означает одновалентный катион металла (п=1) или дикатион (п=2);
    Υ означает О или ΝΗ и
    Ζ означает О, ΝΗ, СН2О или связь.
  2. 2. Применение по п.1, в котором соединение является жирной кислотой со средней длиной цепи формулы II (К2=Н).
  3. 3. Применение по п.1, в котором соединение является солью формулы Па, и М является катионом Са, Мд, К и Να.
  4. 4. Применение по п.1, в котором соединение является каприловой кислотой, каприновой кислотой, триглицеридом каприловой и триглицеридом каприновой кислот.
  5. 5. Применение по п.1, в котором соединение является каприлатом натрия, капратом натрия, каприлатом кальция или капратом кальция.
  6. 6. Применение по любому из предшествующих пунктов, в котором состояние представляет собой вызванную лекарством нейропению или нейропению, появляющуюся в результате гематологического заболевания, нейропению, развивающуюся в результате инфекции, нейропению, развивающуюся в результате инфекции или в результате лучевой терапии.
  7. 7. Фармацевтическая композиция, включающая соединение как определено в любом из пп.1-5 и колониестимулирующего фактора человека, для одновременного или раздельного применения при лечении состояний как определено в пп.1-6.
  8. 8. Фармацевтическая композиция по п.7, в которой колониестимулирующий фактор представляет собой С-С8Р или СМ-С8Р.
  9. 9. Фармацевтическая композиция, включающая соединение как определено в любом из пп.1-5 и человеческий цитокин, для одновременного или раздельного применения при лечении состояний как определено в пп.1-6.
  10. 10. Фармацевтическая композиция по п.9, в которой цитокин представляет собой интерлейкин 2 или интерлейкин 15.
EA200301131A 2001-04-18 2002-04-18 Жирные кислоты со средней длиной цепи, глицериды и аналоги как факторы, способствующие выживанию и активации нейтрофилов EA007322B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US28445801P 2001-04-18 2001-04-18
PCT/CA2002/000535 WO2002083120A2 (en) 2001-04-18 2002-04-18 Medium-chain length fatty acids, glycerides and analogues as neutrophil survival and activation factors

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA200301131A1 EA200301131A1 (ru) 2004-04-29
EA007322B1 true EA007322B1 (ru) 2006-08-25

Family

ID=23090294

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA200301131A EA007322B1 (ru) 2001-04-18 2002-04-18 Жирные кислоты со средней длиной цепи, глицериды и аналоги как факторы, способствующие выживанию и активации нейтрофилов

Country Status (30)

Country Link
US (2) US7745488B2 (ru)
EP (2) EP1385498B1 (ru)
JP (3) JP5026655B2 (ru)
KR (1) KR20030096323A (ru)
CN (1) CN1633286A (ru)
AP (1) AP1740A (ru)
AU (2) AU2002308456B2 (ru)
BG (1) BG66418B1 (ru)
BR (1) BR0208984A (ru)
CA (2) CA2444463C (ru)
CY (1) CY1107081T1 (ru)
CZ (1) CZ305273B6 (ru)
DE (1) DE60223670T2 (ru)
DK (2) DK1385498T3 (ru)
EA (1) EA007322B1 (ru)
EE (1) EE200300510A (ru)
ES (2) ES2295397T3 (ru)
HU (1) HUP0303817A3 (ru)
IL (3) IL158322A0 (ru)
MX (1) MXPA03009436A (ru)
NO (1) NO335105B1 (ru)
NZ (2) NZ528690A (ru)
OA (1) OA12506A (ru)
PL (2) PL222876B1 (ru)
PT (2) PT1385498E (ru)
SI (1) SI1385498T1 (ru)
SK (1) SK12772003A3 (ru)
TN (1) TNSN03089A1 (ru)
WO (1) WO2002083120A2 (ru)
ZA (1) ZA200307778B (ru)

Families Citing this family (44)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SK12772003A3 (sk) 2001-04-18 2004-07-07 Prometic Biosciences Inc. Stredne dlhé mastné kyseliny, glyceridy a analógy ako faktory prežitia a aktivácie neutrofilov
JP5390070B2 (ja) * 2003-02-07 2014-01-15 プロメティック、バイオサイエンシーズ、インコーポレーテッド 赤血球形成刺激薬としての中鎖脂肪酸、グリセリド、および類似体
ES2284029T5 (es) 2003-07-25 2012-02-17 Prometic Biosciences Inc. Preparación de sales metálicas de ácidos grasos de cadena media.
US20070219131A1 (en) * 2004-04-15 2007-09-20 Ben-Sasson Shmuel A Compositions capable of facilitating penetration across a biological barrier
US8241670B2 (en) * 2004-04-15 2012-08-14 Chiasma Inc. Compositions capable of facilitating penetration across a biological barrier
ZA200701781B (en) * 2004-09-03 2008-11-26 Prometic Biosciences Inc Substituted purinyl derivatives with immunomodulator and chemoprotective activity and use alone or with medium-chain length fatty acids or glycerides
US8071580B2 (en) * 2004-10-01 2011-12-06 Prometic Biosciences Inc. Medium-chain length fatty alcohols as stimulators of hematopoiesis
ZA200702532B (en) * 2004-10-01 2008-11-26 Prometic Biosciences Inc Medium-chain length fatty alcohols as stimulators of hematopoiesis
ATE553114T1 (de) * 2005-02-28 2012-04-15 Alphabeta Ab Verbindungen zur verminderung der aggregation von amyloid-beta-peptid
WO2007136424A2 (en) * 2006-05-17 2007-11-29 Cognate Therapeutics, Inc. Isolation and purification of hematopoietic stem cells from post-liposuction lipoaspirates
US8324277B2 (en) 2007-08-01 2012-12-04 University of Pittsburgh—of the Commonwealth System of Higher Education Nitrated-fatty acids modulation of type II diabetes
NZ584981A (en) 2007-11-02 2012-05-25 Prometic Biosciences Inc Medium-chain length fatty acids and glycerides as nephroprotection agents
CA2708679C (en) * 2007-12-19 2016-11-15 Prometic Biosciences Inc. Medium-chain length fatty acids, salts and triglycerides in combination with gemcitabine for treatment of pancreatic cancer
CA2729053A1 (en) 2008-05-01 2009-11-05 Bruce A. Freeman Vinyl substituted fatty acids
US20140024713A1 (en) 2008-06-19 2014-01-23 University Of Utah Research Foundation Use of nitrated lipids for treatment of side effects of toxic medical therapies
CN102099024B (zh) * 2008-06-19 2015-11-25 犹他大学研究基金会 硝化脂质在毒性医疗疗法的副作用的治疗上的用途
SI2343982T1 (sl) 2008-09-17 2017-08-31 Chiasma Inc. Farmacevtski sestavki in metode povezane z dostavo
EP2165713B1 (en) * 2008-09-19 2012-11-14 Nestec S.A. Whey and thymus function
JP2013500966A (ja) 2009-07-31 2013-01-10 ユニバーシティー オブ ピッツバーグ − オブ ザ コモンウェルス システム オブ ハイヤー エデュケーション 抗炎症剤としての脂肪酸
EP2483233A4 (en) 2009-10-02 2013-08-14 Complexa Inc HETEROATOMA CONTAINING SUBSTITUTED FATTY ACIDS
EP2394636B1 (en) * 2010-05-28 2014-03-19 Novagali Pharma S.A. Method for treating retinal conditions using an intraocular tamponade
EP2744491B1 (en) 2011-08-19 2020-07-29 The University of Utah Research Foundation Combination therapy with nitrated lipids and inhibitors of the renin-angiotensin-aldosterone system
TWI572352B (zh) * 2012-03-01 2017-03-01 波麥堤克藥學Ｓｍｔ有限公司 用於製備具中鏈長度之脂肪酸的三酸甘油酯之方法
HUE053247T2 (hu) 2012-05-09 2021-06-28 Cantex Pharmaceuticals Inc Mieloszuppresszió kezelése
US20160199338A1 (en) 2013-08-19 2016-07-14 Enzychem Lifesciences Corporation Compositions containing monoacetyldiacylglycerol compound as an active ingredient for preventing or treating rheumatoid arthritis
WO2015176012A1 (en) 2014-05-15 2015-11-19 Enzychem Lifesciences Corporation Methods for treating leukopenia and thrombocytopenia
AU2016215350B2 (en) 2015-02-03 2021-11-25 Amryt Endo, Inc. Method of treating diseases
US10052346B2 (en) 2015-02-17 2018-08-21 Cantex Pharmaceuticals, Inc. Treatment of myelodysplastic syndromes with 2-O and,or 3-O desulfated heparinoids
DK3303339T3 (da) 2015-07-07 2021-04-12 H Lundbeck As Pde9-inhibitorer med imidazotriazinonskelet og imidazopyrazinonskelet til behandling af perifere sygdomme
EP3355879A4 (en) 2015-10-02 2019-05-22 Complexa, Inc. PREVENTION, TREATMENT AND INVERSION OF DISEASE USING THERAPEUTICALLY EFFECTIVE AMOUNTS OF ACTIVATED FATTY ACIDS
US9808438B2 (en) * 2015-11-09 2017-11-07 Enzychem Lifesciences Corporation Method for treating mucositis
US10588974B2 (en) 2016-04-22 2020-03-17 Receptor Holdings, Inc. Fast-acting plant-based medicinal compounds and nutritional supplements
WO2017211274A1 (en) 2016-06-08 2017-12-14 Dong Yuhong Lipids with odd number of carbon atoms and their use as pharmaceutical composition or nutritional supplement
EA201892396A1 (ru) 2016-12-02 2019-04-30 Ресептор Лайф Сайенсиз, Инк. Быстродействующие растительные лекарственные соединения и биологически активные добавки
CN107382710B (zh) * 2017-08-19 2020-11-06 中国铁道科学研究院集团有限公司铁道建筑研究所 一种接枝抗氧剂分子的多元醇
EA202090566A1 (ru) * 2017-09-12 2020-07-14 Санреджен Хэлскэр Аг Липиды, содержащие нечетное количество атомов углерода, и их применение в качестве фармацевтической композиции или питательной добавки
JP2020536873A (ja) * 2017-10-05 2020-12-17 レセプター・ホールディングス・インコーポレイテッド 迅速発現作用延長型の植物系及び合成カンナビノイド製剤
EP3672608A4 (en) * 2017-10-05 2021-09-01 Receptor Holdings, Inc. HERBAL COMPOSITION WITH IMPROVED BIOAVAILABILITY
KR102054401B1 (ko) * 2018-03-26 2019-12-10 주식회사 엔지켐생명과학 1,2-디아실글리세롤 화합물, 그 제조방법 및 이를 유효성분으로 함유하는 면역조절제
JP2021526134A (ja) 2018-05-25 2021-09-30 イマラ インク． ６−［（３Ｓ，４Ｓ）−４−メチル−ｌ−（ピリミジン−２−イルメチル）ピロリジン−３−イル］−３−テトラヒドロピラン−４−イル−７Ｈ−イミダゾ［ｌ，５−Ａ］ピラジン−８−オンの一水和物および結晶形態
KR20220086574A (ko) * 2019-10-31 2022-06-23 니폰 제온 가부시키가이샤 전기 화학 소자용 기능층 및 그 제조 방법, 전기 화학 소자용 기능층 형성 세퍼레이터 및 그 제조 방법, 그리고 전기 화학 소자 및 그 제조 방법
US11141457B1 (en) 2020-12-28 2021-10-12 Amryt Endo, Inc. Oral octreotide therapy and contraceptive methods
WO2023067501A1 (en) * 2021-10-18 2023-04-27 Enzychem Lifesciences Corporation Compositions and methods for treating mucositis
WO2023205196A1 (en) * 2022-04-21 2023-10-26 Merck Sharp & Dohme Llc Process for preparing agglomerated crystalline medium-chain fatty acid sodium salts

Family Cites Families (50)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2003A (en) * 1841-03-12 Improvement in horizontal windivhlls
US2002A (en) * 1841-03-12 Tor and planter for plowing
US2006A (en) * 1841-03-16 Clamp for crimping leather
US2008A (en) * 1841-03-18 Gas-lamp eok conducting gas pkom ah elevated buhner to one below it
US2004A (en) * 1841-03-12 Improvement in the manner of constructing and propelling steam-vessels
US4528197A (en) * 1983-01-26 1985-07-09 Kabivitrum Ab Controlled triglyceride nutrition for hypercatabolic mammals
US4703062A (en) * 1984-01-16 1987-10-27 Baxter Travenol Laboratories, Inc. Parenteral nutrition with medium and long chain triglycerides
US4871768A (en) 1984-07-12 1989-10-03 New England Deaconess Hospital Corporation Dietary supplement utilizing ω-3/medium chain trigylceride mixtures
US4816440A (en) * 1985-09-26 1989-03-28 Cetus Corporation Stable formulation of biologically active proteins for parenteral injection
US6054441A (en) * 1987-10-28 2000-04-25 Pro-Neuron, Inc. Oxypurine nucleosides and their congeners, and acyl derivatives thereof, for improvement of hematopoiesis
US5011852A (en) * 1988-07-25 1991-04-30 Applied Analytical Industries, Inc. Liquid oral pharmaceutical compositions of non-steroidal anti-inflammatory drugs
JPH02134326A (ja) * 1988-11-14 1990-05-23 Snow Brand Milk Prod Co Ltd 高度侵襲用経腸栄養剤
JP3249147B2 (ja) * 1990-06-01 2002-01-21 キリン−アムジエン・インコーポレーテツド 生理活性蛋白含有経口製剤
EP0526630A4 (en) * 1991-02-22 1993-08-11 Amgen Inc. Use of gm-csf and g-csf to promote accelerated wound healing
JP3132085B2 (ja) * 1991-09-06 2001-02-05 ウェルファイド株式会社 脂肪乳剤
JPH05163160A (ja) * 1991-12-13 1993-06-29 Snow Brand Milk Prod Co Ltd 免疫低下に伴う感染症の予防及び治療用栄養剤
US5214035A (en) * 1992-04-16 1993-05-25 Hoechst-Roussel Agri-Vet Company Thixotropic formulations
US5308832A (en) * 1992-07-27 1994-05-03 Abbott Laboratories Nutritional product for persons having a neurological injury
US5318781A (en) * 1993-04-06 1994-06-07 Hoffmann-La Roche Inc. Absorption enhancement of antibiotics
US20010003739A1 (en) 1993-06-24 2001-06-14 Astrazeneca Ab Systemic administration of a therapeutic preparation
US5631219A (en) * 1994-03-08 1997-05-20 Somatogen, Inc. Method of stimulating hematopoiesis with hemoglobin
AU7082694A (en) 1994-05-10 1995-11-29 Kitasato Institute, The Hematopoietic stem cell proliferation accelerator
US5470861A (en) * 1994-08-04 1995-11-28 Hoffmann-La Roche Inc. Method of promoting hair growth
US5549905A (en) * 1994-10-18 1996-08-27 Clintec Nutrition Co. Enternal composition for pediatric patients
IT1275802B1 (it) 1994-11-03 1997-10-17 Hoffmann La Roche Composizione di interferone
GB9516268D0 (en) * 1995-08-08 1995-10-11 Danbiosyst Uk Compositiion for enhanced uptake of polar drugs from the colon
US5733884A (en) * 1995-11-07 1998-03-31 Nestec Ltd. Enteral formulation designed for optimized wound healing
DE19648566A1 (de) * 1995-11-28 1997-06-05 Braun Melsungen Ag Hydrolyseoptimierte Lipidemulsionen und ihre Verwendung
AUPN933396A0 (en) * 1996-04-17 1996-05-09 Pfizer Pty Limited Non-aqueuos oral-drench compositions containing avermectin compounds
US5851534A (en) * 1996-05-03 1998-12-22 Dynagen, Inc. Methods for prevention and/or treatment of neutropenia
JPH10265380A (ja) 1997-03-17 1998-10-06 Bristol Myers Squibb Co 抗ガン剤
US6017531A (en) * 1997-06-02 2000-01-25 W. R. Grace & Co. Hydrophilic composition containing protease produced by Vibrio
AU9221698A (en) 1997-09-04 1999-03-22 Biozone Laboratories, Inc. Oral liposomal delivery system
WO1999025312A1 (en) * 1997-11-19 1999-05-27 Hercules Incorporated Fluidized polymer suspensions of cationic polysaccharides in emollients and use thereof in preparing personal care compositions
DE69833333T2 (de) * 1997-11-20 2006-10-19 Jhon, Gil Ja Pharmazeutische zusammensetzung enthaltend geweihextrakte von cervus nippon mit wachstumsstimulierender aktivität auf hematopoietische stammzellen und megakaryozyten
ATE246506T1 (de) 1998-03-11 2003-08-15 Grelan Pharmaceutical Co Darmlösliche sprudelnde zusammensetzungen
US6267985B1 (en) * 1999-06-30 2001-07-31 Lipocine Inc. Clear oil-containing pharmaceutical compositions
WO2001022937A1 (en) * 1999-09-27 2001-04-05 Sonus Pharmaceuticals, Inc. Compositions of tocol-soluble therapeutics
US6835750B1 (en) * 2000-05-01 2004-12-28 Accera, Inc. Use of medium chain triglycerides for the treatment and prevention of alzheimer's disease and other diseases resulting from reduced neuronal metabolism II
EP1289530B1 (en) * 2000-06-14 2006-10-04 PORTER, William Leslie Lipids for modulating immune response
KR20030025933A (ko) * 2000-06-20 2003-03-29 엔.브이. 세거스 뉴트리션 사이언시스 항균제로서의 중간 사슬 길이의 지방산
US6967028B2 (en) * 2000-07-31 2005-11-22 Mainelab Prolonged release microspheres for injectable administration
IL142535A0 (en) 2001-04-11 2002-03-10 Yeda Res & Dev Pharmaceutical compositions for the treatment of inflammation
SK12772003A3 (sk) 2001-04-18 2004-07-07 Prometic Biosciences Inc. Stredne dlhé mastné kyseliny, glyceridy a analógy ako faktory prežitia a aktivácie neutrofilov
US20040052836A1 (en) 2002-09-13 2004-03-18 Li Luk Chiu Pharmaceutical compositions containing at least one stable liposphere having an improved shelf life
JP5390070B2 (ja) 2003-02-07 2014-01-15 プロメティック、バイオサイエンシーズ、インコーポレーテッド 赤血球形成刺激薬としての中鎖脂肪酸、グリセリド、および類似体
US6725510B1 (en) * 2003-04-25 2004-04-27 Almetta Clyburn Inclining coffin
ES2284029T5 (es) 2003-07-25 2012-02-17 Prometic Biosciences Inc. Preparación de sales metálicas de ácidos grasos de cadena media.
ZA200701781B (en) * 2004-09-03 2008-11-26 Prometic Biosciences Inc Substituted purinyl derivatives with immunomodulator and chemoprotective activity and use alone or with medium-chain length fatty acids or glycerides
US8071580B2 (en) 2004-10-01 2011-12-06 Prometic Biosciences Inc. Medium-chain length fatty alcohols as stimulators of hematopoiesis

Also Published As

Publication number Publication date
US20100279959A1 (en) 2010-11-04
WO2002083120A3 (en) 2003-05-22
NZ528690A (en) 2005-08-26
PL402948A1 (pl) 2013-05-13
CN1633286A (zh) 2005-06-29
CA2444463A1 (en) 2002-10-24
CA2444463C (en) 2012-03-20
IL195200A0 (en) 2009-08-03
NO335105B1 (no) 2014-09-15
SI1385498T1 (sl) 2008-04-30
DE60223670T2 (de) 2008-03-06
NO20034644L (no) 2003-11-25
WO2002083120A2 (en) 2002-10-24
BR0208984A (pt) 2004-06-29
EP1385498B1 (en) 2007-11-21
DK1900364T3 (da) 2014-01-13
JP2004525957A (ja) 2004-08-26
NO20034644D0 (no) 2003-10-17
AP2003002888A0 (en) 2003-12-31
JP2014231519A (ja) 2014-12-11
EP1900364A2 (en) 2008-03-19
EP1385498A2 (en) 2004-02-04
ZA200307778B (en) 2004-04-21
JP5026655B2 (ja) 2012-09-12
US7745488B2 (en) 2010-06-29
OA12506A (en) 2006-05-29
BG108280A (bg) 2004-09-30
KR20030096323A (ko) 2003-12-24
CA2763637A1 (en) 2002-10-24
AU2006201163B2 (en) 2006-10-05
DK1385498T3 (da) 2008-03-25
AU2002308456B2 (en) 2005-12-22
PT1385498E (pt) 2007-12-14
ES2295397T3 (es) 2008-04-16
AU2006201163A1 (en) 2006-04-13
PL366435A1 (en) 2005-01-24
JP2010053135A (ja) 2010-03-11
PT1900364E (pt) 2013-12-19
IL195200A (en) 2011-11-30
SK12772003A3 (sk) 2004-07-07
EP1900364B1 (en) 2013-09-25
CZ20032685A3 (cs) 2004-06-16
CA2763637C (en) 2016-08-23
US20040147599A1 (en) 2004-07-29
JP5657879B2 (ja) 2015-01-21
CZ305273B6 (cs) 2015-07-15
PL223348B1 (pl) 2016-10-31
EE200300510A (et) 2004-02-16
AP1740A (en) 2007-05-10
HUP0303817A3 (en) 2009-10-28
TNSN03089A1 (en) 2005-12-23
EA200301131A1 (ru) 2004-04-29
IL158322A (en) 2011-09-27
PL222876B1 (pl) 2016-09-30
BG66418B1 (bg) 2014-03-31
EP1900364A3 (en) 2009-09-23
IL158322A0 (en) 2004-05-12
MXPA03009436A (es) 2004-12-06
US8487001B2 (en) 2013-07-16
ES2439738T3 (es) 2014-01-24
CY1107081T1 (el) 2012-10-24
DE60223670D1 (de) 2008-01-03
HUP0303817A2 (hu) 2004-03-01
NZ541140A (en) 2006-11-30
JP6420089B2 (ja) 2018-11-07

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA007322B1 (ru) Жирные кислоты со средней длиной цепи, глицериды и аналоги как факторы, способствующие выживанию и активации нейтрофилов
AU2002308456A1 (en) Medium-chain length fatty acids, glycerides and analogues as neutrophil survival and activation factors
AU2004210193B2 (en) Medium-chain length fatty acids, glycerides and analogues as stimulators of erythropoiesis

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM

PC4A Registration of transfer of a eurasian patent by assignment
TC4A Change in name of a patent proprietor in a eurasian patent