DK3000870T3 - Filamentøse svampe med ændret viscositetsfænotype - Google Patents

Claims (19)

1. FILAMENTØSE SVAMPE MED ÆNDRET VISCOSITETSFÆNOTYPE

   1. Stamme variant af filamentøse Trichodcrma reesei svampe, der er afledt af en ophavsstamme, hvilken stammevariant omfatter en genetisk ændring, der får celler af stammevarianten til at producere en reduceret mængde af funktionelt Sebl-protein sammenlignet med celler af ophavsstammen, hvor cellerne af stammevarianten producerer under aerob fermentering i nedsænket kultur en cellebouillon, der (i) kræver reduceret omrøring for at opretholde et forhåndsvalgt opløst oxygenindhold sammenlignet med cellerne i ophavsstammen, og/eller (ii) opretholder et forøget opløst oxygenindhold ved eri forhåndsvalgt mængde omrøring sammenlignet med cellerne i ophavsstammen, hvor ophavsstammen yderligere omfatter et heterologt gen, der koder for et protein af interesse.
2. 2. Stammevariant ifølge krav 1, hvor den genetiske ændring omfatter en forstyrrelse af sebi-genet, der er til stede i ophavsstammen.
3. 3. Stammevariant ifølge krav 2, hvor: (a) et brud på sebi genet er resultatet af deletion af hele eller en del af sebi genet; eller (b) et biud på sebl-geriet er resultatet af deletion af en del af genomisk DNA omfattende sebl-genet; eller (c) et brud på sebl-genet er resultatet af muiagenese af sebl- genet.
4. 4. Stammevariant ifølge krav 2 eller krav 3, hvor brud på sebl-genet udføres ved attvendeise af stedsspecifik rekombination eller brud på. sebl-genet udføres i kombination med indføring af en valgbar markør på. det: genetiske locus for sebl -genet,
5. 5. Stammevariant ifølge et hvilket som helst af de foregående krav, hvor stammevarianten ikke producerer funktionelt Sebl-protein.
6. 6. Stammevariant ifølge et hvilket som helst af de foregående krav, hvor stammevarianten ikke producerer Sebl-protein.
7. 7. Stammevariant ifølge et hvilket som helst af de foregående krav, hvor stammevarianten yderligere omfatter et brud på mindst et gen udvalgt fra gruppen bestående af sfb3-genei, mpgi-genet, gasl-genet, crzl -genet og tps2-genet eller homologe gener deraf.
8. 8. Stammevariant ifølge krav 7, omfattende et brud på sfb3-genet.
9. 9. Stammevariant ifølge et hvilket som helst af de foregående krav, hvor stammevarianten producerer i det væsentlige samme mængde eller mere protein per enhedsmængde af biomasse som ophavsstammen.
10. 10. Stammevariant ifølge krav 1, hvor (a) stammevarianten omfatter en valgbar markør på det genetiske locus for sebl -genet og/eller (b) stammevarianten yderligere omfatter et brud på mpgl-genet
11. 11. Fremgangsmåde til ekspression af et heterologt protein af interesse for celler af en stammevariant af en filamentøs svamp omfattende en genetisk ændring, der bevirker, at celler af stammevarianten producerer en reduceret mængde af funktionelt Sebl-protein sammenlignet med celler af ophavsstammen, hvor cellerne i stammevarianten producerer en celleboullion under aerob fermentering i nedsænket kultur, der (i) kræver reduceret omrøring for at opretholde et forhåndsvalgt opløst oxygenindhold sammenlignet med cellerne i ophavsstammen og/eller (ii) opretholder et forøget opløst oxygenindhold ved en forhåndsvalgt mængde omrøring sammenlignet med cellerne i ophavsstammen, hvor stammevarianten yderligere omfatter et gen, der koder for et heterologt protein af interesse, hvilken fremgangsmåde omfatter dyrkning af de fil amen tøse svampeceller, således at de udtrykker det heterologe protein af interesse.
12. 12. Fremgangsmåde ifølge krav 11, hvor: (a) stammevarianten omfatter en valgbar markør på det genetiske locus for sebi genet; eller (b) stammevarianten yderligere omfatter et brud på sfb3-genet.
13. 13. Fremgangsmåde ifølge krav 11 eller krav 12, hvor stammevarianten producerer i det væsentlige samme mængde eller mere protein pr. enhedsmængde af biomasse som ophavsstammen,
14. 14. Fremgangsmåde ifølge ei hvilket som helst af kravene 11 til 14, hvor den filamentøse svamp er en Pezizomycotina-art, eller den filamentøse svamp er en Trichoderma spp.
15. 15. Fremgangsmåde ifølge krav 14, hvor det· filamentøse svamp er Trichoderma reesei.
16. 16. Fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst al' kravene 11 til 15, hvor stammevarianten yderligere omfatter et brud på mindst et gen udvalgt fra gruppen bestående af sfb3-genet, mpgi-genet, gas 1-genet, crzl -genet og tps2-genet eller homologe gener deraf.
17. 17. Fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af kravene il til 16, hvor proteinet af interesse er et enzym.
18. 18. Fremgangsmåde ifølge krav 17, is vor enzymet er udvalgt blandt en cellulasc, en xylanase, en pectinase, en lyase, en protease, en kinase, eri amylase, en pullulanase, en lipase, en esterase, en perhydrolase, en transferase, en laeease, en catalase, en oxidase, en reduklase, en ehiorophyllase, hydrophobin, chymosin, kulsyreanhydrase, hymidylatsyntase, dihvdrofolairednktase, en tyrosinkinase, carbamyl-P-syntase, aspartat-transcarbamylase, dihydroorotase, topoisomeraser eller ribonukleotidreduktase.
19. 19. Anvendelse af en variantstamme af filamentøse svampe, der er afledt af en ophavsstamme til ekspression af et heterologt protein af interesse, hvilken stammevarianten omfatter en genetisk ændring, der får celler i stammevarianten, til at producere en reduceret mængde af funktionelt Sebi-protein sammenlignet, med celler af ophavsstammen, hvor cellerne i stammevarianten producerer under aetob fermentering i nedsænket kultur en cellebouillon, der (i) kræver reduceret omrøring for at opretholde et forhåndsvalgt opløst oxygenindhold sammenlignet med cellerne i ophavsstammen og/eller (ii) opretholder et forøget opløst oxygenindhold ved en forhåndsvalgt mængde omrøring sammenlignet med cellerne i ophavsstammen, hvor stammevarianten yderligere omfatter et gen, der koder for et heterologt protein af interesse.