EA000411B1 - Вакцинная композиция, содержащая полирибозилрибитолфосфат, и способ ее получения - Google Patents

Вакцинная композиция, содержащая полирибозилрибитолфосфат, и способ ее получения Download PDF

Info

Publication number
EA000411B1
EA000411B1 EA199700419A EA199700419A EA000411B1 EA 000411 B1 EA000411 B1 EA 000411B1 EA 199700419 A EA199700419 A EA 199700419A EA 199700419 A EA199700419 A EA 199700419A EA 000411 B1 EA000411 B1 EA 000411B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
aluminum
vaccine composition
antigen
vaccine
prp
Prior art date
Application number
EA199700419A
Other languages
English (en)
Other versions
EA199700419A1 (ru
Inventor
Франсуа Арменжон
Жан-Рене Картье
Original Assignee
Пастёр Мерьё Серён Э Ваксен С.А.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=9479510&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=EA000411(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Пастёр Мерьё Серён Э Ваксен С.А. filed Critical Пастёр Мерьё Серён Э Ваксен С.А.
Publication of EA199700419A1 publication Critical patent/EA199700419A1/ru
Publication of EA000411B1 publication Critical patent/EA000411B1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/02—Bacterial antigens
    • A61K39/102—Pasteurellales, e.g. Actinobacillus, Pasteurella; Haemophilus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55505—Inorganic adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
    • A61K2039/6031—Proteins
    • A61K2039/6037—Bacterial toxins, e.g. diphteria toxoid [DT], tetanus toxoid [TT]
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S424/00—Drug, bio-affecting and body treating compositions
    • Y10S424/831—Drug, bio-affecting and body treating compositions involving capsular polysaccharide of bacterium, e.g. polyribosyl ribitol phosphate

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Description

Данное изобретение относится к вакцинным композициям, более подробно, к композициям, содержащим, по крайней мере, один антиген в виде капсульного полисахарида Haemophilus influenzae типа b, полирибозилрибитолфосфата с высоким молекулярным весом, связанного со столбнячным анатоксином.
Антиген, который можно применять для вакцинации человека с целью его защиты от инфекций, вызванных Haemophilus influenzae типа b, известен из предшествующего уровня техники и, в частности, из статьи Количественный и качественный анализ антител сыворотки взрослых людей при использовании капсульных полисахаридных антигенов Haemophilus influenzae типа b и пневмококка типа 6A, конъюгированных co столбнячным токсоидом, Rachel Schneerson и др., Infect. Immun., май 1986. Этот антиген образован капсульным полисахаридом бактерий, полирибозилрибитолфосфатом (PRP), который является Тзависимым вследствие связывания с белкомносителем, столбнячным анатоксином. Как сообщается в указанной статье, испытания, проведенные на резусных детях, показали, что иммунная реакция была адекватной и в то же время более сильной и более ранней, если антиген был комбинирован с гидроксидом алюминия. Однако, как указано в другой статье (Клинические и иммунологические реакции на капсульный полисахарид Haemophilus influenzae типа b или его конъюгат со столбнячным токсоидом у 18-23 месячных детей, Во A.Claesson и др., The Journal of Pediatrics, май 1988), после хранения данный антиген, адсорбированный на гидроксиде алюминия, является менее иммуногенным, чем антиген, хранившийся в солевом растворе, что может быть следствием расщепления полисахарида.
Для разрешения проблемы стабильности PRP-T в предшествующем уровне техники предлагалось использовать лиофилизацию. Однако, хотя это и позволяет сохранять иммуногенные свойства антигена, данный подход имеет некоторые недостатки, особенно в отношении промышленного производства; лиофилизация и отдельные приемы кондиционирования усложняют способ производства, что повышает его стоимость.
Кроме того, во время введения препарата необходимо растворять лиофилизат в соответствующей жидкости; эта процедура создает дополнительные сложности для практикующего врача и как любая манипуляция сопряжена с риском непрофессионального выполнения.
Кроме того, определенные жидкие вакцинные композиции включают антигены, абсорбированные на адъюванте на основе алюминия, и должна быть обеспечена возможность добавления к ним антигена в виде PRP-T без потери иммуногенности. Действительно, жидкая композиция, известная из предшествующего уровня техники, содержится в специальном шприце с двумя отделениями (первое отделение наполнено PRP-T в лиофилизованной форме, а второе отделение содержит другие антигены в водной суспензии), содержимое которых смешивают только во время введения препарата. Производство таких композиций дорого, а способ применения трудоёмок.
Таким образом, желательно иметь жидкую вакцинную композицию, включающую антиген в виде PRP-T с сохраняющимися во времени стабильными иммуногенными характеристиками, условия получения которой обеспечивают наименьшую стоимость производства. Для решения указанных задач предложена вакцинная композиция, включающая, по крайней мере, один антиген в виде капсульного полисахарида Haemophilus influenzae типа b или высокомолекулярного полирибозилрибитолфосфата, связанного со столбнячным анатоксином, а также адъювант на основе алюминия, отличающаяся тем, что адъювант на основе алюминия имеет точку нулевого заряда ниже 7,2.
Таким образом, неожиданно было обнаружено, что при этих условиях PRP-T сохраняет с течением времени стабильные иммуногенные свойства в жидкой среде.
В соответствии со специфической особенностью данного изобретения адъювант на основе алюминия включает гидроксиды алюминия, к которым добавлены соединения, образующие анионы.
В соответствии с другой особенностью данного изобретения, анионы представляют собой фосфаты или цитраты.
Таким образом, полученная композиция соответствует всем требованиям безопасности, предъявляемым к вакцинам.
В соответствии с конкретным способом осуществления изобретения вакцинная композиция дополнительно содержит один или более вакцинных антигенов, представляющих собой дифтерийный, столбнячный, коклюшный антиген, или антиген вируса гепатита B, или антиген вируса полиомиелита.
Таким образом, можно получить жидкие стабильные вакцинные композиции, в которых каждый антиген сохраняет свою иммуногенность, что позволяет практикующему врачу проводить вакцинацию одновременно против нескольких болезней без дополнительных манипуляций; это позволяет снизить стоимость препарата, сэкономить входящие в его состав компоненты и сократить количество визитов к врачу.
Заявленное изобретение также относится к способу получения вакцинной композиции, включающей, по крайней мере, один антиген в виде капсульного полисахарида Haemophilus influenzae типа b или высокомолекулярного полирибозилрибитолфосфата, связанного со столбнячным анатоксином, который заключает3 ся в том, что смешивают препарат антигена с адъювантом на основе алюминия с точкой нулевого заряда ниже 7,2.
Настоящее изобретение более подробно раскрывается ниже.
Антиген в виде капсульного полисахарида Haemophilus influenzae типа b является линейным полимером, состоящим из рибозы, рибитола и фосфорной кислоты, и имеет следующую структуру мономерного звена:
Количество мономеров такого типа велико (более 100), в результате чего полисахарид имеет молекулярный вес порядка от 500 000 до 1 000 000.
Для того чтобы вызвать иммунную реакцию Т клеток у маленьких детей, указанный антиген конъюгируют с белком-носителем, представляющим собой столбнячный анатоксин.
Такой антиген можно, например, получить согласно способу, описанному в работе Количественный и качественный анализ антител сыворотки взрослых людей при использовании капсульных полисахаридных антигенов Haemophilus influenzae типа b и пневмококка типа 6А, конъюгированных со столбнячным токсоидом, Rachel Schneerson и др., Infect. Immun. 52:519 (1986).
Большое количество мономеров полисахарида, природа белка-носителя, природа связи между полисахаридом и белком-носителем придают ему особые свойства и высокую иммуногенность.
Для сохранения указанных свойств в жидкой среде с течением времени, как обнаружено, можно использовать комплексы алюминия, точка нулевого заряда которых ниже 7,2.
Действительно, неожиданно обнаружено, что, когда PRP-T связан с такими комплексами алюминия, его иммуногенные свойства долго сохраняются в жидкой среде при любой степени иммобилизации на комплексах алюминия.
Точка нулевого заряда комплексов алюминия эквивалентна изоэлектрической точке белков; это такое значение pH, при котором заряд на поверхности комплексов алюминия равен нулю. Фактически, точка нулевого заряда определяется при измерениях зета-потенциала, которые можно выполнять разными способами, при этом основным способом является электрофорез. Измерения можно осуществлять при помощи такого прибора как DELSA 440 (Coulter Electronics, Hialeah, F1, USA).
Способы измерений и приборы могут быть разными, соответственно и полученные результаты могут различаться. Подходящими для целей данного изобретения комплексами алюминия могут быть такие комплексы, для которых точка нулевого заряда ниже 7,2 (значение 7,2 является приблизительной величиной), или такие комплексы, которые можно модифицировать с целью снижения их точки нулевого заряда.
Среди комплексов алюминия, имеющих точку нулевого заряда ниже 7,2, можно указать комплексы, известные в качестве вакцинных адъювантов как фосфаты алюминия, даже если с химической точки зрения они содержат соли, отличные от фосфатов алюминия. Такими комплексами являются, например, ADJUFOS® фосфат алюминия, производимый SUPERFOS BIOSECTOR a/s.
Указанные комплексы алюмния могут быть получены посредством реакции карбоната натрия в PBS-буфере на сульфатах калия и алюминия.
Иммуногенность PRP-Т, полностью или частично связанного с комплексом алюминия, сохраняется в течение длительного периода времени.
С другой стороны, согласно данному изобретению можно использовать комплексы алюминия, которые по своей природе имеют точку нулевого заряда выше 7,2 и которые модифицированы для снижения этой точки заряда.
Это, главным образом, комплексы алюминия, известные в качестве вакцинных адъювантов как гидроксиды алюминия, даже если с химической точки зрения они образованы не только гидроксидами алюминия. Такими комплексами являются, главным образом, ALHYDROGEL® гидроксид алюминия, производимый SUPERFOS BIOSECTOR a/s, используемый в качестве адъюванта в вакцинах D.T. Coq™ фирмы PASTEUR MERIEUX S & V или Recombivax® фирмы МЕRСК.
В соответствии с данным изобретением модификация указанных комплексов заключается в добавлении соединений, образующих анионы. Анионы могут быть различной природы при условии, что все они соответствуют требованиям безопасности, предъявляемым к препаратам для вакцинирования. Показано, что добавление цитрат-ионов или фосфат-ионов особенно эффективно для решения задач данного изобретения. Фосфат-ионы могут быть добавлены в виде раствора, содержащего монокальцийфосфат, динатрийфосфат и хлорид натрия.
Можно также применять комбинацию различных анионов, например комбинацию фосфат-ионов и карбонат-ионов. Соединения, образующие анионы, можно добавлять к суспензии комплексов алюминия до добавления PRP-T или к PRP-T до его связывания с комплексами алю5 миния. Для удобства предпочтительно суспендировать PRP-T в растворе, содержащем выбранные анионы, до их контакта с адъювантом.
Количество добавляемых анионов рассчитывают с целью снижения точки нулевого заряда используемых комплексов алюминия до величины менее 7,2. Таким образом, это количество меняется в зависимости от природы используемых комплексов алюминия, а также от количества анионов, которые могут быть внесены при использовании буферных соединений. Определение этого количества не выходит за пределы знаний специалиста в данной области техники.
Таким образом, получают вакцинную композицию, стабильную в жидком состоянии, при том, что PRP-T сохраняет свои высокоиммуногенные свойства.
Кроме того, обнаружено, что благодаря добавлению анионов, снижается иммобилизация PRP-T на комплексах алюминия, что может вносить свой вклад в сохранение его целостности и, следовательно, иммуногенности.
Хотя это не является предпочтительным в соответствии с данным изобретением, можно добавлять анионы к комплексам алюминия, уже имеющим по своей природе точку нулевого заряда ниже 7,2. В этом случае точка нулевого заряда снижается, а иммобилизация PRP-T на комплексах алюминия уменьшается.
Под термином “иммобилизация” понимают, что любая форма связи делает PRP-T неподдающимся дозировке, когда после центрифугирования собирают супернатант.
Вакцинные композиции в соответствии с данным изобретением содержат вакцинный антиген PRP-T, но могут также включать и другие вакцинные антигены, в особенности предназначенные для защиты против дифтерии, столбняка, коклюша (клеточного или бесклеточного), полиомиелитов, гепатита А, гепатита В и др. заболеваний. Фактически, в соответствии с данным изобретением в вакцинную композицию можно вводить любой вакцинный антиген, совместимый с PRP-T и комплексами алюминия. Таким образом, можно получить жидкую вакцинную композицию, позволяющую одним введением произвести вакцинацию против нескольких заболеваний. В частности, вакцинные композиции в соответствии с данным изобретением пригодны для введения маленьким детям.
Кроме того, показано, что использование такой жидкой вакцинной композиции при активной вакцинации 12-ти месячных детей, которым делали инъекции в 2-, 4- и 6-ти месячном возрасте, должно особенно сильно увеличивать выработку анти-PRP-T антител по сравнению с активной вакцинацией, проводимой при тех же условиях с использованием TETRAct-HIB™ вакцины от PASTEUR MERIEUX Serums et Vaccins.
ед.дозы вакцинирования ед. дозы вакцинирования 15 OU (оптические ед.)
2 мкг
43,75 мкг
0,3 мг микромолей
0,125 мл
До 0,5 мл
Пример 1 . Получают вакцинную композицию, используя следующие компоненты: Очищенный столбнячный анатоксин (РТА)
Очищенный дифтерийный анатоксин (PDA)
Коклюшная клеточная смесь PRP-T (приведено количество PRP)
Мертиолат (Merthiolat)
Г идроксид алюминия (приведено количество Al) соответствует количеству в препарате D.T.Coq'1''
Фосфаты мМолярный Трисбуфер, содержащий 8,5% сахарозы Вода для инъекций
Фосфат-ионы добавляют, используя раствор, содержащий монокалийфосфат, динатрийфосфат и хлорид натрия.
Пример 2. Иммуногенность вакцинной композиции, полученной как указано в примере 1 , исследовали на маленьких детях при сравнении с иммуногенностью известной вакцины TETRAct-HIB™, которая имеет такой же состав, но лиофилизованный PRP-T непосредственно перед инъекцией смешивают с вакцинной композицией, содержащей дифтерийный и столбнячный анатоксины, а также коклюшную клеточную смесь.
Данное исследование проводили на группе из 262 детей, 130 из которых получали препарат, приготовленный в соответствии с примером 1 , и 1 32 получали коммерческую вакцину TETRAct-HIB™. Введение вакцин проводили внутримышечно в 2, 6 и 1 2-ти месячном возрасте.
Перед иммунизацией GMT-титр анти-PRP антител в двух группах был равен 0,2 мкг/мл; после второй инъекции он составлял 1,9 и 1,4 мкг и после третьей инъекции 5,9 и 5,8, соответственно для заявленной вакцины и вакцины, известной из уровня техники.
После воторой инъекции 98% детей (вакцинированных согласно данному изобретению) и 93% детей (вакцинированных в соответствии с предшествующим уровнем техники) имели уровень анти-PRP антител более 0,15 мкг/мл; этот уровень достигался у 1 00% детей после третьей инъекции заявленной вакцины и у 99% детей, вакцинированных в соответствии с предшествующим уровнем техники.
После третьей инъекции количество антител, направленных против каждого вакцинного
антигена, в среднем составляло следующие ве- зиция сохраняет свои иммуногенные свойства,
личины: Предшест- вующая вакцина Заявленная вакцина это касается и PRP-T, и других вакцинных антигенов. Пример 4. Вакцинные композиции, каждая из которых содержит PRP-Т в концентрации, по крайней мере, 20 мкг PRP/мл, получают при
Дифтерийный антиген, UI/мл 1,35 1,56 использовании комплексов алюминия разного типа, имеющих различные точки нулевого заря-
Столбнячный ан- 5,1 4,9 да (PZC). Количество комплексов алюминия
тиген, UI/мл Коклюшный анти- таково, что концентрация алюминия в композиции равна 0,6 г/л.
ген, GMT- агглютинация 597 601 Композиция 1 : Комплекс алюминия, образованный гидроксидом алюминия, таким как в
PRP, мкг/мл 5,8 5,9 составе вакцины D. Т. Coq™ от PMsv. PZC = 11,3.
Композиция 2: Комплекс алюминия, образованный гидроксидом алюминия, таким как в
После активной иммунизации в 12-ти месячном возрасте количество антител составляло:
Предшест- вующая вакцина Заявленная вакцина
Дифтерийный 3,2 4,5
антиген, UI/мл
Столбнячный ан- 12,0 11,5
тиген, UI/мл
Коклюшный антиген, GMT- агглю- 2447 2560
тинация PRP, мкг/мл 19,4 32,6
Приведенные результаты показывают, что полученная в соответствии с настоящим изобретением вакцинная комбинация стабильна; фактически активная инъекция детям 12-ти месячного возраста проводилась с использованием вакцины, которую получили 18 месяцев тому назад; однако, полученные данные свидетельствуют о том, что иммуногенность каждого антигена композиции сохраняется. Кроме того, эффект активной иммунизации при использовании вакцинной композиции, полученной в соответствии с данным изобретением, заметно сильнее по сравнению с эффектом активной иммунизации при использовании известной вакцины, имеющей тот же самый состав.
Пример 3. Дозированную вакцинную композицию, описанную в примере 1 , хранят при +4°С в течение 18-24 месяцев и затем используют в клинических испытаниях на группе из 104 детей.
Ниже приведены титры антител, направленных против каждого вакцинного антигена:
Дифтерийный ан- До вакцинирования 0,013 После вакци нирования 0,736
тиген, GMT
Столбнячный антиген, GMT 0,181 3,831
PRP, GMT мкг/мл 0,22 6,40
Таким образом, можно видеть, что даже после хранения в течение длительного периода времени при +4°С заявленная вакцинная компосоставе вакцины Recombivax® от Merck. PZC =7,4.
Композиция 3: Комплекс алюминия, образованный фосфатом алюминия, полученным при смешивании хлорида натрия и тринатрийфосфата. PZC = 6,2.
Композиция 4: Комплекс алюминия, образованный продуктом, который называется Alum, и получен по реакции карбоната натрия в PBSбуфере с сульфатами калия и алюминия. PZC = 5,4.
Вакцинную композицию получают посредством простого смешивания суспензий, содержащих комплексы алюминия и PRP-T.
Пример 5. Иммуногенность полученных композиций проверяют на мышах. С целью изучения иммуногенной стабильности полученные композиции выдерживают в условиях ускоренного старения, то есть хранят их при +37°С в течение 2 недель.
Исследование иммуногенности осуществляют на мышах весом 22-24 г, которым подкожно вводят дозы 0,5 мл, каждая из которых содержит 2,5 мкг PRP. Введение производят в день 0 и на 14 день. На 14 и 21 день у мышей берут кровь и определяют содержание антител радиоиммунологическим способом. Количество мышей, иммунизированных каждой вакциной, составляет 8.
Результаты считаются удовлетворительными, если:
• по крайней мере, 75% мышей на 21 день имеют титр антител > 0,5;
• имеет место существенная разница между результатами, полученными на 1 4 и 21 дни.
Считают, что заявленная вакцинная композиция является стабильной, если результаты, полученные после ускоренного старения, удовлетворительны.
Результаты, полученные для исследованных композиций, суммированы в таблице ниже:
PZC Иммунологии. тест
С1 11,3 Неудовлетворительно
С2 7,4 Неудовлетворительно
С3 6,2 Удовлетворительно
С4 5,4 Удовлетворительно
Таким образом видно, что когда точка нулевого заряда комплексов алюминия соответствует кислому значению рН, полученная вакцинная композиция является стабильной.
Пример 6. Для каждой композиции, полученной в соответствии с примером 4, изменяют процентное содержание PRP-T, иммобилизованного на комплексах алюминия.
Для этого каждую композицию центрифугируют, собирают супернатант, в котором определяют количество неиммобилизованного PRPT путём ELISA или RIA.
Разница между концентрацией PRP-T в исходной композиции и количеством, определенным в супернатанте, позволяет определить процент иммобилизованного PRP-T.
Ниже приведены полученные результаты:
С1 : 100%
С2 : 100%
С3 : 100%
С4 : 70%
Пример 7. Композицию 1 модифицируют, добавляя к ней соединения, образующие фосфат-ионы, с получением концентрации ионов 50 мМолей/л. Исследование иммуногенности, проводимое на мышах после ускоренного старения раствора, дает удовлетворительный результат.
Определение процента иммобилизации PRP-T на комплексах алюминия показывает, что в таких условиях иммобилизовано только 20% PRP-T.
Пример 8. На этот раз композицию 1 модифицируют, добавляя к ней соединения, образующие цитрат-ионы, для получения концентрации ионов 200 мМолей/л.
Исследование иммуногенности, проводимое на мышах после ускоренного старения раствора, дает удовлетворительный результат.
Определение процента иммобилизации PRP-T на комплексах алюминия показывает, что в таких условиях PRP-T вообще не иммобилизован.
Пример 9. Композицию 2 модифицируют, добавляя к ней соединения, образующие фосфат-ионы, для получения концентрации ионов 20 мМолей/л.
Исследование иммуногенности, проводимое на мышах после ускоренного старения раствора, дает удовлетворительный результат. Определение процента иммобилизации PRP-T на комплексах алюминия показывает, что в таких условиях PRP-T вообще не иммобилизован.
Пример 1 0. Композицию 3 модифицируют, добавляя к ней соединения, образующие фосфат-ионы, в разных количествах и определяют процент иммобилизации PRP-Т на комплексах алюминия.
Если количество добавленных фосфатионов таково, что концентрация фосфатов в композиции составляет 2 мМоля/л, процент иммобилизованного PRP-T снижается до 1 0%.
Если количество добавленных фосфатионов таково, что концентрация фосфатов в композиции составляет 4 ммоля/л, то PRP-T вообще не иммобилизован.
Исследование иммуногенности, проводимое на мышах после ускоренного старения раствора, дает удовлетворительный результат.
Пример 11. Композицию 4 модифицируют, добавляя к ней соединения, образующие фосфат-ионы, для получения концентрациии ионов 60 мМолей/л.
Определение процента иммобилизации PRP-T на комплексах алюминия показывает, что в таких условиях иммобилизовано только 30% PRP-T. Исследование иммуногенности, проводимое на мышах после ускоренного старения раствора, дает удовлетворительный результат.
Пример 1 2. Получают вакцинную композицию, используя следующие компоненты:
Г идроксид алюминия
(приведено количество Al) 0,25 мг
PRP-T (приведено количество PRP) 1 0 мкг
PDA 1 ед.дозы вак-
рта ци-нирования 1 ед.дозы вак-
Фосфаты ци-нирования 15 микромолей
Антигены полиовируса тип I 40 Ед.
тип II 8 Ед.
тип III 32 Ед.
Коклюшный анатоксин 25 мкг
Коклюшный F-HA 25 мкг
50 мМолярный Трисбуфер, содержащий 42,5% 0,125 мл
сахарозы Вода для инъекций До 0,5 мл
Исследования иммуногенности PRP-T проводят на мышах, используя раствор, полученный в соответствии с данным способом, а также раствор, хранившийся в течение 1 месяца при 37°С; раствор, хранившийся в течение 2 месяцев при 25°С, и раствор, хранившийся в течение 6 месяцев при 4°С. Все эксперименты приводят к удовлетворительным результатам, что подтверждает стабильность PRP-T при названных условиях.
Пример 13. Получают вакцинную композицию, используя следующие компоненты:
Гидроксид алюминия (приведено количество Al) PRP-T (приведено количество РRР)
PDA
0,3 мг
0 мкг ед.дозы вакци11
нирования
РТЛ 1 ед.дозы вакци-
нирования
Коклюшный анатоксин F-HA Hbs протеин (как в вакцине GenHevae В PASTEUR® ) Антигены полиовируса 25 мкг 25 мкг 20 мкг
тип I 40 Ед.
тип II 8 Ед.
тип III 32 Ед.
Фосфаты 20 микромолей
Карбонаты 5 микромолей
50 мМолярный Трис-буфер, содержащий 42,5% сахарозы 0,125 мл
Вода для инъекций До 0,5 мл
Стабильность полученного таким образом раствора изменяют, выдерживая его в течение 2 недель при 37°С, и затем проводят на мышах исследование иммуногенности PRP-T, как описано в примере 5.
Полученные результаты удовлетворительны.
Проводят исследование иммуногенности Hbs протеина на мышах, оно заключается в определении анти-Hbs антител путём ELISA, и затем в определении 50%-ной эффективной дозы, которая может составлять менее 0,970 мкг Hbs протеина, до тех пор, пока тест считается удовлетворительным.
Результаты исследований при использовании раствора, приготовленного как указано выше и хранившегося до этого в течение 2 недель при 37°С, являются удовлетворительными.
Пример 14. Получают вакцинную композицию, используя следующие компоненты:
Г идроксид алюминия
(приведено количество Al) 0,3 мг
PRP-T (приведено количество PRP) 1 0 мкг
PDA 1 ед.дозы вакцинирования
РТЛ 1 ед.дозы вакцинирования
Коклюшный анатоксин 1 0 мкг
F-HA 5 мкг
Фимбрии 5 мкг
Пертактин (Pertactin) Hbs протеин (как в вакци- 3 мкг
не GenHevae В PASTEUR®) Антигены полиовируса 20 мкг
тип I 40 Ед.
тип II 8 Ед.
тип III 32 Ед.
Фосфаты 20 микромолей
Карбонаты 1 0 микромолей
MgCl2 5 микромо-
лей
50 мМолярный Трисбуфер, содержащий 42,5% сахарозы 0,125 мл
Вода для инъекций До 0,5 мл
Исследования иммуногенности PRP-T, как описано в примере 5, и исследования иммуногенности Hbs протеина, как описано в примере 1 3, дают удовлетворительные результаты, что свидетельствует о стабильности вакцинной композиции, полученной в соответствии с данным изобретением.

Claims (8)

  1. ФОРМУЛЛ ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Вакцинная композиция, содержащая капсульный полисахаридный антиген Haemophilus influenzae типа b, а именно высокомолекулярный полирибозилрибитолфосфат, связанный со столбнячным анатоксином, и адъювант на основе алюминия, отличающаяся тем, что адъювант на основе алюминия имеет точку нулевого заряда ниже 7,2.
  2. 2. Вакцинная композиция по п.1, отличающаяся тем, что адъювант на основе алюминия представляет собой гидроксиды алюминия, к которым добавлены соединения, образующие анионы.
  3. 3. Вакцинная композиция по п.2, отличающаяся тем, что указанные соединения представляют собой фосфаты и цитраты.
  4. 4. Вакцинная композиция по любому из пп. 1 -3, отличающаяся тем, что адъювант на основе алюминия представляет собой фосфаты алюминия.
  5. 5. Вакцинная композиция по любому из пп. 1 -4, отличающаяся тем, что адъювант на основе алюминия представляет собой сульфаты алюминия и калия.
  6. 6. Вакцинная композиция по любому из пп.1-5, отличающаяся тем, что дополнительно содержит один или более антигенов, представляющих собой дифтерийный, столбнячный, коклюшный антиген, или антиген вируса гепатита В, или антиген вируса полиомиелита.
  7. 7. Способ получения вакцинной композиции по п. 1 , заключающийся в том, что смешивают препарат антигена с адъювантом на основе алюминия, имеющим точку нулевого заряда ниже 7,2.
  8. 8. Способ по п.7, отличающийся тем, что к адъюванту на основе алюминия дополнительно добавляют соединение, образующее анионы, причем указанные соединения представляют собой фосфаты и цитраты.
EA199700419A 1995-05-24 1996-05-24 Вакцинная композиция, содержащая полирибозилрибитолфосфат, и способ ее получения EA000411B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR9506417A FR2734484B1 (fr) 1995-05-24 1995-05-24 Composition vaccinale liquide et procede de fabrication
PCT/FR1996/000791 WO1996037222A1 (fr) 1995-05-24 1996-05-24 Composition vaccinale comprenant du polyribosylribitol phosphate et son procede de fabrication

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA199700419A1 EA199700419A1 (ru) 1998-06-25
EA000411B1 true EA000411B1 (ru) 1999-06-24

Family

ID=9479510

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA199700419A EA000411B1 (ru) 1995-05-24 1996-05-24 Вакцинная композиция, содержащая полирибозилрибитолфосфат, и способ ее получения

Country Status (26)

Country Link
US (1) US6333036B1 (ru)
EP (1) EP0828511B1 (ru)
JP (1) JPH11505824A (ru)
KR (1) KR100404312B1 (ru)
CN (1) CN1152715C (ru)
AT (1) ATE207365T1 (ru)
BR (1) BR9608810C8 (ru)
CA (1) CA2218764C (ru)
CZ (1) CZ289810B6 (ru)
DE (2) DE69620271T2 (ru)
DK (1) DK0828511T3 (ru)
EA (1) EA000411B1 (ru)
ES (1) ES2162067T3 (ru)
FR (1) FR2734484B1 (ru)
GR (1) GR3037011T3 (ru)
HK (1) HK1017251A1 (ru)
HU (1) HU223941B1 (ru)
LU (1) LU91924I2 (ru)
NL (1) NL300231I2 (ru)
NO (2) NO319579B1 (ru)
NZ (1) NZ309829A (ru)
PL (1) PL185846B1 (ru)
PT (1) PT828511E (ru)
SK (1) SK282500B6 (ru)
TR (1) TR199701424T1 (ru)
WO (1) WO1996037222A1 (ru)

Families Citing this family (25)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20020054884A1 (en) 1995-06-23 2002-05-09 Smithkline Beecham Biologicals, Sa Vaccine composition comprising a polysaccharide conjugate antigen adsorbed onto aluminium phosphate
US6974581B1 (en) * 1998-12-15 2005-12-13 Aventis Pasteur Limited Multi-component vaccine comprising at least two antigens from haemophilus influenzae to protect against disease
IL145209A0 (en) 2000-09-06 2002-06-30 Pfizer Prod Inc Pharmaceutical combinations for the treatment of stroke and traumatic brain injury
EP1674087A1 (en) 2000-10-02 2006-06-28 Pfizer Products Inc. Prophylactic use of n-methyl-d-aspartate (NMDA) antagonists
FR2828406B1 (fr) 2001-08-08 2005-06-24 Aventis Pasteur Composition vaccinale bivalente havi
AU2003274511B2 (en) 2002-10-11 2009-06-04 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Polypeptide-vaccines for broad protection against hypervirulent meningococcal lineages
CN102302776B (zh) 2003-01-30 2014-06-18 诺华疫苗和诊断有限公司 抗多种脑膜炎球菌血清组的可注射性疫苗
GB0313916D0 (en) 2003-06-16 2003-07-23 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccine composition
GB0323103D0 (en) 2003-10-02 2003-11-05 Chiron Srl De-acetylated saccharides
BRPI0415025A (pt) 2003-10-02 2006-12-12 Chiron Srl vacinas lìquidas para sorogrupos meningocócicos múltiplos
DK1689721T3 (da) * 2003-11-26 2010-09-20 Pfizer Prod Inc Aminopyrazolderivater som GSK-3-ihibitorer
GB0405787D0 (en) * 2004-03-15 2004-04-21 Chiron Srl Low dose vaccines
GB0409745D0 (en) 2004-04-30 2004-06-09 Chiron Srl Compositions including unconjugated carrier proteins
GB0500787D0 (en) 2005-01-14 2005-02-23 Chiron Srl Integration of meningococcal conjugate vaccination
RU2379052C2 (ru) 2004-04-30 2010-01-20 Чирон С.Р.Л. Вакцинация менингококковыми конъюгатами
CA2694083A1 (en) * 2007-07-26 2009-01-29 Sanofi Pasteur Limited Antigen-adjuvant compositions and methods
GB0818453D0 (en) 2008-10-08 2008-11-12 Novartis Ag Fermentation processes for cultivating streptococci and purification processes for obtaining cps therefrom
PE20100366A1 (es) * 2008-10-24 2010-05-21 Panacea Biotec Ltd Novedosas composiciones de vacuna con tos ferina acelular asi como el metodo para su elaboracion
PE20100365A1 (es) 2008-10-24 2010-05-21 Panacea Biotec Ltd Novedosas vacunas de combinacion con tos ferina de celulas enteras y metodo para su elaboracion
US7814991B2 (en) * 2009-01-28 2010-10-19 Gas Technology Institute Process and apparatus for subterranean drilling
PL2411048T3 (pl) 2009-03-24 2020-11-16 Glaxosmithkline Biologicals Sa Adjuwantowe meningokokowe białko wiążące czynnik h
TW201138805A (en) * 2010-03-29 2011-11-16 Novartis Ag Composition of organic compounds
RU2013136397A (ru) 2011-01-05 2015-02-10 Бхарат Байотек Интернэшнл Лимитед Комбинированная семивалентная вакцина
WO2014135651A1 (en) 2013-03-08 2014-09-12 Crucell Holland B.V. Acellular pertussis vaccine
KR20230173114A (ko) 2021-04-20 2023-12-26 케이엠 바이올로직스 가부시키가이샤 6종 혼합 액상 백신 조성물

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA1209036A (en) * 1982-08-20 1986-08-05 Joseph S.C. Kuo Combined haemophilus influenzae and diphtheria, pertussis, tetanus vaccine
IT1187753B (it) * 1985-07-05 1987-12-23 Sclavo Spa Coniugati glicoproteici ad attivita' immunogenica trivalente
EP0320942A3 (en) * 1987-12-18 1989-10-04 American Cyanamid Company Novel polysaccharides novel macromolecular conjugates of the polysaccharides
GB9202219D0 (en) * 1992-02-03 1992-03-18 Connaught Lab A synthetic heamophilus influenzae conjugate vaccine
CZ283910B6 (cs) * 1992-05-23 1998-07-15 Smithkline Beecham Biologicals (S.A.) Kombinovaný očkovací prostředek, způsob jeho výroby a použití fosforečnanu hlinitého jako pomocného prostředku

Also Published As

Publication number Publication date
PL323457A1 (en) 1998-03-30
TR199701424T1 (xx) 1998-03-21
CZ289810B6 (cs) 2002-04-17
NO975366D0 (no) 1997-11-21
BR9608810C8 (pt) 2014-07-08
US6333036B1 (en) 2001-12-25
FR2734484B1 (fr) 1997-06-27
DE69620271D1 (de) 2002-05-02
CZ359797A3 (cs) 1999-06-16
PL185846B1 (pl) 2003-08-29
NO319579B1 (no) 2005-08-29
CA2218764C (fr) 2011-01-11
AU6008696A (en) 1996-12-11
LU91924I2 (fr) 2012-02-21
DK0828511T3 (da) 2002-02-18
GR3037011T3 (en) 2002-01-31
NL300231I1 (nl) 2006-07-03
EP0828511A1 (fr) 1998-03-18
JPH11505824A (ja) 1999-05-25
CN1190898A (zh) 1998-08-19
SK282500B6 (sk) 2002-10-08
EA199700419A1 (ru) 1998-06-25
DE69620271T2 (de) 2002-07-18
NO975366L (no) 1997-11-21
ATE207365T1 (de) 2001-11-15
ES2162067T3 (es) 2001-12-16
KR19990014919A (ko) 1999-02-25
EP0828511B1 (fr) 2001-10-24
CN1152715C (zh) 2004-06-09
SK152997A3 (en) 1998-07-08
NZ309829A (en) 1999-06-29
KR100404312B1 (ko) 2004-02-11
CA2218764A1 (fr) 1996-11-28
NO2011019I1 (no) 2011-09-26
HUP9901432A2 (hu) 1999-08-30
FR2734484A1 (fr) 1996-11-29
HUP9901432A3 (en) 2000-03-28
HK1017251A1 (en) 1999-11-19
NL300231I2 (nl) 2006-09-01
MX9709011A (es) 1998-03-31
WO1996037222A1 (fr) 1996-11-28
DE122011100030I1 (de) 2011-12-08
PT828511E (pt) 2002-02-28
HU223941B1 (hu) 2005-03-29
BR9608810A (pt) 1999-08-31
AU708777B2 (en) 1999-08-12
NO2011019I2 (no) 2015-05-18

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA000411B1 (ru) Вакцинная композиция, содержащая полирибозилрибитолфосфат, и способ ее получения
KR100287083B1 (ko) B형 간염 표면 항원 및 다른 항원을 포함하는 조합 백신
JP4871770B2 (ja) 組み合わせ髄膜炎ワクチン
JP5637848B2 (ja) 髄膜炎ワクチンの製剤化
JP5679631B2 (ja) 全細胞百日咳抗原を含む混合ワクチン
PT1390066E (pt) Composição de vacina
US20200138927A1 (en) Non-cross-linked acellular pertussis antigens for use in combination vaccines
EP2376112B1 (en) Mixing lyophilised meningococcal vaccines with d-t-pa vaccines
JP2015509963A (ja) Ｔｌｒ４アゴニストを含む混合ワクチン
KR100289224B1 (ko) 조합 소아과 백신 조성물
WO2022224966A1 (ja) ６種混合液状ワクチン組成物
EP0101562A2 (en) Combined haemophilus influenzae and diphtheria, pertussis, tetanus vaccine
MXPA97009011A (en) Vaccination composition comprising polyribosil phosphate ribitol and its manufacture procedure
PL174077B1 (pl) Szczepionka do ochrony przed zakażeniem lub leczeniem zakażeń Hepatitis B i heterologicznych chorób, zawierająca antygen powierzchniowy Hepatitis B (HBsAg)
SA96170157B1 (ar) تركيب لقاح composition vaccine يشتمل على مولد مضاد متعدد سكريد مقترن antigen conjugated polsaccharide يتم امتزازه على فوسفات الألومنيوم aluminum phosphate
SA93140106B1 (ar) اتحاد اللقاح لتشكيل مضاد سطحي لالتهاب الكبد الوبائي ب hepatitis b أو مضادات أخرى

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ KZ KG MD TJ TM

MK4A Patent expired

Designated state(s): BY RU