JPH0813269B2 - 非特異免疫誘発剤の製造法 - Google Patents

非特異免疫誘発剤の製造法

Info

Publication number
JPH0813269B2
JPH0813269B2 JP63255031A JP25503188A JPH0813269B2 JP H0813269 B2 JPH0813269 B2 JP H0813269B2 JP 63255031 A JP63255031 A JP 63255031A JP 25503188 A JP25503188 A JP 25503188A JP H0813269 B2 JPH0813269 B2 JP H0813269B2
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
virus
specific immunity
inducer
specific
immunity inducer
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Lifetime
Application number
JP63255031A
Other languages
English (en)
Other versions
JPH02432A (ja
Inventor
アントン・マイア
ペーター・タイン
バルター・シユトルベ
Original Assignee
バイエル・アクチエンゲゼルシヤフト
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by バイエル・アクチエンゲゼルシヤフト filed Critical バイエル・アクチエンゲゼルシヤフト
Publication of JPH02432A publication Critical patent/JPH02432A/ja
Publication of JPH0813269B2 publication Critical patent/JPH0813269B2/ja
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Lifetime legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/15—Reoviridae, e.g. calf diarrhea virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/155—Paramyxoviridae, e.g. parainfluenza virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/155—Paramyxoviridae, e.g. parainfluenza virus
    • A61K39/17—Newcastle disease virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/275—Poxviridae, e.g. avipoxvirus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/275—Poxviridae, e.g. avipoxvirus
    • A61K39/285—Vaccinia virus or variola virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/525—Virus
    • A61K2039/5252—Virus inactivated (killed)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/525—Virus
    • A61K2039/5254—Virus avirulent or attenuated
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/24011—Poxviridae
    • C12N2710/24111—Orthopoxvirus, e.g. vaccinia virus, variola
    • C12N2710/24134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/24011—Poxviridae
    • C12N2710/24211—Parapoxvirus, e.g. Orf virus
    • C12N2710/24234—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/24011—Poxviridae
    • C12N2710/24211—Parapoxvirus, e.g. Orf virus
    • C12N2710/24261—Methods of inactivation or attenuation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2720/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsRNA viruses
    • C12N2720/00011—Details
    • C12N2720/12011—Reoviridae
    • C12N2720/12034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/18011—Paramyxoviridae
    • C12N2760/18111—Avulavirus, e.g. Newcastle disease virus
    • C12N2760/18134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/8215—Microorganisms
    • Y10S435/948—Microorganisms using viruses or cell lines

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はウィルスから非特異免疫誘発剤を、２段階処
理で、ウィルスを不活性化し、同時に抗原性を低下さ
せ、しかし非特異免疫化活性は壊さずに製造する方法に
関する。
A.Mayrによれば非特異免疫化とは、個体が複数の全く
異なる感染症、毒素及び抗原に対する防御作用を、特定
な病原及び抗原に対してでなく［即ち副特異的に（para
specific）］急速に獲得発限し、それと色々と異なる期
間保持する現象を意味する。副特異的防御作用（非特異
的免疫化）は細胞性及び体液性免疫系の副特異性部分が
刺激されて発現する。
非特異免疫性は、感染する過程で、又は非特異免疫誘
発剤、免疫調節剤、生体応答調整物質（BRM）その他で
処理する事により、自然に獲得することが出来る。公知
の非特異免疫誘発剤には例えば、不活性化した鶏痘（fo
wl pox）ウィルス、パラポックス又はオルトポックスウ
ィルスが挙げられる［Tierrztl Parxis14,237−244
（1986）参照］。
公知の非特異免疫誘発剤はガンマー線、加熱処理ある
いは化学的な方法によって不活性する［ドイツ国特許公
告公報（DE−OS）第2,714,665号参照］。２段階不活性
化法は、非特異免疫誘発剤の製造では今までの所開示さ
れていない。
そこで使用する技術それ自体は新規なものではない。
しかし、それら技術はウィルス学の分野では、今日迄全
く別の目的で使用されていた。Zwartouw他［J.gen.Micr
obiol.38,39−45（1965）］は種痘粒子（vaccinia part
icles）から抗体を沈澱分離するのに熱を用いて又アル
カリ化を行った。これらの操作は不活性化を目的にした
ものではなくて、抗原の検出を目的としており、続いて
処理したウイルス懸濁液の上澄みで、完全ウイルスに対
する抗体を含む出発物質を、血清で処理した。この系で
著者達はワクチニアウイルスの化学的熱処理の後に起こ
った抗原−抗体反応が、定量的にはあまり明確でなかっ
たことを示せたに過ぎない。
非特異免疫誘発剤をポックスウイルス及びパラミクソ
ウイルスから製造した経験から、高活性なこの種誘発剤
を得るには、下記の２つの事項、即ち 1.不活性化は温和な条件の下で行う、 2.全体の抗原性は減少させ、同時に非特異免疫化活性は
保持する、 のが重要であることが判っている。
非特異免疫誘発剤が、非特異免疫性をもたらすウイル
スの懸濁液をpH8ないし11に調整、次いで50ないし60℃
で40ないし120分間熱処理することにより得られること
が発見された。
アルカリ化と熱処理の２つの操作を組み合わせること
によって、最適状態でウイルスが不活性化され、全抗原
性が減少し、そして非特異免疫化活性が維持されて、し
かもその上、それによって非特異免疫誘発剤が有利に製
造できるのは驚くべきことである。同操作によって、 1.不活性化は放射線や毒性物質に曝すこと無く簡単に行
われ、 2.抗原性を減少させているので、繰り返し使用した後で
も感作の危険が少なく、そして 3.製造法が簡単になったので経済性が改善される。
本方法はウイルス懸濁液のpHを約８ないし11、好まし
くは９ないし10に調整して実施する。
pH調整は無機アルカリ金属水酸化物、例えば水酸化ナ
トリウム又はカリウム、炭酸塩、例えば炭酸ナトリウム
又はカリウム、又は重炭酸塩、例えば重炭酸ナトリウム
又はカリウムの水溶液を用いて実施する。
次いで熱処理による不活性化は約50ないし60℃で40な
いし120分間加熱して実施し、好ましくは55ないし60
℃、特に56℃で60ないし120分間行う。
不活性化工程は特にpH約10、そして56℃で約60ないし
120分間が好ましい。
非特異免疫誘発剤の製造で、本発明の不活性化が特に
適しているウイルスは、 ポックスウイルスで、特にアビポックス（avipox）属
のウイルス、特に好ましくはガリナエ（gallinae）属の
無毒免疫化株、HP−1,438。にわとり胚繊維芽細胞中で
継代培養したもの（FHE）である［同株は、例えばColle
gium Veterinaium（獣医学委員会）1978、35頁以降に示
されている）。同ウイルス株は、“Mayr−Stickl Avipo
x Interferon Inducer"の寄託名で、西独、Nordrhein−
Westfalen州立種痘所（Landesimpfanstalt）、培養及び
検査部に寄託されている。同株は公開されており、一般
に入手可能である。
パラポックスウイルス属のウイルス、特に好ましくは
オルフウイルス種の無毒化株C 1701,138。仔羊の腎臓
中、又はうし胎児肺中で継代培養したもの、（同株ORF
D1701は、例えばTierrztl.Praxis14,237−244（198
6）；同株から製造した製造した非特異免疫誘発剤用実
験室指示書（laboratory designation）の部分に開示さ
れている］PIND−ORF。同株は免疫化株として、西独、
バイエルン州立種痘所［Neudeck 1,8000 Munich 95（ミ
ュンヘン市）］に1981年９月１日寄託された。
同株は1988年４月４日、パリ、25 rue du Docteur Ro
ux 7524にあるフランス国立パスツール研究所の微生物
培養コレクションに、CNCM I−751の名前で、オルトポ
ックスウイルス属の、特に好ましくはワクチニアウイル
ス種の無毒化株 MVA,530として寄託された。ワクチニア
ウィルスCVAのFHE培養における継代培養によるMVA株
は、A.MayrによってZbl.Bak.Hyg.I.Abt.Orig.B,167,367
（1978）に記載されている。同株は、Paul−Ehrlich研
究所（Frankfurt）によってヒト天然痘に対する予防免
疫性を有することが証明され、微生物学研究所（Dussel
dorf）に寄託されている。
しかし、他のウィルス、例えばパラミクソポックスウ
ィルス、レオウィルス及びヘルペスウィルスも、本発明
の不活性化法を用いて非特異免疫誘発剤の製造に適して
いる。
ウィルスは最初、それ自体公知の、細胞培養に適した
方法で、例えば哺乳動物又は鳥類組織細胞の細胞培養で
育成する。単層細胞培養、懸濁培養、又は孵化鶏卵中で
実施する事が可能である。単層又は懸濁培養に使用する
栄養培地は公知のもので、例えばEarle、Eagle又はHank
s培地である。
ウィルスは公知の方法で採集され、適当な場合、精製
される。採集したウィルスは次いで、本発明の方法によ
って不活性化する。
不活性化したウィルス採集物は、続いて冷却するか、
又は凍結乾燥して貯蔵するか又は非特異免疫誘発剤の製
造に使用する。得られた製剤は径粘膜的に、例えば径
口、鼻腔内投与、及び非経口的に、例えば筋肉内又は皮
下投与される。
下記に示す実施例における様に製造した非特異免疫誘
発剤は、凍結乾燥しても良いし、そのまま適当な薬剤製
造の出発物質として使用することも出来る。冷凍乾燥物
は使用する前に、その適当な量を、通常の薬剤用賦形
剤、好ましくは滅菌した発熱物質を含まない蒸留水と混
合する。こうして得られた製剤は非経口（例えば筋肉内
又は皮下）投与及び局部投与に適している。
非特異免疫誘発剤は又、その他の薬剤用賦形剤中に加
える事も可能である。この場合、例えば賦形剤の中の蛋
白質分解を起こす成分によって、滅菌状態及び安定性が
損なわれないように注意しなければならない。
疫病予防では、非特異免疫誘発剤は、１回ないし24時
間間隔で３回投与される。治療に際しては、１日当たり
１回ないし３回、病気の重さによって３ないし５日間手
当を行う。投与量は投与される動物の大きさ、及び投与
形態によって異なる（例えば牛に対して非経口的に投与
する際は4ml;犬に対して非経口的に投与する際は0.5m
l）。
実施例 １ 使用した出発材料は、無毒化された、プラーク法で３
世代継代培養して精製した鶏痘ウィルス株HP−１（にわ
とり胚繊維芽細胞中で441代継代培養してきたもの）で
その感染力指数（infectiositytitre）107.5CID50/mlで
あった。EarleのMEM培地にうし胎児血清３％を加えてFH
E培養に使用し、添加しないEarleのMEM培地を維持培地
（ウィルス培地）として使用した。ウィルス材料を、約
90％連続単層培養を用いて接種（例えばRoux皿当たり20
0mlの培地と0.5mlのウィルス懸濁液）した。感染24時間
後、又は細胞培養の80ないし100％がウィルス特有の変
化（例えば細胞の顆粒化、円形化、剥離、溶解）を受け
たら、なお存在する細胞の液面上の塊を、培養物を振盪
して剥がし、そしてウィルスと細胞を含む培地を超音波
（Branson社製:15分間）で処理、まだウィルスによって
攻撃されていない細胞を破壊する。破砕した細胞は低速
延伸法で分離する。
ウィルス採集物から試料を取り、その滅菌状態及び感
染力指数を検査した。ウィルス、細菌、かびおよび菌
類、マイコプラスマに汚染されておらず、そして感染力
指数が107.5CID50/ml以上のウィルス採集物だけを次の
試験で使用した。これに満たないものは廃棄した。
採集したウィルスは＋４℃は−60℃で、次に使用する
まで貯蔵した。
得られたウィルス材料は、本発明の２段階不活性化を
始める前に37℃迄加熱した。不活性化の第１段階で、ウ
ィルス懸濁液のpHを1N NaOH水溶液を使用して10.0に調
整した。アルカリ性にした懸濁液は、続いて直ちに56℃
に維持した湯浴に漬けた。ウィルス懸濁液はマグネティ
ックスターラーで連続的に混合し、又湯浴も通常の撹拌
機で撹拌して、均一混合、均一加熱を行った。熱不活性
化は60分間実施した。
この時点で継代培養を行って、感染力がもう残ってお
らず、検知できないことを示した。
こうして得られた非特異免疫誘発剤はPIND−AVIt（熱
処理）と呼ば＋４℃又は−60℃で保管される。同誘発剤
は又冷凍乾燥した状態ででも保持することが出来る。
本発明の方法によって得られた非特異免疫誘発剤、PI
ND−AVItの純度、特異性、及び無害性を適当な対照を用
いて調べた。
試験の結果、同剤の特異性、純度、及び無害性はヨー
ロッパ薬局法（European Pharmacopoeia）が要求する下
記基準を満たしていた。
1.電子顕微鏡を用いて、通常の方法で検査すると、製品
中で大部分が典型的なPox Particleを形成しているのが
見られ、その幾つかは中空である。他の微生物による生
成物は無い。
2.微生物による汚染を通常の方法で検査すると、生成物
中には他のウィルス、細菌、カビ及び菌類及びマイコプ
ラスマは無い。
3.ヨーロッパ薬局法に規定してある方法によって毒性、
催奇形性及び発熱生をした所、プラスの結果は得られな
かった。
4.残存する不活性化されなかったウィルスの量を検査
を、非特異免疫誘発剤最終製品を通常の方法でFHE試験
管培養で滴定し、そして感染力指数は細胞変性効果によ
って定量して行う。残存ウィルスの量は更に３回継代培
養すれば０になる。
非特異免疫誘発剤の活性を示すために同剤を下記の方
法で調べた。
ベビーマウスのVSV感染モデルをin vivo指数として使
用した［J.Vet.Med.B,33,321−339（1986）参照］。こ
れは又有効単位（EU/ml）決定に使用することが出来
る。
表１はVSVモデルにおけるPIND−AVt活性を滴定した結
果を示したものである。この滴定は、試料を段階的に希
釈して行って、有効指数（effictive index）が少なく
とも20になる希釈段階（dilution stage）の時、同試料
が0.1ml（マウス１匹当たりの注射量）当たり1EU又は1m
l当たり10EU含むものとして、あるバッチの有効単位（E
U/ml）を定量するのに用いられる［例えば表１で、1:16
の希釈が最終滴定になったなら（即ち1:32のEIが20以下
になったので）、同バッチは1ml当たり160（16x10）EU
含んでいるとする］。表 １ VSV感染モデルでのPIND−AVtの非特異免疫原活性の滴
定生成物 希釈段階 有効指数 PIND−AVt 1: 4 48 1: 8 45 1:16 34 1:32 13 本発明の非特異免疫誘発剤のin vitro活性は、放射性
クローム51放出４時間試験で腹腔NK細胞の活性を、PIND
−AVtで処理して24時間後に測定して行った［J.Ver.Me
d.B,33,321−339（1986）参照］。この為に0.2mlのPIND
−AVtを、腹腔細胞を取り出す24時間前にマウスに投与
する。この試験の結果PIND−AVtは、その効果が投与量
依存的であることが判った。
In vitroで、PIND−AVtのマウスの血清中でのコロニ
ー刺激活性に及ぼす、処理８時間後の効果を試験した。
CSA試験で実施した結果、PIND−AVtはその刺激効果が投
与量依存的であることが判った。
実施例 ２ 非特異免疫誘発剤製造の原料として、無毒化Parapox
ovis（ORF,羊の膿瘡）D 1710株（仔羊腎臓又は牛胎児肺
中で138代継代培養した、感染力指数107.75CID50/mlの
もの）を使用した。実施例１と同様に、只熱処理による
不活性化を２時間に延長してウィルスを調製、不活性化
してウィルスを採集した。約２時間後、完全に不活性化
され、又はウィルスの感染力が低下した。
純度、無害性、特異性、及び活性を、実施例１と同様
に実施した。結果も実施例１と同様であった。
実施例 ３ 無毒化Orthopoxvirus commune、Vaccinia virus MVA
株を用いて、実施例１と同様に非特異免疫誘発剤を製
造、その純度、及び活性を試験した。本発明の方法で不
活性化したウィルスは非特異免疫化性を有していた。
実施例 ４ 遅発性（lentogenic）ニューカッスル病ウィルス（para
myxovirus）Hitchneer B1株を使用して、実施例１と同
様に非特異免疫誘発剤を製造、純度、及び活性を試験し
た。この方法で不活性化したウィルスは非特異免疫化性
を有していた。
実施例 ５ Reovirus serotype 3を使用して、実施例１と同様に
非特異免疫誘発剤を製造、その純度、及び活性を試験し
た。この方法で不活性化したウィルスは非特異免疫化性
を有していた。
実施例 ６ 実施例１と同様に製造した非特異免疫誘発剤の使用可
能性及び活性を示すために、その治療のための使用及び
予防のための使用を表２及び３に示した。
PIND−AVItを使用して、妊娠した雌犬とその仔犬達へ
の作用を２重盲験試験を行った所、明らかに感染による
衰弱、これは一般に子が生まれてその第１週の死亡率が
特徴的に高くなることで示されるが、それが効果的に抑
制され、同誘発剤が予防的に使用できることを示した
（表２）。
仔牛肥育場での２重盲験試験で、仔牛を肥育場に受け
入れて直ちに（PIND−AVItを投与した（4mlづつ２回、2
4時間間隔で）ところ、明らかに各種病原による感染に
対する優れた予防作用が見られた。
これらのデータから明らかなように、本非特異免疫誘
発剤を使用して各種病原体による感染症の進行を停止さ
せるか、又は改善し、あるいはその発生を完全に防ぐこ
とが可能である。
これら試験で更に、本発明の非特異免疫誘発剤が無害
性であり、副作用を無いことが示された。

Claims (6)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】非特異免疫誘発剤を製造するために用いら
    れるウィルス懸濁液を不活性化するための方法であっ
    て、ウィルス懸濁液をpH上昇及び熱処理の２段階の不活
    性化に付すことを特徴とする方法。
  2. 【請求項２】採取するウィルスがオルフウィルス種のパ
    ラポックスウィルス又は丘疹性口内炎ウィルスであるこ
    とを特徴とする特許請求の範囲第１項記載の方法。
  3. 【請求項３】採取するウィルスを最初にpH8ないし11に
    調整し、次いで50ないし60℃の温度で40ないし120分間
    加熱することを特徴とする特許請求の範囲第１項記載の
    方法。
  4. 【請求項４】採取するウィルスを最初にpH9ないし10に
    調整し、次いで55ないし60℃で60ないし90分間加熱する
    ことを特徴とする特許請求の範囲第１項記載の方法。
  5. 【請求項５】鶏痘ウィルスを用いて実施することを特徴
    とする特許請求の範囲第１項記載の方法。
  6. 【請求項６】パラミクソウィルス又はレオウィルスを用
    いて実施することを特徴とする特許請求の範囲第１項記
    載の方法。
JP63255031A 1987-10-17 1988-10-12 非特異免疫誘発剤の製造法 Expired - Lifetime JPH0813269B2 (ja)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE3735277 1987-10-17
DE3816139.7 1988-05-11
DE3816139A DE3816139A1 (de) 1987-10-17 1988-05-11 Verfahren zur herstellung von paramunitaetsinducern
DE3735277.6 1988-05-11

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JPH02432A JPH02432A (ja) 1990-01-05
JPH0813269B2 true JPH0813269B2 (ja) 1996-02-14

Family

ID=25860889

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP63255031A Expired - Lifetime JPH0813269B2 (ja) 1987-10-17 1988-10-12 非特異免疫誘発剤の製造法

Country Status (11)

Country Link
US (1) US5094850A (ja)
EP (1) EP0312839B1 (ja)
JP (1) JPH0813269B2 (ja)
KR (1) KR0130775B1 (ja)
AU (1) AU618287B2 (ja)
CA (1) CA1338758C (ja)
DE (2) DE3816139A1 (ja)
DK (1) DK171798B1 (ja)
ES (1) ES2054759T3 (ja)
IL (1) IL88048A0 (ja)
NZ (1) NZ226569A (ja)

Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE4405841C1 (de) * 1994-02-23 1995-01-05 Mayr Anton Prof Dr Med Vet Dr Multipotente Paramunitätsinducer auf der Basis von Kombinationen von Pockenviruskomponenten, Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung als Arzneimittel
ES2099678B1 (es) * 1995-11-03 1998-02-16 Grifols Grupo Sa Procedimiento para la inactivacion de virus en proteinas.
WO1998009660A1 (en) * 1996-09-06 1998-03-12 Epic Therapeutics, Inc. Viral inactivation of biological fluids with biomolecule activity retention
SI21171A (sl) * 2000-07-11 2003-10-31 Bayer Aktiengesellschaft Uporaba sevov parapoksvirusa ovis proti fibrozi organov
AU2002353031A1 (en) 2001-12-07 2003-06-23 Bayer Corporation Use of parapox b2l protein to treat cancer and modify immune responses
EP1951274B1 (en) 2005-11-24 2009-12-02 AiCuris GmbH & Co. KG Parapoxviruses in combination with classical cytotoxic chemotherapeutic agents as biochemotherapy for the treatment of cancer
US9493744B2 (en) 2012-06-20 2016-11-15 Genentech, Inc. Methods for viral inactivation and other adventitious agents

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE1021133B (de) * 1956-10-24 1957-12-19 Dr Med Karl Theurer Verfahren zur Herstellung von Impfstoffen gegen Viruserkrankungen
EP0037441B1 (en) * 1980-03-10 1984-05-09 Seiji Arakawa Pharmaceutical compositions useful as cellular immunopotentiator and anti-tumor agent, process for production thereof and microorganism used therein
ATE36457T1 (de) * 1983-05-02 1988-09-15 Immuno Ag Verfahren zur inaktivierung von vermehrungsfaehigen krankheitserregern.
HU197517B (en) * 1984-07-30 1989-04-28 Laszlo Csatary Process for production of terapeutical composition applicable against virus infection

Also Published As

Publication number Publication date
AU618287B2 (en) 1991-12-19
DE3816139A1 (de) 1989-04-27
JPH02432A (ja) 1990-01-05
EP0312839A2 (de) 1989-04-26
DK573888D0 (da) 1988-10-14
EP0312839B1 (de) 1993-05-26
AU2394488A (en) 1989-04-20
KR0130775B1 (ko) 1998-04-09
NZ226569A (en) 1991-02-26
DK171798B1 (da) 1997-06-02
KR890006254A (ko) 1989-06-12
DE3881326D1 (de) 1993-07-01
US5094850A (en) 1992-03-10
DK573888A (da) 1989-04-18
CA1338758C (en) 1996-12-03
ES2054759T3 (es) 1994-08-16
IL88048A0 (en) 1989-06-30
EP0312839A3 (en) 1990-03-14

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2280075C2 (ru) Измененный штамм модифицированного вируса коровьей оспы ankara (mva)
HRP950088A2 (en) Para-influenza virus-containing vaccines for preventing porcine reproductive and respiratory syndrome
US3520972A (en) Feline virus vaccines obtained by propagation and serial passage attenuation of virulent feline viruses in diploid feline embryo tissue cell serial passage subculture strains
EP2075005B1 (en) Ipv-dpt vaccine
Norian et al. Comparative efficacy of two heterologous capripox vaccines to control lumpy skin disease in cattle.
NO153692B (no) Fremgangsmaate ved fremstilling av en antigen, immunogen subenhet av herpes simplex type 1 (hsv1) eller type 2 subenhet (hsv2)
JPH0813269B2 (ja) 非特異免疫誘発剤の製造法
Klockmann et al. Preclinical investigations of the safety, immunogenicity and efficacy of a purified, inactivated tick-borne encephalitis vaccine
IE46498B1 (en) New vaccine
WO2009004641A2 (en) Adaptation of pitman moore strain of rabies virus to primary chick embryo fibroblast cell cultures
Prabhu et al. Camelpox and buffalopox: Two emerging and re-emerging orthopox viral diseases of India
US4021302A (en) Cell cultures
Crick The vaccination of man and other animals against rabies
JP5946453B2 (ja) 変異狂犬病ウイルス及びワクチン
CN112752581A (zh) 灭活全颗粒流感疫苗及其制备法
Johnson Status of arenavirus vaccines and their application
JPH02295934A (ja) イヌコロナウイルスワクチン
Mikhael et al. Effectiveness Of The Pigeon Pox Vaccine On The Chicken Vaccinated With Avian Influenza Vaccine
BRPI0611979A2 (pt) cepas do vìrus da varìola altamente atenuados, métodos para a produção das mesmas como indutores de paramunidade ou a produção de vacinas de vetor
Losio et al. A study on the characteristics of La Sota strain of Newcastle disease virus adapted to grow in a cell line from bovine embryo kidney (BS/BEK)
JP2000516622A (ja) 交差防御的ウマヘルペスウイルス製剤並びにそれらの製造及び使用方法
AbulMagd Immunomodulatin Effect of Inactivated Parapox Virus (Zylexis) on Sheep Crop Vaccinated with Inactivated RVF Vaccine
RU2127602C1 (ru) Штамм "бг" вируса инфекционной бурсальной болезни птиц и вакцина против инфекционной бурсальной болезни птиц
US5066492A (en) Method of treating herpes simplex virus
DE19655440B4 (de) Verfahren zur Herstellung eines Influenzaimpfstoffs

Legal Events

Date Code Title Description
R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20080214

Year of fee payment: 12

FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090214

Year of fee payment: 13

EXPY Cancellation because of completion of term
FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090214

Year of fee payment: 13