CZ20022048A3 - Selektivní agonisty receptoru EP4 při léčení osteoporosy - Google Patents

Selektivní agonisty receptoru EP4 při léčení osteoporosy Download PDF

Info

Publication number
CZ20022048A3
CZ20022048A3 CZ20022048A CZ20022048A CZ20022048A3 CZ 20022048 A3 CZ20022048 A3 CZ 20022048A3 CZ 20022048 A CZ20022048 A CZ 20022048A CZ 20022048 A CZ20022048 A CZ 20022048A CZ 20022048 A3 CZ20022048 A3 CZ 20022048A3
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
hydroxy
pyrrolidin
butyl
bone
compound
Prior art date
Application number
CZ20022048A
Other languages
English (en)
Inventor
Kimberly O´Keefe Cameron
Huazhu Ke
Bruce Allen Lefker
David Duane Thompson
Original Assignee
Pfizer Products Inc.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Pfizer Products Inc. filed Critical Pfizer Products Inc.
Publication of CZ20022048A3 publication Critical patent/CZ20022048A3/cs

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A61K31/4015—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil having oxo groups directly attached to the heterocyclic ring, e.g. piracetam, ethosuximide
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D207/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D207/18—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member
    • C07D207/22—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D207/24—Oxygen or sulfur atoms
    • C07D207/26—2-Pyrrolidones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/02—Stomatological preparations, e.g. drugs for caries, aphtae, periodontitis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A61P19/10—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease for osteoporosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D207/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D207/18—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member
    • C07D207/20—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member with only hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/06—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings linked by a carbon chain containing only aliphatic carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/02—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings
    • C07D405/10—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings linked by a carbon chain containing aromatic rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D409/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D409/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings
    • C07D409/06—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings linked by a carbon chain containing only aliphatic carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D409/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D409/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D417/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00
    • C07D417/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings
    • C07D417/06—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings linked by a carbon chain containing only aliphatic carbon atoms

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Pyrrole Compounds (AREA)
  • Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Nitrogen And Oxygen As The Only Ring Hetero Atoms (AREA)

Description

Selektivní agonisty receptoru EP4 při léčení osteoporosy
Oblast techniky
Vynález se týká způsobů a farmaceutických kompozic využívajících agonisty prostaglandinu, které jsou užitečné při prevenci úbytku kostní hmoty nebo jejím obnovování nebo zvyšování a jako podpora hojení kostí, včetně léčení stavů, které se projevují nízkou kostní hmotou a/nebo kostními defekty u obratlovců, zejména savců, včetně člověka. Vynález se zejména týká způsobů a farmaceutických kompozic, které využívají selektivní agonisty receptoru EP4.
Dosavadní stav techniky
Osteoporosa je systemická kosterní choroba, pro niž je charakteristická nízká kostní hmota a zhoršování kostní tkáně, v jejichž důsledku dochází ke zvýšení křehkosti kostí a náchylnosti ke zlomeninám. V USA tento stav postihuje více než 25 milionů lidí a každý rok je příčinou více než 1,3 milionu zlomenin, z nichž je 500 000 zlomenin páteře, 250 000 zlomenin kyčle a 240 000 zlomenin zápěstí. Nejvážnější jsou zlomeniny kyčle, poněvadž 5 až 20 % pacientů postižených těmito zlomeninami umírá do jednoho roku a více než 50 % přeživších zůstává invalidních.
Největšímu riziku osteoporosy jsou vystaveni starší lidé, a předpokládá se, že se tento problém bude významně narůstat se stárnutím populace. Odhaduje se, že ve světovém měřítku dojde v průběhu následujících 60 let ke ztrojnásobeni počtu • · roce 2050 ve světě celkem zlomenin, a podle jedné studie má v dojít ke 4,5 milionu zlomenin kyčle.
Ženy jsou ohroženy osteoporosou více než muži. U žen dochází k významnému urychlení úbytku kostní hmoty v průběhu 5 let po menopauze. Z jiných faktorů zvyšujících úbytek kostní hmoty vedoucí k osteoporose, je možno uvést kouření, abúsus alkoholu, sedavý životní styl a nízký příjem vápníku.
Pro léčení osteoporosy v současné době existují dva hlavní typy farmakoterapie. Při prvním z nich se za účelem snížení resorpce kotní tkáně používá antiresorpčních sloučenin .
Příkladem antiresorpčního činidla je estrogen, o němž je známo, že redukuje zlomeniny. Kromě toho Black et al. v EP 0 605 193 Al uvádějí, že estrogen, zejména je-li podáván perorálně, snižuje hladinu LDL v plasmě a zvyšuje hladinu prospěšných lipoproteinů s vysokou hustotou (HDL). V případě kostry postižené rozvinutou osteoporosou však estrogen při opětovné výstavbě kostí na úroveň odpovídající mladému dospělému člověku selhává. Kromě toho se dlouhodobá léčba estrogenem dává do souvislosti s různými poruchami, jako je zvýšené riziko rakoviny dělohy, rakoviny endometria a možná rakoviny prsu, což vede mnoho žen k tomu, že se takovému léčení vyhýbají. Významné nežádoucí účinky spojené s léčením estrogenem podtrhují nutnost vyvinout alternativní způsoby léčení osteoporosy, které by měly žádoucí příznivý vliv na hladinu LDL v séru, ale bez nežádoucích vedlejších účinků.
Druhým typem farmakoterapie při léčení osteoporosy je použití anabolických činidel za účelem podpoření tvorby kosti a zvýšení kostní hmoty. O činidlech z této třídy se .** ··;· · · · ···· · ϊ ϊ 3 ···· . ·..· ; ·..··.,· předpokládá, že obnovují kostní tkáň u kostry postižené rozvinutou osteoporosou.
Určité agonisty prostaglandinu jsou popsány v GB 1 478 281, GB 1 479 156 a US patentech 4 175 203, 4 055 596, 4 175 203, 3 987 091 a 3 991 106, jako látky užitečné například jako renální vasodilatancia.
V US patentu č. 4 033 996 jsou popsány určité 8-aza-9-oxo(a dioxo)thia-11,12-sekoprostaglandiny, které jsou užitečné jako renální vasodilatancia, pro prevenci tvorby thrombů, pro indukci uvolňování růstového hormonu a jako regulátory imunitní odpovědi.
Ve francouzském patentu č. 897 566 jsou popsány určité aminokyselinové deriváty pro léčeni neurologických, duševních nebo kardiovaskulárních chorob.
V J. Org. Chem. 26, 1961, 1437 je popsána N-acetyl-N-benzyl-p-aminofenylmerkaptooctová kyselina.
V US patentu č. 4 761 430 jsou popsány určité arylbenzensufonamidové sloučeniny, jako činidla snižující lipidy.
V US patentu č. 4 443 477 jsou popsány určité sulfonamidofenylkarboxylové kyseliny, jako činidla snižující lipidy.
V US patentu č. 3 528 961 jsou popsány určité deriváty e-kaprolaktamu, jako barviva.
V US patentu č. 3 780 095 jsou popsány určité acylované anilinokarboxylové kyseliny, jako choleretika.
• · ·
V US patentu č. 4 243 678 jsou popsány určité acylhydrokarbylaminoalkanové kyseliny, jako látky užitečné při léčení žaludečních vředů, inhibitory sekrece mazových žláz a látky pro boj se záněty kůže.
V US patentu č, 4 386 031 jsou popsány určité N-benzoyl-ω-anilinoalkankarboxylové kyseliny, jako antialergická činidla, inhibitory agregace thrombů, protizánětlivá činidla a činidla snižující lipidy.
Uvádí se, že kromě osteoporosy v samotné Americe má ročně 20 až 25 milionů žen a zvyšující se počet mužů detekovatelné zlomeniny obratlů, které souvisí se sníženou kostní hmotou a dochází k dalším 250 000 zlomenin kyčle. Zlomeniny kyčle jsou spojeny s 12% úmrtností v prvních dvou letech a 30% podílem pacientů, kteří po zlomenině potřebují domácí pečovatelskou službu. Ačkoliv se již dnes jedná o významný problém, předpokládá se další zvýšení ekonomických a zdravotních dopadů rekonvalescence vyvolané pomalým nebo nedokonalým hojením těchto zlomenin kostí, protože celá populace stárne.
Ukázalo se, že estrogeny (Bolander et al. , 38th Annual Meeting Orthopedic Research Society, 1992) zlepšují kvalitu hojení apendikulárních zlomenin. Zdá se tedy, že estrogenová substituční terapie by tedy mohla být efektivním způsobem léčení zlomenin. Kompliance pacientů s estrogenovou terapií je však relativně nízká, vzhledem k jejich vedlejším účinkům, jako je opětovné zahájení menstruace, mastodynie, zvýšené riziko rakoviny dělohy, pocit zvýšeného rizika rakoviny prsu a doprovodné používání progestinů. Kromě toho je pravděpodobné, že muži budou mít námitky proti léčbě estrogeny. Je tedy zřejmé, že existuje potřeba terapie, která by byla prospěšná pro pacienty, kteří utrpěli invalidizující zlomeniny kostí nebo kteří mají nízkou kostní hmotu, a která by zvýšila komplianci pacientů.
Ukázalo se, že prostaglandin E2 (PGE2) může obnovit ztracenou kostní tkáň u ovariektomizovaných (OVX) potkanů, jako modelu postmenopausálnl osteoporosy (Ke, H.. Z. et al., Bone, 23: 249 až 255, 1988) . S PGE2 však souvisí závažné vedlejší účinky (Jee, W. S. S. a Ma, Y. F., Bone, 21: 297 až
304, 1997).
Přestože existuji různé způsoby léčení osteoporosy, na tomto poli stále přetrvává potřeba vyvinout alternativní způsoby jejího léčení. Kromě toho existuje potřeba vyvinout způsoby léčení zlomenin kostí. Rovněž by bylo žádoucí vyvinout terapii, která by podporovala opětovnou výstavbu kostí v oblastech kostry postižených defekty, jako defekty vyvolanými například kostními nádory. Potřebnou se dále jeví terapie, která by podporovala opětovnou výstavbu kosti v oblastech kostry, kde byly indikovány kostní štěpy.
Podstata vynálezu
Předmětem vynálezu jsou způsoby léčení stavů, které se projevují nízkou kostní hmotou u savců, jejichž podstata spočívá v tom, že se takovému savci podává selektivní agonista receptoru EP4, jeho proléčivo nebo farmaceuticky vhodná sůl selektivního agonisty receptoru EP4 nebo jeho proléčiva.
Předmětem vynálezu jsou zejména takové způsoby léčení, kde stavem je osteoporosa, křehkost, osteoporotická fraktura, kostní defekt, juvenilní idiopatický úbytek kostní tkáně, úbytek alveolární kosti, úbytek mandibulárnl kosti, fraktura kosti, osteotomie, úbytek kosti spojený s periodontitis a • · • · · ·
prorůstání protézy. Při přednostních způsobech podle tohoto vynálezu se selektivní agonista receptoru EP4 podává systemicky, například perorálně, subkutánně, intramuskulárně nebo ve formě aerosolu. Při jiných přednostních způsobech podle vynálezu se agonista EP4 podává lokálně.
Způsoby podle vynálezu jsou zejména užitečné v případě, že stavem je křehkost.
Způsoby podle vynálezu jsou zejména užitečné v případě, že stavem je osteoporosa.
Způsoby podle vynálezu jsou také zvláště užitečné v případě, že stavem je fraktura kosti nebo osteoporotická fraktura.
Jako přednostní selektivní agonisty EP4 pro použití při způsobech podle tohoto vynálezu je možno uvést sloučeniny obecného vzorce I
Q představuje skupinu COOR3, CONHR4 nebo tetrazol-5-yl;
A představuje jednoduchou nebo cis dvojnou vazbu;
B . představuje jednoduchou nebo trans dvojnou vazbu;
=U představuje skupinu vzorce
ΗΧθΗ , ΗΟ Η nebo Η0 Η;
R2 představuje ce-thienylskupinu, fenylskupinu, fenoxyskupinu, monosubstituovanou fenylskupinu nebo monosubstituovanou fenoxyskupinu, kde substituenty jsou chlor, fluor, fenylskupina, methoxyskupina, trifluormethylskupina nebo alkylskupina s 1 až 3 atomy uhlíku;
R3 představuje vodík, alkylskupinu s 1 až 5 atomy uhlíku, fenylskupinu nebo p-bif enylskupinu,R4 představuje skupinu COR5 nebo SOjR5; a
R5 představuje fenylskupinu nebo alkylskupinu s 1 až 5 atomy uhlíku;
jejich proléČiva a farmaceuticky vhodné soli těchto sloučenin a proléčiv.
Skupinu selektivních agonistů receptoru EP4, jejichž použití se při způsobech podle vynálezu dává přednost, tvoří sloučeniny obecného vzorce I, kde Q představuje 5-tetrazolylskupinu a =U představuje skupinu vzorce
Q (IA) • ·
Z této skupiny se zvláštní přednost dává 5S-(4-(3-chlorfenyl) -3R-hydroxybutyl)-1-(6-(2H-tetrazol-5-yl)hexylpyrrolidin-2-onu; 5S-(3R-hydroxy-4 -(3-trifluormethylfenyl)butyl)-1- (6-(2H-tetrazol-5-yl)hexyl)pyrrolidin-2-onu; 5R-(3S-hydroxy-4 -fenylbut-1-enyl)-1-[6-(lH-tetrazol-5-yl)hexyl]pyrrolidin-2-onu a 5S-(3R-hydroxy-4-fenylbutyl)-1-[6-(lH-tetrazol-5-yl)hexyl]pyrrolidin-2-onu.
Další skupinu selektivních agonistů receptoru EP4 obecného vzorce I, jejichž použití se při způsobech podle vynálezu dává přednost, tvoři sloučeniny obecného vzorce I, kde Q představuje skupinu COOH. Jako sloučeniny, kterým se z této skupiny dává zvláštní přednost, je možno uvést 7-{2S-[3R-hydroxy-4-(3-fenoxyfenyl)butyl]- 5-oxopyrrolidin-1-yljheptanovou kyselinu; 7-(2S-(3R-hydroxy-4-(3-trifluormethylfenyl)butyl )-5-oxopyrrolidin-1-yl)heptanovou kyselinu; 7-{2S-[4-(3-chlorfenyl)-3R-hydroxybutyl]- 5-oxopyrrolidin-1-yl}heptanovou kyselinu; 7-[2S-(3R-hydroxy-4-fenylbutyl)-5-oxopyrrolidin-l-yl]heptanovou kyselinu a 7-[2R-(3S-hydroxy-4-fenylbut-1-enyl)-5-oxopyrrolidin-1-yl]heptanovou kyselinu.
Přednostně se léčí ženy po menopauze a muži ve věku nad 60 let a také jednotlivci bez ohledu na věk, kteří mají významně sníženou kostní hmotu, tj. 1,5 standardní odchylky a více pod normálními hladinami v mládí.
Jako stavy, které se projevují nízkou kostní hmotou, je v souvislosti se způsoby podle tohoto vynálezu možno například uvést osteoporosu, juvenilní idiopatický úbytek kostní tkáně, úbytek alveolární kosti, úbytek mandibulární kosti, frakturu kosti, osteotomii, úbytek kostní tkáně spojený s periodontitis a prorůstání protézy.
• · • · · ····
Do rozsahu vynálezu také spadají způsoby léčeni sekundární osteoporosy. Jako sekundární osteoporosu je možno uvést osteoporosu indukovanou glukokortikoidy, osteoporosu indukovanou hyperthyroidismem, osteoporosu indukovanou imobilizaci, osteoporosu indukovanou heparinem a osteoporosu indukovanou imunosupresivy u obratlovců, například savců (jako člověka). Tyto způsoby se provádějí tak, že se obratlovci, například savci, podá selektivní agonista receptorů prostaglandinu EP4, jeho proléčivo nebo farmaceuticky vhodná sůl selektivního agonisty receptorů prostaglandinu EP4 nebo jeho proléčiva v množství účinném při léčení sekundární osteoporosy.
Předmětem vynálezu jsou dále také způsoby zpevňování kostních štěpů, indukování vertebrální synostosy, podporování prodlužování dlouhých kostí, podporování hojení kostí po rekonstrukci obličeje, rekonstrukci horní a/nebo dolní čelisti u obratlovců, například savců (včetně člověka), jejichž podstata spočívá v tom, že se obratlovci, například savci, který prodělal rekonstrukci obličeje nebo rekonstrukci horní nebo dolní čelisti, podá selektivní agonista receptorů prostaglandinu EP4 jeho proléčivo nebo farmaceuticky vhodná sůl selektivního agonisty receptorů prostaglandinu EP4 nebo jeho proléčiva v množství posilujícím kosti. Účinné selektivní agonisty receptorů prostaglandinu EP4 podle tohoto vynálezu je možno aplikovat lokálně na místo rekonstrukce kosti, nebo systemicky.
Denní dávka selektivního agonisty receptorů prostaglandinu EP4, jeho proléčiva nebo farmaceuticky vhodné soli tohoto agonisty nebo jeho proléčiva přednostně leží v rozmezí od asi 0,001 do asi 100 mg/kg, přičemž zvláštní přednost se dává denním dávkám v rozmezí od asi 0,01 do asi 10 mg/kg.
·· 4 • 4 • · 4 4*4
Pod pojmem stav, který se projevuje nízkou kostní hmotou se rozumí stav, při němž je úroveň kostní hmoty pod normální hladinou specifickou pro věk, jak je definována ve standardech Světové zdravotnické organizace Assesment of Fracture Risk and its Application to Screening for Postmenopausal Osteoporosis (1994), Report of a World Health Organization Study Group. World Health Organization Technical Series 843. Takovým stavem se rozumí například primární a sekundární osteoporosa uvedená výše. Spadají sem také periodontální choroba, úbytek alveolární kosti, stavy po osteotomii a juvenilní idiopatický úbytek kostní hmoty. Stavem, který se projevuje nízkou kostní hmotou se také rozumějí dlouhodobé komplikace osteoporosy, jako je zakřivení páteře, ztráta výšky a voperování protézy.
Pojem stav, který se projevuje nízkou kostní hmotou se vztahuje také na obratlovce, například savce, u nichž je pravděpodobnost vývoje některé z výše uvedených chorob, jako je osteoporosa, vyšší než průměrná (například ženy po přechodu, muži nad 50 let) . Jako příklady zvyšování nebo posilování kostní hmoty je možno uvést rekonstrukci kostí, urychlování hojení zlomenin, všechny operace s nahrazováním kostními štěpy, urychlování přijetí kostních štěpů, urychlování hojení kostí po rekonstrukci obličeje nebo rekonstrukci horní nebo dolní čelisti, prorůstání protézy, vertebrální synostosu a prodlužování dlouhých kostí.
Způsobů podle vynálezu je také možno používat spolu s ortopedickým aparátem, jako jsou košíčky pro fúzi páteře (spinal fusion cages), kovový aparát pro fúzi páteře, zařízení pro vnitřní a vnější fixaci kosti, šrouby a hřeby.
• » ·»«*
Odborníkům v tomto oboru bude zřejmé, že se pod pojmem kostní hmota ve skutečnosti rozumí hmotnost kosti na jednotku plochy, která je někdy (ačkoliv ne zcela přesně) označována jako minerální hustota kosti.
Pojem léčení nebo léčba, jak se ho používá v tomto textu, zahrnuje preventivní (například profylaktickou) a paliativní a kurativní léčbu.
Přívlastku farmaceuticky vhodný se používá pro označení nosičů, vehikul, ředidel, excipientů a/nebo solí, které musí být kompatibilní s ostatními složkami formulace a nepoškozují recipienta.
Pod pojmem proléčiva se rozumí sloučeniny, které jsou prekursory léčiv, které po podání působením určitého chemického nebo fyziologického mechanismu uvolňují léčivo in vivo (například se proléčivo vystaví fyziologickému pH nebo se na požadovanou formu léčiva převede enzymatickým působením) . Typická proléčiva po štěpení uvolňují odpovídající léčivou látku.
Pod pojmem farmaceuticky vhodné soli se rozumějí soli obsahující netoxické anionty. Jako neomezující příklady takových solí je možno uvést chloridové, bromidové, jodidové, sulfátové, hydrogensulfátové, fosfátové, acetátové, maleátové, fumarátové, oxalátové, laktátové, tartrátové, citrátové, glukonátové, methansulfonátové a 4-toluensulfonátové soli. Do rozsahu pojmu farmaceuticky vhodné soli rovněž spadají soli s netoxickými kationty. Jako neomezující příklady takových solí je možno uvést soli, které obsahují kationty sodíku, draslíku, vápníku, hořčíku, amonia nebo protonovaného benzathinu (N,N'-dibenzylethylendiaminu), cholinu, ethanolami12 ·· · • 9 9
9 9 « ···· φ • · • 999 e
9 • 9 9
9 9 9 • » ··»· * · 9 ·· « »· ···· « »
9 • 9
9 · *· nu, diethanolaminu, ethylendiaminu, meglaminu (N-methylglukaminu), benethaminu (N-benzylfenylethylaminu), piperazinu nebo tromethaminu (2-amino-2-hydroxymethyl-1,3-propandiolu).
Způsoby podle vynálezu vedou k tvorbě kosti, jejímž výsledkem je snížený počet zlomenin. Příspěvek tohoto vynálezu v tomto oboru spočívá v tom, že poskytuje způsoby, které zvyšují tvorbu kosti, což se projevuje prevencí, retardací a/nebo regresí osteoporosy a příbuzných kostních poruch.
Předmětem vynálezu jsou také sloučeniny zvolené ze souboru sestávajícího z
7-{2S- [3R-hydroxy-4-(3-fenoxyfenyl)butyl] -5-oxopyrrolid.in-l-yl}heptanové kyseliny;
5S-(4-(3-chlorfenyl)-3R-hydroxybutyl)-1-(6-(2H-tetrazol-5-yl)hexylpyrrolidin-2-onu;
7-(2S-(3R-hydroxy-4-(3-trifluormethylfenyl)butyl)-5-oxopyrrolidin-1-yl)heptanové kyseliny;
7-{2S- [4-(3-chlorfenyl)-3R-hydroxybutyl]-5-oxopyrrolidin-l-yl}heptanové kyseliny a
5S-(3R-hydroxy-4-(3-trifluormethylfenyl)butyl)-1-(6-(2H-tetrazol-5-yl)hexyl)pyrrolidin-2-onu.
Předmětem vynálezu je také zejména 7-{2S-[3R-hydroxy-4-(3-fenoxyfenyl)butyl]-5-oxopyrrolidin-l-yl}heptanová kyselina .
• ···· · ·
Předmětem vynálezu je také zejména 5S-(4-(3-chlorfenyl)-3R-hydroxybutyl)-1-(6-(2H-tetrazol-5-yl)hexylpyrrolidin-2-on.
Předmětem vynálezu je také zejména 7-(2S-(3R-hydroxy-4-(3 -trifluormethylfenyl)butyl)-5-oxopyrrolidin-l-yl)heptanová kyselina .
Předmětem vynálezu je také zejména 7-{2S-[4-(3-chlorfenyl) -3R-hydroxybutyl]-5-oxopyrrolidin-1-yljheptanová kyselina.
Předmětem vynálezu je také zejména 5S- (3R-hydroxy-4-(3 -trifluormethylfenyl)butyl)-1-(6-(2H-tetrazol-5-yl)hexyl)pyrrolidin-2-on.
Další znaky a výhody tohoto vynálezu budou zřejmé z dalšího popisu a patentových nároků.
Následuje podrobnější popis vynálezu.
Jako selektivního agonisty receptoru EP4 je mošno použít jakéhokoliv selektivního agonisty receptoru EP4 . Selektivními agonisty EP4 jsou sloučeniny, jejichž hodnota IC50 je v případě receptoru EP1, EP2 a EP3 alespoň desetinásobně vyšší než hodnota IC50 v případě receptoru podtypu EP4. Například 7-(2-(3-hydroxy-4-fenylbutyl)-5-oxopyrrolidín-l-yl)heptanová kyselina je selektivním agonistou receptoru PGE2 EP4, jehož hodnota IC50 při vazbě k receptoru EP4 je 16nM, zatímco u všech ostatních subtypů receptoru EP, jako EP1, EP2 a EP3, je její IC50 více než 3200nM.
Sloučeniny obecného vzorce I je možno připravovat způsoby popsanými v US patentu 4 177 346 stejného majitele. Tento • ······ patent je zde citován náhradou za přenesení jeho obsahu do tohoto textu.
Všechny selektivní agonisty receptoru EP4, kterých se používá při způsobech podle vynálezu, jsou uzpůsobeny pro terapeutické použití ve formě činidel, která stimulují tvorbu kosti a zvyšují kostní hmotu u obratlovců, například savců, a zejména lidí. Jelikož tvorba kostí úzce souvisí s rozvojem osteoporosy a kostních poruch, užitečnost agonistů, kterých se používá při způsobech podle vynálezu, spočívá v tom, že svým účinkem na kosti zabraňují osteoporose, zastavují a/nebo regretují osteoporosu.
Užitečnost selektivních agonistů EP^ kterýmb i 3Θ
OH z. -L v ci při způsobech podle vynálezu jako léčiv pro léčení stavů, které se projevují nízkou kostní hmotou (například osteoporosy) u obratlovců, například savců (zvláště lidí, zejména u žen), je možno demonstrovat pomocí účinnosti agonistů při konvenčních zkouškách, jako je zkouška s vazbou k receptoru, zkouška s cyklickým AMP, in vivo stanovení a zkouška hojení zlomeniny (všechny tyto zkoušky jsou popsány dále) . Takových zkoušek je také možno použít jako prostředků pro porovnání účinnosti selektivních agonistů EP4 mezi sebou a s účinností jiných známých sloučenin a kompozic. Výsledky těchto srovnávacích zkoušek jsou užitečné pro určení úrovně dávkování u obratlovců, například u savců, včetně člověka, při léčení takových chorob.
Zkouška in vivo
Účinnost činidel s anabolickým účinkem na kosti při stimulaci tvorby kosti a zvyšování kostní hmoty je možno zkoušet na intaktních samcích nebo samicích potkana nebo na • ·· ·
• · · · · • ···· · · · • · · · samcích nebo samicích potkana s deficiencí pohlavních hormonů (po orchidektomii nebo ovariektomii).
Pro studii je možno použít samců nebo samic potkana o různém stáří (jako 3 měsíců). Buď intaktnim nebo kastrovaným (ovariektomizovaným nebo orchidektomizovaným) potkanům se 30 dní subkutánními injekcemi nebo žaludeční sondou podávají agonisté prostaglandinu v různých dávkách (jako 1, 3 nebo 10 mg/kg/den). V případě kastrovaných potkanů se ošetřování zahájí následující den po chirurgickém výkonu (za účelem prevence ztráty kostní tkáně) nebo v době, kdy již ke ztrátě kostní tkáně došlo (za účelem jejího znovuobnovení). Všem zvířatům se během zkoušky ponechá volný přístup k vodě a peletizované potravě dostupné na trhu (Teklad Rodent Diet #8064, Harlan Teklad, Madison, WI, USA) obsahující 1,46 % vápníku, 0,99 % fosforu a 4,96 IU/g vitaminu D3. 12 dnů a 2 dny před usmrcením se všem potkanům subkutánními injekcemi podá 10 mg/kg kalceinu. Potkani se usmrtí a provedou se následující mereni
Stanovení minerálů ve femuru
Při pitvě se každému potkanu vyjme pravý femur a podrobí skanování za použití zařízení pro rentgenovou absorpciometrii při dvou energetických úrovních (duální fotonová rentgenová technika, DXA, QDR 1000/W, Hologic lne., Waltham, MA, USA) vybaveného softwarem Regional High Resolution Scan (Hologic lne., Waltham, MA, USA), přičemž velikost snímaného pole je 5,08 x 1,902 cm, rozlišení 0,0254 x 0,0127 cm a rychlost snímáni 7,25 mm/s. Analyzují se skanové obrazce femuru a stanoví se kostní plocha, minerální obsah kosti (BMC) a minerální hustota kosti (BMD) celého femuru (WF), distální femorální metafýzy (DFM), dříku femuru (FS) a proximálního femuru (PF).
Histomorfometrická analýza tibie
Při pitvě se vyjme pravá holenní kost, svaly se odpreparují a kost se nařeže na tři části. Proximální tibie a dřík tibie se fixují v 70% ethanolu, dehydrují ethanolem o odstupňované koncentraci, v acetonu zbaví tuku a poté uloží do methylmethakrylátu (Eastman Organic Chemicals, Rochester, NY, USA) .
Přední části proximální metafýzy tibie se za použití zařízení pro mikrotomy Reichert-Jung Polycut S nařežou na na tloušťku 4 a 10 gm. Řezy o tloušfce 4 gm se obarví modifikovaným Massonovým barvivém Trichrome, zatímco lOgm řezy se ponechají neobarvené. Pro histomorfometrii spongiosní kosti se použije jednoho 4gm a jednoho lOgm řezu od každého potkana.
Za použití mikrotomu Reichert-Jung Polycut S se připraví příčné řezy dříku tibie o tloušfce 10 gm. Těchto řezů se použije pro histomorfometrickou analýzu kortikální kosti.
Histomorfometrie spongiosní kosti
Pro statická a dynamická histomorfometrická měření sekundární spongiosy proximální metafýzy tibie mezi 1,2 a 3,6 mm distálně k junkci růstové chrupavky a epifýzy se použije histomorfometrického systému Bioquant OS/2 (R&M Biometrics, lne. , Nashville, TN, USA) . Prvních 1,2 mm metafýzové oblasti tibie je třeba vynechat, aby se měření omezilo na sekundární spongiosu. Pro stanovení ukazatelů objemu kosti, struktury kosti a resorpce kosti se použije 4gm řezů, zatímco pro
• 0 tkáně se
0 0 00··· 0 «00 • 0· · stanovení ukazatelů tvorby kostní použije 10gm řezů.
a obratu kosti
I. Měření a výpočty objemu a struktury trámčiny kosti:
1. Celková plocha metafýzy (TV, mm2); plocha metafýzy mezí 1,2 a 3,6 mm distálně k junkci růstové chrupavky a epifýzy.
2. Plocha trámčité kosti (BV, mm2): celková plocha trámčiny v TV.
3. Obvod trámčité kosti (BS, mm) : délka celkového obvodu trámčité kosti.
4. Objem trámčité kosti (BV/TV, %): BV/TV x 100.
5. Trabekulární kostní číslo (TBN, #/mm): 1,199/2xBS/TV.
6. Tloušťka trámčité kosti (TBT, μπι) : (2000/1,199) x x (BV/BS) .
7. Trabekulární kostní separace (TBS, μτη) : (2000x1,199) x x (TV-BV).
II. Měření a výpočty týkající se resorpce kosti
1. Počet osteoklastů (OCN, #) : celkový počet osteoklastů v celé oblasti metafýzy.
. Obvod osteoklastů (OCP, mm) : délka obvodu trámčiny pokryté osteoklasty.
3. Počet osteoklastů na milimetr (OCN/mm, #/mm): OCN/BS.
• ·· ·
4. Procenta obvodu osteoklastů (%OCP, %): OCP/BSxlOO.
III. Měření a výpočty týkající se tvorby kostní tkáně a obratu kosti
1. Obvod jednou značený kalceinem (SLS, mm): celková délka obvodu trámčité kosti s jednou kalceinovou značkou.
2. Obvod dvakrát značený kalceinem (DLS, mm) : celková délka obvodu trámčité kosti se dvěma kalceinovými značkami.
3. Vzdálenost mezi značkami (ILW, μτα) : průměrná vzdálenost mezi dvěma kalceinovými značkami.
4. Procento mineralizovaného obvodu (PMS, %) : (SLS/2 + + DLS)/BSxlOO.
5. Rychlost minerální apozice (MAR, /im/den) : ILW/značkový interval.
6. Rychlost tvorby kosti/povrch ref. (BFR/BS, Mm2/den/Atm) :
(SLS/2+DLS)xMAR/BS.
7. Rychlost obratu kosti (BTR, %/rok): (SLS/2+DLS) x x MAR/BV x 100.
Histomorfometrie kortikální kosti
Pro statická a dynamická histomorfometrická měření kortikální tkáně dříku tibie se použije histomorfometrického systému Bioquant OS/2 (R&M Biometrics, lne., Nashville, TN, USA). Vypočítá se celková plocha tkáně, plocha medulární dutiny, obvod periostu, obvod endokortexu, jednou značený • ·· · obvod, dvakrát značený obvod a vzdálenost mezi značkami jak na povrchu okostice, tak na endokortexu a dále plocha kortexu kosti (celková plocha tkáně - plocha medulární dutiny), procentický podíl plochy kortexu kosti (plocha kortexu/celková plocha tkáně x 100), procentický podíl medulární dutiny (plocha medulární dutiny/celková plocha tkáně x 100) , procentický značený obvod periostu a endokortexu [(jednou značený obvod/2 + dvakrát značený obvod)/celkový obvod x 100], rychlost minerální apozice (vzdálenost mezi značkami/intervaly) a rychlost tvorby kosti [rychlost minerální apozice x x [(jednou značený obvod/2 + dvakrát značený obvod)/celkový obvod].
Statistické metody
Statistické údaje se vypočtou za použití balíčku StatView 4.0 (Abacus Concepts, lne., Berkeley, CA, USA). Pro porovnání rozdílů mezi skupinami se použije analýzy variance (ANOVA) a poté Fisherovy PLSD (Stát View, Abacus Concepts lne., 1918 Bonita Ave Berkeley, CA, 94704-1014).
Stanoveni zvýšení cAMP u buněčné linie 293-S stabilně nadexprimující rekombinantní lidské receptory EP4 cDNA představující úplné otevřené čtecí rámce lidských receptorů EP4 se získá pomocí reversní PCR (RT-PCR) za použití oligonukleotidových primerů založených na publikovaných sekvencích (1) a RNA z primárních buněk lidských plic (EP4), jako templátů. cDNA se klonují do mnohočetného klonovacího místa pcDNA3 (Invitrogen Corporation, 3985B Sorrento Valley Blvd. San Diego, CA, 92121, USA) a použijí pro transfekci buněk ledvin lidského embrya 293-S pomocí koprecipitace za použití fosforečnanu vápenatého. G418-resistentní kolonie se nechají růst a zkoušejí na specifickou vazbu [3H] PGE2. Transfektanty, které vykazují vysoké hladiny specifické vazby [3H]PGE2, se dále charakterizují Scatchardovou analýzou, čímž se stanoví Bmax a Kds pro PGE2. Linie zvolené pro zkoušení sloučenin mají přibližně 256 400 receptorů na buňku a Kd =
2,9nM pro PGE2 (EP4). Konstitutivní exprese receptoru v rodičovských buňkách 2 93-S je zanedbatelná. Buňky se udržují v RPMI doplněném fetálním hovězím sérem (konečná koncentrace 10 %) a G418 (konečná koncentrace 700 ^g/ml).
cAMP odpověď v liniích 293-S/EP4 se stanoví tak, že se buňky intenzivním klepáním oddělí od kultivačních nádob do 1 ml PBS bez vápenatých a hořečnatých iontů a přidá se RPMI bez séra do konečné koncentrace 1 χ 106 buněk/ml a 3-ísobutyl-l-methylxanthin (IBMX) do konečné koncentrace lmM. Jeden mililitr buněčné suspenze se ihned navzorkuje do individuální 2ml mikrocentrífugy se šroubovým uzávěrem a inkubuje bez uzavření 10 minut při 37°C v atmosféře 5% oxidu uhličitého o relativní vlhkosti 95 %. Sloučeniny, které se mají zkoušet, se k buňkám přidají ve zředění 1 : 100, takže konečná koncentrace v DMSO nebo ethanolu je 1 %. Ihned po přídavku sloučenin se zkumavky uzavřou, jejich obsah se promísí dvojím převrácením a inkubuje 12 minut při 37°C. Vzorky se poté lysuj£ lOminutovou inkubací při 100°C a bezprostředně poté 5 minut chladí na ledu. Buněčné fragmenty se peletizují 5minutovou centrifugací při 1000 x g a vyčiřené lysáty se převedou do nových zkumavek. Koncentrace cAMP se stanoví za použití obchodně dostupného kitu pro radioimunologické stanoveni cAMP (NEK-033, NEN/DuPont Research Products, 549 Albany St. , Boston, MA, 02118, USA) po zředění vyčiřených lysátů 1 : 10 pufrem pro RIA cAMP. Obvykle se buňky ošetří zkoušenou sloučeninou v 6 až 8 koncentracích stoupajících logaritmicky. Hodnoty EC50 se ·· 4 ♦ · · • ·4 · kalkulačce za použití lineární regresní křivky závislosti odpovědi na dávce.
analýzy vypočítají na lineární části
Citace
1. Regan, J. W. , Bailey, T.
L., Bogardus, A. M. , Donello, J.
K. M., Woodward, D. F. a Gil, D
Human Prostaglandin Receptor Pharmacologically Defined EP2 213 až 220.
J., Pepperl, D. J., Pierce, K. E., Fairbairn, C. E., Kedzie, W., 1994, Cloning of a Novel with Characteristics of the Subtype., Mol. Pharmacology 46:
Zkouška vazby k receptorům prostaglandinu E2
Příprava membrán
Všechny operace se provádějí při 4°C. Transfekované buňky exprimující receptory prostaglandinu E2 typu 1 (EPJ , typu 2 (EP2) , typu 3 (EP3) nebo typu 4 (EP4) se sklidí a suspendují v koncentraci 2 miliony buněk/ml v pufru A [50mM Tris-HCl (pH 7,4), lOmM chlorid hořečnatý, lmM EDTA, lmM peptid Pefabloc (Sigma, St. Louis, MO, USA), ΙΟμΜ peptid Phosporamidon (Sigma, St. Louis, MO, USA), ΙμΜ peptid Pepstatin A (Sigma, St. Louis, MO, USA), ΙΟμΜ peptid Elastatinal (Sigma, St. Louis, MO, USA), ΙΟΟμΜ peptid Antipain (Sigma, St. Louis, MO, USA] a lysují pomocí ultrazvuku za použití sonikátoru Branson (model #250, Branson Ultrasonics Corporation, Danbury, CT, USA) ve dvou patnáctisekundových impulzech. Nelyžované buňky a fragmenty se odstraní desetiminutovou centrifugací při 100 x g. Membrány se poté sklidí 30minutovou centrifugací při 45 000 x g. Peletizované membrány se resuspendují na koncentraci 3 až 10 mg proteinu/ml, přičemž koncentrace proteinu se stanoví Bradfordovou metodou [Bradford, M., Anal. Biochem., 72, 248 • 4
4
4« ···· • 4 · » 4444 (1976)] . Resuspendované membrány se až do použití skladují zmrazené při -80°C.
Vazebná zkouška
Zmrazené membrány připravené výše popsaným způsobem se rozmrazí a zředí pufrem A na koncentraci 0,5 mg/ml (potkaní EP2) nebo 0,3 mg/ml (potkaní EP4) . Jeden objemový díl membránového přípravku se spojí s 0,05 objemového dílu zkoušené sloučeniny nebo pufru a jedním objemovým dílem 3nM 3Hprostaglandinu E2 (#TRK 431, Amersham, Arlington Heights, IL, USA) v pufru A. Výsledná směs (o celkovém objemu 2 05 μΐ) se inkubuje 1 hodinu při 25°C. Membrány se poté oddělí filtrací přes filtr ze skleněných vláken typu GF/C (#1205-401, Wallac, Gaithersburg, MD, USA) za použití sklízeče Tomtec (Model Mach 11/96, Tomtec, Orange, CT, USA). Membrány s navázaným 3H-prostaglandinem E2 jsou zachyceny filtrem, pufr a nenavázaný 3H-prostaglandin E2 projdou filtrem do odpadu. Každý vzorek se promyje 3 x 3 ml pufru [50mM Tris-HCl (pH 7,4), lOmM chlorid hořečnatý, lmM EDTA]. Filtry se poté vysuší zahříváním v mikrovlnné troubě. Za účelem stanovení množství 3H-prostaglandinu navázaného k membránám se vysušené filtry umístí do plastových sáčků se scintilační kapalinou a spočítají za použití čítače LKB 1205 Betaplate (Wallac, Gaithersburg, MD, USA). Z koncentrace zkoušené sloučeniny potřebné pro 50% vytěsnění specificky vázaného 3H-prostaglandinu E2 se stanoví hodnoty IC50.
Buňky exprimující potkaní receptory prostaglandinu E2 buď EP2 nebo EP4 se získají způsoby známými odborníkům v tomto oboru. Obvykle se postupy dobře známými odborníkům v tomto oboru popsanými výše připraví PCR primery odpovídající 5'a 3' koncům publikovaného receptoru o plné délce a použije se jich ·· ···· při RT-PCR reakci za použití úplné RNA z ledvin potkana u obou receptorů EP2 a EP4.
Kódující sekvence pro potkaní receptor EP2 o plné délce se připraví způsobem popsaným v Němoto et al., Prostaglandins, 1997, 54, 713 až 725. Kódující sekvence pro potkani receptor
EP4 se připraví způsobem popsaným v Sando et al . , Biochem. Biophys. Res. Comm., 1994, 200, 1329 až 1333. Těchto receptorů o plné délce se použije při přípravě buněk 293S exprimujících receptory EP2 a EP4.
Kódující sekvence pro receptor EPI o plné délce se připraví způsobem popsaným ve Funk et al. , Journal of Biological Chemistry, 1993, 268, 26767 až 26772. Kódující sekvence pro receptor EP2 o plné délce se připraví způsobem popsaným v Regan et al. , Molecular Pharmacology, 1994, 46, 213 až 220. Kódující sekvence pro receptor EP3 o plné délce se připraví způsobem popsaným v Regan et al. , British Journal of Pharmacology, 1994, 112, 377 až 385. Kódující sekvence pro receptor EP4 o plné délce se připraví způsobem popsaným v Bastien, Journal of Biological Chemistry, 1994, 269, 11873 až
11877. Těchto receptorů o plné délce se použije pro přípravu buněk 293S, které expřimují receptory EPI, EP2, EP3 a EP4.
Buňky 293S, které exprimuj! receptor lidského prostaglandinu E2 EPI, EP2, EP3 nebo EP4 se připraví postupy dobře známými odborníkům v tomto oboru. Obvykle se postupy dobře známými odborníkům v tomto oboru připraví PCR primery odpovídající 5'a 3' koncům publikovaného receptoru o plné délce a použije se jich při RT-PCR reakci za použití celé RNA z lidských ledvin (pro EPI), lidských plic (EP2), lidských plic (EP3) nebo lidských lymfocytů (EP4) , jako zdroje. PCR produkty se klonují postupem s TA přesahem do pCR2.1
φ · ···· φ 4444 44 4 4444 4 4 • 4 4 4 4
4 (Invitrogen, Carlsbad, CA) a totožnost klonovaného receptoru se potvrdí sekvencováním DNA.
Do buněk 293S (Mayo, Dept. of Biochemistry, Northwestern Univ.) se elektroporací trasfekuje klonovaný receptor v pcDNA3. Po selekci transfekovaných buněk pomocí G418 se získají stabilní buněčné linie exprimující receptor.
Po vazebné zkoušce za použití 3H-PGE2, při níž je kompetitorem neznačený PGE2, se zvolí klonované buněčné linie exprimující maximální počet receptorů.
Zkouška účinnosti na hojení zlomenin
Zkouška účinnosti na hojení zlomenin po systemickém podávání
Vyvolání zlomeniny
Potkani Sprague-Dawley o stáří 3 měsíců se anestetizují ketaminem. Proximální částí pravé tibie nebo femuru se vede lem anteromediální řez. Následující popis se týká chirurgického postupu na tibii. Provede se řez ke kosti a 4 mm proximálně k distální poloze tibiální drsnatiny a 2 mm od středové čáry k přednímu válu se vyvrtá lmm otvor. Nitrodřeňové hřebování se provede za použití 0,8mm trubičky z nerezové oceli (maximální zátěž 36,3 N, maximální tuhost 61,8 N/mm, při zkoušce za stejných podmínek jako kosti). Neprovádí se žádné rozšiřování medulárního kanálu. 2 mm nad tibiofibulární junkcí se způsobí standardizovaná uzavřená zlomenina tříbodovým ohnutím za použití speciálně zkonstruovaných nastavitelných kleští s tupými čelistmi. Za účelem minimalizace poškození měkkých tkání, se pracuje opatrně, aby nedošlo k dislokaci zlomeniny. Kůže se uzavře šitím nylonovým
4· 4
4 4*44
4 4 • «·44 4 • · · 4 4 4
4 4 4
4 4444
4 4
4
monofílamentem. Operace se provádí za sterilních podmínek. Bezprostředně po hřebováni se fraktury zrentgenují. Zvířata se zlomeninami mimo danou oblast diafýzy nebo s dislokovanými hřeby se vyloučí. Za účelem zkoušení hojení zlomenin se zbývající zvířata náhodně rozdělí do dále popsaných skupin, přičemž každá podskupina má 10 až 12 zvířat. První skupině se denně žaludeční sondou podává vehikulum (směs vody a 100% ethanolu v poměru 95 : 5, 1 ml/potkan), zatímco zbývajícím se denně žaludeční sondou podává zkoušená sloučenina v denní dávce 0,01 až 100 mg/kg (1 ml/potkan), po dobu 10, 20, 40 a 80 dní .
10., 20., 40. a 80. den se 10 až 12 potkanů z každé skupiny anestetizuje ketaminem a usmrtí exsangvinací. Obě tibiofibulární kosti se vyříznou a zbaví všech měkkých tkání. Kosti 5 až 6 potkanů z každé skupiny se pro účely histologické analýzy uchovávají v 70% ethanolu a kosti dalších 5 až 6 potkanů z každé skupiny se pro účely radiografie a biomechanického zkoušení uchovávají v pufrovaném Ringerově roztoku (+4°C, pH 7,4).
Histologická analýza
Způsoby histologické analýzy zlomenin kostí byly publikovány v Mosekilde a Bak (The Effects of Growth Hormone on Fracture Healing in Rats: A Histological Description. Bone, 14: 19 až 27, 1993). Tyto postupy lze stručně popsat takto: Zlomená kost se odřízne ve vzdálenosti 8 mm na obě strany od linie lomu a nedekalcifikovaná uloží do methylmetakrylátu. Za použití mikrotomu Reichert-Jung Polycut se připraví čelní řezy o tloušťce 8 μω. Pro vizualizaci buněčné a tkáňové odpovědi na hojení zlomeniny s ošetřením a bez ošetření se použije středních čelních řezů (jak kosti holenní, tak kosti lýtkové) • * 0 00 ·
0 0 0 «0000 0 0 barvených Masson-Trichrome. Řezů barvených červení
Sirius se použije pro demonstraci strukturálních charakteristik svalku a pro rozlišení mezi vláknitou kostí a lamelární kostí v místě fraktury. Provedou se následující měření: (1) rozestup zlomeniny - měří se jako nejkratší vzdálenost mezi konci kortikální kosti ve zlomenině, (2) délka svalku a průměr svalku, (3) celkový objem oblasti svalku v kosti, (4) kostní tkáň na oblast tkáně uvnitř oblasti svalku, (5) vláknitá tkáň ve svalku, (6) chrupavčitá oblast ve svalku.
Biomechanická analýza
Biomechanické analytické postupy jsou popsány v Bak a Andreassen (The Effects of Aging on Fracture Healing in Rats. Calcif. Tissue Int. 45: 292 až 297, 1989). Tento postup je stručně možno popsat takto: Před biomechanickou zkouškou se pořídí radiografické snímky všech zlomenin. Mechanické vlastnosti hojících se fraktur se analyzují destruktivním postupem ohýbání ve třech nebo čtyřech bodech. Stanoví se maximální zátěž, tuhost, energie při maximální zátěži, ohyb při maximální zátěži a maximální napětí.
Zkouška účinnosti na hojení zlomenin po místním podávání
Vyvolání zlomeniny
Pro zkoušku se použije anestetizovaných samic nebo samců psa beagle o stáří asi 2 roky. Příčná zlomenina vřetenní kosti se vyvolá pomalým zvyšujícím se zatěžováním při tříbodovém ohýbání, jak je to popsáno v Lenehan et al. (Lenehan, T. M., Balligand, M., Nunamaker, D. M., Wood, F. E., Effects of EHDP on Fracture Healing in Dogs, J. Orthop. Res. 3, 499 až 507, 1985) . Zlomenina se protáhne drátem, aby se zajistilo úplné
4··*· · ·· · • ♦ · » · · • »··4 • · ···» · ·» ···· anatomické přerušení kosti. Následná místní dodávka agonistu prostaglandinu na místo fraktury se provádí pomalým uvolňováním sloučeniny z pelet s pomalým uvolňováním nebo se sloučeniny podávají ve vhodné formulaci, jako jsou roztoky
nebo suspenze gelových past po dobu 10, 15 nebo 2 0 týdnů.
Histologická analýza
Způsoby histologická analýzy zlomenin kostí byly
publikovány v Peter et al. (Peter, C. P. , Cook, W. 0. ,
Nunamaker, D. M., Provost, M. T., Seedor, J. G. , Rodan, G. . A. ,
Effects of alendronate on fracture healing and bone remodeling in dogs, J. Orthop. Res. 14, 74 až 70, 1996) a Mosekilde a Bak (The Effects of Growth Hormone on Fracture Healing in Rats: A Histological Description. Bone, 14: 19 až 27, 1993). Tyto postupy lze stručně popsat takto: Zlomená kost se odřízne ve vzdálenosti 3 cm na obě strany od linie lomu a nedekalcifikovaná uloží do methylmetakrylátu. Za použiti mikrotomu Reichert-Jung Polycut se připraví čelní řezy o tloušťce 8 gm. Pro vizualizaci buněčné a tkáňové odpovědi na hojení zlomeniny s ošetřením a bez ošetření se použije středních čelních řezů (jak kosti holenní, tak kosti lýtkové) barvených Masson-Trichrome. Řezů barvených červení Sirius se použije pro demonstraci strukturálních charakteristik svalku a pro rozlišení mezi vláknitou kostí a lamelární kosti v místě fraktury. Provedou se následující měření: (1) rozestup zlomeniny - měří se jako nejkratší vzdálenost mezi konci kortikální kosti ve zlomenině, (2) délka svalku a průměr svalku, (3) celkový objem oblasti svalku v kosti, (4) kostní tkáň na oblast tkáně uvnitř oblasti svalku, (5) vláknitá tkáň ve svalku, (6) chrupavčitá oblast ve svalku.
• ti • ti ti···
Biomechanická analýza
Biomechanické analytické postupy jsou popsány v Bak a Andreassen (The Effects of Aging on Fracture Healing in Rats. Calcif. Tissue Int. 45: 292 až 297, 1989) a Peter et al. (Peter, C. P., Cook, W. 0., Nunamaker, D. M., Provost, Μ. T., Seedor, J. G., Rodan, G. A., Effects of alendronate on fracture healing and bone remodeling in dogs, J. Orthop. Res.
14, 74 až 70, 1996) . Tento postup je stručně možno popsat takto: Před biomechanickou zkouškou se pořídí radiografické snímky všech zlomenin. Mechanické vlastnosti hojících se fraktur se analyzují destruktivním postupem ohýbání ve třech nebo čtyřech bodech. Stanoví se maximální zátěž, tuhost, energie při maximální zátěži, ohyb při maximální zátěži a maximální napětí.
Selektivní agonisty EP4 je při způsobech podle vynálezu možno podávat jakýmkoliv způsobem pro systemíckou a/nebo místní dodávku (například na místo zlomeniny kosti, osteotomie nebo na místo chirurgického ortopedického výkonu). Jako tyto způsoby je možno uvést perorální podávání, parenterální podávání, intraduodenální podávání atd. Sloučeniny se podle vynálezu obvykle podávají perorálně. Parenterálního podávání (intravenosního, intramuskulárního, subkutánního nebo intramedulárního) je však možno využít například v případech, kdy je perorální podávání nevhodné s ohledem na zvolený cíl nebo kdy je pacient neschopen pozřít léčivo.
Způsobů podle vynálezu se používá pro léčení a zlepšování hojení zlomenin kostí a osteotomií tak, že se místně (například na místa zlomenin kostí nebo osteotomií) podávají selektivní agonisté receptoru EP4. Selektivní agonisté se podávají na místo zlomeniny nebo osteotomie například injekcí • # · ·· · · · · • · · · · · ► · · · · · · · »· · · ······· · · • · · · ···· * · · · · · · · sloučeniny ve vhodném rozpouštědle (například olejovém rozpouštědle, jako arašídovém oleji) k růstové chrupavce nebo, v případě otevřeného chirurgického zákroku, se taková sloučenina ve vhodném nosiči nebo ředidle, jako jsou kostní vosk, demineralizovaný kostní prášek, polymerní kostní cementy, kostní těsniva atd., aplikuje na místo zákroku. Alternativně je lokální aplikaci možno provádět tak, že se roztok nebo disperze sloučeniny ve vhodném nosiči nebo ředidle nanese na povrch nebo se začlení do tuhých nebo polotuhých implantátů, jakých se obvykle používá v ortopedické chirurgii, jako je dakronová sítka, pěnový gel a Kiel Bone, nebo protéz.
Množství a doba podávání sloučenin bude v každém případě samozřejmě záviset na léčeném subjektu, závažnosti postižení, způsobu podávání a rozhodnutí předepisujíčího lékaře. Vzhledem k odlišnostem mezi jednotlivými pacienty je nutno uvedené dávkování chápat pouze jako vodítko a ošetřující lékař může dávky léčiva nastavit tak, aby se dosáhlo účinku (například zvýšení kostní hmoty), kterou považuje za vhodnou pro konkrétního pacienta. Při posuzování stupně požadovaného účinku musí ošetřující lékař zvážit různé faktory, jako výchozí hladinu kostní hmoty, věk pacienta, předchozí chorobu, jakož i přítomnost jiných chorob (například kardiovaskulárních) .
Obvykle se používá takového množství selektivního agonisty receptoru EP4, které je dostatečné pro zvýšení kostní hmoty nad práh zlomeniny kosti (podrobněji viz World Health Organization Study citovaná výše).
Selektivní agonisty receptoru EP4 se při způsobech podle vynálezu obvykle podávají ve formě farmaceutické kompozice, která obsahuje alespoň jednu ze sloučenin podle vynálezu spolu • 4 ·
4444 • 4 4 4 4 4 ·· φ · 4 4444 44 4 · 4444 4 4 4 444 4 4 4 4 4
SH · · 4 4 4 4444 *44* 4 4 4 4 44 44 s farmaceuticky vhodným vehikulem nebo ředidlem. Sloučeniny podle vynálezu mohou být tedy podávány jednotlivě v podobě kterékoliv z obvyklých perorálních, intranasálních, parenterálních, rektálních nebo transdermálních dávkovačích forem.
Pro perorální podávání se může použít roztoků, suspenzí, tablet, pilulí, tobolek, prášků apod. Lze použít tablet obsahujících různé excipienty, jako je citran sodný, uhličitan vápenatý a fosforečnan vápenatý, spolu s různými rozvolňovadly, jako je škrob (přednostně bramborový nebo tapiokový škrob) a určité komplexní silikáty s granulačními pojivý, jako je polyvinylpyrrolidon, sacharosa, želatina a klovatina. Pro tabletovací účely mohou být přídavně přítomna lubrikační činidla, jako je stearan hořečnatý, natriumlaurylsulfát a mastek. Pevné prostředky podobného typu mohou být také přítomny jako náplně v měkkých nebo tvrdých želatinových tobolkách. V tomto případě obsahují použité prostředky přednostně také laktosu nebo vysokomolekulární polyethylenglykoly. Při výrobě vodných suspenzí a/nebo elixírů, které se hodí pro perorální podávání, se může účinná přísada mísit s různými sladidly nebo aromatizačnimi látkami, barvicími přísadami či barvivý a - pokud je to zapotřebí - emulgátory a/nebo suspenzními činidly a dále také takovými ředidly, jako je voda, ethanol, propylenglykol, glycerol a jejich různé kombinace.
Pro parenterální podávání se může použit roztoků buď v sezamovém nebo arašídovém oleji, nebo ve vodném propylenglykolu, jakož i sterilních vodných roztoků odpovídající vodorozpustné soli. Vodné roztoky by měly být účelně pufrovány (pokud je to nutné) a kapalné ředidlo by mělo být nejprve isotonizováno přidáním dostatečného množství solného • · *» · ·· · roztoku nebo glukosy. Takové vodné roztoky se hodí pro intravenosní, intramuskulární, subkutánní a intraperitoneální injekční podávání. Výroba všech takových roztoků za sterilních podmínek se snadno provádí standardními farmaceutickými technologiemi, které jsou dobře známy odborníkům v tomto oboru.
Pro účely transdermálního (například topického) podávání se používá zředěných sterilních vodných nebo zčásti vodných roztoků (obvykle o koncentraci 0,1 až 5%), které se připravují podobným způsobem jako parenterální roztoky.
Způsoby výroby různých farmaceutických kompozic, které obsahují určité množství účinné sl známé nebo budou odborníku v tomto oboru zřejmé z tohoto popisu (viz například Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easter, Pa, 19. vydání (1995)).
Protokol zkoušky
Účelem této zkoušky je stanovení, zda selektivní agonista receptoru EP4, a zejména 7-(2-(3-hydroxy-4-fenylbutyl)-5-oxopyrrolidin-l-yl)heptanová kyselina, může obnovit kostní hmotu při modelové zkoušce na OVX potkanech.
Samice potkana Sprague-Dawley o stáří 3,5 měsíce se ovariektomizuj í (OVX) . Deset měsíců poté se jim po dobu 2 8 dnů subkutánními injekcemi podává vehikulum nebo 7-(2-(3-hydroxy-4-fenylbutyl)-5-oxopyrrolidin-l-yl)heptanová kyselina v denní dávce 30 mg/kg. Při pitvě se každému potkanu vyjme pravý femur a podrobí skanování za použití zařízení pro rentgenovou absorpciometrii při dvou energetických úrovních (duální fotonová rentgenová technika, DEXA, QDR 1000/W, Hologic lne.,
99 9
1999 9 9
Waltham, MA, USA) vybaveného softwarem Regional High Resolution Scan (Hologic lne., Waltham, MA, USA), přičemž velikost snímaného pole je 5,08 x 1,902 cm, rozlišení 0,0254 x 0,0127 cm a rychlost snímání 7,25 mm/s. Analyzuji se skanové obrazce femuru. Způsobem popsaným v H. Z. Ke et al. , Droloxifene, a New Estrogen Antagonist/Agonist, Prevents Bone Loww in Ovariectomized Rats, Endocrinilogy 136, 2435 až 2441,
1995 se stanoví minerální obsah kosti (BMC) a minerální hustota kosti (BMD) celého femuru (WF), distální femorální metafýzy (DFM) a dříku femuru (FS).
Výsledky a diskuse
Oproti OVX potkanům ošetřovaným vehikulem, došlo u OVX potkanů ošetřovaných 7-(2-(3-hydroxy-4-fenylbutyl)-5-oxopyrrolidin-1-yl)heptanovou kyselinou ke zvýšení BMC celého femuru o 17 %, BMD celého femuru o 13 %, BMC distálního femuru o 8 %, BMD distálního femuru o 8 %, BMC dříku femuru o 20 % a BMD dříku femuru o 18 %. U potkanů ošetřovaných touto sloučeninou nebyly pozorovány žádné vedlejší účinky typu PGE2.
Tyto údaje ukazují, že 7-(2-(3-hydroxy-4-fenylbutyl)-5-oxopyrrolidin-l-yl)heptanová kyseliny, selektivní agonista receptoru PGE2 EP4, u ovariektomizovaných potkanů s rozvinutou osteopenií stimuluje tvorbu kosti a obnovuje kostní tkáň.
NMR spektra byla zaznamenána na spektrometru Varian Unity 400 při asi 23°C 400 MHz pro protonová jádra. Chemické posuny jsou vyjádřeny v dílech na milion dílů směrem dolů od trimethylsilanu. Tvary plků jsou označovány následujícím způsobem: s - singlet, d - dublet, t - triplet, q - kvartet, m multiplet, br - široký. Hmotnostní spektra při chemické ionizaci za atmosférického tlaku (APCI) byla získána na • · « · · · ·« spektrometru Fisons Platform II. V případech, kdy se uvádí intenzita iontů obsahujících chlor nebo brom, byl zjištěn předpokládaný poměr intenzity (přibližně 3 : 1 pro 35Cl/37Cl-obsahující ionty) a 1 pro Br/ Br-obsahující ionty) udává se pouze intenzita iontu o nižší hmotnosti.
Středotlaká chromatografie se provádí na za použití systému Biotage (Biotage lne., Dyax Corp., Charlottesville, Virginia). Mžiková chromatografie se provádí na silikagelu Baker 40 (40 gm) (J. T .· Baker, Phillipsburg, N. J. , USA) nebo silikagelu 60 (EM Sciences, Gibbstown, N. J.
USA) ve skleněných kolonách za nízkého tlaku dusíku. Radiální chromatografie se provádí za použití zařízeni Chromatron (model
7924T, Harrison Research). Preparativní kJííxTOuícI oc se provádí za použití desek Analtech Uniplates Silica Gel GF (20 x 20 cm) (Analtech, lne., Newark, DE, USA). Dimethylformamid (DMF) , tetrahydrofuran (THF) a dichlormethan (CH2C12) , kterých se používá jako reakčních rozpouštědel, byla v bezvodém stavu dodána firmou Aldrich Chemical Company (Milwaukee, Winconsin, USA). Pod pojmem zkoncentruje nebo odpaří se rozumí odstranění rozpouštědla za tlaku vodní vývěvy v rotačním odpařováku. Zkratkou TBAF se označuje tetrabutylamoniumfluorid a zkratkou DMAP dimethylaminopyridin. Pojmy dichlormethan a methylenchlorid jsou synonymní, a tedy vzájemně zaměnitelné.
Příklady provedení vynálezu
Příklad
7-{2S-[4-(3-Chlorfenyl)-3R-hydroxybutyl]-5-oxopyrrolidin-l-yljheptanová kyselina • · • · • · · • · · fl
9
Stupeň A: Ethylester 7-{2R-[4 -(3-chlorfenyl)- 3-oxobut-1-enyl]-5-oxopyrrolidin-1-yl}heptanové kyseliny
K roztoku dimethylesteru [3-(3-chlorfenyl)-2-oxopropyl]-fosfonové kyseliny (2,66 g, 9,63 mmol) v tetrahydrofuranu (35 ml) se při 0°C postupně přidá hydrid sodný (60% hmotn. v oleji, 426 mg, 10,7 mmol) . Reakční směs se 40 minut míchá při teplotě místnosti, poté ochladí na 0°C přidá se k ní roztok ethylesteru 7-(2R-formyl-5-oxopyrrolidin-1-yl)heptanové kyseliny (předpoklad 10,6 mmol, připravené způsobem popsaným v preparativním postupu 7, ale za použití jiných množství reagentů) v tetrahydrofuranu. Reakční směs se 18 hodin míchá, načež se k ní přidá kyselina octová. Výsledná směs se zředí ethylacetátem. Organický roztok se promyje postupně nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (2x), vodou (Ix) a vodným roztokem chloridu sodného (lx) , vysuší síranem hořečnatým, přefiltruje a filtrát se zkoncentruje. Zbytek se přečistí středotlakou chromatografií za použití 15% acetonu v toluenu jako elučního činidla. Získá se ethylester 7-{2R-[4-(3-chlorfenyl)-3-oxobut-1-enyl]- 5-oxopyrrolidin-1-yljheptanové
kyseliny (2,26 g) . XH NMR (CDC13) δ 7,27-7,15 (m, 3H), 7,08 (m,
1H) , 6,66 (dd, 1H), 6,20 (d, 1H) , 4,17 (m, 1H) , 4,11 (q, 2H
2H) , 3,55 (m, 1H), 2,72 (m, 1H), 2,46-2,23 (m, 5H) , 1,79 (m,
1H) , 1,58 (m, 2H) , 1,47- 1,20 (m, 9H) ; MS 420,2 (M+l), 418,2
(M-l)
•» to • · • · · · • to • · · · · · · i · * • to··· toto to toto·· 111 1 • · · · · · 9 » · ···» i ·· * ·· ii
Stupeň B: Ethylester 7-{2R-[4-(3-chlorfenyl)-3S-hydroxybut-lenyl]-5-oxopyrrolidin-l-yl}heptanové kyseliny
K roztoku ethylesteru 7-{2R- [4 -(3-chlorfenyl)-3-oxobut-1-enyl]-5-oxopyrrolidin-1-yl[heptanové kyseliny (2,1 g, 5,0 mmol) v bezvodém dichlormethanu (200 ml) se přidá (R)-2-methyl-CBS-oxazaborolidin (ÍM v toluenu, 5 ml, 5 mmol). Výsledný roztok se ochladí na -45°C. Reakční směs se 20 minut míchá, načež se k ní přidá katecholboran (ÍM v tetrahydrofuranu, 15 ml, 15 mmol) . Reakční směs se 18 hodin míchá při -45°C, načež se k ní přidá vodná kyselina chlorovodíková (ÍM, 100 ml). Reakční směs se 18 hodin míchá při teplotě místnosti. Kyselá vodná vrstva se oddělí a organický roztok se promyje ledově chladným ÍM hydroxidem sodným (2x) a poté vodným chloridem sodným (lx), vysuší síranem hořečnatým, přefiltruje a filtrát se zkoncentruje. Zbytek se přečistí středotlakou chromatografií (ethylacetát : hexany 1 : 1 až 80% ethylacetát v hexanech). Získá se ethylester 7-{2R-[4-(3-chlorfenyl)-3S-hydroxybut-l-enyl]- 5-oxopyrrolidin-1-yl[heptanové kyseliny
(800 mg) jako směs 3S a 3R alkoholických diastereomerů v
poměru 6 : 1 (podle NMR) • 4Η NMR (CDC13) δ 7,23-7,17 (m,
3H) , 7,06 (m, 1H) , 5, 67 (dd, 1H ), 5,46 (dd, 1H), 4,37 (m, 1H),
4,08 (q, 2H) , 4,00 (m, 1H) , 3, 44 (m, 1H) , 2, 80 (m, 2H), 2,67
(m, 1H) , 2,41-2,12 (m, 5H) f 1,70-1,20 (m, 13H); MS 422,3
(M+l).
Stupeň C: Ethylester 7-{2S-[4-(3-chlorfenyl)-3R-hydroxybutyl]-5-oxopyrrolidin-1-yl}heptanové kyseliny
K roztoku ethylesteru 7-{2R-[4-(3-chlorfenyl)-3S-hydroxybut-l-enyl]-5-oxopyrrolidin-l-yl}heptanové kyseliny (800 mg, 1,90 mmol) v ethanolu (50 ml) se přidá 10% palladium na uhlíku (80 mg) . Reakční směs se 4,5 hodiny hydrogenuje v Parrově * · · 9 ♦ 9 9« • 9 9 9 999 9 9 * 9999 09 9 9999 99 9 · · a## 99
Jv »··» « ·· 9 99 třepaném zařízení za tlaku 309,15 kPa. Katalyzátor se za použití ethanolu oddělí filtrací přes celit. Po přečištění středotlakou chromatografií (hexany : ethylacetát 1 : 1 až ethylacetát : hexany 4 : 1) se získá ethylester 7-{2S-[4-(3-chlorfenyl)-3R-hydroxybutyl]-5-oxopyrrolidin-l-yl}heptanové kyseliny (625 mg). XH NMR (CDC13) δ 7,27-7,21 (m, 3H), 7,09 (m,
1H) , 4,10 (m, 2H) , 3,84 (m, 1H), 3, 61 (m, 2H) , 2,90 (m, 1H
2,78 (dd, 1H) , 2,68 (m, 1H) , 2,47-2, . 25 (m, 4H) , 2,12 (m, 1H
1,92- -1,22 (m, 17H) ; MS 424,3 (M+l).
Stupeň D: 7-{2S- [4 -(3-Chlorfenyl)-3R-hydroxybutyl] -5-oxopyrrolidin-l-yljheptanová kyselina
K roztoku ethylesteru 7-{2S-[4-(3-chlorfenyl)-3R-hydroxybutyl]- 5-oxopyrrolidin-1-yl}heptanové kyseliny (595 mg, 1,40 mmol) v ethanolu (25 ml) se přidá 2M hydroxid sodný (6 ml) . Reakčni směs se 24 hodin míchá při teplotě místnosti a poté se za sníženého tlaku zkoncentruje na 3/4 původního objemu. Ke zkoncentrované směsi se do pH asi 2 přidává 1M vodná kyselina chlorovodíková. Vodná směs se promyje methylenchloridem (3x) . Spojené organické vrstvy se promyjí vodou a poté vodným chloridem sodným, vysuší síranem hořečnatým, přefiltrují a filtrát se zkoncentruje. Získá se sloučenina uvedená v nadpisu příkladu 1 (500 mg). XH NMR (CDC13) δ 7,26-7,18 (m, 3H) , 7,08 (m, 1H) , 3,84 (m, 1H) , 3,58 (m, 2H) , 2,90 (m, 1H) , 2,77 (dd, 1H) , 2,68 (m, 1H) , 2,43-2,28 (m, 4H) , 2,10 (m, 1H) , 1,78 (m, 1H), 1,66-1,22 (m, 13H); MS 396,2 (M+l), 394 (M-l).
Příklad 2
7-{2S-[3R-Hydroxy-4-(3-trifluormethylfenyl)butyl]-5-oxopyrrolidin-l-yljheptanová kyselina
4 • · • · 4 4
--4 4 4 • · 4 4 4 · · ··· 4 4 4 4 4 · β
44444* 4 ·4 4 4 4 4 4 * 4 4 4 * 4 4 4 « ►· · 4 4« 4 44 44
Stupeň A: Ethylester 7-{2-oxo-5R-[3-oxo-4-(3-trifluormethylfenyl )but-l-enyl]pyrrolidin-1-yl}heptanové kyseliny
Způsobem popsaným v příkladu 1 stupni A se anion odvozený od dimethylesteru [2-oxo-3-(3-trifluormethylfenyl)propyl]fosfonové kyseliny (4,16 g, 13,40 mmol) a hydridu sodného (60% v oleji, 590 mg, 14,7 mmol) nechá během 24 hodin reagovat s ethylesterem 7-(2R-formyl-5-oxopyrrolidin-l-yl)heptanové kyseliny (předpoklad 14,74 mmol). Po přečištění středotlakou chromatografií za použití elučního gradientu 20% ethylacetát v hexanech až 100% ethylacetát se získá ethylester 7-{2-oxo-5R[3-OXO-4-(3-trifluormethylfe-nyl)but-l-enyl]pyrrolidin-l-yl}-
heptanové kyseliny (4,29 g) NMR (CDC13 ) δ 7,52 (d, 1H) ,
7,44 (m, 2H), 7,37 (d, 1H) , 6,67 (dd, 1H) , 6,22 (d, 1H) , 4,80
(m, 1H) , 4,08 (q, 2H) , 3,90 (s, 2H) , 3,54 (m, 1H) , 2,70 (m,
1H), 2,37 1,44-1,20 (m, 2H) , (m, 9H) ; 2,24 (m, MS 454,2 3H) , (M+l) 1,78 452,2 (m, (M-l 1H) , ) · 1,56 (m, 2H) ,
Stupeň B: Ethylester 7-{2R-[3S-hydroxy-4-(3-trifluormethylfenyl) but-l-enyl]- 5-oxopyrrolidin-1-yl}heptanové kyseliny
K roztoku ethylesteru 7-{2-oxo-5R-[3-oxo-4-(3-trifluormethylfenyl) but -1-enyl] pyrrolidin-1-yl} heptanové kyseliny (1,5 g, 3,31 mmol) a (R)-2-methyl-CBS-oxazaborolidinu (1M v toluenu, 0,5 ml, 0,5 mmol) v dichlormethanu (100 ml) se při -45°C přikape katecholboran (1M v tetrahydrofuranu, 9,9 ml,
9,9 mmol). Výsledný roztok se 24 hodin míchá při -45°C a přidá se k němu 1M kyselina chlorovodíková. Reakční směs se 1 hodinu míchá při teplotě místnosti a oddělí se vrstvy. Vodný roztok se promyje dichlormethanem (2x) . Spojené organické vrstvy se promyjí postupně ledově chladným 0,5M hydroxidem sodným a vodným chloridem sodným (2x), vysuší síranem hořečnatým, přefiltrují a filtrát se zkoncentruje za sníženého tlaku. Zbytek se přečisti středotlakou chromatografií (50% ethylacetát v hexanech až 60% ethylacetát v hexanech až 80% ethylacetát v hexanech až ethylacetát až 5% methanol v dichlormethanu) . Získá se ethylester 7-{2R- [3S-hydroxy-4-(3-trifluormethylfenyl) but-l-enyl]-5-oxopyrrolidin-l-yl}heptanové kyseliny (1,23 g) ve formě směsí 3S a 3R alkoholických diastereome-
rů v poměru asi 5,5 : 1 (podle analýzy HPLC). ΧΗ NMR (CDC13) δ
7,51- -7,35 (m , 4H), 5,72 (dd, 1H), 5,50 (dd, 1H), 4,44 (m, 1H) ,
4,09 (q, 2H) , 4,01 (m, 1H), 3,44 (m, 1H) , 2,90 (d, 2H), 2,71
(m, 1H), 2, 37-2,12 (m, 5H) , 1,70-1,21 (m, 13H); MS 456,3
(M+l) , 454,3 (M-l).
Stupeň C: Ethylester 7-(2S-[3R-hydroxy-4-(3-trifluormethylfenyl) butyl]-5-oxopyrrolidin-l-yl}heptanové kyseliny
Způsobem popsaným v příkladu 1 stupni C se roztok ethylesteru 7-{2R-[3S-hydroxy-4-(3-trifluormethylfenyl)but-1-enyl]-5-oxopyrrolidin-l-yljheptanové kyseliny (1,18 g, 2,59 mmol) v ethanolu (50 ml) 24 hodin v Parrově třepaném zařízení hydrogenuje za přítomnosti 10% palladia na uhlíku (120 mg) za tlaku 274,8 až 309,15 kPa. Po přečištění středotlakou chromatografií (50% ethylacetát v hexanech až ethylacetát až 1% methanol v dichlormethanu až 3% methanol v dichlormethanu až 5% methanol v dichlormethanu až 10% methanol v dichlormethanu) se získá ethylester 7-{2S-[3R-hydroxy-4-(3-trifluormethylfenyl) butyl]-5-oxopyrrolidin-l-yl}heptanové kyseliny (1,08 g) . 1H •0 ···· *00 · 4» 0« 0 *·0 4 0 0 · »0 0
0000 0 0 0 0000 · 0 0 · • · <0 0 4 0 0 0
4 0 0 « »« 0 00 00
NMR (CDC13) δ 7,51-7,39 (m, 4Η) , 4,09 (q, 2Η) , 3,86 (m, 1Η) , 3,60 (tn, 2H) , 2,89 (m, 2H) , 2,76 (m, 1H) , 2,33 (m, 4H) , 2,11 (m, 1H), 1,80 (m, 1H), 1,68-1,21 (m, 16H) .
Stupeň D: 7-{2S-[3R-Hydroxy-4-(3-trifluormethylfenyl)butyl]-5-oxopyrrolidin-1-yljheptanová kyselina
Způsobem popsaným v příkladu 1 stupni D se ethylester 7-{2S-[3R-hydroxy-4-(3-trifluormethylfenyl)butyl]-5-oxopyrrolidin-l-yl}heptanové kyseliny (1,93 g, 4,22 mmol) během 24 hodin hydrogenuje 6M hydroxidem sodným (26 ml) v ethanolu (52 ml) . Po přečištění středotlakou chromatografií (ethylacetát až 1% methanol v dichlormethanu až 3% methanol v dichlormethanu až 5% methanol v dichlormethanu až 10% methanol v dichlormethanu) získá 7-{2S-[3R-Hydroxy-4-(3-trifluormethylfenyl)butyl]-5-oxopyrrolidin-l-yl}heptanová kyselina (1,66 g) . ’Ή NMR (CDC13) δ 7,51-7,39 (m, 4H) , 3,88 (m, 1H) , 3,58 (m, 2H) , 2,84 (m, 3H) , 2,34 (m, 4H) , 2,10 (m, 1H) , 1,80 (m, 1H) , 1,67-1,26 (m, 13H) , MS 430,4 (M+l).
Stupeň E: Sodná sůl 7-{2S-[3R-Hydroxy-4-(3-trifluormethylfenyl)butyl]-5-oxopyrrolidin-l-yl}heptanové kyseliny
K roztoku 7-{2S-[3R-hydroxy-4-(3-trifluormethylfenyl)butyl] - 5-oxopyrrolidin-1-yl} heptanové kyseliny (1,66 g, 3,87 mmol) v ethanolu (16 ml) se přidá hydrogenuhličitan sodný (325 mg, 3,87 mmol) ve vodě (3 ml). Reakční směs se 5 hodin míchá a poté zkoncentruje za sníženého tlaku. Zbytek se podrobí azeotropické destilaci s dichlormethanem (3x) . Získá se sodná sůl sloučeniny uvedené v nadpisu příkladu 2 (1,698 g). 1H NMR (CD3OD) δ 7,48 (m, 4H) , 3,80 (m, 1H) , 3,69 (m, 1H) , 3,52 (m, 1H) , 2,94 (m, 1H) , 2,81 (m, 2H) , 2,32 (m, 2H) , 2,13 (m, 3H) ,
1,81 (m, ÍH), 1,69-1,26 (m, 13H); MS 430,3 (M-Na+1), 428,2 (MNa-1).
Příklad 3
5S-[4-(3-Chlorfenyl)-3-hydroxybutyl]-1-[6-(2H-tetrazol-5-yl)hexyl]pyrrolidin-2-on
Stupeň A: 7-{2R-[4-(3-Chlorfenyl)-3-oxobut-l-enyl]-5-oxopyrrolidin-1-yl}heptannitril
Způsobem popsaným v příkladu 1 stupni A se anion odvozený od dimethylesteru [3-(3-chlorfenyl)-2-oxopropyl]fosfonové kyseliny (3,35 g, 12,12 mmol) a hydridu sodného (60% v oleji, 533 mg, 13,3 mmol) během 18 hodin nechá reagovat se 7-(2R-formyl-5-oxopyrrolidin-l-yl)heptannitrilem. Po přečištění středotlakou chromatografiíí (20% ethylacetát v hexanech až 80% ethylacetát v hexanech) se získá 7-{2-[4-(3-chlorfenyl)-3-oxo-
but-l-enyl]-5- oxopyrrolidin-1 -yljheptannitril (1 ,52 g) . XH NMR
(CDC13) δ 7,24 (m, 2H) , 7,17 (s, ÍH) , 7,06 (m, ÍH) , δ , 64 (dd,
ÍH) , 6,20 (d, ÍH) , 4,15 (m, 1H) , 3,80 (s, 2H) , 3, 50 (m, ÍH) ,
2,72 (m, ÍH) , 2,46-2,20 (m, 5H) , 1,78 (m, ÍH) , 1, 59 (m, 2H) ,
1,40 (m, 4H), 1,24 (m, 2H).
Stupeň B: 7-{2S-[4-(3-Chlorfenyl)-3-oxobutyl]-5-oxopyrrolidin-l-yl}heptannitril • · «· ♦···
Způsobem popsaným v příkladu 1 stupni C se 7-{2R-[4-(3chlorf eny1)- 3 -oxobut-1-enyl]- 5 -oxopyrrolidin-1-yl}heptanni tri1 (86 0 mg, 2,31 mmol) v methanolu (40 ml) 1 hodinu hydrogenuje za přítomnosti 10% palladia na uhlíku (86 mg) . Po přečištěni radiální chromatografii (hexany až 20% ethylacetát v hexanech až 70% ethylacetát v hexanech) se získá 7-{2S- [4- (3-chlorfenyl)-3-oxobutyl]-5-oxopyrrolidin-l-yl}heptannitril (730 mg).
Stupeň C: 7-{2S-[4-(3-Chlorfenyl)-3-hydroxybutyl]-5-oxopyrrolidin-l-yl jheptannitril .
K roztoku 7-[2S-{4-(3-chlorfenyl)-3-oxobutyl]-5-oxopyrrolidin-l-yl jheptannitrilu (730 mg, 1,87 mmol) v methanolu (30 ml) se při 0°C přidá tetrahydroboritan sodný (35 mg, 0,921 mmol) . Reakční směs se 45 minut míchá při 0°C a přidá se k ní voda. Těkavé látky se odstraní za sníženého tlaku. Vodný roztok se zředí methylenchloridem. Organický roztok se promyje vodou a poté vodným chloridem sodným, vysuší síranem hořečnatým, přefiltruje a filtrát se zkoncentruje. Po přečištění středotlakou chromatografii (1:1 hexany : ethylacetát až ethylacetát až 3% methanol v dichlormethanu) se získá 7-{2S-[4-(3-chlorfenyl)-3-hydroxybutyl]-5-oxopyrrolidin-l-yl}-hep-
tannitril (730 mg) NMR (CDC13 ) δ 7,22 (m, 3H) , 7,07 (d
1H) , 3,80 (m, 1H) , 3,57 (m, 2H) , 2, 88 (m, 1H) , 2,78 (m, 1H)
2,64 (m, 1H) , 2,31 (m, 4H) , 2,10 (m , 1H) , 1,65- -1,22 (m, 14H)
MS 377,3 (M+l).
Stupeň D: 5S-[4-(3-Chlorfenyl)-3-hydroxybutyl]-1-[6-(2H-tetrazol-5-yl)hexyl]pyrrolidin-2-on
Roztok 7-{2S-[4-(3-chlorfenyl)-3-hydroxybutyl]-5-oxopyrrolidin-l-yl }heptannitrilu (730 mg, 1,94 mmol), trimethylsilylazidu (0,63 ml, 0,475 mmol) a dibutylcínoxidu (96 mg, 3,87
4 44 4 •·· 4 4 4 4 · 4 • · · 4 · 4 · 4 4 4
4444 44 4 4444 «44 4
4 «44 4444 ··«· 4 44 4 44 44 ·· 4 44 4 mmol) v toluenu (30 ml) se 18 hodin zahřívá ke zpětnému toku. Těkavé látky se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se zředí dichlormethanem. Organický roztok se promyje 1M kyselinou chlorovodíkovou a poté vodným chloridem sodným. Organický roztok se vysuší síranem hořečnatým, přefiltruje a filtrát se zkoncentruje. Zbytek se přečistí středotlakou chromatografií (ethylacetát až 2% methanol v dichlormethanu až 7% methanol v dichlormethanu), čímž se získá TMS komplex. Zbytek se zředí methanolem a přidá se k němu 2M kyselina chlorovodíková. Výsledný roztok se 40 minut míchá a poté zředí dichlormethanem. Organická vrstva se promyje vodou a poté vodným chloridem sodným. Organický roztok se vysuší síranem hořečnatým, přefiltruje a filtrát se zkoncentruje. Zbytek se přečistí středotlakou chromatografií (ethylacetát až 7% methanol v dichlormethanu). Získá se 5S-[4-(3-chlorfenyl)-3-hydroxybutyl]-1-[6-(2H-tetrazol-5-yl)hexyl]pyrrolidin-2-on (521 mg). XH NMR (CDC13) δ 7,23 (m, 3H), 7,09 (d, 1H), 3,85 (m,
1H) , 3,66 (m, 1H) , 3,53 (m, 1H) , 2,96 (m, 3H) , 2,81 (m, 1H) , 2,70 (m, 1H) , 2,44 (m, 2H) , 2,18 (m, 1H) , 1,88-1,27 (m, 14H) ; MS 420,2 (M+l), 418,3 (M-l).
Příklad 4
5S-[3R-Hydroxy-4-(3-trifluormethylfenyl)butyl]-1-[6-(2H-tetrazol-5-yl)hexyl]pyrrolidin-2-on
• ti ti • ti ti ti ti titi ti tititi titi·· titi ti ti tititi* titi ti ti··· tititi ti • titi ti titi·· tititi titi · titi titi • ti tititi ti
Stupeň A: 7-{2-Oxo-5R-[3-oxo-4-(3-trifluormethylfenyl)but-1-enyl]pyrrolidin-1-yl}heptannitril
Způsobem popsaným v přikladu 1 stupni A se anion odvozený od dimethylesteru [2-oxo-3-(3-trifluormethylfenyl)propyl]fosfonové kyseliny (2,68 g, 8,64 mmol) a NaH (60% v oleji, 400 mg, 10 mmol) nechá během 18 hodin reagovat s 7 -(2R-formyl-5 -oxopyrrolidin-l-yl)heptannitrilem (předpoklad 10 mmol). Po přečištění středotlakou chromatografií (30% ethylacetát v hexanech až 80% ethylacetát v hexanech) se získá 7-{2-oxo-5R-[3-oxo-4-(3-trifluormethylfenyl)but-1-enyl]pyrrolidin-1-yl}-
heptannit: ril (1,2 g) . 1H NMR (CDC13) δ 7,52 (m, 1H) , 7,45 (m,
2H) , 7,37 (m, 1H) , 6 , 67 (dd, 1H), 6, 23 (d, 11H) , 4,18 (m, 1H) ,
3,90 (s, 2H) , 3,53 (m, 1H) , 2,73 (m, 1H) , 2,45- 2,23 (m, 5H) ,
1,79 (m, 1H) , 1,60 (m, 2H) , , 1,41 (m , 2H); MS 407, 2 (M+l),
405,3 (M-l).
Stupeň B: 7-{2R-[3S-Hydroxy-4-(3-trifluormethylfenyl)but-1-enyl]-5-oxopyrrolidin-1-yl}heptannitril
K roztoku 7-{2-oxo-5R-[3-oxo-4-(3-trifluormethylfenyl)but-l-enyl]pyrrolidin-1-yl}heptannitrilu (1,14 g, 2,81 mmol) a (R)-2-methyl-CBS-oxazaborolidinu (1M v toluenu, 0,42 ml, 0,42 mmol) v dichlormethanu (112 ml) se při -45°C přikape katecholboran (1M v tetrahydrofuranu, 8,4 ml, 8,4 mmol). Reakční směs se 18 hodin míchá při -45°C a přidá se k ní 1M kyselina chlorovodíková. Reakční směs se 40 minut míchá při teplotě místnosti a oddělí se vrstvy. Organický roztok se promyje chladným 1M hydroxidem sodným (3x), a poté postupně 1M kyselinou chlorovodíkovou, vodou a vodným chloridem sodným, vysuší síranem hořečnatým, přefiltruje a filtrát se zkoncentruje. Po přečištění středotlakou chromatografií (1:1 hexany : ethylacetát až 80% ethylacetát v hexanech) se získá ·
4 4
4 444
4 • 4 4 » 4 4
4 4
4444
4
4
4
4 *
4
7-{2R-[3S-hydroxy-4-(3-trifluormethylfenyl)but-l-enyl]-5-oxopyrrolidin-l-yl}heptannitril (820 mg) ve formě směsi 3S a 3R alkoholických diastereoměrů v poměru asi 2,5 : 1 (podle 1H NMR). ΧΗ NMR (CDC13) δ 7,51-7,38 (m, 4H) , 5,72 (dd, 1H) , 5,49 (dd, 1H) , 4,45 (m, 1H) , 4,02 (m, 1H) , 3,47 (m, 1H) , 2,90 (m, 2H) , 2,71 (m, 1H) , 2,34 (m, 4H) , 2,18 (m, 1H) , 1,66 (m, 4H) , 1,44 (m, 4H), 1,27 (m, 2H); MS 409,2 (M+l).
Stupeň C: 7-{2S-[3R-Hydroxy-4-(3-trifluormethylfenyl)butyl]-5-oxopyrrolidin-1-yl}heptannitril
Způsobem popsaným v příkladu 1 stupni C se 7-{2R-[3S-hydroxy-4 -(3 -1ri fluormethylf enyl)but-1-enyl]- 5 -oxopyrrolidin-1-yl}heptannitril (810 mg) v methanolu (40 ml) 18 hodin v Parrově třepaném zařízení hydrogenuje za přítomnosti 10% palladia na uhlíku (100 mg) za tlaku 343,5 kPa. Po přečištění středotlakou chromatografií (1:1 hexany : ethylacetát až ethylacetát až 3% methanol v dichlormethanu) se získá 7-{2S-[3R-hydroxy-4-(3-trifluormethylfenyl)butyl] -5-oxopyrrolidin-
-1 -yl}heptannitril (720 mg) NMR (CDC13) δ 7,44 (m, 4H) ,
3, 84 (m, 1H) , 3,58 (m, 2H) , 2,88 (m, 2H) , 2,73 (m, 1H) , 2,32
(m MS , 4H) , 2,11 (m, 411,2 (M+l). 1H) , 1H) , 1,65- -1,37 (m, 11H) , 1,30 (m, 2H) ;
Stupeň D: 5S-[3R-Hydroxy-4-(3-trifluormethylfenyl)butyl]-1-[6-(2H-tetrazol-5-yl)hexyl]pyrrolidin-2-on
Způsobem popsaným v příkladu 3 stupni D se 7-{2S-[3R-hydroxy-4-(3-trifluormethylfenyl)butyl]-5-oxopyrrolidin-l-yl}heptannitril (710 mg, 1,73 mmol) nechá reagovat s azidotrimethylsilanem (399 mg, 3,46 mmol) a dibutylcínoxidem (43 mg, 1,7 mmol) v toluenu (25 ml) 18 hodin při teplotě zpětného toku. Těkavé látky se odstraní za sníženého tlaku.
4· 4 44 4 • 4 4 44 4 • 4 · 444 4* 4
444 4444 4 4 4 4 4444 44 4 4444 444 4 /1 r 4 4 444 4444
H-J ···· « ·· · *4 ««
Zbytek se zředí dichlormethanem. Organický roztok se promyje postupně 1M kyselinou chlorovodíkovou (2 x) , vodou (1 x) a vodným chloridem sodným (1 x) . Organický roztok se vysuší síranem hořečnatým, přefiltruje a filtrát se zkoncentruje. Zbytek se přečistí středotlakou chromatografií (ethylacetát až 2% methanol v dichlormethanu až 8% methanol v dichlormethanu). Získá se 5S-[3R-hydroxy-4-(3-trifluormethylfenyl)butyl]-1-[6-(2H-tetrazol-5-yl)hexyl]pyrrolidin-2-on (450 mg). XH NMR (CDC13) δ 7,44 (m, 4H) , 3,87 (m, 1H) , 3,65 (m, 1H) , 3,50 (m, 1H) , 3,01-2,73 (m, 5H) , 2,42 (m, 2H) , 2,16 (m, 1H) , 1,86-1,23 (m, 14H); MS 454,4 (M+l), 452,4 (M-l).
Stupeň E: Sodná sůl 5S-[3R-hydroxy-4-(3-trifluormethylfenyl)-butyl-1-[6-(2H-tetrazol-5-yl)hexyl]pyrrolidin-2-onu
Způsobem popsaným v příkladu 2 stupni E se reakcí 5S-[3R-hydroxy-4-(3-trifluormethylfenyl)butyl]-1-[6-(2H-tetrazol-5-yl)hexyl]-pyrrolidin-2-onu (428 mg, 0,944 mmol) s hydro-
genuhličitanem sodným (79 mg , 0,94 mmol) z íská sodná sůl (430
mg). XH NMR (CD3OD) δ 7,48 (m , 4H) , 3,79 (m, . 1H) , 3,67 (m, 1H) ,
3,51 (m, 1H) , 2,86 (m, 5H) , 2,30 (m, 2H) (m, 1H) , 1,84 -1,27
(m, 14H); MS 454,4 (M-Na+li ) , 452,4 (M-Na-1) •
P ř i k 1 a d 5
5- [4-(4-Fluorfenyl)-3-hydroxybutyl]-1-[6-(2H-tetrazol-5-yl)hexyl]pyrrolidin-2-on
OH • 4 4 ·· 4·· · • · 4 4 4 4 4« «
44« 4444 44 · • 4444 44 4 4444 444 ·
4 444 4444 ••44 4 44 4 44 44
Stupeň A: 7-{2-[3-(terč-Butyldimethylsilanyloxy)-4-(4-fluorfenyl)butyl]- 5-oxopyrrolidin-1-yljheptannitrii
Roztok 5-[3-(terc-butyldimethylsilanyloxy)-4-(4-fluorfenyl)butyl]pyrrolidin-2-onu (150 mg, 0,41 mmol) v DMF (5 ml) se přidá k hydridu sodnému (60% hmotn. v oleji, 16 mg, 0,41 mmol) v dimethylformamidu (10 ml). Po 1,5 hodiny se ke vzniklé směsi přidá 7-bromheptannitril (78 mg, 0,41 mmol) v dimethylformamidu (5 ml). Reakční směs se 2,5 hodiny míchá při 90°C, načež se k ní přidá voda. Vodný roztok se promyje ethylacetátem (4 x 15 ml) . Spojené organické roztoky se promyjí vodou (2 x 15 ml), vysuší síranem hořečnatým, přefiltrují a filtrát se zkoncentruje. Zbytek se přečistí středotlakou chromatografií (1:1 hexany : ethylacetát). Získá se 7-{2-[3-(terc-butyldimethylsilanyloxy)-4-(4-fluorfenyl)butyl]- 5-oxopyrrolidin-1-
yl}heptannitril (161 mg) . XH NMR (CDC13) δ 7,09 (m, 2H) , 6,95
(m, 2H), 3,81 (m, 1H) , 3,54 (m, 2H) , 2,86 (m, 1H) , 2,68 (m,
2H) , 4H), 2,06 (m, 1H) , 1,74- 1,23 (m, 13H), 0,85 (s, 9H) , 0,04
(m, 3H) , 0,19 (m, 475,1 (M+l)
Stupeň B: 7-{2- [4-(4-Fluorfenyl)-3-hydroxybutyl]-5-oxopyrrolidin-1-yl}heptannitril
K roztoku 7-{2-[3-(terc-butyldimethylsilanyloxy)-4-(4-fluorfenyl)butyl]-5-oxopyrrolidin-l-yl}heptannitrilu (158 mg, 0,333 mmol) v tetrahydrofuranu (20 ml) se při 0°C přidá TBAF (1M v tetrahydrofuranu, 0,50 ml, 0,50 mmol). Reakční směs se 3 hodiny míchá při teplotě místnosti a přidá se k ní nasycený vodný hydrogenuhličitan sodný. Těkavé látky se odstraní za sníženého tlaku. Vodný roztok se promyje trichlormethanem (4 x 5 ml). Spojené organické roztoky se vysuší síranem hořečnatým, přefiltrují a filtrát se zkoncentruje. Zbytek se přečistí středotlakou chromatografií (1:1 hexany : ethylacetát až • 9 ·· · 9t 9 99 • 9 9 9 9 9 9
9 9 « ·99 S
9999 · · 9 9999 « 9
9 9 9 9 9
EtOAc). Získá se 7-{2-[4-(4-fluorfenyl)-3-hydroxybutyl]-5-oxopyrrolidin-l-yl}heptannitril (82 mg). XH NMR (CDC13) δ 7,15 (m,
2H) , 7,00 (m, 2H) , 3,77 (m, 1H) , 3,58 (m, 2H) , 2,89 (m, 1H) , 2,79 (m, 1H) , 2,64 (m, 1H) , 2,34 (m, 4H) , 2,12 (m, 1H) , 1,681,24 (m, 14H); MS 361,2 (M+l).
Stupeň C: 5-[4-(4-Fluorfenyl)-3-hydroxybutyl]-1-[6-(2H-tetrazol-5-yl)hexyl]pyrrolidin-2-on
Způsobem popsaným v příkladu 3 stupni D se 7-{2-[4-(4-fluorfenyl)- 3-hydroxybutyl]-5-oxopyrrolidin-l-yl}heptannitril (71 mg, 0,197 mmol) nechá reagovat s azidotrimethylsilanem (45 mg, 0,394 mmol) a dibutylcínoxidem (5 mg, 0,02 mmol) v toluenu (10 ml) po dobu 16 hodin při teplotě zpětného toku. K reakční směsi se přidá další azidotrimethylsilan (200 mg) a dibutylcínoxid (50 mg) . Reakční směs se 5 hodin zahřívá ke zpětnému toku, poté 1M kyselinou chlorovodíkovou (5 ml) okyselí na pH 2. Vodný roztok se promyje ethylacetátem (4 x 10 ml). Spojené organické roztoky se vysuší síranem hořečnatým, přefiltrují a filtrát se zkoncentruje. Po přečištění středotlakou chromatografií (ethylacetát až 39:1 ethylacetát : methanol až
19:1 ethylacetát methanol) se získá sloučenina uvedená v
nadpisu příkla du 5A (3 9 mg) . ΧΗ NMR (CDC13) δ 7,16 (m, 2H) ,
7,00 (m, 2H) , 3,81 (m, 1H) , 3,68 (m,1H) , 3,53 (m, 1H) , 2,99
(m, 3H) , 2,80 (m, 1H) , 2,68 (m, 1H) , 2,47 (m, 2H) , 2,20 (m,
1,22 (m, 14H) ; MS 404,3 (M+l), : 402,3 (M-l).
Příklad 6
5-(4-Bifenyl-3-yl-3-hydroxybutyl)-1-[6-(2H-tetrazol-5-yl)hexyl]pyrrolidin-2-on • « φφφφ φφφ φφ * * Φ 9 9 » » · Φ Φ • φ φ φ Φ φ · · • ΦΦΦ
ΦΦΦΦ Φ ΦΦ φφ φφ·φ
Φ · Φ • Φ Φ ΦΦΦ φ • ΦΦΦ<
Φ · Φ Φ ·
Stupeň Α: 7-{2 - [4-Bifenyl-3-yl-3 -(terc-butyldimethylsilanyloxy)butyl]-5-oxopyrrolidin-l-yl}heptannitril
Způsobem popsaným v příkladu 5 stupni A se anion odvozený od 5-[4-bifenyl-3-yl-3-(terc-butyldimethylsilanyloxy)butyl]pyrrolidin-2-onu (239,1 mg, 0,564 mmol) a NaHMDS (IM v tetrahydrofuranu, 0,67 ml, 0,67 mmol) 24 hodin při 70°C alkyluje 7-bromheptannitrilem (118 mg, 0,620 mmol). Po přečištění středotlakou chromatografií (dichlormethan až 1% methanol v dichlormethanu až 2% methanol v dichlormethanu až 4% methanol v dichlormethanu) se získá 7-{2 -[4-bifenyl-3 -(terc-butyldimethylsilanyloxy)butyl] -5-oxopyrrolidin-l-yl}heptannitril (187 mg). MS 533,3 (M+l).
Stupeň B: 7-[2 - (4-Bifenyl-3-yl-3-hydroxybutyl)-5-oxopyrrolidin-1-yl]heptannitril.
Způsobem popsaným v příkladu 5 stupni B se 7-(2-(4bifenyl-3-yl-3-(terc-butyldimethylsilanyloxy)butyl]-5-oxopyrrolidin-l-yl(heptannitril (187 mg, 0,351 mmol) podrobí deprotekci působením TBAF (IM v tetrahydrofuranu, 0,53 ml, 0,53 mmol). Sloučenina se přidává při 0°C. Reakční směs se 24 hodin míchá při teplotě místnosti. Po přečištění středotlakou chromatografií (dichlormethan až 1% methanol v dichlormethanu až 2% methanol v dichlormethanu až 6% methanol v dichlormethanu až 10% methanol v dichlormethanu) se získá 7*e ····
0 4« * • « 4 «44 4· ·
0 0 0004 0 0 · • ·»00 4 0 · 0000 0 0 0 «
0 0 0 0 0 0 0 0
0 0 4 0 0 0 0 »0 0«
-[2-(4-bifenyl-3~yl-3-hydroxybutyl)-5-oxopyrrolidin-l-yl]-
heptannitril (85 mg) . XH NMR (CDClj) δ 7,58 (m, 1H) , 7,51-7,33
(m, 4H), 7,21-7,12 (m, 4H) , 3,85 (m, 1H) , 3,60 (m, 2H) , 2,90
(m, 1H) , 2,83-2,60 (m, 2H) , 2,45-2,30 (m, 4H) , 2,14 (m, 1H) ,
1,73-1,25 (m, 14H).
Stupeň C: 5-(4-Bifenyl-3-yl-3-hydroxybutyl)-1-[6-(2H-tetrazol-5-yl)hexyl]pyrrolidin-2-on
Způsobem popsaným v příkladu 3 stupni D se 7-[2-(4-bifenyl-3-yl- 3-hydroxybutyl)-5-oxopyrrolidin-l-yl]heptannitril (109 mg, 0,260 mmol) 72 hodin při teplotě zpětného toku nechá reagovat s azidotrimethylsilanem (0,69 ml, 0,52 mmol) a dibutylcínoxidem (11 mg, 0,044 mmol) v toluenu (5,3 ml). Reakční směs se ochladí a přidá se k ní voda. Vodná směs se okyselí 1M kyselinou chlorovodíkovou na pH 2. Vodný roztok se promyje 5% methanolem v dichlormethanu (3x). Spojené organické roztoky se vysuší síranem hořečnatým, přefiltrují a filtrát se zkoncentruje. Po přečištění středotlakou chromatografií (1:1 hexany : ethylacetát až ethylacetát až 2% methanol v dichlormethanu až 4% methanol v dichlormethanu až 8% methanol
v dichlormethanu) se získá sloučenina uvedená v nadpisu
příkladu 6 (107 mg) . 2Η NMR (CDC13) δ 7,57 (m, 1H) , 7,51-7,32
(m, 4H) , 7,25-7,13 (m, 4H) , 3,91 (m, 1H) , 3,74-3,50 (m, 2H) ,
2,96 (m, 3H) , 2,77 (m, 1H) , 2,50(m, 2H) , 2,22 (m, 1H) , 2,07
(m, 1H) , 1,90-1,22 (m, 14H); MS 462,2 (M+l), , 460,1 (M- •1) .
Příklad 7
5-[4-(3-Fluorfenyl)- 3-hydroxybutyl]-1-[6-(2H-tetrazol-5-yl)hexyl]pyrrolidin-2-on ·· ·
·· · « · • · · *· <4··· «··· ·· • ···· · · Φ · · • · * ·· Φ·
ΝΗ
Stupeň Α: 7-{2 - [3 -(terc-Butyldimethylsilanyloxy)-4 -(3-fluorfenyl)butyl]-5-oxopyrrolidin-l-yl}heptannitril.
Způsobem popsaným v příkladu 5 stupni A se anion odvozený od 5-[3-(terc-butyldimethylsilanyloxy)-4-(3-fluorfenyl)butyl]pyrrolidin-2-onu (250 mg, 0,684 mmol) a NaHMDS (1M v tetrahydrofuranu, 0,80 ml, 0,80 mmol) 72 hodin při 70°C alkyluje 7-bromheptannitrilem (142 mg, 0,748 mmol). Po přečištění středotlakou chromatografií (1:1 hexany : ethylacetát až ethylacetát až 5% methanol v dichlormethanu) se získá 7-{2-[3-(terc-butyldimethylsilanyloxy)-4-(3-fluorfenyl)butyl]-5-oxopyrrolidin-l-yl}heptannitril (261,7 mg). 1H NMR (CDC13) δ 7,26 (m, 1H) , 6,92 (m, 3H) , 3,89 (m, 1H) , 3,59 (m, 2H) , 2,89 (m, 1H) , (m, 2H) , 2,36 (m, 4H) , 2,11 (m, 1H) , 1,72-1,26 (m, 13H), 0,89 (s, 9H), 0,09 (s, 6H); MS 475,3 (M+l).
Stupeň B: 7-{2- [4-(3-Fluorfenyl)-3-hydroxybutyl]-5-oxopyrro1idin-1-yl}heptannitril.
Způsobem popsaným v příkladu 5 stupni B se 7-{2-[3-(terc-butyldimethylsilanyloxy)-4-(3-fluorfenyl)butyl]-5-oxopyrrolidin-l-yl }heptannitril (261,7 mg, 0,551 mmol) podrobí deprotekci působením TBAF (1M v tetrahydrofuranu, 0,83 ml, 0,83 mmol). Sloučenina se přidává při 0°C. Reakční směs se 24 hodin míchá při teplotě místnosti. Po přečištění středotlakou chromatografií (dichlormethan až 1% methanol v dichlormethanu » · · · 9 · ······ ··· · 9 9 9 9 9
9 9 9 9 9 9 9 9 1 • 9999 99 9 9999 9 9 9 ·
1 9 9 9 9 9 9 9 až 2% methanol v dichlormethanu až 4% methanol v dichlormethanu) se získá 7-{2 - [4-(3-fluorfenyl)-3-hydroxybutyl]-5-oxopyrrolidin-l-yl}heptannitril (141 mg).
H NMR (CDC13) δ 7,32 (m, 1H) , 6,98 (m, 3H) , 3,86 (m, 1H) , 3,64 (m,
2H) , 2,99-2,80 (m, 2H) , 2,71 (m, 1H) , 2,38 (m, 4H) 2,16 (m,
1H), 1,74-1,29 (m, 14H); MS 361,3 (M+l).
Stupeň C: 5-[4-(3-Fluorfenyl)-3-hydroxybutyl]-1-[6-(2H-tetrazol-5-yl)hexyl]pyrrolidin-2-on
Způsobem popsaným v příkladu 6 stupni C se 7-{2-[4-(3-fluorfenyl)-3-hydroxybutyl]-5-oxopyrrolidin-l-yljheptannitril (141,3 mg, 0,392 mmol) 72 hodin za zahřívání na teplotu zpětného toku nechá reagovat s azidotrimethylsilanem (0,210 ml, 1,57 mmol) a dibutylcínoxidem (29 mg, 0,116 mmol) v toluenu (8 ml) . Po přečištění středotlakou chromatografií (dichlormethan až 2% methanol v dichlormethanu až 4% methanol v dichlormethanu až 6% methanol v dichlormethanu) se získá sloučenina uvedená v nadpisu přikladu 5C (101,5 mg). 1H NMR (CDCI3) δ 7,26 (m, 1H) , 6,94 (m, 3H) , 3,87 (m, 1H) , 3,70 (m, 1H) , 3,52 (m, 1H) , 2,98 (m, 3H) , 2,78 (m, 2H) , 2,48 (m, 2H) , 2,20 (m, 1H), 1,89-1,24 (m, 14H); MS 404,2 (M+l), 401,9 (M-l).
Příklad 8
5S- [4-(3-Chlorfenyl)-3R-hydroxybutyl] -1- [6-(2H-tetrazol-5-yl)hexyl]pyrrolidin-2-on
• · • ·
Stupeň A: 7-{2R-[3S-hydroxy-4-(3-chlorfenyl)but-l-enyl]-5-oxopyrrolidin-1-yl}heptannitril
K roztoku 7-{2-oxo-5R-[3-oxo-4-(3-chlorfenyl)but-l-enyl]pyrrolidin-1-yl}heptannitrilu (1,62 g, 4,34 mmol) v dichlormethanu (200 ml) se při -45°C přidá (R) -2-methyl-CBS-oxazaborolidin (1M v toluenu, 1,3 ml, 1,3 mmol). Ke vzniklé směsi se po 20minutovém míchání přikape katecholboran (1M v tetrahydrofuranu, 13 ml, 13 mmol). Reakční směs se 16 hodin míchá při -45°C a přidá se k ní 1M kyselina chlorovodíková. Výsledná směs se zahřeje na teplotu místnosti a vrstvy se oddělí. Organický roztok se promyje chladným 1M hydroxidem sodným (3 x) a poté postupně 1M kyselinou chlorovodíkovou, vodou a vodným chloridem sodným. Organický roztok se vysuší síranem hořečnatým, přefiltruje a filtrát se zkoncentruje. Po přečištění středotlakou chromatografií (1:1 hexany : ethylacetát až 20% methanol v dichlormethanu) se získá 7-{2R-[3Shydroxy-4-(3-chlorfenyl)but-l-enyl]- 5-oxopyrrolidin-1-yl}heptannitril (53 6 mg) jako směs 3S a 2R alkoholu v poměru 8,2 : 1 (podle HPLC). 3H NMR (CDC13) δ 7,24-7,17 (m, 3H), 7,07 (m, 1H) , 5,69 (dd, 1H) , 5,46 (dd, 1H) , 4,40 (m, 1H) , 4,01 (m, 1H), 3,46 (m,lH)2,81 (m, 2H), 2,68 (m, 1H), 2,42-2,28 (m, 4H), 2,20 (m, 1H) , 1,73-1,59 (m,4H) 1,42 (m, 4H) , 1,25 (m, 2H) ; MS 375 (M+l).
Stupeň B: 7 -{2S-[4 -(3-chlorfenyl)-3R-hydroxybutyl]- 5-oxopyrrolidin-l-yl}heptannitril.
Způsobem popsaným v příkladu 4 stupni C se 7-{2R-[3S-hydroxy-4-(3-chlorfenyl)but-l-enyl]- 5-oxopyrrolidin-1-yl}heptannitril (536 mg) v ethanolu (30 ml) 3,5 hodiny hydrogenuje za přítomnosti 10% palladia na uhlíku (60 mg). Po přečištění středotlakou chromatografií (1:1 hexany : ethyl53 ··· · · · · 4 4
4 4 4 444 4 4 4
4444 44 4 4444 444 4 · ♦ · · · 4 4 ·
444 4 4 4 4 «4 4 4 acetát až 20% methanol v dichlormethanu) se získá 7-{2S-[4-(3-chlorfenyl)-3R-hydroxybutyl]-5-oxopyrrolidin-l-yl}heptannitril (440 mg). XH NMR (CDC13) δ 7,22 (m, 3H) , 7,08 (m, 1H) ,
3,83 (m, 1H) , 3,59 (m, 2H) , 2,90 (m, 1H) , 2,77 (dd, 1H) , 2,66 (dd, 1H) , 2,39 (m, 4H) , 2,11 (m, 1H) , 1,78 (m, 1H) , 1,68-1,39 (m, 11H), 1,29 (m, 2H); MS 377,2 (M+l).
Stupeň C: S-[4-(3-Chlorfenyl)-3R-hydroxybutyl]-1-[6-(2H-tetrazol-5-yl)hexyl]pyrrolidin-2-on
Způsobem popsaným v příkladu 3 stupni D se směs 7-{2S-[4-(3-chlorfenyl)-3R-hydroxybutyl]-5-oxopyrrolidin-l-yl}heptannitrilu (420 mg, 1,114 mmol), trimethylsilylazidu (257 mg, 2,23 mmol) a dibutylcínoxidu (56 mg) v toluenu (30 ml) 16 hodin zahřívá ke zpětnému toku. Těkavé látky se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se rozpustí v methanolu. Methanolický roztok se 3 hodiny míchá se 3M kyselinou chlorovodíkovou a poté zředí vodou a dichlormethanem. Vrstvy se oddělí a organická vrstva se promyje vodou a poté vodným chloridem sodným. Organický roztok se vysuší síranem hořečnatým, přefiltruje a filtrát se zkoncentruje. Po přečištění středotlakou chromatografií (ethylacetát až 2% methanol v dichlormethanu až 7% methanol v dichlormethanu) se získá 5S-[4-(3-chlorfenyl)-3R-hydroxybutyl]-1-[6-(2H-tetrazol-5-yl)hexyl]pyrrolidin-2-on (311 mg). NMR (CDC13) δ 7,22 (m, 3H),
7,08 (m, 1H) , 3,86 (m, 1H) , 3,66 (m, 1H) , 3,52 (m, 1H) , 2,96 (m, 3H) , 2,82-2,68 (m, 2H) , 2,45 (m, 2H) , 2,17 (m, 1H) , 1,881,22 (m, 14H); MS 420,2 (M+l), 418,3 (M-l).
Příklad ,7-{2R-[3-Hydroxy-4-(3 -fenoxyfenyl)but-1-enyl]- 5-oxopyrrolidin-1-yl}heptanová kyselins • 4
4 4 · · · · · · • 4 4 «··· 44 4
4444 * 4 4 4444 · 4 4 4 · 4 4 · 4 · ♦ 4 «444 4 44 4 4 4 44
Stupeň A: Ethylester 7-{2-oxo-5R-[3-oxo-4-(3-fenoxyfenyl)but-1-enyl]pyrrolidin-1-yl}heptanové kyseliny
Způsobem popsaným v příkladu 1 stupni A se anion odvozený od dimethylesteru [2-oxo-3-(3-fenoxyfenyl)propyl]fosfonové kyseliny (633 mg, 1,98 mmol) a NaH (60% v oleji, 70 mg, 1,74 mmol) nechá během 24 hodin reagovat s ethylesterem 7-(2R-formyl-5-oxopyrrolidin-1-yl)heptanové kyseliny (předpoklad 1,58 mmol). Středotlakou chromatografií (ethylacetát) se získá ethylester 7-{2-oxo-5R-[3-oxo-4-(3-fenoxyfenyl)but-1-enyl]pyrrolidin-l-yl}heptanové kyseliny (215 mg) . 1H NMR (CDC13) δ
7,28 (m, 3H) , 7,08 (m, 1H), 6,97 (m, 2H), 6,89 (m, 2H) / 6,83
(m, 1H) , 6,62 (dd, 1H) , 6,19 (d, 1H) , 4,13 (m, 1H) , 4, 08 (q,
2H) , 3,79 (s, 2H) 1H) , 2,68 (m, 1H) , 2,35 (m, 2H) , 2, 24 (m,
3H) , 2,24 (m, 3H) , 1,75 (m, 1H) , 1,54 (m, 2H) , 1,43 -i, 20 (m,
9H) .
Stupeň B: Ethylester 7-{2R-[3-hydroxy-4-(3 -fenoxyfenyl)but-1-enyl]-5-oxopyrrolidin-1-yl}heptanové kyseliny
Způsobem popsaným v příkladu 3 stupni C se ethylester 7-{2-OXO-5R-[3-OXO-4-(3-fenoxyfenyl)but-l-enyl]pyrrolidin-1-yl}heptanové kyseliny (215 mg, 0,451 mmol) nechá během 4 hodin při 0°C reagovat s tetrahydroboritanem sodným (17 mg,
0,45 mmol) v ethanolu
Po přečištění středotlakou chromatografií (ethylacetát) se získá ethylester 7-{2R-[3• ·
-hydroxy-4-(3-fenoxyfenyl)but-1-enyl]-5-oxopyrrolidin-l-yl}-heptanové kyseliny (167 mg). XH NMR (CDC13) δ 7,33 (m, 2H) ,
7,25 (m, 1H) , 7,10 (m, 1H) , 6,99 (m, 2H) , 6,93 (m, 1H) , 6, 86
(m, 2H) , 5,72 (m, 1H) 1H) , 4,37 (m, 1H) , 4,10 (q, 2H) , 3,47
(m, 1H) , 2,82 (m, 3H) , 2,35 (m, 2H), 2,26 (t, 2H) , (2,15 (m,
1H), 1,70-1,21 (m, 13H).
Stupeň C: 7-{2R-[3-Hydroxy-4-(3-fenoxyfenyl)but-1-enyl]- 5 -oxopyrrolidin-1-yl}heptanové kyselina
Způsobem popsaným v příkladu 1 stupni D se ethylester 7-{2R-[3-hydroxy-4-(3-fenoxyfenyl)but-1-enyl]-5-oxopyrrolidinl-yl } heptanové kyseliny (29 mg, 0,060 mmol) během 24 hodin při teplotě místnosti hydrolyzuje 2M hydroxidem sodným v ethanolu. Získá se sloučenina uvedená v nadpisu (20 mg). XH NMR (CDC13) δ
7,33 -7,21 (m, 3H) , 7,08 (m, 1H) , 6 , 98- 6,84 (m, 5H) , 5,70 (tn,
1H) , 5,44 (m, 1H) , 4,36 (tn, 1H) , 4, 00 (m, 1H) , 3,44 (m, 1H) ,
2,85 -2,51 (m, 3H) , 2,32 (m, 4H) , 2, 14 (m, 1H) , 1, 68 -1,18 (m,
10H) .
Příklad 10
7-{2S-[3-Hydroxy-4-(3-fenoxyfenyl)butyl]-5-oxopyrrolidin-l-yl}heptanová kyselina
Stupeň A: Ethylester 7-{2S-[3-hydroxy-4-(3-fenoxyfenyl)butyl]-5-oxopyrrolidin-1-yl}heptanové kyseliny • ·
444 4 4 4 4 44 4 {”£ · 4444 4 4 4 4444 4 4 4 4
4 4 444 4444
4444 4 44 4 44 44
Způsobem popsaným v příkladu 1 stupni C se směs ethylesteru 7-{2R-[3-hydroxy-4-(3-fenoxyfenyl)but-l-enyl]-5-oxopyrrolidin-1-yl}heptanové kyseliny (139 mg, 0,290 mmol), methanolu (30 ml) a 10% palladia na uhlíku (14 mg) 18 hodin hydrogenuje v Parrově třepaném zařízení za tlaku 343,5 kPa. Po přečištění středotlakou chromatografií (1:1 hexany : ethylacetát) se získá ethylester 7-{2S-[3-hydroxy-4-(3-fenoxyfenyl)butyl]-5-oxopyrrolidin-l-yl}heptanové kyseliny (86 mg).
Ί NMR (CDC13) δ 7,35-7,24 (m, 3H), 7,10 (m, 1H), 6,99 (m, 2H),
6,93 (m, 1H) , 6,8 (m, 2H) , 4,09 (q, 2H) , 3,80 (m, 1H) , 3,58 (m, 2H) , 2,82 (m, 2H) , 2,64 (m, 1H) , 2,42-2,24 (m, 4H) , 2,10 (m, 1H) , 1,77 (m, 1H) , 1,66-1,21 (m, 16H) .
Stupeň B: 7-{2S-[3-Hydroxy-4-(3-fenoxy-fenyl)butyl]-5-oxopyrrol idin-1-yl }heptanová kyselina
Způsobem popsaným v příkladu 1 stupni D se ethylester 7-{2S- [3-hydroxy-4-(3-fenoxyfenyl)butyl]-5-oxopyrrolidin-l-yl}heptanové kyseliny (86 mg, 1,79 mmol) během 18 hodin hydrolyzuje 2M hydroxidem sodným v methanolu. Získá se sloučenina uvedená v nadpisu (62 mg) . 1H NMR (CDC13) δ 7,33-
7,23 (m, 3H) , 7,09 (m, 1H) , 6,98 (m, 2H) , 6,91 (m, 1H) , 6,86
(m, 2H), 3,80 (m, 1H), 3 ,56 (m, 2K), 2,88 (m, 1H) , 2,77 (m, 1H)
2,64 (m, 1H) , 2,38-2,28 (m, 4H) , 2,09 (m, 1H) , 1,77 (m, 1H) ,
1,64-1,21 (m, 13H
P r e p a r a t i v η ί p 0 s tup 1
7-(2R-Hydroxymethyl-5-oxopyrrolidin-1-yl)heptannitril
Stupeň A: 7-[2R-(terc-Butyldimethylsilanyloxymethyl)-5-oxopyrrolidin-l-yl]heptannitril ♦ · · ·· · «····· ··· · · · e· · φφφ φφφ· * · φ • φ· · · · · e «· · ·
Ke směsi hydridu sodného (60% v oleji, 3,836 g, 0,0959 mmol, promyté 25 ml dimethylformamidu) v dimethylformamidu (250 ml) se přidá roztok 5R-(terc-butyldimethylsilanyloxymethyl)pyrrolidin-2-onu (Tetrahedron: Assymetry, 1996, 7,
2113) (20,00 g, 87,19 mmol) v dimethylformamidu (50 ml) .
Reakční směs se 1,5 hodiny míchá při teplotě místnosti, načež se k ní přidá roztok 7-bromheptannitrilu (16,574 g, 87,19 mmol) v dimethylf ormamidu (50 ml) . Reakční směs se 3 hodiny míchá při 90°C, poté ochladí na teplotu místnosti a přidá se k ní voda (750 ml) . Vodný roztok se promyje ethylacetátem (4 x 250 ml). Spojené organické roztoky se promyjí vodou (2 x 250 ml), vysuší síranem hořečnatým, přefiltrují a filtrát se zkoncentruje. Po přečištění středotlakou chromatografií za použití elučního gradientu (9:1 hexany : ethylacetát až 7:3 hexany : ethylacetát až 1:1 hexany : ethylacetát) se získá 7-[2R-(terc-butyldimethylsilanyloxymethyl)- 5-oxopyrrolidin-1-yl]heptannitril (22,46 g) . τΗ NMR (CDC13) δ 3,69-3,55 (m, 4H) ,
2,99 (m, 1H) , 2,42 (m, 1H) , 2,34-2,24 (m, 3H) , 2,05 (m, 1H)
1,81 (m, 1H) , 1,67- 1,42 (m, 6H), 1,31 (m, 2H) , 0, 86 (s, 9H)
0,03 (s, 6H) ; MS 33 9 ,3 (M+l)
Stupeň B: 7-(2R-Hydroxymethyl-5-oxopyrrolidin-l-yl)-heptannitril
Roztok tetrabutylamoniumfluorídu (IM v tetrahydrofuranu, 100,0 ml, 100,0 mmol) se při 0°C pomalu přidá k roztoku 7-[2R-(terc-butyldimethylsilanyloxymethyl)-5-oxopyrrolidin-l-yl]heptannitrilu (22,39 g, 66,13 mmol) v tetrahydrofuranu (400 ml) . Reakční směs se zahřeje na teplotu místnosti, 4 hodiny míchá a přidá se k ní nasycený vodný hydrogenuhličitan sodný (250 ml) . Těkavé látky se odstraní za sníženého tlaku. Vodný roztok se promyje trichlormethanem (4 x 200 ml). Spojené organické roztoky se vysuší síranem hořečnatým, přefiltrují a • · 4 filtrát se zkoncentruje. Po přečištění středotlakou • 4 4 4 4 4 • · · · V 4 4
4444444 4 4
4 4 4 4 4 4 • 4 4 4 4 4 4
chromatograf ií za použití elučního gradientu (9:1 hexany :
ethylacetát až 4 :1 hexany : ethylacetát až 7 : 3 hexany :
ethylacetát až 6 :4 hexany : ethylacetát až 1 : 1 hexany :
ethylacetát až ethylacetát až 9:1 ethylacetát : methanol) se
získá 7-(2R-hydroxymethyl-5-oxopyrrolidin-l-yl)-heptannitril
(14, 922 g) · h NMR (CDC13) δ 3,78 (dd, 1H) , 3,71-3,58 (m, 3H)
3, 00 (m, 1H) , 2,46 (m, 1H) , 2,36- 2,27 (m, 3H), 2,0 8 (m, 1H)
1,93 (m, , 1H) , 1,77 (m, 1H) , 1,68 -1,43 (m, 6H), 1,32 (m, 2H)
MS 225,1 (M+l).
Preparativní postup 2
Ethylester 7-(2R-hydroxymethyl-5-oxopyrrolidin-1-yl)heptanové kyseliny
Stupeň A: Ethylester 7-[2R-(terc-butyldimethylsilanyloxymethyl)-5-oxopyrrolidin-1-yl]heptanové kyseliny
Způsobem popsaným v preparativním postupu 1 stupni A se anion odvozený od 5R-(terc-butyldimethylsilanyloxymethyl)pyrrolidin-2-onu (30,000 g, 130,8 mmol) a NaH (60% v oleji, 5,756 g, 143,9 mmol) v dimethylformamidu (600 ml) nechá 3 hodiny při 90°C reagovat s ethyl-7-bromheptanoátem (32,559 g, 137,3 mmol). Po přečištění středotlakou chromatografií za použití elučního gradientu (9:1 hexany : ethylacetát až 4:1 hexany : ethylacetát až 7:3 hexany : ethylacetát až 6:4 hexany : ethylacetát) se získá ethylester 7-[2R-(terc-butyl-dimethylsilanyloxymethyl)-5-oxopyrrolidin-l-yl]heptanové ky-
seliny (39,46 g) . XH NMR ( CDCI3) δ 4,10 (q, 2H) , 3,62 (m, 4H) ,
2,95 (m, 1H) , 2,42 (m, 1H) , 2,27 (m, 3H) , 2,04 (m, 1H) , 1,81
(m, 1H) , 1,65-1,26 (m, 8H ), 1,23 (t, 3H) , 0, 86 (s, 9H), 0, 03
(S, 6H); MS 386,2 (M+l).
» • · « 9 · · 9 9 9
9 9 9 9 9 9 9 9 9
999999 9999999 * · • · · · · 9 9 9 9
999 9 9 99 9 99 99
Stupeň B: Ethylester 7-(2R-hydroxymethyl-5-oxopyrrolidin-l-yl)heptanové kyseliny
Způsobem popsaným v preparativním postupu 1 stupni B se ethylester 7-[2R-(terc-butyldimethylsilanyloxymethyl)-5-oxopyrrolidin-l-yl] heptanové kyseliny (39,46 g, 102,3 mmol) podrobí deprotekci 2,5hodinovým působením TBAF (1M v tetrahydrofuranu, 154,0 ml, 154,0 mmol). Po přečištění středotlakou chromatografii za použití elučního gradientu (9:1 hexany : ethylacetát až 6:4 hexany : ethylacetát až 1:1 hexany : ethylacetát až ethylacetát až 19:1 ethylacetát : methanol) se získá ethylester 7-(2R-hydroxymethyl-5-oxopyrrolidin-l-yl) heptanové kyseliny (25,41 g) . Y NMR (CDC13) δ 4,10 (q,
2H), 3,77 (dd, 1H), 3,64 (m, 3H), 2,96 (m, 2,46 (m, 1H), 2,352,25 (m, 3H) , 2,08 (m, 1H) , 1,93 (m, 1H) , 1,71 (m, 1H) , 1,631,27 (m, 8H), 1,23 (t, 3H); MS 272,2 (M+l).
Preparativní postup 3
Dimethylester [2-oxo-3-(3-trifluormethylfenyl)propyl]fosfonové kyseliny
Stupeň A: N-Methoxy-N-methyl-2-(3-trifluormethylfenyl)acetamid
K roztoku hydrochloridu N,O-dimethylhydroxylaminu (1,577 g, 16,2 mmol) v dimethylformamidu (25 ml) a dichlormethanu (25 ml) se při 0°C přidá triethylamin (2,25 ml) . Vzniklá směs se 5 minut míchá, načež se k ní přidá 3-trifluormethylfenyloctová kyselina (3,0 g, 14,7 mmol), HOBT (3,177 g, 23,5 mmol) a DEC (hydrochlorid 2-diethylaminoethylchloridu, 3,10 g, 16,2 mmol). Reakční směs se 18 hodin míchá při teplotě místnosti a zkoncentruje za sníženého tlaku. Zbytek se zředí « · ethylacetátem. Organický roztok se promyje postupně 1M hydroxidem sodným (2x), vodou a vodným chloridem sodným. Organický roztok se vysuší síranem hořečnatým, přefiltruje a filtrát se zkoncentruje. Středotlakou chromatografií (20% ethylacetát v hexanech až 50% ethylacetát v hexanech) se získá N-methoxy-N-methyl-2 -(3 -trifluormethylfenyl)acetamid.
Stupeň B: Dimethylester [2-oxo-3-(3-trifluormethylfenyl)propylfosfonové kyseliny
K roztoku dimethylmethylfosfonátu (9,4 g, 75,8 mmol) v toluenu (80 ml) se při -78°C pomalu přidá n-butyllithium (2,5M v hexanech, 28 ml, 70 mmol). Reakční směs se 1 hodinu míchá a pomalu se k ní přidá roztok N-methoxy-N-methyl-2-(3-trifluormethylfenyl ) acetamidu (14,39 g) v toluenu (50 ml). Reakční směs se 2,5 hodiny míchá a přidá se k ní kyselina octová (40 ml). Reakční směs se zahřeje na teplotu místnosti a přidá se k n£ voda. Organická vrstva se promyje vodou a poté vodným chloridem sodným. Organický roztok se vysuší síranem hořečnatým, přefiltruje a filtrát se zkoncentruje za sníženého tlaku. Středotlakou chromatografi£ (dichlormethan až 2% methanol v dichlormethanu) se získá sloučenina uvedená v nadpisu preparativního postupu 3 (9,37 g) . 1H NMR (CDC13) δ 7,52 (m, 1H) , 7,44 (m, 2H) , 7,37 (m, 1H) , 3,96 (s, 2H) , 3,87 (s, 3,76 (s, 3H), 3,12 (d, 2H).
Preparativní postup 4
Dimethylester [3 -(3-chlorfenyl)-2-oxopropyl]fosfonové kyseliny
Sloučenina uvedená v nadpisu se vyrobí způsobem popsaným v preparativním postupu 3 za použití odpovídajících výchozích látek.
• · ·
9 0 · · · • 94 t 49 4 4
Preparativní postup
Dimethylester [3-(3-chlorfenyl)-2-oxopropyl]fosfonové kyseliny
K roztoku dimethylfenylfosfonátu (17,93 g, 144 mmol) v tetrahydrofuranu (270 ml) se při -78°C pomalu přidá n-butyllithium (2,5M, 64,2 ml, 160,6 mmol). Reakční směs se 1 hodinu míchá a pomalu se k ní přidá kyseliny (26,93 g, 146 mmol) methylester (3-chlorfenyl)octové Reakční směs se nechá zahřát na teplotu místnosti, 24 hodin míchá a přidá se k ní kyselina octová (15 ml) . Těkavé látky se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se zředí dichlormethanem. Organický roztok se opatrně promyje nasyceným vodným hydrogenuhličitanem sodným (3x) . Organická vrstva se vysuší síranem hořečnatým, přefiltruje a filtrát se zkoncentruje za sníženého tlaku. Po přečištění středotlakou chromatografií (20% ethylacetát v hexanech až ethylacetát) se získá sloučenina uvedená v nadpisu (9,28 g).
Preparativní postup 6
Tetrahydropyrrolizin-3,5-dion
Sloučenina uvedená v nadpisu se připraví způsobem popsaným v US patentu č. 4 663 464.
Preparativní postup 7
Ethylester 7-(2R-formyl-5-oxopyrrolidin-l-yl)heptanové kyseliny
K roztoku ethylesteru 7-(2R-hydroxymethyl-5-oxopyrrolidin-1-yl)heptanové kyseliny (1,63 g, 6,01 mmol) v benzenu (50 ml) se přidá hydrochlorid 1-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbo• 9 • * 9 99 9999
9 9 ♦ 9 9
999 9·«9 9« 9 • 9999 99 9 0999 990 9
9 «99 9999 • 999 9 99 · 99 99 diimidu (3,46 g, 18,03 mmol) a dimethylsulfoxid (1,5 ml, 24,04 mmol) . Výsledný roztok se ochladí na 0°C a přidá se k němu pyridiniumtrifluoracetát (1,28 g, 6,61 mmol). Reakčni směs se 15 minut míchá při 0°C a poté 2 hodiny při teplotě místnosti. Roztok se od olejovitého zbytku oddělí dekantací. Olejovitý zbytek se promyje benzenem (3x) . Spojené bezenové promývací louhy se zkoncentrují za sníženého tlaku. Získá se ethylester 7-(2R-formyl-5-oxopyrrolidin-l-yl)heptanové kyseliny, kterého se použije bez dalšího přečištění.
Preparativní postup 8
Methylester 4-(3 - {2 -[4-bifenyl-3-yl-3-(terc-butyldimethylsilanyloxy)butyl]- 5-oxopyrrolidin-1-yl}propyl)benzoové kyseliny
Stupeň A: 5-(3-Brom-3-oxobutyl)pyrrolidin-2-on
K roztoku tetrahydropyrrolizin-3,5-dionu (5 g, 36 mmol) v dichlormethanu (320 ml) se při 0°C přikape 3-brombenzylmagnesiumbromid (0,25M v diethyletheru, 155 ml, 38,8 mmol). Výsledný roztok se 2 hodiny míchá při 0°C a poté rozloží nasyceným vodným chloridem amonným. Ke vzniklé směsi se do pH 3 přidá 1M kyselina chlorovodíková. Po zahřátí na teplotu místnosti se vodný roztok extrahuje dichlormethanem (3x). Spojené organické extrakty se vysuší síranem hořečnatým, přefiltrují a filtrát se zkoncentruje. Po přečištění středotlakou chromatografií za použití elučního gradientu (1:1 hexany : ethylacetát až ethylacetát až 5% methanol v dichlormethanu) se získá 5-(3-brom-3-oxobutyl)pyrrolidin-2-on (7,84 g) , 1H NMR (CDC13) δ 7,41-7,11 (m, 4H) , 6,24 (bs, 1H) ,
3,6 2H) , 3,60 (m, 1H) , 2,52 (t, 2H) , 2,32 (m, 2H) , 2,20 (m,
1H), 1,88-1,60 (m, 3H) •9 9999
Λ
999 9 9 9
9 9 9 9 9 9
9 9 « ♦ t t » « 9
9999 9 9 9 ··♦» 9 9 9 9
OJ 9 9 999 9999
9» 9 9 9 9 9 9 9 9
Stupeň Β: 5- (3-Brom-3-hydroxybutyl)pyrrolidin-2-on
K roztoku 5-(3-brom-3-oxobutyl)pyrrolidin-2-onu (7,84 g, 25,3 mmol) v ethanolu (130 ml) se při 0°C přidá tetrahydroboritan sodný (480 mg, 12,6 mmol). Reakční směs se rozloží nasyceným vodným chloridem amonným a přidá se k ní voda a dichlormethanem. Vodná vrstva se promyje dichlormethanem (3x) . Spojené organické extrakty se vysuší síranem hořečnatým, přefiltrují a filtrát se zkoncentruje. Po přečištění středotlakou chromatografií za použití elučního gradientu (1:1 hexany : ethylacetát až ethylacetát až 1% methanol v dichlormethanu až 3% methanol v dichlormethanu až 5% methanol v dichlormethanu až 8% methanol v dichlormethanu) se získá 5-(3-brom-3-hydroxybutyl)pyrrolidin-2-on (6,76 g) . XH NMR (CDC13) δ 7,36-7,09 (m, 4H) , 6,27 (d, 1H) , 3,78 1H) , 3,63 (m, 1H) , 2,75 (m, 1H) , 2,62 (m, 1H) , 2,32-2,18 (m, 3H) , 1,88 (m, 1H), 1,73-1,42 (m, 5H); MS 312,2, 314,1 (M+).
Stupeň C: 5-[3-Brom-3-(terc-butyldimethylsilanyloxy)butyl]pyrrolidin-2-on
K roztoku 5-(3-brom-3-hydroxybutyl)pyrrolidin-2-onu (6,76 g, 21,6 mmol) v dimethylformamidu (86 ml) se přidá terc-butyldimethylsilylchlorid (3,59 g, 23,8 mmol) a poté imidazol (2,95 g, 43,3 mmol) a DMAP (264 mg, 2,16 mmol) . Reakční směs se 24 hodin míchá a poté rozloží nasyceným vodným chloridem amonným. Vodný roztoke se promyje ethylacetátem (3x). Spojené organické extrakty se vysuší síranem hořečnatým, přefiltrují a filtrát se zkoncentruje. Po přečištění středotlakou chromatografií za použití elučního gradientu (dichlormethan až 1% methanol v dichlormethanu až 3% methanol v dichlormethanu až 5% methanol v dichlormethanu až 8% methanol v dichlormethanu) se získá 5-[3-brom-3-(terc-butyldimethylsilanyloxy)butyl]pyrrolidin-2-on • · 4 · * · ·· • 9 · · · · *
9 9 9 9 9 9 9
999* · 9 9 9999 9 9
4 · * 9 9
9 9 · ·· · 9 9 99 (7,45 g), 1HNMR (CDC13) δ 7,30 (m, 2H), 7,12 (m, ÍH), 7,04 (m,
ÍH) , 5,71 (m, ÍH) , 3,81 (m, ÍH), 3,56 (m, ÍH) , 2,66 (m, 2H) ,
2,32-2,17 (m, 3H) , 1,70-1,35 (m, 5H) , 0, 82 (s, 9H), -0,06 (d,
3H) , -0,24 (d, 3H) ; MS 426,2, 428,2 (M+ ) ·
Stupeň D: 5- [4-Bifenyl-3-yl-3-(terč-butyldimethylsilanyloxybutyl]pyrrolidin-2-on
K roztoku 5-[3-brom-3-(terc-butyldimethylsilanyloxy)butyl] pyrrolidin-2-onu (750 mg, 1,76 mmol) v DME (15 ml) se přidá fenylboronová kyselina (236 mg, 1,93 mmol). K výsledné směsi se přidá octan palladnatý (26,8 mg, 0,088 mmol) a tri-o-tolylfosfin (39,5 mg, 0,176 mmol) a poté roztok uhličitanu sodného (37,3 mg, 3,52 mmol) ve vodě (1,8 ml). Reakční směs se 24 hodin zahřívá ke zpětnému toku, poté ochladí a za sníženého tlaku se z ní odstraní těkavé látky. Zbytek se zředí vodným chloridem sodným a ethylacetátem. Vodný roztok se promyje ethylacetátem (3x). Spojené organické extrakty se vysuší síranem hořečnatým, přefiltrují a filtrát se zkoncentruje. Po přečištění středotlakou chromatografií za použití elučního gradientu (1:1 hexany : ethylacetát až ethylacetát až 1% methanol v dichlormethanu až 3% methanol v dichlormethanu až 5% methanol v dichlormethanu) se získá 5-[4-bifenyl-3-yl-3(terc-butyldimethylsilanyloxy)butyl]pyrrolidin-2-on (717,3 mg), ]H NMR (CDC13) δ 7,57 (m, 2H) , 7,43 (m, 2H) , 7,33 (m, 3H) ,
7,11 (m, 2H) , 5,78 (m, ÍH) , 3,91 (m, ÍH) , 3,59 (m, ÍH) , 2,76 (m, 2H) , 3H) , 1,73-1,38 (m, 5H) , 0,83 (s, 9H) , -0,03 (d, 3H) , -0,16 (d, 3H); MS 424,3 (M+l).
Preparativní postup 9
5-[3-(terc-Butyldimethylsilanyloxy)-4-(3-fluorfenyl)butyl]pyrrolidin-2-on
000 »· ♦
000 000 00 4
0*0 0000 ·« 0 » 0000 00 0 0000 000 0
0 000 0040
4444 4 4 4 4 44 00
Stupeň A: 5 -[4-(3-Fluorfenyl)-3-oxobutyl]pyrrolidin-2-on
Způsobem popsaným v preparativním postupu 8 stupni A, se tetrahydropyrrolizin-3,5-dion (2 g, 14 mmol) nechá během 2,5 hodiny reagovat s 3-fluorbenzylmagnesiumchloridem (0,25M v diethyletheru, 62 ml, 15,5 mmol). Po přečištění středotlakou chromatografií za použití elučního gradientu (1:1 hexany : ethylacetát až 2:1 EtOAc:hexany až ethylacetát až 2% methanol v dichlormethanu až 10% methanol v dichlormethanu) se získá 5- [4-(3-fluorfenyl)-3-oxobutyl]pyrrolidin-2-on (2,1730 g) . 1H
NMR (CDC13) δ 7,32-7,27 (m, 1H) , 7,00-6,90 (m, 3H) , 6,12 (bs
1H) 3,69 (s, 2H) , 3,59 (m, 2,19 (m, 1H), 1,75 (m, 2H), 1H) , 1,65 2,52 (t, (m, 1H) . 2H) , 2,30 (m, 2H)
Stupeň B: 5-[4-(3-Fluorfenyl)-3-hydroxybutyl]pyrrolidin-2-on
Způsobem popsaným v preparativním postupu 8 stupni B se 5 -[4-(3-fluorfenyl)-3-oxobutyl]pyrrolidin-2-on (2,17 g, 8,71 mmol) redukuje tetrahydroboritanem sodným (165 mg, 4,35 mmol). Po přečištění středotlakou chromatografií za použití elučního gradientu (1:1 hexany : ethylacetát až ethylacetát až 1% methanol v dichlormethanu až 3% methanol v dichlormethanu až 6% methanol v dichlormethanu) se získá 5-[4-(3-fluorfenyl)-3-hydroxybutyl] pyrrolidin-2-on (2,23 g) . 1H NMR (CDC13) δ 7,27 (m, 1H) , 6,94 (m, 3H) , 6,38 (m, 1H) , 3,82 (m, 1H) , 3,66 (m, 1H) , 2,79 (m, 1H) , 2,67 (m, 1H) , 2,33-2,21 (m, 3H) , 1,92 (d, J=4,15 Hz, 1H), 1,75-1,40 (m, 5H); MS 252,2 (M+l).
Stupeň C: 5-[3-(terc-Butyldimethylsilanyloxy)-4-(3-fluorfenyl)butyl]pyrrolidin-2-on
Způsobem popsaným v preparativním postupu 8 stupni C se 5-[4-(3-fluorfenyl)- 3-hydroxybutyl]pyrrolidin-2-on (2,23 g, « 4
4·· 4 • 4 4 4 • 4 ♦ 4 4 4 4 «
4 4 4 4 4 4 4 4 · ·<44 · · · 44·· 4 4 4 4
4 · · 4 ··#· • 44 4 ·· · ·4 4 4
8,87 mmol) nechá reagovat s terc-butyldimethylsilylchloridem (1,47 g, 9,76 mmol). Po přečištění středotlakou chromatografií za použití elučního gradientu (1:1 hexany : ethylacetát až ethylacetát až 1% methanol v dichlormethanu až 2% methanol v dichlormethanu až 4% methanol v dichlormethanu) se získá 5-[3-(terc-butyldimethylsilanyloxy)-4-(3-fluorfenyl)butyl]pyrrolidin-2-on (2,84 g) . XH NMR (CDC13) δ 7,23 (m, 1H) , 6,88 (m, 3H) , 5,75 (m, 1H) , 3,85 (m, 1H) , 3,57 (m, 1H) , 2,71 (m, 2H) , 2,30 (m, 2H) , 2,25 (m, 1H) , 1,70-1,38 (m, 5H) , 0,84 (s, 9H) , 0 (s, 3H), -0,2 (s, 3H).
Preparativní postup 10
5-[3-(terc-Butyldimethylsilanyloxy)-4-(4-fluorfenyl)butyl]pyrrolidin-2-on
Stupeň A: 5-[4-(4-Fluorfenyl)-3-oxobutyl]pyrrolidin-2-on
Způsobem popsaným v preparativním postupu 8 stupni A se tetrahydropyrrolizin-3,5-dion (1,41 g, 10,1 mmol) se během 5 hodin nechá reagovat se 4-fluorbenzylmagnesiumchloridem (0,25M v diethyletheru, 50 ml, 12,5 mmol). Po přečištění středotlakou chromatografií (2% methanol v dichlormethanu) se získá 5- [4-(4-fluorfenyl)-3-oxobutyl]pyrrolidin-2-on (2,64 g) . 1H (CDC13) δ 7,18 (m, 2H), 7,03 (m, 2H), 6,34 (m, 1H), 3,70 (s, 2H), 3,62 (m, 1H) , 2,54 (t, 2H) , 2,34-2,15 (m, 3H) , 1,82-1,61 (m, 3H) .
Stupeň B: 5- [4-(4-Fluorfenyl)-3-hydroxybutyl]pyrrolidin-2-on
Způsobem popsaným v preparativním postupu 8 stupni B se 5-[4 - (4-fluorfenyl)-3-oxobutyl]pyrrolidin-2-on (2,64 g, mmol) 1 hodinu při teplotě místnosti redukuje tetrahydroboritanem sodným (400 mg) . K vzniklé směsi se přidá další tetrahydrobo4 44« •4 ··« 44 4
444 4444 44 4
4>44 · 4 4 4444 44« · · · ® · 4 4 4 ·4 · 4444 ritan sodný (150 mg) a reakční směs se 20 hodin míchá. Po přečištění středotlakou chromatografií za použití elučního gradientu (dichlormethan až 2% methanol v dichlormethanu až 4% methanol v dichlormethanu) se získá 5- [4 -(4-fluorfenyl)- 3-hydroxybutyl]pyrrolidin-2-on (2,01 g) . 1H NMR (CDC13) δ 7,14 (m, 2H) , 6,98 (m, 2H) , 6,78 (m, 1H) , 3,76 (m, 1H) , 3,65 (m,
1H) , 2,76 (m, 1H) , 2,64 (m, 1H) , 2,32-2,18 (m, 4H) , 1,72-1,47 (m, 5H) .
Stupeň C: 5- [3-(terc-Butyldimethylsilanyloxy)-4-(4-fluorfenyl)butyl]pyrrolidin-2-on
Způsobem popsaným v preparátivním postupu 8 stupni C se 5-[4-(4-fluorfenyl)- 3-hydroxybutyl]pyrrolidin-2-on (1,95 g, 7,79 mmol) nechá reagovat s terc-butyldimethylsilylchloridem (1,47 g, 9,76 mmol). Po přečištění středotlakou chromatografií (1% methanol v dichlormethanu) se získá 5-[3 -(terc-butyldimethylsilanyloxy)-4-(4-fluorfenyl)butyl]pyrrolidin-2-on. 1H
NMR (CDC13) δ 7,12 (m, 2H) , 6,97 (m, 2H), 5,75 (m, 1H) , 3 , 83
(m, 1H), 3,60 (m, 1H) , 2,71 (m, 2H) , 2, 36-2,24 (m, 1,38 (m,
5H) , 0,84 (s, 9H) , -0,05 (d, 3H), -0,2 (d, 3H) .
P r e p a r a t i v n i P o s tup 1 1
Dimethylester [2-oxo-3-(3 -fenoxyfenyl)propyl]fosfonové kyseliny
Za použití vhodných výchozích látek se podobným způsobem, jaký je popsán v preparátivním postupu 5 vyrobí sloučenina uvedená v nadpisu preparativního postupu 11.

Claims (26)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1. Použití selektivního agonisty EP4 receptoru obecného vzorce I kde :d
    Q představuje skupinu COOR3, CONHR4 nebo tetrazol-5-yl;
    A představuje jednoduchou nebo cis dvojnou vazbu;
    B představuje jednoduchou nebo trans dvojnou vazbu ,=U představuje skupinu vzorce •''z,
    OH nebo ho^h
    R2 představuje ce-thienylskupinu, f enylskupinu, fenoxyskupinu, monosubstituovanou fenylskupinu nebo monosubstituovanou fenoxyskupinu, kde substituenty jsou chlor, fluor, fenylskupina, methoxyskupina, trifluormethylskupina nebo alkylskupina s 1 až 3 atomy=Uhlíku;
    R3 představuje vodík, alkylskupinu s 1 až 5 atomy uhlíku, fenylskupinu nebo p-bifenylskupinu;
    R4 představuje skupinu COR5 nebo SO2R5; a
    R5 představuje fenylskupinu nebo alkylskupinu s 1 až 5 atomy uhlíku;
    pro výrobu léčiva pro léčení stavů, pro něž je charakteristická nízká kostní hmota.
  2. 2. Použití podle nároku 1, kde stavem je osteoporosa, křehkost, osteoporotická fraktura, kostní defekt, juvenilní idiopatický úbytek kostní tkáně, úbytek alveolární kosti, úbytek mandibulární kosti, fraktura kosti, osteotomie, úbytek kosti spojený s periodontitis nebo prorůstání protézy.
  3. 3. Použití podle nároku 2, kde léčivo se podává systemicky.
  4. 4. Použití podle nároku 2, kde léčivo se podává lokálně.
  5. 5. Použití podle nároku 2, kde stavem je křehkost.
  6. 6. Použití podle nároku 2, kde stavem je osteoporosa.
  7. 7. Použití podle nároku 2, kde stavem je fraktura kosti nebo osteoporotická fraktura.
  8. 8. Použití podle nároku 1, kde selektivním agonistou receptoru EP4 je sloučenina obecného vzorce I, kde Q představuje 5-tetrazolylskupinu a =U představuje skupinu vzorce
    Η ΌΗ ·· ·· ·· ····
  9. 9. Použití podle nároku 8, kde sloučeninou obecného vzorce I je 5R-(3S-hydroxy-4-fenylbut-l-enyl)-1-[6-(lH-tetrazol-5yl)yl]pyrro-lidin-2-on.
  10. 10. Použití podle nároku 8, kde že sloučeninou obecného vzorce I je 5S-(3R-hydroxy-4-fenylbutyl)-1-[6-(lH-tetrazol-5yl)hexyl]pyrrolidin-2-on.
  11. 11. Použití podle nároku 8, kde sloučeninou obecného vzorce I je 5S-(4-(3-chlorfenyl)-3R-hydroxy-butyl)-1-(6-(2Htetrazol-5-yl)hexyl-pyrrolidin-2-on.
  12. 12. Použití podle nároku 8, kde sloučeninou obecného vzorce I je 5S-(3R-hydroxy-4-(3-trifluormethylfenyl)butyl)-1(6-(2H-tetrazol-5-yl)hexyl)pyrrolidin-2-on.
  13. 13. Použití podle nároku 1, kde selektivním agonistou receptoru EP4 je sloučenina obecného vzorce I, kde Q představuje skupinu COOH a =U představuje skupinu vzorce
    H^OH
  14. 14. Použití podle nároku 13, kde sloučeninou obecného vzorce I je 7-[2S-(3R-hydroxy-4-fenylbutyl)-5-oxopyrrolidin-lyl] heptanová kyselina.
  15. 15. Použití podle nároku 13, kde sloučeninou obecného vzorce I je 7-[2R-(3S-hydroxy-4-fenylbut-l-en-yl)-5-oxopyrrolidin-l-yl]heptanová kyselina.
    ·· fefefefe • · * · ·♦···· • · · · fe fefe • · · · fefefe ···· ···· «· tt9
  16. 16. Použití podle nároku 13, kde sloučeninou obecného vzorce I je 7-{2S-[3R-hydroxy-4-(3-trifluor-methoxyfenyl)butyl]-5-oxopyrrolidin-l-yl}heptanová kyselina.
  17. 17. Použití podle nároku 13, kde sloučeninou obecného vzorce I je 7-{2S-[3R-hydroxy-4-(3-fenoxy-fenyl)butyl]-5oxopyrrolidin-1-yl}heptanová kyselina.
  18. 18. Použití podle nároku 13, kde sloučeninou obecného vzorce I je 7-(2S-(3R-hydroxy-4-(3-trifluor-methylfenyl)butyl)-5-oxopyrrolidin-1-yl)heptanová kyselina.
  19. 19. Použití podle nároku 13, kde sloučeninou obecného vzorce I je 7-{2S-[4-(3-chlorfenyl)-3R-hydroxy-butyl]-5-oxopyrrolidin-l-yl}heptanová kyselina.
  20. 20. Použití podle nároku 1, kde sloučenina obecného vzorce I je zvolena ze souboru sestávajícího z
    7-{2S-[3R-hydroxy-4-(3-fenoxyfenyl)butyl]-5-oxopyrrolidin-l-yl}heptanová kyseliny;
    7-(2S-(3R-hydroxy-4-(3-trifluormethylfenyl)butyl)-5-oxopyrrolidin-l-yl)heptanová kyseliny;
    7-{2S-[4-(3-chlorfenyl)-3R-hydroxybutyl]-5-oxopyrrolidin-1-yljheptanové kyseliny;
    5S-[4-(3-chlorfenyl)-3R-hydroxybutyl]-1-[6-(2H-tetrazol-5-yl)hexyl]pyrrolidin-2-onu a
    5S-(3R-hydroxy-4-(3-trifluormethylfenyl)butyl)-1-(6-(2H-tetrazol-5-yl)hexyl)pyrrolidin-2-onu.
    • ·♦·
  21. 21. Sloučenina zvolená ze souboru sestávajícího z
    7-{2S-[3R-hydroxy-4-(3-fenoxyfenyl)butyl]-5-oxopyrrolidin-l-yl}heptanové kyseliny;
    7-(2S-(3R-hydroxy-4-(3-trifluormethylfenyl)butyl)-5-oxopyrrolidin-l-yl)heptanové kyseliny;
    7-{2S-[4-(3-chlorfenyl)-3R-hydroxybutyl]-5-oxopyrrolidin-l-yl}heptanové kyseliny;
    5S-[4-(3-chlorfenyl)-3R-hydroxybutyl]-1-[6-(2H-tetrazol-5-yl)hexyl]pyrrolidin-2-onu a
    5S-(3R-hydroxy-4-(3-trifluormethylfenyl)butyl)-1-(6-(2H-tetrazol-5-yl)hexyl)pyrrolidin-2-onu.
  22. 22. Sloučenina podle nároku 21, kterou je 7-{2S-[3R-hydroxy-4-(3-fenoxyfenyl)butyl]-5-oxopyrrolidin-l-yl}heptanová kyselina.
  23. 23. Sloučenina podle nároku 21, kterou je 5S-(4-(3-chlorfenyl)-3R-hydroxybutyl)-1-(6-(2H-tetrazol-5-yl)hexylpyrrolidin-2-on.
  24. 24. Sloučenina podle nároku 21, kterou je 7-(2S-(3R-hydroxy-4-(3-trifluormethylfenyl)butyl)-5-oxopyrrolidin-l-yl)heptanová kyselina.
  25. 25. Sloučenina podle nároku 21, kterou je 7-{2S-[4-(3-chlorfenyl)-3R-hydroxybutyl]-5-oxopyrrolidin-l-yl}heptanová kyselina.
    ·· φφφφ φ φφφφ φ φ • φφφ ···· φ · φ « • · φ φ φ 1 • · Φ Φ 4 ·· ·♦· ΦΦ
  26. 26. Sloučenina podle nároku 21, kterou je 5S-(3R-hydroxy-4-(3-trifluormethylfenyl)butyl)-1-(6-(2H-tetrazol-5-yl)hexyl)pyrrolidin-2-on.
CZ20022048A 1999-12-22 2000-11-20 Selektivní agonisty receptoru EP4 při léčení osteoporosy CZ20022048A3 (cs)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US17135399P 1999-12-22 1999-12-22

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CZ20022048A3 true CZ20022048A3 (cs) 2004-03-17

Family

ID=22623430

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ20022048A CZ20022048A3 (cs) 1999-12-22 2000-11-20 Selektivní agonisty receptoru EP4 při léčení osteoporosy

Country Status (36)

Country Link
US (2) US6737437B2 (cs)
EP (1) EP1110949B1 (cs)
JP (1) JP2001181210A (cs)
KR (1) KR100419681B1 (cs)
CN (1) CN1413190A (cs)
AP (2) AP2001002357A0 (cs)
AT (1) ATE250575T1 (cs)
AU (2) AU1293101A (cs)
BG (1) BG106882A (cs)
BR (1) BR0016560A (cs)
CA (1) CA2329678A1 (cs)
CO (1) CO5251453A1 (cs)
CR (1) CR6678A (cs)
CZ (1) CZ20022048A3 (cs)
DE (1) DE60005471T2 (cs)
DK (1) DK1110949T3 (cs)
EA (1) EA005293B1 (cs)
EE (1) EE200200355A (cs)
ES (1) ES2204458T3 (cs)
GE (1) GEP20043203B (cs)
HR (1) HRP20020537A2 (cs)
HU (1) HUP0005001A3 (cs)
IL (1) IL140325A0 (cs)
IS (1) IS6388A (cs)
MA (1) MA26852A1 (cs)
MX (1) MXPA02006322A (cs)
NO (1) NO20022925L (cs)
OA (1) OA12117A (cs)
PE (1) PE20010953A1 (cs)
PL (1) PL356662A1 (cs)
PT (1) PT1110949E (cs)
SK (1) SK8552002A3 (cs)
TR (2) TR200201643T2 (cs)
UA (1) UA72293C2 (cs)
WO (1) WO2001046140A1 (cs)
ZA (1) ZA200007694B (cs)

Families Citing this family (52)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20010056060A1 (en) * 2000-02-07 2001-12-27 Cameron Kimberly O. Treatment of osteoporsis with EP2/EP4 receptor selective agonists
DE60130675T2 (de) 2000-11-27 2008-01-24 Pfizer Products Inc., Groton Selektive agonisten des ep4 rezeptors für die behandlung von osteoporose
MXPA04000456A (es) * 2001-07-16 2004-03-18 Hoffmann La Roche Analogos de prostaglandina como agonistas del receptor ep4.
EP1408961B1 (en) * 2001-07-16 2007-07-11 F. Hoffmann-La Roche Ag 2 pyrrolidone derivatives as prostanoid agonists
ES2360604T3 (es) * 2001-07-23 2011-06-07 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Remedios para enfermedades con pérdida de masa osea que tienen como ingrediente activo agonistas de ep4.
TWI313608B (en) * 2001-07-23 2009-08-21 Ono Pharmaceutical Co Lower bone mass treating agent containing er4 agonist as active ingredient
JPWO2003041717A1 (ja) * 2001-11-12 2005-03-03 小野薬品工業株式会社 プロスタグランジン誘導体を有効成分とする局所投与用持続性フィルム状製剤
WO2003047417A2 (en) * 2001-12-03 2003-06-12 Merck & Co., Inc. Ep4 receptor agonist, compositions and methods thereof
US20040254230A1 (en) * 2001-12-03 2004-12-16 Ogidigben Miller J. Method for treating ocular hypertension
CA2469075C (en) 2001-12-20 2011-09-13 Applied Research Systems Ars Holding N.V. Pyrrolidine derivatives as prostaglandin modulators
MXPA04008596A (es) 2002-03-05 2004-12-06 Ono Pharmaceutical Co Compuestos derivados de 8-azaprostaglandina y farmacos que contienen los compuestos como ingrediente activo.
EP1490055A1 (en) * 2002-03-18 2004-12-29 Pfizer Products Inc. Use of selective ep4 receptor agonists for the treatment of liver failure, loss of patency of the ductus arteriosus, glaucoma or ocular hypertension
AU2011202937B2 (en) * 2002-05-14 2012-06-07 Allergan, Inc. 8-azaprostaglandin analogs as agents for lowering intraocular pressure
US6573294B1 (en) * 2002-05-14 2003-06-03 Allergan, Inc. 8-azaprostaglandin analogs as agents for lowering intraocular pressure
EP1513589B1 (en) 2002-06-06 2010-11-10 Merck Frosst Canada Ltd. 1,5-disubstituted pyrrolid-2-one derivatives for use as ep4 receptor agonists in the treatment of eye diseases such as glaucoma
AU2003237520B2 (en) * 2002-06-10 2009-01-08 Laboratoires Serono Sa Gamma lactams as prostaglandin agonists and use thereof
EP2465537B1 (en) 2002-10-10 2016-06-29 ONO Pharmaceutical Co., Ltd. Microspheres comprising ONO-1301
EP1581503A4 (en) 2002-11-08 2007-07-25 Merck & Co Inc OPHTHALMIC COMPOSITIONS FOR TREATING OCULAR HYPERTENSION
US7196082B2 (en) 2002-11-08 2007-03-27 Merck & Co. Inc. Ophthalmic compositions for treating ocular hypertension
US7053085B2 (en) 2003-03-26 2006-05-30 Merck & Co. Inc. EP4 receptor agonist, compositions and methods thereof
CA2511255C (en) 2003-01-10 2009-04-07 F. Hoffmann-La Roche Ag 2-piperidone derivatives as prostaglandin agonists
WO2004065365A1 (ja) * 2003-01-21 2004-08-05 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. ８−アザプロスタグランジン誘導体およびその医薬用途
EP1603874B1 (en) 2003-03-03 2008-05-07 Laboratoires Serono SA G-lactam derivatives as prostaglandin agonists
US6734206B1 (en) 2003-06-02 2004-05-11 Allergan, Inc. 3-oxa-8-azaprostaglandin analogs as agents for lowering intraocular pressure
US6734201B1 (en) 2003-06-02 2004-05-11 Allergan, Inc. 8-Azaprostaglandin carbonate and thiocarbonate analogs as therapeutic agents
US7179820B2 (en) 2003-06-06 2007-02-20 Allergan, Inc. Piperidinyl prostaglandin E analogs
EP1654219A2 (en) 2003-07-18 2006-05-10 Applied Research Systems ARS Holding N.V. Hydrazide derivatives as prostaglandin receptors modulators
CA2537119A1 (en) 2003-09-02 2005-03-10 Merck & Co., Inc. Ophthalmic compositions for treating ocular hypertension
CA2537430A1 (en) 2003-09-04 2005-03-24 Merck & Co., Inc. Ophthalmic compositions for treating ocular hypertension
CA2537410C (en) 2003-09-04 2009-08-11 Merck & Co., Inc. Ophthalmic indazole comprising compositions for treating ocular hypertension
WO2005027931A1 (en) * 2003-09-19 2005-03-31 Pfizer Products Inc. Pharmaceutical compositions and methods comprising combinations of 2-alkylidene-19-nor-vitamin d derivatives and an ep2 or ep4 selective agonist
US7326732B2 (en) 2004-02-12 2008-02-05 Pharmagene Laboratories Limited EP2 receptor agonists
AU2005274972A1 (en) 2004-07-20 2006-02-23 Merck & Co., Inc. Ophthalmic compositions for treating ocular hypertension
WO2006061366A1 (en) 2004-12-06 2006-06-15 Laboratoires Serono S.A. Pyrrolidin-2-one derivatives for use as dp1 receptor agonists
US7531533B2 (en) 2005-01-27 2009-05-12 Asahi Kasei Pharma Corporation 6-Membered heterocyclic compound and use thereof
US20090074844A1 (en) 2005-04-28 2009-03-19 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Trenadermal absorption preparation
KR100686186B1 (ko) * 2005-06-13 2007-02-26 영진종합건설 주식회사 교량용 배수 구조물
CA2618486A1 (en) 2005-08-09 2007-02-15 Asterand Uk Limited Ep2 receptor agonists
US8410171B2 (en) 2006-10-26 2013-04-02 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Adhesive preparation
US9394520B2 (en) 2006-12-08 2016-07-19 University Of Rochester Expansion of hematopoietic stem cells
WO2009065070A2 (en) 2007-11-14 2009-05-22 Cayman Chemical Company Prostaglandin e1 and e2 analogs for the treatment of various medical conditions
CA2738045C (en) 2010-05-28 2019-02-19 Simon Fraser University Conjugate compounds, methods of making same, and uses thereof
HK1197194A1 (en) 2011-08-02 2015-01-09 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Left ventricular diastolic function improving agent
AU2013292357C1 (en) 2012-07-19 2017-05-25 Cayman Chemical Company, Inc. Difluorolactam compounds as EP4 receptor-selective agonists for use in the treatment of EP4-mediated disease and conditions
US20150272874A1 (en) 2012-10-29 2015-10-01 Cardio Incorporated Pulmonary disease-specific therapeutic agent
US9676712B2 (en) 2013-03-15 2017-06-13 Cayman Chemical Company, Inc. Lactam compounds as EP4 receptor-selective agonists for use in the treatment of EP4-mediated diseases and conditions
ES2635635T3 (es) * 2013-03-15 2017-10-04 Cayman Chemical Company, Incorporated Compuestos de difluorolactama como agonistas selectivos del receptor EP4 para su uso en el tratamiento de enfermedades y afecciones mediadas por EP4
KR20160048054A (ko) 2013-07-19 2016-05-03 카이맨 케미칼 컴파니 인코포레이티드 골 성장의 촉진을 위한 방법, 시스템 및 조성물
IL280864B2 (en) 2013-08-09 2024-03-01 Ardelyx Inc Compounds and methods for inhibiting phosphate transport
US9968716B2 (en) 2013-10-15 2018-05-15 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Drug-eluting stent graft
CA2988523A1 (en) 2015-06-12 2016-12-15 Simon Fraser University Amide-linked ep4 agonist-bisphosphonate compounds and uses thereof
US20200368223A1 (en) 2019-05-21 2020-11-26 Ardelyx, Inc. Methods for inhibiting phosphate transport

Family Cites Families (25)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR897566A (fr) 1942-08-28 1945-03-26 Bopp & Reuther Gmbh Machine à rotors
US3528961A (en) 1966-08-16 1970-09-15 Allied Chem Monoazo dyes from e-caprolactam
US3780095A (en) 1970-04-08 1973-12-18 Byk Gulden Lomberg Chem Fab Acylated anilino-carboxylic acids and their salts
US3987091A (en) 1973-04-12 1976-10-19 Merck & Co., Inc. 11,12-secoprostaglandins
US4033996A (en) 1973-04-25 1977-07-05 Merck & Co., Inc. 8-Aza-9-oxo(and dioxo)-thia-11,12-secoprostaglandins
SE7414770L (cs) 1973-12-13 1975-06-16 Merck & Co Inc
DK366475A (da) 1974-08-30 1976-03-01 Merck & Co Inc Fremgangsmade til fremstilling af aryloxy- eller arylthioholdige secoprostaglandiner
US3991106A (en) 1974-09-13 1976-11-09 Merck & Co., Inc. 16-Ethers of 8-aza-9-dioxothia-11,12-seco-prostaglandins
US4055596A (en) 1974-09-13 1977-10-25 Merck & Co., Inc. 11,12-Seco-prostaglandins
US4113873A (en) 1975-04-26 1978-09-12 Tanabe Seiyaku Co. Ltd. 8-azaprostanoic acid derivatives
DE2528664A1 (de) 1975-06-27 1977-01-13 Hoechst Ag Pyrrolidone und verfahren zu ihrer herstellung
IL49325A (en) 1976-03-31 1979-11-30 Labaz 8-aza-11-deoxy-pge1 derivatives,their preparation and pharmaceutical compositions containing them
DE2619638A1 (de) * 1976-05-04 1977-11-17 Hoechst Ag Pyrrolidone und verfahren zu ihrer herstellung
US4177346A (en) 1976-08-06 1979-12-04 Pfizer Inc. 1,5-Disubstituted-2-pyrrolidones
US4175203A (en) 1976-12-17 1979-11-20 Merck & Co., Inc. Interphenylene 11,12-secoprostaglandins
US4243678A (en) 1977-12-30 1981-01-06 Byk Gulden Lomberg Chemische Fabrik Gmbh Acylhydrocarbylaminoalkanoic acids, compositions and uses
DE3000377A1 (de) 1980-01-07 1981-07-09 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Neue sulfonamide, verfahren zu deren herstellung sowie diese verbindungen enthaltende arzneimittel
DE3042482A1 (de) 1980-11-11 1982-06-24 A. Nattermann & Cie GmbH, 5000 Köln N-benzoyl- (omega) -anilinoalkancarbonsaeuren, -salze und -ester, verfahren zu ihrer herstellung und diese enthaltende pharmazeutische praeparate
DE3266360D1 (en) 1981-06-16 1985-10-24 Choay Sa Medicines containing as active ingredients compounds of the arylbenzenesulfonamide-type, and processes for their preparation
AU6427596A (en) * 1992-04-14 1996-10-31 Alfred Maximillian Stessl A boat hull
TW383306B (en) 1992-12-22 2000-03-01 Lilly Co Eli New use of 2-phenyl-3-aroylbenzothiophenes in lowering serum cholesterol
KR100359557B1 (ko) * 1996-12-20 2002-11-08 화이자 인코포레이티드 이피2 수용체 서브타입 선택적 프로스타글란딘 이2 작용물질을이용한 골격 질환의 예방 및 치료
GB2330307A (en) * 1998-02-07 1999-04-21 Glaxo Group Ltd EP4 Receptor antagonists as bone resorption inhibitors
WO2000021532A1 (en) * 1998-10-15 2000-04-20 Merck & Co., Inc. Methods for inhibiting bone resorption
CA2346031A1 (en) * 1998-10-15 2000-04-20 Merck & Co., Inc. Methods for stimulating bone formation

Also Published As

Publication number Publication date
AU763983B2 (en) 2003-08-07
HUP0005001A3 (en) 2002-01-28
EA200200505A1 (ru) 2002-12-26
AU7239300A (en) 2001-06-28
CN1413190A (zh) 2003-04-23
AU1293101A (en) 2001-07-03
IL140325A0 (en) 2002-02-10
JP2001181210A (ja) 2001-07-03
EA005293B1 (ru) 2004-12-30
DK1110949T3 (da) 2003-11-24
TR200201643T2 (tr) 2002-11-21
EP1110949B1 (en) 2003-09-24
GEP20043203B (en) 2004-03-25
EP1110949A1 (en) 2001-06-27
TR200301841T4 (tr) 2004-01-21
ATE250575T1 (de) 2003-10-15
DE60005471D1 (de) 2003-10-30
OA12117A (en) 2006-05-04
MXPA02006322A (es) 2002-12-13
US6737437B2 (en) 2004-05-18
CA2329678A1 (en) 2001-06-22
US6642266B2 (en) 2003-11-04
ZA200007694B (en) 2002-06-20
KR100419681B1 (ko) 2004-02-21
KR20010067415A (ko) 2001-07-12
HRP20020537A2 (en) 2004-12-31
SK8552002A3 (en) 2003-09-11
HU0005001D0 (cs) 2001-02-28
ES2204458T3 (es) 2004-05-01
MA26852A1 (fr) 2004-12-20
IS6388A (is) 2002-05-17
CO5251453A1 (es) 2003-02-28
US20010047105A1 (en) 2001-11-29
AP2001002357A0 (en) 2001-12-31
BR0016560A (pt) 2002-09-10
WO2001046140A1 (en) 2001-06-28
US20020040149A1 (en) 2002-04-04
EE200200355A (et) 2003-10-15
DE60005471T2 (de) 2004-04-22
CR6678A (es) 2004-01-14
UA72293C2 (en) 2005-02-15
NO20022925D0 (no) 2002-06-18
BG106882A (en) 2003-02-28
AP2002002555A0 (en) 2002-06-30
HUP0005001A2 (hu) 2001-12-28
NO20022925L (no) 2002-06-18
PT1110949E (pt) 2003-12-31
PE20010953A1 (es) 2001-09-25
PL356662A1 (en) 2004-06-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CZ20022048A3 (cs) Selektivní agonisty receptoru EP4 při léčení osteoporosy
DE60130675T2 (de) Selektive agonisten des ep4 rezeptors für die behandlung von osteoporose
JPH11180926A (ja) 骨粗しょう症用化合物
DE69738613T2 (de) Prävention und behandlung von skeletterkrankungen mit ep2 subtyp selektiven prostaglandin e2 agonisten
KR100620772B1 (ko) 에스트로겐과 2-페닐-1-[4-(2-아미노에톡시)-벤질]-인돌을 포함하는 약제학적 조성물
CA2334257C (en) Treatment of osteoporosis with ep2/ep4 receptor selective agonists
BG64582B1 (bg) Фармацевтичен състав за комбинирана терапия на остеопороза и използване
US20020019351A1 (en) Treatment of skeletal disorders
HRP980356A2 (en) Prostaglandin agonists
JP2002515484A (ja) ２−フェニルインドール化合物およびエストロゲン製剤からなる組成物
JP2000143541A (ja) 哺乳動物における認知機能不全症の予防及び治療用組成物
HK1051366A (en) Ep4 receptor selective agonists in the treatment of osteoporosis
HK1145171A (en) Polymorphs of (3-(((4-tert-butyl-benzyl)-(pyridine-3-sulfonyl)-amino)-methyl)-phenoxy)-acetic acid sodium salt or a hydrate thereof and methods for making the same
MXPA01001387A (en) Treatment of osteoporosis with ep2/ep4 receptor selective agonists