JPH02295934A - イヌコロナウイルスワクチン - Google Patents
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、イヌコロナウィルス（ｃｘｎｉｎｅ ｃＯｔ
ｏｎｘｒｉｒａｔ）感染から感受性（ｓｕｓｃｅｐｔｉ
ｂｌｅ）動物を保護するワクチン、新規な抗原型イヌコ
ロナウィルス及びこのようなワクチンの製造への前記ウ
ィルスの使用、並びにイヌコロナウィルス感染から感受
性動物を保護するためのこのワクチンの使用に関する。
ｏｎｘｒｉｒａｔ）感染から感受性（ｓｕｓｃｅｐｔｉ
ｂｌｅ）動物を保護するワクチン、新規な抗原型イヌコ
ロナウィルス及びこのようなワクチンの製造への前記ウ
ィルスの使用、並びにイヌコロナウィルス感染から感受
性動物を保護するためのこのワクチンの使用に関する。
コロナウィルスは独自のウィルス属として分類されてい
る。この属に属するウィルスはヒトを含む多くの種の動
物に感染性であることが知られている。コロナウィルス
は種々の疾患、例えば胃腸炎（豚、七面鳥、マウス、子
牛、犬、猫及び人）、唾液腺感染症（Ｗ歯頚動物）、呼
吸器疾患（人、豚、鳥及び犬）及び脳炎（幼豚）を引き
起こす。
る。この属に属するウィルスはヒトを含む多くの種の動
物に感染性であることが知られている。コロナウィルス
は種々の疾患、例えば胃腸炎（豚、七面鳥、マウス、子
牛、犬、猫及び人）、唾液腺感染症（Ｗ歯頚動物）、呼
吸器疾患（人、豚、鳥及び犬）及び脳炎（幼豚）を引き
起こす。
コロナウィルス属内には、特有の抗原性クラスターを形
成する一群のウィルスが見出される。猫のネコ感染性腹
膜炎ウィルス（ＦＩＰＶ）及びネコ腸炎ウィルス（ＦＥ
Ｖ）、豚の伝播性胃腸炎ウィルス（Ｔ Ｇ Ｅ Ｖ）及
びブタコロナウィルス（ＰＣｖ）、犬のイヌコロナウィ
ルス（ＣＣＶ）及び人のウィルスＣＶ２２９Ｅは全てこ
の群に属する。
成する一群のウィルスが見出される。猫のネコ感染性腹
膜炎ウィルス（ＦＩＰＶ）及びネコ腸炎ウィルス（ＦＥ
Ｖ）、豚の伝播性胃腸炎ウィルス（Ｔ Ｇ Ｅ Ｖ）及
びブタコロナウィルス（ＰＣｖ）、犬のイヌコロナウィ
ルス（ＣＣＶ）及び人のウィルスＣＶ２２９Ｅは全てこ
の群に属する。
この抗原性クラスターのものはマウス肝炎ウィルス３型
、子牛下痢ウィルス、豚の血液凝集性脳を髄炎ウィルス
、ヒトコロナウィルス０Ｃ４３及び鳥の感染性気管支炎
ウィルスのような他のコロナウィルスと交差反応するこ
とはない。
、子牛下痢ウィルス、豚の血液凝集性脳を髄炎ウィルス
、ヒトコロナウィルス０Ｃ４３及び鳥の感染性気管支炎
ウィルスのような他のコロナウィルスと交差反応するこ
とはない。
ＣＣｖは１９７１年にドイツで軍用犬から初めて単離さ
れた。感染に伴なう徴候には嘔吐、下痢、食欲不振、抑
を及び脱水症状を含んでいる。ある環境（ストレス）下
では死亡することがある。鼻及び眼の障害を含む呼吸器
疾患が報告されている。
れた。感染に伴なう徴候には嘔吐、下痢、食欲不振、抑
を及び脱水症状を含んでいる。ある環境（ストレス）下
では死亡することがある。鼻及び眼の障害を含む呼吸器
疾患が報告されている。
抗体の発生頻度は国によって異なる。英国では、家庭用
の犬の４０％までがＣＣｖに対する抗体を有しており、
一方、養大場の犬での割合はより高いものである。
の犬の４０％までがＣＣｖに対する抗体を有しており、
一方、養大場の犬での割合はより高いものである。
猫及び豚にＣＣＶを接種すると感染はするが、これらの
種でＣＣＶにより臨床的な疾患が引き起こされることは
ない。口腔咽頭と糞からウィルスを単離することができ
、抗体反応が認められる。
種でＣＣＶにより臨床的な疾患が引き起こされることは
ない。口腔咽頭と糞からウィルスを単離することができ
、抗体反応が認められる。
ヒト、ウシ及びマウスがＣＣＶに感受性であるという証
拠はない。
拠はない。
交差保護の研究から、コロナウィルスはほとんど（又は
全く）互いに免疫性を誘発しないことが示されている。
全く）互いに免疫性を誘発しないことが示されている。
例えば、実験的に犬をＴＧＥＶ又はＦＩＰＶに感染させ
ても、その後のＣＣｖ感染の影譬から犬が保護されるこ
とはない。
ても、その後のＣＣｖ感染の影譬から犬が保護されるこ
とはない。
ＣＣｖに対する種々のワクチンが開発されている。米国
では、アジュバントを含有する不活化ワクチンが使用さ
れてきている。弱毒化した生ワクチンは当時知られてい
た６０７株からは動物を保護したが、多価ワクチンと相
容性ではない（ｉｍｅｏｓｐ＊ｔｉｂｌｅ）ことが示さ
れたので市場から引き上げられた。
では、アジュバントを含有する不活化ワクチンが使用さ
れてきている。弱毒化した生ワクチンは当時知られてい
た６０７株からは動物を保護したが、多価ワクチンと相
容性ではない（ｉｍｅｏｓｐ＊ｔｉｂｌｅ）ことが示さ
れたので市場から引き上げられた。
驚くべきことに、今回、ＣＣＶ疾患を有する犬から新規
な６０７株を単離することができた。この新規ウィルス
を内部標記でＩＮ／ＳＡＴ／ＣＩと称し、Ｃｏ１１ｅｃ
ｔｉｏｎ Ｎｔｌｉｏｎｓｌｅ ｄｃ Ｃｏｌｔ
ｗｒｅｓ ｄｅ Ｍｉｃｒｏ−ｏＢ■１ｇｍ１ｏｆ
１ｎｓｔｉｔｏｌ Ｐ＊５ｌｅａｒ （パリ）に受託
番号１−７４３で寄託した。このウィルスの特徴的な性
質は、ＣＣｖの既知の単離物に対する抗血清を用いる中
和テストにおいて、いかなる程度にも中和されないこと
である。しかし、ＩＮ／ＳＡＹ／Ｃ１に対する抗血清は
、ＩＮ／ＳＡＹ／ＣＩ株自身並びに公知のアメリカ株全
てを高い力価まで中和する。従って、ＣＣｖのこの新規
株はこれまでに知られていない抗原型のＣＣｖを表わし
ていると結論できる。これまでのところ、ＣＣｖについ
ては顕著な抗原性の変異株は報告されていなかった。
な６０７株を単離することができた。この新規ウィルス
を内部標記でＩＮ／ＳＡＴ／ＣＩと称し、Ｃｏ１１ｅｃ
ｔｉｏｎ Ｎｔｌｉｏｎｓｌｅ ｄｃ Ｃｏｌｔ
ｗｒｅｓ ｄｅ Ｍｉｃｒｏ−ｏＢ■１ｇｍ１ｏｆ
１ｎｓｔｉｔｏｌ Ｐ＊５ｌｅａｒ （パリ）に受託
番号１−７４３で寄託した。このウィルスの特徴的な性
質は、ＣＣｖの既知の単離物に対する抗血清を用いる中
和テストにおいて、いかなる程度にも中和されないこと
である。しかし、ＩＮ／ＳＡＹ／Ｃ１に対する抗血清は
、ＩＮ／ＳＡＹ／ＣＩ株自身並びに公知のアメリカ株全
てを高い力価まで中和する。従って、ＣＣｖのこの新規
株はこれまでに知られていない抗原型のＣＣｖを表わし
ていると結論できる。これまでのところ、ＣＣｖについ
ては顕著な抗原性の変異株は報告されていなかった。
この発見から、本発明により、感受性動物に投与すると
これらの動物をＣＣｖ感染の臨床的作用から保護する新
規なワクチンが提供される。この新規なワクチンは内部
標記ＩＮ／ＳＡＹ／ＣＩの新規００７株の抗原型ウィル
ス株に由来する。
これらの動物をＣＣｖ感染の臨床的作用から保護する新
規なワクチンが提供される。この新規なワクチンは内部
標記ＩＮ／ＳＡＹ／ＣＩの新規００７株の抗原型ウィル
ス株に由来する。
この新規ワクチンは犬だけではなく、猫及び豚のような
ＣＣｖ感染を受けやすい他の動物にも投与しうる。
ＣＣｖ感染を受けやすい他の動物にも投与しうる。
本発明のワクチンは生きていて適宜弱毒化した形又は不
活化した形のウィルスを含む。
活化した形のウィルスを含む。
好ましくはイヌ又はネコの種からの細胞の培養物内でウ
ィルスを連続継代することにより弱毒化させる。各ステ
ップにおいて、前の培養ステップから採取したウィルス
を新しい細胞培養物を含有する培地に接種する。細胞の
培養に関しては当業界で公知の方法を使用しうる。
ィルスを連続継代することにより弱毒化させる。各ステ
ップにおいて、前の培養ステップから採取したウィルス
を新しい細胞培養物を含有する培地に接種する。細胞の
培養に関しては当業界で公知の方法を使用しうる。
生ワクチン製造のためには、上記のように適宜弱毒化し
た種ウィルスを細胞培養物例えばネコ胎児腺維芽細胞（
Ｆ Ｅ Ｆ）培養物上で増殖させることができる。この
ように増殖させたウィルスは組繊細胞培養液及び／又は
細胞を採集することにより収穫しつる。収穫の間に、適
宜、増殖基質からの感染性粒子の放出を改善する技法、
例えば超音波処理によってウィルスの収率を高めること
ができる。生ワクチンは懸濁液の形で製造することがで
き、或いは凍結乾燥してもよい。凍結乾燥したＣＣｖワ
クチンには１つ以上の安定剤を加えるのが好ましい。好
ましい安定剤は、例えばＳＰＧＡ（Ｂｏｗｘｒｎｉｃｋ
がＪ、ＢｘｃｌｅｒｉｏｌｏＨ５９，５［１９（１９５
０）に記載）、炭水化物（例えば、ソルビトール、マン
ニトール、デンプン、蔗糖、デキストラン、グルコース
）、蛋白質（例えば、アルブミン又はカゼイン）又はそ
の分解産物、蛋白質含有物質（例えばウシ血清又はスキ
ムミルク）及びバッファ（例えば、アルカリ金属リン酸
塩）である。適宜、アジュバント活性を有する化合物を
１つ以上加えてもよい。好適なアジュバントは、例えば
、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム又は酸化ア
ルミニウム、無機部（例えば、Ｂ１７０１ Ｆ（登録商
標）、Ｍｘｒｃｏｌ ５２ （登録商標））及びサポ
ニンである。
た種ウィルスを細胞培養物例えばネコ胎児腺維芽細胞（
Ｆ Ｅ Ｆ）培養物上で増殖させることができる。この
ように増殖させたウィルスは組繊細胞培養液及び／又は
細胞を採集することにより収穫しつる。収穫の間に、適
宜、増殖基質からの感染性粒子の放出を改善する技法、
例えば超音波処理によってウィルスの収率を高めること
ができる。生ワクチンは懸濁液の形で製造することがで
き、或いは凍結乾燥してもよい。凍結乾燥したＣＣｖワ
クチンには１つ以上の安定剤を加えるのが好ましい。好
ましい安定剤は、例えばＳＰＧＡ（Ｂｏｗｘｒｎｉｃｋ
がＪ、ＢｘｃｌｅｒｉｏｌｏＨ５９，５［１９（１９５
０）に記載）、炭水化物（例えば、ソルビトール、マン
ニトール、デンプン、蔗糖、デキストラン、グルコース
）、蛋白質（例えば、アルブミン又はカゼイン）又はそ
の分解産物、蛋白質含有物質（例えばウシ血清又はスキ
ムミルク）及びバッファ（例えば、アルカリ金属リン酸
塩）である。適宜、アジュバント活性を有する化合物を
１つ以上加えてもよい。好適なアジュバントは、例えば
、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム又は酸化ア
ルミニウム、無機部（例えば、Ｂ１７０１ Ｆ（登録商
標）、Ｍｘｒｃｏｌ ５２ （登録商標））及びサポ
ニンである。
好ましくは、生ワクチンは約４週令からの、より特定的
には５〜１２週令の保護すべき動物に投与しつる。場合
によっては、２回、例えば６週令及び１００週令にワク
チン接種することが推奨される。
には５〜１２週令の保護すべき動物に投与しつる。場合
によっては、２回、例えば６週令及び１００週令にワク
チン接種することが推奨される。
生ワクチンは１０２〜１０９ｐｌｙ／用量のウィルスを
含有すると好ましい。
含有すると好ましい。
本発明のワクチンは又、不活化した形の００７株を含む
ものでもよい。
ものでもよい。
本発明の不活化した形のＣＣｖワクチンは、複製能と毒
性の両者を失ったウィルスから製造する。
性の両者を失ったウィルスから製造する。
一般に、これは化学的又は物理的手段で達成しうる。化
学的な不活化は、例えば、酵素；ホルムアルデヒド、β
−プロピオラクトンもしくはエチレンイミン又はこれら
の誘導体；有機溶媒（例えば、ハロゲン化炭化水素）及
び／又は洗剤（例えば、Ｔｖｅｅｎ （登録商標）
、Ｔｒｉｌｏｎ Ｘ （登録商標）、デスオキシコール
酸ナトリウム、スルホベタイン又はセチルトリメチルア
ンモニウム塩）で１クイルスを処理することにより実施
しうる。物理的不活化は、ウィルスを高エネルギー照射
、例えばＵＶ光、γ−照射又はＸ−線に処することによ
り有利に実施しつる。必要であれば、不活化したものを
中和する。例えば、ホルムアルデヒドで不活化した製剤
はチオサルフェートで中和できる。必要であれば、次に
、ｐＨを約７に戻す。一般に、アジュバントをも不活化
したウィルスに加え、適宜１つ以上の乳化剤、例えばＴ
ｖｅｅｎ （登録商標）及び５ｐａｎ（登録商標）を加
える。
学的な不活化は、例えば、酵素；ホルムアルデヒド、β
−プロピオラクトンもしくはエチレンイミン又はこれら
の誘導体；有機溶媒（例えば、ハロゲン化炭化水素）及
び／又は洗剤（例えば、Ｔｖｅｅｎ （登録商標）
、Ｔｒｉｌｏｎ Ｘ （登録商標）、デスオキシコール
酸ナトリウム、スルホベタイン又はセチルトリメチルア
ンモニウム塩）で１クイルスを処理することにより実施
しうる。物理的不活化は、ウィルスを高エネルギー照射
、例えばＵＶ光、γ−照射又はＸ−線に処することによ
り有利に実施しつる。必要であれば、不活化したものを
中和する。例えば、ホルムアルデヒドで不活化した製剤
はチオサルフェートで中和できる。必要であれば、次に
、ｐＨを約７に戻す。一般に、アジュバントをも不活化
したウィルスに加え、適宜１つ以上の乳化剤、例えばＴ
ｖｅｅｎ （登録商標）及び５ｐａｎ（登録商標）を加
える。
不活化ワクチンは、好ましくは、不活化前に測定して、
少なくとも１０’ ｐｉｎ／ｍｌのウィルス活性（当量
）を含みうる。
少なくとも１０’ ｐｉｎ／ｍｌのウィルス活性（当量
）を含みうる。
好ましくは、不活化ワクチンは、約４週令からの、より
特定的には５〜１２週令の動物に投与しうる。動物に２
回ワクチン接種するときには、２回のワクチン接種は約
４〜６週間の間隔で行うのが好ましい。
特定的には５〜１２週令の動物に投与しうる。動物に２
回ワクチン接種するときには、２回のワクチン接種は約
４〜６週間の間隔で行うのが好ましい。
本発明のワクチンは他のワクチンと組合せることができ
る。好適には、イヌバルボウイルス、イヌアデノウィル
ス１及び２、狂犬病ウィルス、レプトスピラ及び気管支
散布病菌に対するワクチン１つ以上と共に本発明のワク
チンを投与しつる。
る。好適には、イヌバルボウイルス、イヌアデノウィル
ス１及び２、狂犬病ウィルス、レプトスピラ及び気管支
散布病菌に対するワクチン１つ以上と共に本発明のワク
チンを投与しつる。
コロナウィルスＩＮ／ＳＡＶ／Ｃ１の単離コロナウィル
ス単離物のＩＮ／ＳＡＹ／ＣＩは重篤な胃腸炎の仔犬の
糞からのものであった。仔犬は大きなピーグル犬の血統
のものであり、パルボが疑われる胃腸炎を起していた。
ス単離物のＩＮ／ＳＡＹ／ＣＩは重篤な胃腸炎の仔犬の
糞からのものであった。仔犬は大きなピーグル犬の血統
のものであり、パルボが疑われる胃腸炎を起していた。
パルボウイルスが存在せずにコロナウィルスが単離され
た。
た。
単離法
糞のサンプルを、ペニシリン及びストレプトマイシンを
含むＰＢＳで１ ｒ １０（ｖ／マ）に希釈した。
含むＰＢＳで１ ｒ １０（ｖ／マ）に希釈した。
希釈したサンプルをよく混合してから、ミリボア０．２
２μフイルターで屏過した。糞の上清０．２ｒａｌを、
ペトリ皿上の集密的Ａ７２細胞培養物の細胞シートに、
３７℃で１時間吸着させた。次に、維持培地５ｍｌをペ
トリ皿に加えた（ｔｅｌｅｄｌ。６日後に上清を収穫し
、０．５ｍｌのアリコートを取った。（パルボウイルス
感染が疑われていたので、パルボウィルスが単離されつ
るか調べるために１：４の比で細胞を分割（ｓｏｂｂｅ
ｄ） シた。後から、この上清をパルボウイルスについ
てＨＡテストしたが、陰性であることが判った）。上清
をペトリ皿上の集密的Ａ？２細胞培養物上でアッセイし
くプレート当り０．２ｍｌ、希釈当りプレート２枚）、
３７℃で１時間吸着させ、そしてプレート当り ６．５
ｍｌの寒天でおおった。コロナウィルスのプラークに類
似したプラークが出現し、１０−’希釈（プラークが出
現する最高希釈）からのプラークを採集した。この物質
を集密的Ａ７２のペトリ皿に３７℃で１時間吸着させ、
維持培地５ｍｌを加えた（ｔｅｌｅｄ）。４日後に完全
なＣＰＥが現われ、もう１度、上清を採集した。これを
さらに、プラスチックの １７５ノのルーサイズのびん
中のＡ？２細胞上で継代した。
２μフイルターで屏過した。糞の上清０．２ｒａｌを、
ペトリ皿上の集密的Ａ７２細胞培養物の細胞シートに、
３７℃で１時間吸着させた。次に、維持培地５ｍｌをペ
トリ皿に加えた（ｔｅｌｅｄｌ。６日後に上清を収穫し
、０．５ｍｌのアリコートを取った。（パルボウイルス
感染が疑われていたので、パルボウィルスが単離されつ
るか調べるために１：４の比で細胞を分割（ｓｏｂｂｅ
ｄ） シた。後から、この上清をパルボウイルスについ
てＨＡテストしたが、陰性であることが判った）。上清
をペトリ皿上の集密的Ａ？２細胞培養物上でアッセイし
くプレート当り０．２ｍｌ、希釈当りプレート２枚）、
３７℃で１時間吸着させ、そしてプレート当り ６．５
ｍｌの寒天でおおった。コロナウィルスのプラークに類
似したプラークが出現し、１０−’希釈（プラークが出
現する最高希釈）からのプラークを採集した。この物質
を集密的Ａ７２のペトリ皿に３７℃で１時間吸着させ、
維持培地５ｍｌを加えた（ｔｅｌｅｄ）。４日後に完全
なＣＰＥが現われ、もう１度、上清を採集した。これを
さらに、プラスチックの １７５ノのルーサイズのびん
中のＡ？２細胞上で継代した。
注
（１１三代継代した種（５ｅｅｄ）が中和テストに使用
したウィルスである。
したウィルスである。
（２）金側で上清はバルボウイルス陰性であった。
（３）ＣＰＥは他のコロナウィルスのＣＰＥと類似して
いた。
いた。
（４）単離物がコロナウィルスであることは蛍光顕微鏡
及び電子顕微鏡観察でも証明された。
及び電子顕微鏡観察でも証明された。
（５）他のコロナウィルス株に陽性及び陰性の両者の血
清に対して、交差血清中和テストをプラーク減少法（ｐ
ｌＩｑｕｅ ｒｅｄｏｅｌｉｏｎ）により実施した。
清に対して、交差血清中和テストをプラーク減少法（ｐ
ｌＩｑｕｅ ｒｅｄｏｅｌｉｏｎ）により実施した。
中和テスト法
ペトリ皿上の集密的４８時間Ａ２７細胞を使用して血清
中和テストを実施した。血清サンプルをＰＢＳで希釈し
、最終希釈！／１６．１／６４． １／２５６及び１／
１０２４とした。以前のアッセイ結果に基きウィルスを
希釈した。各血清希釈物に等量のウィルスを加えた。次
に、血清／ウィルスを３７℃で１時間インキュベートし
た。テストに使用したウィルス希釈物からなるウィルス
の対照（Ｖ Ｃ）も同様に処理した。培地をペトリ皿か
ら傾瀉し、エッペンドルフピペットを使って各プレート
に血清／ウィルス希釈物０．１ｍｌを置いた。１希釈物
当り２枚のプレートとし、ＶＣＳＶＣＩＱ−１及びウィ
ルスを含まない細胞の対照についてもプレート２枚とし
た。
中和テストを実施した。血清サンプルをＰＢＳで希釈し
、最終希釈！／１６．１／６４． １／２５６及び１／
１０２４とした。以前のアッセイ結果に基きウィルスを
希釈した。各血清希釈物に等量のウィルスを加えた。次
に、血清／ウィルスを３７℃で１時間インキュベートし
た。テストに使用したウィルス希釈物からなるウィルス
の対照（Ｖ Ｃ）も同様に処理した。培地をペトリ皿か
ら傾瀉し、エッペンドルフピペットを使って各プレート
に血清／ウィルス希釈物０．１ｍｌを置いた。１希釈物
当り２枚のプレートとし、ＶＣＳＶＣＩＱ−１及びウィ
ルスを含まない細胞の対照についてもプレート２枚とし
た。
脱気したインキュベーター内で３０分間プレートを吸着
させた。次に、各プレートを１つあたり ６．５ｍｌの
寒天でおおった。
させた。次に、各プレートを１つあたり ６．５ｍｌの
寒天でおおった。
プレートを、５％ＣＯ２ガス、３７℃の水ジヤケツトイ
ンキュベータ内に置いた。感染４日後にプラークが現わ
れた。寒天をはたき落し、ナフタレンブラック染色剤２
．５ｍｌを加え、５〜１０分放置後に流水で洗い落した
。その後、プラークを簡単に読み取ることができた。ウ
ィルスの対照と比べてプラークの量が９０％まで減少し
たときの血清希釈において中和が起ったものとした。
ンキュベータ内に置いた。感染４日後にプラークが現わ
れた。寒天をはたき落し、ナフタレンブラック染色剤２
．５ｍｌを加え、５〜１０分放置後に流水で洗い落した
。その後、プラークを簡単に読み取ることができた。ウ
ィルスの対照と比べてプラークの量が９０％まで減少し
たときの血清希釈において中和が起ったものとした。
抗血清
（ＴＧＥを除く）種々のウィルスに対する抗血清を猫で
調製した。これをロー鼻経路で注入し、感染後、間隔を
おいて採血した。中和活性を示す血清を交差中和テスト
に使用した。
調製した。これをロー鼻経路で注入し、感染後、間隔を
おいて採血した。中和活性を示す血清を交差中和テスト
に使用した。
幼豚をロー鼻経路で感染させてＴＧＥ抗血清を調製した
。次に、これらの豚から採血した。
。次に、これらの豚から採血した。
単離物：
５ＤＡ
ＬＩＶＥＲＰＯＯＬ
単離物
１／２０４８” ｌ／１２８ １／１２８
１／２５６ ＞１／２００ １／２５６１／１２８
１／１２８ １／３２ １／６４
１／４０ １／２５６Ｎ／ＳＡＹ／ＣＩ ＣＶ−３ ＣＶ−４ ＰＯＯＬ １８９ ＩＰ ＜１／８ １／２５６ １／１６ ＜１／１６ １／６４ １／１２８ １／１２８ 【／３２ １／１２８ １／６４ １／１２８ １／１２８ １／６４ ＜１／１６ １／１２８ １／１２８ １／２５６ １／３２ １／２０ １／２００ １／２００ ＞１／４０Ｇ ＞１／２０Ｇ １／１６ １／２５６ １／１２Ｂ ＞１／２５６ ＞１／１２８ ＄ プラークの９０％を中和する血清希釈を表わす。
１／２５６ ＞１／２００ １／２５６１／１２８
１／１２８ １／３２ １／６４
１／４０ １／２５６Ｎ／ＳＡＹ／ＣＩ ＣＶ−３ ＣＶ−４ ＰＯＯＬ １８９ ＩＰ ＜１／８ １／２５６ １／１６ ＜１／１６ １／６４ １／１２８ １／１２８ 【／３２ １／１２８ １／６４ １／１２８ １／１２８ １／６４ ＜１／１６ １／１２８ １／１２８ １／２５６ １／３２ １／２０ １／２００ １／２００ ＞１／４０Ｇ ＞１／２０Ｇ １／１６ １／２５６ １／１２Ｂ ＞１／２５６ ＞１／１２８ ＄ プラークの９０％を中和する血清希釈を表わす。
実施例１
イヌコロナウィルス生ワクチン−Ａ
ネコ胎児線維芽細胞からの組織培養液中の株ＩＮ／ＳＡ
Ｖ／Ｃ１の生きている弱毒化ウィルスを、１ｆｔ当りに
次のものを含む凍結乾燥安定剤と混合する： 蔗 糖
７４１５ ｇＫＨ２Ｐ Ｏ＜
０．５２ ｇＮ ａ ｘ ＨＰ Ｏａ
” １２Ｈｚ Ｏ２，５８ｇグルタミン酸−ナトリ
ウム ０．９１０ｇ牛血清アルブミン３０％（
Ｗ／マ）溶液 ３０ ｍｌウィルス約１０’ ｐｌａの
約１ ｍｌ用量を含有するノくイアル中で混合物を凍結
乾燥し、バイアルを密封する。
Ｖ／Ｃ１の生きている弱毒化ウィルスを、１ｆｔ当りに
次のものを含む凍結乾燥安定剤と混合する： 蔗 糖
７４１５ ｇＫＨ２Ｐ Ｏ＜
０．５２ ｇＮ ａ ｘ ＨＰ Ｏａ
” １２Ｈｚ Ｏ２，５８ｇグルタミン酸−ナトリ
ウム ０．９１０ｇ牛血清アルブミン３０％（
Ｗ／マ）溶液 ３０ ｍｌウィルス約１０’ ｐｌａの
約１ ｍｌ用量を含有するノくイアル中で混合物を凍結
乾燥し、バイアルを密封する。
使用前に、この凍結乾燥製品を蒸留水で元の容量に戻す
。
。
実施例２
イヌコロナウィルス生ワクチン−Ｂ
イヌＡ７２細胞からの組織培養液中の株ＩＮ／ＳＡＶ／
Ｃ１の生きている弱毒化ウィルスを実施例１の凍結乾燥
安定剤と混合し、各々が約ｔｏ’ ｐｌｎのウィルスを
含有するこの混合物１ ｉｆづつを１回用量用バイアル
に入れ、次にこれを密封する。
Ｃ１の生きている弱毒化ウィルスを実施例１の凍結乾燥
安定剤と混合し、各々が約ｔｏ’ ｐｌｎのウィルスを
含有するこの混合物１ ｉｆづつを１回用量用バイアル
に入れ、次にこれを密封する。
実施例３
イヌコロナウィルスの不活化ワクチン
ウィルスＩＮ／ＳＡＶ／Ｃ１に感染したイヌＡ７２細胞
の組織培養液（力価１０’ ｐｌｕ／ｍｌ）にβ−プロ
ピオン酸（最終濃度１ ： ５００）を加えて、不活化
する。Ｎａ０Ｈ（０，１モル／１）を加えてｐＨを約７
に戻す。
の組織培養液（力価１０’ ｐｌｕ／ｍｌ）にβ−プロ
ピオン酸（最終濃度１ ： ５００）を加えて、不活化
する。Ｎａ０Ｈ（０，１モル／１）を加えてｐＨを約７
に戻す。
この材料に次の割合のアジュバントを混合する：不活化
したウィルス感染組織培養液 １ ｍ１２％リン
酸アルミニウム溶液 ０．１８ｍ１１ｔ＋
９の １．２モル／ｆｌグリシンバッファー ０．０２
ｍ１ＱｕｉｌＡ １３
Ｇ埒この混合物をバイアルにつめる。
したウィルス感染組織培養液 １ ｍ１２％リン
酸アルミニウム溶液 ０．１８ｍ１１ｔ＋
９の １．２モル／ｆｌグリシンバッファー ０．０２
ｍ１ＱｕｉｌＡ １３
Ｇ埒この混合物をバイアルにつめる。
Claims (6)
- （１）パリのＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ Ｎａｔｉｏｎａｌ
ｅ ｄｅ Ｃｕｌｔｕｒｅａｄｅ Ｍｉｃｒｏ−ｏｒｇ
ａｎｉｓｍｅｓ ｏｆ Ｉｎｓｔｉｔｕｔ Ｐａｓｔｅ
ｕｒに寄託された、受託番号Ｉ−７４３のイヌコロナウ
イルス株の抗原型ウィルス株に由来することを特徴とす
る、イヌコロナウイルス感染の臨床的作用から感受性動
物を保護するワクチン。 - （２）パリのＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ Ｎａｔｉｏｎａｌ
ｅ ｄｅ Ｃｕｌｔｕｒｅａｄｅ Ｍｉｃｒｏ−ｏｒａ
ｇｎｉｓｍｅｓ ｏｆ Ｉｎｓｔｉｔｕｔ Ｐａｓｔｅ
ｕｒに寄託された、受託番号Ｉ−７４３のイヌコロナウ
イルス株に由来することを特徴とする請求項１に記載の
ワクチン。 - （３）イヌコロナウイルス株Ｉ−７４３の血清型イヌコ
ロナウイルスの本質的に純粋な培養物。 - （４）イヌコロナウイルス株Ｉ−７４３の、請求項３に
記載の本質的に純粋な培養物。 - （５）イヌコロナウイルス株Ｉ−７４３の抗原型イヌコ
ロナウイルスをワクチン用途に適する形にすることを特
徴とするイヌコロナウイルスワクチンの製法。 - （６）請求項１又は２のワクチンを動物に投与すること
を特徴とするイヌコロナウイルス感染から感受性動物を
保護する方法。
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|---|---|---|---|
| EP89304441 | 1989-05-03 | ||
| EP89304441.2 | 1989-05-03 |
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|---|---|
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| JP2892767B2 JP2892767B2 (ja) | 1999-05-17 |
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Family Applications (1)
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| CA (1) | CA2015828C (ja) |
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- 1994-08-03 US US08/285,611 patent/US5464621A/en not_active Expired - Fee Related
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