EA006600B1 - Фармацевтические композиции фибринолитического агента - Google Patents
Фармацевтические композиции фибринолитического агента Download PDFInfo
- Publication number
- EA006600B1 EA006600B1 EA200400182A EA200400182A EA006600B1 EA 006600 B1 EA006600 B1 EA 006600B1 EA 200400182 A EA200400182 A EA 200400182A EA 200400182 A EA200400182 A EA 200400182A EA 006600 B1 EA006600 B1 EA 006600B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- zinc
- pharmaceutical composition
- composition according
- metalloproteinase
- fibrinolytic agent
- Prior art date
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
- A61K38/46—Hydrolases (3)
- A61K38/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/08—Solutions
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
- A61K38/46—Hydrolases (3)
- A61K38/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- A61K38/4886—Metalloendopeptidases (3.4.24), e.g. collagenase
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/02—Inorganic compounds
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
- A61K47/12—Carboxylic acids; Salts or anhydrides thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
- A61K9/19—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Immunology (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Hematology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Описаны замороженная и лиофилизированная композиции металлопротеиназного фибринолитического агента (фибролазы или NAT), способ приготовления лиофилизированной композиции и набор и способ восстановления лиофилизированной композиции.
Description
Область, к которой относится изобретение
Данное изобретение относится к новым фармацевтическим композициям фибринолитического агента. Более конкретно, данное изобретение относится к замороженным жидким или лиофилизированным композициям фибролазы и, отдельно, тромболитика нового действия (ΝΑΤ), а также к способам их получения и применения.
Предпосылки создания изобретения
В большинстве случаев полипептиды не очень устойчивы в водной среде и претерпевают химическое и физическое расщепление, приводящее к потере биологической активности при обработке и хранении. Другой трудностью, которая, в частности, встречается при работе в водном растворе, является гидролиз, такой как деамидирование и расщепление пептидной связи. Эти эффекты представляют собой серьёзную проблему для терапевтически активных полипептидов, которые предполагается ввести человеку в определенном интервале доз, исходя из биологической активности.
Для уменьшения расщепления полипептидов водные фармацевтические композиции обычно хранят в охлаждённом или замороженном состоянии до момента применения. Или же для стабилизации полипептидов при длительном хранении используют лиофилизацию, особенно если полипептид сравнительно неустойчив в жидких композициях. Цикл лиофилизации обычно состоит из трёх стадий: замораживание, первичная сушка и вторичная сушка; ^1Шаш8 апй РоШ, 1оигиа1 о£ Рагсп1сга1 §с1еисе апй Тсе1шо1оду. Уо1ите 38, ШтЬег 2, радек 48-59 91984). На стадии замораживания раствор охлаждают до равномерного замерзания. На этой стадии основная масса воды образует лёд. Лёд сублимируется на стадии первичной сушки, которую проводят при давлении ниже давления паров льда, применяя вакуум. Наконец, сорбированную или связанную воду удаляют на стадии вторичной сушки при пониженном давлении и повышенной температуре. В этом процессе получают материал, известный как лиофилизированный осадок (брикет). После этого брикет можно снова восстановить перед употреблением.
Стандартная процедура восстановления лиофилизированного материала представляет собой добавление объёма чистой воды (обычно эквивалентного объёму, удаляемому лиофилизацией), хотя иногда при получении фармацевтических препаратов для парентерального применения используют разбавленные растворы антибактериальных агентов; С1еи, Эгад Оеуе1ортеи1 апй 1ийик1па1 Рйагтасу, Уо1ите 18, ШтЬег 11 апй 12, радек 1311-1354(1992).
Считается, что лиофилизация является лучшим методом для удаления избытка воды из растворов полипептидов. Процесс лиофилизации может дать в результате продукты, которые устойчивы и способны храниться долго. Лиофилизированные продукты могут храниться при комнатной температуре и, следовательно, с ними легче работать и их можно распространять на более широком (географически) рынке, таком, где рефрижерация может быть недоступной.
Отмечено, что в некоторых случаях эксципиенты ведут себя как стабилизаторы лиофилизированных продуктов; СагреШег е1 а1., Пеуе1ортеи1к ίη Вю1одюа1 81аийаг11х.а11ои, Уо1ите 74, радек 225-239 (1991). Например, известные эксципиенты включают полиолы (включая маннит, сорбит и глицерин); сахара (включая глюкозу и сахарозу); и аминокислоты (включая аланин, глицин и глутаминовую кислоту).
Кроме того, полиолы и сахара также часто используются для защиты от повреждения при замораживании и сушке и для повышения стабильности при хранении в высушенном состоянии. В большинстве случаев сахара, в частности, дисахариды, эффективны как в процессе лиофилизации, так и при хранении. Сообщалось, что другие классы веществ, включая моно- и дисахариды и полимеры, такие как РУР (ПВП), являются стабилизаторами лиофилизированных продуктов.
Сущность изобретения
Данное изобретение относится к устойчивым фармацевтическим композициям фибролазы и тромболитика нового действия (ΝΑΤ), некоторые из них являются жидкими композициями, пригодными для хранения в замороженном состоянии, а другие пригодны для лиофилизации.
Благодаря фибринолитическим свойствам фибролазы и ΝΑΤ композиции по данному изобретению применимы для разрушения сгустков крови ίη у1уо и могут применяться в терапии для этой цели.
Для целей данного изобретения термин ΝΑΤ относится к металлопротеиназе с фибринолитической активностью, которая характеризуется последовательностью 8ЕО ΙΌ N0:1. ΝΑΤ-полипептид кодируется кДНК с последовательностью 8Е0 ΙΌ N0:2, хотя любая ДНК с вариантом последовательности, кодирующей тот же полипептид, может применяться для экспрессии и получения в соответствии со способами, представленными ниже в данном описании.
Фибролаза представляет собой известную металлопротеазу, которая описана в научной и патентной литературе; см. К.аийо1рй е1 а1., РгоЮш Баеисе, СатЬпйде Ишуегкйу Ргекк (1992), радек 590-600 и Европейская патентная заявка N 0323722 (Уа1е1гхие1а е1 а1.), опубликованная 12 июля 1989 г. Обычно фибролаза, применяемая в композициях по данному изобретению, имеет последовательность 8Е0 ΙΌ N0:3, кодируемую кДНК с последовательностью 8Е0 ΙΌ N0:4 (или её вариантом, кодирующим ту же самую аминокислотную последовательность).
Фибролазу и NΑΤ следует отличать от других терапевтических агентов для обработки сгустков крови ш у1уо, таких как урокиназа, стрептокиназа и 1РА, представляющих собой активаторы плазмино
- 1 006600 гена. В отличие от этих (других) агентов фибролаза и ΝΑΤ действуют непосредственно на сгусток, разрушая как фибрин, так и фиброген.
Фармацевтические композиции по данному изобретению содержат, помимо терапевтически эффективного количества фибролазы или ΝΑΤ, цинковый стабилизатор и, при необходимости, наполнитель с другими эксципиентами или без них в фармацевтически приемлемом буфере, который, в комбинации, дает стабильный замороженный или лиофилизированный продукт, который может храниться длительное время.
В одном из аспектов данное изобретение включает замерзающую жидкую медицинскую композицию, содержащую фибролазу или ΝΑΤ, водорастворимую цинковую соль, лимоннокислый буфер, при необходимости, дополнительный стабилизатор, выбранный из группы, состоящей из воды, растворимых солей кальция и, при необходимости, наполнитель (например, маннит). Для увеличения стабильности при замораживании-плавлении можно также добавлять поверхностно-активное вещество, такое как Т\уссп 80 (ΒΑ8Ε, битее, ΙΗίηοίδ). Для стабилизации значений рН равным или выше 7,4 можно добавлять Тгй-буфер (81дша, 8!. Ьош8, Мщкоип) или другой буфер с буферной ёмкостью выше рН 7,0.
В другом аспекте данного изобретения фармацевтическая композиция может представлять собой лиофилизируемую или лиофилизированную фармацевтическую композицию, содержащую фибролазу или ΝΑΤ, цинковый стабилизатор (например, растворимую в воде соль цинка) и лимоннокислый буфер, с другими эксципиентами (например, с наполнителем, таким как маннит, глицин и т.п.) или без них. Лиофилизированная композиция может также содержать дисахарид, такой как сахароза илитрегалоза, в качестве лиопротетанта. Для защиты от металлопротеиназы (фибролазы или ΝΑΤ) от стрессов при лиофилизации можно добавлять поверхностно-активное вещество, такое как Тетееп 80. В идеальном случае значение рН сохраняется при 8,8 ± 0,5 за счёт применения подходящего буфера с рКа в этом интервале (например, Тп5).
Изобретение также включает способ получения лиофилизированной композиции, содержащей стадии: (ί) смешение фибролазы или ΝΑΤ с буфером и водорастворимой солью цинка, а также с любыми требуемыми необязательными ингредиентами, и (и) лиофилизацию этой смеси.
Кроме того, изобретение включает набор для получения водной фармацевтической композиции, содержащий первый контейнер с вышеупомянутой лиофилизированной композицией и второй контейнер с физиологически приемлемым растворителем для этой композиции.
Ещё один аспект этого изобретения включает способ, содержащий стадии восстановления лиофилизированной композиции и введения восстановленной композиции больному, нуждающемуся в разрушении сгустков крови (тромбов).
Подробное описание изобретения
Для экспрессии последовательности, кодирующей полипептид фибролазы или ΝΑΤ, стандартными методами рекомбинантной экспрессии, хорошо известными специалистам в данной области техники, и получения посредством этого фибринолитически активного полипептида для композиций можно использовать ряд систем вектора-хозяина. Такие системы включают, но без ограничения, эукариотные клеточные системы, такие как млекопитающих, инфицированные вирусом (например, вирусом коровьей оспы, аденовирусом и т.д.); клеточные системы насекомых, инфицированные вирусом (например, бакуловирусом); микроорганизмы, такие как дрожжи, содержащие дрожжевые векторы; или прокариотные клеточные системы, такие как бактерии (например, Е. сой), трансформированные при участии бактериофагальной ДНК, плазмидной ДНК или космидной ДНК. Элементы экспрессии этих векторов варьируются по силе и специфичности. В зависимости от используемой системы вектора-хозяина можно использовать любой из ряда пригодных элементов транскрипции и трансляции.
Предпочтительно, для рекомбинантной экспрессии используют дрожжевую систему экспрессии (например, йсЫа райопк) из-за её более высокой эффективности. Подробное описание такой системы можно найти в Патентах США №№ 4855231 (81гошап е! а1.), 4812405 (Ьа1г е! а1.) 4818700 (Сгедд е! а1.) 4855242 (Сгедд) и 4837148 (Сгедд). Экспрессия фибролазы в такой системе, как правило, включает ДНК с последовательностью 8ЕО ΙΌ N0:5, которая кодирует помимо зрелого полипептида (нуклеотиды 7841392), препро последовательность (нуклеотиды 1-783). Экспрессия ΝΑΤ в такой системе обычно включает ДНК с последовательностью 8ЕО ΙΌ Ν0:6, которая кодирует препро последовательность (нуклеотиды 1-783) в дополнение к зрелому полипептиду (нуклеотиды 784-1386).
Когда полипептид (фибролаза или ΝΑΤ) получен, очищен и проанализирован на активность (известными специалистам в данной области техники методами), из него можно приготовить фармацевтические композиции по данному изобретению.
В данные композиции (либо замороженные, либо лиофилизированные) добавляют стабилизатор (который также можно называть стеклообразующая добавка) для предупреждения или уменьшения осаждения и химического расщепления фибролазы или ΝΑΤ при любых обстоятельствах. Мутный или густой при комнатной температуре раствор указывает на осаждение полипептида. Термин стабилизатор означает, что эксципиент способен предотвращать агрегацию или другой вид физической деградации, а также химическое разложение (например, аутолиз, деамидирование, окисление и т.д.) фибролазы или ΝΑΤ в водной среде.
- 2 006600
Было найдено, что введение цинкового стабилизатора, и более конкретно, водорастворимой соли цинка, повышает стабильность металлопротеиназы (фибролазы или ΝΑΤ) в композиции каждого вида, по сравнению с препаратами, в которых для предупреждения агрегации и/или разложения полипептида используют неорганические или другие органические соединения. Конкретно, цинк при концентрации выше 0,01 миллимоля (мМ) стабилизирует металлопротеиназу при условии, что цинк при концентрации выше 1 мМ значительно ограничивает растворимость фибролазы или ΝΑΤ. Следовательно, рекомендуется интервал около 0,01-1 мМ. Примерами пригодных солей цинка являются ацетат цинка, сульфат цинка и хлорид цинка.
Замороженные жидкие композиции по данному изобретению, в частности, могут при необходимости (но необязательно) также включать водорастворимую соль кальция в качестве дополнительного стабилизатора. Примерами являются ацетат кальция, сульфат кальция или хлорид кальция, которые предпочтительно присутствуют в концентрации около 0,001-0,02 мМ и более предпочтительно в концентрации около 0,01-0,002 мМ.
Если требуется, помимо вышеуказанных можно использовать другие стабилизаторы, обычно применяемые в фармацевтических композициях, такие как сахароза, трегалоза или глицин. Обычно такие стабилизаторы добавляют в минорных количествах, в интервале, например, около 0,1-0,5 (вес./об.)%. Поверхностно-активные стабилизаторы, такие как Тетееп 20 или Тетееп 80 (ΒΑ8Ε) можно также добавлять в обычных количествах.
Если требуется, замороженные жидкие или лиофилизированные композиции могут также включать наполнитель/регулятор осмолярности. Предпочтительно, вводят маннит с концентрацией около 2-8% (вес/об.)%, и обычно с концентрацией около 5 (вес/об.)%.
Найдено, что выбор фармацевтически приемлемого буфера и рН также влияют на стабильность данных композиций. Фибролаза или ΝΑΤ наиболее устойчивы при значениях рН выше нейтрального (7,0). Заметное осаждение обеих металлопротеиназ происходит при рН ниже 7,0, когда замороженная композиция размораживается или лиофилизированная композиция восстанавливается. Буферная система композиций выбирается так, чтобы она была физиологически совместимой и сохраняла нужное значение рН в восстановленном растворе, а также в растворе перед лиофилизацией. Предпочтительно рН буферная ёмкость буферных растворов составляет около рН 7,0-8,5.
Конкретно, буферы лимонной кислоты (например, лимонная кислота или соль лимонной кислоты), предпочтительно, вводятся в концентрации около 20-110 мМ и наиболее предпочтительно около 100 мМ в композиции замороженной и около 20 мМ в лиофилизированной композиции. Соли лимонной кислоты применяют как буферизаторы и стабилизаторы в композициях по данному изобретению. Используют ли кислоту как таковую, либо её соль - буфер выбирают для доведения рН композиции до значения в вышеуказанном заданном интервале (в случае лиофилизированной композиции - после восстановления). Можно добавлять в эффективных количествах дополнительные буферизаторы, такие как Тгб. для сохранения адекватной буферной ёмкости выше рН 7,0.
Предпочтительная жидкая композиция, подлежащая замораживанию, содержит, помимо солюбилизированной фибролазы или ΝΑΤ, ацетат цинка с концентрацией около 0,08-0,12 мМ, ацетат кальция с концентрацией около 0,008-0,012 мМ и лимонную кислоту (или цитрат натрия) с концентрацией около 95-105 мМ при рН около 7,4. Другая предпочтительная жидкая композиция содержит фибролазу или ΝΑΤ, ацетат цинка с концентрацией около 0,08-0,12 мМ, лимонную кислоту (или цитрат натрия) с концентрацией около 18-22 мМ, Тпз с концентрацией около 0,02-0,06 мМ, маннит с концентрацией около 36 (вес./об.)% мМ и Т\гееп 80 с концентрацией около 0,008-0,012 (вес./об.)% мМ при рН около 8,0.
Предпочтительная лиофилизируемая композиция содержит, помимо фибролазы или ΝΑΤ, сульфат цинка с концентрацией около 0,08-0,12 мМ, лимонную (или цитрат натрия) с концентрацией около 18-22 мМ, Тпз с концентрацией около 3-6 мМ, маннит с концентрацией около 3-6 (вес./об.)% мМ и Т\гееп 80 с концентрацией около 0,008-0,012 (вес./об.)% мМ при рН около 8,0.
Во всех композициях по данному изобретению фибролаза или NΑΤ присутствуют с концентрацией около 0,1-50 мг/мл предпочтительно, с концентрацией около 5-40 мг/м, более предпочтительно, и с концентрацией около 10-15 мг/мл - наиболее предпочтительно.
Относительные пропорции эксципиентов в этих композициях зависят от нескольких факторов. Например, количество металлопротеиназы и наполнителя (например, маннита) влияет на количество цинка (или кальция, если он присутствует), необходимого для стабилизации композиции. Количество стабилизатора, используемого в композициях, зависит от количества, необходимого для сохранения структурной целостности фибролазы или NΑΤ в ходе лиофилизации или другой обработки или при хранении.
Также в композицию могут быть включены другие эксципиенты при условии, что они физиологически совместимы и ни в коей мере не вредны для фибролазы или ΝΑΈ Например, композиция может содержать минорные количества добавок, таких как консерванты, тонизирующие вещества, антиоксиданты или другие полимеры (например, корректоры вязкости или наполнители). Специалисты в данной области техники могут легко определить подходящие, фармацевтически приемлемые реагенты на основе знаний и опыта в отношении других фармацевтических композиций. См., например, Кетшдбп'з РйагшасеиОса! 8с1епсез (последнее издание), Маск РиЬИзЫпд Сотрапу, Еаз1оп, ΡΑ.
- 3 006600
Предполагается, что композиции устойчивы, по меньшей мере, в течение двух лет при -30°С для замороженной композиции, и в течение двух лет при 2-8°С для лиофилизированной композиции. Такая продолжительная устойчивость полезна для длительного хранения фармацевтического продукта и для перевозок на большие расстояния.
В другом аспекте данное изобретение также охватывает способ получения лиофилизированной композиции, включающий стадии:
(a) доведение рН смеси, содержащей ингредиенты без фибролазы или ΝΑΤ, до рН 7,6-8,2, (b) буферный перенос фибролазо- или ΝΑΤ-содержащего раствора в раствор композиции, полученный на стадии (а), а затем добавление эффективного количества поверхностно-активного вещества, и (c) лиофилизация смеси, полученной на стадии (Ь).
Фибролаза или ΝΑΤ и эффективные количества эксципиентов смешивают в условиях, эффективных для уменьшения агрегации высушенного полипептида фибролазы или ΝΑΤ в процессе восстановления средой для восстановления, например, растворителем, совместимым со способом введения и не препятствующим действию металлопротеиназы, таким как стерильная вода, физиологический раствор, раствор глюкозы или другие водные растворители (например, спирты, такие как этиловый, н-пропиловый или изопропиловый, бутиловый или их смеси) и, при необходимости, другие компоненты, такие как антибактериальные агенты.
Эксципиенты могут смешиваться с металлопротеиназой в определённое время перед лиофилизацией. Время смешения эксципиентов и металлопротеиназы должно быть достаточным для приготовления соответствующей смеси; предпочтительно смешение следует проводить в течение примерно 1-30 мин.
Затем приготовленный состав с металлопротеиназой можно лиофилизировать, хранить и восстанавливать с применением стандартных методов. Конкретные условия, при которых фибролаза или ΝΑΤ лиофилизируются и восстанавливаются, не особенно важны, при условии, что выбранные условия не разрушают металлопротеиназу и не вредны для стабилизатора. Предпочтительный лиофилизированный цикл включает замораживание композиции при -40°С, отжиг замороженного образца при -12°С и проведение первичной сушки при от -30 до -35°С в течение 20-50 ч, а вторичной сушки при 20°С в течение 20-40 ч. В большинстве случаев восстановленную композицию используют вскоре после восстановления (реконструкции).
Как ΝΑΤ, так и фибролазу лучше всего доставлять локально к месту тромба (сгустка) для наиболее эффективного лечения. Подобно фибролазе ΝΑΤ ковалентно связывается а2-макроглобулином в общем потоке. В комплексе с а2-макроглобулином ни фибролаза, ни ΝΑΤ не могут иметь доступ к целевому субстрату (т.е. фибрину или фибриногену) и в значительной степени неэффективны, если и до тех пор, пока не будет превышен максимальный природный уровень а2-макроглобулина. Следовательно, предпочтительно, чтобы композиции по данному изобретению вводились непосредственно в сгусток крови с помощью внутриартериальной или внутривенной катетеризации.
Описание примеров осуществления изобретения
Следующие примеры дополнительно иллюстрируют данное изобретение.
Рекомбинантный ΝΑΤ (8ЕО ΙΌ ΝΟ:1), используемый в примерах 1-3, получают экспрессией в Р. раДогк. Подробности, касающиеся подходящей системы экспрессии и способа, можно найти в патентах 81тотаи с1 а1., Ьа1т с1 а1., Сгедд с1 а1. и Сгедд, ссылки на которые даны выше. Все химические реактивы имеют степень чистоты либо чда, либо И8Р.
Пример 1. Получение замороженной жидкой композиции
Водный раствор, содержащий 100 мМ лимонной кислоты, 0,01 мМ ацетата кальция и 0,1 мМ сульфата цинка, готовят, смешивая ингредиенты при рН, доведенном до 7,4. ΝΑΤ-содержащий раствор подвергают буферному переносу в раствор диализом (или же можно применять ультрафильтрацию). Образующийся ΝΑΤраствор концентрируют до 10 мг/мл и хранят в замороженном виде при температуре -30°С до употребления.
Пример 2. Приготовление лиофилизированной композиции
Водный раствор, содержащий 5 мМ Τπ5. 20 мМ лимонной кислоты, 5 (вес./об.)% маннита, 0,5% (вес./об.) сахарозы и 0,1 мМ сульфата цинка готовят смешением ингредиентов при рН, доведенном до 8,0. ΝΑΤ-содержащий раствор подвергают буферному переносу в раствор композиции диализом (можно вместо него использовать ультрафильтрацию). Образующийся ΝΑΤ-раствор концентрируют до 10-12 мг/мл. Добавляют ГОтееп 80 до конечной концентрации 0,01 (вес./об.)%. Раствор хранят при температуре 2-8°С до момента лиофилизации.
Лиофилизированный цикл для получения лиофилизированного продукта. Приготовленную выше композицию сначала замораживают при температуре -40°С в лиофильной сушилке. Температура отжига устанавливается при -12°С; температура первичной сушки устанавливается -30°С; и температура вторичной сушки 20°С. Образующийся в результате лиофилизированный брикет (кек) имеет хорошую морфологию и содержит менее 3% воды, как показано титрованием по методу Карла Фишера; см. Ексйет, Лпде\\\ Сйет1е, Уо1ите 48, раде 394 (1935). По окончании процесса лиофилизации лиофилизированный брикет (осадок) помещают в пузырьки и под вакуумом плотно закрывают резиновыми пробками, прижимая верхние металлические полки в лиофильной сушке. Затем пузырьки обжимают с помо
- 4 006600 щью 13-миллиметрового наружного алюминиевого уплотнения и помещают в термостаты, выдерживают при различных температурах.
Пример 3. Анализ восстановленных лиофилизированных образцов
Анализ временных точек образца. Пузырьки с образцами вынимают из термостатов в определенные временные интервалы для анализа временных точек. Лиофилизированный образец восстанавливают 0,9 мл стерилизованной воды, т.е. воды для инъекций (МсСате 1пс., 1туше, СА). Визуально определяют прозрачность восстановленных растворов образцов. Отфильтрованные растворы анализируют с помощью ВЭЖХ, УФ-у18-спектроскопии и определения ферментативной активности, чтобы количественно определить оставшийся растворимый ΝΑΤ в этих лиофилизированных образцах.
На основе вышеуказанных анализов можно сделать вывод, что более 90% ΝΑΤ регенерировано после восстановаления лиофилизированного продукта.
Оптическая плотность в УФ/видимой области (νίκ). 150-200 мкл раствора ΝΑΤ помещают в ультрамикрокювету из кварцевого стекла супрасил с длиной траектории 1 см. УФМк-оптическую плотность определяют на спектрофотометре НР 8452А с диодной матрицей (НеМей-Раскатб Со., ^11шшд1оп, ΌΕ). Концентрации ΝΑΤ определяют, используя А0,1% = 1,05 при 280 нм, с учетом расчетов на основе аминокислотного состава; ссылку см. Ебе1йосй, ВюсйетМгу. Уо1ише 6, радек 1948-1954 (1967). После повторной гидратации лиофилизированного продукта не наблюдается заметного помутнения при определении оптической плотности при длине волны 350 нанометров (нм).
Высокоэффективная жидкостная хроматография. ВЭЖХ-анализ ΝΑΤ-образцов осуществляют на системе для жидкостной хроматографии НР 1050, снабжённой НР 3Ό Сйетк1а1юп для сбора данных (НеМей-Раскатб Со.). Образцы ΝΑΤ обнаруживают по оптической плотности при 280 и 214 нм, используя диодный детектор.
Для обращённо-фазовой ВЭЖХ (ОФ-ВЭЖХ, КР-НРЬС) образцы впрыскивают на колонку 2отЬах 3008В-СВ (4,6 х 250 мм) (НеМей-Раскатб Со.) в подвижной фазе, состоящей из 51,5% буфера А (2% излпропанола, 0,1% ΤΕΑ (ТФК)) и 48,5% буфера В (90% ацетонитрила, 2% изопропанола, 0,1% ТФК) при скорости потока 0,6 мл/мин. Буфер В выдерживают 6 мин, а затем постепенно доводят до 51% в течение двадцати минут. Эту концентрацию выдерживают одну минуту с последующим постепенным доведением в течение восьми минут до 90% и выдерживают при такой концентрации в течение пяти минут. Наконец, концентрацию буфера В опять постепенно доводят до 48,5% за три минуты. Регенерация ΝΑΤ после лиофилизации, как обнаружено этим методом, составляет более 92%.
Для ионообменной ВЭЖХ (ИО-ВЭЖХ, 1ЕХ-НРЬС) образцы впрыскивают на колонку ^койаак ΌΕΑΕ^ν (7,5 х 75 мм) ^окойаак, МогИдотегусШе. Α1аЬата) в подвижной фазе, состоящей из 90% буфера А (20 мМ Ττίκ, рН 8,5) и 10% буфера В (20 мМ Ττίκ, 250 мМ №С1, рН 8,5) при скорости потока 0,5 мл/мин. Затем применяют градиент, повышая концентрацию буфера В от 10 до 75% за 20 мин, затем от 75% буфера В до 90% буфера В за одну минуту. Затем выдерживают эту концентрацию буфера В в течение пяти минут, а далее постепенно доводят до 10% буфера В за четыре минуты. Регенерация ΝΑΤ после лиофилизации, как обнаружено этим методом, составляет более 90%.
Для гель-фильтрационной ВЭЖХ (ГФ-ВЭЖХ, БЕС-НРЬС) образцы наносят на колонку ^койаак С20003\νΧΡ (300 х 7,8 мм). Изократическое элюирование осуществляют при скорости потока 0,8 мл/мин, используя буфер, содержащий 15 мМ фосфата натрия, рН 7,0 и 0,140 М хлористого натрия. Регенерация ΝΑΤ после лиофилизации, как обнаружено этим методом, составляет более 95%.
Биоанализ. Образцы подвергали скринингу на активность против фибриновых сгустков. Малые аликвоты серийного разведения ΝΑΤ в интервале 0,01-1,0 мг/мл наносят на заранее образованные фибриновые сгустки в 96-луночных планшетах. Образцы инкубируют восемнадцать часов и лизис сгустков количественно определяют по оптической плотности при 500 нм. График зависимости оптической плотности от концентрации ΝΑΤ для различных рецептур сравнивают с графиком приготовленного эталона ΝΑΤ для сравнительной активности. Не обнаруживается ощутимой разницы между фибринолитической активностью ΝΑΤ после лиофилизации и активностью контрольного (нелиофилизированного) образца.
Сходные результаты анализа получены и для замороженной жидкой композиции после того, как последнюю разморозили (раплавили) при 4°С и анализировали, используя те же самые протоколы.
Вышеприведённое изобретение описано с представлением некоторых подробностей для большей ясности и лучшего понимания. Также станет очевидно, что можно использовать различные другие комбинации формы и деталей в объёме данного изобретения, как определено в прилагаемой формуле изобретения.
Пример 4.
Операции, описанные в примерах 1 и 2, повторяют с рекомбинантной фибролазой вместо ΝΑΤ, получая аналогичные замороженные жидкие и лиофилизированные фармацевтические композиции.
- 5 006600
Список последовательностей <110» Ашдеп Πιο.
<120> Фармацевтические композиции фибринолитического агента <130> А-578 ' <140> Ν/Α <141> 1993-10-01 <160> 6 ’ <170» РаЬепСГп Ует. 2.0 <210> 1 <211> 201 <212> РКТ < 213 > Искусственная последовательность <220>
< 2 2 3 > Описание искусственной последовательности: ΝΑΤ (аналог фнОролазы АвквНоЛоп СопЮйгй) <400» 1 ' .
Зег 1 | Рпе Ргэ С1п | Агд 5 | Туг | Уа1 С1п | Ьеи Уа! . -10 | Не Уа1 | А1а | Азр | ΗΪ3 15 | Агд | |||||
мес | Азп | ТЬг | Ьуз | Тут | Азп | С1у | Азр | Зег | Азр | Ьуз | Не | Агд | 51 п | >Тгр | Уа1 |
20 | 25 | - | 30 | ||||||||||||
Н1з | С1п | Не | Уа1 | Азп | ТЬг | 11е | Азп | 51 и | Не | Туг | Агд | Рго | Ьеи | АЗП | Не |
35 | 40 | 45 | |||||||||||||
С1п | РЬе | ТЬг | Ьеи Х/а.1 | С1у | Ьеи | 51и | Не | тгр | Зег | Азп | С1п- | Азр | Ьеи | Не- | |
. 50 | 55 | 60- | |||||||||||||
ТЬг Да! | ТЬг | Зег | Уа! | Зег | ΗΪΞ | Азр | ТЬг | Ьеи | А1а | Зег | .РЬе | С1у | Азп | Тгр | |
65 | 70 | 75 | .... | 80 | |||||||||||
Агд | 51и | ТЬг | Азр | Ьеи | Ьеи | Агд | Агд | 51П | Агд | ΗΪ3 | Азр | Азп | А1а | βίη | Ьеи |
85· 90 · * У5
Ьеи | ТЬг | А1а | 11е 100 | Азр | РЬе | Азр | С1 у | Азр 'ТЬг 105’ | Уа1 | 51у | Ьеи | А1а НО | Туг | Уа1 | |
•51у | 61у | МеЬ 115 | суз | 51п | Ьеи | Ьуз | ΗΪ3 120 | Зег | ТЬг | 51у | Уа1 | Не 125 | С1п | Азр | Н13 |
Зег | А1а 130 | Не | Азп | Ьеи | Ьеи | Уа1 135 | А1а | Ьеи | ТЬг | МеС | А1а 140 | Нхз | 51и | Ьеи | С1у |
Шз 145: | Азп | Ьеи | <51у | МеГ | Азп 150 | ΗΪ3 | Азр | 51у | Азп | С1п 155 | Суз | Шз | Суз | 51у | А1а 160 |
Азп | Зег | Суз | Уа1 | МеС 165 | А1а | А1а | МеЬ | Ьеи | Зет 170 | Азр | С1п | Рго | Зет | Ьуз 175 | Ьеи |
РНе ' | Зег | Азр | Суз 180 | Зег | Ьуз | Ьуз | АЗр | Тут 185 | <31п | ТЬг | РЬе | Ьеи | ТЬг 190 | Уа1 | Азп |
- 6 006600
Азп Рго С1п Суз 11е Ьеи Азп Ьуз Рго
195 200 <210> 2 <211> 603 <212> РИА <213> „
Искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: кодируетΝΑΤ (аналог фнбролазы) ' <400> 2.
ЬсССЬессас ааадаЬасдС асадсСддСЬ аЬсдЬЬдсЬд ассассдЬаЬ даасасЬааа60
СасаасддЬд асЬсЬдасаа аайссдЬсаа ЬдддЬдсасс аааЬсдСсаа ЬассаЬЬаас120 даааЬсСаса дассасЬдаа саСссааЬЬс асСЬЬддЬЬд дСЬРддаааЬ сЬддЬссаас180 саадаЬЬЬда СсассдССас РЬсЬдЬаЬсс сасдасасЬс ЬддсаСссСЬ сддСаасЬдд240 сдрдааассд ассЬдсСдсд СсдссаасдС саСдаСаасд сЬсаасСдсС дассдсЪаСс300 дасЬСсдасд дЬдаЬасЕдЬ СддбсЬддсЕ СасдЕСддРд дсаЬдбдЬса асьдааасас360
ЬсСасЬддЬд ССаессадда ссасЬссдсС аЬСаассЬдс ЬддбедсЬсЬ дассаЬддса420 сасдаасЬдд дЬсаЬаассС дддСаСдаас сасдаЬддса ассадСдЬса сСдсддСдса480 аасрссьдед ЬИаЬддсЬдс Ьаедседесс даьсаассас ссааасЬдЬС сессдасСдс540
СсСаадааад асСассадас сЬСссСдасс дСЬаасаасс сдсадСдЬа! ссЬдаасааа600 ссд ' ’ 603 <210> 3 <211> 203 <212> РНТ <213> АдкТзЬгодоп сопЬогСгхх <220>
<223> Природная фибролаэа Α^ΚίΛπχΙοη СопГогтпх <400> 3 .
С1п 1 | С1п | Агд | РЬе | Рго 5 | С1п | Агд | Туг | νοί | С1п 10 | Ьеи | Ца1 | Ие | Т7а1 | А1а 15 | Азр |
ΗΪ3 | Агд | Меб | Азп 20 | ТЬг | Ьуз | Туг | Азп | С1у 25 | Азр | 5ег | Азр | Ьуз | 11е 30 | Агд | С1п |
тгр | Уа1 | ΗΪ3 35 | βΐη | Ые | Уа1 | Азп | ТЫ 40 | Не | Азп | <31и | 11е | Туг . 45 | Агд | Рго | Ьеи |
АЗП | Не 50 | СЬп | РЬе | ткг | Ьеи | Уа1 55 | С1у | Ьеи | С1и | Ие | Тгр 60 | 5ег | Азп | <31п | Азр |
Ьеи 65 | Не | ТЬг | Уа1 | ТЫ | 5ег 70 | Уа1 | Зег | Н1з | Азр | ТЬг 75 | Ьеи | А1а | Зег | Рке | С1у 80 |
Азп | Тгр | Агд | С1и | ТЫ 85 | Азр | Ьеи | Ьеи | Агд | Агд 90 | С1п | Агд | ΗΪΞ | Азр | Агп 95 | А1а |
О1П | Ьеи | Ьеи | ТЬг 100 | А1а | Не | Азр | РЬе | Азр 105 | С1у | Азр | ТЬг | Уа1 | С1у 110 | Ьеи | А1а |
Туг | Уа1 | С1у 115 | С1у | МеЪ | Суз | С1п | Ьеи 120 | Ьуз | Н1з | 5ег | ТЬг | (31у 125 | Уа1 | Ие | <21п |
Азр | Η1Ξ ’ 130 | Зег | А1а | Ие | Азп | Ьеи 135 | Ьеи | νβΐ | А1а | Ьеи | ТЬг 140 | МеЬ | А1а | Н1з | С1и |
Ьеи 145 | 01у | Н15 | Азп | Ьеи | С1у 150 | Мее | АЗП | Н1з | Азр | С1у 155 | Азп | С1п | Суз | Нхз | Суз 160 |
С1у | А1а | Азп | Зег | Суз 165 | Уа1 | мее | А1а | А1а | МеЬ 170 | Ьеи | 8ег | Азр | С1п | Рго 175 | Зег |
Ьуз | Ьеи | РЬе | Зег 180 | Азр | Суз | 5ег | Ьуг | Ьуз 185 | Азр | Туг | С1п | ТЬг | РЬе 190 | Ьеи | ТНг |
Уа1 | Азп | Азп 195 | Рго | С1п | Суз | Не | Ьеи 200 | Азп | Ьуз | Рго |
<210> 4 <211> 609 <212> ША <213> Адк1зЬго(1оп' сопЬогЬгхх <22 0> ’ <223> Кодирует природную фнбролазу А$кв1го<ЬпСопТогйх <400> 4 оаасааадаЬ Ьсссасааад аСасдЬасад ссддсхарсд еьдсрдасса ссдЬаСдаас 60 аОЬааасаса асддрдасЬс ЬдасааааСс сдЬсааСддд СдсассаааС сдСсаасасс 120 аЬЬаасдааа ЬсСасадасс асСдаасаСс сааСРсасЫ: ЬддЬЬддеее ддааасссдд 180 ьесаассаад аЫСдаСсас сдССасССсС дСаСсссасд асасРсьддс аессрЬсддС 240 аасЬддсдРд ааассдассЬ дсСдсдЬсдс саасдЬсаСд аЬаасдсЬса асЬдсСдасс 300 дсЬаЬсдасС Ссдасддбда ЪасСдССддЬ сЬддсЬНасд ССддЬддсаС дЬдСсаа^^д. 360 ааасаЬйсСа сЬддЬдрСаЬ -ссаддасеас ЬссдсЬаЬЬа ассСдседдР СдсСсрдасс 420 аЬддсасасд аасСдддЬса РаассЬдддЬ аСдаассасд аьддсаасса дСдСсасСдс 480 , ддРдсааасС ссЬдСдЬЬаЬ ддсСдсСаСд сЬдЬссдаЬс аассасссаа асСдСЬсЬсс 540 дасбдсесЬа адааадасРа ссадассЬЬс еЬдассдЬЬа асаасесдса дСдСаЬссед 600 аасааассд . 609 <210 5 •<211> 1392 .
<212> ОНА <213> АдкЬзРгоДоп сопьогСгхх <220>
< 22 3> Природная профибролата А^нзДойоп СопЮНпх <400> 5 .
аСдадасеке сььсааеьеь ЬасЬдсЬдСЬ ььаеесдсад сапсдьссдс аСЬадсСдсР 60 ссадЬсааса сСасаасада адаЬдааасд дсасаааЬЬс сддсЬдаадс ЬдЬсаЬсддР 120 СасЬсадакЬ Ьадаадддда РСЬсдаедСС дсЬдЬЬЬЬдс саЬСРЬссаа садсасаааЬ 180 аасдддЁСаЬ СдССЬаЬааа СасСасКаСЪ дссадсаРЬд сЬдсСааада адааддддСа 240 ЬсРсРсдада ааадададдс ПдаадсЬЬсЬ есРаСРаСсР рддаарсрдд РаасдРЬаас 300 даСЬасдаад редЬЬЬаСсс аадаааддьс асСссадРЬс сРаддддЬдс ЬдЬЬсаасса 360 аадЬасдаад аСдссаСдса аЬасдааЫзс ааддесааса дрдаассадь ЬдЬсЬЕдсас 420 ССддаааааа асаааддеее дЬСсСсЬдаа даЕсасСсСд ааасЬсаСЬа сьссссадае 480 ддСададааа СЬасЬасЬса сссаЬЬдддЬ даадаЬсасЬ дСЬасСасса ^ддЬадааЬс 540 даааасдаьд сСдасЬссас ЬдсСЬеЬаЬс ЬсСдсЬСдСа асддСЬСдаа дддЕсаРРЬс 600 аадЪСдсаад дьдаааЬдЪа сССдаЬЬдаа ссаььддаа< ЬдСссдасСс Ьдаадсссас 660 дсЬдЬс^аса адСасдаааа сдрсдаааад даадаЬдаад ссссааадаЬ дЬдСддСдЬЬ 720 ассеаааасе дддааЪсаСа ЬдаассааЬс аадааддссС ЪссааЬСааа сРРдасРаад 780 адасаасааа даСЬсссаса аадаЬасдЬа садсСддССа СсдрСдсЬда.ссассдСаЬд 840 аасасЬаааЬ аеаасддьда сЬсЬдасааа аЬседСсааЬ дддрдсасса аарсдьсаас 900 ассаРЬаасд аааЬсЬасад ассасЬдаас аЬссааССса сЬСРддЬЬдд СЬРддаааЬс 960 ЬддЬссаасс аадаСССдаР сассдСЬасс СсСдсаСссс асдасасрср ддсаЬссСЬс 1020
- 8 006600 ддЕаасЕддс дЕдааассда ссЕдсЕдсдЕ сдссаасдЕс аЕдаСаасдс ЕсаасЕдсЕд 1080 ассдеЕаЕсд асЕЕсдасдд ЕдаЕасЕдЕЕ ддЕсЕддсЕЕ асдЕЕддЕдд саЕдЕдЕсаа 1140 сЕдааасаЕЕ сЕасЕддЕдЕ ЕаЕссаддас сасЕссдсЕа ЕЕаассЕдсЕ ддЕЕдсЕсЕд 1200 ассаЕддсас асдаасЕддд ЕсаЕаассЕд ддСаЕдаасс асдаЕддсаа ссадЕдЕсае 1260 СдсддЕдсаа асЕссЕдЕдЕ ЕаЕддсЕдсЕ аЕдсЕдЕссд аЕсаассаЕс сааасЕдЕЕс 1320 ЕссдасЕдсЕ сЕаадааада сЕасаадасс ЕЕссЕдассд ЕСаасаассс дсадЕдЕаЕс 1380 СЕдаасааас сд . 1392 •<210> 6 <211> 1386 <212> ОНА <213> Искусственная последовательность <220>
< 2 2 3 > Описание искусственной последовательности: ρωΝΑΤ (аналог профибролазы А^оягойоп Сопвдппх) <400> 6 .
аЕдадаЕЕЕс сЕЕсааЕЕЕЕ ЕасЕдсЕдЕЕ ЕЕаЕЕсдсад саЕссЕссдс* аЕЕадсЕдсЕ 60 ссадЕсааса сЕасаасада адаЕдааасд дсасаааЕЕс сддсЕдаадс ЕдЕсассддЕ 120 ЕасЕсадаЕЕ Еадаадддда ЕЕЕсдаСдЕЕ дсЕдЕЕЕЕдс саЕЕЕЕссаа садсасааас 180 аасдддЕЕаЕ СдЕЕЕаЕааа ЕасЕасЕаЕЕ дссадсаЕЕд сЕдсЕааада адааддддЕа 240 ЕсЕсЕсдада ааадададдс ЕдаадсЕЕсЕ ЕсЕаЕЕаЕсЕ ЕддааЕсЕдд ЕаасдЕЕаас 300 даЕЕасдаад ЕЕдЕЕЕаЕсс аадаааддЕс асЕссадЕЕс сЕаддддЕдс ЕдЕЕсаасса 360 аадЕасдаад аЕдссаЕдса аЕасдааЕЕс ааддЕЕааса дЕдаассадЕ ЕдЕсЕЕдсас 420 *ййадаааааа асаааддссЕ дсЕсЕсЕдаа дагЕасЕсЕд ааасЕсаЕЕа сЕссссадаЕ 480 ддЕададааа ЕЕасЕасЕЕа.сссаЕЕдддЕ даадаЕсасЕ дЕгасгасса ЕддЕадааЕс 540 даааасдаЕд сЕдасЕссас ЕдсЕЕсЕаЕс ЕсЕдсЕЕдЕа асддЕЕЕдаа дддЕсаЕЕЕс 600 “аадЕЕдсаад дЕдаааедСа сСЕдаЕЕдаа ссаЕЕддааЕ ЕдЕссдасЕс ЕдаадсссаС 660 .дсЕдЕсЕаса адЕасдаааа сдЕсдаааад даадаЕдаад ссссааада£.дЕдЕддЕдЕЕ 720 асссаааасЕ дддааЕсаЕа ЕдаассааЕс аадааддссЕ сссааЕЕааа сЕЕдасЕаад 780 адаЕсьЕгсс сасааадаЕа сдЕасадсЕд дЕЕаЕсдЕЕд.сЕдассассд саЕдаасасЕ 840 аааЕасаасд дёдасЕсЕда сааааЕссдЕ сааЕдддЕдс ассаааЕсдЕ саасассаЕЕ 900 аасдааассЕ асадассасЕ даасаЕссаа ЕЕсассЕЕдд ЕЕддЕЕЕдда ааЕсЕддссс 960 аассаадаЕЕ ЕдаЕсассдЕ ЕасЕЕсЕдЕа Есссасдаса ссссддсаЕс-сЕЕсддЕаас 1020 ЕдгдсдЕдааа ссдассЕдсЕ дсдЕсдссаа сдЕсаЕдаЕа асдсЕсаасЕ дсЕдассдсЕ 108*0* аЕсдасЕЕсд асддЕдаЕас ЕдЕЕддЕсЕд дсЕЕасдЕЕд дЕддсаЕдЕд ЕсаасЕдааа 1140 саЕЕсЕасЕд дЕдЕЕаЕсса ддассасЕсс дсЕассаасс ЕдсЕддЕЕдс ЕсЕдассаЕд 1200 дсаСасдаас ЕдддЕсаЕаа ссЕдддЕаЕд аассасдаЕд^дсаассадЕд ЕсасЕдсддЕ 1260 дсааас^ссЕ дЕдЕЕаЕддс ЕдсЕаЕдсЕд ЕссдаЕсаас саЕссааасЕ. дЕЕсЕссдас 1320, ЕдсЕсЕаада аадасЕасса дассЕЕссЕд ассдЕЕааса асссдсадЕд ЕаЕссЕдаас 1380 ааассд * 1386
Claims (22)
- ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ1. Фармацевтическая композиция, содержащая металлопротеиназный фибринолитический агент, цинковый стабилизатор и, при необходимости, наполнитель в фармацевтически приемлемом буфере, отличающийся тем, что металлопротеиназный фибринолитический агент представляет собой модифицированную фибролазу, которая связывается с цинком, непосредственно разрушает фибрин и инактивируется при вхождении в комплекс с альфа-2-макроглобулином.
- 2. Фармацевтическая композиция по п.1, отличающаяся тем, что цинковый стабилизатор представляет собой водорастворимую соль цинка, выбираемую из группы, состоящей из сульфата цинка, ацетата цинка и хлорида цинка.
- 3. Фармацевтическая композиция по п.1, отличающаяся тем, что буфер представляет собой лимонную кислоту или водорастворимую соль лимонной кислоты.
- 4. Фармацевтическая композиция по п.1, отличающаяся тем, что наполнитель представляет собой маннит.
- 5. Фармацевтическая композиция по п.1, отличающаяся тем, что значение рН составляет около 6,5-8,5.
- 6. Фармацевтическая композиция по п.1, отличающаяся тем, что она находится в виде замороженной жидкости.
- 7. Фармацевтическая композиция по п.6, отличающаяся тем, что содержит водорастворимую кальциевую соль.
- 8. Фармацевтическая композиция по п.7, отличающаяся тем, что водорастворимую кальциевую соль выбирают из группы, состоящей из ацетата кальция, сульфата кальция и хлорида кальция.
- 9. Фармацевтическая композиция по п.1, отличающаяся тем, что она представляет собой лиофилизированную композицию.
- 10. Фармацевтическая композиция по п.1, содержащая около 0,1-50 мг/мл металлопротеиназного фибринолитического агента, около 0,08-0,12 мМ сульфата цинка, около 0,008-0,012 мМ ацетата кальция и около 95-110 мМ лимонной кислоты или цитрата натрия, при этом рН указанной композиции примерно равен 7,4.
- 11. Фармацевтическая композиция по п.10, отличающаяся тем, что она содержит 10 мг/мл металлопротеиназы, 100 мМ лимонной кислоты, 0,01 мМ ацетата кальция и 0,1 мМ сульфата цинка.
- 12. Фармацевтическая композиция по п.1, содержащая около 0,1-50 мг/мл металлопротеиназного фибринолитического агента, около 0,08-0,12 мМ ацетата цинка, около 18-22 мМ лимонной кислоты или цитрата натрия, около 0,02-0,06 мМ Тпв. около 3-6% (вес./об.) необязательного наполнителя и около 0,008-0,012% (вес./об.) поверхностно-активного вещества, при этом рН указанной композиции примерно- 9 006600 равен 8,0.
- 13. Фармацевтическая композиция по п.1, содержащая около 0,1-50 мг/мл металлопротеиназного фибринолитического агента, около 0,08-0,12 мМ сульфата цинка, около 18-22 мМ лимонной кислоты или цитрата натрия, около 3-6 мМ Тп5. около 3-6% (вес./об.) необязательного наполнителя и около 0,0080,012% (вес./об.) поверхностно-активного вещества и, при необходимости, около 0,1-0,5% (вес./об.) сахарозы, причём рН указанной композиции примерно равен 8,0.
- 14. Фармацевтическая композиция по п.13, отличающаяся тем, что она содержит 12 мг/мл металлопротеиназы, 5 мМ Тп8, 20 мМ лимонной кислоты, 5% (вес./об.) маннита, 0,5% (вес./об.) сахарозы, 0,01% (вес./об.) поверхностно-активного вещества и 0,1 мМ сульфата цинка, причём рН указанной композиции примерно равен 8,0.
- 15. Композиция по любому из пп.1-14 для лизиса сгустков крови.
- 16. Применение композиции по любому из пп.1-14 для производства лекарственного средства для лизиса сгустков крови.
- 17. Способ приготовления лиофилизированной композиции, включающий следующие стадии:(a) составление смеси металлопротеиназного фибринолитического агента, цинковой соли, наполнителя, стабилизирующего дисахарида и поверхностно-активного вещества в буфере, причем металлопротеиназный фибринолитический агент представляет собой модифицированную фибролазу, которая связывается с цинком, непосредственно разрушает фибрин и инактивируется при вхождении в комплекс с альфа-2-макроглобулином и (b) лиофилизацию смеси, полученной на стадии (а).
- 18. Способ по п.17, отличающийся тем, что рН указанной комбинации доводят перед лиофилизацией примерно до 7,8-8,2.
- 19. Способ по п.17, отличающийся тем, что включает следующие стадии:(a) доведение значения рН раствора, содержащего соль цинка, наполнитель и стабилизирующий дисахарид до 7,6-8,2.(b) буферный перенос раствора, содержащего металлопротеиназу, в раствор, полученный на стадии (а), а затем добавление эффективного количества поверхностно-активного вещества, и (c) лиофилизация смеси, полученной на стадии (Ь).
- 20. Лиофилизированная фармацевтическая композиция, полученная способом по п.19.
- 21. Набор для приготовления водной фармацевтической композиции, включающий первый контейнер, содержащий лиофилизированную композицию цинкового стабилизатора и металлопротеиназного фибринолитического агента, представляющего собой модифицированную фибролазу, которая связывается с цинком, непосредственно разрушает фибрин и инактивируется при вхождении в комплекс с альфа-2макроглобулином, и второй контейнер, содержащий физиологически приемлемый растворитель для лиофилизированной композиции.
- 22. Способ растворения сгустков крови, включающий контактирование сгустка крови ίη νίίτο с эффективным количеством композиции, включающей металлопротеиназный фибринолитический агент, цинковый стабилизатор и, при необходимости, наполнитель, в фармацевтически приемлемом буфере, причем металлопротеиназный фибринолитический агент представляет собой модифицированную фибролазу, которая связывается с цинком, непосредственно разрушает фибрин и инактивируется при вхождении в комплекс с альфа-2-макроглобулином.
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US09/411,335 US6440414B1 (en) | 1999-10-01 | 1999-10-01 | Pharmaceutical compositions of fibrinolytic agent |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
EA200400182A1 EA200400182A1 (ru) | 2004-08-26 |
EA006600B1 true EA006600B1 (ru) | 2006-02-24 |
Family
ID=23628514
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
EA200200396A EA004627B1 (ru) | 1999-10-01 | 2000-09-29 | Фармацевтические композиции фибринолитического агента |
EA200400182A EA006600B1 (ru) | 1999-10-01 | 2000-09-29 | Фармацевтические композиции фибринолитического агента |
Family Applications Before (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
EA200200396A EA004627B1 (ru) | 1999-10-01 | 2000-09-29 | Фармацевтические композиции фибринолитического агента |
Country Status (28)
Country | Link |
---|---|
US (4) | US6440414B1 (ru) |
EP (2) | EP1438967A3 (ru) |
JP (1) | JP2003510369A (ru) |
KR (1) | KR100717435B1 (ru) |
CN (2) | CN101209347A (ru) |
AT (1) | ATE262923T1 (ru) |
AU (1) | AU769313B2 (ru) |
BG (1) | BG106578A (ru) |
BR (1) | BR0014420A (ru) |
CA (1) | CA2385966A1 (ru) |
CZ (1) | CZ20021033A3 (ru) |
DE (2) | DE60009529T2 (ru) |
DK (1) | DK1220685T3 (ru) |
EA (2) | EA004627B1 (ru) |
ES (2) | ES2218228T3 (ru) |
HK (1) | HK1049112B (ru) |
HU (1) | HUP0202654A3 (ru) |
IL (1) | IL148842A0 (ru) |
MX (1) | MXPA02003197A (ru) |
NO (1) | NO20021500L (ru) |
NZ (4) | NZ540967A (ru) |
PL (1) | PL355016A1 (ru) |
PT (1) | PT1220685E (ru) |
SG (1) | SG148823A1 (ru) |
SK (1) | SK4242002A3 (ru) |
WO (1) | WO2001024817A2 (ru) |
YU (1) | YU23302A (ru) |
ZA (1) | ZA200202400B (ru) |
Families Citing this family (22)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP5149470B2 (ja) | 1999-02-22 | 2013-02-20 | バクスター・インターナショナル・インコーポレイテッド | 新規のアルブミンを含有していない第viii因子処方物 |
US6440414B1 (en) | 1999-10-01 | 2002-08-27 | Amgen Inc. | Pharmaceutical compositions of fibrinolytic agent |
US6261820B1 (en) | 1999-10-01 | 2001-07-17 | Amgen Inc. | Fibronolytically active polypeptide |
US6455269B1 (en) * | 1999-12-17 | 2002-09-24 | Amgen, Inc. | Method for localized administration of fibrinolytic metalloproteinases |
US7033776B2 (en) * | 1999-12-17 | 2006-04-25 | Amgen Inc. | Method for treatment of indwelling catheter occlusion using fibrinolytic metalloproteinases |
DE10149030A1 (de) * | 2001-10-05 | 2003-04-10 | Viscum Ag | Stabile galenische gefriergetrocknete Arzneimittelzubereitung von rViscumin |
MXPA04007328A (es) * | 2002-02-01 | 2005-07-05 | Shimoda Biotech Pty Ltd | Composicion farmaceutica. |
WO2003068805A2 (en) * | 2002-02-14 | 2003-08-21 | Bayer Pharmaceuticals Corporation | Formulation strategies in stabilizing peptides in organic solvents and in dried states |
US6803046B2 (en) * | 2002-08-16 | 2004-10-12 | Bracco International B.V. | Sincalide formulations |
US8304387B2 (en) * | 2004-12-15 | 2012-11-06 | Swedish Orphan Biovitrum Ab (Publ) | Therapeutic formulations of keratinocyte growth factor |
US8158152B2 (en) * | 2005-11-18 | 2012-04-17 | Scidose Llc | Lyophilization process and products obtained thereby |
AU2006316005A1 (en) * | 2005-11-18 | 2007-05-24 | Eisai R & D Management Co., Ltd. | Process for production of cinnamamide derivative |
US7867747B2 (en) * | 2006-11-08 | 2011-01-11 | Korea Ocean Research And Development Institute | Fibrinolytic metalloprotease and composition comprising the same |
EP1958618A1 (de) | 2007-02-15 | 2008-08-20 | Octapharma AG | Verfahren zur Gefriertrocknung mit optimierter Rekonstitution von Biopolymeren |
NZ593190A (en) | 2008-11-07 | 2013-01-25 | Baxter Int | Factor viii formulations |
MX2012000475A (es) | 2009-07-10 | 2012-03-26 | Thrombogenics Nv | Variantes de plasminogeno y plasmina. |
CN102000022A (zh) * | 2010-11-23 | 2011-04-06 | 郑州大学 | 注射用重组双功能纤溶酶冻干制剂及其制备方法 |
EP2661493B1 (en) | 2011-01-05 | 2016-03-30 | ThromboGenics N.V. | Plasminogen and plasmin variants |
CN103764163A (zh) | 2011-08-12 | 2014-04-30 | 斯路姆基因公司 | 纤溶酶原和纤溶酶变体 |
US20140212405A1 (en) | 2013-01-28 | 2014-07-31 | 2294719 Ontario Limited | Fibrinolytic/Proteolytic Treatment of Myofacial and Neuropathic Pain and Related Conditions |
JP6877340B2 (ja) * | 2014-11-06 | 2021-05-26 | ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ コロラド,ア ボディー コーポレイトTHE REGENTS OF THE UNIVERSITY OF COLORADO,a body corporate | 血栓溶解剤の存在下における粘弾性解析を用いた新規病態の確認 |
AU2020204922A1 (en) * | 2019-01-06 | 2021-07-01 | Endo Global Aesthetics Limited | Collagenase formulations and methods of producing the same |
Family Cites Families (35)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
FR2310133A2 (fr) | 1975-05-05 | 1976-12-03 | Fabre Sa Pierre | Nouveau medicament comportant un activateur du plasminogene perfectionne |
EP0062642B1 (en) * | 1980-06-27 | 1986-09-10 | Movement Techniques Limited | Movement measuring apparatus and landmarks for use therewith |
US4447236A (en) * | 1982-02-05 | 1984-05-08 | Cordis Corporation | Infusion catheter system |
US4610879A (en) | 1984-01-06 | 1986-09-09 | University Of Southern California | Fibrinolytic enzyme from snake vernom |
CA1237482A (en) * | 1984-03-09 | 1988-05-31 | Frank B. Stiles | Catheter for effecting removal of obstructions from a biological duct |
US4755167A (en) * | 1984-04-10 | 1988-07-05 | Research Corporation | In vivo method for distribution and stirring of therapeutic agents |
US4855231A (en) * | 1984-10-30 | 1989-08-08 | Phillips Petroleum Company | Regulatory region for heterologous gene expression in yeast |
US4837148A (en) * | 1984-10-30 | 1989-06-06 | Phillips Petroleum Company | Autonomous replication sequences for yeast strains of the genus pichia |
US4885242A (en) * | 1984-10-30 | 1989-12-05 | Phillips Petroleum Company | Genes from pichia histidine pathway and uses thereof |
US4818700A (en) * | 1985-10-25 | 1989-04-04 | Phillips Petroleum Company | Pichia pastoris argininosuccinate lyase gene and uses thereof |
US4812405A (en) * | 1986-02-18 | 1989-03-14 | Phillips Petroleum Company | Double auxotrophic mutants of Pichia pastoris and methods for preparation |
US5000185A (en) * | 1986-02-28 | 1991-03-19 | Cardiovascular Imaging Systems, Inc. | Method for intravascular two-dimensional ultrasonography and recanalization |
US4848700A (en) * | 1987-04-16 | 1989-07-18 | Lockheed John A | Canard control system for aircraft |
ZA889415B (en) | 1987-12-18 | 1989-09-27 | Chiron Corp | Compositions and method for recombinant production of crotalidus venum fibrolase |
WO1990007352A1 (en) | 1989-01-04 | 1990-07-12 | Boston Scientific Corporation | Angioplasty catheter |
US5222941A (en) * | 1990-01-12 | 1993-06-29 | Don Michael T Anthony | Method of dissolving an obstruction in a vessel |
EP0438200B1 (en) | 1990-01-16 | 2002-07-17 | Centro De Ingenieria Genetica Y Biotecnologia | Method for the expression of heterologous genes in the yeast Pichia pastoris, expression vectors and transformed microorganisms |
US5709676A (en) * | 1990-02-14 | 1998-01-20 | Alt; Eckhard | Synergistic treatment of stenosed blood vessels using shock waves and dissolving medication |
US5250034A (en) * | 1990-09-17 | 1993-10-05 | E-Z-Em, Inc. | Pressure responsive valve catheter |
US5167628A (en) * | 1991-05-02 | 1992-12-01 | Boyles Paul W | Aortic balloon catheter assembly for indirect infusion of the coronary arteries |
US5380273A (en) * | 1992-05-19 | 1995-01-10 | Dubrul; Will R. | Vibrating catheter |
EP0624642B1 (en) | 1993-05-12 | 1999-01-20 | Indian Council For Medical Research | Novel thrombolytic agent, process for preparing same and its use for the preparation of a thrombi dissolving medicament |
US5370653A (en) * | 1993-07-22 | 1994-12-06 | Micro Therapeutics, Inc. | Thrombectomy method and apparatus |
DE69433133T2 (de) | 1993-12-17 | 2004-04-01 | Mochida Pharmaceutical Co. Ltd. | Lösliches thrombomodulin enthaltende zubereitung |
US5626564A (en) * | 1995-03-31 | 1997-05-06 | Creighton University | Adjustable sideholes catheter |
US5830468A (en) | 1995-05-17 | 1998-11-03 | The New York Blood Center, Inc. | Fibrin(ogen) degradation by fibrinolytic matrix metalloproteinase |
US6020181A (en) * | 1995-05-17 | 2000-02-01 | New York Blood, Inc. | Inhibition of thrombus formation by medical related apparatus comprising treating with fibrinolytic matrix metalloproteinase |
US5741779A (en) * | 1996-05-10 | 1998-04-21 | Xoma Corporation | Antithrombotic materials and methods |
DK0914102T3 (da) | 1996-05-24 | 2006-01-09 | Angiotech Pharm Inc | Præparater og fremgangsmåder til behandling eller forebyggelse af syddomme i legemskanaler |
US5951981A (en) | 1996-12-02 | 1999-09-14 | Diatide, Inc. | Thrombolytic agents with antithrombotic activity |
US6413760B1 (en) | 1997-04-15 | 2002-07-02 | Genetics Institute, Inc. | Highly purified mocarhagin cobra venom protease polynucleotides endcoding same and related proteases and therapeutic uses thereof |
US6261820B1 (en) | 1999-10-01 | 2001-07-17 | Amgen Inc. | Fibronolytically active polypeptide |
US6440414B1 (en) | 1999-10-01 | 2002-08-27 | Amgen Inc. | Pharmaceutical compositions of fibrinolytic agent |
US6455269B1 (en) * | 1999-12-17 | 2002-09-24 | Amgen, Inc. | Method for localized administration of fibrinolytic metalloproteinases |
WO2002012283A2 (en) | 2000-08-03 | 2002-02-14 | Zymogenetics, Inc. | Disintegrin homologs, zsnk10, zsnk11, and zsnk12 |
-
1999
- 1999-10-01 US US09/411,335 patent/US6440414B1/en not_active Expired - Fee Related
-
2000
- 2000-09-28 NZ NZ540967A patent/NZ540967A/en unknown
- 2000-09-29 BR BR0014420-7A patent/BR0014420A/pt not_active Application Discontinuation
- 2000-09-29 CZ CZ20021033A patent/CZ20021033A3/cs unknown
- 2000-09-29 EP EP04007657A patent/EP1438967A3/en not_active Withdrawn
- 2000-09-29 EP EP00967197A patent/EP1220685B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-09-29 DE DE60009529T patent/DE60009529T2/de not_active Expired - Fee Related
- 2000-09-29 IL IL14884200A patent/IL148842A0/xx unknown
- 2000-09-29 DE DE2004007657 patent/DE04007657T1/de active Pending
- 2000-09-29 YU YU23302A patent/YU23302A/sh unknown
- 2000-09-29 EA EA200200396A patent/EA004627B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2000-09-29 PT PT00967197T patent/PT1220685E/pt unknown
- 2000-09-29 PL PL00355016A patent/PL355016A1/xx not_active Application Discontinuation
- 2000-09-29 ES ES00967197T patent/ES2218228T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2000-09-29 AT AT00967197T patent/ATE262923T1/de not_active IP Right Cessation
- 2000-09-29 SG SG200400542-7A patent/SG148823A1/en unknown
- 2000-09-29 NZ NZ550200A patent/NZ550200A/en unknown
- 2000-09-29 WO PCT/US2000/027022 patent/WO2001024817A2/en active IP Right Grant
- 2000-09-29 EA EA200400182A patent/EA006600B1/ru unknown
- 2000-09-29 NZ NZ530959A patent/NZ530959A/en unknown
- 2000-09-29 AU AU77430/00A patent/AU769313B2/en not_active Ceased
- 2000-09-29 DK DK00967197T patent/DK1220685T3/da active
- 2000-09-29 SK SK424-2002A patent/SK4242002A3/sk unknown
- 2000-09-29 HU HU0202654A patent/HUP0202654A3/hu unknown
- 2000-09-29 NZ NZ518007A patent/NZ518007A/en unknown
- 2000-09-29 ES ES04007657T patent/ES2224917T1/es active Pending
- 2000-09-29 CN CNA2007101529313A patent/CN101209347A/zh active Pending
- 2000-09-29 CA CA002385966A patent/CA2385966A1/en not_active Abandoned
- 2000-09-29 KR KR1020027004128A patent/KR100717435B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2000-09-29 JP JP2001527816A patent/JP2003510369A/ja not_active Withdrawn
- 2000-09-29 MX MXPA02003197A patent/MXPA02003197A/es active IP Right Grant
- 2000-09-29 CN CNB008163790A patent/CN100353999C/zh not_active Expired - Fee Related
-
2002
- 2002-03-26 ZA ZA200202400A patent/ZA200202400B/en unknown
- 2002-03-26 NO NO20021500A patent/NO20021500L/no not_active Application Discontinuation
- 2002-04-04 BG BG106578A patent/BG106578A/bg unknown
- 2002-08-23 US US10/226,408 patent/US7138114B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2003
- 2003-01-10 HK HK03100282.4A patent/HK1049112B/zh not_active IP Right Cessation
-
2006
- 2006-06-29 US US11/479,214 patent/US7311908B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2006-07-28 US US11/495,487 patent/US7244426B2/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US7244426B2 (en) | Pharmaceutical compositions of fibrinolytic agent | |
US6204036B1 (en) | Stable transglutaminase preparations and processes for their production | |
KR100705997B1 (ko) | 안정화된 hgf 동결건조제제 및 그 제조방법 | |
FI85335B (fi) | Foerfarande foer framstaellning av lyofiliserad, farmaceutisk vaevnadsplasminogenaktivator(t-pa)-komposition. | |
KR101710471B1 (ko) | 건조한 트랜스글루타미나제 조성물 | |
AU2004201694B2 (en) | Pharmaceutical compositions of fibrinolytic agent | |
AU2006200638B2 (en) | Pharmaceutical compositions of fibrinolytic agent | |
AU738891B2 (en) | Stable transglutaminase preparations and process for producing them |