DK171798B1 - Fremgangsmåde til fremstilling af paramunitetsinducere - Google Patents

Fremgangsmåde til fremstilling af paramunitetsinducere Download PDF

Info

Publication number
DK171798B1
DK171798B1 DK573888A DK573888A DK171798B1 DK 171798 B1 DK171798 B1 DK 171798B1 DK 573888 A DK573888 A DK 573888A DK 573888 A DK573888 A DK 573888A DK 171798 B1 DK171798 B1 DK 171798B1
Authority
DK
Denmark
Prior art keywords
virus
paramunity
inducers
inactivation
pind
Prior art date
Application number
DK573888A
Other languages
English (en)
Other versions
DK573888D0 (da
DK573888A (da
Inventor
Anton Mayr
Peter Thein
Walter Strube
Original Assignee
Bayer Ag
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Bayer Ag filed Critical Bayer Ag
Publication of DK573888D0 publication Critical patent/DK573888D0/da
Publication of DK573888A publication Critical patent/DK573888A/da
Application granted granted Critical
Publication of DK171798B1 publication Critical patent/DK171798B1/da

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/15—Reoviridae, e.g. calf diarrhea virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/155—Paramyxoviridae, e.g. parainfluenza virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/155—Paramyxoviridae, e.g. parainfluenza virus
    • A61K39/17—Newcastle disease virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/275—Poxviridae, e.g. avipoxvirus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/275—Poxviridae, e.g. avipoxvirus
    • A61K39/285—Vaccinia virus or variola virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/525—Virus
    • A61K2039/5252—Virus inactivated (killed)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/525—Virus
    • A61K2039/5254—Virus avirulent or attenuated
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/24011—Poxviridae
    • C12N2710/24111—Orthopoxvirus, e.g. vaccinia virus, variola
    • C12N2710/24134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/24011—Poxviridae
    • C12N2710/24211—Parapoxvirus, e.g. Orf virus
    • C12N2710/24234—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/24011—Poxviridae
    • C12N2710/24211—Parapoxvirus, e.g. Orf virus
    • C12N2710/24261—Methods of inactivation or attenuation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2720/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsRNA viruses
    • C12N2720/00011—Details
    • C12N2720/12011—Reoviridae
    • C12N2720/12034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/18011—Paramyxoviridae
    • C12N2760/18111—Avulavirus, e.g. Newcastle disease virus
    • C12N2760/18134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/8215—Microorganisms
    • Y10S435/948—Microorganisms using viruses or cell lines

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Description

i DK 171798 B1
Den foreliggende opfindelse angår en fremgangsmåde til fremstilling af paramunitetsinducere ud fra virusser ved en totrinsbehandling, der fører til inaktivering under samtidig nedsættelse af antigeniteten, men ikke ødelægger 5 de paramuniserende aktiviteter.
Ved paramunisering forstås ifølge A. Mayr erhvervelse af hurtigt opstående, forskellige længe varende, ikke-or-ganisme- og ikke-antigenspecifik (paraspecifik) beskyttelse af et individ over for flere ganske forskellige infektioner, 10 toxiner og antigener. Den paraspecifikke beskyttelse (para-munitet) opstår ved stimulering af den paraspecifikke del af det cellulære og humorale immunsystem.
Paramunitet kan erhverves på naturlig måde under forløbet af en infektion eller medikamentelt ved hjælp af 15 paramunitetsinducere, immunomodulatorer, "biological response modifiers" (BRM) osv. Kendte paramunitetsinducere er f.eks. inaktiverede fjerkrækoppevirusser, parakoppevirusser eller orthokoppevirusser (Tierårztl. Praxis 14. s. 237-244 (1986)].
Inaktiveringen af kendte paramunitetsinducere sker 20 ved hjælp af gammastråler, ved opvarmning eller ved kemiske metoder (DE offentliggørelsesskrift nr. 2.714.665). En totrins inaktiveringsmetode til fremstilling af paramunitetsinducere er hidtil ukendt.
De anvendte metoder er i og for sig ikke teknisk 25 nye. De er imidlertid inden for virologien hidtil udelukkende blevet anvendt til andre formål. Zwartouw et. al. [J. gen. Microbiol. 39-45 (1965)] har ved hjælp af varme og alkaliser ing isoleret udfældende antigener fra vacciniapartikler. Disse arbejder gjaldt ikke en inaktivering, men havde det 30 mål at påvise antigener i den ovenstående væske af behandlede virussuspensioner efter forskellig forbehandling af udgangsmaterialet med serum, hvori der var indeholdt antistoffer mod det komplette virus.
I det valgte system kunne disse forfattere kun påvise, 35 at der efter den kemisk-termiske behandling af vacciniavirus forekom en kvantitativt svagere udpræget anti-antistof-reak- DK 171798 B1 2 tion.
De hidtidige erfaringer ned paramunitetsinducere ud fra koppevirusser og paramyxovirusser beviser, at to kriterier er vigtige for virkningen af sådanne inducere: 51. en skånsom inaktivering og 2. en reduktion af den samlede antigenitet ved samtidig bevarelse af de paramuniserende aktiviteter.
Det har vist sig, at der fås paramunitets inducere, når pH-værdien af virussuspensioner af virusser, der frem-10 kalder paramunitet, indstilles til værdier mellem 8 og 11, og der derefter opvarmes til 50-60*C i 40-120 minutter.
Det er overraskende, at kravet til inaktivering af virusserne og sænkning af den samlede antigenitet under bibeholdelse af de paramuniserende aktiviteter ikke blot 15 opfyldes på optimal måde ved hjælp af en kombination af alkalisering og opvarmning, men herved opnås yderligere fordele ved fremstilling af paramunitetsinducere. Disse fordele er følgende: 1. Enkelt gennemførelse af inaktiveringsmetoden uden 20 belastning med stråling eller toksiske kemikalier.
2. På grund af den forringede antigenitet nedsættes risikoen for sensibilisering efter gentagen anvendelse.
3. Forbedret økonomi på grund af forenklingen af fremstilling smetoden.
25
Fremgangsmåden gennemføres ved, at pH-værdien af virussuspensionen indstilles til værdier mellem ca. 8 og 11, fortrinsvis mellem ca. 9 og 10.
Til indstillingen anvendes vandige uorganiske alkali-30 metalhydroxider, f.eks. natrium-, kaliumhydroxid, carbonater, f.eks. natrium- eller kaliumcarbonat, hydrogencarbonater, f.eks. natrium- eller kaliumhydrogencarbonat.
Derefter gennemføres en termisk inaktivering ved opvarmning til ca. 50-60*C i 40-120 minutter, idet der fore-35 trækkes opvarmning til 55-60*C, især til ca. 56*C, i 60-120 minutter.
DK 171798 B1 3
Ved inaktiveringen arbejdes der særlig foretrukket ved en pH-værdi på ca. 10 og ved ca. 56'C i ca. 60-120 minut ter.
Som virusarter til fremstilling af paramunitetsin-5 ducere, der er særlig egnede til den her omhandlede inaktivering, skal der nævnes:
Koppevirusser, især af slægten Avipox, særlig foretrukket arten gallinae, svækket podestamme HP-1, 438. passage i kyllingefoster-fibroblast-kulturer (FHE). (Stammen er kendt, 10 f.eks. fra Collegium Veterinarium 1978, s. 35 ff. Virusstammen er deponeret under deponeringsbetegnelsen "Mayr-Stickl-Avipox-Interferon-Inducer" hos Landesimpfanstalt Nordrhein-Westfalen, Abteilung Virusziichtung und -priifung. Den er frit tilgængelig for offentligheden); af slægten parakop-15 pevirus særlig foretrukket arten orfvirus, svækket stamme c 1701, 138. passage i lammenyrekulturer eller embryonale bovine lungevævskulturer [stammen ORF D 1701 er kendt, f.eks. fra Tierårztl. Praxis 14., 237-244 (1986); laboratoriebeteg-nelse for den deraf fremstillede paramunitetsinducer: PIND-20 ORF. Stammen er deponeret som podestamme den 1. september 1981 hos Bayerische Landesimpfanstalt, Am Neudeck 1, 8000 Nunchen 95. Stammen er deponeret den 28. april 1988 hos Institut Pasteur, Collection Nationale de Cultures de Micro-organismes, 25 rue de Docteur Roux, 75724 Paris, under be-25 tegneisen CNCM 1-751; af slægten orthokoppevirus særlig foretrukket arten vac-ciniavirus, den svækkede stamme MVA, 530. passage af vac-cinavirus CVA i FHE-kulturer [stammen MVA er beskrevet af A. Mayr i Zbl. Bakt. Hyg. I. Abt. Orig. B, 1£Z, 367 (1978).
30 Den er tilladt til vaccinering mod menneskekopper af Paul-Ehrlich-Institut, Frankfurt, og er deponeret hos Institut fur Mikrobiologie, Dusseldorf.
Egnede til fremstilling af paramunitetsinducere ved den her omhandlede inaktivering er imidlertid også andre 35 virusarter, f.eks. paramyxovirusser, reovirusser, herpes-virusser.
DK 171798 B1 4
Formeringen af virusserne sker ferst på i og for sig kendt måde på egnede cellekulturer, f.eks. på cellekulturer af pattedyr- eller fugle-vævsceller. Der kan derved arbejdes i etlags-cellekulturer eller suspensionskulturer eller i 5 befrugtede hønseæg.
Som næringsmedier til etlags- eller suspensionskulturer anvendes de kendte medier, f.eks. ifølge Earle, Eagle, Hanks.
Virusset høstes ved kendte metoder og renses even-10 tuelt. virushøsten underkastes derefter den her omhandlede inaktiveringsmetode.
Den inaktiverede virushøst bliver derefter afkølet eller frysetørret og oplagret eller anvendt til fremstilling af en paramunitetsinducer. Til dette formål fremstilles 15 præparater, der kan indgives via slimhinden, f.eks. oralt eller intranasalt, og parenteralt, f.eks. intramuskulært eller subkutant.
De ifølge de følgende eksempler fremstillede paramu-nitetsinducere frysetørres og tjener i denne form som ud-20 gangsmateriale til fremstilling af tilsvarende lægemidler.
Til det frysetørrede materiale sættes der svarende til udgangsvolumenet før anvendelsen gængse farmaceutiske bærere, fortrinsvis sterilt pyrogenfrit destilleret vand. I denne præparatform egner det sig både til parenteral (f.eks. in-25 tramuskulær og subkutan) eller lokal indgivelse.
Paramunitetsinducerne kan også indarbejdes i andre farmaceutiske bærere. Der skal herved tages hensyn til, at steriliteten og holdbarheden ikke nedsættes, f.eks. på grund af proteolytiske bestanddele af bæreren.
30 Ved forebyggende behandling indgives paramunitetsin- ducere 1-3 gange med intervaller på 24 timer. Ved terapeutisk anvendélse gennemføres der alt efter sygdommens sværhedsgrad 1-3 behandlinger pr. dag i 3-5 dage. Dosis retter sig efter størrelsen af den pågældende art og efter indgivelsesformen 35 (f.eks. 4 ml ved parenteral indgivelse til okse, 0,5 ml ved parenteral indgivelse til hvalp (hund)).
DK 171798 B1 5
Eksempel 1
Som udgangsmateriale anvendes den svckkede, plaque-rensede (3 passager) fjerkrækoppevirusstamme HP-1 i den 441. kulturpassage i kyllingefoster-fibroblast-kulturer 5 (FHE) med en infektiøsitetstiter på 107'5 KIDso/ml. Til dyrkning af FHE-kulturerne anvendes Earle MEM med en tilsætning af 3% kalvefosterserum, og som bibeholdelsesmedium (virusmedium) Earle MEM uden tilsætninger. Ca. 90% tætte FHE-et-lags-kulturer podes med virusmaterialet (f.eks. 0,5 ml vi-10 russuspension pr. 200 ml medium pr. Rouxskål). Ca. 24 timer efter infektion, eller når cellekulturen er forandret virusspecifikt 80-100% (granulering, kugledannelse, lyse af celler) løsnes det stadig tilstedeværende cellelag ved rystning af kulturerne, og virusset og det celleholdige medium be-15 handles med ultralyd (Branson Sonifier, 15 min.) for at oplukke de stadig intakte celler. Det nedbrudte cellemateriale fracentrifugeres derefter ved lav hastighed.
Der udtages prøver af virushøsten til kontrol af steriliteten og infektiøsiteten. Kun virushøst, som er fri 20 for kontaminering (virus, bakterier, svampe, mykoplasma) og har en infektiøsitetstiter på mindst 107'25KID50/ml, videre-forarbejdes. Virus, som ikke opfylder disse krav, bortkastes.
Indtil den videre forarbejdning oplagres virushøsten ved +4*C eller -60*C.
25 Før påbegyndelsen af den totrins inaktivering opvarmes virusmaterialet til 37*C. I det første inaktiveringstrin indstilles virussuspensionen med 1 N natriumhydroxidopløsning til en pH-værdi på 10,0. Den basiske suspension bringes derefter straks ned i et vandbad med en temperatur på 56*C.
30 For at opnå en ensartet gennemblanding og opvarmning gen-nemblandes virussuspensionen konstant ved hjælp af en magnet omrører, og vandbadet gennembl andes konstant med en gængs omrører. Den termiske inaktivering gennemføres over 60 minutter.
35 Efter dette tidsrum konstateres det ved følgepassager, at der ikke mere kan påvises nogen restinfektiøsitet.
DK 171798 B1 6
Den således fremstillede paramunitetsinducer betegnes PIND-AVT*1 (termisk) og opbevares ved temperaturer på +4* C eller -60*C. Den kan også opbevares i frysetørret form.
Renheden, specificiteten og uskadeligheden af den 5 ifølge opfindelsen fremstillede paramunitetsinducer PIND-AVI^ kontrolleres ved tilsvarende kontrolundersøgelser.
Specificiteten, renheden og uskadeligheden opfylder kravene ifølge Europ. Arzneibuch med hensyn til følgende kriterier: 10 1. Elektronmikroskopisk kontrol ved gængse metoder viser i præparat massevis af typiske, til dels tomme kop-peviruspartikler. Præparatet er frit for andre mikrobielle strukturer.
2. De gængse kontroller af mikrobiel kontaminering viser, 15 at produktet er frit for andre virusser, bakterier, svampe og mykoplasmaer.
3. Ifølge retningslinierne i Europåische Arzneibuch undersøges toksicitet, teratogenitet og pyrogenitet, og der konstateres ingen positive resultater.
20 4. Kontrol af indholdet af ikke-inaktiveret restvirus.
Herved gennemføres der med den færdige paramunitetsinducer på gængs måde en titrering i FHE-rørkulturer, og infektiøsitetstiteren bestemmes ved hjælp af den optrædende cytopatiske effekt. Ved 3 yderligere føl-25 gepassager ligger restvirusindholdet ved 0.
Til påvisning af virkningen undersøges paramunitets-induceren ved den følgende metode:
Til in vivo-påvisning anvendes VSV-infektionsmodellen 30 hos babymus [J. Vet. Med. B, 21, 321-339 (1986)]. Den kan samtidig anvendes til bestemmelse af virkningsenhederne (WE/ml).
I tabel I er titreringen af virkningen af et PIND-AVI*· vist i VSV-modellen. En sådan titrering tjener til 35 bestemmelse af virkningsenhederne (WE/ml) af en portion.
Det fortyndingstrin, hvor der stadig opnås et virkningsindeks DK 171798 B1 7 på mindst 20, indeholder 1 HE pr. 0,1 ml (injektionsdosis pr. mus) eller 10 WE/ml (i eksemplet en sluttiter på 1:16, portionen indeholder 160 WE/ml).
5 Tabel.I
Titrering af paramunogen virkning af PIND-AVIt i VSV-infektionsmodellen
10 Eraeparfrt Fortvndingstrin VirKnipqsjndSiSS
PIND-AVIt 1 : 4 48 1:8 45 1 : 16 34 15 1 : 32 13
Til in vitro-påvisning af virkningen af den her omhandlede paramunitetsinducer anvendes aktiviteten af peri-toneale NK-celler 24 timer efter behandling med PIND-AVI^ 20 ved en 4-timers chrom-51-frigørelsestest [J. Vet. Med. B, 23, 321-339 (1986)]. Herved indgives 0,2 ml PIND-AVIt til mus 24 timer før udvindingen af celler. Resultaterne af denne prøve viser en dosisafhsngig virkning af PIND-AVI^.
Ved en in vitro-test undersøges indflydelsen af PIND-25 AVI*· på den kolonistimulerende aktivitet i serum af mus 8 timer efter behandlingen. Resultaterne af denne CSA-test viser en dosisafhsngig virkning af PIND-AVIt.
Eksempel 2 30 Som udgangsmateriale til fremstilling af en paramuni tetsinducer anvendes den attenuerede parapoxvirus ovis (ORF, ekthyma hos får), stamme D 1701, i den 138. kulturpassage (infektiøsitetstiter: 107,75KID5o/ml) i lammenyrekulturer eller embryonale okselungekulturer. Fremstillingen og inak-35 tiveringen af virushøsten sker som i eksempel 1, men med en forlænget termisk inaktivering på 2 timer. Efter ca. 2 timer DK 171798 B1 8 opnås en fuldstændig inaktivering af virusinfektiøsitet.
Undersøgelserne af renhed, uskadelighed, specificitet og virkning sker som beskrevet i eksempel 1. Der opnås de samme resultater som i eksempel l.
5
Eksempel 3
Fremstillingen af paramunitetsinduceren samt undersøgelsen af denne for renhed og virkning sker som i eksempel 1, men med den attenuerede orthopoxvirus commune, vaccinia-10 virus, stamme MVA. Det ved denne fremgangsmåde inaktiverede virus har paramuniserende egenskaber.
E&gS-Mpel_4
Fremstillingen af paramunitetsinduceren samt under-15 søgelsen af denne for renhed og virkning sker som beskrevet i eksempel 1, men med det lentogene Newcastle Disease virus (paramyxovirus), stamme Hitchner B^. Det ved denne fremgangsmåde inaktiverede virus har paramuniserende egenskaber.
20 Eksempel 5
Fremstillingen af paramunitetsinduceren samt undersøgelsen af denne for renhed og virkning sker som beskrevet i eksempel 1, men med reovirus serotype 3. Det ved denne fremgangsmåde inaktiverede virus har paramuniserende egen-25 skaber.
Eksempel 6
For at demonstrere anvendelsesmulighederne og virkningen af den ifølge eksempel 1 fremstillede paramunitets-30 inducer er eksempler på den terapeutiske og profylaktiske anvendelse sammenfattet i de følgende tabeller II og III.
Anvendelsen af PIND-AVI^ ved et dobbeltblindforsøg hos drægtige hunde og deres hvalpe viser tydeligt, at smitsom hvalpedød, der i regelen er karakteriseret ved en høj døde-35 lighed i den første leveuge, på virksom måde kan bringes under kontrol ved profylaktisk anvendelse af dette præparat DK 171798 B1 9 (tabel II).
Et dobbeltblindforsøg i et kalveopdræt, hvor der gennemføres behandling med PIND-AVI*- straks efter modtagelse af kalvene (2 x 4 ml i.m. med 24 timers mellemrum) viser 5 tydeligt, at præparatet har en udmærket profylaktisk virkning over for infektioner af forskellig genese.
Som det fremgår af resultaterne, kan infektionssygdomme af forskellig genese stoppes i deres forløb, mildnes eller hindres i at udbryde ved anvendelse af paramunitets-10 induceren.
Resultaterne viser endvidere uskadeligheden af den her omhandlede paramunitetsinducer. Der observeres ingen bivirkninger.
15 Tabel II
Virkning af PIND-AVI^ ved profylakse af smitsom hvalpedød.
Sygdomsbillede Behandlingsmetode Resultater 20 og antal behandlede tilfælde 42 nyfødte Moderhund i sidste alle 42 hval- 25 hvalpe fra uge af drægtighed: pe opdrættes 10 kuld, 2 x 1 ml i.m. sunde.
behandlede nyfødte hvalpe: 0,5 ml i.m.
30 1. straks efter fødsel, 2. 12-24 timer efter fødsel.
35 __ 18 ubehandlede 6 opdrættet, kuld søskende 12 døde i lø bet af den 40 første leveuge 45 5 10 DK 171798 B1
Tabel III
Virkning af PIND-AVIt ved forebyggelse af "Crowding Disease" ved kalveopdræt.
Forsøgsgruppe Syge kal/e Døde kalve 10 32 kalve, 2 0 PIND-AVI*--behandlede 15 32 kalve, 15 4 ubehandlede

Claims (6)

1. Fremgangsmåde til inaktivering af virussupensioner, der tjener til fremstilling af paramunitetsinducere, kendetegnet ved, at virushøsten underkastes en totrins 5 inaktivering ved forhøjelse af pH-værdien og ved opvarmning.
2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendeteg net ved, at der som virushøst anvendes en parapoxvirus af arten orfvirus eller stomatitis papulosa-virus.
3. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendete g- 10 net ved, at virushøsten først indstilles til en pH-vsrdi mellem 8 og 11 og derefter opvarmes 40-120 minutter til temperaturer mellem 50 og 60°C.
4. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendeteg net ved, at virushøsten først indstilles til en pH-værdi 15 mellem 9 og 10 og derefter opvarmes i 60-90 minutter til temperaturer mellem 55 og 60*c.
5. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendeteg net ved, at den gennemføres med fjerkrækoppevirus.
6. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendete g- 20 net ved, at den gennemføres med paramyxovirus eller reo- virus.
DK573888A 1987-10-17 1988-10-14 Fremgangsmåde til fremstilling af paramunitetsinducere DK171798B1 (da)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE3735277 1987-10-17
DE3735277 1987-10-17
DE3816139A DE3816139A1 (de) 1987-10-17 1988-05-11 Verfahren zur herstellung von paramunitaetsinducern
DE3816139 1988-05-11

Publications (3)

Publication Number Publication Date
DK573888D0 DK573888D0 (da) 1988-10-14
DK573888A DK573888A (da) 1989-04-18
DK171798B1 true DK171798B1 (da) 1997-06-02

Family

ID=25860889

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DK573888A DK171798B1 (da) 1987-10-17 1988-10-14 Fremgangsmåde til fremstilling af paramunitetsinducere

Country Status (11)

Country Link
US (1) US5094850A (da)
EP (1) EP0312839B1 (da)
JP (1) JPH0813269B2 (da)
KR (1) KR0130775B1 (da)
AU (1) AU618287B2 (da)
CA (1) CA1338758C (da)
DE (2) DE3816139A1 (da)
DK (1) DK171798B1 (da)
ES (1) ES2054759T3 (da)
IL (1) IL88048A0 (da)
NZ (1) NZ226569A (da)

Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE4405841C1 (de) * 1994-02-23 1995-01-05 Mayr Anton Prof Dr Med Vet Dr Multipotente Paramunitätsinducer auf der Basis von Kombinationen von Pockenviruskomponenten, Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung als Arzneimittel
ES2099678B1 (es) * 1995-11-03 1998-02-16 Grifols Grupo Sa Procedimiento para la inactivacion de virus en proteinas.
WO1998009660A1 (en) * 1996-09-06 1998-03-12 Epic Therapeutics, Inc. Viral inactivation of biological fluids with biomolecule activity retention
SK382003A3 (en) * 2000-07-11 2003-07-01 Bayer Ag Use of strains of the Parapox ovis virus against organ fibrosis
WO2003050135A2 (en) 2001-12-07 2003-06-19 Board Of Regents The University Of Texas System Use a parapox b2l protein to modify immune responses to administered antigens
ATE450266T1 (de) 2005-11-24 2009-12-15 Aicuris Gmbh & Co Kg Parapocken-viren in kombination mit klassischen zytotoxischen chemotherapeutika als biochemotherapie zur behandlung von krebs
US9493744B2 (en) * 2012-06-20 2016-11-15 Genentech, Inc. Methods for viral inactivation and other adventitious agents

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE1021133B (de) * 1956-10-24 1957-12-19 Dr Med Karl Theurer Verfahren zur Herstellung von Impfstoffen gegen Viruserkrankungen
EP0037441B1 (en) * 1980-03-10 1984-05-09 Seiji Arakawa Pharmaceutical compositions useful as cellular immunopotentiator and anti-tumor agent, process for production thereof and microorganism used therein
EP0124506B1 (de) * 1983-05-02 1988-08-17 IMMUNO Aktiengesellschaft für chemisch-medizinische Produkte Verfahren zur Inaktivierung von vermehrungsfähigen Krankheitserregern
HU197517B (en) * 1984-07-30 1989-04-28 Laszlo Csatary Process for production of terapeutical composition applicable against virus infection

Also Published As

Publication number Publication date
EP0312839A2 (de) 1989-04-26
AU2394488A (en) 1989-04-20
CA1338758C (en) 1996-12-03
AU618287B2 (en) 1991-12-19
DE3816139A1 (de) 1989-04-27
JPH02432A (ja) 1990-01-05
KR890006254A (ko) 1989-06-12
DK573888D0 (da) 1988-10-14
DK573888A (da) 1989-04-18
EP0312839A3 (en) 1990-03-14
KR0130775B1 (ko) 1998-04-09
US5094850A (en) 1992-03-10
ES2054759T3 (es) 1994-08-16
DE3881326D1 (de) 1993-07-01
JPH0813269B2 (ja) 1996-02-14
IL88048A0 (en) 1989-06-30
NZ226569A (en) 1991-02-26
EP0312839B1 (de) 1993-05-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
DK171798B1 (da) Fremgangsmåde til fremstilling af paramunitetsinducere
CH664497A5 (de) Vakzine zur behandlung der harnwegsinfektionen.
Turner et al. Inactivated smallpox vaccine. A comparison of inactivation methods
CN109207436B (zh) 一株i群4型禽腺病毒毒株及其应用
Prabhu et al. Camelpox and buffalopox: Two emerging and re-emerging orthopox viral diseases of India
JPS637754B2 (da)
CN104069489B (zh) 鸡新城疫和传染性法氏囊二联灭活疫苗及其制备方法
CN102961742A (zh) 猪圆环病毒2型与猪细小病毒二联灭活疫苗及其制备方法
JPH07502174A (ja) 家禽病を発症させる新規バクテリアとそれから誘導されたワクチン
US3401219A (en) Moraxella bovis infectious bovine keratoconjunctivitis steam-killed bacterin
CN106563125B (zh) 鸭甲肝病毒ⅲ型复合物活疫苗及其制备方法
CN107446859A (zh) 一株鸡毒支原体及其应用
CN106674346A (zh) 一种预防牛支原体疾病的特异性卵黄抗体及其制备方法与应用
CN107881154B (zh) 貉细小病毒弱毒疫苗株及其在制备貉细小病毒弱毒疫苗中的用途
US3534136A (en) M.g. inoculum for poultry
Katow et al. GROWTH OF MEASLES VIRUS IN NERVOUS TISSUES II. NEUROTROPIC PROPERTIES OF A SSPE VIRUS IN HAMSTERS
US3629396A (en) Avian encephalomyelitis vaccine
CN105749273A (zh) 猪圆环病毒2型与猪细小病毒二联灭活疫苗及其制备方法
CN108144053A (zh) 一种制备兽用狂犬病疫苗的方法
CN116478280B (zh) 牛结节性皮肤病病毒阳性血清及其制备方法和应用
CN114558130B (zh) 一种胶原蛋白与抗痤疮丙酸杆菌γ蛋白组合制剂的制备方法
KR100391265B1 (ko) 흑염소 로타 바이러스 순화주, 이의 제조 방법 및 용도
CN116102641A (zh) 一种采用巴氏消毒的卵黄抗体提取方法
CN115869392A (zh) 牛病毒性腹泻病毒、传染性鼻气管炎病毒、副流感病毒3型和支原体四联灭活疫苗
RU2108385C1 (ru) Аттенуированный штамм вируса чумы плотоядных virus pestis carnivorum

Legal Events

Date Code Title Description
B1 Patent granted (law 1993)
PUP Patent expired