DK174773B1 - Specifik bindingsbestemmelse, specifik bindings-bestemmelsessæt og sensibilisatorkonjugat til anvendelse herved - Google Patents
Specifik bindingsbestemmelse, specifik bindings-bestemmelsessæt og sensibilisatorkonjugat til anvendelse herved Download PDFInfo
- Publication number
- DK174773B1 DK174773B1 DK199002916A DK291690A DK174773B1 DK 174773 B1 DK174773 B1 DK 174773B1 DK 199002916 A DK199002916 A DK 199002916A DK 291690 A DK291690 A DK 291690A DK 174773 B1 DK174773 B1 DK 174773B1
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- specific binding
- sensitizer
- conjugate
- binding assay
- analyte
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
- G01N33/582—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances with fluorescent label
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
- G01N33/583—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances with non-fluorescent dye label
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/905—Photochemical activation of reactions
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10T436/14—Heterocyclic carbon compound [i.e., O, S, N, Se, Te, as only ring hetero atom]
- Y10T436/142222—Hetero-O [e.g., ascorbic acid, etc.]
- Y10T436/143333—Saccharide [e.g., DNA, etc.]
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
- Investigating Or Analyzing Materials By The Use Of Electric Means (AREA)
- Measuring Fluid Pressure (AREA)
- Train Traffic Observation, Control, And Security (AREA)
- Burglar Alarm Systems (AREA)
Description
i DK 174773 B1
Den foreliggende opfindelse angår en specifik bindingsbestemmelse, et specifik bindings-bestemmelsessæt og et sensibilisatorkonjugat til anvendelse herved.
Nogle forbindelser vil antage exciterede triplet-5 tilstande efter excitation ved bestråling, elektronoverføring, elektrolyse (dvs. elektroluminescens) eller energioverføring. Disse forbindelser eller "sensibilisatorer" kan vekselvirke med forskellige andre forbindelser og overføre energi eller elektroner til disse andre forbindelser, hvorved 10 sensibilisatoren returnerer til den ikke-exciterede tilstand eller grundtilstand. Vekselvirkningen mellem den exciterede sensibilisator og disse andre forbindelser kan under visse betingelser bevirke dannelse af et detekterbart signal, som kan overvåges og/eller kvantificeres.
15 Sensibilisatorer er blevet beskrevet i litteraturen og er blevet anvendt ved immunobestemmelser. F.eks. beskrives det i Chemical Abstracts, bind 102, nr. 131352p, at dioxeta-ner giver kemiluminescens ved termolyse. US patent nr. 4.383.031, 4.160.645 og 4.391.904 beskriver generelt bestem-20 melsesmetoder, hvorved kemiluminescens anvendes ved en specifik bindingsbestemmelse. Disse bestemmelsessystemer anvender imidlertid ukonjugerede sensibilisatorer til tilvejebringelse af kemiluminescens. Sensibilisatorerne selv er ikke direkte involveret i en specifik bindingsreaktion og tilsættes i 25 det sidste trin til tilvejebringelse af kemiluminescens-signaler. Sensibilisatorerne kan således frit vekselvirke med ikke blot forbindelserne, som er involveret i den specifikke binding, men også de forbindelser, som ikke er involveret i den specifikke binding. Denne ikke-selektive veksel-30 virkning begrænser ofte følsomheden af bestemmelsen. Det ville derfor være ønskeligt at anvende sensibilisatorer, som er bundet til et specifik bindingsmateriale, således at signalerne dannet af sensibilisatorerne korrelerer med mængden af analyt, som er involveret i den specifikke bindings-35 vekselvirkning.
Den foreliggende opfindelse angår en specifik bin- 2 DK 174773 B1 dingsbestemmelse som defineret i krav l. Opfindelsen angår desuden et specifik bindings-bestemmelsessaet som defineret i krav 28. Opfindelsen angår endelig også et sensibilisator-konjugat som defineret i krav 36.
5 Ifølge den foreliggende opfindelse beskrives specifik ke bindingsbestemmelser, hvorved der anvendes en sensibili-sator som mærkning. Når sensibilisatoren bindes til et specifikt bindende materiale, som anvendes i en specifik bindingsreaktion ved en bestemmelse for tilstedeværelse af en 10 analyt i en prøve, kan signalet dannet som resultat af vekselvirkningen mellem sensibilisatoren og en anden forbindelse korreleres til tilstedeværelsen eller mængden af analyt i prøven.
Da sensibilisatoren kan returneres til den oprindelige 15 tilstand og således gøres tilgængelig for en anden excitation, giver anvendelsen af en sensibilisator som mærkning også den yderligere fordel, at signalet fra sensibilisatoren forstærkes, hvilket forøger bestemmelsens følsomhed stærkt.
I forbindelse med beskrivelsen af den foreliggende 20 opfindelsen skal der ved udtrykket "sensibilisator" forstås enhver gruppe, som ved excitation ved bestråling med en eller flere bølgelængder eller ved anden kemisk eller fysisk stimulus (f.eks. elektronoverføring, elektrolyse, elektroluminescens eller energioverføring) vil opnå en exciteret 25 tilstand og (a) ved efterfølgende reaktion med molekylært oxygen vil danne molekylært singlet-oxygen eller (b) ved efterfølgende reaktion med et leuko-farvestof vil antage en reduceret form, som derefter kan returneres til den oprindelige tilstand ved reaktion med molekylært oxygen, hvilket 30 medfører dannelse af hydrogenperoxid.
Hver af reaktionerne af den exciterede sensibilisator vil, ved tilsætning af andre reagenser i nogle tilfælde men ikke i andre, give et detekterbart signal. For det første kan det molekylære singlet-oxygen reagere med en olefin (a) 35 til dannelse af et dioxetan, som henfalder ved opvarmning og udsender en detekterbar foton, eller (b) til dannelse 3 DK 174773 B1 af et peroxid, som enten kan (i) henfalde ved opvarmning og udsende en detekterbar foton eller (ii) oxidere et chromogen til dannelse af en detekterbar farveændring eller fluorescens. For det andet vil det oxiderede leuko-farvestof give 5 en detekterbar farveændring eller fluorescens. Hydrogen-peroxidet, som dannes ved recirkulering af den reducerede sensibilisator ved hjælp af molekylært oxygen, kan påvises som resultat af oxidationen af et chromogen, hvilket medfører en detekterbar farveændring eller fluorescens eller oxidation 10 af en kemiluminescerende gruppe, der producerer en detekterbar foton.
Opfindelsen omfatter således bestemmelsessæt, der indeholder sensibilisatorkonjugater, definer og leuko-farve-stoffer.
15 Fig. 1 på tegningen viser anvendelsen af en sensibi lisator med en olefin til dannelse af et dioxetan, der vil udsende lys ved opvarmning.
Fig. 2 viser resultaterne af en sondebestemmelse for varierende mængder af mål-DNA.
20
Beskrivelse af den foretrukne udførelsesform.
Ved udøvelsen af den foreliggende opfindelse mærkes specifikt bindende materialer med en sensibilisator. Sådanne sensibilisatorer omfatter, uden at dette skal opfattes som 25 begrænsende, de fleste farvestoffer, såsom methylenblåt, rhodamin, perylen, aromatiske carbonhydrider (f.eks. pyren), heterocykliske forbindelser, eosin, frie porphyriner, metal-loporphyriner, tetraphenylporphin, phthalocyanin og forskellige flavinderivater. Eksempler på specifikke sensibilisa-30 torer er anført i "The Chemistry of Synthetic Dyes," bind I til IX, redigeret af K. Venkataraman (Academic Press, New York 1978), og "Singlet Molecular Oxygen," redigeret af A.
Paul Schaap (Bowden, Hutchinson and Ross 1976), hvortil der henvises.
35 Særlig anvendelige sensibilisatorer omfatter: 4 DK 174773 B1
Sensibilisator Singlet-oxygen-virkningsgrad
Protoporphyrin- 177,67 dimethylester 5
Tetraphenylporphin 40,33
Methylpyrroporphin 38,38 10 Methylpyrroporphin- 53,13 ethylester
Protoporphyrin- 72,81 dinatriumsalt 15
Co-Porphyrin 40,19 Hæmatoporphyrin 6,72 20 Phthalocyanin 10,53
Sensibilisatorer kan bindes til specifikt bindende materiale ved metoder, der er velkendte inden for teknikken, 25 f.eks. ved anvendelse af en N-hydroxysuccinimidylester-linker, ved anvendelse af en diamin-linker og ved inkorporering af sensibilisatoren i en byggesten (f.eks. et nucleotid eller en aminosyre) af et specifikt bindende materiale. Metoden til at binde sensibilisatoren til det specifikt 30 bindende materiale vil afhænge af typen af specifikt bindende materiale og typen af sensibilisator, der anvendes.
Specifikt bindende materiale med tilknyttet sensibilisator (betegnet sensibilisatorkonjugat) er anvendeligt til et bredt udvalg af specifikke bindingsbestemmelser af 35 tilstedeværelsen af analyt i en prøve. Ved udtrykket "tilstedeværelse" skal der i den foreliggende beskrivelse forstås kvalitativ og/eller kvantitativ påvisning af en analyt. Sådanne bestemmelser kan være rettet mod enhver analyt, som kan påvises ved anvendelse af sensibilisatorkonjugatet i 40 forbindelse med specifikke bindingsreaktioner. Disse bestemmelser omfatter f.eks. immunobestemmelser, proteinbindingsbestemmelser og nuclemsyrehybridiseringsbestemmelser.
Ved en typisk immunobestemmelse er analytten immuno- 5 DK 174773 B1 reaktiv, og dens tilstedeværelse i en prøve kan bestemmes på grund af dens immunoreaktion med et bestemmelsesreagens.
Ved en typisk proteinbindingsbestemmelse bestemmes tilstedeværelsen af analyt i en prøve ved hjælp af den specifikke 5 bindingsreaktivitet af analytten med et bestemmelsesreagens, hvor reaktiviteten er en anden end immunoreaktivitet. Eksempler herpå omfatter enzym-substrat-genkendelse og bindingsaffiniteten af avidm til biotin. Ved en typisk nuclein-syrehybridiseringsbestemmelse bestemmes tilstedeværelsen af 10 analyt i en prøve ved en hybridiseringsreaktion af analytten med et bestemmelsesreagens. Analyt-nucleinsyre (sædvanligvis til stede som dobbeltstrenget DNA eller RNA) omdannes sædvanligvis først til en enkeltstrenget form og immobiliseres på en bærer (f.eks. nitrocellulosepapir). Analyt-nucleinsyren 15 kan alternativt underkastes elektroforese i en gelmatrix.
Den immobiliserede analyt kan derefter hybridiseres (dvs. bindes specifikt) af en komplementær nucleinsyresekvens.
De ovennævnte specifikke bindingsbestemmelser kan gennemføres ved hjælp af et stort udvalg af bestemmelses-20 metoder. Ved disse bestemmelsesmetoder anvendes et sensibi-lisatorkonjugat, som omfatter sensibilisatoren bundet til et specifikt bindende materiale. Med "specifikt bindende materiale" menes i den foreliggende beskrivelse ethvert materiale, som vil binde specifikt ved en immunoreaktion, 25 proteinbindingsreaktion, nucleinsyrehybridiseringsreaktion eller enhver anden reaktion, hvor materialet reagerer specifikt med en begrænset klasse af biologiske, biokemiske eller kemiske stoffer. I denne kategori af bestemmelser deltager sensibilisatorkonjugatet i en specifik bindingsreaktion, og 30 tilstedeværelsen af analyt i prøven er proportional med dannelsen af et eller flere specifik bindings-reaktionsprodukter indeholdende sensibilisatorkonjugatet. Bestemmelsen udføres ved at gøre det muligt for de nødvendige specifikke bindingsreaktioner at forekomme under egnede reaktionsbetm-35 gelser. Dannelsen af specifik bindings-reaktionsprodukter indeholdende sensibilisatorkonjugatet bestemmes ved at måle 6 DK 174773 B1 signalet dannet som resultat af excitationen af sådanne produkter indeholdende sensibilisatorkonjugatet eller ved at måle signalet dannet som resultat af excitationen af ikke-reageret eller delvis reageret sensibilisatorkonjugat, 5 som ikke er indeholdt i sådanne produkter.
Som typiske bestemmelsesmetoder kan nævnes sandwichbestemmelser, kompetitive bestemmelser, overfladeantigenbestemmelser, sekvensvise mætningsbestemmelser, kompetitive fortrængningsbestemmelser og "quenching"-bestemmelser.
10 Ved en typisk sandwich-metode er det specifikt bin dende materiale, hvortil sensibilisatoren bindes, i stand til specifik binding med analytten. Ved bestemmelsen anvendes yderligere en reaktant, som er i stand til specifik binding med analytten til dannelse af et reaktant-analyt-sensibilisa-15 torkonjugat-kompleks. Reaktanten kan være bundet til en fast fase, f.eks. dyppepinde, perler, rør, papirark eller polymerark. I sådanne tilfælde vil tilstedeværelsen af analyt i en prøve være proportional med signalet dannet som resultat af excitationen af sensibilisator bundet til den faste fase 20 efter tilendebringelsen af de specifikke bindingsreaktioner. Sådanne bestemmelsesmetoder er beskrevet nærmere i US patentskrift nr. 4.652.533, 4.383.031, 4.380.580 og 4.226.993, hvortil der henvises.
Ved en typisk kompetitiv metode anvendes der ved 25 bestemmelsen en reaktant, som er i stand til specifik binding til analytten til dannelse af et analyt-reaktant-kompleks og til det specifikt bindende materiale, hvortil sensibilisatoren er bundet, til dannelse af et sensibilisatorkonjugat-reaktant-kompleks. Reaktanten kan være bundet til en fast 30 fase, eller reaktionsprodukterne indeholdende reaktanten kan alternativt udfældes ved anvendelse af et andet antistof eller ved andre kendte metoder. Ved denne kompetitive metode er tilstedeværelsen af analyt "proportional", dvs. omvendt proportional, med signalet dannet som resultat af excitatio-35 nen af sensibilisator bundet til den faste fase eller i bundfaldet. En yderligere diskussion af denne bestemmelses- 7 DK 174773 B1 metode kan findes i de umiddelbart ovenfor nævnte US patent-skrifter.
Ved en anden bestemmelsesmetode kan analytten forekomme på eller være bundet til et større biologisk, biokemisk 5 eller kemisk stof. Denne type af metode illustreres af en overfladeantigen-bestemmelse. Ved denne metode er det specifikt bindende materiale i stand til specifik binding til analytten, og tilstedeværelsen af analyt er proportional med analyt-sensibilisatorkonjugat-komplekset dannet som reak-10 tionsprodukt. Dette illustreres af binding af sensibilisa-toren til et antistof, som er specifikt for et overfladeantigen på en celle. Tilstedeværelsen af celleoverfladeantigenet vil vise sig ved signalet dannet som resultat af exci-tationen af sensibilisator bundet til cellerne efter til-15 endebringelse af reaktionen. Cellerne selv kan anvendes sammen med et filtreringssystem til fraskillelse af analyt--sensibilisatorkonjugat-komplekset, som dannes på overfladen af cellerne, fra ikke-reageret sensibilisatorkonjugat. Dette er diskuteret nærmere i US patentskrift nr. 4.652.533.
20 Sensibilisatoren kan anvendes ved yderligere bestem melsesmetoder, som er kendte inden for teknikken, f.eks. sekvensvis mætning og kompetitiv fortrængning, hvor der i begge tilfælde anvendes et sensibilisatorkonjugat, hvor både (1) det specifikt bindende materiale, som sensibilisa-25 toren er bundet til, og (2) analytten bindes specifikt med en reaktant. Når der er tale om sekvensvis mætning, omsættes analytten først med reaktanten, hvorefter sensibilisatorkon-jugatet omsættes med tilbageværende ikke-omsat reaktant.
Når der er tale om kompetitiv fortrængning, fortrænger sen-30 sibilisatorkonjugatet kompetitivt analyt, som allerede er bundet til reaktanten.
Ved en typisk "quenching"-metode anvendes der ved bestemmelsen en reaktant, som er i stand til specifik binding til analytten til dannelse af et analyt-reaktant-kompleks og 35 til det specifikt bindende materiale, som sensibilisatoren er bundet til, til dannelse af et sensibilisatorkonjugat- 8 DK 174773 B1 -reaktant-kompleks. En "undertrykkende" gruppe bindes til reaktanten. Når den "undertrykkende" gruppe bringes tæt på sensibilisatoren, reducerer eller undertrykker den signalet dannet som resultat af excitationen af bundet sensibilisator 5 eller reducerer eller undertrykker overføringen af elektroner eller energi fra den exciterede sensibilisator til et mellemprodukt (dvs. molekylært oxygen eller et 1 euko-farvestof) .
Ved denne "quenching"-metode er tilstedeværelsen af analyt proportional med luminescensen af de henfaldende dioxetaner.
10 En yderligere diskussion af denne metode kan findes i US patentskrift nr. 4.220.450 og 4.277.437, hvortil der henvises .
Ved de ovenfor diskuterede bestemmelsesmetoder og ved metoderne, der diskuteres nedenfor, kan den rækkefølge, 15 i hvilken bestemmelsesreagenserne tilsættes og omsættes, variere i vidt omfang, således som det er velkendt inden for teknikken. F.eks. kan reaktanten bundet til en fast fase ved en sandwich-bestemmelse omsættes med en analyt indeholdt i en prøve, og efter denne reaktion kan den faste 20 fase indeholdende kompleksbundet analyt skilles fra den resterende prøve. Efter dette adskillelsestrin kan sensibi-lisatorkonjugatet omsættes med komplekset på den faste fase. Alternativt kan den faste fase, prøven og sensibilisatorkon-jugatet tilsættes samtidig og omsættes før adskillelsen.
25 Som et yderligere, men mindre foretrukket alternativ kan analytten i prøven og sensibilisatorkonjugatet omsættes før tilsætningen af reaktanten på den faste fase. Lignende variationer med hensyn til blandings- og reaktionstrinene er mulige ved kompetitive bestemmelsesmetoder og ved andre 30 metoder, der er kendte inden for teknikken. At "muliggøre væsentlig dannelse under egnede betingelser" af specifikke bindingsreaktionsprodukter skal i den foreliggende beskrivelse omfatte de mange forskellige variationer med hensyn til rækkefølgen for tilsætning og omsætning af bestemmelses-35 reagenser.
De ovenfor beskrevne bestemmelser kan være heterogene 9 DK 174773 B1 eller homogene. Ved heterogene bestemmelser skilles reaktionsprodukterne, hvis dannelse er proportional med tilstedeværelsen af analyt i prøven, fra andre produkter af reaktionen. Adskillelsen kan opnås ved enhver metode, f.eks.
5 fraskillelse af en væskefase fra en fast fase ved filtrering, mikrofiltrering, dobbelt antistoffældning, centrifugering, størrelsesudelukkelseschromatografi, fjernelse af en fast fase (f.eks. en dyppepind) fra en prøveopløsning eller elek-troforese. Ved f.eks. en sandwich-bestemmelse skilles reak-10 tant-analyt-sensibilisatorkonjugat-komplekset fra ikke-omsat sensibilisatorkonjugat. Ved en overfladeantigen-bestemmelse skilles analyt-sensibilisatorkonjugat-komplekset fra ikke--reageret sensibilisatorkonjugat. Ved en kompetitiv bestemmelse skilles reaktant-sensibilisatorkonjugat-komplekset 15 fra ikke-reageret sensibilisatorkonjugat. Ved en sekvensvis mætningsbestemmelse og ved en kompetitiv fortrængningsbestemmelse skilles reaktant-sensibilisatorkonjugat-komplekset fra ikke-reageret sensibilisatorkonjugat. Alternativt fraskilles reaktionsprodukterne ikke ved homogene bestemmelser.
20 Efter at bestemmelsesreagenserne har fået lov at reagere, kan signalet måles fra den samlede bestemmelsesblanding, hvad enten denne blanding er i opløsning, på en fast fase eller fordelt mellem forskellige membranlag på en dyppepind eller anden fast bærer. "Quenching"-bestemmelsen illustrerer 25 en kompleks homogen bestemmelse, ved hvilken fraskillelse er unødvendig. Det forudses, at hver kategori af bestemmelsesmetoder kan give anledning til enten heterogene eller homogene metoder.
Et andet eksempel på en homogen bestemmelse er il-30 lustreret i EP patentansøgning nr. 82303699.1, offentliggjort den 16. oktober 1985 (offentliggørelsesnummer 70.685), hvortil der henvises. I dette skrift beskrives en homogen hy-bridiseringsbestemmelse, hvor der anvendes to sonder, hvor den ene er mærket med en kemiluminescerende gruppe, og den 35 anden er mærket med en absorber/emitter-gruppe. Bestemmelsen kan gennemføres i opløsning, uden at det er nødvendigt at 10 DK 174773 B1 anvende nogen immobiliseringsprocedurer. Ved den foreliggende opfindelse vælges fortrinsvis to strenge af DNA, der aflæses fra modsatte ender. En streng er fortrinsvis mærket med en kemiluminescerende gruppe, hvis exciterede tilstand giver et 5 højt fluorescenskvantum-udbytte. Den anden streng er fortrinsvis mærket med en sensibilisator, som exciteres af den anden mærkning. Alternativt kan den kemiluminescerende gruppe erstattes med forbindelse indeholdende et tungt atom (I eller Br) , som ved krydsning mellem systemerne vil omdanne 10 sensibilisatormærkningen på den anden streng fra en svag til en stærk sensibilisator, når en sådan forbindelse indeholdende et tungt atom er tæt på sensibilisatormærkningen.
Udover det, der er anført ovenfor, kan sensibilisa-tormærkninger anvendes til DNA-sekvensbestemmelse. Ved eksi-15 sterende sekvensbestemmelser af DNA anvendes fire forskellige fluorescerende farvestoffer, et til hver af reaktionerne med A, T, C og G. Ved den foreliggende opfindelse kan der anvendes fire sensibilisatorer, der hver har en forskellig excitationsbølgelængde, sammen med fire filtre til sekvensvis 20 excitering af den rette sensibilisator.
Ved bestemmelser, hvor der anvendes et sensibilisator-konjugat, kan tilstedeværelsen af analyt påvises ved excitation af sensibilisatoren med den rette bestråling eller anden stimulus (f.eks. elektronoverføring, elektrolyse, 25 elektroluminescens eller energioverføring) . Den exciterede sensibilisator vil derefter reagere med et "mellemprodukt" (dvs. molekylært oxygen eller et leuko-farvestof). De resulterende produkter og yderligere reaktioner afhænger af, hvilke mellemprodukter, der anvendes.
30 Når molekylært oxygen er mellemproduktet, dannes der molekylært singlet-oxygen, og sensibilisatoren vender tilbage til den oprindelige ikke-exciterede tilstand. Det molekylære singlet-oxygen vil derefter reagere med en olefin til dannelse af enten et dioxetan eller et peroxid. En olefin er 35 karakteriseret ved den almene formel : 11 DK 174773 B1
Rlv^_^R3 R2^ V'v'R4 5 hvori Ri, R2, R3 og R4 er enhver gruppe. RI, R2, R3 og/eller R4 kan i nogle tilfælde være bundet til hinanden til dannelse af ringstrukturer eller ringlignende strukturer, som f.eks. i strukturerne (1) og (4) nedenfor·.
10 cco a> 20 CH, o (I) H)
Karakteren af carbonatomet i hver af RI, R2, R3 og R4, som 25 er tættest på dobbeltbindingen ("det tilstødende carbonatom') i en given olefin vil afgøre, om der dannes et dioxetan eller et peroxid efter omsætning af olefinen med molekylært singlet-oxygen. Hvis alle de tilstødende carbonatomer er (a) et brohoved eller (b) ikke bærer nogen hydrogenatomer, 30 vil der blive dannet et dioxetan, f.eks.
12 DK 174773 B1 sensibilisator* sensibilisator ^ ! X X’ I ? 10 CHJ ch3 (1) (2)
Ved opvarmning henfalder dioxetanet under dannelse af en 15 detekterbar foton, f.eks.
ίΓΊ Γ-^7 ':czan varme 25 ^ Ls (2) (3)
Substituerede definer, som har elektrondonerende grupper 30 blandt deres substituenter, foretrækkes til udøvelse af den foreliggende opfindelse, fordi de danner dioxetaner med forøget kvantumudbytte ved henfald. Fortrinsvis er Ri og R2 og/eller R3 og R4 forbundet til dannelse af en ringgruppe, som er fluorescerende. F.eks. danner RI og R2 i strukturen 35 (1) ovenfor et N-methyl-aeridan. Tilstedeværelsen af en fluorescerende gruppe "ved den ene ende" af olefinen vil 13 DK 174773 B1 føre til en yderligere forøgelse af kvantumudbyteet fra det resulterende dioxetan.
Hvis et eller flere af de tilstødende carbonatomer (a) ikke er et brohoved og (b) bærer mindst ét hydrogenatom, 5 vil der blive dannet et peroxid. Ved opvarmning vil dioxeta-net også henfalde og danne en detekterbar (omend svag) emission af fotoner. Alternativt kan peroxidet anvendes til at oxidere et chromogen til dannelse af en detekterbar farveændring eller fluorescens.
10 Når et leuko-farvestof er mellemproduktet, reduceres den exciterede sensibilisator af leuko-farvestoffet. Det oxiderede leuko-farvestof bliver synligt og kan detekteres ved hjælp af den fremkomne farveændring eller fluorescens.
Den reducerede sensibilisator kan også omsættes med moleky-15 lært oxygen til dannelse af hydrogenperoxid og returnering af sensibilisatoren til den oprindelige ikke-exciterede tilstand. Hydrogenperoxidet kan anvendes til at oxidere et chromogen til dannelse af en detekterbar farveændring eller fluorescens eller til at oxidere en kemiluminescerende gruppe 20 til dannelse af en detekterbar foton. Leuko-farvestoffer er farvestoffer (f.eks. hydroxyanthraquinoner og methylenblåt), som er farveløse i deres reducerede former og bliver farvede ved oxidation. Eksempler på leuko-farvestoffer er anført i "The Chemistry of Synthetic Dyes", bind I til IX, redigeret 25 af K. Venkataraman (Academic Press, New York 1978) , og "Singlet Molecular Oxygen," redigeret af A. Paul Schaap (Bowden, Hutchinson and Ross 1976), hvortil der henvises.
Da mængden af sensibilisator, der stimuleres, kan korreleres til tilstedeværelsen af analyt, kan signalet 30 (dvs. fotoner eller farveændring eller fluorescens) dannet ved de ovenfor diskuterede reaktioner også korreleres til tilstedeværelsen eller mængden af analyt i prøven.
"Chromogener”, som giver en farveændring eller fluorescens ved oxidation med peroxider, er velkendte inden for 35 teknikken. Egnede "chromogener", som giver en farveændring, omfatter f.eks. benzidin og derivater af benzidin. Egnede 14 DK 174773 B1 "chromogener", som giver fluorescens, omfatter f.eks. fluorescein (dvs. dihydrofluorescein) og derivater deraf.
"At muliggøre under egnede betingelser" skal uden begrænsninger omfatte, hvor det er relevant, fraskillelsen 5 af de specifikke bindingsreaktionsprodukter (hvis dannelse er proportional med tilstedeværelsen af analyt i prøven) fra andre reaktionsprodukter, excitering af sensibilisator-konjugatet indeholdt i ethvert specifikt bindingsreaktions -produkt, tilsætning af andre reagenser (dvs. olefin, leuko-10 farvestof, chromogen eller kemiluminescerende gruppe) og/el-ler opvarmning af dioxetanet eller peroxidet til fremkaldelse af henfald, måling af en farveændring eller fluorescens ved enhver metode (f.eks. visuelt, ved absorption, ved refleksion eller ved fluorescens).
15
Eksempel 1
Til dannelse af et sensibilisatorkonjugat bindes pyrensmørsyre til det 5'-terminale phosphat af et kinasebe-handlet syntetisk oligonucleotid (20 baser, sekvens: 20 5' -TTCAATCATGCGAAACGATC-3') via en hexandiamin-linker som vist nedenfor: 25 is DK 174773 B1 o 0
II
oVigonucteotid — 5'—O — P — O “
5 I
o-
IMIDAZOL-CDI
T
’o o
II
oligonucleotid —5’—O— P— N π 1 l
Ό- ^ J
15 NHjCCH^gNHjj
T
o
II
oligonucleotid —— P— NHCC^JgNHj 20 O" / 0
Γ-ϊ II
N-q-CCCH,), odu 25 yp
T
0 0
30 II II
oligonucleotid —5‘—O—P—NHCCr^gNH- CCCl·^)^ *' o6u løg 35 16 DK 174773 B1
Oligonucleotidet syntetiseres på et automatiseret synteseapparat (tilgængeligt i handelen fra Applied Biosystems, Foster City, CA 94404, Model 380B).
Oligonucleotidet (2,5 μφ omdannes til 5'-phosphor-5 imidazolidet ved behandling med 0,1 M l-ethyl-3,3-dimethyl-aminopropyl-carbodiimid (CDI) i 0,1 Μ 1-methylimidazol-puffer ved en pH-værdi på 7,8 i 1 time ved stuetemperatur under kraftig omrystning. Produktet omdannes til 51-hexandiamin--additionsproduktet ved behandling med 0,25 M hexandiamin 10 ved en pH-værdi på 7,8 i 1 time ved 50°C.
Det pyren-mærkede (sensibilisator-mærkede) oligonu-cleotid dannes ved at omsætte 5'-hexandiamin-additionspro-duktet med 0,25 M pyrensmørsyre som dens N-hydroxysuccini-midylester i 1-methylimidazolpuffer ved en pH-værdi på 7,8 15 ved stuetemperatur.
Olefinen 9-(adamantyliden)-N-methyl-acridan (struktur (1) ovenfor) syntetiseres på følgende måde. N-methyl-acridan (15,2 g, 0,074 mol} og phosphorpentasulfid (10,3 g, 0,046 mol) blandes i tørt pyridm (470 ml) og tilbagesvales i 1 20 time. Der opsamles røde krystaller efter afkøling af opløsningen. Omkrystallisation fra xylen giver 12,5 g N-methyl-acridonethion.
Adamantanon-p-tolylhydrazon og triphenylphosphin i dimethylacetamid (DMA) sættes til tørt natriumhydrid, og 25 blandingen opvarmes til 120°C i 20 minutter. N-methyl-acri-donethion sættes til reaktionsblandingen, og denne blanding tilbagesvales i 2 timer. Opløsningen afkøles, og det opsam-lede faste stof omkrystalliseres fra xylen. Det fremkomne produkt chromatograferes på silicagel, idet der elueres med 30 toluen. Den første fraktion (R^ 0,8) opsamles. Toluenet af dampes, og det fremkomne 9-(adamantylidm) -N-methyl-acridan omkrystalliseres fra acetone.
Ved gennemførelsen af en nucleinsyrehybridiserings-bestemmelse immobiliseres DNA på polyamidfiltre (tilgængelige 35 i handelen som "Hybond" fra Amersham, U.K.) ved metoder, der er kendte inden for teknikken. Et komplementært oligo- 17 DK 174773 B1 nucleotid {"Sorneo") og et ikke-komplementært oligonucleotid (dvs. kontrolnucleotid) ("pAT 153") anvendes som mål ved en standard Southern-blot-procedure under anvendelse af det sensibilisator-mærkede oligonucleotid som sonde. Mål-oligo-5 nucleotiderne bestemmes ved koncentrationer på 0,2 μg, 0,02 jug og 0,002 μg. Prøven koncentreres i en plet på 2 x 2 cm. Hybridiseringen gennemføres med 200 Mg/ml sensibilisator-mærket oligonucleotid ved 37°C i 2 timer i hybridiserings-puffer (6x SSC, 0,5% SDS, lOOx Denhardts) , og vaskningen 10 gennemføres på sædvanlig måde.
Efter fuldstændig hybridisering og vaskning sættes 50 (il 1 x 10“δ M 9-(adamantyliden) -N-methyl-acndan i di-chlortoluen til hver hybndiseringsplet. Hver plet bestråles med en ultraviolet strålingskilde (150 W xenon-buelampe) i 15 10 minutter i nærværelse af omgivende molekylært oxygen.
Halvdelen af pletterne opvarmes også til 100°C umiddelbart efter bestrålingen for at fremkalde henfald af dioxetanet, der dannes ved bestrålingen.
Luminescensen af de henfaldende dioxetaner måles ved 20 anvendelse af et fotoforstærkerrør (tilgængeligt i handelen fra Thorn EMI, type 9813 QB), som holdes ved 0°C i et ter-moelektrisk afkølet standardhus. Prøverne, der skal måles, anbringes i et lystæt kammer på en opvarmningsblok. Et termoelement monteret i varmepladen muliggør temperaturkontrol 25 (+ 0,1°C i området 30-300°C) af varmeelementerne direkte under varmepladen. Prøvecellen er også lukket hermetisk for at muliggøre måling under den ønskede atmosfære.
De opnåede luminescensmålinger er sammenfattet i tabel I og II.
30 35 18 DK 174773 B1
Tabel I
Luminescens ved stuetemperatur 5 Luminescens3^
Koncentrat-ion)·3) "Sorneo" "pAT 15311 0,2 Mg 9,6845 5,7100 10 0,02 Mg 8,8377 8,5845 0,002 Mg 16,450 17,151 a) tællinger x 102,- baggrund (procedure uden anvendelse af sonde) 5,6092 x 102 15 b) af mål-oligonucleotid
Tabel II
Luminescens ved 100°C
20 Luminescens3)
Koncentrat ion^) "Sorneo11 npAT 153" 25 0,2 Mg 6253,5 498,57 0,02 m9 23,905 17,023 0,002 M9 658,14 136,08 a) tællinger x 102; baggrund (procedure uden anvendelse af 30 sonde) 14,933 x 102 b) af mål-oligonucleotid
Selvom resultaterne er opnået ved en rå og uforfinet bestemmelsesprocedure, giver opvarmningen i alle tilfælde et 35 stærkere signal, og det komplementære mål giver flere tællinger end kontrolmålet. Metoder til forfining af denne bestemmelsesprocedure (f.eks. bedre bortvaskning af hver type af reagens, tilsætning af inhibitorer for at nedsætte autooxidation af olefinen, anvendelse af mere effektive 40 sensibilisatorer, anvendelse af de rette filtre for den primære bølgelængde, der absorberes af sensibilisatoren, afkøling af pletten, medens den bestråles, regulering og/el- DK 174773 B1 19 ler optimering af opvarmningshastigheden, anvendelse af mere reaktive olefiner, anvendelse af olefiner, der danner dioxe-taner, som giver højere lysudbytte, og anvendelse af opløsningsmidler for at fremme vandring af singlet-oxygen) vil 5 være nærliggende for en fagmand.
Eksempel 2
Sonde-bestemmelsen ifølge det foregående eksempel kan anvendes med porphyrin-mærkede oligonucleotider. Det 10 porphyrin-mærkede (sensibilisator-mærkede) oligonucleotid kan dannes ved anvendelse af N6-(6-aminohexyl)-dATP (i det følgende betegnet AHdATP), der er vist nedenfor: NKICH^NH^
, . . ,_A
-.-»-ο-f-o-i-oa/ \J> °* o- «Λ ” DNA underkastes en nick-translation på kendt måde i nærværelse af AHdATP til dannelse af strenge af DNA, der har 25 frie funktionelle NHj-grupper. Dette produkt omsættes med ΝΗΞ-ester-porphyrin-konjugat i nærværelse af DMF/H2O på kendt måde til dannelse af strenge af DNA, hvortil der er bundet: 30 0
II
-NHC-porphyrin-mærkning 35 Eksempel 3
Sonde-bestemmelsen ifølge de foregående eksempler gentages under anvendelse af protoporphyrin-dinatriumsalt 20 DK 174773 B1 som mærkning. 5 μΐ af dCTP, dGTP og dTTP (20 μΜ) sættes til 1 μΐ prøve-DNA (pUG), 3 μΐ 0,4 mM AHdATP og 10 μΐ H20. Efter kort blanding tilsættes 5 μΐ DNA-Polymerase I. Blandingen inkuberes derefter ved 15°C i 60 minutter. Inkorporeringen 5 overvåges på kendt måde. DNA, som er mærket med aminohexal-gruppen, skilles derefter fra ikke-inkorporerede nucleotider ved udelukkelseschromatografi på en "Sephadex G-50"-søjle, idet der elueres med 1 x 5SC indeholdende 0,1% SDS. Fraktioner opsamles, hvorefter der udfældes med ethanol. Efter 10 omsætning ifølge eksempel 2 med NHS-ester-protoporphyrin gennemføres sondebestemmelsen ifølge eksempel 1. DNA im-mobiliseres på polyamidfiltre. Komplementært oligonucleotid anvendes som mål ved en standard Southern blot-procedure under anvendelse af det sensibilisator-mærkede oligonucleotid 15 som sonde ifølge eksempel 1. De resulterende pletter opvarmes til 100°C umiddelbart efter bestråling for at fremkalde henfald af dioxetanet dannet ved bestrålingen.
Tabel III
20 Luminescens ved 100°C i 1 minut
Koncentration Tællinger ved Tællinger ved af mål første bestemmelse anden bestemmelse (tophøjde) (tophøjde) 25 - 100 μg 1,58 2,67 10 μg 1,02 1,65 1 μg 0,69 1,03 30 0,1 μg 0,49 0,88 0,01 μg 0,37 0,74 blindprøve 0,16 0,059
Eksempel 4 35 Eksempel 3 gentages under anvendelse af protopor- phyrin-dinatriumsalt og 32P som samtidige mærkestoffer for at sammenligne følsomheden af bestemmelsen ved anvendelse af disse to mærkestoffer. 1 μΐ 32P-dCTP sættes til blandingen fra eksempel 3 før tilsætningen af 5 μΐ DNA-Polymerase I.
40 Bestemmelsen gennemføres med følgende koncentrationer af 21 DK 174773 B1 mål-DNA: 100 μg 10 μg 1 μg 5 0,1 0,01 μg 0,005 μg blind-prøve 10 Resultaterne vist i fig. 2 for opvarmning af pletterne til 100°C i 1 minut viser en detektionsgrænse på 0,005 μg mål-DNA ved den ovenfor beskrevne bestemmelse. Alternativt, når der er tale om 32P-mærkmng, udviser en 24 timers eksponeringstid i et standardfilmdetektionssystem en sammenlignelig 15 detektionsgrænse.
I dette eksempel 4 gøres der ikke noget forsøg på at nedsætte baggrunden, når der er tale om sensibilisator-mærkning. Sensibilisatorer kan udvælges til følsomhed for visse bølgelængder, der er forskellige fra excitationsbøl-20 gelængden for baggrundsmaterialerne, herunder dannelsen af generelle peroxider. F.eks. kan methylenblåt eller pyren anvendes som sensibilisator, og der kan inkorporeres et excitationsfilter, således at kun bølgelængder, som exciterer disse sensibilisatorer, vil medføre dannelse af singlet-25 oxygen. Opvarmning af membranen kan give baggrundslys fra opvarmning af generelle peroxider. Fremkaldelse af henfald af dioxetaner ved lavere sønderdelingstemperaturer vil hjælpe til med at nedsætte baggrundsaflæsningerne, især når sådanne temperaturer er meget lavere end en temperatur, som bevirker 30 baggrundslys. Endelig bør olefinen vælges således, at der dannes et dioxetan, som emitterer ved en anden bølgelængde end baggrunden. Et emissionsfilter kan da udvælges til at reducere baggrunden. Det forudses, at disse og andre forbedringer vil forøge følsomheden af bestemmelserne med an-35 vendelse af sensibilisator-mærkning væsentligt.
På baggrund af det ovenfor anførte vil det være nær- 22 DK 174773 B1 liggende for en fagmand, at der kan foretages forskellige modifikationer af de ovenfor beskrevne metoder, materialer og genstande inden for opfindelsens rammer. Følgelig kan opfindelsen udøves i andre specifikke udførelsesformer, 5 uden at der afviges fra dens ånd og væsentlige karakteristika. Foretrukne udførelsesformer og eksempler skal derfor i alle henseender opfattes som illustrative og ikke begrænsende, idet opfindelsens omfang er angivet i kravene snarere end af det foregående, og alle ændringer, som kommer inden 10 for kravenes betydning og ækvivalensområde, skal derfor være omfattet.
Claims (45)
1. Specifik bindingsbestemmelse for tilstedeværelse af en analyt i en prøve, hvorved (i) der ved bestemmelsen anvendes et sensibilisatorkonjugat omfattende en sensibili- 5 sator bundet til et specifikt bindende materiale, hvorved sensibilisatoren er en gruppe, der bringes i en exciteret tilstand ved bestråling eller ved kemisk eller fysisk stimu-. lus, således at den kan reagere med (a) molekylært oxygen til dannelse af molekylært singlet-oxygen eller (b) et leuko-10 -farvestof til dannelse af en reduceret form, der kan oxideres til den oprindelige tilstand ved reaktion med oxygen, hvorved der dannes hydrogenperoxid, og (ii) tilstedeværelsen af analyt i prøven er proportional med dannelsen af specifik bindings-reaktionsprodukter indeholdende sensibilisatorkonju-15 gatet, hvilken bestemmelse omfatter: at der under egnede betingelser muliggøres væsentlig dannelse af de nævnte specifik bindings-reaktionsprodukter indeholdende sensibilisatorkonjugatet, at der under egnede betingelser muliggøres (A) exci-20 tation af (i) sensibilisator indeholdt i de nævnte specifik bindings-reaktionsprodukter indeholdende sensibilisatorkonjugatet eller (ii) sensibilisator indeholdt i sensibilisatorkonjugat, der ikke er indeholdt i de nævnte specifik bindings-reaktionsprodukter, og (B) omsætning af (i) exciteret 25 sensibilisator indeholdt i de nævnte specifik bindings-reaktionsprodukter indeholdende sensibilisatorkonjugatet eller (ii) exciteret sensibilisator indeholdt i sensibilisatorkonjugat, der ikke er indeholdt i de nævnte specifik bindingsreaktionsprodukter med molekylært oxygen til dannelse af 30 molekylært singlet-oxygen, hvilket molekylære singlet-oxygen er egnet til reaktion til dannelse af et detekterbart signal, og måling af det detekterbare signal.
2. Specifik bindingsbestemmelse ifølge krav 1, hvorved 35 det specifikt bindende materiale er i stand til specifik binding med analytten, og det nævnte ene eller de nævnte 24 DK 174773 B1 flere specifik bindings-reaktionsprodukter er et analyt-sen-sibilisatorkonjugat-kompleks.
3. Specifik bindingsbestemmelse ifølge krav 1, hvorved der ved bestemmelsen yderligere anvendes en reaktant, som 5 er i stand til specifik binding (i) med analytten til dannelse af et analyt-reaktant-kompleks og (ii) med det specifikt bindende materiale til dannelse af et sensibilisatorkon-3ugat-reaktant-kompleks, og hvorved det nævnte ene eller de nævnte flere specifik bindings-reaktionsprodukter er sen- 10 sibilisatorkonjugat-reaktant-komplekset.
4. Specifik bindingsbestemmelse ifølge krav 1, hvorved det specifikt bindende materiale er i stand til specifik binding til analytten, og der ved bestemmelsen yderligere anvendes en reaktant, som er i stand til specifik binding til 15 analytten til dannelse af et reaktant-analyt-sensibilisator-kon]ugat-kompleks, og hvorved det nævnte ene eller de nævnte flere specifik bindings-reaktionsprodukter er reaktant-ana-lyt-sensibilisatorkonjugat-komplekset.
5. Specifik bindingsbestemmelse ifølge krav l, hvorved 20 sensibilisatoren er valgt blandt et farvestof, et porphyrin, et metalloporphyrin, et aromatisk carbonhydrid, en hetero-cylisk forbindelse og et flavinderivat.
6. Specifik bindingsbestemmelse ifølge krav 5, hvorved sensibilisatoren er pyren eller methylenblåt.
7. Specifik bindingsbestemmelse ifølge krav 5, hvorved porphyrinet er protoporphvrin-dimethylester, protoporphyrin--dinatriumsalt, methylpyrroporphin-ethylester, methylpyr-roporphin, tetraphenylporphin, co-porphyrin eller hæmatopor-phyrin.
8. Specifik bindingsbestemmelse ifølge krav 5, hvorved sensibilisatoren er phthalocyanin, hæmin eller rhodamin.
9. Specifik bindingsbestemmelse ifølge krav l, hvorved det molekylære singlet-oxygen reagerer med en olefin til dannelse af en gruppe valgt blandt et dioxetan og et peroxid.
10. Specifik bindingsbestemmelse ifølge krav 9, hvor ved den nævnte gruppe henfalder ved opvarmning og danner det 25 DK 174773 B1 detekterbare signal som en foton.
11. Specifik bindingsbestemmelse ifølge krav 9, hvorved peroxidet oxiderer et chromogen til dannelse af det detekterbare signal som en farveændring eller fluorescens 5 af chromogenet.
12. Specifik bindingsbestemmelse ifølge krav 9, hvorved olefinen er en substitueret olefin.
13. Specifik bindingsbestemmelse ifølge krav 12, hvorved den substituerede olefin har mindst én substituent, 10 som er en elektrondonerende gruppe.
14. Specifik bindingsbestemmelse ifølge krav 12, hvorved mindst to af substituenterne på den substituerede olefin er forbundet til dannelse af en ringgruppe, som er fluorescerende.
15. Specifik bindingsbestemmelse ifølge krav 14, hvor den substituerede olefin har formlen: 20 f i 25 T CH3 30 og ringgruppen er en N-methyl-acridan-gruppe.
16. Specifik bindingsbestemmelse for tilstedeværelse af en analyt i en prøve, hvorved (i) der ved bestemmelsen 35 anvendes et sensibilisatorkonjugat omfattende en sensibili-sator bundet til et specifikt bindende materiale, hvorved 26 DK 174773 B1 sensibilisatoren er en gruppe, der bringes i en exciteret tilstand ved bestråling eller ved kemisk eller fysisk stimulus, således at den kan reagere med (a) molekylært oxygen til dannelse af molekylært singlet-oxygen eller (b) et leuko-5 -farvestof til dannelse af en reduceret form, der kan oxideres til den oprindelige tilstand ved reaktion med oxygen, hvorved der dannes hydrogenperoxid, og (ii) tilstedeværelsen af analyt i prøven er proportional med dannelsen af et eller flere specifik bindings-reaktionsprodukter indeholdende 10 sensibilisatorkonjugatet, og bestemmelsen omfatter: at der under egnede betingelser muliggøres væsentlig dannelse af de nævnte specifik bindings-reaktionsprodukter indeholdende sensibilisatorkonjugatet, at der under egnede betingelser muliggøres (A) exci-15 tation af (i) sensibilisator indeholdt i de nævnte specifik bindings-reaktionsprodukter indeholdende sensibilisatorkonjugatet eller (ii) sensibilisator indeholdt i sensibilisator-konjugat, der ikke er indeholdt i de nævnte specifik bindings-reaktionsprodukter, og (B) reaktion af (i) exciteret 20 sensibilisator indeholdt i de nævnte specifik bindings-reaktionsprodukter indeholdende sensibilisatorkonjugatet eller (ii) exciteret sensibilisator indeholdt i sensibilisatorkon-jugat, der ikke er indeholdt i de nævnte specifik bindingsreaktionsprodukter, med et leuko-farvestof til dannelse af 25 et detekterbart signal, og måling af det detekterbare signal.
17. Specifik bindingsbestemmelse ifølge krav 16, hvor det specifikt bindende materiale er i stand til specifik binding til analytten, og de nævnte specifik bindings-reak- 30 tionsprodukter er et analyt-sensibilisatorkonjugat-kompleks.
18. Specifik bindingsbestemmelse ifølge krav 16, hvorved der ved bestemmelsen yderligere anvendes en reaktant, som er i stand til specifik binding (i) til analytten til dannelse af et analyt-reaktant-kompleks og (ii) til det 35 specifikt bindende materiale til dannelse af et sensibilisa-torkonjugat-reaktant-kompleks, og hvorved de nævnte specifik 27 DK 174773 B1 bindings-reaktionsprodukter er sensibilisatorkonjugat-reaktant -komplekse c .
19. Specifik bindingsbestemmelse ifølge krav 16, hvorved det specifikt bindende materiale er i stand til 5 specifik binding til analytten, og der ved bestemmelsen yderligere anvendes en reaktant, der er i stand til specifik binding til analytten til dannelse af et reaktant-analyt-• sensibilisatorkonjugat-kompleks, og hvorved de nævnte speci fik bindings-reaktionsprodukter er reaktant-analyt-sensibili- 10 satorkonjugat-komplekset.
20. Specifik bindingsbestemmelse ifølge krav 16, hvorved sensibilisatoren er valgt blandt et farvestof, et porphyrin, et metalloporphyrin, et aromatisk carbonhydrid, en heterocyclisk forbindelse og et flavinderivat.
21. Specifik bindingsbestemmelse ifølge krav 20, hvorved sensibilisatoren er pyren eller methylenblåt.
22. Specifik bindingsbestemmelse ifølge krav 20, hvorved porphyrinet er protoporphyrin-dimethylester, protoporphyrin -dinat nums al t , met hylpyr roporphin-ethy lester, 20 methylpyrroporphin, tetraphenylporphin, co-porphvrin eller hæmatoporphyrin.
23. Specifik bindingsbestemmelse ifølge krav 20, hvorved sensibilisatoren er phthalocyanin, hæmin eller rho- damin.
23 DK 174773 B1
24. Specifik bindingsbestemmelse ifølge krav 16, hvor leuko-farvestoffet oxideres til dannelse af det detek-terbare signal som en farveændring eller fluorescens af leuko-farvestoffet.
25. Specifik bindingsbestemmelse ifølge krav 16, 30 hvorved den exciterede sensibilisator reduceres af leuko- farvestoffet og derefter oxideres ved reaktion med molekylært oxygen til dannelse af hydrogenperoxid.
26. Specifik bindingsbestemmelse ifølge krav 25, hvorved hydrogenperoxidet oxiderer et chromogen til dannelse 35 af det detekterbare signal som en farveændring eller fluorescens af chromogenet. 28 DK 174773 B1
27. Specifik bindingsbestemmelse ifølge krav 25, hvorved hydrogenperoxidet oxiderer en kemiluminescerende gruppe til dannelse af det detekterbare signal som en foton.
28. Specifik bindings-bestemmelsessæt omfattende: 5 en første beholder indeholdende et sensibilisatorkon- jugat, hvor sensibilisatorkonjugatet omfatter en sensibili-sator bundet til et specifikt bindende materiale, hvorved sensibilisatoren er en gruppe, der bringes i en exciteret tilstand ved bestråling eller ved kemisk eller fysisk stimu- 10 lus, således at den kan reagere med (a) molekylært oxygen til dannelse af molekylært singlet-oxygen eller (b) et leuko-- farvestof til dannelse af en reduceret form, der kan oxideres til den oprindelige tilstand ved reaktion med oxygen, hvorved der dannes hydrogenperoxid, og 15 en anden beholder indeholdende en olefin eller et leuko-farvestof.
29. Specifik bindings-bestemmelsessæt ifølge krav 28, hvorved sensibilisatoren er valgt blandt et farvestof, et porphyrin, et metalloporphyrin, et aromatisk carbonhyrid 20 og et flavinderivat.
30. Specifik bindings-bestemmelsessæt ifølge krav 28, hvorved den anden beholder indeholder en olefin.
31. Specifik bindings-bestemmelsessæt ifølge krav 30, hvorved olefinen er en substitueret olefin.
32. Specifik bindings-bestemmelsessæt ifølge krav 31, hvorved den substituerede olefin har mindst én substituent, som er en elektrondonerende gruppe.
33. Specifik bindings-bestemmelsessæt ifølge krav 31, hvorved mindst to af substituenterne på den substituerede 30 olefin er forbundet til dannelse af en ringgruppe, som er fluorescerende.
34. Specifik bindmgs-bestemmelsessæt ifølge krav 33, hvorved den substituerede olefin har formlen: 29 DK 174773 B1 [ΓΊ iW CHj
35. Specifik bindings-bestemmelsessæt ifølge krav 28, hvorved den anden beholder indeholder et leuko-farvestof.
36. Sensibilisatorkonjugat, omfattende en sensibili- sator bundet til et specifikt bindende materiale, hvorved sensibilisatoren er en gruppe, der bringes i en exciteret tilstand ved bestråling eller ved kemisk eller fysisk stimulus, således at den kan reagere med (a) molekylært oxygen 20 til dannelse af molekylært singlet-oxygen eller (b) et leuko-- farvestof til dannelse af en reduceret form, der kan oxideres til den oprindelige tilstand ved reaktion med oxygen, hvorved der dannes hydrogenperoxid.
37. Sensibilisatorkonjugat ifølge krav 36, hvorved 25 sensibilisatoren er valgt blandt et farvestof, et porphyrin, et metalloporphyrin, et aromatisk carbonhydrid, en heterocyc-lisk forbindelse og et flavinderivat.
38. Sensibilisatorkonjugat ifølge 37, hvorved sensibilisatoren er pyren eller methylenblåt.
39. Sensibilisatorkonjugat ifølge krav 37, hvorved sensibilisatoren er protoporphyrin-dimethylester, protopor-phyrin-dinatriumsalt, methylpyrroporphin-ethylester, methyl-pyrroporphin, tetraphenylporphm, co-porphyrin eller hæma-toporphyrin.
40. Sensibilisatorkonjugat ifølge krav 37, hvorved sensibilisatoren er phthalocyamn, hæmin eller rhodamm. 30 DK 174773 B1
41. Sensibilisatorkonjugat ifølge krav 36, hvorved det specifikt bindende materiale bindes specifikt til enten A, T, C eller G.
42. Sensibilisatorkonjugat ifølge krav 36, hvorved 5 det specifikt bindende materiale bindes specifikt til et polynucleotidsegment.
43. Sensibilisatorkonjugat ifølge krav 36, hvorved det specifikt bindende materiale bindes specifikt til protein eller et proteinkonjugat.
44. Sensibilisatorkonjugat ifølge krav 36, hvorved det specifikke materiale er et antistof eller omfatter et antistoffragment.
45. Specifik bindingsbestemmelse ifølge krav 1 eller 16, hvorved sensibilisatorkonjugatet omfatter en sensibili-15 sator bundet til et første enkeltstrenget polynucleotidseg-ment, og der ved bestemmelsen yderligere anvendes et konjugat med en kemiluminescerende gruppe omfattende en kemilumine-scerende gruppe bundet til et andet enkeltstrenget polynu-cleotidsegment, idet det første polynucleotidsegment og det 20 andet polynucleotidsegment er komplementære til gensidigt eksklusive dele af et enkeltstrenget mål-polynucleotid, således at den kemiluminescerende gruppe og sensibilisatoren efter hybndisering med et enkeltstrenget mål-polynucleotid er tilstrækkelig tæt på hinanden til at muliggøre energiover-25 føring fra den kemiluminescerende gruppe til excitering af sensibilisatoren.
Applications Claiming Priority (6)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US20405588A | 1988-06-08 | 1988-06-08 | |
| US20405588 | 1988-06-08 | ||
| US36018889A | 1989-06-01 | 1989-06-01 | |
| US36018889 | 1989-06-01 | ||
| US8902479 | 1989-06-05 | ||
| PCT/US1989/002479 WO1989012232A1 (en) | 1988-06-08 | 1989-06-05 | Assays utilizing sensitizer-induced production of detectable signals |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK291690D0 DK291690D0 (da) | 1990-12-07 |
| DK291690A DK291690A (da) | 1991-01-25 |
| DK174773B1 true DK174773B1 (da) | 2003-10-27 |
Family
ID=26899134
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK199002916A DK174773B1 (da) | 1988-06-08 | 1990-12-07 | Specifik bindingsbestemmelse, specifik bindings-bestemmelsessæt og sensibilisatorkonjugat til anvendelse herved |
Country Status (15)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US5516636A (da) |
| EP (1) | EP0345776B1 (da) |
| JP (1) | JP2681061B2 (da) |
| AT (1) | ATE114373T1 (da) |
| AU (1) | AU636110B2 (da) |
| CA (1) | CA1338927C (da) |
| DE (1) | DE68919440T2 (da) |
| DK (1) | DK174773B1 (da) |
| ES (1) | ES2064380T3 (da) |
| FI (1) | FI104391B (da) |
| GR (1) | GR3014969T3 (da) |
| IE (1) | IE66734B1 (da) |
| IL (1) | IL90542A (da) |
| NZ (1) | NZ229465A (da) |
| WO (1) | WO1989012232A1 (da) |
Families Citing this family (113)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2681061B2 (ja) * | 1988-06-08 | 1997-11-19 | ロンドン・ダイアグノスティック・インコーポレーテッド | 検出可能なシグナルのセンシタイザー誘導発生を利用したアッセイ |
| US5094958A (en) * | 1990-08-30 | 1992-03-10 | Fiberchem Inc. | Method of self-compensating a fiber optic chemical sensor |
| EP0476556A3 (en) * | 1990-09-18 | 1992-11-19 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Method for determination of a light sensitive substance |
| CA2071935C (en) * | 1990-10-26 | 1996-06-11 | Arja Kallio | Method for evaluating the adequacy of clinical specimens for hybridization assays and kit for performing the evaluation |
| ATE246360T1 (de) * | 1991-05-22 | 2003-08-15 | Dade Behring Marburg Gmbh | Partikel, die eine zusammensetzung beinhalten, die eine chemilumineszierende verbindung umfassen |
| US5578498A (en) | 1991-05-22 | 1996-11-26 | Behringwerke Ag | Metal chelate containing compositions for use in chemiluminescent assays |
| US6251581B1 (en) | 1991-05-22 | 2001-06-26 | Dade Behring Marburg Gmbh | Assay method utilizing induced luminescence |
| US5340716A (en) * | 1991-06-20 | 1994-08-23 | Snytex (U.S.A.) Inc. | Assay method utilizing photoactivated chemiluminescent label |
| WO1994002486A1 (en) * | 1992-07-20 | 1994-02-03 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Novel chemiluminescent compounds and methods of use |
| US6002000A (en) * | 1992-07-20 | 1999-12-14 | Dade Behring Marburg Gmbh | Chemiluminescent compounds and methods of use |
| DK0653066T3 (da) * | 1992-07-31 | 1998-09-23 | Dade Behring Marburg Gmbh | Fotoaktiverbare kemiluminescerende matricer |
| JP3498960B2 (ja) * | 1993-09-03 | 2004-02-23 | デイド・ベーリング・マルブルク・ゲゼルシヤフト・ミツト・ベシユレンクテル・ハフツング | 蛍光酸素チャンネリングイムノアッセイ |
| DE4403780A1 (de) * | 1994-02-03 | 1995-08-10 | Frank Dr Schubert | Verfahren zum nichtradioaktiven Nachweis von Biomolekülen |
| PT983788E (pt) | 1994-06-16 | 2004-07-30 | Dade Behring Marburg Gmbh | Metodo e dispositivo para misturar liquidos |
| US5891736A (en) * | 1996-06-21 | 1999-04-06 | Bayer Corporation | Reagents and methods for releasing and measuring lead ions from biological matrices |
| US5800999A (en) | 1996-12-16 | 1998-09-01 | Tropix, Inc. | Dioxetane-precursor-labeled probes and detection assays employing the same |
| WO1999042838A1 (en) | 1998-02-18 | 1999-08-26 | Dade Behring Inc. | Chemiluminescent compositions for use in detection of multiple analytes |
| US6365346B1 (en) * | 1998-02-18 | 2002-04-02 | Dade Behring Inc. | Quantitative determination of nucleic acid amplification products |
| GB9811483D0 (en) * | 1998-05-29 | 1998-07-29 | Photonic Research Systems Limi | Luminescence assay using cyclical excitation wavelength sequence |
| WO2000049406A1 (en) * | 1999-02-16 | 2000-08-24 | Princeton Separations | Activating film for chemiluminescent assays and methods for use |
| DE19912380B4 (de) * | 1999-03-19 | 2005-02-03 | Dräger Safety AG & Co. KGaA | Biomimetisches Reagenzsystem und seine Verwendung |
| US6627400B1 (en) | 1999-04-30 | 2003-09-30 | Aclara Biosciences, Inc. | Multiplexed measurement of membrane protein populations |
| US6322980B1 (en) | 1999-04-30 | 2001-11-27 | Aclara Biosciences, Inc. | Single nucleotide detection using degradation of a fluorescent sequence |
| US6764817B1 (en) * | 1999-04-20 | 2004-07-20 | Target Discovery, Inc. | Methods for conducting metabolic analyses |
| US20030119069A1 (en) * | 1999-04-20 | 2003-06-26 | Target Discovery, Inc. | Labeling of protein samples |
| US20030235832A1 (en) * | 2000-06-21 | 2003-12-25 | Ahmed Chenna | Multiplexed analysis by chromatographic separation of molecular tags |
| US6649351B2 (en) | 1999-04-30 | 2003-11-18 | Aclara Biosciences, Inc. | Methods for detecting a plurality of analytes by mass spectrometry |
| US7001725B2 (en) | 1999-04-30 | 2006-02-21 | Aclara Biosciences, Inc. | Kits employing generalized target-binding e-tag probes |
| US6673550B2 (en) | 1999-04-30 | 2004-01-06 | Aclara Biosciences, Inc. | Electrophoretic tag reagents comprising fluorescent compounds |
| US6331530B1 (en) * | 1999-07-13 | 2001-12-18 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Hydrophilic carrier for photosensitizers that cleaves when they catalyze the formation of singlet oxygen |
| WO2001032210A2 (en) * | 1999-10-29 | 2001-05-10 | Pharmacyclics, Inc. | Compositions for treating atheroma and neoplastic tissue |
| US7078486B2 (en) * | 1999-12-10 | 2006-07-18 | Spectral Diagnostics, Inc. | Single-chain polypeptides comprising troponin I and troponin C |
| US6703248B1 (en) | 1999-12-15 | 2004-03-09 | Dade Behring Marburg Gmbh | Particles for diagnostic and therapeutic use |
| US7771929B2 (en) * | 2000-04-28 | 2010-08-10 | Monogram Biosciences, Inc. | Tag library compounds, compositions, kits and methods of use |
| US20030207300A1 (en) * | 2000-04-28 | 2003-11-06 | Matray Tracy J. | Multiplex analytical platform using molecular tags |
| US7537938B2 (en) * | 2000-04-28 | 2009-05-26 | Monogram Biosciences, Inc. | Biomarker detection in circulating cells |
| US7160735B2 (en) * | 2000-04-28 | 2007-01-09 | Monogram Biosciences, Inc. | Tagged microparticle compositions and methods |
| JP4796259B2 (ja) * | 2000-05-04 | 2011-10-19 | シーメンス・ヘルスケア・ダイアグノスティックス・プロダクツ・ゲーエムベーハー | 複数のアナライトの検出において使用するための組成物 |
| US6797481B1 (en) * | 2000-10-17 | 2004-09-28 | Dade Behring Marburg Gmbh | Simultaneous screening of multiple analytes |
| US7635571B2 (en) * | 2000-12-07 | 2009-12-22 | Siemens Healthcare Diagnostics Products Gmbh | Amplified signal in binding assays |
| US7087395B1 (en) | 2001-01-16 | 2006-08-08 | Quest Diagnostics Investments Incorporated | Vitamin D assay |
| EP1565747B1 (en) * | 2001-03-29 | 2013-11-27 | Cellect Technologies Corp. | Method and system for separating and sorting particles |
| HUP0501021A3 (en) | 2001-05-21 | 2006-06-28 | Aclara Biosciences Inc Mountai | Methods and compositions for analyzing proteins |
| KR20040082273A (ko) * | 2001-05-21 | 2004-09-24 | 아클라라 바이오사이언시스 인코퍼레이티드 | 단백질 분석을 위한 방법 및 조성물 |
| WO2002097112A2 (en) * | 2001-05-26 | 2002-12-05 | Aclara Biosciences, Inc. | Catalytic amplification of multiplexed assay signals |
| EP1401430A4 (en) * | 2001-05-31 | 2005-10-19 | Miravant Pharm Inc | SUBSTITUTED PORPHYRIN AND AZAPORPHYRIN DERIVATIVES AND USE IN PHOTODYNAMIC THERAPY, RADIOIMAGING, AND MRI DIAGNOSIS |
| US7291477B2 (en) * | 2001-07-03 | 2007-11-06 | Xenotope Diagnostics, Inc. | Method and device for trichomonas detection |
| US20050032060A1 (en) * | 2001-08-31 | 2005-02-10 | Shishir Shah | Arrays comprising pre-labeled biological molecules and methods for making and using these arrays |
| US7045311B2 (en) * | 2001-10-25 | 2006-05-16 | Monogram Biosciences, Inc. | Whole cell assay systems for cell surface proteases |
| JP2006509183A (ja) * | 2002-03-05 | 2006-03-16 | アクララ バイオサイエンシーズ， インコーポレイテッド | 膜結合増感剤を用いる多重分析 |
| US20040229293A1 (en) * | 2002-05-21 | 2004-11-18 | Po-Ying Chan-Hui | Surface receptor complexes as biomarkers |
| US20040229299A1 (en) * | 2002-05-21 | 2004-11-18 | Badal M. Youssouf | Intracellular complexes as biomarkers |
| US20040229380A1 (en) * | 2002-05-21 | 2004-11-18 | Po-Ying Chan-Hui | ErbB heterodimers as biomarkers |
| US7402397B2 (en) * | 2002-05-21 | 2008-07-22 | Monogram Biosciences, Inc. | Detecting and profiling molecular complexes |
| US20040229294A1 (en) * | 2002-05-21 | 2004-11-18 | Po-Ying Chan-Hui | ErbB surface receptor complexes as biomarkers |
| US6897036B2 (en) * | 2002-06-06 | 2005-05-24 | Lumigen, Inc. | Fluorescent detection of peroxidase enzymes |
| US20040175765A1 (en) * | 2002-07-05 | 2004-09-09 | Sharat Singh | Cell-screening assay and composition |
| US6764819B2 (en) * | 2002-07-16 | 2004-07-20 | Emp Biotech Gmbh | Method for chemiluminescent detection |
| US20040014043A1 (en) * | 2002-07-16 | 2004-01-22 | Emp Biotech Gmbh | Sensitizer-labeled analyte detection |
| DE60329194D1 (de) | 2002-07-25 | 2009-10-22 | Aclara Biosciences Inc | Nachweis der rezeptoroligomerisierung |
| JP2006508907A (ja) * | 2002-07-26 | 2006-03-16 | アクララ バイオサイエンシーズ， インコーポレイテッド | 親油性電気泳動プローブ |
| US6674781B1 (en) * | 2002-08-19 | 2004-01-06 | The Boeing Company | Method and system for fueling a closed cycle chemical oxygen iodine laser |
| US20040091850A1 (en) * | 2002-11-08 | 2004-05-13 | Travis Boone | Single cell analysis of membrane molecules |
| CA2513133A1 (en) | 2003-01-16 | 2004-07-29 | Techno Mart Co., Ltd. | Porphyrin derivatives |
| US7402398B2 (en) * | 2003-07-17 | 2008-07-22 | Monogram Biosciences, Inc. | Measuring receptor homodimerization |
| BRPI0413471A (pt) * | 2003-08-11 | 2006-10-17 | Monogram Biosciences Inc | métodos para detectar um ou mais complexos de proteìnas e para detectar um complexo em uma amostra biológica |
| US7259122B1 (en) * | 2004-08-30 | 2007-08-21 | John Lombardi | Chemically-resistant shelter coating |
| US7915197B2 (en) * | 2003-08-29 | 2011-03-29 | Lombardi John L | Pathogen-resistant coatings |
| EP1680666A4 (en) * | 2003-10-27 | 2008-03-26 | Monogram Biosciences Inc | ANTI-THERAPEUTIC HUMAN ANTIBODY DETECTION |
| GB0329220D0 (en) * | 2003-12-17 | 2004-01-21 | Inverness Medical Switzerland | System |
| US7939267B2 (en) * | 2004-11-04 | 2011-05-10 | Laboratory Corporation Of America Holdings | Detection of activation of endothelial cells as surrogate marker for angiogenesis |
| US20060204999A1 (en) * | 2005-03-14 | 2006-09-14 | Stephen Macevicz | Detecting molecular complexes |
| SI1877415T1 (sl) * | 2005-05-02 | 2011-01-31 | Baseclick Gmbh | Nove označevalne strategije za senzitivno detekcijo analitov |
| KR101335218B1 (ko) | 2005-05-02 | 2013-12-12 | 바스프 에스이 | 분석물의 감응성 검출을 위한 신규한 표지화 전략 |
| US20060281104A1 (en) * | 2005-06-13 | 2006-12-14 | Macevicz Stephen C | Leuco dye particles and uses thereof |
| WO2007050811A2 (en) * | 2005-10-27 | 2007-05-03 | The President And Fellows Of Harvard College | Methods and compositions for labeling nucleic acids |
| CN101473216B (zh) * | 2006-05-09 | 2011-02-09 | 贝克曼考尔特公司 | 非分离式测定方法 |
| US7799534B2 (en) * | 2006-05-09 | 2010-09-21 | Beckman Coulter, Inc. | Nonseparation assay methods |
| US7732153B2 (en) * | 2006-05-09 | 2010-06-08 | Beckman Coulter, Inc. | Nonseparation assay methods |
| US20070299046A1 (en) * | 2006-06-26 | 2007-12-27 | Mai Nguyen Brooks | Orally available light-independent antineoplastic compounds |
| SI2089343T1 (sl) * | 2006-10-31 | 2011-10-28 | Baseclick Gmbh | Klik kemija za proizvodnjo poročevalskih molekul |
| EP2092084B1 (en) | 2006-11-13 | 2016-02-24 | PerkinElmer LAS, Inc. | Detecting molecular interactions |
| WO2008098100A2 (en) * | 2007-02-07 | 2008-08-14 | Perscitus Biosciences, Llc | Detection of molecule proximity |
| US20100240070A1 (en) * | 2007-11-07 | 2010-09-23 | Beckman Coulter, Inc. | Nonseparation Assay Methods Using Peroxide Generating Enzymes |
| EP2235536A4 (en) * | 2007-12-20 | 2011-05-04 | Lab Corp America Holdings | HER-2 DIAGNOSTIC METHODS |
| CN104263816B (zh) | 2008-05-16 | 2018-10-19 | 生命技术公司 | 用于测量细胞增殖的双标记法 |
| SG177252A1 (en) * | 2008-12-01 | 2012-03-29 | Lab Corp America Holdings | METHODS AND ASSAYS FOR MEASURING p95 AND/OR p95 IN A SAMPLE AND ANTIBODIES SPECIFIC FOR p95 |
| ES2535723T3 (es) | 2009-01-15 | 2015-05-14 | Laboratory Corporation Of America Holdings | Métodos de determinación de la respuesta del paciente mediante la medición de Her-3 |
| US8486719B2 (en) | 2009-02-20 | 2013-07-16 | Perkinelmer Biosignal, Inc. | Multiplex assay methods and compositions |
| US9347947B2 (en) | 2009-03-12 | 2016-05-24 | Siemens Healthcare Diagnostics Inc. | Immunoassays employing non-particulate chemiluminescent reagent |
| JP6468838B2 (ja) | 2011-05-19 | 2019-02-13 | ラボラトリー コーポレイション オブ アメリカ ホールディングス | 癌患者の生存可能性を決定するためおよび癌患者における転移可能性を予測するための方法 |
| EP2981828A1 (en) | 2013-04-05 | 2016-02-10 | Laboratory Corporation of America Holdings | Systems and methods for facilitating diagnosis, prognosis and treatment of cancer based on detection of her3 activation |
| CA3016914C (en) | 2016-03-15 | 2019-08-27 | Laboratory Corporation Of America Holdings | Methods of assessing protein interactions between cells |
| PT3482210T (pt) | 2016-07-06 | 2021-07-28 | Prothena Biosciences Ltd | Ensaio para detetar alfa-sinucleína total e fosforilada s129 |
| JP2020508436A (ja) | 2016-12-07 | 2020-03-19 | プロジェニティ， インコーポレイテッド | 胃腸管の検出方法、装置およびシステム |
| KR20190095931A (ko) | 2016-12-14 | 2019-08-16 | 프로제너티, 인크. | 섭취가능한 디바이스를 사용하여 방출된 il-12/il-23 저해제로의 위장관 질환의 치료 |
| WO2018112256A1 (en) | 2016-12-14 | 2018-06-21 | Progenity Inc. | Treatment of a disease of the gastrointestinal tract with an il-1 inhibitor |
| TW201834690A (zh) | 2016-12-14 | 2018-10-01 | 美商寶珍那提公司 | 以免疫抑制劑治療胃腸道疾病 |
| WO2018112223A1 (en) | 2016-12-14 | 2018-06-21 | Progenity Inc. | Treatment of a disease of the gastrointestinal tract with a tlr modulator |
| WO2018112237A1 (en) | 2016-12-14 | 2018-06-21 | Progenity Inc. | Treatment of a disease of the gastrointestinal tract with an il-6r inhibitor |
| MX2019006867A (es) | 2016-12-14 | 2020-01-13 | Progenity Inc | Tratamiento de una enfermedad del tracto gastrointestinal con un inhibidor de integrina. |
| CA3045310A1 (en) | 2016-12-14 | 2018-06-21 | Progenity, Inc. | Treatment of a disease of the gastrointestinal tract with a chemokine/chemokine receptor inhibitor |
| JP2020502126A (ja) | 2016-12-14 | 2020-01-23 | プロジェニティ， インコーポレイテッド | 消化管疾病のｊａｋ阻害薬による治療 |
| US20190343425A1 (en) | 2016-12-14 | 2019-11-14 | Progenity, Inc. | Treatment of a disease of the gastrointestinal tract with a tnf inhibitor |
| CA3045472A1 (en) | 2016-12-14 | 2018-06-21 | Progenity Inc. | Treatment of a disease of the gastrointestinal tract with a smad7 inhibitor |
| WO2018183941A2 (en) | 2017-03-30 | 2018-10-04 | Progenity Inc. | Treatment of a disease of the gastrointestinal tract with live biotherapeutics |
| EP4108183A1 (en) | 2017-03-30 | 2022-12-28 | Biora Therapeutics, Inc. | Treatment of a disease of the gastrointestinal tract with an immune modulatory agent released using an ingestible device |
| WO2018183931A1 (en) | 2017-03-30 | 2018-10-04 | Progenity Inc. | Treatment of a disease of the gastrointestinal tract with il-10 or an il-10 agonist |
| CA3054159A1 (en) | 2017-03-30 | 2018-10-04 | Progenity, Inc. | Treatment of a disease of the gastrointestinal tract with a chst15 inhibitor |
| WO2018183932A1 (en) | 2017-03-30 | 2018-10-04 | Progenity Inc. | Treatment of a disease of the gastrointestinal tract with a il-13 inhibitor |
| US20200306516A1 (en) | 2017-08-14 | 2020-10-01 | Progenity, Inc. | Treatment of a disease of the gastrointestinal tract with glatiramer or a pharmaceutically acceptable salt thereof |
| CN112400024B (zh) | 2018-06-01 | 2024-04-09 | 比奥拉治疗股份有限公司 | 用于胃肠道微生物组检测和处理的装置和系统 |
| CN111693500B (zh) * | 2020-06-19 | 2022-11-25 | 哈尔滨工业大学 | 一种基于时间分辨光谱测量实现单态氧量子产率监测的方法 |
Family Cites Families (21)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4383031A (en) * | 1975-04-28 | 1983-05-10 | Miles Laboratories, Inc. | Homogeneous chemiluminescent specific binding assay |
| US4220450A (en) * | 1978-04-05 | 1980-09-02 | Syva Company | Chemically induced fluorescence immunoassay |
| US4277437A (en) * | 1978-04-05 | 1981-07-07 | Syva Company | Kit for carrying out chemically induced fluorescence immunoassay |
| US4668619A (en) * | 1980-10-30 | 1987-05-26 | Miles Laboratories, Inc. | Multilayer homogeneous specific binding assay device |
| CA1190838A (en) * | 1981-07-17 | 1985-07-23 | Cavit Akin | Homogeneous nucleic acid hybridization diagnostics by non-radiative energy transfer |
| US4743561A (en) * | 1985-03-05 | 1988-05-10 | Abbott Laboratories | Luminescent assay with a reagent to alter transmitive properties of assay solution |
| US4792521A (en) * | 1985-08-15 | 1988-12-20 | Immunomedics, Inc. | Non-enzymatic immunohistochemical staining system and reagents |
| US4868103A (en) * | 1986-02-19 | 1989-09-19 | Enzo Biochem, Inc. | Analyte detection by means of energy transfer |
| US4777128A (en) * | 1986-05-27 | 1988-10-11 | Ethigen Corporation | Fluorescence immunoassay involving energy transfer between two fluorophores |
| US5254477A (en) * | 1986-06-25 | 1993-10-19 | Trustees Of Tufts College | Flourescence intramolecular energy transfer conjugate compositions and detection methods |
| US4822746A (en) * | 1986-06-25 | 1989-04-18 | Trustees Of Tufts College | Radiative and non-radiative energy transfer and absorbance modulated fluorescence detection methods and sensors |
| US4956477A (en) * | 1987-12-31 | 1990-09-11 | Tropix, Inc. | Synthesis of 1,2-dioxetanes |
| US4775745A (en) * | 1986-12-08 | 1988-10-04 | National Distillers And Chemical Corporation | Diazonium compounds useful as components for nucleic acid probes |
| US4900686A (en) * | 1987-04-02 | 1990-02-13 | Polaroid Corporation | Fluorescent conjugates and biological diagnostic assay |
| US4894348A (en) * | 1987-07-01 | 1990-01-16 | Ronald Robert C | Fluorescein-conjugated proteins with enhanced fluorescence |
| US5037615A (en) * | 1987-10-30 | 1991-08-06 | Cordis Corporation | Tethered pair fluorescence energy transfer indicators, chemical sensors, and method of making such sensors |
| NZ227506A (en) * | 1987-12-31 | 1992-06-25 | London Diagnostics Inc | Specific binding assays using chemiluminescent compounds |
| EP0348494B1 (en) * | 1987-12-31 | 1994-08-10 | Tropix, Inc. | Dioxetanes for use in assays |
| JP2681061B2 (ja) * | 1988-06-08 | 1997-11-19 | ロンドン・ダイアグノスティック・インコーポレーテッド | 検出可能なシグナルのセンシタイザー誘導発生を利用したアッセイ |
| US4935498A (en) * | 1989-03-06 | 1990-06-19 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Expanded porphyrins: large porphyrin-like tripyrroledimethine-derived macrocycles |
| US5340716A (en) * | 1991-06-20 | 1994-08-23 | Snytex (U.S.A.) Inc. | Assay method utilizing photoactivated chemiluminescent label |
-
1989
- 1989-06-05 JP JP1506900A patent/JP2681061B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1989-06-05 AU AU37718/89A patent/AU636110B2/en not_active Expired
- 1989-06-05 WO PCT/US1989/002479 patent/WO1989012232A1/en active IP Right Grant
- 1989-06-06 IL IL9054289A patent/IL90542A/en unknown
- 1989-06-06 CA CA000601917A patent/CA1338927C/en not_active Expired - Fee Related
- 1989-06-08 NZ NZ229465A patent/NZ229465A/en unknown
- 1989-06-08 EP EP89110383A patent/EP0345776B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1989-06-08 DE DE68919440T patent/DE68919440T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1989-06-08 AT AT89110383T patent/ATE114373T1/de not_active IP Right Cessation
- 1989-06-08 ES ES89110383T patent/ES2064380T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1989-06-12 IE IE183189A patent/IE66734B1/en not_active IP Right Cessation
-
1990
- 1990-12-07 DK DK199002916A patent/DK174773B1/da not_active IP Right Cessation
- 1990-12-07 FI FI906043A patent/FI104391B/fi active IP Right Grant
-
1992
- 1992-12-01 US US07/984,296 patent/US5516636A/en not_active Expired - Lifetime
-
1995
- 1995-02-08 GR GR940403591T patent/GR3014969T3/el unknown
-
1996
- 1996-03-28 US US08/623,410 patent/US5705622A/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH03505373A (ja) | 1991-11-21 |
| EP0345776A3 (en) | 1991-04-03 |
| DE68919440D1 (de) | 1995-01-05 |
| DK291690D0 (da) | 1990-12-07 |
| IL90542A0 (en) | 1990-01-18 |
| CA1338927C (en) | 1997-02-25 |
| ATE114373T1 (de) | 1994-12-15 |
| US5705622A (en) | 1998-01-06 |
| IL90542A (en) | 1994-11-11 |
| NZ229465A (en) | 1992-05-26 |
| DK291690A (da) | 1991-01-25 |
| DE68919440T2 (de) | 1995-06-08 |
| AU636110B2 (en) | 1993-04-22 |
| EP0345776A2 (en) | 1989-12-13 |
| AU3771889A (en) | 1990-01-05 |
| JP2681061B2 (ja) | 1997-11-19 |
| FI906043A0 (fi) | 1990-12-07 |
| EP0345776B1 (en) | 1994-11-23 |
| IE66734B1 (en) | 1996-01-24 |
| US5516636A (en) | 1996-05-14 |
| WO1989012232A1 (en) | 1989-12-14 |
| IE891831L (en) | 1989-12-08 |
| FI104391B (fi) | 2000-01-14 |
| GR3014969T3 (en) | 1995-05-31 |
| ES2064380T3 (es) | 1995-02-01 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DK174773B1 (da) | Specifik bindingsbestemmelse, specifik bindings-bestemmelsessæt og sensibilisatorkonjugat til anvendelse herved | |
| US4950588A (en) | Prolonged enhanced chemiluminescence | |
| US5656207A (en) | Detecting or quantifying multiple analytes using labelling techniques | |
| US4868103A (en) | Analyte detection by means of energy transfer | |
| US5639615A (en) | Luminescent lanthanide chelates and methods of use | |
| Mayer et al. | Luminescent labels—more than just an alternative to radioisotopes? | |
| JP5319714B2 (ja) | 過酸化水素検出方法に用いるシグナリング化合物 | |
| US5332659A (en) | Light emission-or absorbance-based binding assays for polynucleic acids | |
| EP0478626B2 (en) | Detecting or quantifying multiple analytes using labelling techniques | |
| JPS62244399A (ja) | 競合的均質検定法 | |
| JP4589588B2 (ja) | 長寿命励起型蛍光を用いる測定方法 | |
| DE3688766T2 (de) | Verlängerte Chemolumineszenz. | |
| US5679516A (en) | Process for detecting nucleic acid by capillary electrophoresis | |
| Wu et al. | Highly selective colorimetric and fluorescent BODIPY dyes for sensing of cysteine and/or homocysteine | |
| Nakazono et al. | Acridinium ester chemiluminescence: Methyl substitution on the acridine moiety | |
| Kuroda et al. | New phenylboronic acid derivatives as enhancers of the luminol–H2O2–horseradish peroxidase chemiluminescence reaction | |
| NO310258B1 (no) | Spesifikk bindingsbestemmelse, analysepakke og sensibilisatorkonjugat | |
| Hirano et al. | Development of Novel Fluorescent Sensors Based on Fluorescent Natural Compounds | |
| US20030003510A1 (en) | Biophotonic sensors and methods of use thereof | |
| Gray | Uncovering the Impact of a Fluorescent Merocyanine Probe on the Structure and Function of Aptamers for Protein and Small Molecule Detection | |
| Guliyev | Rational design of ratiometric chemosensor via modulation of energy donor efficiency | |
| Li et al. | Enzymic hydrolysis of intramolecular complexes for monitoring theophylline in homogeneous competitive protein-binding reactions | |
| JPH05123196A (ja) | 固定化相補ｄｎａまたはｒｎａを用いるｄｎａまたはｒｎａ断片の測定方法 | |
| Visser | The investigation of interactions in the excited state of flavins using time-resolved spectroscopy | |
| JPH0675519B2 (ja) | 核酸プローブ、その製造方法および該核酸プローブを使用する検出方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PUP | Patent expired |