EA005293B1 - Производные пирролидин-2-она и их применение при лечении остеопороза - Google Patents

Производные пирролидин-2-она и их применение при лечении остеопороза Download PDF

Info

Publication number
EA005293B1
EA005293B1 EA200200505A EA200200505A EA005293B1 EA 005293 B1 EA005293 B1 EA 005293B1 EA 200200505 A EA200200505 A EA 200200505A EA 200200505 A EA200200505 A EA 200200505A EA 005293 B1 EA005293 B1 EA 005293B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
hydroxy
pyrrolidin
phenyl
butyl
heptanoic acid
Prior art date
Application number
EA200200505A
Other languages
English (en)
Other versions
EA200200505A1 (ru
Inventor
Кимберли О'Киф Кэмерон
ХуаЖу Ки
Брюс Аллен Лефкер
Дейвид Дуэйн Томпсон
Original Assignee
Пфайзер Продактс Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Пфайзер Продактс Инк. filed Critical Пфайзер Продактс Инк.
Publication of EA200200505A1 publication Critical patent/EA200200505A1/ru
Publication of EA005293B1 publication Critical patent/EA005293B1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A61K31/4015—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil having oxo groups directly attached to the heterocyclic ring, e.g. piracetam, ethosuximide
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D207/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D207/18—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member
    • C07D207/22—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D207/24—Oxygen or sulfur atoms
    • C07D207/26—2-Pyrrolidones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/02—Stomatological preparations, e.g. drugs for caries, aphtae, periodontitis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A61P19/10—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease for osteoporosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D207/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D207/18—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member
    • C07D207/20—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member with only hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/06—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings linked by a carbon chain containing only aliphatic carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/02—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings
    • C07D405/10—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings linked by a carbon chain containing aromatic rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D409/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D409/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings
    • C07D409/06—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings linked by a carbon chain containing only aliphatic carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D409/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D409/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D417/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00
    • C07D417/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings
    • C07D417/06—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings linked by a carbon chain containing only aliphatic carbon atoms

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Nitrogen And Oxygen As The Only Ring Hetero Atoms (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Pyrrole Compounds (AREA)

Abstract

Данное изобретение относится к способам лечения состояний, которые представлены низкой костной массой, в частности остеопороза, хрупкости костей, остеопорозного перелома, дефекта кости, детской идиопатической потери кости, потери альвеолярной кости, потери нижнечелюстной кости, перелома кости, остеотомии, потери кости, связанной с периодонтитом, или врастания протеза, при которых вводят селективные агонисты рецептора Е, представляющие собой соединения формулы (I), где переменные являются такими, как определено в описании.

Description

Предшествующий уровень техники
Данное изобретение относится к способам и фармацевтическим композициям, содержащим агонисты простагландина, которые являются полезными для предупреждения потери кости, восстановления или нарастания костной массы и для усиления заживления кости, включая лечение состояний, которые представлены низкой костной массой и/или дефектами костей у позвоночных, и в частности млекопитающих, включая людей. Данное изобретение конкретно относится к способам и фармацевтическим композициям, содержащим агонисты простагландина, селективные по отношению к рецептору ЕР4.
Остеопороз представляет собой системное заболевание скелета, характеризующееся низкой костной массой и разрушением костной ткани, с последующим увеличением хрупкости костей и подверженности перелому. В США это состояние поражает более чем 25 млн человек и вызывает более чем 1,3 млн переломов каждый год, включая 500000 переломов позвоночника, 250000 переломов бедра и 240000 переломов запястья ежегодно. Переломы бедра представляют собой наиболее серьезное последствие остеопороза, причем 5-20% пациентов умирают в течение 1 года, и более 50% выживших пациентов становятся нетрудоспособными.
Пожилые имеют наибольший риск остеопороза, и поэтому предсказывают, что эта проблема существенно возрастет со старением населения. Прогнозируют, что число случаев переломов по всему миру увеличится в 3 раза в течение ближайших 60 лет, а в одном исследовании оценили, что в 2050 году во всем мире будет 4,5 млн переломов бедра.
Женщины имеют больший риск остеопороза, чем мужчины. Женщины испытывают резкое ускорение потери кости в течение 5 лет после менопаузы. Другие факторы, которые увеличивают риск, включают в себя курение, злоупотребление алкоголем, малоподвижный образ жизни и низкое потребление кальция.
В настоящее время существует два основных типа фармацевтической терапии для лечения остеопороза. Первый представляет собой применение антирезорбтивных соединений для снижения резорбции костной ткани.
Примером антирезорбтивного агента является эстроген. Известно, что эстроген снижает вероятность переломов. Кроме того, В1аск с1 а1. в ЕР 0605193А1 сообщают, что эстроген, в частности, при пероральном приеме снижает уровни ЛПНП (липопротеинов низкой плотности) в плазме и повышает уровни полезных липопротеинов высокой плотности (ЛПВП). Однако эстроген не способствует обратному восстановлению кости до уровней молодого возраста в установившемся остеопорозном скелете. Кроме того, долговременная терапия эстрогеном влечет за собой различные расстройства, включая увеличение риска рака матки, рака эн дометрия и, возможно, рака молочной железы, что заставляет многих женщин избегать этого лечения. Значительные нежелательные эффекты, связанные с терапией эстрогеном, подтверждают необходимость в разработке альтернативных терапий для остеопороза, которые обладают желательным воздействием на сывороточные ЛПНП, но не вызывают нежелательных эффектов.
Вторым типом фармацевтической терапии для лечения остеопороза является применение анаболических агентов для стимуляции остеогенеза и увеличения костной массы. Ожидают, что данный класс агентов восстанавливает кости установившегося остеопорозного скелета.
Некоторые агонисты простагландинов раскрыты в ОВ 1478281, ОВ 1479156 и в патентах США №№ 4175203, 4055596, 4175203, 3987091 и 3991106, как являющиеся полезными в качестве, например, почечных вазодилататоров.
В патенте США № 4033996 раскрыты некоторые 8-аза-9-оксо(и диоксо)-тиа-11,12-секопростагландины, которые являются полезными в качестве почечных вазодилататоров, для предупреждения тромбообразования, для индукции высвобождения гормона роста, а также в качестве регуляторов иммунного ответа.
Во французском патенте № 897566 раскрыты некоторые производные аминокислот для лечения неврологических, психических или сердечно-сосудистых заболеваний.
В 1. Отд. Сйет. 26; 1961; 1437 раскрыта Νацетил-Л-бензилпарааминофенилмеркаптоуксусная кислота.
В патенте США № 4761430 раскрыты некоторые арилбензолсульфонамидные соединения в качестве липид-понижающих агентов.
В патенте США № 4443477 раскрыты некоторые сульфонамидофенилкарбоновые кислоты в качестве липид-понижающих агентов.
В патенте США № 3528961 раскрыты некоторые производные ε-капролактама в качестве красителей.
В патенте США № 3780095 раскрыты некоторые ацилированные анилинокарбоновые кислоты в качестве желчегонных средств.
В патенте США № 4243678 раскрыты некоторые ацилгидрокарбиламиноалкановые кислоты как обладающие пользой при лечении язв желудка, в качестве ингибиторов экскреции сальных желез, а также для борьбы с кожным воспалением.
В патенте США № 4386031 раскрыты некоторые Ν-бензоил-щ-анилиноалканкарбоновые кислоты в качестве противоаллергических агентов, ингибиторов тромботической агрегации, противовоспалительных агентов и липид-понижающих агентов.
Кроме остеопороза, примерно 20-25 млн женщин и все возрастающее число мужчин страдают обнаружимыми переломами позво3 ночника вследствие сниженной костной массы, и, кроме того, сообщают о 250000 переломов бедра ежегодно только в одной Америке. Последнее состояние связано с 12%-ной смертностью в течение первых 2 лет и с 30%-ной долей пациентов, нуждающихся в медицинском уходе на дому после перелома. Хотя уже это является значительным, ожидают, что экономические и медицинские последствия периода выздоровления вследствие медленного или неправильного заживления этих переломов костей будут возрастать вследствие старения населения в целом.
Показано, что эстрогены (Во1апбег е! а1., 3811' Аппиа1 МееШш ОгШоребю Кезеагсй 8ос1е1у, 1992) улучшают качество заживления переломов конечностей. Следовательно, заместительная терапия эстрогеном должна быть эффективной в качестве способа лечения при репарации перелома. Однако согласие пациента при терапии эстрогеном является относительно низким вследствие его побочных эффектов, включая возобновление месячных, мастодинию, повышенный риск рака матки, осознаваемый повышенный риск рака молочной железы и сопутствующее применение прогестинов. Кроме того, мужчины склонны отказываться от применения лечения эстрогеном. Существует необходимость в терапии, которая была бы полезной для пациентов, страдающих изнуряющими переломами костей, и которая увеличила бы согласие пациента.
Продемонстрировано, что простагландин Е2 (РСЕ2) может восстанавливать потерянную костную массу в модели овариэктомированных крыс (ОУХ), модели постменопаузального остеопороза, Ке, Η.Ζ. е! а1., Вопе, 23: 249-255, 1998. Однако имеются тяжелые побочные эффекты, связанные с РСЕ2, Дее, Ж 8.8. апб Ма, Υ.Ε., Вопе, 21: 297-304, 1997.
Хотя имеется множество терапий остеопороза, существует постоянная необходимость и проводятся постоянные исследования в данной области техники в отношении альтернативных терапий остеопороза. Кроме того, существует необходимость в терапиях, направленных на заживление переломов костей. Также существует необходимость в терапии, которая может стимулировать возобновление роста костей в областях скелета, где имеются дефекты, такие как дефекты, вызванные или индуцированные, например, опухолями кости. Кроме того, существует необходимость в терапии, которая может стимулировать возобновление роста кости в областях скелета, где показаны костные трансплантаты.
Краткое изложение сущности изобретения
Данное изобретение относится к способу лечения состояния, которое представлено низкой костной массой, у млекопитающего, при котором указанному млекопитающему вводят селективный агонист рецептора ЕР4, представляющий собой соединение формулы I
или фармацевтически приемлемую соль указанного соединения, где
С) представляет собой СООР3, СОКНК4 или тетразол-5-ил;
А представляет собой простую или цисдвойную связь;
В представляет собой простую или трансдвойную связь;
=и представляет собой
Н^'ОН , НО^'Н или НО^Н
К2 представляет собой α-тиенил, фенил, фенокси, однозамещенный фенил или однозамещенный фенокси, причем указанные заместители представляют собой хлоро, фторо, фенил, метокси, трифторметил или (С1-С3)алкил;
К3 представляет собой водород, (С1-С5)алкил, фенил или парабифенил;
К4 представляет собой СОК5 или 8О2К5; и
К5 представляет собой фенил или (С1-С5) алкил;
или 7-{2К-[3-гидрокси-4-(3-феноксифенил)бут-1 -енил]-5-оксопирролидин-1 -ил } гептановую кислоту, или 7-{28-[3-гидрокси-4-(3-феноксифенил)бутил]-5-оксо-пирролидин-1 -ил } гептановую кислоту.
Предпочтительной группой селективных агонистов рецептора ЕР4 формулы I для применения в способах по данному изобретению являются те соединения формулы I, где О представляет собой 5-тетразолил и =и представляет собой
Н^'ОН с образованием соединений, имеющих
Особенно предпочтительные соединения, входящие в эту группу, включают в себя 5К-(38гидрокси-4-фенил-бут-1 -енил)-1-[6-(1 Н-тетразол5-ил)гексил]пирролидин-2-он, 5 8-(3К-гидрокси-4фенилбутил)-1-[6-(1Н-тетразол-5-ил)гексил]пирролидин-2-он, 58-(4-(3-хлорфенил)-3К-гидроксибутил)-1-(6-(2Н-тетразол-5-ил)гексилпирролидин2-он или 58-(3К-гидрокси-4-(3-трифторметилфенил)бутил)-1-(6-(2Н-тетразол-5-ил)гексил)пирролидин-2-он.
Другой предпочтительной группой селективных агонистов рецептора ЕР4 формулы I для применения в способах по данному изобрете5 нию являются те соединения формулы I, где О представляет собой СООН и =и представляет собой
У”·;
Н ОН
Особенно предпочтительные соединения, входящие в данную группу, включают в себя 7(28-(3К-гидрокси-4-фенилбутил)-5-оксопирролидин-1-ил)-гептановую кислоту, 7-[2К-(38-гидрокси-4-фенил-бут-1-енил)-5-оксопирролидин1-ил]гептановую кислоту, 7-{2§-[3К-гидрокси4-(3-трифторметоксифенил)бутил]-5-оксопирролидин-1-ил}гептановую кислоту, 7-{2§-[3К-гидрокси-4-(3-феноксифенил)бутил]-5-оксопирролидин-1-ил}гептановую кислоту, 7-(28-(3 К-гидрокси-4-(3-трифторметилфенил)бутил)-5-оксопирролидин-1-ил)гептановую кислоту или 7-{28[4-(3-хлорфенил)-3К-гидроксибутил]-5-оксопирролидин-1-ил}гептановую кислоту.
В частности, данное изобретение относится к таким способам, где указанное состояние представляет собой остеопороз, хрупкость костей, остеопорозный перелом, дефект кости, детскую идиопатическую потерю кости, потерю альвеолярной кости, потерю нижнечелюстной кости, перелом кости, остеотомию, потерю кости, связанную с периодонтитом, или врастание протеза.
В предпочтительных способах по данному изобретению селективный агонист рецептора ЕР4 вводят системно, например перорально, подкожно, внутримышечно или посредством аэрозоля. В других предпочтительных способах по данному изобретению агонист ЕР4 вводят местно.
Кроме того, данное изобретение относится к соединению, выбранному из 7-{28-[3К-гидрокси-4-(3-феноксифенил)бутил]-5-оксопирролидин-1-ил}гептановой кислоты; 7-(28-(3К.-гидрокси-4-(3-трифторметилфенил)бутил)-5-оксопирролидин-1-ил)гептановой кислоты; 7-{28-[4(3-хлорфенил)-3К-гидроксибутил]-5-оксопирролидин-1-ил}гептановой кислоты; 58-[4-(3-хлорфенил)-3К-гидроксибутил]- 1-[6-(2Н-тетразол-5ил)гексил]пирролидин-2-она и 58-(3К.-гидрокси4-(3 -трифторметилфенил)бутил)-1-(6-(2Н-тетразол-5 -ил)гексил)пирролидин-2-она.
Данное изобретение также относится к фармацевтической композиции, содержащей указанное выше соединение и фармацевтически приемлемый разбавитель или носитель.
Данное изобретение также относится к применению указанного выше соединения в качестве лекарства.
Способы по данному изобретению являются особенно полезными, когда указанное состояние представляет собой хрупкость костей.
Способы по данному изобретению также являются особенно полезными, когда указанное состояние представляет собой остеопороз.
Способы по данному изобретению также являются особенно полезными, когда указанное состояние представляет собой перелом кости или остеопорозный перелом.
Предпочтительно лечат женщин после менопаузы и мужчин в возрасте старше 60 лет. Также предпочтительными являются индивидуумы независимо от возраста, которые имеют значительно сниженную костную массу, то есть более высокую, чем 1,5 стандартных отклонения, или равную 1,5 стандартным отклонениям ниже нормальных уровней для молодого возраста.
В способах по данному изобретению состояния, которые представлены низкой костной массой, включают в себя такие состояния, как, например, остеопороз, детская идиопатическая потеря кости, потеря альвеолярной кости, потеря нижнечелюстной кости, перелом кости, остеотомия, потеря кости, связанная с периодонтитом, и врастание протеза.
Способы лечения «вторичного остеопороза» также включены в способы по данному изобретению. «Вторичный остеопороз» включает в себя остеопороз, индуцированный глюкокортикоидами, остеопороз, индуцированный гипертиреозом, остеопороз, индуцированный иммобилизацией, остеопороз, индуцированный гепарином, и остеопороз, индуцированный иммуносупрессией, у позвоночного, например млекопитающего (включая человека). Эти способы осуществляют посредством введения указанному позвоночному, например млекопитающему, количества агониста простагландина, селективного по отношению к рецептору ЕР4, или фармацевтически приемлемой соли указанного агониста простагландина, селективного по отношению к рецептору ЕР4, которое лечит «вторичный остеопороз».
Еще один аспект данного изобретения относится к способам укрепления костного трансплантата, включая позвоночный синостоз, усиление вытяжения длинной кости, усиление заживления кости после лицевой реконструкции, верхнечелюстной реконструкции и/или нижнечелюстной реконструкции у позвоночного, например у млекопитающего (включая человека), при котором указанному позвоночному, например млекопитающему, которое было подвергнуто лицевой реконструкции, верхнечелюстной реконструкции или нижнечелюстной реконструкции, вводят усиливающее кость количество агониста простагландина, селективного по отношению к рецептору ЕР4, или фармацевтически приемлемой соли указанного агониста простагландина, селективного по отношению к рецептору ЕР4. Активные агонисты простагландина, селективные по отношению к рецептору ЕР4, по данному изобретению можно применять местно в участке реконструкции кости, либо их можно вводить системно.
Предпочтительная дозировка составляет от примерно 0,001 до примерно 100 мг/кг/сутки селективных агонистов рецептора ЕР4 либо фармацевтически приемлемой соли указанного соединения. Особенно предпочтительная дозировка составляет от примерно 0,01 до примерно 10 мг/кг/сутки селективного агониста рецептора ЕР4 или фармацевтически приемлемой соли указанного соединения.
Выражение «состояние(ия), которое(ые) представлено(ны) низкой костной массой» относится к состоянию, при котором уровень костной массы является более низким, чем специфичный для данного возраста нормальный уровень, как определено в стандартах Всемирной Организации Здравоохранения «А^екктеп! οί Егас1иге РБк апб ίΐδ Арр1 ίοαίίοη ίο 8сгеешпд ίοτ Ро81тепораи§а1 Ο^οροτοκίδ (1994). Κ^ροή οί \νοι16 Неа11й 0гдашха1юп 81ибу Огоир. \νοι16 Неа11й 0гдашха1юп Тесйшса1 8ег1е§ 843». «Состояние(ия), которое(ые) представлено(ны) низкой костной массой» включают первичный и вторичный остеопороз, как описано выше. Включены также периодонтальное заболевание, потеря альвеолярной кости, постостеотомия и детская идиопатическая потеря кости. Выражение «состояние(ия), которое(ые) представлено(ны) низкой костной массой» также включает в себя длительные осложнения остеопороза, такие как искривление позвоночника, прекращение роста и операции протезирования.
Выражение «состояние(ия), которое(ые) представлено(ны) низкой костной массой» также относится к позвоночному, например млекопитающему, о котором известно, что оно имеет значительно более высокую, чем средняя, вероятность развития таких заболеваний, как описано выше, включая остеопороз (например, женщины после менопаузы, мужчины в возрасте старше 50 лет). Другие применения наращивания или увеличения костной массы включают в себя восстановление кости, повышение скорости заживления перелома кости, заместительную хирургию костных трансплантатов в целом, увеличение доли успешных костных трансплантаций, заживление кости после лицевой реконструкции, либо верхнечелюстной реконструкции, либо нижнечелюстной реконструкции, врастание протеза, позвоночный синостоз или вытяжение длинной кости.
Способы по данному изобретению можно также применять в сочетании с ортопедическими устройствами, такими как каркасы для сращения позвоночника, металлоконструкции для сращения позвоночника, устройства внутренней и внешней фиксации кости, винты и штифты.
Специалистам в данной области техники будет понятно, что термин «костная масса» в действительности относится к костной массе на единицу площади, которую иногда (хотя это не строго корректно) называют минеральной костной плотностью.
Термин «лечение», «лечить» или «терапия», как он использован здесь, включает в себя предупреждающую (например, профилактическую), паллиативную и лечебную терапию.
Под «фармацевтически приемлемым» подразумевают, что носитель, наполнитель, разбавитель, эксципиенты и/или соль должны быть совместимы с другими ингредиентами препарата и не являться вредными для его реципиента.
Выражение «фармацевтически приемлемая соль» относится к нетоксичным анионным солям, содержащим анионы, таким как (но не ограниченным ими) хлорид, бромид, йодид, сульфат, бисульфат, фосфат, ацетат, малеат, фумарат, оксалат, лактат, тартрат, цитрат, глюконат, метансульфонат и 4-толуолсульфонат. Это выражение также относится к нетоксичным катионным солям, таким как (но не ограниченным ими) соли натрия, калия, кальция, магния, аммония или протонированного бензатина (Ν,Ν'дибензилэтилендиамина), холина, этаноламина, диэтаноламина, этилендиамина, мегламина (Νметилглюкамина), бенетамина (Ν-бензилфенетиламина), пиперазина или трометамина (2-амино-2-гидроксиметил-1,3-пропандиола).
Результатом способов по данному изобретению является остеогенез, приводящий в результате к пониженной частоте переломов. Данное изобретение вносит значительный вклад в данную область техники благодаря разработке способов, которые усиливают остеогенез, приводящий в результате к предупреждению, замедлению и/или регрессии остеопороза и родственных костных расстройств.
Другие признаки и преимущества будут понятны из описания и формулы изобретения, в которых описано данное изобретение.
Подробное описание изобретения
В качестве селективного агониста рецептора ЕР4 по данному изобретению можно использовать любой селективный агонист рецептора ЕР4. Селективными агонистами ЕР4 являются соединения, которые имеют ИК50 для рецепторов ЕР1, ЕР2 и ЕР3, которая по меньшей мере в 10 раз выше, чем ИК50 для рецептора подтипа ЕР4. Например, 7-(2-(3-гидрокси-4-фенилбутил)-5-оксопирролидин-1-ил)гептановая кислота является агонистом РСЕ2, селективным по отношению к рецептору ЕР4, имеющим ИК50 связывания рецептора ЕР4, составляющую 16 нМ. Для всех других подтипов рецептора ЕР, включая подтипы рецептора ЕР1, ЕР2 и ЕР3, ИК50 для 7-(2-(3-гидрокси-4-фенилбутил)-5-оксопирролидин-1-ил)гептановой кислоты выше, чем 3200 нМ.
Соединения формулы I можно получить, как раскрыто в переуступленном должным образом патенте США 4177346, который включен в данное изобретение путем ссылки.
Селективные агонисты рецептора ЕР4, используемые в способах по данному изобретению, все являются адаптированными для терапевтического применения в качестве агентов, которые стимулируют остеогенез и увеличение костной массы у позвоночных, например млекопитающих, и в частности людей. Поскольку остеогенез тесно связан с развитием остеопоро9 за и родственных костных расстройств, агонисты, используемые в способах по данному изобретению, благодаря их действию на кость предупреждают, останавливают остеопороз и/или приводят к регрессии остеопороза.
Пригодность селективных агонистов ЕР4, используемых в способах по настоящему изобретению в качестве лекарственных агентов при лечении состояний, которые представлены низкой костной массой (например, остеопороза), у позвоночных, например млекопитающих (особенно людей, и в частности женщин) доказана активностью этих агонистов в общепринятых анализах, включая анализ на связывание рецептора, анализ циклического АМФ, анализ ίη νΐνο и анализ заживления перелома, все из которых описаны ниже. Кроме того, такие анализы предоставляют методики, посредством которых активности селективных агонистов ЕР4 можно сравнивать друг с другом и с активностями других известных соединений и композиций. Результаты этих сравнений являются полезными для определения уровней дозировки у позвоночных, например у млекопитающих, включая людей, для лечения таких заболеваний.
Анализ ίη νΐνο
Активность анаболических костных агентов в стимулировании остеогенеза и увеличении костной массы можно протестировать у интактных самцов или самок крыс, самцов крыс (подвергнутых орхидэктомии) или самок крыс (подвергнутых овариэктомии), с дефицитом половых гормонов.
В данном исследовании можно использовать самцов или самок крыс различного возраста (как, например, в возрасте 3 месяца). Крысы являются либо интактными, либо кастрированными (овариэктомированными или орхидэктомированными), и им подкожно инъецируют или вводят через зонд агонисты простагландина в различных дозах (таких как 1, 3 или 10 мг/кг/ сутки) в течение 30 суток. У кастрированных крыс лечение начинают на следующие сутки после операции (с целью предупреждения потери кости) или в то время, когда потеря кости уже возникла (с целью восстановления костной массы). Во время исследования всем крысам дают свободный доступ к воде и гранулированному коммерческому корму (Тек1аб Робеп1 ΌίοΙ #8064, Наг1ап Тек1аб, Майкоп, XVI). содержащему 1,46% кальция, 0,99% фосфора и 4,96 ЕД/г витамина Ό3. Всем крысам делают подкожные инъекции 10 мг/кг кальцеина на 12-ые и 2-ые сутки перед умерщвлением. Крыс умерщвляют. Определяют следующие конечные параметры.
Измерения минеральных элементов в бедренной кости.
Правую бедренную кость от каждой крысы удаляют при аутопсии и сканируют, используя двухэнергетическую рентгеновскую абсорбциометрию (ДРА, ΟΌΡ 1000/ν, Но1още 1пс., \Vа1ιйат. МА), оборудованную программным обеспечением «К.едюпа1 Н1дй РехойШоп 8сап» (Но1ощс 1пс., ’№аййат, МА). Размер поля сканирования составляет 5,08х1,902 см, разрешение составляет 0,0254х0,0127 см, и скорость сканирования составляет 7,25 мм/с. Анализируют сканированные изображения бедренной кости и определяют площадь кости, содержание минеральных элементов в кости (ВМС) и минеральную костную плотность (ΒΜΌ) целой бедренной кости (νΕ), дистальных бедренных метафизов (ИРМ), тела бедренной кости (Ε8) и проксимального отдела бедренной кости (ΡΕ).
Гистоморфометрические анализы большеберцовой кости.
Правую большеберцовую кость удаляют при аутопсии, освобождают от мышц и разрезают на три части. Проксимальный отдел большеберцовой кости и тело большеберцовой кости фиксируют в 70%-ном этаноле, обезвоживают при градуированных концентрациях этанола, обезжиривают в ацетоне, затем заключают в метилметакрилат (ЕаНтап Отдатс Сйетюак, Восйейег, ΝΥ).
Фронтальные срезы метафизов проксимального отдела большеберцовой кости с толщиной 4 и 10 мкм нарезают, используя микротом Ве1сйет1-1ипд Ро1уси1 8. Срезы толщиной 4 мкм окрашивают модифицированным красителем трихромом Массона (Маккоп'к Тпсйготе), тогда как срезы толщиной 10 мкм оставляют неокрашенными. Один срез 4 мкм и один срез 10 мкм от каждой крысы используют для гистоморфометрии губчатого вещества кости.
Поперечные срезы тела большеберцовой кости с толщиной 10 мкм нарезают, используя микротом Ве1сйет1-1ипд Ро1уси1 8. Эти срезы используют для гистоморфометрического анализа кортикального слоя кости.
Гистоморфометрия губчатого вещества кости.
Систему гистоморфометрии Вюс.|иап1 О8/2 (Р&М Вютейтск, 1пс., №§^Ше, ΤΝ) используют для статических и динамических гистоморфометрических измерений вторичной спонгиозы метафизов проксимального отдела большеберцовой кости между 1,2 и 3,6 мм дистально к ростовому эпифизарно-пластинчатому соединению. Первые 1,2 мм метафизарного участка большеберцовой кости необходимо исключить, чтобы ограничить измерения вторичной спонгиозой. Срезы толщиной 4 мкм используют для определения показателей, относящихся к объему кости, структуре кости и резорбции кости, тогда как срезы толщиной 10 мкм используют для определения показателей, относящихся к остеогенезу и обновлению кости.
(I) Измерения и расчеты, относящиеся к объему и структуре губчатой кости:(1) Суммарная метафизарная площадь (ТУ, мм2): метафизарная площадь между 1,2 и 3,6 мм дистально к ростовому эпифизарно-пластинчатому соединению. (2) Площадь губчатой кости (ВУ, мм2):
суммарная площадь трабекул в пределах ТУ. (3) Периметр губчатой кости (В8, мм): длина суммарного периметра трабекул. (4) Объем губчатой кости (ВУ/ТУ, %): ВУ/ТУх100. (5) Трабекулярное число кости (ΤΒΝ, #/мм): 1,199/2 хВ8/ТУ. (6) Толщина губчатой кости (ТВТ, мкм): (2000/1,199)х(ВУ/В8). (7) Трабекулярное разделение кости (ТВ8, мкм): (2000х1,199)х(ТУ-ВУ).
(II) Измерения и расчеты, относящиеся к резорбции кости: (1) Число остеокластов (ΘΟΝ, #): суммарное число остеокластов в пределах суммарной метафизарной площади. (2) Периметр остеокластов (ОСР, мм): длина трабекулярного периметра, покрытого остеокластами. (3) Число остеокластов/мм (ОСМ/мм, #/мм): ΟСN/В8. (4) Периметр остеокластов в процентах (% ОСР, %): 0СР/В8х100.
(III) Измерения и расчеты, относящиеся к остеогенезу и обновлению кости: (1) Периметр одинарного мечения кальцеиновой меткой (8Ь8, мм): суммарная длина трабекулярного периметра, меченного одной кальцеиновой меткой. (2) Периметр двойного мечения кальцеиновой меткой (ΌΤ8, мм): суммарная длина трабекулярного периметра, меченного двумя кальцеиновыми метками. (3) Ширина между метками ([ЙАУ. мкм): среднее расстояние между двумя кальцеиновыми метками. (4) Периметр минерализации в процентах (РМ8, %): (8Ь8/2+ПЬ8)/В8х100. (5) Скорость минеральной аппозиции (МАК, мкм/сутки): ШУ/интервал мечения. (6) Отношение скорость остеогенеза/поверхность (ВРК/В8, мкм2/мкм): (8Т8/2+ПЬ8)хМАК/В8. (7) Скорость обновления кости (ВТК, %/у): (8Ь8/2+ПЬ8)хМАК/ВУх100.
Гистоморфометрия кортикального слоя кости.
Для статических и динамических гистоморфометрических измерений кортикального слоя кости тела большеберцовой кости используют систему гистоморфометрии Вюс.|иап1 08/2 (К&М Вютейтск, Ьс., ΝακΗνιΙΙο, ΓΝ). Измеряют суммарную площадь ткани, площадь костномозговой полости, периостальный периметр, эндокортикальный периметр, периметр одинарного мечения, периметр двойного мечения и ширину между метками как на периостальной, так и на эндокортикальной поверхности, и рассчитывают площадь кортикального слоя кости (суммарная площадь ткани - площадь костно-мозговой полости), площадь кортикального слоя кости в процентах (площадь кортикального слоя кости/суммарная площадь ткани х 100), площадь костномозговой полости в процентах (площадь костномозговой полости/суммарная площадь ткани х 100), периостальный и эндокортикальный периметр мечения в процентах [(периметр одинарного мечения/2+периметр двойного мечения)/суммарный периметр х 100], скорость минеральной аппозиции (ширина между метками/интервалы) и скорость остеогенеза [скорость минеральной аппозиции х [(периметр одинарного мечения/2+периметр двойного мечения)/суммарный периметр].
Статистические расчеты.
Статистику можно вычислить, используя пакеты программ 81а1У1ете 4.0 (АЬасик СопсерК Шс., Вегке1еу, СА). Для сравнения различий между группами используют тест дисперсионного анализа (АN0VА), а затем критерий Фишера ΡΤ8Ό (8(а(У1еху, АЬасик С'опсерК Шс., 1918 Воийа Ауе, Вегке1еу, СА 94704-1014).
Определение повышения уровня цАМФ в клеточных линиях 293-8 со стабильной сверхэкспрессией рекомбинантных рецепторов ЕР4 человека.
кДНК, представляющие полноразмерные открытые рамки считывания рецепторов ЕР4 человека, получают путем обратно-транскриптазной полимеразной цепной реакции, используя олигонуклеотидные праймеры на основе опубликованных последовательностей (1) и РНК из первичных легочных клеток человека (ЕР4) в качестве матриц. кДНК клонируют во множественный сайт клонирования рс^NА3 (Iην^ΐ^одеη Сотротайои, 3985В 8отгеи1о Уа11еу В1уб., 8ап П1едо, СА 92121) и используют для трансфекции эмбриональных почечных клеток человека 293-8 посредством кальций-фосфатной копреципитации. Колонии, устойчивые к 0418, выращивают и тестируют на специфичное связывание [3Н]РОЕ2. Трансфектанты, демонстрирующие высокие уровни специфичного связывания [зН]РОЕ2, дополнительно характеризуют с помощью анализа Скэтчарда (8са1сйатб), чтобы определить Втах и Кб для РОЕ2. Линии, отобранные для скрининга соединений, имеют примерно 256400 рецепторов на клетку и Кб=2,9 нМ для РОЕ2 (ЕР4). Конститутивная экспрессия рецептора в родительских клетках 293-8 является незначительной. Клетки поддерживают в среде КΡМI с добавлением фетальной телячьей сыворотки (конечная концентрация 10%) и 0418 (конечная концентрация 700 мкг/мл).
цАМФ-ответы в линиях 293-8/ЕР4 определяют с помощью отделения клеток от культуральных колб в 1 мл забуференного фосфатом физиологического раствора (РВ8) с дефицитом Са++ и Мд++, посредством энергичного встряхивания, добавления свободной от сыворотки КΡМI до конечной концентрации 1х106 клеток/мл и добавления 3-изобутил-1-метилксантина (ШМХ) до конечной концентрации 1 мМ. 1 мл клеточной суспензии немедленно делят на аликвоты в индивидуальные микроцентрифужные пробирки с завинчивающимися крышками объемом 2 мл и инкубируют в течение 10 мин без крышек при 37°С, 5% СО2, относительной влажности 95%. Тестируемое соединение затем добавляют к клеткам в разведениях 1:100, так чтобы конечные концентрации ДМСО или этанола составляли 1%. Немедленно после добавления соединения пробирки закрывают крышками, перемешивают переворачиванием 2 раза и ин кубируют при 37°С в течение 12 мин. Затем образцы подвергают лизису путем инкубации при 100°С в течение 10 мин и немедленно охлаждают на льду в течение 5 мин. Клеточный дебрис осаждают путем центрифугирования при 1000хд в течение 5 мин и очищенные лизаты переносят в свежие пробирки. Концентрации цАМФ определяют, используя имеющийся в продаже набор для радиоиммунологического анализа цАМФ К1А (ΝΕΚ-033, ΌπΡοηί/ΝΕΝ Кекеагсй Ргобис1к, 549 Л1Ьапу 81., Вок1оп, МА 02118), после разведения очищенных лизатов 1:10 в буфере для анализа цАМФ К!А (включенном в набор). Обычно клетки обрабатывают 6-8 концентрациями соединения, которое нужно тестировать, при приращениях 1 1од. Расчеты ЕС50 осуществляют на калькуляторе, используя анализ линейной регрессии на линейных участках кривых доза-ответ.
Ссылки
1. Кедап, IV. Вабеу, Т.1. Реррег1, Ό.Τ Р1егсе, К.Ь. Водагбик, А.М. Эопе11о. ТЕ. ЕаиЬаип, С.Е. Кебхле, К.М. ^ооб^агб, Ό.Ε. апб Об, Ό.ν. 1994. С1оп1пд о! а №ге1 Нитап Ргок1ад1апбш Кесер1ог \\йй Сйагас1епкйск о! 1йе Рйагтасо1од1са11у ЭеПпеб ЕР2 8иЬ1уре. Мо1. Рйагтасо1оду 46: 213220.
Анализ на связывание с рецепторами простагландина Е2.
Препарат мембран.
Все операции проводят при 4°С. Трансфицированные клетки, экспрессирующие рецепторы простагландина Е2 типа 1 (ЕР1), типа 2 (ЕР2), типа 3 (ЕР3) или рецепторы типа 4 (ЕР4), собирают и суспендируют до 2 млн клеток на мл в буфере А [50 мМ Трис-НС1 (рН 7,4), 10 мМ МдС12, 1 мМ ЭДТА, 1 мМ пептида Ре!аЬ1ос (Воейппдег Маппйепп Согр., 1пб1апаройк, ΙΝ), 10 мкМ пептида фосфорамидон (81дта, 81. Ьошк, МО), 1 мкМ пептида пепстатин А (81дта, 81. Ьошк, МО), 10 мкМ эластатинового пептида (81дта, 81. Ьошк, МО), 100 мкМ пептида антипаин (81дта, 81. Ьошк, МО)]. Клетки подвергают лизису путем обработки ультразвуком с помощью Вгапкоп 8ошПег (модель #250, Вгапкоп И1йакошск Со грога! юн ОапЬигу, СТ) в двух вспышках по 15 с. Не подвергшиеся лизису клетки и дебрис удаляют путем центрифугирования при 100хд в течение 10 мин. Затем мембраны собирают путем центрифугирования при 45000хд в течение 30 мин. Осажденные мембраны ресуспендируют до 3-10 г белка на мл буфера А, причем концентрацию белка определяют способом Брэдфорда [ВгабГогб, М., Апа1. Вюсйет., 72, 248 (1976)]. Ресуспендированные мембраны хранят замороженными при -80°С до использования.
Анализ на связывание.
Замороженные мембраны, полученные как описано выше, подвергают оттаиванию и разбавляют до 0,5 мг/мл (для ЕР2 крысы) или 0,3 мг/мл (для ЕР4 крысы) в описанном выше буфе ре А. Один объем препарата мембран объединяют с 0,05 объема тестируемого соединения или буфера и одним объемом 3 нМ 3Нпростагландина Е2 (#ТКК 431, Атегкйат, Аг1шд1оп Не1дй1к, 1Ь) в буфере А. Эту смесь (суммарный объем 205 мкл) инкубируют в течение 1 ч при 25°С. Затем мембраны выделяют путем фильтрования через фильтры из стекловолокна типа ОБ/С (#1205-401, '№а11ас, ОаййегкЬигд, МО), используя сборник Тот1ес (модель Масй ΙΙ/96, Тот1ес, Огапде, СТ). Мембраны со связанным 3Н-простагландином Е2 улавливаются фильтром, тогда как буфер и несвязанный 3Нпростагландин Е2 проходит через фильтр в отходы. Затем каждый образец промывают 3 раза по 3 мл 50 мМ Трис-НС1 (рН 7,4), 10 мМ МдС12, 1 мМ ЭДТА. Затем фильтры высушивают путем нагревания в микроволновой печи. Чтобы определить количество 3Н-простагландина, связанного с мембранами, высушенные фильтры помещают в пластиковые пакеты со сцинтилляционной жидкостью и считают на считывающем устройстве ЬКВ 1205 Ве1ар1а1е ^а11ас, ОаййегкЬигд, МО). ИК50 определяют на основании концентрации тестируемого соединения, необходимой для замещения 50% специфично связанного 3Н-простагландина Е2.
Клетки 2938, экспрессирующие рецепторы либо ЕР2, либо ЕР4 простагландина Е2 крысы, получают согласно способам, известным специалистам в данной области техники. Типично праймеры ПЦР (полимеразной цепной реакции), соответствующие 5'- и 3'-концам опубликованного полноразмерного рецептора, получают согласно хорошо известным способам, раскрытым выше, и их применяют в обратнотранскриптазной полимеразной цепной реакции (ОТ-ПЦР), используя суммарную РНК из почек крысы для обоих рецепторов ЕР2 и ЕР4.
Полноразмерную кодирующую последовательность для рецептора ЕР2 крысы получают, как раскрыто в №то1о е1 а1., Ргок1ад1апбшк, 1997, 54, 713-725. Полноразмерную кодирующую последовательность для рецептора ЕР4 крысы получают, как раскрыто в 8апбо е1 а1., Вюсйет. Вюрйук. Кек. Сотт., 1994, 200, 13291333. Эти полноразмерные рецепторы используют для получения клеток 2938, экспрессирующих рецепторы ЕР2 и ЕР4.
Полноразмерную кодирующую последовательность для рецептора ЕР1 получают, как раскрыто в Бипк е1 а1., 1оигпа1 о! Вю1од1са1 Сйепйк1гу, 1993, 268, 26767-26772. Полноразмерную кодирующую последовательность для рецептора ЕР2 получают, как раскрыто в Кедап е1 а1., Мо1еси1аг Рйагтасо1оду, 1994, 46, 213-220. Полноразмерную кодирующую последовательность для рецептора ЕР3 получают, как раскрыто в Кедап е1 а1., Впбкй 1оигпа1 о! Рйагтасо1оду, 1994, 112, 377-385. Полноразмерную кодирующую последовательность для рецептора ЕР4 получают, как раскрыто в Вакйеп, 1оигпа1 о!
Вю1ощса1 СЬетйку, 1994, 269, 11873-11877. Эти полноразмерные рецепторы используют для получения клеток 2938, экспрессирующих рецепторы ЕР!, ЕР2, ЕР3 и ЕР4.
Клетки 2938, экспрессирующие рецепторы простагландина Е2 человека, либо ЕР!, либо ЕР2, либо ЕР3, либо ЕР4, получают согласно способам, известным специалистам в данной области техники. Типично праймеры ПЦР (полимеразной цепной реакции), соответствующие 5'- и 3'концам опубликованного полноразмерного рецептора, получают согласно хорошо известным способам, раскрытым выше, и их применяют в реакции ОТ-ПЦР, используя суммарную РНК из почек человека (для ЕР1), легких человека (для ЕР2), легких человека (для ЕР3) или лимфоцитов человека (для ЕР4) в качестве источника. Продукты ПЦР клонируют перекрывающимся способом ТА в рСР2.1 (1пуйтодеп, СаткЬаб, СА) и идентичность клонированного рецептора подтверждают секвенированием ДНК.
Клетки 2938 (Мауо, Эер1. ОГ ВюсНетМгу. Ыог1кете81егп Ишу.) трансфицируют клонированным рецептором в рсПЫА3 путем электропорации. Стабильные клеточные линии, экспрессирующие рецептор, устанавливают после отбора трансфицированных клеток С418.
Клональные клеточные линии, экспрессирующие максимальное число рецепторов, выбирают согласно анализу на связывание 3Н-РСЕ2 целыми клетками, используя немеченый РСЕ2 в качестве конкурента.
Анализы заживления перелома Анализ на эффекты по заживлению перелома после системного введения
Методика перелома.
Крыс 8ртадие-ОаМеу в возрасте 3 месяца анестезируют кетамином. Делают надрез 1 см на переднемедиальной стороне проксимального участка большеберцовой кости или бедра. Ниже описана методика операции на большеберцовой кости. Надрез проводят до кости и просверливают отверстие 1 мм на расстоянии 4 мм проксимально к дистальной стороне бугристости большеберцовой кости и 2 мм медиально к переднему гребню. Интрамедуллярный внутрикостный остеосинтез проводят с помощью трубки 0,8 мм из нержавеющей стали (максимальная нагрузка 36,3 Ν, максимальный коэффициент упругости 61,8 Ν/мм, тестированные в таких же условиях, как в костях). Расширение медуллярного канала не проводят. Стандартизованный закрытый перелом производят на 2 мм выше соединения большеберцовой и малоберцовой костей путем сгибания в трех точках, используя специально сконструированные регулируемые щипцы с тупоконечными зажимами. Для минимизирования повреждения мягкой ткани соблюдают осторожность, чтобы не сместить перелом. Кожу соединяют однонитчатыми нейлоновыми швами. Операцию проводят в стерильных условиях. Радиографии всех переломов снимают немедленно после внутрикостного остеосинтеза и крыс с переломами вне пределов определенной диафизарной области или со смещенными остеосинтезами исключают. Оставшихся животных делят случайным образом на следующие группы по 10-12 животных на каждую подгруппу на момент времени для тестирования заживления перелома. Первая группа получает ежесуточно через зонд носитель (вода:100% этанол=95:5) в дозе 1 мл/крысу, тогда как другие получают ежесуточно через зонд от 0,01 до 100 мг/кг/сутки тестируемого соединения (1 мл/крысу), в течение 10, 20, 40 и 80 суток.
На 10-е, 20-е, 40-е и 80-е сутки 10-12 крыс из каждой группы анестезируют кетамином и умерщвляют кровопусканием. Обе большеберцовые-малоберцовые кости извлекают путем рассечения и снимают все мягкие ткани. Кости от 5-6 крыс на каждую группу хранят в 70%-ном этаноле для гистологического анализа, а кости от других 5-6 крыс на каждую группу хранят в забуференном растворе Рингера (+4°С, рН 7,4) для проведения радиографии и биомеханического тестирования, которое осуществляют.
Гистологический анализ.
Способы гистологического анализа сломанной кости опубликованы ранее Мокекббе апб Вак (ТНе ЕГГсск о£ Сго\\111 Ногтопе оп Егас1иге НеаНпд т Рак: А НМо1ощса1 Эе^сприоп. Вопе, 14:19-27, 1993). В кратком изложении, место перелома отпиливают на 8 мм в каждую сторону от линии перелома, заключают без декальцификации в метилметакрилат и нарезают фронтальные срезы на микротоме Ве1сйег1-1ипд Ро1уси1 с толщиной 8 мкм. Среднефронтальные срезы, окрашенные трихромом Массона (включая как большеберцовую, так и малоберцовую кости), используют для визуализации клеточного и тканевого ответа на заживление перелома при лечении и без него. Срезы, окрашенные красителем Сириус красный (8ши5 геб), используют для демонстрации характеристик структуры костной мозоли и для различия между тканевидной костью и пластинчатой костью в месте перелома. Проводят следующие измерения: (1) щель перелома - измеряют как кратчайшее расстояние между концами кортикального слоя кости в переломе; (2) длина костной мозоли и диаметр костной мозоли; (3) суммарный объем кости области костной мозоли; (4) костная ткань на площадь ткани внутри области костной мозоли; (5) фиброзная ткань в костной мозоли и (6) площадь хряща в костной мозоли.
Биомеханический анализ.
Способы биомеханического анализа опубликованы ранее Вак и Апбгеаккеп (ТНе ЕГГеск оГ Ащпд оп Бтас1иге Неайпд ίπ РаК СаЮГ Т|55ие 1п1 45: 292-297, 1989). В кратком изложении, радиографии всех переломов снимают перед биомеханическим тестом. Механические свойства заживающих переломов анализируют с помощью методики деструктивного трех- или четырехточечного сгибания. Определяют максимальную нагрузку, жесткость, усилие при максимальной нагрузке, деформацию при максимальной нагрузке и максимальное напряжение.
Анализ на эффекты по заживлению перелома после местного введения
Методика перелома.
В данном исследовании используют самок или самцов гончих собак в возрасте примерно 2 года, под анестезией. Поперечные радиальные переломы производят путем медленной непрерывной нагрузки при сгибании в трех точках, как описано Ьепейап е! а1. (Ьепейап, Т.М.; Ва1йдапб, М.; Ыипатакет, Ό.Μ.; \Уооб. ЕЕ.: Е£Гес!к оГ ΕΗΌΡ оп Вгас1иге Неайпд ш Эодк. 1. Оййор. Кек. 3:499-507; 1985). Через место перелома протягивают проволоку, чтобы гарантировать полное анатомическое расхождение кости. После этого локальной доставки агонистов простагландина в место перелома достигают посредством медленного высвобождения соединения, доставляемого с помощью гранул медленного высвобождения или путем введения соединений в подходящем препарате, таком как паста, гель, раствор или суспензия, в течение 10, 15 или 20 недель.
Гистологический анализ.
Способы гистологического анализа сломанной кости опубликованы ранее Ре1ег е! а1. (Ре1ет, С.Р.; Соок, \У.О.; Ыипатакег, Ό.Μ.; Ртоуок!, М.Т.; Беебог, 1.О.; Кобап, О.А. ЕГГес!к оГ а1епбтопа1е оп ГгасШге йеайпд апб Ьопе тетобейпд ш бодк. 1. Оййор. Кек. 14:74-70, 1996) и Мокекйбе апб Вак (Тйе ЕГГес!к оГ Сго\\1й Ногтопе оп ГгасШге Неайпд 1п Ка!к: А Н1к!о1одюа1 ЭекспрЦоп. Вопе, 14:1927, 1993). В кратком изложении, после умерщвления место перелома отпиливают на 3 см в каждую сторону от линии перелома, заключают без декальцификации в метилметакрилат и нарезают на микротоме КеюйейЧипд Ро1уси! с толщиной фронтальных срезов 8 мкм. Среднефронтальные срезы, окрашенные трихромом Массона (включая как большеберцовую, так и малоберцовую кости), используют для визуализации клеточного и тканевого ответа на заживление перелома при лечении и без него. Срезы, окрашенные Сириус красным, используют для демонстрации характеристик структуры костной мозоли и для различия между тканевидной костью и пластинчатой костью в месте перелома. Проводят следующие измерения: (1) щель перелома - измеряют как кратчайшее расстояние между концами кортикального слоя кости в переломе; (2) длина костной мозоли и диаметр костной мозоли; (3) суммарный объем кости области костной мозоли; (4) костная ткань на площадь ткани внутри области костной мозоли; (5) фиброзная ткань в костной мозоли и (6) площадь хряща в костной мозоли.
Биомеханический анализ.
Способы биомеханического анализа опубликованы ранее Вак и Апбгеаккеп (Тйе ЕГГес!к оГ Адшд оп ГгасШге Неайпд ш Ка!к. Са1с1Г Т1ккие 1п! 45:292-297, 1989) и Ре!ег е! а1. (Ре!ег, С.Р.; Соок, \У.О.; Ыипатакет, Э.М.; Ртоуок!, М.Т.; 8еебот, 1.О.; Кобап, О.А. ЕГГес!к оГ А1епбгопа!е Оп Гтас!иге Неайпд Апб Вопе Кетобейпд 1п Эодк. 1. Оййор. Кек. 14:74-70, 1996). В кратком изложении, радиографии всех переломов снимают перед биомеханическим тестом. Механические свойства заживающих переломов анализируют с помощью методик деструктивного трех- или четырехточечного сгибания. Определяют максимальную нагрузку, жесткость, усилие при максимальной нагрузке, деформацию при максимальной нагрузке и максимальное напряжение.
Введение селективных агонистов рецептора ЕР4 согласно способам по данному изобретению можно осуществлять любым методом, который доставляет селективный агонист рецептора ЕР4 системно и/или местно (то есть в место перелома кости, остеотомии или ортопедической операции). Эти способы включают в себя пероральные пути, парентеральные, интрадуоденальные пути и так далее. Как правило, соединения по данному изобретению вводят перорально, но можно использовать парентеральное введение (например, внутривенное, внутримышечное, чрескожное, подкожное, ректальное или интрамедуллярное), например, если пероральное введение является не подходящим для мишени или если пациент не способен глотать лекарство.
Способы по данному изобретению используют для лечения и ускорения заживления переломов костей и остеотомии посредством местного применения (например, в местах переломов костей или остеотомии) селективных агонистов рецептора ЕР4. Селективные агонисты рецептора ЕР4 по данному изобретению применяют в местах переломов костей или остеотомии, например, либо путем инъекции соединения в подходящем растворителе (например, масляном растворителе, таком как арахисовое масло) в пластинку роста хряща, либо, в случаях открытых операций, путем местного нанесения в них соединения в подходящем наполнителе, носителе или разбавителе, таком как костный воск, деминерализованный костный порошок, полимерные костные цементы, костные пломбировочные материалы и так далее. Альтернативно, местное применение может быть достигнуто посредством нанесения раствора или дисперсии соединения в подходящем носителе или разбавителе на поверхность твердых или полутвердых имплантатов или включения в твердые или полутвердые имплантаты, традиционно применяемые в ортопедической хирургии, такие как дакроновая сетка, гель-пена и кость к1е1, либо протезы.
В любом случае, количество и время введения соединений будут, несомненно, зависеть от субъекта, которого лечат, от тяжести болезни, от способа введения и от мнения лечащего врача. Таким образом, вследствие вариабельности от пациента к пациенту, указанные в описании изобретения дозировки являются руководством, а врач может титровать дозы лекарственного соединения для достижения лечения (например, нарастания костной массы), которые этот врач считает подходящими для пациента. С учетом степени желаемого лечения врач должен сопоставить ряд факторов, таких как исходный уровень костной массы, возраст пациента, наличие прежде существовавшего заболевания, а также наличие других заболеваний (например, сердечно-сосудистого заболевания).
Как правило, используют такое количество селективного агониста рецептора ЕР4, которое является достаточным для нарастания костной массы до уровня, который находится выше порогового значения перелома кости (как подробно описано в Исследовании Всемирной Организации Здравоохранения, цитируемом выше в данном описании).
Соединения, представляющие собой селективные агонисты рецептора ЕР4, используемые в способах по данному изобретению, как правило, вводят в форме фармацевтической композиции, содержащей по меньшей мере одно из соединений по данному изобретению вместе с фармацевтически приемлемым носителем или разбавителем. Таким образом, селективный агонист рецептора ЕР4 можно вводить индивидуально в любой традиционной пероральной, интраназальной, парентеральной, ректальной или чрескожной лекарственной форме.
Для перорального введения фармацевтическая композиция может принимать форму растворов, суспензий, таблеток, пилюль, капсул, порошков и тому подобного. Таблетки, содержащие различные эксципиенты, такие как цитрат натрия, карбонат кальция и фосфат кальция, применяют вместе с различными разрыхлителями, такими как крахмал и, предпочтительно, картофельный или маниоковый крахмал, и некоторые комплексные силикаты, вместе со связывающими агентами, такими как поливинилпирролидон, сахароза, желатин и аравийская камедь. Кроме того, смазывающие агенты, такие как стеарат магния, лаурилсульфат натрия и тальк, часто являются очень полезными для целей таблетирования. Твердые композиции подобного типа применяют также в качестве наполнителей в мягких и твердых заполненных желатиновых капсулах; предпочтительные материалы в этой связи также включают в себя лактозу или молочный сахар, а также полиэтиленгликоли высокой молекулярной массы. Когда для перорального введения желательны водные суспензии и/или эликсиры, композиции по данному изобретению можно комбинировать с различными подслащивающими агентами, корригирующими агентами, красящими агентами, эмульгирующими агентами и/или суспендирующими агентами, а также с такими разбавителями, как вода, этанол, пропиленгликоль, глицерин и различные подобные их комбинации.
Для целей парентерального введения можно применять растворы в кунжутном или арахисовом масле либо в водном пропиленгликоле, а также стерильные водные растворы соответствующих водорастворимых солей. Такие водные растворы можно соответствующим образом забуферить, если необходимо, а жидкий разбавитель сначала сделать изотоническим достаточным количеством физиологического раствора или глюкозы. Эти водные растворы являются особенно подходящими для целей внутривенных, внутримышечных, подкожных и внутрибрюшинных инъекций. В этой связи все применяемые стерильные водные среды можно легко получить с помощью стандартных методик, хорошо известных специалистам в данной области техники.
Для целей чрескожного (например, местного) введения изготавливают разбавленные стерильные водные или частично водные растворы (обычно в концентрации примерно от 0,1 до 5%), то есть подобные описанным выше парентеральным растворам.
Способы изготовления различных фармацевтических композиций с определенным количеством активного ингредиента известны специалистам в данной области техники или будут понятны им в свете данного описания. Для примеров способов изготовления фармацевтических композиций см. Ксшшд1оп'8 РйаттасеиИса1 Зс1спсс5. Маск РиЫЫипд Сотрапу, Еайоп, Ра., 19‘ь Еййюп (1995).
Протокол исследования
Целью данного исследования является определение того, может ли селективный агонист рецептора ЕР4, и конкретно 7-(2-(3-гидрокси-4фенилбутил)-5-оксопирролидин-1-ил)гептановая кислота, восстанавливать костную массу в модели ОУХ крыс.
Самок крыс 8ргадие-Ба^1еу подвергали овариэктомии (ОУХ) в возрасте 3,5 месяца. Через 10 месяцев после ОУХ этим крысам делали подкожную инъекцию носителя или 7-(2-(3гидрокси-4-фенилбутил)-5-оксопирролидин-1ил)гептановой кислоты в дозе 30 мг/кг/сутки в течение 28 сут. Этих крыс подвергали аутопсии. Правую бедренную кость от каждой крысы удаляли при аутопсии и сканировали, используя двухэнергетическую рентгеновскую абсорбциометрию (БЕХА, ЦБР 1000/У, Но1ощс 1пс., УаИйат, МА), оборудованную программным обеспечением «Кедюпа1 Н1дй КекойШоп 8сап» (Но1ощс 1пс., Уаййат, МА). Размер поля сканирования составлял 5,08х1,902 см, разрешение составляло 0,0254х0,0127 см, и скорость сканирования составляла 7,25 мм/с. Анализировали сканированные изображения бедренной кости. Определяли содержание минеральных элементов в кости (ВМС) и минеральную костную плотность (ΒΜΌ) целой бедренной кости (\УЕ). дистальных бедренных метафизов (ΌΡΜ) и тела бедренной кости (Е8) согласно способу, описанному в Η.Ζ. Ке с1 а1., Ого1ох|Гспс. а №те Е8Сгодсп Ап1адош81/Адош81, Ргсусп18 Вопе Ьо88 ίη ОуапссЮиихсб Ра18. ΕΝΌΟΟΒΙΝΟΕΟΟΥ 136: 2435-2441, 1995.
Результаты исследования и обсуждение
По сравнению с ОУХ крысами, которым вводили носитель, ОУХ крысы, которых лечили 7-(2-(3-гидрокси-4-фенилбутил)-5-оксопирролидин-1-ил)гептановой кислотой, проявляли суммарное значение ВМС бедренной кости, увеличенное на 17%, суммарное значение ΒΜΌ бедренной кости, увеличенное на 13%, значение ВМС дистальной бедренной кости, увеличенное на 8%, значение ΒΜΌ дистальной бедренной кости, увеличенное на 8%, значение ВМС тела бедренной кости, увеличенное на 20%, и значение ΒΜΌ тела бедренной кости, увеличенное на 18%. У крыс, которых лечили 7-(2-(3-гидрокси4-фенилбутил)-5-оксопирролидин-1-ил)гептановой кислотой, не наблюдали никаких РОЕ2подобных побочных эффектов.
Эти данные показывают, что 7-(2-(3-гидрокси-4-фенилбутил)-5-оксопирролидин-1-ил)гептановая кислота, представляющая собой селективный РОЕ2 агонист рецептора ЕР4, стимулирует остеогенез и восстанавливает кость у ОУХ крыс со стабильно нарушенным остеогенезом.
Общие экспериментальные методики
ЯМР-спектры регистрировали на спектрометре Уапап Ипйу 400 (Уапап Со., Ра1о А11о, СайГогша) при температуре примерно 23 °С при 400 МГц для протонных ядер. Химические сдвиги выражены в долях на миллион. Формы пиков обозначены следующим образом: 8, синглет; б, дублет; 1, триплет; с.|. квартет; т, мультиплет; Ь8=широкий синглет. Масс-спектры химической ионизации при атмосферном давлении (АРС1, а1то8р11спс ргс88игс сйст1са1 юшхайоп) получили на спектрометре Е18оп8 Р1а1Гогт II. При описании интенсивности хлор- или бромсодержащих ионов наблюдали ожидаемое отношение интенсивности (примерно 3:1 для 35С1/37С1-содержащих ионов и 1:1 для 79Вг/81Вгсодержащих ионов), и дана интенсивность только иона более низкой массы.
Хроматографию среднего давления проводили, используя систему очистки Β^о1адс (ВюСадс. Эуах Согрогайоп, Сйаг1о11с8уШс, Упд1ша) под давлением азота. Флэш-хроматографию проводили либо с силикагелем ΒηΙ^Γ (40 рт) (1.Т. ΒηΙ^Γ РЫШр8Ьигд, Ν.Ε), либо с силикагелем 60 (ЕМ 8с1спсс8, О1ЬЬ81отеп, N.1.) в стеклянных колоннах при низком давлении азота. Радиальную хроматографию проводили, используя Сйгоша1о1гоп (модель 7924Т, Нат8оп Рс8сагс11). Препаративную хроматографию проводили, используя силикагель Апа11ссй ишр1а1с8 ОЕ (20х20 см) (ЛпаНсск 1пс., №\\агк. ΌΕ). Диметилформамид (ДМФ), тетрагидрофуран (ТГФ) и дихлорметан (СН2С12), используемые в качестве растворителей реакционной смеси, были безводными по степени чистоты, поставляемые Л1бпс11 Сйст1са1 Сотрапу (Μί1\νηιι1<^. \У18соп8т). Термин «концентрировали» относится к удалению растворителя при давлении водного аспиратора на роторном испарителе. Сокращение «ч» ставят для обозначения времени. Термин «ТБАФ» относится к тетрабутиламмония фториду. Термин «ДМАП» относится к диметил аминопиридину. Термины «дихлорметан» и «метиленхлорид» являются синонимами, и их используют взаимозаменяемо на протяжении всего описания, а также в примерах и подготовительных примерах.
Пример 1. 7-{28-[4-(3-Хлорфенил)-3Р-гидроксибутил] -5 -оксопирролидин-1-ил}гептановая кислота.
Стадия А. 7-{2Р-[4-(3-Хлорфенил)-3-оксобут-1 -енил]-5-оксопирролидин-1-ил}гептановой кислоты этиловый эфир.
К раствору [3-(3-хлорфенил)-2-оксопропил]фосфоновой кислоты диметилового эфира (2,66 г, 9,63 ммоль) в ТГФ (35 мл) при 0°С добавляли порциями NаΗ (60% мас./мас. в масле, 426 мг, 10,7 ммоль). Эту реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 40 мин. Эту реакционную смесь охлаждали до 0°С, и добавляли раствор 7-(2Р-формил-5-оксопирролидин-1-ил)гептановой кислоты этилового эфира (предположительно 10,6 ммоль, получен согласно способу, описанному в подготовительном примере 7, но с использованием других количеств реагентов) в ТГФ, и эту реакционную смесь перемешивали в течение 18 ч. Добавляли АсОН и эту реакционную смесь разбавляли Е1ОАс. Органический раствор промывали последовательно насыщенным раствором NаΗСΟз (2х), водой (1х) и рассолом (1х). Органический раствор высушивали (Мд§О4), фильтровали и концентрировали. Остаток очищали путем хроматографии среднего давления, элюируя 15%-ным ацетоном в толуоле с получением 7-{2Р-[4-(3 -хлорфенил)-3-оксо-бут-1-енил] -5 -оксопирролидин-1-ил}гептановой кислоты этилового эфира (2,26 г).
'Н ЯМР (СОС13) δ 7,27-7,15 (т, 3Н), 7,08 (т, 1Н), 6,66 (бб, 1Н), 6,20 (б, 1Н), 4,17 (т, 1Н),
4,11 (ф 2Н), 3,82 (8, 2Н), 3,55 (т, 1Н), 2,72 (т,
1Н), 2,46-2,23 (т, 5Н), 1,79 (т, 1Н), 1,58 (т, 2Н),
1,47-1,20 (т, 9Н); МС 420,2 (М+1), 418,2 (М-1).
Стадия Б. 7-{2К-[4-(3-Хлорфенил)-3Б-гидрокси-бут-1 -енил]-5-оксопирролидин-1-ил}гептановой кислоты этиловый эфир.
К раствору 7-{2К-[4-(3-хлорфенил)-3-оксобут-1 -енил]-5 -оксопирролидин-1-ил}гептановой кислоты этилового эфира (2,1 г, 5,0 ммоль) в безводном СН2С12 (200 мл) добавляли (К)-2метил-СВБ-оксазаборолидин (1 М в толуоле, 5 мл, 5 ммоль) и этот раствор охлаждали до -45°С. Эту реакционную смесь перемешивали в течение 20 мин и добавляли катехолборан (1 М в ТГФ, 15 мл, 15 ммоль). Эту реакционную смесь перемешивали в течение 18 ч при -45°С. Добавляли водную НС1 (1н., 100 мл) и эту реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч. Кислотный водный слой отделяли и органический раствор промывали охлажденным на льду 1н. ЛаОН (2х), затем рассолом (1х). Органический раствор высушивали (Мд§О4), фильтровали и концентрировали. С помощью очистки путем хроматографии среднего давления (от 1:1 ЕЮ Ас: гексаны до 80% ЕЮАс в гексанах) получили 7-{2К-[4-(3хлорфенил)-3Б-гидрокси-бут-1-енил] -5-оксопирролидин-1-ил}гептановой кислоты этиловый эфир (800 мг) в виде смеси 3Б:3К диастереомеров спирта в соотношении примерно 6:1 по 'Н ЯМР.
!Н ЯМР (СПС13) δ 7,23-7,17 (т, 3Н), 7,06 (т, 1Н), 5,67 (бб, 1Н), 5,46 (бб, 1Н), 4,37 (т, 1Н), 4,08 (ф 2Н), 4,00 (т, 1Н), 3,44 (т, 1Н), 2,80 (т, 2Н), 2,67 (т, 1Н), 2,41-2,12 (т, 5Н), 1,70-1,20 (т, 13Н); МС 422,3 (М+1).
Стадия В. 7-{2Б-[4-(3-Хлорфенил)-3К-гидроксибутил]-5-оксопирролидин-1-ил}гептановой кислоты этиловый эфир.
К раствору 7-{2К-[4-(3-хлорфенил)-3Бгидрокси-бут-1 -енил]-5-оксопирролидин-1-ил} гептановой кислоты этилового эфира (800 мг,
1.90 ммоль) в ЕЮН (50 мл) добавляли 10%-ный палладий на углероде (80 мг). Эту реакционную смесь гидрогенировали на встряхивателе Парра при 310,26 кПа (45 фунт/кв.дюйм) в течение 4,5 ч. Катализатор удаляли фильтрованием через Се1ййе® с помощью ЕЮН. С помощью очистки путем хроматографии среднего давления (от 1:1 ЕЮАс: гексаны до 4:1 ЕЮАс/гексаны) получили 7-{2Б-[4-(3-хлорфенил)-3К-гидроксибутил] -5-оксопирролидин-1-ил}гептановой кислоты этиловый эфир (625 мг).
!Н ЯМР (СЭС13) δ 7,27-7,21 (т, 3Н), 7,09 (т, 1Н), 4,10 (т, 2Н), 3,84 (т, 1Н), 3,61 (т, 2Н),
2.90 (т, 1Н), 2,78 (бб, 1Н), 2,68 (т, 1Н), 2,472,25 (т, 4Н), 2,12 (т, 1Н), 1,92-1,22 (т, 17Н); МС 424,3 (М+1).
Стадия Г. 7-{2Б-[4-(3-Хлорфенил)-3К-гидроксибутил] -5 -оксопирролидин-1-ил } гептановая кислота.
К раствору 7-{2Б-[4-(3-хлорфенил)-3Кгидроксибутил]-5-оксопирролидин-1-ил}гептановой кислоты этилового эфира (595 мг, 1,40 ммоль) в ЕЮН (25 мл) добавляли 2н. ЛаОН (6 мл).
Эту реакционную смесь перемешивали в течение 24 ч при комнатной температуре и концентрировали в вакууме до примерно 3/4 исходного объема. Добавляли водную 1н. НС1 до получения рН примерно 2. Этот водный раствор промывали метиленхлоридом (3х). Объединенные органические слои промывали водой, затем рассолом. Органический раствор высушивали (Мд§О4), фильтровали и концентрировали с получением соединения, указанного в заголовке примера 1 (500 мг).
!Н ЯМР (СЭС13) δ 7,26-7,18 (т, 3Н), 7,08 (т, 1Н), 3,84 (т, 1Н), 3,58 (т, 2Н), 2,90 (т, 1Н),
2,77 (бб, 1Н), 2,68 (т, 1Н), 2,43-2,28 (т, 4Н),
2,10 (т, 1Н), 1,78 (т, 1Н), 1,66-1,22 (т, 13Н); МС 396,2 (М+1), 394,2 (М-1).
Пример 2. 7-{2Б-[3К-Гидрокси-4-(3-трифтор-метилфенил)бутил]-5-оксопирролидин-1ил}гептановая кислота.
О
Стадия А. 7-{2-Оксо-5К-[3-оксо-4-(3-трифторметилфенил)-бут-1 -енил]пирролидин-1-ил} гептановой кислоты этиловый эфир.
Следуя методике, описанной для примера 1, стадия А, анион, полученный из [2-оксо-3-(3трифторметилфенил)пропил]фосфоновой кислоты диметилового эфира (4,16 г, 13,40 ммоль) и ЛаН (60%-ный в масле, 590 мг, 14,7 ммоль), подвергали взаимодействию с 7-(2К-формил-5оксопирролидин-1-ил)гептановой кислоты этиловым эфиром (предположительно 14,74 ммоль) в течение 24 ч. С помощью очистки путем хроматографии среднего давления (градиент растворителя от 20% ЕЮАс в гексанах до ЕЮАс) получили 7-{2-оксо-5К-[3-оксо-4-(3-трифторметилфенил)-бут-1 -енил]пирролидин-1-ил}гептановой кислоты этиловый эфир (4,29 г).
!Н ЯМР (СПС13) δ 7,52 (б, 1Н), 7,44 (т, 2Н), 7,37 (б, 1Н), 6,67 (бб, 1Н), 6,22 (б, 1Н), 4,80 (т, 1Н), 4,08 (ф 2Н), 3,90 (8, 2Н), 3,54 (т, 1Н),
2,70 (т, 1Н), 2,37 (т, 2Н), 2,24 (т, 3Н), 1,78 (т, 1Н), 1,56 (т, 2Н), 1,44-1,20 (т, 9Н); МС 454,2 (М+1), 452,2 (М-1).
Стадия Б. 7-{2К-[3Б-Гидрокси-4-(3-трифторметилфенил)-бут-1-енил]-5-оксопирролидин-1-ил}гептановой кислоты этиловый эфир.
К раствору 7-{2-оксо-5К-[3-оксо-4-(3трифторметилфенил)-бут-1-енил]пирролидин-1ил}гептановой кислоты этилового эфира (1,5 г, 3,31 ммоль) и (К)-2-метил-СВБ-оксазаборолидина (1 М в толуоле, 0,5 мл, 0,5 ммоль) в СН2С12 (100 мл) при -45°С добавляли по каплям катехолборан (1 М в ТГФ, 9,9 мл, 9,9 ммоль). Этот раствор перемешивали в течение 24 ч при -45°С и добавляли 1н. НС1. Эту реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч и разделяли слои. Водный раствор промывали СН2С12 (2х) и объединенные органи25 ческие слои промывали последовательно охлажденным на льду 0,5н. ΝαΟΗ и рассолом (2 раза). Органический раствор высушивали (Мд8О4), фильтровали и концентрировали. С помощью очистки путем хроматографии среднего давления (от 50% ЕЮАс в гексанах, до 60% ЕЮАс в гексанах, до 80% ЕЮЛе в гексанах, до ЕЮЛе, до 5% МеОН в СН2С12) получили 7-{2В-[38-гидрокси-4-(3 -трифторметилфенил)-бут-1-енил]-5оксопирролидин-1-ил}гептановой кислоты этиловый эфир (1,23 г) в виде смеси 38:3В диастереомеров спирта в соотношении примерно 5,5:1 по ВЭЖХ-анализу.
Ή ЯМР (СБС13) δ 7,51-7,35 (т, 4Н), 5,72 (άά, 1Н), 5,50 (άά, 1Н), 4,44 (т, 1Н), 4,09 (ф 2Н), 4,01 (т, 1Н), 3,44 (т, 1Н), 2,90 (ά, 2Н), 2,71 (т, 1Н), 2,37-2,12 (т, 5Н), 1,70-1,21 (т, 13Н); МС
456,3 (М+1), 454,3 (М-1).
Стадия В. 7-{28-[3В-Гидрокси-4-(3-трифторметилфенил)бутил]-5-оксопирролидин-1ил}гептановой кислоты этиловый эфир.
Следуя методике, описанной для примера 1, стадия В, раствор 7-{2В-[38-гидрокси-4-(3трифторметилфенил)-бут-1-енил]-5-оксопирролидин-1-ил}гептановой кислоты этилового эфира (1,18 г, 2,59 ммоль) в ЕЮН (50 мл) гидрогенировали в присутствии 10%-ного палладия на углероде (120 мг) при 275,79-310,26 кПа (40-45 фунт/кв.дюйм) на встряхивателе Парра в течение 24 ч. С помощью очистки путем хроматографии среднего давления (от 50% ЕЮ Ас в гексанах, до ЕЮАс, до 1% МеОН в СН2С12, до 3% МеОН в СН2С12, до 5% МеОН в СН2С12, до 10% МеОН в СН2С12) получили 7-{28-[3В-гидрокси4-(3-трифторметилфенил)бутил] -5 -оксопирролидин-1-ил}гептановой кислоты этиловый эфир (1,08 г).
Ή ЯМР (СБС13) δ 7,51-7,39 (т, 4Н), 4,09 (Я, 2Н), 3,86 (т, 1Н), 3,60 (т, 2Н), 2,89 (т, 2Н), 2,76 (т, 1Н), 2,33 (т, 4Н), 2,11 (т, 1Н), 1,80 (т, 1Н), 1,68-1,21 (т, 16Н).
Стадия Г. 7-{28-[3В-Гидрокси-4-(3-трифторметилфенил)бутил]-5-оксопирролидин-1ил}гептановая кислота.
Следуя методике, описанной для примера 1, стадия Г, 7-{28-[3В-гидрокси-4-(3-трифторметилфенил)бутил]-5-оксопирролидин-1-ил}гептановой кислоты этиловый эфир (1,93 г, 4,22 ммоль) подвергали гидролизу 6н. №ЮН (26 мл) в ЕЮН (52 мл) в течение 24 ч. С помощью очистки путем хроматографии среднего давления (от ЕЮАс до 1% МеОН в СН2С12, до 3% МеОН в СН2С12, до 5% МеОН в СН2С12, до 10% МеОН в СН2С12) получили 7-{28-[3В-гидрокси-4-(3трифторметилфенил)бутил]-5-оксопирролидин1-ил}гептановую кислоту (1,66 г).
Ή ЯМР (ΟϋΟ13) δ 7,51-7,39 (т, 4Н), 3,88 (т, 1Н), 3,58 (т, 2Н), 2,84 (т, 3Н), 2,34 (т, 4Н),
2,10 (т, 1Н), 1,80 (т, 1Н), 1,67-1,26 (т, 13Н); МС 430,4 (М+1).
Стадия Д. Натриевая соль 7-{28-[3В-гидрокси-4-(3-трифторметилфенил)бутил]-5-оксопирролидин-1-ил}гептановой кислоты.
К раствору 7-{28-[3В-гидрокси-4-(3-трифторметилфенил)бутил]-5-оксопирролидин-1-ил} гептановой кислоты (1,66 г, 3,87 ммоль) в ЕЮН (16 мл) добавляли NаНСО3 (325 мг, 3,87 ммоль) в воде (3 мл). Эту реакционную смесь перемешивали в течение 5 ч и концентрировали в вакууме. Остаток подвергали азеотропной перегонке с СН2С12 (3х) с получением натриевой соли соединения, указанного в заголовке примера 2 (1,698 г).
Ή ЯМР ((ΊΧΟΙ)) δ 7,48 (т, 4Н), 3,80 (т, 1Н), 3,69 (т, 1Н), 3,52 (т, 1Н), 2,94 (т, 1Н), 2,81 (т, 2Н), 2,32 (т, 2Н), 2,13 (т, 3Н), 1,81 (т, 1Н), 1,69-1,26 (т, 13Н); МС 430,3 (М-№+1), 428,2 (Μ-Να-1).
Пример 3. 58-[4-(3-Хлорфенил)-3-гидроксибутил]-1-[6-(2Н-тетразол-5-ил)гексил]пирролидин-2-он.
Стадия А. 7-{2В-[4-(3-Хлорфенил)-3-оксобут-1-енил]-5-оксопирролидин-1-ил}гептаннитрил.
Следуя методике, описанной для примера 1, стадия А, анион, полученный из [3-(3-хлорфенил)-2-оксопропил]фосфоновой кислоты диметилового эфира (3,35 г, 12,12 ммоль) и №1Н (60%-ный в масле, 533 мг, 13,3 ммоль), подвергали взаимодействию с 7-(2В-формил-5-оксопирролидин-1-ил)гептаннитрилом (предположительно 13,3 ммоль) в течение 18 ч. С помощью очистки путем хроматографии среднего давления (от 20% ЕЮАс в гексанах до 80% ЕЮАс в гексанах) получили 7-{2В-[4-(3-хлорфенил)-3-оксобут-1 -енил]-5-оксопирролидин-1-ил}гептаннитрил (1,52 г).
Ή ЯМР (ΟϋΟ13) δ 7,24 (т, 2Н), 7,17 (8, 1Н), 7,06 (т, 1Н), 6,64 (άά, 1Н), 6,20 (ά, 1Н), 4,15 (т, 1Н), 3,80 (8, 2Н), 3,50 (т, 1Н), 2,72 (т, 1Н), 2,46-2,20 (т, 5Н), 1,78 (т, 1Н), 1,59 (т, 2Н), 1,40 (т, 4Н), 1,24 (т, 2Н).
Стадия Б. 7-{28-[4-(3-Хлорфенил)-3-оксобутил]-5-оксопирролидин-1-ил}гептаннитрил.
Следуя методике, описанной для примера 1, стадия В, 7-{2В-[4-(3-хлорфенил)-3-оксо-бут1-енил]-5-оксопирролидин-1-ил}гептаннитрил (860 мг, 2,31 ммоль) в МеОН (40 мл) гидрогенировали в присутствии 10%-ного палладия на углероде (86 мг) в течение 1 ч. С помощью очистки путем радиальной хроматографии (от гексанов до 20% ЕЮАс в гексанах, до 70% ЕЮАс в гексанах) получили 7-{28-[4-(3-хлорфенил)-3оксобутил]-5-оксопирролидин-1-ил}гептаннитрил (730 мг).
Стадия В. 7-{28-[4-(3-Хлорфенил)-3-гидроксибутил]-5-оксопирролидин-1-ил}гептаннитрил.
К раствору 7-{2§-[4-(3-хлорфенил)-3-оксобутил]-5 -оксопирролидин-1 -ил }гептаннитрила (730 мг, 1,87 ммоль) в МеОН (30 мл) при 0°С добавляли ΝαΒΗ4 (35 мг, 0,921 ммоль). Эту реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 45 мин и добавляли воду. Летучие вещества удаляли в вакууме и остаточный водный раствор разбавляли метиленхлоридом. Органический раствор промывали водой, затем рассолом, высушивали (Мд§О4), фильтровали и концентрировали. С помощью очистки путем хроматографии среднего давления (от 1:1 гексаны:ЕЮАс до ЕЮАс, до 3% МеОН в СН2С12) получили 7-{2Б-[4-(3 -хлорфенил)-3 -гидроксибутил] 5-оксопирролидин-1-ил}гептаннитрил (730 мг).
!Н ЯМР (СЭС13) δ 7,22 (т, 3Н), 7,07 (й, 1Н), 3,80 (т, 1Н), 3,57 (т, 2Н), 2,88 (т, 1Н), 2,78 (т, 1Н), 2,64 (т, 1Н), 2,31 (т, 4Н), 2,10 (т, 1Н), 1,65-1,22 (т, 14Н); МС 377,3 (М+1).
Стадия Г. 5§-[4-(3-Хлорфенил)-3-гидроксибутил]-1-[6-(2Н-тетразол-5-ил)гексил]пирролидин-2-он.
Раствор 7-{2§-[4-(3-хлорфенил)-3-гидроксибутил]-5 -оксопирролидин-1-ил}гептаннитрила (730 мг, 1,94 ммоль), триметилсилилазида (0,63 мл, 0,475 ммоль) и дибутилоловооксида (96 мг, 3,87 ммоль) в толуоле (30 мл) нагревали с обратным холодильником в течение 18 ч. Летучие вещества удаляли в вакууме и остаток разбавляли СН2С12. Органический раствор промывали 1н. НС1, затем рассолом. Органический раствор высушивали (Мд§О4), фильтровали и концентрировали. Остаток очищали путем хроматографии среднего давления, элюируя от ЕЮАс до 2% МеОН в СН2С12, до 7% МеОН в СН2С12 с получением ТМБ-комплекса. Этот остаток разбавляли МеОН, и добавляли 2н. НС1, и этот раствор перемешивали в течение 40 мин. Этот раствор разбавляли СН2С12 и органический слой промывали водой, затем рассолом. Органический раствор высушивали (Мд§О4), фильтровали и концентрировали. Остаток очищали путем хроматографии среднего давления, элюируя от ЕЮАс до 7% МеОН в СН2С12 с получением 5 Б-[4-(3 -хлорфенил)-3-гидроксибутил]-1[6-(2Н-тетразол-5-ил)гексил]пирролидин-2-она (521 мг).
!Н ЯМР (СЭС13) δ 7,23 (т, 3Н), 7,09 (й, 1Н), 3,85 (т, 1Н), 3,66 (т, 1Н), 3,53 (т, 1Н), 2,96 (т, 3Н), 2,81 (т, 1Н), 2,70 (т, 1Н), 2,44 (т, 2Н),
2,18 (т, 1Н), 1,88-1,27 (т, 14Н); МС 420,2 (М+1), 418,3 (М-1).
Пример 4. 5§-[3К-Гидрокси-4-(3-трифторметилфенил)бутил]-1-[6-(2Н-тетразол-5-ил)гексил]пирролидин-2-он.
Стадия А. 7-{2-Оксо-5К-[3-оксо-4-(3-трифторметилфенил)-бут-1 -енил]пирролидин-1-ил} гептаннитрил.
Следуя методике, описанной для примера 1, стадия А, анион, полученный из [2-оксо-3-(3трифторметилфенил)пропил]фосфоновой кислоты диметилового эфира (2,68 г, 8,64 ммоль) и №-1Н (60%-ный в масле, 400 мг, 10 ммоль), подвергали взаимодействию с 7-(2К-формил-5-оксопирролидин-1 -ил)гептаннитрилом (предположительно 10 ммоль) в течение 18 ч. С помощью очистки путем хроматографии среднего давления (от 30% ЕЮАс в гексанах до 80% ЕЮАс в гексанах) получили 7-{2-оксо-5К-[3-оксо-4-(3трифторметилфенил)-бут-1-енил]пирролидин-1ил}гептаннитрил (1,2 г).
!Н ЯМР (СЭС13) δ 7,52 (т, 1Н), 7,45 (т, 2Н), 7,37 (т, 1Н), 6,67 (йй, 1Н), 6,23 (й, 1Н), 4,18 (т, 1Н), 3,90 (8, 2Н), 3,53 (т, 1Н), 2,73 (т, 1Н), 2,45-2,23 (т, 5Н), 1,79 (т, 1Н), 1,60 (т, 2Н), 1,41 (т, 4Н), 1,24 (т, 2Н); МС 407,2 (М+1), 405,3 (М-1).
Стадия Б. 7-{2К-[3§-Гидрокси-4-(3-трифторметилфенил)-бут-1-енил]-5-оксопирролидин1-ил}гептаннитрил.
К раствору 7-{2-оксо-5К-[3-оксо-4-(3-трифторметилфенил)-бут-1 -енил]пирролидин-1-ил} гептаннитрила (1,14 г, 2,81 ммоль) и (К)-2метил-СВБ-оксазаборолидина (1 М в толуоле, 0,42 мл, 0,42 ммоль) в СН2С12 (112 мл) при -45°С добавляли по каплям катехолборан (1 М в ТГФ, 8,4 мл, 8,4 ммоль). Эту реакционную смесь перемешивали при -45°С в течение 18 ч и добавляли 1н. НС1. Эту реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 40 мин и разделяли слои. Органический раствор промывали холодным 1н. №ЮН (3 раза). Органический раствор промывали последовательно 1н. НС1, водой и рассолом. Органический раствор высушивали (Мд§О4), фильтровали и концентрировали. С помощью очистки путем хроматографии среднего давления (от 1:1 гексаны:ЕЮАс до 80% ЕЮАс в гексанах) получили 7-{2К-[3Б-гидрокси-4-(3-трифторметилфенил)-бут-1-енил] -5 -оксопирролидин-1-ил}гептаннитрил (820 мг) в виде 3Б:3К диастереомеров спирта в соотношении примерно 2,5:1 по 'Н ЯМР.
!Н ЯМР (СЭС13) δ 7,51-7,38 (т, 4Н), 5,72 (йй, 1Н), 5,49 (йй, 1Н), 4,45 (т, 1Н), 4,02 (т, 1Н),
3,47 (т, 1Н), 2,90 (т, 2Н), 2,71 (т, 1Н), 2,34 (т, 4Н), 2,18 (т, 1Н), 1,66 (т, 4Н), 1,44 (т, 4Н), 1,27 (т, 2Н); МС 409,2 (М+1).
Стадия В. 7-{2§-[3К-Гидрокси-4-(3-трифторметилфенил)бутил] -5-оксопирролидин-1 -ил} гептаннитрил.
Следуя методике, описанной для примера
1, стадия В, 7-{2К-[3§-гидрокси-4-(3-трифторметилфенил)-бут-1-енил]-5-оксопирролидин-1ил}гептаннитрил (810 мг) в МеОН (40 мл) гидрогенировали в присутствии 10%-ного палладия на углероде (100 мг) при 344,74 кПа (50 фунт/ кв. дюйм) в течение 18 ч на встряхивателе Парра. С помощью очистки путем хроматографии среднего давления (от 1:1 гексаны:Е!ОАс до Е!ОАс, до 3% МеОН в СН2С12) получили 7-{28[3К-гидрокси-4-(3-трифторметилфенил)бутил]5-оксопирролидин-1-ил}гептаннитрил (720 мг).
1Н ЯМР (СЭС13) δ 7,44 (т, 4Н), 3,84 (т, 1Н), 3,58 (т, 2Н), 2,88 (т, 2Н), 2,73 (т, 1Н), 2,32 (т, 4Н), 2,11 (т, 1Н), 1,78 (т, 1Н), 1,65-1,37 (т, 11Н), 1,30 (т, 2Н); МС 411,2 (М+1).
Стадия Г. 58-[3К-Гидрокси-4-(3-трифторметилфенил)бутил]-1-[6-(2Н-тетразол-5-ил)гексил]пирролидин-2-он.
Следуя методике, описанной для примера 3, стадия Г, 7-{28-[3К-гидрокси-4-(3-трифторметилфенил)бутил]-5-оксопирролидин-1-ил}гептаннитрил (710 мг, 1,73 ммоль) подвергали взаимодействию с азидотриметилсиланом (399 мг, 3,46 ммоль) и дибутилоловооксидом (43 мг, 1,7 ммоль) в толуоле (25 мл), нагревали с обратным холодильником в течение 18 ч. Летучие вещества удаляли в вакууме и остаток разбавляли СН2С12. Органический раствор промывали 1 н НС1 (2 раза), водой (1 раз) и рассолом (1 раз). Органический раствор высушивали (Мд§О4), фильтровали и концентрировали. Остаток очищали путем хроматографии среднего давления, элюируя от Е!ОАс до 2% МеОН в СН2С12, до 8% МеОН в СН2С12, с получением 58-[3К-гидрокси4-(3 -трифторметилфенил)бутил]- 1-[6-(2Н-тетразол-5-ил)гексил]пирролидин-2-она (450 мг).
Ή ЯМР (СЭС13) δ 7,44 (т, 4Н), 3,87 (т, 1Н), 3,65 (т, 1Н), 3,50 (т, 1Н), 3,01-2,73 (т, 5Н), 2,42 (т, 2Н), 2,16 (т, 1Н), 1,86-1,23 (т, 14Н); МС 454,4 (М+1), 452,4 (М-1).
Стадия Д. Натриевая соль 58-[3Кгидрокси-4-(3 -трифторметилфенил)бутил] -1-[6(2Н-тетразол-5-ил)гексил]пирролидин-2-он.
Следуя методике, описанной для примера 2, стадия Д, 58-[3К-гидрокси-4-(3-трифторметилфенил)бутил]-1-[6-(2Н-тетразол-5-ил)гексил] пирролидин-2-он (428 мг, 0,944 ммоль) обрабатывают ЫаНСО3 (79 мг, 0,94 ммоль) с получением натриевой соли.
Ή ЯМР (СЭС13) δ 7,48 (т, 4Н), 3,79 (т, 1Н), 3,67 (т, 1Н), 3,51 (т, 1Н), 2,86 (т, 5Н), 2,30 (т, 2Н), 2,12 (т, 1Н), 1,84-1,27 (т, 14Н); МС
454,4 (М-Ыа+1), 452,4 (М-Ыа-1).
Пример 5. 5-[4-(4-Фторфенил)-3-гидроксибутил]-1-[6-(2Н-тетразол-5-ил)гексил]пирролидин-2-он.
Стадия А. 7-{2-[3-(трет-Бутилдиметилсиланилокси)-4-(4-фторфенил)бутил]-5-оксопирролидин-1-ил}гептаннитрил.
Раствор 5-[3-(трет-бутилдиметилсиланилокси)-4-(4-фторфенил)бутил]пирролидин-2-она (150 мг, 0,41 ммоль) в ДМФ (5 мл) добавляли к ЫаН (60% мас./мас. в масле, 16 мг, 0,41 ммоль) в ДМФ (10 мл). Через 1,5 ч добавляли 7-бромгептаннитрил (78 мг, 0,41 ммоль) в ДМФ (5 мл) и эту реакционную смесь перемешивали при 90°С в течение 2,5 ч. Добавляли воду (20 мл) и водный раствор промывали Е!ОАс (4х15 мл). Объединенные органические растворы промывали водой (2х15 мл), высушивали (Мд§О4), фильтровали и концентрировали. Остаток очищали путем хроматографии среднего давления (1:1 гексаны:Е!ОАс) с получением 7-{2-[3-(третбутилдиметилсиланилокси)-4-(4-фторфенил)бутил]-5-оксопирролидин-1-ил}гептаннитрила (161 мг).
1Н ЯМР (СЭС13) δ 7,09 (т, 2Н), 6,95 (т, 2Н), 3,81 (т, 1Н), 3,54 (т, 2Н), 2,86 (т, 1Н), 2,68 (т, 2Н), 2,29 (т, 4Н), 2,06 (т, 1Н), 1,74-1,23 (т, 13Н), 0,85 (8, 9Н), 0,04 (т, 3Н), 0,19 (т, 3Н); МС
475,1 (М+1).
Стадия Б. 7-{2-[4-(4-Фторфенил)-3-гидроксибутил]-5-оксопирролидин-1-ил}гептаннитрил.
К раствору 7-{2-[3-(трет-бутилдиметилсиланилокси)-4-(4-фторфенил)бутил]-5-оксопирролидин-1-ил}гептаннитрила (158 мг, 0,333 ммоль) в ТГФ (20 мл) при 0°С добавляли ТБАФ (1М в ТГФ, 0,50 мл, 0,50 ммоль). Эту реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч и добавляли насыщенный водный ЫаНСО3. Летучие вещества удаляли в вакууме. Остаточный водный раствор промывали СН2С12 (4х5 мл) и объединенные органические растворы высушивали (Мд§О4), фильтровали и концентрировали. Остаток очищали путем хроматографии среднего давления (от 1:1 гексаны:Е!ОАс до Е!ОАс) с получением 7-[2-[4-(4фторфенил)-3-гидроксибутил]-5-оксопирролидин-1-ил}гептаннитрила (82 мг).
1Н ЯМР (СЭС13) δ 7,15 (т, 2Н), 7,00 (т, 2Н), 3,77 (т, 1Н), 3,58 (т, 2Н), 2,89 (т, 1Н), 2,79 (т, 1Н), 2,64 (т, 1Н), 2,34 (т, 4Н), 2,12 (т, 1Н),
1,68-1,24 (т, 14Н); МС 361,2 (М+1).
Стадия В. 5-[4-(4-Фторфенил)-3-гидроксибутил]-1-[6-(2Н-тетразол-5-ил)гексил]пирролидин-2-он.
Следуя методике, описанной для примера 3, стадия Г, 7-{2-[4-(4-фторфенил)-3-гидроксибутил]-5-оксопирролидин-1-ил}гептаннитрил (71 мг, 0,197 ммоль) подвергали взаимодействию с азидотриметилсиланом (45 мг, 0,394 ммоль) и дибутилоловооксидом (5 мг, 0,02 ммоль) в толуоле (10 мл), нагревали с обратным холодильником в течение 16 ч. Добавляли дополнительные количества азидотриметилсилана (200 мг) и дибутилоловооксида (50 мг) и эту реакционную смесь нагревали с обратным холодильником в течение 5 ч. Эту реакционную смесь подкисляли 1 н. НС1 до рН=2 (5 мл) и водный раствор промывали Е!ОАс (4х10 мл). Объединенные органические растворы высушивали (Мд§О4), фильтровали и концентрировали. С помощью очистки путем хроматографии среднего давления (от Е10Ас до 39:1 Е10Ас:МеОН, до 19:1 Е10Ас:МеОН) получили соединение, указанное в заголовке примера 5А (39 мг).
'Н ЯМР (СИС13) δ 7,16 (т, 2Н), 7,00 (т, 2Н), 3,81 (т, 1Н), 3,68 (т, 1Н), 3,53 (т, 1Н), 2,99 (т, 3Н), 2,80 (т, 1Н), 2,68 (т, 1Н), 2,47 (т, 2Н), 2,20 (т, 1Н), 1,88-1,22 (т, 14Н); МС 404,3 (М+1), 402,3 (М-1).
Пример 6. 5-(4-Бифенил-3-ил-3-гидроксибутил)-1 -[6-(2Н-тетразол-5 -ил)гексил] пирролидин-2-он.
Стадия А. 7-{2-[4-Бифенил-3-ил-3-(третбутилдиметилсиланилокси)бутил]-5-оксопирролидин-1-ил}гептаннитрил.
Следуя методике, описанной для примера 5, стадия А, анион, полученный из 5-[4-(бифенил-3-ил-3 -(трет-бутилдиметилсиланилокси) бутил] пирролидин-2-она (239,1 мг, 0,564 ммоль) и №1НМЭ8 (1 М в ТГФ, 0,67 мл, 0,67 ммоль), алкилировали 7-бромгептаннитрилом (118 мг, 0,620 ммоль) при 70°С в течение 24 ч. С помощью очистки путем хроматографии среднего давления (от СН2С12 до 1% МеОН в СН2С12, до 2% МеОН в СН2С12, до 4% МеОН в СН2С12) получили 7-{ 2- [(4-бифенил-3 -ил-3-(трет-бутилдиметилсиланилокси)бутил]-5 -оксопирролидин-1ил}гептаннитрил (187 мг). МС 533,3 (М+1).
Стадия Б. 7-[2-(4-Бифенил-3-ил-3-гидроксибутил)-5 -оксопирролидин-1-ил] гептаннитрил.
Следуя методике, описанной для примера 5, стадия Б, 7-{2-[4-бифенил-3-ил-3-(трет-бутилдиметилсиланилокси)бутил]-5-оксопирролидин1-ил}гептаннитрил (187 мг, 0,351 ммоль) подвергали удалению защиты с помощью ТБАФ (1 М в ТГФ, 0,53 мл, 0,53 ммоль). Добавление проводили при 0°С и эту реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 24 ч. С помощью очистки путем хроматографии среднего давления (от СН2С12 до 1% МеОН в СН2С12, до 2% МеОН в СН2С12, до 6% МеОН в СН2С12, до 10% МеОН в СН2С12) получили 7-[2(4-бифенил-3-ил-3-гидроксибутил)-5оксопирролидин-1-ил]гептаннитрил (85 мг).
'|| ЯМР (СИС13) δ 7,58 (т, 1Н), 7,51-7,33 (т, 4Н), 7,21-7,12 (т, 4Н), 3,85 (т, 1Н), 3,60 (т, 2Н), 2,90 (т, 1Н), 2,83-2,60 (т, 2Н), 2,45-2,30 (т, 4Н), 2,14 (т, 1Н), 1,73-1,25 (т, 14Н).
Стадия В. 5-(4-Бифенил-3-ил-3-гидроксибутил)-1-[6-(2Н-тетразол-5-ил)-гексил]пирролидин-2-он.
Следуя методике, описанной для примера 3, стадия Г, 7-[2-(4-бифенил-3-ил-3-гидроксибутил)-5-оксопирролидин-1-ил]гептаннитрил (109 мг, 0,260 ммоль) подвергали взаимодействию с азидотриметилсиланом (0,69 мл, 0,52 ммоль) и дибутилоловооксидом (11 мг, 0,044 ммоль) в толуоле (5,3 мл), нагревали с обратным холодильником в течение 72 ч. Эту реакционную смесь охлаждали и добавляли воду. Эту смесь подкисляли 1н. НС1 до рН=2 (5 мл) и водный раствор промывали 5% МеОН в СН2С12 (3 раза). Объединенные органические растворы высушивали (Мд§04), фильтровали и концентрировали. С помощью очистки путем хроматографии среднего давления (от 1:1 гексаны:Е10Ас до ЕЮАс, до 2% МеОН в СН2С12, до 4% МеОН в СН2С12, до 8% МеОН в СН2С12) получили соединение, указанное в заголовке примера 6 (107 мг).
'|| ЯМР (СВС13) δ 7,57 (т, 1Н), 7,51-7,32 (т, 4Н), 7,25-7,13 (т, 4Н), 3,91 (т, 1Н), 3,743,50 (т, 2Н), 2,96 (т, 3Н), 2,77 (т, 1Н), 2,50 (т, 2Н), 2,22 (т, 1Н), 2,07 (т, 1Н), 1,90-1,22 (т, 14Н); МС 462,2 (М+1), 460,1 (М-1).
Пример 7. 5-[4-(3-Фторфенил)-3-гидроксибутил]-1-[6-(2Н-тетразол-5-ил)гексил]пирроли-
Стадия А. 7-{2-[3-(трет-Бутилдиметилсиланилокси)-4-(3-фторфенил)бутил]-5-оксопирролидин-1 -ил}гептаннитрил.
Следуя методике, описанной для примера 5, стадия А, анион, полученный из 5-[3-(третбутилдиметилсиланилокси)-4-(3-фторфенил)бутил]пирролидин-2-она (250 мг, 0,684 ммоль) и №1НМЭ8 (1 М в ТГФ, 0,80 мл, 0,80 ммоль), алкилировали 7-бромгептаннитрилом (142 мг, 0,748 ммоль) при 70°С в течение 72 ч. С помощью очистки путем хроматографии среднего давления (от 1:1 гексаны:Е10Ас до ЕЮАс, до 5% МеОН в СН2С12) получили 7-{2-[3-(трет-бутилдиметилсиланилокси)-4-(3-фторфенил)бутил]-5оксопирролидин-1-ил}гептаннитрил (261,7 мг).
'|| ЯМР (СВС13) δ 7,26 (т, 1Н), 6,92 (т, 3Н), 3,89 (т, 1Н), 3,59 (т, 2Н), 2,89 (т, 1Н), 2,75 (т, 2Н), 2,36 (т, 4Н), 2,11 (т, 1Н), 1,72-1,26 (т, 13Н), 0,89 (8, 9Н), 0,09 (8, 6Н); МС 475,3 (М+1).
Стадия Б. 7-{2-[4-(3-Фторфенил)-3-гидроксибутил]-5-оксопирролидин-1-ил}гептаннитрил.
Следуя методике, описанной для примера 5, стадия Б, 7-{2-[3-(трет-бутилдиметилсиланилокси)-4-(3-фторфенил)бутил]-5-оксопирролидин1-ил}гептаннитрил (261,7 мг, 0,551 ммоль) подвергали удалению защиты с помощью ТБАФ (1 М в ТГФ, 0,83 мл, 0,83 ммоль). Добавление проводили при 0°С и эту реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 24 ч. С помощью очистки путем хроматографии среднего давления (от СН2С12 до 1% МеОН в СН2С12, до 2% МеОН в СН2С12, до 4% МеОН в СН2С12) получили 7-{2-[4-(3-фторфенил)-3-гидроксибутил]-5-оксопирролидин-1-ил}гептаннитрил (141 мг).
Ή ЯМР (СИС13) δ 7,32 (т, 1Н), 6,98 (т, 3Н), 3,86 (т, 1Н), 3,64 (т, 2Н), 2,99-2,80 (т, 2Н),
2,71 (т, 1Н), 2,38 (т, 4Н), 2,16 (т, 1Н), 1,74-1,29 (т, 14Н); МС 361,3 (М+1).
Стадия В. 5-[4-(3-Фторфенил)-3-гидроксибутил]-1-[6-(2Н-тетразол-5-ил)гексил]пирролидин-2-он.
Следуя методике, описанной для примера 6, стадия В, 7-{2-[4-(3-фторфенил)-3-гидроксибутил]-5 -оксопирролидин-1 -ил}гептаннитрил (141,3 мг, 0,392 ммоль) подвергали взаимодействию с азидотриметилсиланом (0,210 мл, 1,57 ммоль) и дибутилоловооксидом (29 мг, 0,116 ммоль) в толуоле (8 мл), нагревали с обратным холодильником в течение 72 ч. С помощью очистки путем хроматографии среднего давления (от СН2С12 до 2% МеОН в СН2С12, до 4% МеОН в СН2С12, до 6% МеОН в СН2С12) получили соединение, указанное в заголовке примера 5В (101,5 мг).
Ή ЯМР (СОС13) δ 7,26 (т, 1Н), 6,94 (т, 3Н), 3,87 (т, 1Н), 3,70 (т, 1Н), 3,52 (т, 1Н), 2,98 (т, 3Н), 2,78 (т, 2Н), 2,48 (т, 2Н), 2,20 (т, 1Н), 1,89-1,24 (т, 14Н); МС 404,2 (М+1), 401,9 (М-1).
Пример 8. 58-[4-(3-Хлорфенил)-3К-гидроксибутил]-1-[6-(2Н-тетразол-5-ил)гексил]пирролидин-2-он.
Стадия А. 7-{2К-[38-Гидрокси-4-(3-хлорфенил)-бут-1-енил] -5 -оксопирролидин-1-ил}гептаннитрил.
К раствору 7-{2-оксо-5К-[3-оксо-4-(3-хлорфенил)-бут-1-енил]пирролидин-1-ил}гептаннитрила (1,62 г, 4,34 ммоль) в СН2С12 (200 мл) при -45°С добавляли (К)-2-метил-СВ8-оксазаборолидин (1 М в толуоле, 1,3 мл, 1,3 ммоль). После перемешивания в течение 20 мин добавляли по каплям катехолборан (1 М в ТГФ, 13 мл, 13 ммоль). Эту реакционную смесь перемешивали при -45°С в течение 16 ч и добавляли 1н. НС1. Эту реакционную смесь нагревали до комнатной температуры и разделяли слои. Органический раствор промывали холодным 1н. ЫаОН (3 раза). Органический раствор промывали последовательно 1н. НС1, водой и рассолом. Органический раствор высушивали (Мд§О4), фильтровали и концентрировали. С помощью очистки путем хроматографии среднего давления (от 1:1 гексаны:ЕЮАс до 20% МеОН в СН2С12) получили 7-{2К-[38-гидрокси-4-(3-хлорфенил)-бут1-енил]-5-оксопирролидин-1-ил}гептаннитрил (536 мг) в виде смеси 38:3К спиртов в соотношении 8,2:1 по ВЭЖХ.
Ή ЯМР (СПС13) δ 7,24-7,17 (т, 3Н), 7,07 (т, 1Н), 5,69 (бб, 1Н), 5,46 (бб, 1Н), 4,40 (т, 1Н), 4,01 (т, 1Н), 3,46 (т, 1Н), 2,81 (т, 2Н), 2,68 (т, 1Н), 2,42-2,28 (т, 4Н), 2,20 (т, 1Н), 1,73-1,59 (т, 4Н), 1,42 (т, 4Н), 1,25 (т, 2Н); МС 375 (М+1).
Стадия Б. 7-{28-[4-(3-Хлорфенил)-3К-гидроксибутил]-5-оксопирролидин-1-ил}гептаннитрил.
Следуя методике, описанной для примера 4, стадия В, 7-{2К-[38-гидрокси-4-(3-хлорфенил)бут-1 -енил]-5 -оксопирролидин-1-ил}гептаннитрил (536 мг) в ЕЮН (30 мл) гидрогенировали в присутствии 10%-ного палладия на углероде (60 мг) в течение 3,5 ч. С помощью очистки путем хроматографии среднего давления (от 1:1 гексаны:ЕЮАс до 20% МеОН в СН2С12) получили 7-{28-[4-(3-хлорфенил)-3К-гидроксибутил]5-оксопирролидин-1-ил}гептаннитрил (440 мг).
'|| ЯМР (СВС13) δ 7,22 (т, 3Н), 7,08 (т, 1Н), 3,83 (т, 1Н), 3,59 (т, 2Н), 2,90 (т, 1Н), 2 77 (бб, 1Н), 2,66 (бб, 1Н), 2,39-2,29 (т, 4Н), 2,11 (т, 1Н), 1,78 (т, 1Н), 1,68-1,39 (т, 11Н), 1,29 (т, 2Н); МС 377,2 (М+1).
Стадия В. 8-[4-(3-Хлорфенил)-3К-гидроксибутил]-1-[6-(2Н-тетразол-5-ил)гексил]пирролидин-2-он.
Следуя методике, описанной для примера 3, стадия Г, смесь 7-{28-[4-(3-хлорфенил)-3Кгидроксибутил] -5-оксо -пирролидин-1-ил }гептаннитрила (420 мг, 1,114 ммоль), триметилсилил азида (257 мг, 2,23 ммоль) и дибутилоловооксида (56 мг) в толуоле (30 мл), нагревали с обратным холодильником в течение 16 ч. Летучие вещества удаляли в вакууме и остаток растворяли в МеОН и перемешивали с 3н. НС1 в течение 3 ч. Эту реакционную смесь разбавляли водой и СН2С12 и разделяли слои. Органический слой промывали водой, затем рассолом. Органический раствор высушивали (Мд§О4), фильтровали и концентрировали. С помощью очистки путем хроматографии среднего давления (от ЕЮАс до 2% МеОН в СН2С12, до 7% МеОН в СН2С12) получили 58-[4-(3-хлорфенил)-3К-гидроксибутил]-1-[6-(2Н-тетразол-5-ил)гексил]пирролидин-2-он (311 мг).
'Н ЯМР (СВС13) δ 7,22 (т, 3Н), 7,08 (т, 1Н), 3,86 (т, 1Н), 3,66 (т, 1Н), 3,52 (т, 1Н), 2,96 (т, 3Н), 2,82-2,68 (т, 2Н), 2,45 (т, 2Н), 2,17 (т, 1Н), 1,88-1,22 (т, 14Н); МС 420,2 (М+1), 418,3 (М-1).
Пример 9. 7-{2К-[3-Гидрокси-4-(3-феноксифенил)-бут-1-енил]-5-оксо-пирролидин-1-ил} гептановая кислота.
Стадия А. 7-{2-Оксо-5К-[3-оксо-4-(3-феноксифенил)-бут-1 -енил]-пирролидин-1-ил}гептановой кислоты этиловый эфир.
Следуя методике, описанной для примера
1, стадия А, анион, полученный из [2-оксо-3-(3феноксифенил)пропил]фосфоновой кислоты диметилового эфира (633 мг, 1,98 ммоль) и ЫаН (60%-ный в масле, 70 мг, 1,74 ммоль), подверга35 ли взаимодействию с 7-(2К-формил-5-оксопирролидин-1-ил)гептановой кислоты этиловым эфиром (предположительно 1,58 ммоль) в течение 24 ч. С помощью очистки путем хроматографии среднего давления (ЕЮАс) получили 7{2-оксо-5К-[3 -оксо-4-(3-феноксифенил)-бут-1енил]пирролидин-1-ил}гептановой кислоты этиловый эфир (215 мг).
Ή ЯМР (СБС13) δ 7,28 (т, 3Н), 7,08 (т, 1Н), 6,97 (т, 2Н), 6,89 (т, 2Н), 6,83 (т, 1Н), 6,62 (йй, 1Н), 6,19 (й, 1Н), 4,13 (т, 1Н), 4,08 (ф 2Н), 3,79 (к, 2Н), 3,51 (т, 1Н), 2,68 (т, 1Н), 2,35 (т, 2Н), 2,24 (т, 3Н), 1,75 (т, 1Н), 1,54 (т, 2Н), 1,43-1,20 (т, 9Н).
Стадия Б. 7-{2К-[3-Гидрокси-4-(3-феноксифенил)-бут-1 -енил]-5-оксопирролидин-1-ил} гептановой кислоты этиловый эфир.
Следуя методике, описанной для примера 3, стадия В, 7-{2-оксо-5К-[3-оксо-4-(3-феноксифенил)-бут-1-енил] пирролидин-1-ил }гептановой кислоты этиловый эфир (215 мг, 0,451 ммоль) подвергали взаимодействию с ИаВН4 (17 мг, 0,45 ммоль) в ЕЮН (3 мл) при 0°С в течение 4 ч. С помощью очистки путем хроматографии среднего давления (ЕЮАс) получили 7-{2К-[3гидрокси-4-(3 -феноксифенил)-бут-1-енил]-5-оксопирролидин-1-ил}гептановой кислоты этиловый эфир (167 мг).
Ή ЯМР (СБС13) δ 7,33 (т, 2Н), 7,25 (т, 1Н), 7,10 (т, 1Н), 6,99 (т, 2Н), 6,93 (т, 1Н), 6,86 (т, 2Н), 5,72 (т, 1Н), 5,45 (т, 1Н), 4,37 (т, 1Н),
4,10 (ф 2Н), 3,47 (т, 1Н), 2,82 (т, 3Н), 2,35 (т, 2Н), 2,26 (ΐ, 2Н), 2,15 (т, 1Н), 1,70-1,21 (т, 13Н).
Стадия В. 7-{2К-[3-Гидрокси-4-(3-феноксифенил)-бут-1 -енил]-5-оксопирролидин-1-ил} гептановая кислота.
Следуя методике, описанной для примера 1, стадия Г, 7-{2К-[3-гидрокси-4-(3-феноксифенил)-бут-1 -енил]-5-оксопирролидин-1-ил}гептановой кислоты этиловый эфир (29 мг, 0,060 ммоль) подвергали гидролизу 2 М ИаОН в ЕЮН (4,0 мл) при комнатной температуре в течение 24 ч с получением соединения, указанного в заголовке (20 мг).
Ή ЯМР (СБС13) δ 7,33-7,21 (т, 3Н), 7,08 (т, 1Н), 6,98-6,84 (т, 5Н), 5,70 (т, 1Н), 5,44 (т, 1Н), 4,36 (т, 1Н), 4,00 (т, 1Н), 3,44 (т, 1Н), 2,85-2,51 (т, 3Н), 2,32 (т, 4Н), 2,14 (т, 1Н),
1,68-1,18 (т, 10Н).
Пример 10. 7-{28-[3-Гидрокси-4-(3-феноксифенил)бутил]-5-оксопирролидин-1-ил}гептановая кислота.
О сха°'О
Стадия А. 7-{28-[3-Гидрокси-4-(3-феноксифенил)бутил]-5-оксопирролидин-1-ил}гептановой кислоты этиловый эфир.
Следуя методике, описанной для примера 1, стадия В, смесь 7-{2К-[3-гидрокси-4-(3-фе
ноксифенил)бут-1 -енил] -5 -оксопирролидин- 1-ил } гептановой кислоты этилового эфира (139 мг, 0,290 ммоль), МеОН (30 мл) и 10%-ного палладия на углероде (14 мг) гидрогенировали на встряхивателе Парра при 344,74 кПа (50 фунт/ кв.дюйм) в течение 18 ч. С помощью очистки путем хроматографии среднего давления (1:1 гексаны:ЕЮАс) получили 7-{28-[3-гидрокси-4(3 -феноксифенил)бутил]-5-оксопирролидин-1ил}гептановой кислоты этиловый эфир (86 мг).
Ή ЯМР (СБС13) δ 7,35-7,24 (т, 3Н), 7,10 (т, 1Н), 6,99 (т, 2Н), 6,93 (т, 1Н), 6,87 (т, 2Н), 4,09 (ф 2Н), 3,80 (т, 1Н), 3,58 (т, 2Н), 2,82 (т, 2Н), 2,64 (т, 1Н), 2,42-2,24 (т, 4Н), 2,10 (т, 1Н),
1,77 (т, 1Н), 1,66-1,21 (т, 16Н).
Стадия Б. 7-{28-[3-Гидрокси-4-(3-феноксифенил)бутил]-5 -оксопирролидин-1-ил }гептано вая кислота.
Следуя методике, описанной для примера 1, стадия Г, 7-{28-[3-гидрокси-4-(3-феноксифенил)бутил]-5 -оксопирролидин-1-ил}гептановой кислоты этиловый эфир (86 мг, 1,79 ммоль) подвергали гидролизу 2н. ИаОН в МеОН (4 мл) в течение 18 ч с получением соединения, указанного в заголовке (62 мг).
Ή ЯМР (СБС13) δ 7,33-7,23 (т, 3Н), 7,09 (т, 1Н), 6,98 (т, 2Н), 6,91 (т, 1Н), 6,86 (т, 2Н), 3,80 (т, 1Н), 3,56 (т, 2Н), 2,88 (т, 1Н), 2,77 (т, 1Н), 2,64 (т, 1Н), 2,38-2,28 (т, 4Н), 2,09 (т, 1Н),
1,77 (т, 1Н), 1,64-1,21 (т, 13Н).
Подготовительный пример 1. 7-(2К-Гидроксиметил-5-оксопирролидин-1-ил)гептаннитрил.
Стадия А. 7-[2К-(трет-Бутилдиметилсиланилоксиметил)-5-оксопирролидин-1-ил]гептаннитрил.
К смеси ИаН (60%-ный в масле, 3,836 г, 0,0959 ммоль, промыт 25 мл ДМФ) в ДМФ (250 мл) добавляли раствор 5К-(трет-бутилдиметилсиланилоксиметил)пирролидин-2-она (ТеГгайейгоп: АкуттеГгу, 1996, 7, 2113) (20,00 г, 87,19 ммоль) в ДМФ (50 мл). Эту реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение
1,5 ч и добавляли раствор 7-бромгептаннитрила (16,574 г, 87,19 ммоль) в ДМФ (50 мл). Эту реакционную смесь перемешивали при 90°С в течение 3 ч. Эту реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и добавляли воду (750 мл). Водный раствор промывали ЕЮАс (4х250 мл). Объединенные органические растворы промывали водой (2х250 мл), высушивали (Мд§О4), фильтровали и концентрировали. С помощью очистки путем хроматографии среднего давления, элюируя градиентом растворителей (от 9:1 гексаны: ЕГО Ас до 7:3 гексаны: ЕГО Ас, до 1:1 гексаны:ЕГОАс), получили 7-[2К(трет-бутилдиметилсиланилоксиметил)-5-оксопирролидин-1-ил]гептаннитрил (22,46 г).
Ή ЯМР (СБС13) δ 3,69-3,55 (т, 4Н), 2,99 (т, 1Н), 2,42 (т, 1Н), 2,34-2,24 (т, 3Н), 2,05 (т,
1Н), 1,81 (т, 1Н), 1,67-1,42 (т, 6Н), 1,31 (т, 2Н),
0,86 (к, 9Н), 0,03 (к, 6Н); МС 339,3 (М+1).
Стадия Б. 7-(2Р-Гидроксиметил-5-оксопирролидин-1-ил)гептаннитрил.
Раствор тетрабутиламмония фторида (1 М в ТГФ, 100,0 мл, 100,0 ммоль) медленно добавляли к раствору 7-[2Р-(трет-бутилдиметилсиланилоксиметил)-5 -оксопирролидин-1-ил] гептаннитрила (22,39 г, 66,13 ммоль) в ТГФ (400 мл) при 0°С. Эту реакционную смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 4 ч. Добавляли насыщенный водный раствор NаНСОз (250 мл) и летучие вещества удаляли в вакууме. Остаточный водный раствор промывали СН3С1 (4х200 мл). Объединенные органические растворы высушивали (Мд8О4), фильтровали и концентрировали. С помощью очистки путем хроматографии среднего давления, элюируя градиентом растворителей (от 9:1 гексаны: ЕЮ Ас до 4:1 гексаны:ЕЮАс, до 7:3 гексаны:ЕЮАс, до 6:4 гексаны: ЕЮ Ас, до 1:1 гексаны:ЕЮАс, до ЕЮАс, до 9:1 ЕЮАс:МеОН), получили 7-(2Р-гидроксиметил-5-оксопирролидин-1-ил)гептаннитрил (14,922 г).
Ή ЯМР (СБС13) δ 3,78 (бб, 1Н), 3,71-3,58 (т, 3Н), 3,00 (т, 1Н), 2,46 (т, 1Н), 2,36-2,27 (т, 3Н), 2,08 (т, 1Н), 1,93 (т, 1Н), 1,77 (т, 1Н),
1,68-1,43 (т, 6Н), 1,32 (т, 2Н); МС 225,1 (М+1).
Подготовительный пример 2. 7-(2К-Гидроксиметил-5-оксопирролидин-1-ил)гептановой кислоты этиловый эфир.
Стадия А. 7-[2Р-(трет-Бутилдиметилсиланилоксиметил)-5-оксопирролидин-1-ил]гептановой кислоты этиловый эфир.
Следуя методике, описанной для подготовительного примера 1, стадия А, анион, полученный из 5К-(трет-бутилдиметилсиланилоксиметил)пирролидин-2-она (30,000 г, 130,8 ммоль) и NаН (60%-ный в масле, 5,756 г, 143,9 ммоль) в ДМФ (600 мл), подвергали взаимодействию с этил-7-бромгептаноатом (32,559 г, 137,3 ммоль) в течение 3 ч при 90°С. С помощью очистки путем хроматографии среднего давления, элюируя градиентом растворителей (от 9:1 гексаны:ЕЮАс до 4:1 гексаны:ЕЮАс, до 7:3 гексаны:ЕЮАс, до 6:4 гексаны:ЕЮАс), получили 7[2Р-(трет-бутилдиметилсиланилоксиметил)-5оксопирролидин-1-ил]гептановой кислоты этиловый эфир (39,46 г).
Ή ЯМР (СБС13) δ 4,10 (ф 2Н), 3,62 (т, 4Н), 2,95 (т, 1Н), 2,42 (т, 1Н), 2,27 (т, 3Н), 2,04 (т, 1Н), 1,81 (т, 1Н), 1,65-1,26 (т, 8Н), 1,23 (ΐ, 3Н), 0,86 (8, 9Н), 0,03 (8, 6Н); МС 386,2 (М+1).
Стадия Б. 7-(2К-Гидроксиметил-5-оксопирролидин-1-ил)гептановой кислоты этиловый эфир.
Следуя методике, описанной для подготовительного примера 1, стадия Б, 7-[2Р-(трет-бутилдиметилсиланилоксиметил)-5-оксопирролидин-1-ил]гептановой кислоты этиловый эфир (39,46 г, 102,3 ммоль) подвергали удалению защиты с помощью ТБАФ (1 М в ТГФ, 154,0 мл, 154,0 ммоль) при продолжительности реакции
2,5 ч. С помощью очистки путем хроматографии среднего давления, элюируя градиентом растворителей (от 9:1 гексаны: ЕЮ Ас до 6:4 гексаны:ЕЮАс, до 1:1 гексаны:ЕЮАс, до ЕЮАс, до 19:1 ЕЮАс:МеОН), получили 7-[2Р-гидроксиметил-5-оксопирролидин-1-ил)гептановой кислоты этиловый эфир (25,41 г).
Ή ЯМР (СОС13) δ 4,10 (φ 2Н), 3,77 (бб, 1Н),
3,64 (т, 3Н), 2,96 (т, 1Н), 2,46 (т, 1Н), 2,35-2,25 (т, 3Н), 2,08 (т, 1Н), 1,93 (т, 1Н), 1,71 (т, 1Н), 1,63-1,27 (т, 8Н), 1,23 (ΐ, 3Н); МС 272,2 (М+1).
Подготовительный пример 3. [2-Оксо-3-(3трифторметилфенил)пропил]фосфоновой кислоты диметиловый эфир.
Стадия А. №Метокси-№метил-2-(3-трифторметилфенил)ацетамид.
К раствору ^О-диметилгидроксиламина гидрохлорида (1,577 г, 16,2 ммоль) в ДМФ (25 мл) и СН2С12 (25 мл) при 0°С добавляли триэтиламин (2,25 мл). После перемешивания в течение 5 мин добавляли 3-трифторметилфенилуксусную кислоту (3,0 г, 14,7 ммоль), НОВТ (1-гидроксибензотриазола гидрат) (3,177 г, 23,5 ммоль) и ОЕС (2-диэтиламиноэтилхлорида гидрохлорид, 3,10 г, 16,2 ммоль). Эту реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч и концентрировали в вакууме. Остаток разбавляли ЕЮАс и органический раствор промывали последовательно 1н. №1ОН (2 раза), водой и рассолом. Органический раствор высушивали (Мд8О4), фильтровали и концентрировали в вакууме. Путем хроматографии среднего давления (от 20% ЕЮАс в гексанах до 50% ЕЮАс в гексанах) получили №метокси-№метил-2-(3трифторметилфенил)ацетамид.
Стадия Б. [2-Оксо-3-(3-трифторметилфенил)пропил]фосфоновой кислоты диметиловый эфир.
К раствору диметилметилфосфоната (9,4 г, 75,8 ммоль) в толуоле (80 мл) при -78°С медленно добавляли н-бутиллитий (п-ВиЫ) (2,5 М в гексанах, 28 мл, 70 ммоль). Эту реакционную смесь перемешивали в течение 1 ч и медленно добавляли раствор №метокси-№метил-2-(3-трифторметилфенил)ацетамида (14,39 г) в толуоле (50 мл). Эту реакционную смесь перемешивали в течение 2,5 ч и добавляли АсОН (40 мл). Эту реакционную смесь нагревали до комнатной температуры и добавляли воду. Органический слой промывали водой, затем рассолом. Органический раствор высушивали (Мд8О4), фильтровали и концентрировали в вакууме. Путем хроматографии среднего давления (от СН2С12 до 2% МеОН в СН2С12) получили соединение, указанное в заголовке подготовительного примера 3 (9,37 г).
'Н ЯМР (СПС13) δ 7,52 (т, 1Н), 7,44 (т,
2Н), 7,37 (т, 1Н), 3,96 (8, 2Н), 3,87 (8, 3Н), 3,76 (8, 3Н), 3,12 (б, 2Н).
Подготовительный пример 4. [3-(3-Хлорфенил)-2-оксопропил]фосфоновой кислоты диметиловый эфир.
Заменяя соответствующие исходные материалы, соединение, указанное в заголовке подготовительного примера 4, получили, следуя методике, аналогичной описанной для подготовительного примера 3.
Подготовительный пример 5. [3-(3-Хлорфенил)-2-оксопропил] фосфоновой кислоты диметиловый эфир.
К раствору диметилметилфосфоната (17,93 г, 144 ммоль) в ТГФ (270 мл) при -78°С медленно добавляли п-ВиЫ (2,5 М, 64,2 мл, 160,6 ммоль). Эту реакционную смесь перемешивали в течение 1 ч и медленно добавляли (3-хлорфенил)уксусной кислоты метиловый эфир (26,93 г, 146 ммоль). Эту реакционную смесь оставляли нагреваться до комнатной температуры и перемешивали в течение 24 ч. Добавляли АсОН (15 мл) и летучие вещества удаляли в вакууме. Остаток разбавляли СН2С12 и органический раствор осторожно промывали насыщенным водным NаНСОз (3 раза). Органический слой высушивали (Мд8О4), фильтровали и концентрировали в вакууме. С помощью очистки путем хроматографии среднего давления (от 20% ЕЮАс в гексанах до ЕЮАс) получили соединение, указанное в заголовке (9,28 г).
Подготовительный пример 6. Тетрагидропирролизин-3,5-дион.
Соединение, указанное в заголовке подготовительного примера 6, получили, следуя методике, описанной в патенте США № 4663464.
Подготовительный пример 7. 7-(2Р-Формил-5-оксопирролидин-1-ил)гептановой кислоты этиловый эфир.
К раствору 7-(2Р-гидроксиметил-5-оксопирролидин-1-ил)гептановой кислоты этилового эфира (1,63 г, 6,01 ммоль) в бензоле (50 мл) добавляли 1 -(3 -диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимида гидрохлорид (3,46 г, 18,03 ммоль) и ДМСО (1,5 мл, 24,04 ммоль). Этот раствор охлаждали до 0°С и добавляли пиридиния трифторацетат (1,28 г, 6,61 ммоль). Эту реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 15 мин, а затем при комнатной температуре в течение 2 ч. Этот раствор декантировали от масляного остатка. Остаток промывали бензолом (3х) и объединенные бензольные промывки концентрировали в вакууме с получением 7-(2Р-формил-5оксопирролидин-1-ил)гептановой кислоты этилового эфира, который использовали без дальнейшей очистки.
Подготовительный пример 8. 4-(3-{2-[4Бифенил-3-ил-3-(трет-бутилдиметилсиланилокси)бутил]-5 -оксопирролидин-1-ил}пропил)бензойной кислоты метиловый эфир.
Стадия А. 5-(3-Бром-3-оксобутил)пирролидин-2-он.
К раствору тетрагидропирролизин-3,5-диона (5 г, 36 ммоль) в СН2С12 (320 мл) при 0°С добавляли по каплям 3-бромбензилмагния бромид (0,25 М в ЕьО. 155 мл, 38,8 ммоль). Этот раствор перемешивали при 0°С в течение 2 ч и гасили насыщенным водным хлоридом аммо ния. Добавляли водную 1н. НС1 до достижения рН=3. После нагревания до комнатной температуры водный раствор экстрагировали СН2С12 (3х). Объединенные органические экстракты высушивали (Мд8О4), фильтровали и концентрировали. С помощью очистки путем хроматографии среднего давления, используя градиент растворителей (от 1:1 гексаны:ЕЮАс до ЕЮАс, до 5% МеОН в СН2С12), получили 5-(3-бром-3оксобутил)пирролидин-2-он (7,84 г).
Ή ЯМР (СБС1з) δ 7,41-7,11 (т, 4Н), 6,24 (Ьк, 1Н), 3,67 (к, 2Н), 3,60 (т, 1Н), 2,52 (ΐ, 2Н),
2,32 (т, 2Н), 2,20 (т, 1Н), 1,88-1,60 (т, 3Н).
Стадия Б. 5-(3-Бром-3-гидроксибутил)пирролидин-2-он.
К раствору 5-(3-бром-3-оксобутил)пирролидин-2-она (7,84 г, 25,3 ммоль) в ЕЮН (130 мл) при 0°С добавляли NаВН4 (480 мг, 12,6 ммоль) и эту реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 2,5 ч. Эту реакционную смесь гасили насыщенным водным хлоридом аммония. Добавляли воду и СН2С12. Водный слой промывали СН2С12 (3х) и объединенные органические экстракты высушивали (Мд8О4), фильтровали и концентрировали. С помощью очистки путем хроматографии среднего давления, используя градиент растворителей (от 1:1 гексаны:ЕЮАс до ЕЮАс, до 1% МеОН в СН2С12, до 3% МеОН в СН2С12, до 5% МеОН в СН2С12, до 8% МеОН в СН2С12), получили 5-(3-бром-3гидроксибутил)пирролидин-2-он (6,76 г).
1Н ЯМР (СПС13) δ 7,36-7,09 (т, 4Н), 6,27 (б, 1Н), 3,78 (т, 1Н), 3,63 (т, 1Н), 2,75 (т, 1Н),
2,62 (т, 1Н), 2,32-2,18 (т, 3Н), 1,88 (т, 1Н), 1,73-1,42 (т, 5Н); МС 312,2, 314,1 (М+).
Стадия В. 5-[3-Бром-3-(трет-бутилдиметилсиланилокси)бутил]пирролидин-2-он.
К раствору 5-(3-бром-3-гидроксибутил) пирролидин-2-она (6,76 г, 21,6 ммоль) в ДМФ (86 мл) добавляли трет-бутилдиметилсилилхлорид (3,59 г, 23,8 ммоль), а затем имидазол (2,95 г, 43,3 ммоль) и ДМАП (264 мг, 2,16 ммоль). Эту реакционную смесь перемешивали в течение 24 ч и гасили насыщенным водным хлоридом аммония. Водный раствор промывали ЕЮАс (3х) и объединенные органические экстракты высушивали (Мд8О4), фильтровали и концентрировали. С помощью очистки путем хроматографии среднего давления, используя градиент растворителей (от СН2С12 до 1% МеОН в СН2С12, до 3% МеОН в СН2С12, до 5% МеОН в СН2С12, до 8% МеОН в СН2С12), получили 5-[3-бром-3(трет-бутилдиметилсиланилокси)бутил]пирролидин-2-он (7,45 г).
1Н ЯМР (СПС13) δ 7,30 (т, 2Н), 7,12 (т,
1Н), 7,04 (т, 1Н), 5,71 (т, 1Н), 3,81 (т, 1Н), 3,56 (т, 1Н), 2,66 (т, 2Н), 2,32-2,17 (т, 3Н), 1,701,35 (т, 5Н), 0,82 (к, 8Н), -0,06 (б, 3Н), -0,24 (б,
3Н); МС 426,2, 428,2 (М+).
Стадия Г. 5-[4-Бифенил-3-ил-3-(трет-бутилдиметилсиланилокси)бутил]пирролидин-2-он.
К раствору 5-[3-бром-3-(трет-бутилдиметилсиланилокси)бутил]пирролидин-2-она (750 мг, 1,76 ммоль) в ДМЭ (15 мл) добавляли фенилбороновую кислоту (236 мг, 1,93 ммоль). Добавляли ацетат палладия (26,8 мг, 0,088 ммоль) и триортотолилфосфин (39,5 мг, 0,176 ммоль), а затем раствор №12СО3, (37,3 мг, 3,52 ммоль) в воде (1,8 мл). Эту реакционную смесь нагревали с обратным холодильником в течение 24 ч. Эту реакционную смесь охлаждали и летучие вещества удаляли в вакууме. Остаток разбавляли рассолом и ЕЮАс. Водный раствор промывали ЕЮАс (3х) и объединенные органические экстракты высушивали (Мд§О4), фильтровали и концентрировали. С помощью очистки путем хроматографии среднего давления, используя градиент растворителей (от 1:1 гексаны: ЕЮАс до ЕЮАс, до 1% МеОН в СН2С12, до 3% МеОН в СН2С12, до 5% МеОН в СН2С12), получили 5[4-бифенил-3 -ил-3 -(трет-бутилдиметилсиланилокси)бутил]пирролидин-2-он (717,3 мг).
Ή ЯМР (СПС13) δ 7,57 (т, 2Н), 7,43 (т, 2Н), 7,33 (т, 3Н), 7,11 (т, 2Н), 5,78 (т, 1Н), 3,91 (т, 1Н), 3,59 (т, 1Н), 2,76 (т, 2Н), 2,27 (т, 3Н), 1,73-1,38 (т, 5Н), 0,83 (8, 9Н), -0,03 (б, 3Н), -0,16 (б, 3Н); МС 424,3 (М+1).
Подготовительный пример 9. 5-[3-(третБутилдиметилсиланилокси)-4-(3-фторфенил)бутил]пирролидин-2-он.
Стадия А. 5-[4-(3-Фторфенил)-3-оксобутил]пирролидин-2-он.
Следуя методике, описанной для подготовительного примера 8, стадия А, тетрагидропирролизин-3,5-дион (2 г, 14 ммоль) подвергали взаимодействию с 3-фторбензилмагния хлоридом (0,25 М в ЕьО. 62 мл, 15,5 ммоль) в течение
2,5 ч. С помощью очистки путем хроматографии среднего давления, используя градиент растворигелей (от 1:1 гексаны:ЕЮАс до 2:1 ЕЮАс: гексаны, до ЕЮАс, до 2% МеОН в СН2С12, до 10% МеОН в СН2С12), получили 5-[4-(3-фторфенил)-3-оксобутил]пирролидин-2-он (2,1730 г).
Ή ЯМР (СПС13) δ 7,32-7,27 (т, 1Н), 7,00-
6,90 (т, 3Н), 6,12 (Ь8, 1Н), 3,69 (8, 2Н), 3,59 (т, 1Н), 2,52 (1, 2Н), 2,30 (т, 2Н), 2,19 (т, 1Н), 1,75 (т, 2Н), 1,65 (т, 1Н).
Стадия Б. 5-[4-(3-Фторфенил)-3-гидроксибутил]пирролидин-2-он.
Следуя методике, описанной для подготовительного примера 8, стадия Б, 5-[4-(3-фторфенил)-3-оксобутил]пирролидин-2-он (2,17 г, 8,71 ммоль) восстанавливали ЫаВН4 (165 мг, 4,35 ммоль). С помощью очистки путем хроматографии среднего давления, используя градиент растворителей (от 1: 1 гексаны:ЕЮАс до ЕЮАс, до 1% МеОН в СН2С12, до 3% МеОН в СН2С12, до 6% МеОН в СН2С12), получили 5-[4-(3-фторфенил)-3-гидроксибутил]пирролидин-2-он (2,23 г).
Ή ЯМР (СПС13) δ 7,27 (т, 1Н), 6,94 (т, 3Н), 6,38 (т, 1Н), 3,82 (т, 1Н), 3,66 (т, 1Н), 2,79 (т, 1Н), 2,67 (т, 1Н), 2,33-2,21 (т, 3Н), 1,92 (б,
1=4,15 Гц, 1Н), 1,75-1,40 (т, 5Н); МС 252,2 (М+1).
Стадия В. 5-[3-(трет-Бутилдиметилсиланилокси)-4-(3-фторфенил)бутил]пирролидин-2-он.
Следуя методике, описанной для подготовительного примера 8, стадия В, 5-[4-(3-фторфенил)-3-гидроксибутил]пирролидин-2-он (2,23 г, 8,87 ммоль) подвергали взаимодействию с третбутилдиметилсилилхлоридом (1,47 г, 9,76 ммоль). С помощью очистки путем хроматографии среднего давления, используя градиент растворителей (от 1:1 гексаны:ЕЮАс до ЕЮАс, до 1% МеОН в СН2С12, до 2% МеОН в СН2С12, до 4% МеОН в СН2С12), получили 5-[3-(трет-бутилдиметилсиланилокси)-4-(3-фторфенил)бутил]пирролидин-2-он (2,84 г).
'Н ЯМР (СБС1з) δ 7,23 (т, 1Н), 6,88 (т, 3Н), 5,75 (т, 1Н), 3,85 (т, 1Н), 3,57 (т, 1Н), 2,71 (т, 2Н), 2,30 (т, 2Н), 2,25 (т, 1Н), 1,70-1,38 (т, 5Н), 0,84 (8, 9Н), 0 (8, 3Н), -0,2 (8, 3Н).
Подготовительный пример 10. 5-[3-(третБутилдиметилсиланилокси)-4-(4-фторфенил)бутил]пирролидин-2-он.
Стадия А. 5-[4-(4-Фторфенил)-3-оксобутил]пирролидин-2-он.
Следуя методике, описанной для подготовительного примера 8, стадия А, тетрагидропирролизин-3,5-дион (1,41 г, 10,1 ммоль) подвергали взаимодействию с 4-фторбензилмагния хлоридом (0,25 М в Е12О, 50 мл, 12,5 ммоль) в течение 5 ч. С помощью очистки путем хроматографии среднего давления (2% МеОН в СН2С12) получили 5-[4-(4-фторфенил)-3-оксобутил]пирролидин-2-он (2,64 г).
'Н ЯМР (СПС12) δ 7,18 (т, 2Н), 7,03 (т, 2Н), 6,34 (т, 1Н), 3,70 (8, 2Н), 3,62 (т, 1Н), 2,54 (1, 2Н), 2,34-2,15 (т, 3Н), 1,82-1,61 (т, 3Н).
Стадия Б. 5-[4-(4-Фторфенил)-3-гидроксибутил]пирролидин-2-он.
Следуя методике, описанной для подготовительного примера 8, стадия Б, 5-[4-(4-фторфенил)-3-оксобутил]пирролидин-2-он (2,64 г, ммоль) восстанавливали ЫаВН4 (400 мг) при комнатной температуре в течение 1 ч. Добавляли дополнительное количество ЫаВН4 (150 мг) и эту реакционную смесь перемешивали в течение 20 ч. С помощью очистки путем хроматографии среднего давления, используя градиент растворителей (от СН2С12 до 2% МеОН в СН2С12, до 4% МеОН в СН2С12), получили 5-[4(4-фторфенил)-3-гидроксибутил]пирролидин-2-он (2,01 г).
'Н ЯМР (СБС1з) δ 7,14 (т, 2Н), 6,98 (т, 2Н), 6,78 (т, 1Н), 3,76 (т, 1Н), 3,65 (т, 1Н), 2,76 (т, 1Н), 2,64 (т, 1Н), 2,32-2,18 (т, 4Н), 1,72-
1,47 (т, 5Н).
Стадия В. 5-[3-(трет-Бутилдиметилсиланилокси)-4-(4-фторфенил)бутил]пирролидин-2-он.
Следуя методике, описанной для подготовительного примера 8, стадия В, 5-[4-(4-фторфенил)-3-гидроксибутил]пирролидин-2-он (1,95 г,
7,79 ммоль) подвергали взаимодействию с третбутилдиметилсилилхлоридом (1,47 г, 9,76 ммоль). С помощью очистки путем хроматографии среднего давления (1% МеОН в СН2С12) получили 5[3-(трет-бутилдиметилсиланилокси)-4-(4-фторфенил)бутил]пирролидин-2-он.
Ή ЯМР (СЭС13) δ 7,12 (т, 2Н), 6,97 (т, 2Н), 5,75 (т, 1Н), 3,83 (т, 1Н), 3,60 (т, 1Н), 2,71 (т, 2Н), 2,36-2,24 (т, 3Н), 1,70-1,38 (т, 5Н), 0,84 (к, 9Н), -0,05 (б, 3Н), -0,2 (б, 3Н).
Подготовительный пример 11. [2-Оксо-3(3-феноксифенил)пропил]фосфоновой кислоты диметиловый эфир.
Заменяя соответствующие исходные материалы, соединение, указанное в заголовке подготовительного примера 11, получили, следуя методике, аналогичной описанной для соединения подготовительного примера 5.

Claims (10)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Способ лечения состояния, которое представлено низкой костной массой, у млекопитающего, при котором указанному млекопитающему вводят селективный агонист рецептора ЕР4, представляющий собой соединение или фармацевтически приемлемую соль указанного соединения, где
    О представляет собой С00К3, ΟΟΝ^4 или тетразол-5-ил;
    А представляет собой простую или цисдвойную связь;
    В представляет собой простую или трансдвойную связь;
    =и представляет собой
    Η^ΌΗ , НС<'Н или НО^Н
    К2 представляет собой α-тиенил, фенил, фенокси, однозамещенный фенил или однозамещенный фенокси, причем указанные заместители представляют собой хлоро, фторо, фенил, метокси, трифторметил или (С1-С3)алкил;
    К3 представляет собой водород, (С1-С5)алкил, фенил или парабифенил;
    К4 представляет собой С0К5 или 802К5; и
    К5 представляет собой фенил или (С1-С5) алкил;
    или 7- {2К-[3-гидрокси-4-(3-феноксифенил) бут- 1-енил]-5-оксопирролидин-1 -ил} гептановую кислоту, или 7-{28-[3-гидрокси-4-(3-феноксифенил)бутил]- 5-оксопирролидин-1-ил} гептановую кислоту.
  2. 2. Способ по п.1, где О представляет собой 5-тетразолил и =и представляет собой н^'он
  3. 3. Способ по п.2, где указанное соединение формулы I представляет собой 5К-(38-гидрокси-
  4. 4- фенил-бут-1-енил)-1 - [6-(1 Н-тетразол-5-ил)гексил]пирролидин-2-он, 58-(3К-гидрокси-4-фенилбутил)-1-[6-(1 Н-тетразол- 5-ил)гексил]пирролидин2-он, 58-(4-(3-хлорфенил)-3К-гидроксибутил)-1(6-(2Н-тетразол-5-ил)гексилпирролидин-2-он или 58-(3К-гидрокси-4-(3-трифторметилфенил)бутил)1-(6-(2Н-тетразол-5-ил)гексил)пирролидин-2-он.
    4. Способ по п.1, где О представляет собой СООН и =и представляет собой н*^'он
  5. 5. Способ по п.4, где указанное соединение представляет собой 7-(28-(3К-гидрокси-4-фенилбутил)-5-оксопирролидин-1-ил)гептановую кислоту, 7-[2К-(38-гидрокси-4-фенил-бут-1-енил)-5-оксопирролидин-1-ил]гептановую кислоту, 7-{28[3К-гидрокси-4-(3-трифторметоксифенил)бутил]-
    5- оксопирролидин-1-ил} гептановую кислоту, 7{28-[3К-гидрокси-4-(3-феноксифенил)бутил]-5оксопирролидин-1-ил}гептановую кислоту, 7-(28(3К-гидрокси-4-(3-трифторметилфенил)бутил)5-оксопирролидин-1-ил)гептановую кислоту или 7-{28-[4-(3-хлорфенил)-3К-гидроксибутил]-5оксопирролидин-1-ил} гептановую кислоту.
  6. 6. Способ по любому из пп.1-5, где указанное состояние представляет собой остеопороз, хрупкость костей, остеопорозный перелом, дефект кости, детскую идиопатическую потерю кости, потерю альвеолярной кости, потерю нижнечелюстной кости, перелом кости, остеотомию, потерю кости, связанную с периодонтитом, или врастание протеза.
  7. 7. Способ по любому из пп.1-6, при котором указанную композицию вводят системно или местно.
  8. 8. Соединение, выбранное из 7-{28-[3Кгидрокси-4-(3-феноксифенил)бутил]-5-оксопирролидин-1-ил}гептановой кислоты; 7-(28-(3Кгидрокси-4-(3-трифторметилфенил)бутил)-5-оксопирролидин-1-ил)гептановой кислоты; 7-{28[4-(3-хлорфенил)-3К-гидроксибутил]-5-оксопирролидин-1-ил} гептановой кислоты; 58-[4-(3-хлорфенил)-3К-гидроксибутил]-1-[6-(2Н-тетразол-5ил)гексил]пирролидин-2-она и 58-(3К-гидрокси4-(3-трифторметилфенил)бутил)-1-(6-(2Н-тетразол-5-ил)гексил)пирролидин-2-она.
  9. 9. Фармацевтическая композиция, содержащая соединение по п.8 и фармацевтически приемлемый разбавитель или носитель.
  10. 10. Применение соединения по п.8 в качестве лекарства.
EA200200505A 1999-12-22 2000-11-20 Производные пирролидин-2-она и их применение при лечении остеопороза EA005293B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US17135399P 1999-12-22 1999-12-22
PCT/IB2000/001711 WO2001046140A1 (en) 1999-12-22 2000-11-20 Ep4 receptor selective agonists in the treatment of osteoporosis

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA200200505A1 EA200200505A1 (ru) 2002-12-26
EA005293B1 true EA005293B1 (ru) 2004-12-30

Family

ID=22623430

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA200200505A EA005293B1 (ru) 1999-12-22 2000-11-20 Производные пирролидин-2-она и их применение при лечении остеопороза

Country Status (36)

Country Link
US (2) US6737437B2 (ru)
EP (1) EP1110949B1 (ru)
JP (1) JP2001181210A (ru)
KR (1) KR100419681B1 (ru)
CN (1) CN1413190A (ru)
AP (2) AP2001002357A0 (ru)
AT (1) ATE250575T1 (ru)
AU (2) AU1293101A (ru)
BG (1) BG106882A (ru)
BR (1) BR0016560A (ru)
CA (1) CA2329678A1 (ru)
CO (1) CO5251453A1 (ru)
CR (1) CR6678A (ru)
CZ (1) CZ20022048A3 (ru)
DE (1) DE60005471T2 (ru)
DK (1) DK1110949T3 (ru)
EA (1) EA005293B1 (ru)
EE (1) EE200200355A (ru)
ES (1) ES2204458T3 (ru)
GE (1) GEP20043203B (ru)
HR (1) HRP20020537A2 (ru)
HU (1) HUP0005001A3 (ru)
IL (1) IL140325A0 (ru)
IS (1) IS6388A (ru)
MA (1) MA26852A1 (ru)
MX (1) MXPA02006322A (ru)
NO (1) NO20022925L (ru)
OA (1) OA12117A (ru)
PE (1) PE20010953A1 (ru)
PL (1) PL356662A1 (ru)
PT (1) PT1110949E (ru)
SK (1) SK8552002A3 (ru)
TR (2) TR200201643T2 (ru)
UA (1) UA72293C2 (ru)
WO (1) WO2001046140A1 (ru)
ZA (1) ZA200007694B (ru)

Families Citing this family (52)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20010056060A1 (en) * 2000-02-07 2001-12-27 Cameron Kimberly O. Treatment of osteoporsis with EP2/EP4 receptor selective agonists
SK5562003A3 (en) * 2000-11-27 2004-08-03 Pfizer Prod Inc EP4 receptor selective agonists in the treatment of osteoporosis
DK1408961T3 (da) * 2001-07-16 2007-11-05 Hoffmann La Roche 2 pyrrolidon-derivater som prostanoide agonister
KR20040015364A (ko) * 2001-07-16 2004-02-18 에프. 호프만-라 로슈 아게 Ｅｐ4 수용체 작용물질로서의 프로스타글란딘 유사체
IL159996A0 (en) * 2001-07-23 2004-06-20 Ono Pharmaceutical Co Remedies for diseases with bone mass loss having ep4 agonist as the active ingredient
ES2360604T3 (es) * 2001-07-23 2011-06-07 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Remedios para enfermedades con pérdida de masa osea que tienen como ingrediente activo agonistas de ep4.
KR20050012221A (ko) * 2001-11-12 2005-01-31 오노 야꾸힝 고교 가부시키가이샤 프로스타글란딘 유도체를 유효성분으로 하는 국소 투여용지속성 필름형 제제
CA2466751A1 (en) * 2001-12-03 2003-06-12 Merck And Co., Inc. Ep4 receptor agonist, compositions and methods thereof
US20040254230A1 (en) * 2001-12-03 2004-12-16 Ogidigben Miller J. Method for treating ocular hypertension
ATE455758T1 (de) 2001-12-20 2010-02-15 Merck Serono Sa Pyrrolidin-derivatie als prostaglandin- modulatoren
WO2003074483A1 (fr) 2002-03-05 2003-09-12 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Composes derives de 8 azaprostaglandine et medicaments contenant ceux-ci comme principe actif
EP1490055A1 (en) * 2002-03-18 2004-12-29 Pfizer Products Inc. Use of selective ep4 receptor agonists for the treatment of liver failure, loss of patency of the ductus arteriosus, glaucoma or ocular hypertension
US6573294B1 (en) 2002-05-14 2003-06-03 Allergan, Inc. 8-azaprostaglandin analogs as agents for lowering intraocular pressure
AU2011202937B2 (en) * 2002-05-14 2012-06-07 Allergan, Inc. 8-azaprostaglandin analogs as agents for lowering intraocular pressure
WO2003103604A2 (en) * 2002-06-01 2003-12-18 Applied Research Systems Ars Holding N.V Gamma lactams as prostaglandin agonists and use thereof
AU2003233729B2 (en) 2002-06-06 2007-10-04 Merck Frosst Canada Ltd 1,5-distributed pyrrolid-2-one derivatives for use as EP4 receptor agonists in the treatment of eye diseases such as glaucoma
ES2584606T3 (es) 2002-10-10 2016-09-28 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Microesferas que comprenden ONO-1301
US7196082B2 (en) 2002-11-08 2007-03-27 Merck & Co. Inc. Ophthalmic compositions for treating ocular hypertension
JP2006510742A (ja) 2002-11-08 2006-03-30 メルク　エンド　カムパニー　インコーポレーテッド 高眼圧治療用眼科組成物
US7053085B2 (en) 2003-03-26 2006-05-30 Merck & Co. Inc. EP4 receptor agonist, compositions and methods thereof
CN1735597A (zh) 2003-01-10 2006-02-15 霍夫曼-拉罗奇有限公司 作为前列腺素激动剂的2－哌啶酮衍生物
WO2004065365A1 (ja) * 2003-01-21 2004-08-05 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. ８−アザプロスタグランジン誘導体およびその医薬用途
CA2513652A1 (en) 2003-03-03 2004-09-16 Applied Research Systems Ars Holding N.V. G-lactam derivatives as prostaglandin agonists
US6734201B1 (en) 2003-06-02 2004-05-11 Allergan, Inc. 8-Azaprostaglandin carbonate and thiocarbonate analogs as therapeutic agents
US6734206B1 (en) 2003-06-02 2004-05-11 Allergan, Inc. 3-oxa-8-azaprostaglandin analogs as agents for lowering intraocular pressure
US7179820B2 (en) 2003-06-06 2007-02-20 Allergan, Inc. Piperidinyl prostaglandin E analogs
JP2006528154A (ja) 2003-07-18 2006-12-14 アプライド リサーチ システムズ エーアールエス ホールディング ナームロゼ フェンノートシャップ プロスタグランジン受容体のモジュレータとしてのヒドラジド誘導体
JP2007504228A (ja) 2003-09-02 2007-03-01 メルク　エンド　カムパニー　インコーポレーテッド 高眼圧症を治療するための眼組成物
WO2005026128A1 (en) 2003-09-04 2005-03-24 Merck & Co., Inc. Ophthalmic compositions for treating ocular hypertension
EP1663221A4 (en) 2003-09-04 2009-04-22 Merck & Co Inc OPHTHALMIC COMPOSITIONS FOR TREATING OCULAR HYPERTENSION
WO2005027931A1 (en) * 2003-09-19 2005-03-31 Pfizer Products Inc. Pharmaceutical compositions and methods comprising combinations of 2-alkylidene-19-nor-vitamin d derivatives and an ep2 or ep4 selective agonist
WO2005080367A1 (en) 2004-02-12 2005-09-01 Pharmagene Laboratories Limited Ep2 receptor agonists
JP2008507521A (ja) 2004-07-20 2008-03-13 メルク　エンド　カムパニー　インコーポレーテッド 高眼圧症を治療するための眼科用組成物
US7696243B2 (en) 2004-12-06 2010-04-13 Merck Serono, S.A. Pyrrolidin-2-one derivatives for use as DP1 receptor agonists
US7531533B2 (en) 2005-01-27 2009-05-12 Asahi Kasei Pharma Corporation 6-Membered heterocyclic compound and use thereof
US20090074844A1 (en) 2005-04-28 2009-03-19 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Trenadermal absorption preparation
KR100686186B1 (ko) * 2005-06-13 2007-02-26 영진종합건설 주식회사 교량용 배수 구조물
JP2009505973A (ja) 2005-08-09 2009-02-12 アステランド ユーケイ リミテッド Ｅｐ２受容体アゴニスト
EP2085088A4 (en) 2006-10-26 2012-08-29 Ono Pharmaceutical Co ADHESIVE PREPARATION
US9394520B2 (en) 2006-12-08 2016-07-19 University Of Rochester Expansion of hematopoietic stem cells
US8063240B2 (en) 2007-11-14 2011-11-22 Cayman Chemical Company, Incorporated Prostaglandin E1 and E2 analogs for the treatment of various medical conditions
CA2738045C (en) 2010-05-28 2019-02-19 Simon Fraser University Conjugate compounds, methods of making same, and uses thereof
RU2627842C2 (ru) 2011-08-02 2017-08-14 Оно Фармасьютикал Ко., Лтд. Средство для улучшения диастолической функции левого желудочка
WO2014015247A1 (en) 2012-07-19 2014-01-23 Cayman Chemical Company, Inc. Difluorolactam compounds as ep4 receptor-selective agonists for use in the treatment of ep4-mediated disease and conditions
US20150272874A1 (en) 2012-10-29 2015-10-01 Cardio Incorporated Pulmonary disease-specific therapeutic agent
EP3235817B1 (en) * 2013-03-15 2018-12-12 Cayman Chemical Company, Incorporated Lactam compounds as ep4 receptor-selective agonists for use in the treatment of ep4-mediated diseases and conditions
US9676712B2 (en) 2013-03-15 2017-06-13 Cayman Chemical Company, Inc. Lactam compounds as EP4 receptor-selective agonists for use in the treatment of EP4-mediated diseases and conditions
AU2014290512A1 (en) 2013-07-19 2015-11-12 Cayman Chemical Company, Inc. Methods, systems, and compositions for promoting bone growth
JP6694385B2 (ja) 2013-08-09 2020-05-13 アーデリクス，インコーポレーテッド リン酸塩輸送阻害のための化合物及び方法
WO2015056504A1 (ja) 2013-10-15 2015-04-23 小野薬品工業株式会社 薬剤溶出性ステントグラフト
CN107849072B (zh) 2015-06-12 2020-12-15 西蒙弗雷泽大学 酰胺连接的ep4激动剂-二膦酸盐化合物及其用途
WO2020237096A1 (en) 2019-05-21 2020-11-26 Ardelyx, Inc. Combination for lowering serum phosphate in a patient

Family Cites Families (25)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR897566A (fr) 1942-08-28 1945-03-26 Bopp & Reuther Gmbh Machine à rotors
US3528961A (en) 1966-08-16 1970-09-15 Allied Chem Monoazo dyes from e-caprolactam
US3780095A (en) 1970-04-08 1973-12-18 Byk Gulden Lomberg Chem Fab Acylated anilino-carboxylic acids and their salts
US3987091A (en) 1973-04-12 1976-10-19 Merck & Co., Inc. 11,12-secoprostaglandins
US4033996A (en) 1973-04-25 1977-07-05 Merck & Co., Inc. 8-Aza-9-oxo(and dioxo)-thia-11,12-secoprostaglandins
SE7414770L (ru) 1973-12-13 1975-06-16 Merck & Co Inc
DK366475A (da) 1974-08-30 1976-03-01 Merck & Co Inc Fremgangsmade til fremstilling af aryloxy- eller arylthioholdige secoprostaglandiner
US3991106A (en) 1974-09-13 1976-11-09 Merck & Co., Inc. 16-Ethers of 8-aza-9-dioxothia-11,12-seco-prostaglandins
US4055596A (en) 1974-09-13 1977-10-25 Merck & Co., Inc. 11,12-Seco-prostaglandins
US4113873A (en) 1975-04-26 1978-09-12 Tanabe Seiyaku Co. Ltd. 8-azaprostanoic acid derivatives
DE2528664A1 (de) 1975-06-27 1977-01-13 Hoechst Ag Pyrrolidone und verfahren zu ihrer herstellung
IL49325A (en) 1976-03-31 1979-11-30 Labaz 8-aza-11-deoxy-pge1 derivatives,their preparation and pharmaceutical compositions containing them
DE2619638A1 (de) * 1976-05-04 1977-11-17 Hoechst Ag Pyrrolidone und verfahren zu ihrer herstellung
US4177346A (en) 1976-08-06 1979-12-04 Pfizer Inc. 1,5-Disubstituted-2-pyrrolidones
US4175203A (en) 1976-12-17 1979-11-20 Merck & Co., Inc. Interphenylene 11,12-secoprostaglandins
US4243678A (en) 1977-12-30 1981-01-06 Byk Gulden Lomberg Chemische Fabrik Gmbh Acylhydrocarbylaminoalkanoic acids, compositions and uses
DE3000377A1 (de) 1980-01-07 1981-07-09 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Neue sulfonamide, verfahren zu deren herstellung sowie diese verbindungen enthaltende arzneimittel
DE3042482A1 (de) 1980-11-11 1982-06-24 A. Nattermann & Cie GmbH, 5000 Köln N-benzoyl- (omega) -anilinoalkancarbonsaeuren, -salze und -ester, verfahren zu ihrer herstellung und diese enthaltende pharmazeutische praeparate
CA1214170A (fr) 1981-06-16 1986-11-18 Patrick Choay Procedes de preparation de nouveaux composes du type arylbenzenesulfonamide
AU6427596A (en) * 1992-04-14 1996-10-31 Alfred Maximillian Stessl A boat hull
TW383306B (en) 1992-12-22 2000-03-01 Lilly Co Eli New use of 2-phenyl-3-aroylbenzothiophenes in lowering serum cholesterol
JP2000507961A (ja) * 1996-12-20 2000-06-27 ファイザー・インク Ｅｐ２受容体サブタイプ選択性のプロスタグランジンｅ２アゴニストによる骨格障害の予防と治療
GB2330307A (en) * 1998-02-07 1999-04-21 Glaxo Group Ltd EP4 Receptor antagonists as bone resorption inhibitors
EP1121133A1 (en) * 1998-10-15 2001-08-08 Merck & Co., Inc. Methods for stimulating bone formation
AU1444200A (en) * 1998-10-15 2000-05-01 Merck & Co., Inc. Methods for inhibiting bone resorption

Also Published As

Publication number Publication date
ATE250575T1 (de) 2003-10-15
US20010047105A1 (en) 2001-11-29
AU1293101A (en) 2001-07-03
DE60005471D1 (de) 2003-10-30
UA72293C2 (en) 2005-02-15
CO5251453A1 (es) 2003-02-28
IL140325A0 (en) 2002-02-10
BR0016560A (pt) 2002-09-10
CZ20022048A3 (cs) 2004-03-17
TR200201643T2 (tr) 2002-11-21
CA2329678A1 (en) 2001-06-22
US6642266B2 (en) 2003-11-04
MXPA02006322A (es) 2002-12-13
EP1110949A1 (en) 2001-06-27
EA200200505A1 (ru) 2002-12-26
ZA200007694B (en) 2002-06-20
HUP0005001A2 (hu) 2001-12-28
AU763983B2 (en) 2003-08-07
CR6678A (es) 2004-01-14
SK8552002A3 (en) 2003-09-11
NO20022925D0 (no) 2002-06-18
AP2001002357A0 (en) 2001-12-31
KR20010067415A (ko) 2001-07-12
KR100419681B1 (ko) 2004-02-21
DK1110949T3 (da) 2003-11-24
TR200301841T4 (tr) 2004-01-21
OA12117A (en) 2006-05-04
DE60005471T2 (de) 2004-04-22
PE20010953A1 (es) 2001-09-25
PL356662A1 (en) 2004-06-28
US6737437B2 (en) 2004-05-18
HU0005001D0 (ru) 2001-02-28
CN1413190A (zh) 2003-04-23
NO20022925L (no) 2002-06-18
IS6388A (is) 2002-05-17
US20020040149A1 (en) 2002-04-04
ES2204458T3 (es) 2004-05-01
HUP0005001A3 (en) 2002-01-28
EP1110949B1 (en) 2003-09-24
AU7239300A (en) 2001-06-28
PT1110949E (pt) 2003-12-31
WO2001046140A1 (en) 2001-06-28
HRP20020537A2 (en) 2004-12-31
GEP20043203B (en) 2004-03-25
JP2001181210A (ja) 2001-07-03
MA26852A1 (fr) 2004-12-20
BG106882A (en) 2003-02-28
EE200200355A (et) 2003-10-15
AP2002002555A0 (en) 2002-06-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA005293B1 (ru) Производные пирролидин-2-она и их применение при лечении остеопороза
ES2291361T3 (es) Agonistas selectivos del receptor ep4 en el tratamiento de la osteoporosis.
JPH11180926A (ja) 骨粗しょう症用化合物
HRP980356A2 (en) Prostaglandin agonists
CA2334257C (en) Treatment of osteoporosis with ep2/ep4 receptor selective agonists
US20030166631A1 (en) Pharmaceutical compositions and methods for administering EP2 receptor selective agonists
JP2006508051A (ja) 骨形成を促進する方法
AU2008291814A1 (en) Polymorphs of 3- ( ( (4-tert-butyl-benzyl) - (pyridine-3-sulfonyl) -amino) -methyl) -phenoxy) -acetic acid sodium salt or a hydrate thereof and methods for making the same
WO2009027803A2 (en) Polymorphs of (3-(((4-tert-butyl-benzyl)-(pyridine-3-sulfonyl)-amino)-methyl)- phenoxy)-acetic acid, free acid
Virdi et al. Bone regeneration and implant fixation strength are not adversely influenced by Cox 2 inhibition
MXPA01001387A (en) Treatment of osteoporosis with ep2/ep4 receptor selective agonists

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM RU