DK174730B1 - Diastereomer af 7-[2-(2-aminothiazol-4-yl)-2-(Z)-hydroxyiminoacetamido]-3-(methoxymethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre-[alfa-(2,2-dimethylptopionyloxy)-ethyl]-ester, fremgangsmåde til fremstilling deraf, et lægemiddel indeholdende den nævnte diastereomer, - Google Patents

Description

i DK 174730 B1

Den foreliggende opfindelse angår en hidtil ukendt diastereomer af 7-[2-(2-aminothiazol-4-yl)-2-(Z)-hydroxyimi-noacetamido] -3- (rnethoxymethyl) -3-cephem-4-carboxylsyre- [or-(2,2-dimethylpropionyloxy)-ethyl]-ester og fysiologisk ac-5 ceptable syreadditionssalte deraf, der især er egnede til oral anvendelse, en fremgangsmåde til fremstilling deraf, et lægemiddel indeholdende den nævnte diastereomer, en fremgangsmåde til fremstiling af farmaceutiske præparater indeholdende diastereomeren samt anvendelse deraf til fremstil-10 ling af et lægemiddel med antibiotisk virkning.

Selvom der er udviklet adskillige klinisk relevante cephalosporiner med et bredt antibakterielt spektrum, er de fleste af dem kun egnede til parenteral indgivelse, idet de efter oral indgivelse kun - om overhovedet - resorberes 15 særdeles utilstrækkeligt. I mange tilfælde er det imidlertid ønskeligt at give patienten højvirksomme antibiotika i oral form.

De hidtil kendte cephalosporin-antibiotika opfylder ikke alle krav, som må stilles til et sådant lægemiddel, 20 nemlig en høj antibakteriel aktivitet over for grampositive (især staphylokokker) og gramnegative sygdomsfremkaldere og samtidigt en god resorption i mave-tarm-kanalen.

I nogle tilfælde er det lykkedes at øge resorptionen af en cephalosporin i mave-tarmkanalen ved esterificering 25 af 4-carboxylgruppen. Da cephalosporinesterne som regel i sig selv ikke udviser nogen antibiotisk virkning, må esterkomponenterne vælges således, at esteren efter resorptionen med legemets egne enzymer, f.eks. esteraser, atter hurtigt og fuldstændigt spaltes tilbage til cephalosporinen med en 30 fri carboxylgruppe.

Omfanget af den enterale resorption af cephalosporiner er i afgørende grad afhængigt af cephalosporinens og de til enhver tid foreliggende esterkomponenters kemiske struktur. Allerede små strukturelle variationer i cephalosporin-grund-35 skelettet eller i esterkomponenterne kan påvirke resorp- DK 174730 B1 2 tionen. Tilvejebringelsen af egnede komponenter er rent empirisk.

Således fører eksempelvis indførelsen af en sur substituent i 7S-sidekæden af aminothiazolyl-cephalosporiner, 5 f.eks. i cefixim, til en enteralt resorberbar forbindelse, medens forbindelser med neutrale sidekæder, f.eks. i cefur-oxim, kun resorberes enteralt i form af prolægemiddel-estere.

Dosis-virknings-proportionaliteten er herved ofte ikke lineær, og de opnåede terapeutiske serumspejle er ikke 10 tilfredsstillende. Yderligere estere fra rækken af amino-thiazolyl-cephalosporinerne er f.eks. omtalt i EP patentskrifterne nr. 29.557, 34.536, 49.119 og 134.420.

I EP-A-0.049.119 er der beskrevet en blanding af diastereomerer af forbindelsen a- (2,2-dimethyl-propionyloxy) -15 ethyl-7-[2-(2-aminothiazol-4-yl)-2-hydroxyimino-acetamido]-3-(methoxymethyl)-3-cephem-4-carboxylat, hvorimod den foreliggende opfindelse angår en i det væsentlige ren diastereo-mer (diastereomer I) af forbindelsen eller et fysiologisk acceptabelt syreadditionssalt deraf. Diastereomer I udviser 20 uventet forøget enteral absorption og højere biotilgængelig-hed i sammenligning med blandingen af diastereomerer.

Der er således nu ved systematisk gennemførte in vivo-undersøgelser inden for forskellige dyrearter tilvejebragt en snæver gruppe af oralt anvendelige ceph-3-em-4-25 carboxylsyreestere, som har en tilstrækkelig kemisk stabilitet og ved indbyrdes afstemt lipid- og vandopløselighed hurtigt og i terapeutisk henseende betydelig grad resorberes i mave-tarm-kanalen.

Den foreliggende opfindelse angår således diasterome-30 ren I af 7-[2-(2-aminothiazol-4-yl)-2-(Z)-hydroxyiminoacet-amido] -3- (methoxymethyl) -3-cephem-4-carboxylsyre- [a- (2,2-dimethylpropionyloxy)-ethyl]-esteren med formlen I

35 DK 174730 B1 3 N- C -CONH-1-j'"S "j (I ) Η,Ν-Ιΐ β N-OH J-CH2°CH3 2 ^-S O I ch3 5 CO -CH-OC- i-CH -j 2 j II I 3 CH3 o CH3 hvori 10 HO-gruppen er i syn-stilling, samt fysiologisk acceptable syreadditionssalte deraf.

Som fysiologisk acceptable syreadditionssalte kommer de for cephalosporin-antibiotika kendte salte i betragtning, f.eks. hydrochloridet, sulfatet, maleinatet, citratet, ace-15 tatet eller formiatet. Deres fremstilling sker på i og for sig kendt måde ved sammenblanding af komponenterne i et vandigt eller organisk opløsningsmiddel eller i en egnet opløsningsmiddelblanding.

Forbindelserne med formlen I har i esterdelen et 20 chiralt centrum. Ved anvendelse af racemiske forbindelser med den almene formel III foreligger cephemcarboxylsyreester-ne med formlen I som en blanding af to diastereomerer, som ifølge kendte metoder kan adskilles i de to enkeltkomponenter.

25 Opfindelsen angår endvidere en fremgangsmåde til fremstilling af diastereomeren I af 7-[2-(2-aminothiazol-4-yl)-2(Z)-hydroxyiminoacetamido]-3-(methoxymethyl)-3-cephem- 4-carboxylsyre-[a-(2,2-dimethylpropionyloxy)-ethyl]-esteren med formlen I 30

vXJ

CO -CH-OC-å-CH-, 35 2 I II I 3 CH3 o ch3 4 DK 174730 B1 eller dens fysiologisk acceptable syreadditionssalte, hvilken fremgangsmåde er ejendommelig ved, at

(a) en forbindelse med formlen II

N-r— C-CONW i-

HN_^jl S-OR5 oJ-L/>CH2°CH3 HD

'4 S

R COOA

10 i hvilken R4 betyder en aminobeskyttelsesgruppe, R5 betyder en let fraspaltelig gruppe, og A betyder en kation, omsættes med en forbindelse med den almene formel III

ch3 15 X - CH - OC - C - CH, (III) I 1 i 3 CH3 O CH3

hvori X betyder en afgangsgruppe, til diastereomerblandingen af forbindelsen med formel IV

20

N-P- C-CONH--S'I

Il Π " 5 w^'i?;^~CH2OCH3 (IV) HN—^ 0^NT CH3 44 CO^-CH-OC-C-CH-, 25 2 I II Γ 3 ch3 o ch3 hvori R4 og R^ har den ovenfor angivne betydning, hvorpå 30 diasteromererne adskilles fra hverandre ad chromatografisk vej, eller at

(b) en forbindelse med den almene formel V

ΪΓ" a- C-CO-Y

li Μ "5 (V)

35 HN —N-OR

R4 DK 174730 B1 5

i hvilken R4 og R5 har den ovenfor angivne betydning, og Y betyder en aktiverende gruppe, omsættes med en forbindelse med formlen VI

h2n——r J CH^OCH 3 o i ch3 (VI) C0n-CH-0C-‘—C-CH.

2 | II I

ch3 o ch3 10 eller med et salt af denne forbindelse, til diastereomerblan-dingen af forbindelsen med formlen IV, hvorpå diastereomerer-ne adskilles fra hverandre ad chromatografisk vej, og (c) grupperne R4 og R5 fraspaltes fra den mindre polære diastereomer med formlen IV ved behandling med tri-15 fluoreddikesyre, myresyre eller fortyndet saltsyre.

I de almene formler II, IV og ‘ V betyder R4 en fra peptid- og cephalosporinkemien kendt aminobeskyttelsesgruppe, fortrinsvis formyl, chloracetyl, bromacetyl, trichloracetyl, benzyloxycarbonyl, tert.butoxycarbonyl eller trityl, og R5 20 betyder en ligeledes fra peptid- og cephalosporinkemien kendt let fraspaltelig gruppe, fortrinsvis benzhydryl, tri-tyl, tetrahydropyranyl eller l-methoxy-1-methyl-ethyl. Den særligt foretrukne betydning for R4 er trityl og for trityl og 1-methoxy-1-methyl-ethyl.

25 I formlen III betyder X en til esterificeringer alment kendt afgangsgruppe, f.eks. chlor, brom, iod, phenylsul-fonyloxy, p-toluensulfonyloxy eller methylsulfonyloxy, fortrinsvis chlor, brom eller iod, navnlig iod.

Som baser, der ligger til grund for kationen A i den 30 almene formel II, kan der f.eks. nævnes natriumhydrogencar-bonat, kaliumhydrogencarbonat, natriumcarbonat, kaliumcar-bonat, eventuelt substituerede, alkylerede aminbaser, f.eks. trimethylamin, triethylamin, diisopropylamin, ethyldiisopro-pylamin, N,N-dimethylanilin, N,N-dimethylbenzylamin, 1,5-35 diazabicyclo[4.3.0]non-5-en (DBN), 1,8-diazabicyclo[5,4,0]-undec-7-en (DBU), pyridin, picolin eller 2,6-dimethylpyridin.

DK 174730 B1 6

Foretrukne baser er natrium- eller kaliumhydrogencarbonat, natrium- eller kaliumcarbonat, triethylamin, N,N-dimethyl-anilin, DBN eller DBU.

Ved omsætning af de frie carboxylsyrer med disse 5 baser opnås saltene med den almene formel II, i hvilken A betyder en kation, f.eks. natrium eller kalium, men også magnesium eller calcium eller en eventuelt substitueret alkyleret ammoniumion, f.eks. ammonium, trimethylammonium, triethylammonium, tetrabutylammonium, diisopropylammonium, 10 ethyldiisopropylammonium, diazabicyclo[0,3,4]nonenium eller diazabicyclo[0,4,5]undecenium. Fortrinsvis betyder A natrium, kalium, triethylammonium, N,N-dimethylanilinium samt DBN-og DBU-ionen.

Omsætningen af forbindelserne med formlen II med 15 forbindelserne med formlen III kan udføres i et organisk opløsningsmiddel ved fra ca. -20 til ca. +50°C, fortrinsvis ved fra oa. 0°C til stuetemperatur. Som opløsningsmidler kan der eksempelvis anvendes ketoner, f.eks. acetone eller methylethylketon, N,N-dimethylformamid (DMF), N,N-dimethyl-20 acetamid (DMA), N-methylpyrrolidon eller dimethylsulfoxid (DMSO). De foretrukne er DMF, DMA, N-methylpyrrolidon og DMSO. Særligt foretrukket er DMF.

Fraspaltningen af grupperne R4 og R5 fra de opnåede forbindelser med formlen IV sker på i peptid- og cephalo-25 sporinkemien i og for sig kendt måde, f.eks. med trifluor-eddikesyre eller fortyndet saltsyre, fortrinsvis med myresyre under tilsætning af noget vand.

Såfremt en forbindelse med formlen V omsættes med en forbindelse med formlen VI, betegner Y en gruppe, som ak-30 tiverer carboxylgruppen, således som den kendes fra peptid-og cephalosporinkemien for tilsvarende reaktioner, f.eks. et halogenid, fortrinsvis chlorid, en aktiverende estergruppe, f.eks. med 1-hydroxybenzotriazol, eller et blandet an-hydrid, f.eks. med benzensulfonsyre eller toluensulfonsyre.

35 Aktiveringen af carboxylgruppen er også mulig på fra lit- DK 174730 B1 7 teraturen kendt måde ved tilsætning af et kondensationsmiddel, f.eks. et carbodiimid.

Forbindelsen med den almene formel VI kan anvendes som sådan eller i form af et salt, f.eks. tosylatet, hydro-5 chloridet eller hydroiodidet, idet det kan være fordelagtigt at anvende krystallinske salte med henblik på renheden af produkterne.

Omsætningen af forbindelser med formlen V med sådanne med formlen VI kan ske i et organisk opløsningsmiddel, f.eks.

10 methylenchlorid, chloroform, acetone, methylethylketon, dimethylformamid, dimethylacetamid eller vand, eller i blandinger af disse opløsningsmidler.

Acyleringsreaktionen kan hensigtsmæssigt gennemføres ved temperaturer fra ca. -50°C til ca. +50°C, fortrinsvis 15 fra -40°C til +30°C, om ønsket i nærværelse af en base, f.eks. triethylamin eller pyridin. Basetilsætningen anvendes for at binde de ved kondensationen frigjorte sure komponenter.

Udgangsforbindelserne med formlen III kan fremstilles 2 0 på i og for sig kendt måde ved, at forbindelser med den almene formel CH3 X' - c--CH, 25 II 3 ^ o ch3 hvori X' betyder en afgangsgruppe, omsættes med et aldehyd med formlen 30

CH3 - CHO

X1 betyder fortrinsvis brom eller chlor. Omsætningen gennemføres hensigtsmæssigt i et organisk opløsningsmiddel, 35 f.eks. et halogeneret carbonhydrid, f.eks. methylenchlorid eller chloroform, i nærværelse af en katalysator, f.eks.

DK 174730 B1 8 zinkchlorid eller aluminiumchlorid, ved en temperatur på hensigtsmæssigt fra -10°C til +10°C.

Udgangsforbindelserne med formlen III, hvori X betyder chlor, kan alternativt fremstilles ved, at en carboxylsyre 5 med formlen ch3 il I ch3 o ch3 10 hvis fremstilling er beskrevet i J. Amer. Chem. Soc. 70.

s. 1153, omsættes med en forbindelse med formlen 15 Cl - CH - 0S02C1 ch3 hvis fremstilling er beskrevet i Synthetic Communications 20 14, s, 857, i nærværelse af en base, f.eks. natriumcarbonat, kaliumcarbonat, natriumhydrogencarbonat eller kaliumhydrogen-carbonat, fortrinsvis natriumhydrogencarbonat. Omsætningen gennemføres fortrinsvis ved fra 0°C til stuetemperatur i en tofaseblanding, fortrinsvis af vand og et chloreret carbonhy-25 drid, f.eks. methylchlorid eller chloroform, i nærværelse af en faseoverførings-katalysator, f.eks. tetrabutylammonium-hydrogensulfat.

Udgangsforbindelser med formlen III kan også fremstilles ved halogenombytning. Således fås der f.eks. en 30 forbindelse med formlen III, hvori X betyder iod, ved omsætning af de tilsvarende forbindelser III, hvori X betyder chlor eller brom, med et iodidsalt, f.eks. natriumiodid.

Fremstillingen af udgangs forbindelserne med den almene formel II er beskrevet i EP-B 34.356.

35 Fremstillingen af udgangsforbindelseme med den almene formel V med den aktiverede carboxylgruppe sker på fra lit- DK 174730 B1 9 teraturen kendt måde, og esterificeringen, der fører til forbindelserne med formlen VI, sker på den måde, der er beskrevet i forbindelse med fremstillingen af esterne med den almene formel IV.

5 Ceph-3-em-4-carboxylsyreesterne med den almene for mel I er i besiddelse af en række fysisk-kemiske og biologiske egenskaber, som gør dem til værdifulde cephalosporin--antibiotica til oral indgivelse. De er stabile, farveløse og i gængse organiske opløsningsmidler godt opløselige for-10 bindeiser, som resorberes i tarmen, hurtigt spaltes til det antibiotisk aktive cephalosporin-derivat med formlen N-π— C —~ CONH—I f' ] Ås^ ”-°H o'LVSh2och3 15 Η,Ν ' 2 i

2 C02H

i serumet og således er særdeles egnede til behandling af bakterielle infektionssygdomme, f.eks. infektion i luftvejene 20 eller urogenitalkanalen.

Forbindelserne ifølge den foreliggende opfindelse indgives oralt i form af almindelige farmaceutiske præparater, f.eks. kapsler, tabletter, pulvere, sirupper eller suspensioner. Dosen afhænger af patientens alder, symptomerne 25 og legemsvægten samt af behandlingens varighed. Den ligger imidlertid som regel mellem ca. 0,2 g og ca. 5 g daglig, fortrinsvis mellem ca. 0,5 g og ca. 3 g daglig. Forbindelserne indgives fortrinsvis i opdelte doser, f.eks. 2 til 4 gange daglig, idet den enkelte dosis eksempelvis kan indeholde 30 mellem 50 og 500 mg virksomt stof.

Præparaterne til oral anvendelse kan indeholde de sædvanlige bærestoffer og/eller fortyndingsmidler. Således kommer eksempelvis til kapsler eller tabletter følgende i betragtning: bindemidler, f.eks. gelatine, sorbitol, polyvi-35 nylpyrrolidon eller carboxymethylcellulose, fortyndingsmidler, f.eks. lactose, sukker, stivelse, calciumphosphater DK 174730 B1 10 eller polyethylenglycol, gi idemidler, f.eks. talkum eller magnesiumstearat, til flydende præparater f.eks. vandige eller olieagtige suspensioner, sirupper eller lignende kendte præparatformer.

5 Den foreliggende opfindelse forklares nærmere i de følgende eksempler, uden at denne dog begrænses herved.

A. Fremstilling af udgangsstoffer 10 Fremstillincrseksempel 1 1-Chlorethyl-chlorsvovlsyreester 18 ml chlorsvovlsyre sættes ved 0°C i løbet af 15 mi-15 nutter dråbevis til 36 g chlormyresyre-1-chlorethylester. Blandingen omrøres kraftigt, indtil udviklingen af gas er ophørt (ca. 4 timer) . Der hældes i en blanding af 500 ml isvand og methylenchlorid (1:1), den organiske fase fraskilles, og den vandige fase ekstraheres yderligere to gange 2 0 med 30 ml methylenchlorid pr. gang. De forenede organiske faser vaskes to gange med 300 ml mættet natriumhydrogencar-bonat-opløsning pr. gang, tørres med magnesiumsulfat og inddampes, hvorefter remanensen destilleres i vakuum.

Kp. (10): 49-50°C; Udbytte 20 g.

25

Fremstillingseksempel 2 or- (2,2-Dimethyl-propionsyre-iodethylester)

Til en opløsning af 7,5 g (50 mmol) natriumiodid i 30 50 ml vandfri acetonitril sættes der ved 0°C dråbevis 2,8 ml (50 mmol) acetaldehyd i 10 ml vandfri acetonitril. Derpå tilsættes der 6,2 ml (50 mmol) 2,2-dimethyl-propionsyrechlo-rid i 10 ml acetonitril, og der efterrøres i 2 timer ved 0°C. Den gullige opløsning hældes derefter i 200 ml isvand 35 og ekstraheres med 250 ml pentan. Den organiske fase vaskes én gang med vand, én gang med 10%'s natriumbisulf itopløsning DK 174730 B1 11 og én gang med mættet kogsaltopløsning og tørres med magnesiumsulfat. Efter afdestillation af opløsningsmidlet i vakuum (20°C badtemperatur) fås der 7,9 g af en gullig olie.

5 1H-NMR {60 MHz, CDCI3): 6 (dpm) = 1,25 (9H, s. tert.butyl), 2,15 (3H, q, CH-CH3), 6,8 (IH, q, CH-CH3).

Fremstillingseksempel 3 10 7- [2- (2-Tritylaminothiazol-4-yl) -2- (Z) -trityl-oximinoacet- amido] -3- (methoxymethyl) -3-cephem-4-carboxylsyre

Trin 1 15 2- (2-Tritylaminothiazol-4-yl) -2- (Z) - trityloximino-eddikesyre- chlorid 46,5 g (60 mmol) 2-(2-tritylaminothiazol~4-yl)-2-(Z)-trityloximino-eddikesyre-triethylammoniumsalt opløses i 400 ml vandfrit methylenchlorid og afkøles til -70°C. Hertil 20 sættes der dråbevis en opløsning af 12,3 g (60 mmol) phoa-phorpentachlorid i 200 ml vandfrit methylenchlorid på en sådan måde, at temperaturen ikke overstiger -60°C. Derpå efterrøres der i endnu 1 time ved denne temperatur, hvorefter opløsningen omgående inddampes i vakuum. Der tilsættes yder-25 ligere to gange 100 ml methylenchlorid pr. gang og centrifugeres .

Trin 2 30 7- [2- (2-Tritylaminothiazol-4-yl) -2- (Z) -trityl-oximinoacet- amido]-3-(methoxymethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre

En opløsning af produktet fra trin 1 i 50 ml methylenchlorid og 400 ml acetone sættes dråbevis til en til 0°C afkølet opløsning af 18 g 7-amino-3-methoxymethyl-ceph-3-35 em-4-carboxylsyre i 400 ml af en blanding af acetone og vand (1:1), hvortil der i forvejen er sat 5,6 g (66 mmol) DK 174730 B1 12 natriumhydrogencarbonat og 18 ml (132 mmol) triethylamin.

Efter 2 timers omrøring ved 0°C indstilles der med 1 N saltsyre på pH=4, og der ekstraheres med den dobbelte mængde ethylacetat. Derpå skilles faserne, og den organiske opløs-5 ning ekstraheres med 5%'s kaliumhydrogensulfat-opløsning.

Efter tørring med magnesiumsulfat inddampes der, og remanensen opløses i 150 ml methylenchlorid og sættes under kraftig omrøring dråbevis til 1,8 1 diisopropylether. Efter fraskillelse ved sugning fås der 45,7 g (85%) af titelfor-10 bindeisen.

B. Udførelseseksempler

Fremstilling af diastereomerblanding af forbindelser med formlen I

15 Eksempel 1 7- [2-(2-Aminothiazol-4-yl)-2-(Z)-hydroxyimino-acetamido]-3-(methoxymethyl) -3-cephem-4-carboxylsyre-of- (2,2-dimethylpro-pionyloxy)-ethylester 20

Fremgangsmådevariant a)

Trin 1 25 7- [2- (2-Tritylaminothiazol-4-yl)-2-(Z)-trityl-oximinoacet- amido] -3- (methoxymethyl) -3-cephem-4-carboxylsyre-a- (2,2-dimethyl-propionyloxy)-ethylester

Til en opløsning af 14 g (15,6 mmol) 7-[2-(2-trityl-aminothiazol-4-yl) -2- (Z) -trityl-oximinoacetamido] -3- (methoxy-30 methyl)-3-cephem-4-carboxylsyre i 300 ml vandfrit dimethyl-formamid sættes der 1,07 g (7,7 mmol) kaliumcarbonat, og der omrøres ved stuetemperatur, indtil saltet er opløst.

Derpå afkøles der i isbad, og der tilsættes 5,1 g oi-2,2-dimethyl-propionsyre-iodethylester. Der efterrøres ved 0°C 35 i yderligere 2 timer, opløsningsmidlet afdestilleres i vakuum, og der fordeles mellem ethylacetat og vand. Den or- 13 DK 174730 B1 ganiske fase tørres med magnesiumsulfat, opløsningen inddampes, og den faste remanens chromatograferes (SiC>2; tolu-en/EE = 10 + 1). Der fås 4,0 ren titelforbindelse som en blanding af de to diastereomerer.

5 1H-NMR {270 MHz, CDC13) : δ (dpm) = 1,22 (9H, s, C (CH3) 3) , l, 55 (3H, d, CH3), 3,3 (3H, s, OCH3),3,4 {2H, AB, J = 16 Hz, SCH2), 4,30 (2H, s, CH2OCH3), 5,05 (IH, d, 6-H), 6,08 (IH, m, 7-H), 6,4 {IH, bred s, thiazol-H), 6,9 (IH, q, OCH-CH3), 10 7,1-7,4 {32H, aromat. H, 2 x NH).

Trin 2 7- [2- (2-Aminothiazol-4-yl) -2- (Z) -hydroximino-acetamido] -3-15 methoxyrnethyl) -3-cephem-4-carboxylsyre-α- (2,2-dimethylpro-pionyloxy)-ethylester 4,0 g af den i trin 1 opnåede forbindelse opløses ved stuetemperatur i 60 ml myresyre, der tilsættes 15 ml vand, og der omrøres ved stuetemperatur i 30 minutter. Efter 20 at reaktionen er afsluttet, fraskilles der ved sugning, opløsningen inddampes, der tilsættes toluen, og opløsningsmidlet sidestilleres. Den harpiksagtige remanens udrøres i en blanding af diisopropylether og diethylether. Der fås 2,2 g af den ønskede titelforbindelse som en blanding af de 25 to diastereomerer.

l-H-NMR (270 MHz, DMSO-dg): δ (dpm) = 1,15 (9H, 2 x s, tert.-butyl), 1,5 (3H, dd, CH-CH3) , 3,2 (3H, 2 x s, OCH3), 3,55 (2H, m, S-CH2-), 4,15 (2H, d, CH2-OCH3), 5,2 (IH, dd, J = 30 6 Hz, H-6), 5,85 (IH, m, H-7), 6,65 (IH, s, thiazol-H), 6,9 (IH, m, -O-CH-O), 7,1 (2H, bred s, NH2), 9,45 (IH, d, J = 8 Hz, -NH) , 11,3 (IH, s, oxim-H) .

35 DK 174730 B1 14

Fremgangsmådevariant b)

Udgangstrin 5 2 - (2 - Tritylaminothiazol -4-yl) - 2- (2) - (1 -methyl-1-methoxy) - ethoxy-imino-eddikesyre-p-toluensulfonsyreanhydrid

Til en suspension af 6 g {10 mmol) 2-(2-tritylaminothiazol-4-yl) -2-(Z)-{1-methyl-1-methoxy)-ethoxyimino-eddi-kesyre-triethylammoniumsalt i 30 ml acetone sættes der 2,1 g 10 (11 mmol) p-toluensulfonsyrechlorid, og der omrøres ved stuetemperatur i 1,5 time. Derefter tilsættes der 40 ml diethylether, og der afkøles til -10°C, hvorefter der fraskilles ved sugning. Produktet eftervaskes yderligere tre gange med 20 ml ether pr. gang og tørres. Der fås 10 g af 15 et produkt, som består af en blanding af titelforbindelsen og triethylamin-hydrochlorid og videreforarbejdes uden yderligere rensning.

Trin 1 20 7- [2- {2-Tritylaminothiazol-4-yl) -2- (Z) - (1-methyl-1-methoxy) -ethoxyiminoacetamido] -3- (methoxymethyl) -3-cephem-4-carboxylsyre -ot- (2,2-dimethylpropionyloxy) -ethylester 0,73 g {3 mmol) 7-amino-3-methoxymethyl-ceph-3-em-4-25 carboxylsyre suspenderes i 30 ml methylenchlorid, og hertil sættes der ved 0°C 0,37 g (2,4 mmol) 1,8-diazabicyclo- (5,4,0)-undec-7-en (DBU). Den fremkomne opløsning efterrøres i yderligere 30 minutter, hvorefter der dråbevis tilsættes 0,79 g (3,3 mmol) or-2,2-dimethylpropionsyre-iodethylester 30 (fremstillingseksempel 2) og efterrøres ved denne temperatur i 2 timer. Dernæst tilsættes der 1,9 g (2,4 mmol) af det i udgangstrinet opnåede blandede anhydrid, og opløsningen holdes ved 0°C i 1,5 time.

Efter at reaktionen er afsluttet, af destilleres opløs-35 ningsmidlet i vakuum, og remanensen chromatograferes (Si02; DK 174730 B1 15 toluen/ethylacetat = 1:1). Der fås 1,1 g (62%) af den ønskede forbindelse som en blanding af de to diastereomerer.

1H-NMR (270 MHz, DMSO-d6): δ (dpm) = 1,15 (9H, 2 x s, tert.-5 butyl), 1,36 (6H, s, 0-C(CH3)2), 1,51 (3H, dd, CH-CH3), 3,1 (3H, s, C(CH3)2-OCH), 3,20 (3H, s, OCH3), 3,58 (2H, AB, J = 16 Hz, SCH2-), 4,12 (2H, d, CH2OCH3), 5,18 (IH, AB, J = 8 Hz, 6-H), 5,85 (IH, m, 7-H), 6,70 (IH, s, thiazol-H), 6,9 (IH, τη, -OCO-O) , 7,15-7,4 (16 H, m, aromat. H og NH) , 9,5 10 (IH, d, -NHCO).

Trin 2 7-[2-(2-Aminothiazol-4-yl)-2-(Z)-hydroxyimino-acetamido]-3-15 (methoxymethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre-a-(2,2-dimethylpro-pionyloxy)-ethylester 1 g (1,2 mmol) af den i trin 1 opnåede forbindelse opløses i 15 ml myresyre, hvorefter der tilsættes 3 ml vand.

Efter 1 time ved 0°C fraskilles der fra den fremkomne tri-20 phenylcarbinol ved sugning, og filtratet inddampes i vakuum.

Til remanensen sættes der flere gange toluen, og der centrifugeres på ny. Råproduktet optages derpå i ethylacetat, der ekstraheres med mættet natriumhydrogencarbonatopløsning, den organiske fase tørres med magnesiumsulfat, og der cen-25 trifugeres. Remanensen rives med diethylether. Der fås 340 g (57%) af titelforbindelsen, som i alle egenskaber er identisk med det ifølge fremgangsmådevariant a) fremkomne produkt .

I trin 1 kan der i stedet for cephemcarboxylsyreeste-30 ren også anvendes dennes tosylat, som kan fremstilles på følgende måde.

Til en suspension af 2,44 g (10 mmol) 7-amino-3-meth-oxymethyl-3-cephem-4-carboxylsyre i 100 ml vandfrit methy-lenchlorid sættes der 1,5 ml (10 mmol) 1,8-diazabicyclo-35 (5,4,0)-undec-7-en (DBU), og den fremkomne opløsning efter- røres i 30 minutter ved stuetemperatur. Derpå tilsættes der DK 174730 B1 16 ved 0°C dråbevis 2,6 g (10 mmol) a-2,2-dimethyl-propionsyre--iodethylester, og der efterrøres ved stuetemperatur i 1 time. Der inddampes, remanensen optages i ethylacetat, og der ekstraheres med vandig natriumbicarbonatopløsning. Den 5 organiske fase tørres med magnesiumsulfat, hvorefter opløsningsmidlet afdestilleres i vakuum. Der fås 2,7 g råprodukt, som opløses i 13 ml ethylacetat, hvorpå der under omrøring tilsættes en opløsning af 1,8 g p-toluensulfonsyre i 13 ml ethylacetat. Efter kort tid fremkommer der krystallisation.

10 Der efterrøres i yderligere 10 minutter, der tilsættes 10 ml diethylether, der fraskilles ved sugning, der eftervaskes med lidt ethylacetat og diethylether, og der fås således 1,0 g tosylat. Smp. 160°C (sønd.).

15 -^H-NMR (270 MHz, DMSO-dg) : δ (dpm) = 1,15 (9H, s, tert.- butyl), 1,52 (3H, dd, CH-CH3) , 2,3 (3H, s, C6H5-CH3) , 3,25 (2H, S, OCH3), 3,7 (2H, J « 20 Hz, SCH2~), 4,2 (2H, s, CH2OCH3), 5,75 (2H, 2 x dd, 6-H og 7-H), 6,85 (IH, q, 0CH-CH3), 7,15 og 7,43 (4H, 2 x d, arom. H).

20

Fremgangsmådevariant c)

Udgangstrin 1 25 7-Amino-3-methoxymethyl-3-cephem-4-carboxylsyre-a'- (2,2-dime-thyl-propionyloxy)-ethylester 1,46 g (6 mmol) 7-amino-3-methoxymethyl-3-cephem-4-carboxylsyre suspenderes i 30 ml vandfrit methylenchlorid, og der tilsættes under isafkøling 0,9 ml (6 mmol) 1,8-diaza- 30 bicyclo- (5,4,0) -undec-7-en (DBU) . Efter 30 minutter tilsættes der dråbevis 1,66 g (6,5 mmol) o:-2,2 -dimethyl-propionsyre--iodethylester, og der efterrøres i 2 timer ved stuetemperatur. Der fraskilles fra den udfældede remanens ved sugning, og råproduktet chromatograferes (SiC^; toluen/ethylacetat = 35 1:1) .

Der fås 1,3 g (58%) af titelforbindelsen.

DK 174730 B1 17

Udgangstrin 2 7-Bromacetyl-acetamido-3-methoxymethyl-3-cephem-4-carboxyl-syre-α-(2,2-dimethyl-propionyloxy)-ethylester 5 Til en opløsning af 0,26 ml (3,5 mmol) diketen i 20 ml vandfrit methylenchlorid sættes der ved -40°C dråbevis 0,17 ml (3,5 mmol) brom, og der efterrøres i 30 minutter. Derefter tilsættes der dråbevis en opløsning af 1,3 g af den ifølge udgangstrin 1 opnåede forbindelse og 460 mg 10 (3,5 mmol) N-(trimethylsilyl)-acetamid i 10 ml methylenchlo rid, og efter 30 minutters omrøring inddampes opløsningen.

Efter chromatografi af råproduktet (SiC>2; toluen/ethylace-tat = 1:1) fås der 0,9 g produkt.

15 Udgangstrin 3 7-(2-Bromacetyl-2-hydroximino-acetamido)-3-methoxymethyl-3-cephem-4 - carboxylsyre-a- (2,2-dimethyl-propionyloxy) -ethylester 20 En opløsning af 0,9 g (1,7 mmol) af den i udgangs trin 2 opnåede forbindelse i 10 ml vandfrit methylenchlorid og 5 ml eddikesyre afkøles til -10°C, og hertil sættes der 182 mg (2,6 mmol) natriumnitrit i 1,5 ml vand. Efter 30 minutters omrøring ved -5°C tilsættes der derpå 162 mg 25 (2,7 mmol) urinstof, og der efterrøres i 30 minutter. Efter tilsætning af 10 ml vand fraskilles den organiske fase, vaskes flere gange med vand og mættet natriumchloridopløsning og tørres, hvorefter opløsningsmidlet afdestilleres. Der fås 580 mg (63%) af titelforbindelsen.

30

Trin 1 7- [2- (2-Aminothiazol-4-yl) -2- (Z) -hydroximino-acetamido] -3-(methoxymethyl) -3-cephem-4-carboxylsyre-a- (2,2-dimethyl-pro-35 pionyloxy)-ethylester DK 174730 B1 18

Til en opløsning af 0,57 g (1 mmol) fra udgangstrin 2 i 5 ml dimethylacetamid sættes der ved 5°C 92 mg (1,2 mmol) thiourinstof, og der omrøres ved stuetemperatur i 1 time. Derefter sættes der til opløsningen 50 ml af en 3%'s natri-5 umhydrogencarbonatopløsning og 3,8 g natriumchlorid, og den fremkomne fældning fraskilles ved sugning og optages i 15 ml ethylacetat og 5 ml acetone. Den organiske fase vaskes med mættet natriumchloridopløsning, der tørres med magnesiumsulfat, opløsningsmidlet sidestilleres, remanensen udrives 10 med diethylether, og der fås således 135 mg (24%) af den ønskede titelforbindelse, der er identisk med den ifølge fremgangsmådevariant a) eller b) opnåede.

C. Fremstilling af slutprodukt.

15

Eksempel la

Adskillelse af diastereomererne af 7-[2-(2-aminothiazol-4-yl) -2- (Z) -hydroxyimino-acetamido] -3- (methoxymethyl) -3-cephem-20 4-carboxylsyre-a-(2,2-dimethyl-propionyloxy)-ethylester

Trin 1

Rene diastereomerer af 7-[2-(2-tritylaminothiazol-4-yl)-2-25 (Z) - (1-methyl-l-methoxy) -ethoxyiminoacetamido] -3- (methoxy methyl) -3-cephem-4-carboxylsyre-oi- (2,2-dimethylpropionyloxy) -ethylesteren

Til en opløsning af 14,8 g (20,3 mmol) 7-(2-(2-tritylaminothiazol-4-yl)-2-(Z)-(1-methyl-l-methoxy)-ethoxy-30 iminoacetamido]-3-(methoxymethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre i 100 ml vandfrit methylenchlorid sættes der dråbevis 3 ml (20,3 mmol) 1,8-diazabicyclo-(5,4,0)-undec-7-en (DBU) . Opløsningen afkøles derefter til 0°C, og der tilsættes 6,7 g (26,4 mmol) a-2,2-dimethyl-propionsyre-iodethylester. Der 35 efterrøres ved 0°C i yderligere 2 timer, opløsningsmidlet sidestilleres derefter i vakuum, og der fordeles mellem DK 174730 B1 19 ethylacetat og vand. Den organiske fase tørres med magnesiumsulfat, opløsningen inddampes, og den faste remanens (19,1 g), som indeholder en blanding af de to diastereomerer, chro-matograferes (900 g SiC>2; toluen/ethylacetat = 5 + 1; efter 5 eluering af den første diastereomer toluen/ethylacetat = 4 + 1). Der fås på denne måde 2,8 g af den ene diastereomer (diastereomer I) (Rf-værdi = 0,75; toluen/ethylacetat = 1 + 1) og 3,2 g af den anden diastereomer (diastereomer II) (Rf-værdi = 0,7) på ensartet form.

10

Trin 2

Rene diastereomerer af 7-[2-(2-aminothiazol-4-yl)-2-(Z)-hydroxy imino-acet amido] -3- (methoxymethyl) -3-cephem-4-carboxyl-15 syre-a-(2,2-dimethyl-propionyloxy)-ethylesteren

Hver af begge de i trin 1 opnåede diastereomerer I og II opløses i 10 ml myresyre, der tilsættes 2,5 ml vand, og der omrøres ved stuetemperatur i 1 time. Derpå fraskilles der fra den dannede triphenylcarbinol ved sugning, og filtra-20 tet inddampes i vakuum. Remanensen optages derpå i 100 ml ethylacetat og ekstraheres med mættet natriumhydrogencar-bonatopløsning, og den organiske fase tørres med magnesiumsulfat og afdestilleres i vakuum. Remanensen udrives med diisopropylether. Til yderligere rensning omkrystalliseres 25 der fra en blanding af eddikesyre-n-butylester og diisopropylether .

Diastereomer I: 1,2 g af 2,8 g trin 1

Smp. fra 166°C (sønderdeling) 30 -^H-NMR (270 MHz, DMSO-dg): δ (dpm) = 1,15 (9H, s, tert.butyl) , 1,46 (3H, d, CH-CH3), 3,19 (3H, s, 0CH3), 3,56 (2H), AR-system, J = 6 Hz, S-CH2~) , 4,15 (2H, d, CH2OCH3), 5,21 (IH, d, J = 6 Hz, H-6) , 5,83 (IH, m, H-7) , 6,64 (IH, s, 35 thiazol-H), 6,87 (IH, q, -O-CH-O) , 7,1 (2H, bred s, NH2) , 9,5 (IH, d, J = 8 Hz, -NH), 11,3 (IH, s, oxim-H).

DK 174730 B1 20

Diastereomer II: 1 g af 3,2 g trin 1

Smp. = fra 138°C (sønderdeling).

iH-NMR (270 MHz, DMSO-dg): δ (dpm) = 1,15 (9H, s, tert.bu-5 tyl), 1,47 (3H, d, CH-CH3), 3,2 (3H, S, OCH3), 3,54 (2H, AB-system, J = 6 Hz, S-CH2-), 4,13 (2H, s, CH2-OCH3), 5,19 (IH, d, J = 6 Hz, H-6) , 5,82 (IH, m, H-7) , 6,64 (IH, s, thiazol-H) , 6,93 (IH, q, -O-CH-O) , 7,1 (2H, bred s, NH2) , 9,45 (IH, d, J = 8 HZ, -NH), 11,3 (IH, s, oxim-H).

Claims (8)

1. Diastereomer I af 7-[2-(2-aminothiazol-4-yl)-2-(Z) -hydroxyiminoacetamido]-3- (methoxymethyl)-3-cephem-4- 5 carboxylsyre- [<x- (2,2-dimethylpropionyloxy) -ethyl]-esteren med formlen I N-p- C-CONH--r"S "| N-0H Qi— N-^“CH2OCH3 cH3 (I)

10 CO -CH-OC-C-CH, 2. li I 3 ch3 o ch3 i hvilken

15 HO-gruppen er i syn-stilling, samt fysiologisk acceptable syreadditionssalte deraf.

2. II I 3 CH3 O CH3 10 hvori R4 og R5 har den ovenfor angivne betydning, hvorpå diastereomererne adskilles fra hverandre på i og for sig kendt måde, eller at (b) en forbindelse med den almene formel V 15 -n-C-CO-Y ^SJ N-OR5 i« (V) i hvilken R4 og R-* har den ovenfor angivne betydning, og Y 20 betyder en aktiverende gruppe, omsættes med en forbindelse med den almene formel VI «z«—ρΓ'Ί. ^γ-Η2ΟΟΗ3 (νι)

25 O 1 i 3 CO-j-CH-OC—ϊ- C-CH. I 1' I ch3 o ch3 eller med et salt af denne forbindelse, til en forbindelse 30 med den almene formel IV, og at diastereomererne adskilles fra hverandre på i og for sig kendt måde, og (c) grupperne R4 og R5 fraspaltes fra den mindre polære diastereomer med formlen IV på i og for sig kendt 3. måde. DK 174730 B1

2. Fremgangsmåde til fremstilling af diastereomeren I ifølge krav 1, kendetegnet ved, at (a) en forbindelse med formlen II 20 N-j- C-CON»-t- B-OR5 CH2OCH3 (II) ;

14. O T R COOA 25 i hvilken R4 betyder en aminobeskyttelsesgruppe, R5 betyder en let fraspaltelig gruppe, og A betyder en kation, omsættes med en forbindelse med den almene formel III 30. p X - CH - OC-C - CH, (III) I II I 3 ch3 o ch3 35 hvori X betyder en afgangsgruppe, til diastereomerblandingen af forbindelsen med formlen IV DK 174730 B1 N-r- C-CONH-- HN-N-OR5 J-Nv1i^"CH2OCH3 c M ^ O ' VH3 (IV)

3. Fremgangsmåde ifølge krav 2, kendetegnet ved, at X er en benzensulfonyloxy-, p-toluensulfonyl-oxy-, methansulfonyloxygruppe eller chlor, brom eller iod.

4. Fremgangsmåde ifølge krav 2 eller 3, kende-5 tegnet ved, at R4 er en formyl-, chloracetyl-, bromacetyl-, trichloracetyl-, benzyloxycarbonyl-, tert.butoxy-carbonyl- eller tritylgruppe, og at R5 er en benzhydryl-, trityl-, tetrahydropyranyl- eller 1-methoxy-1-methyl-ethyl-gruppe.

5. Fremgangsmåde ifølge krav 2, kendeteg net ved, at X er iod, R4 er tritylgruppen, og R5 er 1-methoxy-1-methyl-ethylgruppen, og at grupperne R4 og R5 fraspaltes med trifluoreddikesyre, myresyre eller fortyndet saltsyre. 15

6. Lægemiddel, kendetegnet ved et indhold af diastereomeren I med formlen I ifølge krav 1.

5. CO.-CH-OC--C-CHL *

7. Fremgangsmåde til fremstilling af farmaceutiske præparater, der er virksomme mod bakterielle infektioner, kendetegnet ved, at diastereomer I med formlen I 20 ifølge krav 1 med farmaceutisk sædvanlige bærestoffer eller fortyndingsmidler bringes på en farmaceutisk egnet indgivelsesform.

8. Anvendelse af diastereomeren I med formlen I ifølge krav 1 til fremstilling af et lægemiddel med antibiotisk 25 virkning.