EA001412B1

EA001412B1 - Иммуномодулятор с антимикробной и антимикобактериальной активностью, способ его получения и лекарственный препарат для лечения микобактериозов, хронических неспецифических заболеваний легких, заболеваний, передающихся половым путем, и иммунодефицита на их основе

Info

Publication number: EA001412B1
Application number: EA200000208A
Authority: EA
Inventors: Николай Михайлович Голощапов; Елена Николаевна Голощапова; Тамара Петровна Филипских; Елена Андреевна Мичурина; Любовь Елизаровна Костюк; Рахим Мусаевич ХАИТОВ; Галина Ивановна Цывкина; Владимир Кузьмич Гришин; Николай Александрович Стукалов
Original assignee: Решетов, Александр Леонидович
Priority date: 1997-08-12
Filing date: 1998-08-11
Publication date: 2001-02-26
Also published as: EP1031570A4; AU8893098A; EE200000088A; UA45497C2; EP1031570A1; CA2300373A1; EA200000208A1; CN1306528A; RU2141322C1; DE69809284D1; WO1999007699A1; US6465476B1; EP1031570B1

Abstract

Изобретение относится к области медицины, точнее к новому иммуномодулятору с антимикробной и антимикобактериальной активностью следующей формулы:Его получают взаимодействием эквимолекулярных количеств 6-метилурацил-5-сульфохлорида и изониазида в ацетонитриле при повышенной температуре. Препарат практически не токсичен (ЛДв остром опыте более 7000 мг/кг), проявляет, по данным клинических испытаний, выраженную иммуномодулирующую и антимикобактериальную активность. Может быть использован для коррекции различных иммунодефицитов, включая ВИЧ-носительство, и в терапии микобактериозов (лепра, туберкулез и другие). Назначается для применения внутрь и парентерально. Заявляемое соединение является действующим веществом лекарственного препарата, применяемого при вторичных иммунодефицитах и микобактериозах.

Description

Настоящее изобретение относится к области медицины, точнее - касается иммуномодулятора с антимикробной и антимикобактериальной активностью, следующей формулы

способа его получения и лекарственного препарата для лечения микобактериозов, хронических неспецифических заболеваний легких, заболеваний передающихся половым путем, и иммунодефицита на их основе.

Предшествующий уровень техники

Антилепрозный препарат 1)шс1р1юпит (диуцифон) (авт. св. СССР № 459228) обладает иммуномодулирующими свойствами (авт. св. СССР № 938442) и оказывает имммуностимулирующее действие на гуморальный и клеточный иммунитет (В.П. Лесков и др. Клиническая фармакология для врачей, М., 1997, с.77-78; Н.С. Прозоровский Иммунологическое действие диуцифона и использование его для анализа пролиферативного ответа лимфоцитов, автореферат диссертации к.м.н., М., 1985;

Л.Е.Костюк, Иммунокорригирующие свойства проти-волепрозных препаратов, автореферат к.б.н. 1986). Однако он не обладает собственной митогенной активностью, а способен увеличивать пролиферацию Т-клеток только в ответ на ФГА. Токсичность диуцифона 2600 мг/кг. Известен И-(6-метил-2,4-диоксо-1,2,3,4тетрагидро-5-пири-мидинсульфон)-И'изоникотиноилгидразид (авт. св. СССР № 7681 86) он и оказывает антимикобактериальное действие, но иммунотропной активностью не обладает, более того, он не выдерживает длительных сроков хранения из-за содержащихся в нем примесей. Заявляемый иммуномодулятор с антимикобактериальной активностью, способ его получения и лекарственный препарат при вторичных им-мунодефицитах и микобактериозах на его основе являются новыми и в литературе не описаны.

Раскрытие изобретения

В основу изобретения положена задача создания нового иммуномодулятора с антимикробной и антимикобактериальной активностью, включая и носительство вируса иммунодефицита человека, активного не только в отношении микобактерий лепры, но и туберкулеза, а также других заболеваний, протекающих на фоне иммунодефицита, а также разработка способа получения этого иммуномодулятора и лекарственного препарата, используемого при вторичных иммунодефицитах и микобактериозах.

Поставленная задача решается тем, что согласно изобретению, заявляется новый иммуномодулятор с антимикробной и антимикобактериальной активностью, представляющий собой

И-(6-метил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-5пиримидинсульфон)-И'-изоникотиноилгидразид гидрат, следующей формулы

Предлагается также способ получения нового иммуномодулятора с антимикробной и антимикобактериальной активностью, представляющего собой И-(6-метил-2,4-диоксо1,2,3,4-тетрагидро-5-пиримидинсульфон)-И'изонико-тиноилгидразид гидрат, указанной формулы.

Согласно изобретению, способ заключается в том, что проводят взаимодействие эквимолекулярных количеств 6-метилурацил-5сульфохлорида и изониазида в ацетонитриле при повышенной температуре. Лекарственный препарат для лечения микобактериозов, хронических неспецифических заболеваний легких, заболеваний, передающихся половым путем, иммунодефицита согласно изобретению, состоит из действующего вещества иммуномодулятора с антимикробной и антимикобактериальной активностью, представляющего собой N-(6метил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-5-пиримидинсульфон)-№-изоникотиноилгидразид гидрат, названной формулы и носителя.

Заявляемый препарат - изофон может быть применен перорально в любой пригодной лекарственной форме и парентерально. Согласно изобретению, заявляемый препарат содержит действующего вещества в количестве от 0,05 до 0,3 г.

Клинические испытания, показали, что изофон нормализует иммунный статус больных лепрой, туберкулезом, хроническим неспецифическим воспалением легких и хламидиозом, включая организм в борьбу с заболеванием; а также проникая внутрь клетки, стимулирует ее функцию и доносит действующее начало до возбудителя, уничтожает его. Не исключена возможность прямого воздействия препарата на возбудителей, передающихся половым путем: хламидии, трихомонады, уреаплазменная инфекция.

Необходимо подчеркнуть хорошую переносимость изофона, отсутствие побочного действия и совместимость с современными антимикобактериальными средствами (этионамид, рифампицин и другие), что подтверждается при обследовании у больных лепрой и туберкулезом.

Токсичность изофона была определена на белых беспородных мышах весом 1 8-20 г в остром опыте по методу Литчфильда - Уилкоксона и составила более 7000 мг/кг.

Лучший вариант осуществления изобретения

Заявляемое соединение представляет собой белый, иногда с желтоватым оттенком, лег3 кий кристаллический порошок, труднорастворимый в воде и обычных органических растворителях. Растворяется в диметилформамиде, диметилсульфоксиде, разбавленных кислотах и щелочах; т.пл.255-256°С. Строение вещества подтверждается данными ПМР спектроскопии. Заявляемое соединение и лекарственный препарат на его основе были испытаны в эксперименте на животных и в клинике на людях.

Было проведено определение иммунотропной активности изофона. Иммунотропная активность изофона была определена на модели иммунодефицита, вызванного облучением. Для создания иммунодефицитного состояния мышей Е₁(СВАхС57ВЬ/6) облучали гамма-лучами на радиотерапевтическом аппарате в дозе 4 Гр (Грэй - единица облучения) при мощности дозы 0,55 Гр/мин. Количество антителообразующих клеток в селезенках определяли по методу ЕрнеНордин. Изофон и диуцифон вводили перорально в широком диапазоне доз. Результаты исследований представлены в табл. 1.

Таблица 1 Влияние изофона на продукцию антителообразующих клеток у облученных животных

Препараты, дозы, мкг/мышь	Количество мышей в группе	АОК на селезенку	Индекс стимуляциииммунного ответа	Р
Облученный контроль	18	308 ±36
Изофон
10	18	1013 ±126	3,63± 0,57	< 0,001
100	18	1173 ±125	4,28 ± 0,8	<0,001
1000	18	1216 ±124	4,46 ± 0,9	<0,001
Диуцифон
10	18	768 ±123	2,5 ± 0,2	< 0,01
100	18	870±119	2,9 ±0,12	< 0,001
1000	18	647 ± 64	2,1 ±0,2	< 0,001

Как видно из таблицы, изофон во всех дозах эффективнее диуцифона в 1,5-2,5 раза.

Влияние на гуморальный иммунитет изучали с помощью метода локального гемолиза в геле. Мышей гибридов Е₁ (СВА/С57ВЬ₆) иммунизировали эритроцитами барана в дозе 5 х 1 0⁶и сразу после этого вводили изучаемые вещества перорально в крахмальной суспензии, так как низкая растворимость изофона не позволяет вводить данное соединение внутрибрюшинно. На 5 сутки подсчитывали количество антителообразующих клеток (АОК) в селезенке мышей и определяли индекс стимуляции иммунного ответа по отношению числа АОК в опытной группе к числу АОК в контрольной группе. Данные представлены в табл. 2.

Таблица 2 Влияние исследуемых соединений на накопление антителообразующих клеток (АОК) в селезенке мышей

Назва ние препарата	Доза, мкг/мышь	Количество АОК в селе- зенке	Коли чество живо тных в груп пе	Индекс стимуляции имму нного ответа	Р достоверность
Контроль	0,5 мл крахм. сусп.	500±50	12	1,0
Изофон	500	2800±200	12	5,6	< 0,01
Диуц ифон	500	2250±125	12	4,5	< 0,01

Индексы стимуляции иммунного ответа изофона и диуцифона достоверно неотличимы между собой. Это говорит о том, что оба исследуемых препарата обладают одинаковым действием на гуморальный иммунитет, тестируемый в реакции накопления АОК в селезенке мышей.

Влияние исследуемого соединения на пролиферацию Т-лимфоцитов изучали на модели ίη νίίτο. Для этого проводили предварительную 3часовую инкубацию мононуклеаторных клеток человека в присутствии различных концентраций каждого исследуемого вещества. Изучали широкий диапазон концентраций каждого исследуемого вещества: от 0,01 до 5 мкг/мл. В качестве негативного контроля добавляли физиологический раствор 0,9% ЫаС1. Результаты влияния новых соединений на интенсивность пролиферации лимфоцитов человека в культуре клеток ίη νίίτο представлены в табл. 3.

Таблица 3

Влияние изофона на пролиферацию Тлимфоцитов в культуре клеток ίη νίίτο

Доза препарата, мкг/мл	Интенсивность включения 3Нтимидина в ДНК культивируемых клеток (импульс/мин) дезоксирибоклеиновую кислоту
спонтанная	активированная фитогемаглютинином (ФГА)
Физраствор	800	20002
Изофон
5	871	20120
1	1272	25455
0,1	1818	37890
0,03	1152	24736
0,01	901	19995

Диуцифон
5	800	20150
1	799	26400
0,1	804	28946
0,03	850	24214
0,01	860	22811

Таким образом, изофон обладает как собственной митогенной активностью, так и способен усиливать пролиферацию Т-клеток в ответ на ФГА (фитогемагглютинин). Оптимальной концентрацией является 0,1 мкг/мл.

Влияние исследуемых препаратов на фагоцитарную активность макрофагов изучали по клиренсу туши в крови, взятой из ретроорбитального синуса мышей, получавших препараты перорально. Результаты оценивали по фагоцитарному индексу а.

Таблица 4

Влияние исследуемых препаратов на фагоцитарную активность макрофагов

Название препарата	Доза мкг/ мышь	Фагоцитарный индекс	Количество животных	Р достове рность
Контроль	0,5 мл крахм. сусп.	4,2 ± 0,06 (100%)	12
Изофон	500	6,55 ± 0,06 (156%)	12	< 0,001
Диуцифон	500	5,18 ± 0,04 (1 23%)	12	< 0,001

В результате эксперимента можно сделать вывод о том, что изофон стимулирует фагоцитарную активность макрофагов на 56%.

Противотуберкулезная активность изофона проверялась в сравнении с классическим противотуберкулезным препаратом тубазидом и высокоактивным иммуномодулятором диуцифоном. Для заражения использовались лабораторные штаммы микобактерий туберкулеза Н₃₇К.У обычный и тубазидоустойчивый до 100 мг. 230 мышей линии СВА заражали внутривенно 0,25 мг культуры микобактерий туберкулеза в 0,5 мл физраствора. Опыт продолжался 2 месяца с 10 сентября по 12 ноября 1996 г. Под наблюдением находилось 1 6 групп животных по 1 5 мышей в каждой группе. Все животные содержались в одинаковых условиях вивария на стандартном рационе.

Контрольные группы получали в течение всего опыта через зонд 5 раз в неделю 0,5 мл крахмальной суспензии. Опытные группы животных получали препараты в различных дозах в 0,5 мл крахмальной суспензии. Все животные, как павшие, так и забитые, по окончании опыта взвешивались, также взвешивались их внутренние органы, определялась степень поражения внутренних органов, кроме этого, о действии препарата судили по средней продолжительности жизни (СПЖ). Результаты экспериментов приведены в табл. 5.

Таблица 5

Группа, дозы, мкг/мышь	Н₃₇Ю СССР
СПЖ, сутки	вес легкого, мг	индекс поражения
Контроль	24,2± 2,7	619,2 ±50,4	2,48 ± 0,22
Тубазид 100	29,4±3,7	586,4 ± 47,2	2,16 ±0,17
Тубазид 200	32,2±4,4	550,6 ± 46,4	2,11 ±0,18
Диуцифон	25,1±2,8	580,4 ± 50,7	2,31 ±0,24
Изофон 100	34,6±4,8	507,0 ± 48,4	1,91 ±0,18
Изофон 200	35,7± 5,2	495,4 ±56,1	1,81 ±0,21

Группа, дозы, мкг/мышь	Н₃₇К._у-тубазидоустойчивый
СПЖ, сутки	вес легкого, мг	индекс поражения
Контроль	23,8± 3,1	632,4±70	2,42 ± 0,1
Тубазид 100	23,7± 2,4	628,7±48,4	2,44±0,24
Тубазид 200	30,2± 2,8	580,4±46,4	2,01±0,18
Диуцифон	24,9±2,4	602,7 ± 70,2	2,27 ± 0,19
Изофон 100	35,2± 3,4	493,4 ± 65,1	1,91 ± 0,18
Изофон 200	37,1± 6,2	478,2 ± 60,8	1,72 ± 0,24

Как показывают полученные результаты, изофон обладает выраженным противотуберкулезным действием как на микобактерии, чувствительные к большинству противотуберкулезных препаратов, так и на микобактерии, резистентные к тубазиду и стрептомицину.

Противолепрозная активность изофона в сравнении с диуцифоном изучалась на мышахсамцах линии СВА, зараженных лабораторным штаммом Кур-4 микобактерий лепры, взятыми в количестве 5000 и введенными интраплантарно по методу Шепарда. Опыт продолжался 6 месяцев с 7 февраля по 4 июня 1996 г. Под наблюдением находилось 5 групп мышей по 20 мышей в каждой группе, все содержались в одинаковых условиях вивария на стандартном рационе.

Первая группа контрольная: в течение 6 месяцев мыши этой группы получали через зонд 5 раз в неделю 0,5 мл крахмальной суспензии. Через 6 месяцев животные были забиты цервикальным смещением позвоночника, органы были подвергнуты бактериоскопическому исследованию, никаких патологических отклонений, характерных для какой либо группы, не обнаружено. При бактериоскопическом исследовании места заражения лапку растирали в 2 мл 0,1% раствора альбумина, из 0,01 мл суспензии делали мазок, окрашивали по Цилю-Нильсену и подсчитывали количество микобактерии лепры в 60 полях зрения и определяли количество микобактерий на одну мышь в каждой группе.

Результаты исследований представлены в табл. 6

Таблица 6

Группа	Количество мышей в груп пе	Количество микробактерий в лапке х 1 0⁶	% инфицированных жвотных	Р оносительно котроля
Контроль	20	1,14±0,12	100%
Изофон	20	-	0
Диуцифон	20	0,048±0,007	60%	< 0,1

Как следует из приведенных данных, изофон в испытанной дозе (2,5 мг/кг) обладает бактерицидной активностью в отношении микобактерий лепры.

Иммунокорригирующие и антимикобактериальные свойства изофона, обнаруженные в эксперименте, были подтверждены при клини ческом испытании изофона на больных лепрой (возбудитель-микобактерии лепры), больных туберкулезом и хроническими неспецифическими заболеваниями легких (ХНЗЛ) на фоне иммунодефицитного состояния организма.

Заявляемый лекарственный препарат был изучен в клинике на больных лепрой в сравнении с диуцифоном. Суточная доза препаратов 0,6 г. Уже через 3-4 недели больные, получавшие изофон, отмечали улучшение общего состояния, снижение воспалительных инфильтратов на коже, размягчение лепром и узлов, изменение их цвета из ржаво-коричневого в бледнорозовый. Через 3 месяца исчезал возбудитель лепры в соскобе со слизистой носа, и бактериоскопический индекс резко снижался. Через 5-6 месяцев возбудитель лепры при бактериоскопическом и гистологическом исследовании не обнаруживался. Больные, получавшие диуцифон, прошли те же этапы клинического выздоровления, но более медленно, так у этой группы больных только через 10-12 месяцев возбудитель лепры при бактериоскопическом и гистологическом исследовании не обнаруживался. Полученные результаты представлены в табл. 7.

Таблица 7 Иммунологическое обследование больных лепрой, леченных изофоном (I) и диуцифоном (II)

^гру^ппа	Иммунологические тесты	До лечения	Через 1 месяц	Через 3 месяца	Р
	Т-лимфоциты	28,6 ± 0,1	43,4 ± 0,7	60,2 ± 0,9
	Б-лимфоциты	8,4 ± 0,2	10,0 ± 0,2	11,4±0,4
I	Т-хелперы	20,2 ± 0,2	28,2 ± 0,3	48,4±1,2		< 0,001
	Т-супрессоры	20,4 ± 0,3	20,0 ± 0,4	21,2±0,4
	Тх/Тс	1,0 ± 0,01	1,4±0,006	2,3 ± 0,1
	Т-лимфоциты	30,4 ± 0,4	50,5±2,1	55,4± 2,4
	В-лимфоциты	6,3 ± 0,3	8,4±0,6	9,0 ± 0,3
II	Т-хелперы	16,8 ± 0,2	32,4±2,0	36,9± 2,3		<0,001
	Т-супрессоры	17,0 ± 0,4	20,1±0,6	20,0±0,5
	Тх/Тс	1,0 ± 0,003	1,6±0,1	1,8 ± 0,4

Тх-Т-хелперы,

Тс-Т-супрессоры,

Тх/Тс-иммунорегуляторный индекс.

Результаты иммунологического обследования больных лепрой, получавших изофон и диуцифон, показали, что оба препарата нормализуют иммунный статус больного: увеличивается общее количество Т-лимфоцитов, количество Т-хелперов, нормализуется иммунорегуляторный индекс (отношение Тх/Тс), который был снижен. Необходимо отметить, что нормализация иммунологических параметров протекает более плавно при применении изофона, видимо за счет его воздействия на иные механизмы иммунитета, чем диуцифон.

Таким образом, изофон показал выраженный клинический антимикобактериальный и иммунотропный эффект, превосходящий диуцифон.

Применение изофона позволило сократить сроки стационарного лечения больных лепрой в раза.

Для лучшего понимания заявляемого лекарственного препарата ниже приведены примеры.

Пример 1 .

Больной X, 49 лет, поступил в клинику с диагнозом Погранично-туберкулоидная лепра. Считает себя больным 2 года. Предполагает заражение в Африке, когда 8 лет назад работал там и получал овощи от больных лепрой. На коже спины, на коже боковых поверхностей живота, левом бедре и голени, левой височной области головы желтовато-красноватые с ржавым оттенком папулы размером от 1,5 х 2 см до 4 х 6 см, с отсутствием чувствительности в их центре. Отмечается нарушение чувствительности по ходу малоберцовых и локтевых нервов. В соскобе со слизистой носа возбудитель лепры не обнаружен, также он не обнаружен и в лимфе при бактериоскопическом исследовании. При гистологическом исследовании биоптата кожи, взятого с очага поражения (бляшки) отмечается инфильтрат типа ВТ с единичными гомогенными и зернистыми микобактериями лепры. В поверхностных слоях дермы множественные инфильтраты, а в глубоких слоях кожи - очаговые и тяжистые инфильтраты. Гистологический индекс равен 1,1. Больному назначено лечение: изофон внутрь по 0,2 г 2 раза в день. Все элементы (бляшки) на коже рассосались полностью через 3,5 месяца и вместо них появились гиперпигментные пятна, которые через 4 месяца полностью приобрели цвет нормальной кожи. Нарушенная чувствительность по ходу локтевых и малоберцовых нервов полностью восстановилась. Больной не госпитализировался, а лечился дома, не прекращая работать. При гистологическом исследовании через 3 месяца возбудитель лепры не обнаружился. Гистологический индекс равен 0. При повторении гистологического исследования через 7 месяцев с целью перевода больного под диспансерное наблюдение, возбудитель лепры также не обнаружен, в поверхностном слое дермы отмечались небольшие инфильтраты из лимфоцитов с эпителиоидными клетками в виде скоплений. В глубоких слоях кожи небольшие инфильтраты вокруг кровеносных сосудов. Больному продлено лечение на 6 месяцев изофоном в комбинации с диуцифоном внутрь. Результаты иммунологического обследования больного X. изложены в табл. 8.

Таблица 8 Иммунологическое обследование больного X. (Погранично-туберкулоидная лепра) до лечения изофоном (0 день) и после 6-месячного лечения изофоном (180 день)

Лимфоц иты, %	Лейкоциты	Тлимфоциты	Влимфоциты, %
0 \|180	0 \|180	0 \|180	0 \|180
1	2	3	4
18 \|30	6,1 \|6,8	57 \|80	12 117

Лимфоц иты, %	Тхелперы, %	Тсупрессоры	Имунорегул. ин- декс	Фагоци- тоз, %
0	180	0	180	0 \|180	ТХ	Тс
1	5	6	7	8
18	30	50	63	4 \|27	12,5	2,3	30 \|5

Пример 2.

Больная Д., 37 лет, поступила в клинику с диагнозом: бронхоэктатическая болезнь. Сопутствующие заболевания:

хронический тонзилит, диффузное увеличение щитовидной железы 1 -2 ст.

В соответствии с протоколом клинических испытаний, больной был назначен изофон в течение 30 дней в суточной дозе 400 мг внутрь. На 1 4-1 5 день введения препарата значительно уменьшилось количество выделяемой мокроты по утрам, ее характер изменился с гнойного на слизистый, прекратился кашель, улучшилось общее состояние и настроение больной. В результате лечения наступило значительное улучшение как в клиническом состоянии больной, так и общего анализа крови на 20 день лечения, биохимических параметров на 7-8 день лечения и параметров иммунного статуса также на 31 день введения изофона; увеличилось количество Т-хелперов и Т-супрессоров, нормализовалось общее количество Т-лимфоцитов и иммунорегуляторного индекса, количество иммуноглобулинов. Таким образом, при клиническом испытании изофон проявил выраженную иммунокорригирующую и антимикобактериальную активность.

Пример 3.

Больная И., 1940 года рождения, поступила в клинику с лепроматозным типом лепры, диффузным инфильтратом кожи лица, с множественными лепромами 1 х 2 см, диффузными инфильтратами кожи верхних и нижних конечностей, с множественными лепромами кожи спины, ягодиц и живота. Больна 8 лет. БИН = 66,8-10,8-5,5, где БИН - бактериологический индекс. Гистологическое исследование при поступлении показало инфильтрат лепроматозной структуры (ЛЛ) с наличием огромного количества гомогенны микобактерий лепры, особенно в кровеносных сосудах, что свидетельствует о вовлечении в лепроматозный процесс внутренних органов (селезенка, печень, костный мозг). ГИ = 5,4, где ГИ - гистологический индекс. Больной назначено лечение: изофон по 200 мг внутрь 2 раза в день диуцифон в/м 200 мг и димоцифон по 1 00 мг внутрь 2 раза в день.

Через 8 месяцев лечения возбудитель лепры в соскобе со слизистой носа исчез, БИН =

8,3-14,2-4,2, нормализовались иммунологические параметры. Через год лечения у больной многие инфильтраты рассосались, а другие рез11 ко уменьшились в объеме и стали мягкими и эластичными, цвет их из ржаво-коричневого стал синюшным. БИН = 5,7-4,8-5,3.

При гистологическом исследовании отмечаются зернистые микобактерии и в небольшом количестве гомогенные: ГИ = 4,8. В умеренном количестве появляются лимфоциты. При иммунологическом обследовании общее количество лимфоцитов 51%, Т-лимфоцитов 85%, Влимфоцитов 12%, Т-хелперов 66%, иммунорегуляторный индекс 3,4. Больная продолжает лечение.

Таким образом, при клиническом испытании изофон показал высокую антилепрозную и иммунокорригирующую активность как при самостоятельном применении у больных лепрой, так и комбинации с другими противолепрозными препаратами.

Необходимо отметить, что на фоне лечения изофоном ΚίΓαιηρίοίηιιιη (рифампицин) и ДДС (диаминодифенилсульфон) не проявляют иммунодепрессивного действия, характерного при их длительном применении, а напротив, происходит стимуляция клеточного иммунитета.

Необходимо отметить, что улучшение клинико-иммунологических показателей при лечении изофоном наступает на 9-10 день лечения, а нормализация биохимических, гематологических, иммунологических показателей через 1 4-1 7 дней приема препарата изофона, как самостоятельно, так и в комбинации с антимикобактериальными препаратами. Только у одного больного лепроматозным типом лепры недостигнуто нормализации иммунологических показателей, хотя отмечалась нормализация биохимических, общеклинических показателей и четкий регресс лепрозного процесса (клинический, бактериоскопический и гистоморфологический), но дольше обычных средних сроков регресса по сравнению с остальными больными, но все равно в более ранние сроки по сравнению с больными контрольной группы. Таким образом, полученные результаты клинических испытаний изофона на больных лепрой позволяют использовать его как самостоятельно при ранних туберкулоидных формах лепры, так и в комбинации с диуцифоном, димоцифоном, рифампицином и другими антимикобактериальными препаратами у больных лепроматозным типом лепры, в связи со способностью иммуномодули рующего и антимикобактериального его эффекта, а также легкой переносимостью в дозе 400600 мг (до 1 200 мг в сутки) и совместимостью с другими препаратами.

Также заявляемый препарат был изучен в клинике больных туберкулезом. Возраст пациентов: 6 человек до 30 лет, 2 человека - до 35 лет.

Клинические формы туберкулеза легких у испытуемых следующие

- инфильтративный туберкулез без полостей распада и бактериовыделения - 2 человека;

- инфильтративный туберкулез с распадом и бактериовыделением - 4 человека;

- диссеминированный туберкулез легких 2 человека.

Длительность приема препарата от 1 до 2 месяцев. Доза - 0,6 г в сутки.

Контрольная группа - 5 человек с инфильтративным туберкулезом легких получала общепринятое лечение с включением изониазида. Переносимость заявляемого препарата - хорошая. Ни у одного пациента не отмечено появление клинических, гематологических признаков токсического действия препарата. Функциональные показатели паренхиматозных органов (печень, почки, поджелудочная железа) не изменились. У 3 человек, поступивших с симптомами интоксикации, в процессе лечения отмечено улучшение самочувствия с нормализацией температуры тела, уменьшением кашля, количества отделяемой мокроты, улучшение аппетита. Динамика иммунологических показателей крови в процессе лечения следующая: абсолютное число Т-лимфоцитов без существенных колебаний, незначительное уменьшение относительного количества Т-клеток.

Таким образом, больные, поступившие с симптомами интоксикации, в процессе лечения отметили улучшение самочувствия, нормализацию температуры, уменьшение кашля и количество отделяемой мокроты, улучшение аппетита.

При иммунологическом обследовании наблюдалось увеличение количества Тлимфоцитов, Т-хелперов, уменьшение повышенного количества Т-супрессоров (см. табл. 9). При контрольном рентгенографическом исследовании легких отмечена положительная динамика в виде уменьшения перифокальной и перикавитарной инфильтрации. Результаты представлены в табл. 9.

Таблица 9 Иммунологическое обследование группы (I) больных туберкулезом легких, принимавших изофон, в сравнении с контрольной группой (II) больных, принимавших базовую терапию без изофон а

Группа	Иммунологические тесты	До лечения	Через 1 месяц	Через 3 месяца	Р
I	Т-лимфоциты	42,4±0,1	48,5±1,0	54,8±0,7	< 0,001
В- лимфоциты	9,0 ± 0,3	12,0 ± 0,8	11,0 ± 0,6
Т-хелперы	28,6 ± 0,2	37,4 ± 0,3	55,5 ± 2,0
Т-супрессоры	28,0 ± 1,2	20,0 ± 0,6	20,0 ± 0,4
Тх/Тс	1,0 ± 0,02	1,85 ± 0,2	2,75 ± 0,04
II	Т-лимфоциты	44,0 ± 0,5	50,0 ± 1,0	50,0 ± 0,9	< 0,05
В-лимфоциты	7,5 ± 0,2	6,2 ± 1,0	7,5 ± 0,2
Т-хелперы	30,5 ± 0,8	32,4 ± 0,9	39,5 ± 1,5
Т-супрессоры	20,0 ± 1,2	18,6 ± 0,2	24,3 ± 2,0
Тх/Тс	1,5 ± 0,09	1,8 ± 0,4	1,8 ± 0,5

Таким образом, при применении у больных туберкулезом изофон проявил себя как эффективный иммуномодулятор с выраженной антимикобактериальной активностью. Учитывая малую низкую токсичность изофона в настоящее время рассматривается вопрос о замене тубазида, как основного противотуберкулезного средства, имеющего токсичность 150 мг/кг, на новый изофон.

Заявляемый препарат был испытан в клинике больных хламидиозом.

Исследования проводились рандомизированно, «двойным слепым методом» у 45 пациентов в возрасте от 25 до 49 лет.

I группа больных из 15 человек (10 человек с хроническими неспецифическими заболеваниями легких (ХНЗЛ), из них 6 - с хроническим катаральным обструктивным бронхитом и 4 - с хроническим катаральным необструктивным бронхитом; 4 человека с хламидийной инфекцией и 1 человек с уреаплазменной инфекцией получала препарат заявляемый в виде ионотерапии в суточной дозе 200 мг в течение 30 дней. II группа больных из 15 человек (8 человек с хламидийной инфекцией, 7 человек с ХНЗЛ, из них 5 человек с хроническим катаральным бронхитом, 2 человека с бронхоэктатической болезнью) получала препарат заявляемый в виде монотерапии в суточной дозе 400 мг в течение 30 дней. III группа больных из 15 человек (1 3 человек с ХНЗЛ, из них 7 - с хроническим катаральным бронхитом и 6 - с хроническим катаральным обструктивным бронхитом; 2 человека с хламидийной инфекцией) получала плацебо.

В результате клинических испытаний заявляемого препарата было отмечено следующее. У 14 человек I группы, принимавших препарат в дозе 200 мг/сутки, отмечено улучшение клинико-иммунологических показателей. Уже на 7-8 день приема препарата III наблюдается положительный сдвиг как в состоянии больного, так и при иммунологическом обследовании:

увеличение общего количества лимфоцитов, Тлимфоцитов, Т-хелперов, нормализация иммунорегуляторного индекса и количества иммуноглобулинов. Лишь у 2 больных не было отмечено изменений при иммунологическом обследовании несмотря на положительную динамику клинических проявлений. Возможно, это обусловлено недостаточной дозой препарата. Значительное улучшение в состоянии больных вплоть до выздоровления наблюдалось на 1 4-1 6 день применения препарата III, что также подтверждалось при гематологическом обследовании: происходила нормализация иммунологических параметров. Тем не менее целесообразно применение препарата еще в течение 7-1 4 дней после наступления клинического выздоровления в поддерживающей дозе 1 00-200 мг/сутки. У одного больного в I группе на 3 день применения препарата появились признаки индивидуальной непереносимости в виде тошноты и рвоты, препарат был отменен. У 14 человек II группы, принимавших препарат в суточной дозе 400 мг, отмечено улучшение клиникоимнунологических параметров, которое наступает на 7-1 0 день лечения препаратом, а нормализация гематологических, биохимических, иммунологических и клинических показателей происходит на 1 2-1 4 день лечения.

У 2 из 14 человек несмотря на значительное улучшение в клиническом течении заболевания и полную нормализацию общеклинических и биохимических параметров, не было отмечено положительного эффекта в иммунологических параметрах. У одного пациента с хламидийной инфекцией наоборот произошло улучшение всех гематологических показателей, но и на 20 день лечения оставались местные проявления заболевания в виде воспаления и наличия возбудителя. В связи с этим целесообразен повторный курс препарата. В III группе боль-ных, принимавших плацебо, у 2 из 1 5 человек отмечено улучшение общего состояния и самочувствия, не подтвержденное при общеклиническом, биохимическом и иммунологиче15 ском обследовании. Возможно, это связано с лабильностью нервной системы больного и вследствие этого обуславливается психоэмоциональный эффект с положительной динамикой заболевания.

Таким образом, проведенные клинические испытания заявляемого препарата показали, что новый оригинальный препарат обладает одновременно антибактериальным и иммунотропным действием в основном на клеточный иммунитет. Клинико-иммунологический эффект наступает на 7-8 день введения препарата, а значительное улучшение и полная нормализация клинико-иммунологических параметров наступает на 15-17 день в зависимости от тяжести течения патологического процесса. Отсутствие иммунологического эффекта у 2 больных I группы и у 2 больных II группы связано с недостаточной дозой препарата, которую при повторном курсе, можно увеличить. Следует подчеркнуть хорошую переносимость препарата и отсутствие побочных эффектов при его введении как в дозе 200 мг, так и в дозе 400 мг. Только у одного пациента была отмечена на 3 день индивидуальная непереносимость препарата в виде тошноты и рвоты. Хотя это могло быть и связано с повышенной чувствительностью на желатиновые капсулы, в которых применяется препарат.

Таким образом, высокий клинический эффект изофона достигается за счет двоякого действия: иммуностимулирующего и антихламидийного.

В настоящее время завершается изучение прямого воздействия изофона на хламидии, трихомонады и уреаплазменные инфекции.

Способ получения заявляемого соединения иммуномодулятора с антимикобактериальной активностью изофона проводят взаимодействием эквимолекулярных количеств 6метилурацил-5-сульфохлорида и изониазида в ацетонитриле при температуре 81°С. Более подробно можно сказать, что изофон получают кипячением эквимолекулярных количеств гидразида изоникотиновой кислоты и 6-метилурацил5-сульфохлорида в безводном ацетонитриле. Образцы изофона сохраняют свои свойства в течение 3 лет.

Для лучшего понимания настоящего изобретения ниже приводится пример получения заявляемого соединения.

Пример 4. №(6-метил-2,4-диоксо-1,2,3,4тетрагидро-5Н-пиримидин-4-сульфон)-№-изоникотиноилгидразид гидрат.

Смесь 2,74 г (0,02 моль) гидразида изоникотиновой кислоты и 4,49 г (0,02 моль) 6метилурацил-5-сульфохлорида в 50 мл ацетонитрила кипятят 10 ч. Фильтруют, осадок на фильтре промывают ацетонитрилом, спиртом, сушат на воздухе. Получают 7,27 г желтоватого мелкого порошка. Полученный продукт кристаллизуют из водного диметилформамида.

Получают 4,94 г (76%) белых легких кристаллов с т. пл. 255-256°С.

Найдено, %: С 38,3; Н 4,0; 8 9,2; N 20,2; С11Н11О₅8*Н2О.

Вычислено, %: С 38,5; Н 3,8; 8 9,4; N 20,4.

ПМР-спектр в диметилсульфоксиде (ДМСО); (3Н, урацил) 2,36 м.д. (4Н, пиридин)

7,7 м.д. 8,65 м.д. 11,53 м.д. (2Н, Н₂О) 3,18 м.д.

Промышленная применимость

Заявленный иммуномодулятор с антимикробной активностью и антимикобактериальной активностью, представляющий собой N-(6метил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-5-пиримидинсульфон)-№-изоникотиноилгидразид гидрат (изофон) находит применение в медицине в качестве действующего вещества лекарственного препарата для лечения вторичных иммунодефицитов и микобактериозов. Таким образом, учитывая широкий спектр иммунотропной активности изофона, а также его антимикобактериальную активность и чрезвычайно низкую токсичность, его можно применять в широкой медицинской практике, в терапии различных заболеваний, протекающих на фоне иммунодефицита, включая и ВИЧ-инфекцию, а также и при микобактериозах (туберкулезе, проказе и других).

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Иммуномодулятор с антимикробной и антимикобактериальной активностью, представляющий собой №(6-метил-2,4-диоксо1,2,3,4-тетрагидро-5-пиримидинсульфон)-№изоникотиноилгидразид гидрат, следующей формулы

О
2. Способ получения иммуномодулятора с антимикробной и антимикобактериальной активностью, представляющего собой №(6-метил2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-5-пиримидинсульфон)-№-изоникотиноилгидразид гидрат, следующей формулы

О характеризующийся тем, что проводят взаимодействие эквимолекулярных количеств 6метилурацил-5-сульфохлорида и изониазида в ацетонитриле при повышенной температуре.
3. Лекарственный препарат для лечения микобактериозов, хронических неспецифических заболеваний легких, заболеваний, передающихся половым путем, и иммунодефицита, состоящий из действующего вещества иммуномодулятора с антимикробной и антимикобакте17 риальной активностью, представляющего собой Ы-(6-метил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидро-5-пиримидинсульфон)-Ы'-изоникотиноилгидразид гидрат, следующей формулы о
4. Лекарственный препарат по п.3, который содержит действующее вещество в количестве от 0,05 до 0,3 г.

и носителя.