DK173425B1 - Fremgangsmåde til adskillelse af (6R,S)-folinater - Google Patents
Fremgangsmåde til adskillelse af (6R,S)-folinater Download PDFInfo
- Publication number
- DK173425B1 DK173425B1 DK198905157A DK515789A DK173425B1 DK 173425 B1 DK173425 B1 DK 173425B1 DK 198905157 A DK198905157 A DK 198905157A DK 515789 A DK515789 A DK 515789A DK 173425 B1 DK173425 B1 DK 173425B1
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- folinate
- calcium
- water
- sodium
- salt
- Prior art date
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
- A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D475/00—Heterocyclic compounds containing pteridine ring systems
- C07D475/02—Heterocyclic compounds containing pteridine ring systems with an oxygen atom directly attached in position 4
- C07D475/04—Heterocyclic compounds containing pteridine ring systems with an oxygen atom directly attached in position 4 with a nitrogen atom directly attached in position 2
Description
DK 173425 B1
Den foreliggende opfindelse angår en fremgangsmåde til adskillelse af salte af N-5-formyl-(6R,S)-5,6,7,8-tetrahydrofolsyre, -5-CHO-(6R,S)-THF-, forkortet benævnt folinsyre, og isolering af et salt af N-5-formyl-(6S)-5,6,7,8-tetrahydrofolsyre, -5-CHO-(6S)-THF-, den biokemisk aktive citrovorum-faktor (= vækstfaktor for Leuconostoc citrovorum).
5
Folinsyren indeholder 2 asymmetriske centrer. På grund af at folinsyre syntetiseres ud fra folsyre, N-(Pteroyl)-L-glutaminsyre, foreligger det optisk aktive carbonatom, der er Indeholdt i glutaminsyreresten, i L-formen, mens det optisk aktive carbonatom i 6-stillingen, hvilket er fremkommet ved hydrogenerfng af pteroylrestens dobbeltbinding i 5,6-stillingen, 10 foreligger i den racemiske (6R,S)-form. Syntetisk folinsyre (- leucovorin) består således af en 1:1-blanding af to diastereomerer.
Ved naturlig forekomst, fx i leveren, findes folinsyre kun i (6S)-formen som 5-CHO-(6S)-THF. 5-CHO-(6R,S)-THF (folinsyre) anvendes i form af calciumsaltet deraf (leucovorin 15 calcium) som lægemiddelstof til behandling af megaloblastisk folsyremangelanæmi, som antidot til styrkelse af forligeligheden af folsyreantagonister, specielt i aminopterin, metho-trexat og fluoruracil, i kræftterapien ("leucovorin rescue") og behandlingen af autoimmun-sygdomme som psoriasis og rheumatisk arthritis samt til styrkelse af forligeligheden af bestemte antiparasitika, fx trimethoprim-sulfamethoxazol, i kemoterapien.
20 Efter administration af 5-CHO-(6R,S)-THF omdannes (6S)-andelen af denne diastereo-merblanding hurtigt til 5-Me-(6S)-THF, mens (6R)-andeien ikke metaboliseres og langsomt udskilles gennem urinen: J. A. Straw et al., Cancer Research 44, 3114-3119 (1984).
F. M. Sirotnak et al., Biochemical Pharmacology 28, 2993-97 (1979) har fundet, at til un-25 dertrykkelse af cellevæksthæmning med methotrexat i L 121 O-kulturer er folinsyrens unaturlige diastereomer [5-CHO-(6R)-THF] 100 gange mindre virksom og den kemisksyntetiske diastereomerblanding [5-CHO-(6R,S)-THF] 2 gange mindre virksom end den naturlige diastereomer [5-CHO-(6S)-THF].
30 C. Temple et al., Cancer Treatment Reports 65, 1117-9 (1981) har in vivo bekræftet disse in vitro bestemte resultater og har fundet, at den naturlige diastereomer med hensyn til reduktion af methotrexattoksicitet er mere end 2 gange så virksom som blandingen af dia-stereomeren (leucovorin].__
Disse forfattere har endog antaget, at de unaturlige diastereomerer har en mulig skadelig t 35 virkning.
2 DK 173425 B1 5-CHO-(6R)-THF hæmmer nemlig nogle af de enzymer, der er ansvarlige for C1-transferen, og dermed tetrahydrofolatets biokemiske virkning: R. P. Leary et al., Biochem. Bio-phys. Res. Commun. 56,484 (1973); V. F. Scott et al., ibid. 14, 523 (1964); G. K. Smith et 5 al., Biochemistry, 20,4034 (1981). Anvendelsen af (6S)-tetrahydrofolater I stedet for (6R,S)-tetrahydrofolater må derfor ud over den dobbelte virkning også fremvise kvalitative, terapeutiske fordele.
Således er der behov for at erstatte den hidtil anvendte 1:1-blanding af diastereomerer 10 med det naturlige, aktive stof [5-CHO-(6S)-THF],
Der er gjort adskillige anstrengelser for at adskille 5-CHO-(6R,S)-THF og for asymmetrisk at syntetisere 5-CHO-(6S)-THF.
D. Cosulich et al., J. Amer. chem. Soc. 74,4215-16 (1952), US-PS 2.688.018 15 (31.08.1954) har eksempelvis forsøgt at foranstalte adskillelsen ved fraktioneret krystallisation af et jordalkalisalt, fx calcium- eller strontiumsaltet af 5-CHO-(6R,S)-THF, af en vandig opløsning [se også J. C. Fontecilla-Camps et al., J. Arner. chem. Soc. 101,6114 (1979)].
20 Under de af D. Cosulich et al. offentliggjorte betingelser lader den ønskede adskillelse sig dog ikke realisere. Ved krystallisation fx af calciumsaltet af 5-CHO-(6R,S)-THF af vand ved pH 7-8 fås atter og atter 6R,S-formen, hvilket kvantitativt lader sig påvise ved hjælp af kromatografisk analyse på en chiral HPLC-søjle samt ved hjælp af den optiske drejning. Således er det uden betydning, om man anvender råt eller rent caiciumsalt af 5-CHO-25 (6R,S)-THF til krystallisationen; til stadighed fås (6R,S)-formen. En adskillelse og berigelse af (6S)-formen kan heller ikke opnås, når den overmættede, vandige opløsning af et jordalkalisalt af 5-CHO-(6R,S)-THF podes med autentisk jordalkalisalt af 5-CHO-(6S)-THF.
30 Adskillelsen af diastereomerparret er også forsøgt ved kromatografi: J.Feeney et al., Biochemistry 20,1837 (1981). Derudover er (6S)-isomereme fremstillet ved stereospecifik reduktion af dihydrofolater i nærværelse af d'ihydrofolat-reduktase: L. Rees et al., Tetrahedron 42, 117(1986).
3 DK 173425 B1 L. Rees et ai., J. Chem. Soc., Chem. Commun. 1987,470, EP-A2-0 266 042 har beskrevet en fremgangsmåde til adskillelse af (6R,S)-THF, ved hjælp af hvilken 5-CHO-(6S)-THF og 5-CHO-(6R)-THF kunne frembringes I ringe mængde. Fremgangsmåden består i, at man omsætter (6R,S)-THF med (-)-menthyl-chlorformlat til dannelse af de diastereo-5 mere 5-(-)-menthyloxycarbonyl-tetrahydrofolsyrer, adskiller disse ved gentagen behandling med n-butanol, opvarmer de vundne diastereomerer med en mættet oplosning af hy-drogenbromid i en blanding af myresyre og eddikesyre, hvorved der efter hydrolyse dannes 5-formyl-(6S)- og (6R)-THF, og endelig isolerer disse som calciumsalte.
Denne fremgangsmåde er omstændelig og vanskelig og nødvendiggør det meget giftige 10 phosgen til fremstilling af det chirale reagens. Derudover er udgangsmaterialet (6R.S)-THF meget ustabilt. Ved fraspaltning af den chirale hjælpegruppe med HBr i AcOH ved >50°C fraspaltes en del af glutaminsyren, og der fremkommer biprodukter, der kun vanskeligt lader sig skille fra. Den (6S)-folinsyre, der fremstilles ifølge en sådan fremgangsmåde, er så bekostelig, at anvendelse deraf i stedet for (R.S)-tetrahydrofolatet næppe 15 kommer i betragtning.
Hidtil har der altså ikke været kendt nogen anvendelig fremgangsmåde til opnåelse af (6S)-tetrahydrofolater.
20 Således består der fremdeles den opgave at tilvejebringe en enkelt, industrielt anvendelig fremgangsmåde til fremstilling af 5-CHO-(6S)-THF.
Det har nu overraskende vist sig, at der af en vandig opløsning af salte af (6R,S)-folinsyre [5-CHO-(6R,S)-THF] efter tilsætning af vandopløselig alkali-, ammonium- eller Jordalkali-25 salte af uorganiske eller organiske syrer udskilles tilsvarende folinat, der stærkt fremherskende består af den unaturlige diastereomer (6R)-folinat [5-CHO-(6R)-THF]. Denne lader sig fraskille ved filtrering. Af filtratet, der overvejende indeholder det ønskede, naturlige (6S)-folinat, lader (6S)-folinatet sig isolere ved tilsætning af et organisk opløsningsmiddel, der er blandbart med vand, såsom ethanol eller acetone og/eller et vandopløseligt jordal-30 kalisalt. Dette kan derefter befris for resten af (6R)-folinatet ved omkrystallisation.
Ved "ammoniumsalt" forstås i nærværende beskrivelse og krav usubstituerede eller 1- til 4-gange substituerede ammoniumsalte inklusive pyrrolidinium-, piperidinium- og morpho-liniumsalte. Som substituenter kan især anvendes alkyl- eller hydroxyalkylgrupper med 1-* 35 4 carbonatomer eller benzyl.
DK 173425 B1 4
Adskillelsen af jordalkalisalte af (6R,S)-folinater kan ifølge den foreliggende fremgangsmåde kun finde sted ved tilnærmelsesvis neutral pH. Af alkalisk miljø (pH >8) udskilles, i overensstemmelse med den i PCT/EP-patentansøgning 88/00341 (offentliggjort 17. no-5 vember 1988 som WO 88/08844) beskrevne fremgangsmåde, først et produkt, der overvejende består af jordalkali-(6S)-folinat.
Ved adskillelsen af alkali-(6R,S)-folinater udskiller sig efter tilsætning af alkalihalogenider såvel i tilnærmelsesvis neutralt som i alkalisk miljø først (6R)-foIinatet.
10 Det er ikke nødvendigt og almindeligvis heller ikke hensigtsmæssigt, at katloneme i den diastereomerblanding, der skal adskilles, og kationeme I alkali-, ammonium- eller jordal-kalisaltene af en uorganisk eller lavere organisk syre er ens.
Når man fx omsætter en opløsning af et jordalkalisalt af (6R,S)-folinat ved tilnærmelsesvis neutral pH med et vandopløseligt alkalihaiogenid, fx natriumiodid, så udskilles det tilsva-15 rende jordalkali-(6R)-folinat.
Det samme sker, når man omsætter en opløsning af et alkali-(6R,S)-folinat ved tilnærmelsesvis neutral pH med et vandopløseligt jordalkalisalt. Først udskilles det tilsvarende jord-alkali-(6R)-fo!inat.
Når en opløsning af alkali-(6R,S)-folinat omsættes med opløselige alkalisalte af uorgani-20 ske syrer, så udskilles først det tilsvarende alkali-(6R)-folinat, undertiden først efter tilsætning af et organisk opløsningsmiddel såsom methanol, ethanol, isopropanol eller acetone.
Ved tilsætning af (mere) organisk opløsningsmiddel kan foranlediges udskillelse af alkal-i(6S)-folinatet af moderluden. Imidlertid kan det tilsvarende jordalkali-(6S)-folinat også bringes til udskillelse af moderiuden ved tilsætning af vandopløselige jordalkalisalte. I den 25 forbindelse skader det ikke, at opløsningens pH stiger til s8.
Den nødvendige mængde vandopløselige alkali- eller ammoniumsalte af uorganiske eller organiske syrer er forholdsmæssig høj. Den udgør ca. den 0,5-10-foldige, fortrinsvis 1-5-foldige, vægtmængde beregnet på vægten af det anvendte (6R,S)-folinat. Vandopløselige 30 jordalkalisalte er nødvendige i langt ringere mængder.
Ved overholdelse af optimale betingelser, der kan fastlægges gennem forsøgsrækker, udskilles (6R)-folinatet i optisk, praktisk taget ren form og i højt udbytte. Under sådanne forhold indeholder moderluden altid kun lidt (6R)-folinat, og svarende hertil udviser det 35 (6S)-folinat, der derefter er bragt til udskillelse fx ved tilsætning af organisk opløsnings- 5 DK 173425 B1 middel eller et jordalkalisalt, en hø] (6S)-andel på 70% til over 95%. Dette folinat, der er stærkt beriget med (6S)-formen, lader sig fuldstændigt befri fra ledsagende (6R)-folinat.
Når indholdet af (6S)-folinat Imidlertid kun udgør omkring 60% eller mindre, dannes racematen, (6R,S)-formen, igen ved omkrystallisation, og den overskydende (6S)-form for-5 bliver i opløsning.
Fremgangsmåden er enkel og er også meget givtig ved optimal gennemførelse af processen.
10 Opfindelsen angår en fremgangsmåde til adskillelse af (6R,S)-folinater, hvilken fremgangsmåde er ejendommelig ved, at en vandig opløsning af et salt af (6R,S)-folinsyre omsættes med et vandopløseligt alkali-, ammonium-eller jordalkalisalt af en uorganisk eller organisk syre, det udskilte (6R)-folinat fraføreres, og (6S)-folinatet Isoleres fra filtra tet.
15
Isoleringen af (6S)-folinatet finder sted ved, at (6S)-folinatet udskilles af filtratet ved tilsætning af et organisk opløsningsmiddel, der er blandbart med vand, og/eller fortrinsvis et vandopløseligt jordalkalisalt, fraføreres og eventuelt omkrystalliseres.
20 Det foretrækkes at gennemføre adskillelsen af jordalkalisalte af (6R)-folinsyre ved tilnærmelsesvis neutral pH.
Salte af (6R,S)-follnsyre, der er er særligt egnede som udgangsmateriale, er natrium-, kalium-, calcium-, magnesium-, strontium- eller bariumsaltet. Natrium- og især calcium- og 25 magnesiumsaltet foretrækkes, idet disse efter stedfunden adskillelse, isolering og oprensning direkte er anvendelige som lægemiddelstoffer.
Ved de uorganiske eller organiske syrer, som ligger til grund for de tilsvarende salte, drejer det sig fortrinsvis om stærke syrer, idet de organiske syrer fortrinsvis indeholder 1-4 30 carbonatomer.
Som uorganiske syrer kan nævnes: iodbrintesyre, brombrintesyre, chlorbrintesyre, salpetersyre og som organiske syrer myresyre, mælkesyre, citronsyre, methansulfonsyre.
Som vandopløselige alkali-, ammonium- eller jordalkalisalte har halogeniderne, Især iodi-w 35 det og bromldet, vist sig at være særdeles gode.
DK 173425 B1 6
Enkeltvis foretrækkes: natriumiodid, natriumbromid, natriumchlorid, kaliumiodid, kalium-bromid, kaliumchlorid, ammoniumiodid, ammoniumbromid, ammoniumchlorid, calciumio-did, calciumbromid, calciumchlorid, magnesiumbromid, magnesiumchlorid, strontiumbro-mid, strontiumchlorid, bariumiodid, bariumbromid, bariumchlorid.
5
Tilsætning af et vandopløseiigt jordalkalisalt, fortrinsvis calciumiodid, calciumbromid, calciumchlorid, magnesiumbromid eller magnesiumchlorid, finder hensigtsmæssigt sted til en opløsning af et alkali-(6R,S)-folinat.
10 Adskillelsen ifølge opfindelsen lykkes imidlertid også ved tilsætning af andre vandopløselige alkali-, ammonium- og jordalkalisalte såsom natriumnitrat, kaliumnitrat, ammoniumnitrat, natriumformiat, natriumlactat, natriumcitrat, calciumlactat eller natriummethansulfo-nat.
15 Som organiske opløsningsmidler, der er blandbare med vand, til isolering af (6S)-folinatet egner sig lavere alkoholer såsom methanol, ethanol, n-propanol, isopropanol, glycolethe-re såsom 2-methoxyethanol, 2-ethoxyethanol, 2-butyloxyethanoI, 1-methoxy-2-propanol, 1,2-dimethoxyethan, 1,2-diethoxyethan, endvidere dioxan, tetrahydrofuran, lavere ketoner såsom acetone, methylethylketon, methoxyacetone, 1,3-dimethoxyacetone samt acetoni-20 tril. Lavere alkoholer eller ketoner foretrækkes, især methanol, ethanol, isopropanol og acetone.
Som vandopløselige jordalkalisalte til udskillelse af tilsvarende (6S)-folinater egner sig jordalkalihalogenider såsom calciumchlorid, calciumbromid, calciumiodid, magnesium-25 chlorid, magnesiumbromid, strontiumchlorid, strontiumbromid eller et bariumhalogenid. Til dette formål foretrækkes calciumchlorid og magnesiumchlorid.
Opfindelsen er således yderligere ejendommelig ved, at der som alkali- eller jordalkalisalt af (6R,S)-folinsyre fortrinsvis anvendes natrium-, calcium- eller magnesiumsaltet, som 30 vandopløseligt salt af en uorganisk syre fortrinsvis anvendes natrium-, kalium- eller am-moniumhalogenid, især natriumiodid, natriumbromid, natriumchlorid, kaliumiodid, kalium-bromid, kaliumchlorid, ammoniumiodid, ammoniumbromid og/eiler ammoniumchlorid, og til udskillelse af det tilsvarende (6S)-folinat foretrækkes som organisk opløsningsmiddel en lavere alkohol eller en lavere keton og/eller som vandopløseligt jordalkalisalt et caici-35 um- eller magnesiumhalogenid.
7 DK 173425 B1
Nedenstående eksempler illustrerer opfindelsen: 5 EKSEMPEL 1
Adskillelse af calcium-(6R,S)-folinat og isolering af calcium-(6R)-folinat samt af calcium-(6S)-folinat.
10 50 g rent calcium-(6R,S)-folinat opløses i 500 ml vand og omsættes med 100 g natriumio-did. Opløsningens pH indstilles på 7,0. Opløsningen afkøles derefter under omrøring til 1°C. Opløsningens pH stiger til ca. 7,7. Efter 15-20 timer frafiltreres det udfældede produkt og vaskes med koncentreret, vandig natriumiodidopløsning og derefter med ethanol.
Der fås calcium-(6R)-folinat med (6R)-indhold på 98,1%; bestemt ved hjælp af HPLC un-15 der anvendelse af en chiral søjle (Resolvosil-BSA-7). Efter omkrystallisation af vand i nærværelse af calciumchlorid fås rent calcium-(6R)-folinat med et (6R)-indhold på 100,0%.
Specifik drejning [a]2D0 - +43,7° (henført til vandfrit Ca-salt).
Opløselighed i vand: ved 20°C: 2,0 g/100 ml 20
Filtratet omsættes med ethanol og afkøles under omrøring til 3°C. Efter ca. 15-20 timer frafiltreres det udfældede produkt og vaskes med ethanol. Der fås calciumfolinat indeholdende 84% calcium-(6S)-folinat og 16% calcium-(6R)-folinat.
Ved omkrystallisation af vand i nærværelse af calciumchlorid fås deraf calcium-(6S)-foli-25 nat med et (6S)-indhold på 97,6%. Efter en yderligere om krystallisation udgør (6S)-ind-holdet ^99,5%.
Specifik drejning: [a]2D0 = -15° (henført til vandfrit Ca-salt).
30 EKSEMPEL 2
Adskillelse af (6R,S)-folinsyre og isolering af natrium-(6R)-folinat og calcium-(6S)-folinat, 25 g (6R,S)-folinsyre opslaemmes i 70 ml vand og bringes i opløsning ved tilsætning af 49 ^ 35 ml 2N natriumhydroxid. Opløsningen omsættes med 40 g natriumchlorid og 140 g natri- DK 173425 B1 8 umiodid. Der dannes en geléagtig udfældning. Denne frafiltreres efter nogle timer og vaskes med methanol. Der fås optisk rent natrium-(6R)-folinat med et (6R)-indhold på 99%. Moderluden omsættes med 25 g calciumchlorid og indstilles på pH 8,5, hvorefter calcium-(6S)-folinat med et (6S)-indhold på 78% efterhånden udfældes. Dette rå calcium-(6S)-foli-5 nat opløses ved 30-35°C i vand, tilsættes aktivt kul og et filterhjælpemiddel (Solkafloc®), filtreres, inddampes til en koncentration på 10% og lades krystallisere ved 5-1 °C. Der fås calcium-(6S)-folinat med et (6S)-indhold på tilnærmelsesvist 98%.
10 EKSEMPEL 3
Adskillelse af (6R,S)-folinsyre og isolering af natrium-(6R)-folinat og magnesium-(6S)-foli-nat.
15 25 g (6R,S)-folinsyre opslæmmes i 75 ml vand og bringes i opløsning ved tilsætning af 5N vandig natriumhydroxid. Den svagt alkaliske opløsning omsættes under omrøring med 75 g natriumbromid og derefter med 200 ml methanol. Efter 2 uger udkrystalliseres efterhånden natrium-(6R)-folinat. Dette produkt frafiltreres, vaskes med methanol og tørres. Der fås optisk, praktisk taget ren natrium-(6R)-folinat med et (6R)-indhold på 98%.
20 Specifik drejning [a]2D4 = +39,5° (henført til vandfrit Na-salt, c= 1% i vand)
Moderluden befris for methanol, indstilles på pH 9,8, omsættes med 25 g magnesiumchlo-rid og omrøres langsomt. Efter nogen tid udkrystalliseres efterhånden magnesium-(6S)-25 folinat Dette frafiltreres efter ca. 100 timer, udvaskes med ethanol og tørres. (6S)-indhold 85%. Ved omkrystallisation i nærværelse af magnesiumchlorid fås optisk rent magnesi-um-(6S)-folinat.
30 EKSEMPEL 4
Adskillelse af natrium-(6R,S)-folinat og isolering af de to diastereomerer.
-w 9 DK 173425 B1 25 g (6R,S)-folinsyre bringes i opløsning i 75 ml vand ved tilsætning af 5N vandig natriumhydroxid, omsættes ved 20°C med 140 g natriumiodid og afkøles under omrøring til 5°C.
Efter henstand natten over frafiltreres det udfældede natrium-(6R)-folinat og vaskes med 5 acetone. Det opnåede produkt har en (6R)-andel på 82,9%.
De samlede moderlude omsættes med 600 ml acetone og omrøres ved 0°C. Den fremkomne udfældning frafiltreres. Den består overvejende af natrium-(6S)-folinat med en (6S)-andel på 71%.
10 EKSEMPEL 5
Adskillelse af calcium-(6R,S)-folinat ved tilsætning af ammoniumiodid i tilnærmelsesvist neutralt miljø.
15 50 g calcium-(6R,S)-folinat og 100 g ammoniumiodid opløses i 500 ml vand ved 36°C. Opløsningen har en pH på 7,7. Den lades nu langsomt afkøle til stuetemperatur under omrøring, afkøles under stadig omrøring videre til 5°C og endelig til 0-2°C; opløsningen podes ved tilsætning af nogle mg rent calcium-(6R)-folinat, hvorefter krystallisation ind-20 træder.
Det derved udkrystalliserede produkt, der overvejende består af ca(cium-(6R)-folinat, frafiltreres, vaskes med ethanol og tørres. Indhold af (6R)-folinat: 98%.
Filtratet samles med vaskeopløsningen og tilsættes under omrøring yderligere 11 ethanol.
25 Den efterhånden udfældede fraktion, der hovedsagelig består af calcium-(6S)-folinat, frafiltreres, vaskes med ethanol og tørres. Indholdet af (6S)-folinat udgør 96%.
Opnået råt ca!cium-(6R)-folmat og calcium-(6S)-folinat omkrystalliseres hver for sig af en smule vand under tilsætning af aktivt kul og filterhjælpemiddel, hvorved indholdet af henholdsvis (6R)- og (6S)-folinat stiger til 99,5-99,7%.
30 EKSEMPEL 6
Adskillelse af calcium-(6R,S)-folinat ved tilsætning af natriumbromid i tilnærmelsesvist T 35 neutralt miljø og efterfølgende isolering af calcium-(6S)-folinat ved tilsætning af CaCI2.
DK 173425 B1 10 50 g ca!cium-(6R,S)-folinat i 500 ml vand omsættes med 75 g natriumbromid. Opløsningens pH er 7,4. Under omrøring nedkøles fra 35°C til 1-3°C, hvorpå langsom krystallisation indtræder.
5 Krystallisatet frafiltreres og vaskes med methanol. Det opnåede krystallisat, der består af calcium-(6R)-folinat, har et (6R)-indhold på 93%. Filtratet omsættes med 100 g calcium-chlorid, hvorefter calcium-(6S)-folinat udfældes. Det frafiltreres og vaskes med ethanol.
Det opnåede Ca-(6S)-folinat har et (6S)-indhold på 84%. Ved omkrystallisation af en smule vand i nærværelse af calciumchlorid fås rent calcium-(6S)-fo(inat med et (6S)-ind-10 hold på 99,6% i godt udbytte.
EKSEMPEL 7 15 Adskillelse af calcium-(6R,S)-folinat i tilnærmelsesvist neutralt miljø ved tilsætning af am-moniumbromid.
50 g calcium-(6R,S)-folinat i 500 ml vand omsættes med 70 g ammoniumbromid. Opløsningens pH er 6,5. Den vundne opløsning nedkøles under omrøring til 0°C og podes med 20 autentisk Ca-(6R)-folinat. Lidt efter lidt indtræder krystallisation. Når mængden af Ca-(6S)-indhold i den ovenstående opløsning ikke mere stiger, dvs. når der ikke udfældes yderligere mængder af Ca-(6R)-folinat, frafiltreres og vaskes med methanol og ethanol.
Det opnåede Ca-(6R)-folinat har et (6R)-indhold på 93,8%.
Filtratet omsættes med 100 g calciumchlorid og indstilles på pH 7, hvorefter Ca-(6S)-foIi-25 nat lidt efter lidt udfælde s. Det vundne produkt frafiltreres og vaskes med ethanol. Indholdet af Ca-(6S)-folinat udgør 98,7%. Ved omkrystallisation i nærværelse af calciumchlorid vindes rent Ca-(6S)-fo!inat ud fra dette.
30 EKSEMPEL 8
Adskillelse af calcium-(6R,S)-folinat ved tilsætning af kaliumiodid.
50 g calcium-(6R,S)-folinat omsættes med 500 ml vand og 110 g kaliumiodid og bringes i 35 opløsning ved 55°C. Den vundne opløsning (pH 7,1) nedkøles under omrøring trinvis til 11 DK 173425 B1 0°C og podes med autentisk Ca-(6R)-folinat. Efter henstand natten over frafiltreres det udfældede krystaDisat og vaskes med en smule kaliumiodidopløsning og med ethanol.
Det således vundne Ca-(6R)-folinat er temmeligt rent. Indholdet af (6R)-diastereomeren udgør 99,1%.
5
Filtratet omsættes ved 60°C med 100 g calciumchlorid i 50 ml vand, indstilles ved tilsætning af en smule natriumhydroxid på pH 7,3 og nedkøles trinvis til 15°C, hvorved calcium-(6S)-folinat udkrystalliseres.
10 Efter 3 dage frafiltreres krystallisatet og vaskes med kold calciumchloridopløsning og med ethanol. Calcium-(6S)-folinatet, der vindes i højt udbytte, har et (6S)-indhold på 97,3%.
EKSEMPEL 9 15
Adskillelse af calcium-(6R,S)-folinat ved tilsætning af natriumchlorid.
50 g rent calcium-(6R,S)-folinat opløses ved 60°C i 320 ml vand, omsættes med 35 g natriumchlorid og nedkøles under omrøring efterhånden til 0°C og podes derved med auten-20 tisk Ca-(6R)-folinat. Krystallisatet, der langsomt udfældes, frafiltreres. Det består af råt Ca-(6R)-folinat med et (6R)-indhold på 82,5%.
Af filtratet vindes efter tilsætning af calciumchlorid og ethanol Ca-(6S)-folinat.
Ved at gå frem på samme måde, men halvere mængden af tilsat natriumchlorid til 17,5 g, vindes råt Ca-(6R)-folinat med en (6R)-andel på kun knapt 67%. Omtrent det samme re-25 sultat opnås, nemlig når der tilsættes 35 g natriumchlorid, men i stedet for Ca-(6R)-folinat til podning anvendes Ca-(6R,S)-folinat.
W i 12 DK 173425 B1 EKSEMPEL 10
Adskillelse af 50 g calcium-(6R,S)-folinat 1500 ml vand ved tilsætning af 35 g ammonium-chlorid analogt med eksempel 7.
5
Der fås Ca-(6R)-folinat med et (6R)-indhold på 92,7% og, efter tilsætning af 100 g calci-umchlorid til moderluden, Ca-(6S)-folinat med et (6S)-indhold på 97%.
10 EKSEMPEL 11
Adskillelse af 50 g calcium-(6R,S)-folinat ved tilsætning af 100 g tetramethylammonium-bromid i 500 ml vand analogt med eksempel 7.
15 Der fås Ca-(6R)-folinat med et (6R)-indhold på 89,1% og Ca-(6S)-folinat med et (6S)-ind-hold på 97,4%.
EKSEMPEL 12 20
Adskillelse af 50 g calcium-(6R,S)-fofinat i 400 ml vand ved tilsætning af ca. 125 g dietha-nolaminhydrobromid i 100 mi vand.
Ved en adskillelse analogt med den I eksempel 7 beskrevne fås: 25 Ca-(6R)-folinat med et (6R)-indhold på 99,1% og Ca-(6S)-folinat med et (6S)-indhold på 80%.
EKSEMPEL 13 30
Adskillelse af calcium-(6R,S)-folinat, der er vundet in situ ud fra 5,10-methenyltetrahydro-folsyre [5,10-CH-(6R,S)-THF * anhydroleucovorin] med ammoniumbromid eller ammoni-umchlorid.
▼ 13 DK 173425 B1 12,6 g calciumhydroxid opløses i 900 ml vand ved 90°C. Opløsningen omsættes under omrøring inden for nogle minutter med 110 g anhydroleucovorinbromid-hydrobromid ([5,10-CH-(6R,S)-THF](+)Br(-).HBr) og samtidig med 25%'s vandig ammoniak fortil stadighed at holde reaktionsopløsningens pH på 6. Den vundne opløsning koges yderligere 5 3-4 timer ved pH 6 under tilbagesvaling, hvorved der dannes Ca-(6R,S)-folinat (5-CHO-THF). Reaktionsopløsningen klares ved behandling med aktivt kul og filterhjælpemiddel, omsættes med 100 g ammoniumbromid, indstilles på pH 7, afkøles og podes med autentisk Ca-(6R)-folinat, hvorefter størstedelen af det tilstedeværende Ca-(6R)-folinat lidt efter lidt udfældes. Krystallisatet frafiltreres og vaskes. Det har et (6R)-indhold på 98,3%.
10 Filtratet omsættes med 200 g calciumchlorid i 100 g vand, indstilles på pH 7 og podes med autentisk Ca-(6S)-folinat, hvorefter det tilstedeværende Ca-(6S)-folinat udkrystalliserer. Krystallisatet frafiltreres. Det har et (6S)-indho!d på 92%.
I det foregående eksempel kan anhydroleucovorinbromid-hydrobromid også erstattes 15 med den ækvivalente mængde anhydroleucovorinchlorid-hydrochlorid, og ammoniumbromid kan erstattes med den samme mængde ammoniumbromid. Derved opnås et lignende resultat.
På samme måde som beskrevet i de ovenstående eksempler gennemføres følgende 20 analoge adskillelser: EKSEMPEL 14 25 Adskillelse af magnesium-(6R,S)-folinat i dets komponenter ved tilsætning af ammoniumbromid i tilnærmelsesvist neutralt miljø.
EKSEMPEL 15 30
Adskillelse af strontrium-(6R,S)-folinat ved tilsætning af natriumiodid, fraskillelse afSr-(6R)-folinat og efterfølgende udfældning af Sr-(6S)-folinat ved tilsætning af 2-methoxy-ethanol og strontriumchlorid.
t 35 DK 173425 Bl 14 EKSEMPEL 16
Adskillelse af barium-(6R,S)-folinat og isolering af Ba-(6R)-folinat og af Ba-(6S)-folinat først ved tilsætning af bariumiodid og derefter 1,2-dimethoxyethan.
5 EKSEMPEL 17
Adskillelse af natriunv(6R,S)-folinat ved tilsætning af magnesiumbromid, adskillelse af 10 magnesium-(6R)-folinat, tilsætning af calciumchlorid til filtratet og isolering af calcium-(6S)-folinat.
EKSEMPEL 18 15
Adskillelse af calcium-(6R,S)-folinat ved tilsætning af magnesiumbromid, adskillelse af det udfældede (6R)-folinat, tilsætning af calciumchlorid til filtratet og isolering af det deraf udfældede calcium-(6S)-folinat.
20 EKSEMPEL 19
Adskillelse af Ca-(6R,S)-folinat ved tilsætning af tetraethylammoniumbromid.
25 EKSEMPEL 20
Adskillelse af Ca-(6R,S)-folinat ved tilsætning af tetrabutylammoniumbromid.
30 EKSEMPEL 21
Adskillelse af Ca-(6R,S)-folinat ved tilsætning af triethylaminhydrochlorid.
35 EKSEMPEL 22 15 DK 173425 B1
Adskillelse af Mg-(6R,S)-folinat ved tilsætning af diethanolaminhydrochlorid.
5 EKSEMPEL 23
Adskillelse af Ca-(6R,S)-folinat ved tilsætning af benzylaminhydroiodid.
10 EKSEMPEL 24
Adskillelse af Ca-(6RpS)-folinat ved tilsætning af morpholinhydrobromid.
Claims (7)
1. Fremgangsmåde til adskillelse af (6R,S)-folinater, 5 kendetegnet ved, at en vandig opløsning af et salt af (6R,S)-folinsyre omsættes med et vandopløseligt alkali-, ammonium- eller jordalkalisalt af en uorganisk eller organisk syre, det udfældede (6R)-folinat frafiltreres, og (6S)-folinatet isoleres fra filtratet.
2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, 10 kendetegnet ved, at (6S)-folinatet udfældes af filtratet ved tilsætning af et organisk opløsningsmiddel, der er blandbart med vand, og/eller fortrinsvis et vandopløseligt jordalkalisalt, frafiltreres og eventuelt omkrystalliseres.
3. Fremgangsmåde ifølge krav 1, 15 kendetegnet ved, at adskillelsen af jordalkalisaltene af (6R,S)-folinsyrer gennemføres ved tilnærmelsesvist neutral pH.
4. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at der som salt af (6R,S)-folinsyre anvendes natrium- eller især 20 calcium- eller magnesiumsaftet.
5. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at der som vandopløseligt alkali- eller ammoniumsalt af en organisk syre anvendes et natrium-, kalium- eller ammoniumhalogenid, især natriumiodid, na-25 triumbromid, natriumchlorid, kaliumiodid, kaliumbromid, kaliumchlorid, ammonlumiodid, ammoniumbromid og/eller ammoniumchlorid.
6. Fremgangsmåde ifølge krav 2, kendetegnet ved, at der som organisk opløsningsmiddel anvendes en lavere alko-30 hol eller en lavere keton.
7. Fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af kravene 1, 2 eller 6, kendetegnet ved, at der som vandopløseligt jordalkalisalt til udfældning af (6SH°~ linatet anvendes et calcium- eller magnesiumhalogenid.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CH4182/88A CH676981A5 (da) | 1988-11-11 | 1988-11-11 | |
| CH418288 | 1988-11-11 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK515789D0 DK515789D0 (da) | 1989-10-17 |
| DK515789A DK515789A (da) | 1990-05-12 |
| DK173425B1 true DK173425B1 (da) | 2000-10-09 |
Family
ID=4271318
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK198905157A DK173425B1 (da) | 1988-11-11 | 1989-10-17 | Fremgangsmåde til adskillelse af (6R,S)-folinater |
Country Status (21)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5010194A (da) |
| EP (1) | EP0367902B1 (da) |
| JP (1) | JPH0645621B2 (da) |
| KR (1) | KR920005744B1 (da) |
| CN (1) | CN1029956C (da) |
| AR (1) | AR245130A1 (da) |
| AT (1) | ATE102201T1 (da) |
| AU (1) | AU607641B2 (da) |
| CA (1) | CA2002430C (da) |
| CH (1) | CH676981A5 (da) |
| DD (1) | DD284879A5 (da) |
| DE (1) | DE58907088D1 (da) |
| DK (1) | DK173425B1 (da) |
| ES (1) | ES2061804T3 (da) |
| FI (1) | FI91157C (da) |
| HU (1) | HU201777B (da) |
| IE (1) | IE63929B1 (da) |
| NO (1) | NO170334C (da) |
| NZ (1) | NZ231193A (da) |
| PT (1) | PT92232B (da) |
| ZA (1) | ZA897284B (da) |
Families Citing this family (20)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5124452A (en) * | 1978-07-10 | 1992-06-23 | Bioresearch S.P.A. | Process for producing d,1-5-methyltetrahydrofolic acid and its salts |
| GB8621268D0 (en) * | 1986-09-03 | 1986-10-08 | Univ Strathclyde | Separation of substances |
| CH673459A5 (da) * | 1987-05-15 | 1990-03-15 | Eprova Ag | |
| FR2643081B1 (fr) * | 1989-02-14 | 1991-06-07 | Panmedica Sa | Folates de magnesium, procede de preparation et compositions pharmaceutiques |
| CH680731A5 (da) * | 1990-04-12 | 1992-10-30 | Sapec Fine Chemicals | |
| CH681303A5 (da) * | 1991-01-16 | 1993-02-26 | Eprova Ag | |
| EP0505640B2 (en) † | 1991-03-29 | 2002-02-27 | Eli Lilly And Company | Improved therapeutic method |
| US5217974A (en) * | 1991-03-29 | 1993-06-08 | Eli Lilly And Company | Method for treating gar-transformylase tumors in mammals and reducing mammalian toxicity |
| CH684270A5 (de) * | 1991-10-04 | 1994-08-15 | Sapec Fine Chemicals | Verfahren zur Herstellung von Erdalkalimetallsalzen von (6R)-N(10)-Formyl-5,6,7,8-tetrahydrofolsäure. |
| DE4136921A1 (de) * | 1991-11-11 | 1993-05-13 | Knoll Ag | Verfahren zur trennung von 5-methyl-tetrahydrofolsaeure |
| CH683262A5 (it) * | 1992-01-22 | 1994-02-15 | Applied Pharma Res | Procedimento per la separazione dei diastereomeri del sale di calcio dell'acido (6(R,S)-N-formiltetraidrofolico). |
| US5599931A (en) * | 1992-02-20 | 1997-02-04 | Bracco S.P.A. | Process for separating stereoisomers of folinic acid |
| IT1254635B (it) * | 1992-02-20 | 1995-09-28 | Bracco Spa | Processo per la separazione degli stereoisomeri dell'acido folinico |
| US5198547A (en) * | 1992-03-16 | 1993-03-30 | South Alabama Medical Science Foundation, Usa | Process for N5-formylating tetrahydropteridines |
| US5441960A (en) * | 1992-04-16 | 1995-08-15 | Zeneca Limited | 1-pyrimidinylacetamide human leukocyte elastate inhibitors |
| US5698693A (en) * | 1992-11-16 | 1997-12-16 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Process of separating the diastereomers of (6R,6S) -5,6,7,8-tetrahydrofolic acid derivatives |
| CH686672A5 (de) * | 1992-12-01 | 1996-05-31 | Cerbios Pharma Sa | Verfahren zur Herstellung von (6S)-5,6,7,8-Tetrahydrofolsaeure. |
| US5710271A (en) * | 1994-06-08 | 1998-01-20 | Dibra S.P.A. | Process for the preparation and separation of diastereomeric salts of folinic acid |
| US7721732B2 (en) * | 2002-04-04 | 2010-05-25 | Qxtec, Inc. | Respiratory heat exchanger |
| CN101792444B (zh) * | 2009-02-02 | 2011-10-12 | 天津康鸿医药科技发展有限公司 | 左亚叶酸钠及其制备方法及药物组合物 |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US2688018A (en) * | 1952-06-28 | 1954-08-31 | American Cyanamid Co | Method of preparing alkaline earth metal salts of 1-leucovorin |
| US4500711A (en) * | 1977-03-21 | 1985-02-19 | Burroughs Wellcome Co. | Synthesis of leucovorin |
| US4148999A (en) * | 1977-08-22 | 1979-04-10 | The Government Of The United States Of America | Preparation and purification of citrovorum factor |
| CH649550A5 (en) * | 1984-02-09 | 1985-05-31 | Eprova Ag | Process for the preparation of alkaline earth metal salts of 5-methyltetrahydrofolic acid |
| GB8621268D0 (en) * | 1986-09-03 | 1986-10-08 | Univ Strathclyde | Separation of substances |
| CH673459A5 (da) * | 1987-05-15 | 1990-03-15 | Eprova Ag |
-
1988
- 1988-11-11 CH CH4182/88A patent/CH676981A5/de not_active IP Right Cessation
-
1989
- 1989-06-29 AT AT89111820T patent/ATE102201T1/de not_active IP Right Cessation
- 1989-06-29 ES ES89111820T patent/ES2061804T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1989-06-29 DE DE89111820T patent/DE58907088D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1989-06-29 EP EP89111820A patent/EP0367902B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1989-09-25 ZA ZA897284A patent/ZA897284B/xx unknown
- 1989-10-17 DK DK198905157A patent/DK173425B1/da not_active IP Right Cessation
- 1989-10-30 NZ NZ231193A patent/NZ231193A/en unknown
- 1989-10-31 AU AU43924/89A patent/AU607641B2/en not_active Expired
- 1989-11-01 DD DD89334113A patent/DD284879A5/de unknown
- 1989-11-07 US US07/432,819 patent/US5010194A/en not_active Expired - Lifetime
- 1989-11-07 CA CA002002430A patent/CA2002430C/en not_active Expired - Lifetime
- 1989-11-08 AR AR89315393A patent/AR245130A1/es active
- 1989-11-08 PT PT92232A patent/PT92232B/pt not_active IP Right Cessation
- 1989-11-09 JP JP1290140A patent/JPH0645621B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1989-11-10 NO NO894499A patent/NO170334C/no not_active IP Right Cessation
- 1989-11-10 CN CN89109727A patent/CN1029956C/zh not_active Expired - Lifetime
- 1989-11-10 HU HU895859A patent/HU201777B/hu unknown
- 1989-11-10 FI FI895380A patent/FI91157C/fi active IP Right Grant
- 1989-11-10 IE IE362389A patent/IE63929B1/en not_active IP Right Cessation
- 1989-11-10 KR KR1019890016278A patent/KR920005744B1/ko not_active IP Right Cessation
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DK173425B1 (da) | Fremgangsmåde til adskillelse af (6R,S)-folinater | |
| DK175118B1 (da) | Fremgangsmåde til fremstilling af folinsyrederivater samt salte af 5,10-methenyl-(6R)-tetrahydrofolsyre | |
| JPH089618B2 (ja) | ホリニン酸の分離方法 | |
| KR920010048B1 (ko) | 광학 활성 피리도벤즈옥사진 유도체 및 이의 중간체의 제조방법 | |
| KR0142189B1 (ko) | 치환된 피리미딘 유도체 | |
| US3976680A (en) | Production of an ester of one enantiomer of an α-amino acid in the form of a salt with an optically active acid | |
| JP2003201291A (ja) | 安定な結晶性（６ｓ）−テトラヒドロ葉酸 | |
| FR2659330A1 (fr) | Composes diastereoisomeres derivant de l'acide tetrahydrofolique, procede de preparation et utilisation dans la synthese de diastereomeres 6s et 6r de folates reduits. | |
| US4067867A (en) | Process for preparing pyrazine precursor of methotrexate or an N-substituted derivative thereof and/or a di(lower)alkyl ester thereof | |
| SU795478A3 (ru) | Способ получени 7-азабензимидазо-лОВ или иХ СОлЕй | |
| JPH041757B2 (da) | ||
| JPS6178778A (ja) | ４，５‐ジヒドロ‐４‐オキソ‐２‐〔（２‐ｔｒａｎｓ‐フエニルシクロプロピル）アミノ〕‐３‐フランカルボン酸とその誘導体 | |
| US3887606A (en) | Process for the preparation of DL-phenylglycine esters | |
| SU1282815A3 (ru) | Способ получени оптически активных транс-1Н-пропил-6-оксо-гидрохинолинов | |
| CS200205B2 (en) | Method of producing aminocyclols | |
| JP4014329B2 (ja) | キノリン誘導体の精製法 | |
| HU195485B (en) | Process for producing aromatic carboxylic acid derivatives and -carboxamide derivatives | |
| JPH01275556A (ja) | プロリン誘導体 | |
| NO822870L (no) | Prosess for produksjon av penicillin- og cephalosporinderivater |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| B1 | Patent granted (law 1993) | ||
| PUP | Patent expired |