DK164912B - Milbemycin-5-carbonatderivater, og anthelmintiske, akaracide og insekticide midler med indhold heraf - Google Patents

Description

i

DK 164912 B

Den foreliggende opfindelse angår en række hidtil ukendte mil-bemycin-5-carbonatderivater samt anthelmintiske, akaracide og insekticide midler omfattende mindst én af de omhandlede forbindelser i blanding med et farmaceutisk, landbrugsmæssigt el-5 ler gartnerimæssigt acceptabelt bærestof eller fortyndingsmiddel .

Milbemycin D er blevet beskrevet i US patentskrift nr. 4.346.171, hvori det blev omtalt som "forbindelse B-41D", og 10 milbemycinerne A3 og A4 er blevet beskrevet i US patentskrift nr. 3.9S0.360. Disse forbindelser kan angives ved hjælp af formlen I

Ch3 3 "ift

25 OH

hvori Ri betegner en methylgruppe, en ethylgruppe eller en isopropylgruppe, idet disse forbindelser er henholdsvis milbe-30 mycin A3, milbemycin A4 og milbemycin D. Det i den ovennævnte formel viste nummereringssystem anvendes heri for alle milbe-mycinderivater, herunder forbindelserne ifølge den foreliggende opfindelse.

35 Disse milbemyci nforbindelser kan isoleres fra kulturer af Streptomyces-stammen B-41-146, der er blevet deponeret ved Fermentation Research Institute, Agency of Industrial Science

DK 164912 B

2 and Technology, Ministry of International Trade and Industry, Japan, hvor den er tilgængelig under accessionsnummeret FERM-1438. Forbindelserne har vist sig at have værdifulde anthelmintiske og akaracide virkninger.

5

Fra japansk Kokai nr. 57-139.081 kendes forbindelsen 5-methyl-carbamoyloxymilbemycin D og andre 5-lavere alkylcarbamoyloxy-eller 5-lavere alkansulfonyloxy-derivater. Som det fremgår af efterfølgende sammenligningsforsøg 2 har disse forbindelser 10 dog kun en moderat anthelmintisk aktivitet og ikke en tilstrækkelig langvarig virkning.

Man har nu fundet en række derivater af milbemycinerne A3, A4 og D, som ved visse testsystemer har vist sig at være mere 15 virksomme over for specifikke endoparasitter og eksoparasitter end de tilsvarende stamforbindelser.

Forbindelserne ifølge opfindelsen er 5-carbonatderivater af milbemyciner og kan angives ved hjælp af formlen II

20 25 II" ^O^R1

ch| i| T

V 0;V'0

I OH (ID

,/0-r2

C

„ o

35 Q

DK 164912B

3 hvori Ri betegner en methylgruppe, en ethylgruppe eller en isopropylgruppe, r2 betegner en A-R3-gruppe, hvor A er alkylen eller alkyliden 5 med 1-6 carbonatomer, og R3 er a) halogen, b) -O-CO-R5, hvor R5 er en 5- eller 6-leddet mættet eller umættet heterocyklisk gruppe med 1 oxygenatom, 10 c) en eventuelt hydroxybeskyttet uronyloxygruppe, hvor beskyttelsesgruppen eller beskyttelsesgrupperne er valgt blandt alifatiske acylgrupper afledt af en carboxylsyre, tetrahydro-2-furanyl, tetra-hydro-2-pyrany1, 1-alkoxyethylgrupper, trial-kylsilylgrupper, alkylengrupper, aralkylengrupper og cyklo-15 alkylengrupper, d) en alkanoylaminoacyloxygruppe, hvor alkanoylgruppen har 1-6 C-atomer, og aminoacylgruppen er afledt af en aminosyre, e) en hydroxyalkanoyloxygruppe med 1-6 C-atomer, f) en dialkylaminoalkylthiogruppe, hvor hver alkylgruppe har 20 1-6 C-atomer, g) en 2,2-dimethyl-l,3-dioxolan-4-ylgruppe, eller h) en 1,2-dihydroxyethylgruppe.

Opfindelsen tilvejebringer også et anthelmintisk, akaracidt og 25 insekticidt middel omfattende en anthelmintisk, akaracid og insekticid forbindelse i blanding med et farmaceutisk, landbrugsmæssigt eller gartnerimæssigt acceptabelt bærestof eller fortyndingsmiddel, hvorhos forbindelsen er en forbindelse med formlen II.

30

Dyr, herunder mennesker, der er angrebet af en parasit i form af en parasitisk indvoldsorm, mide eller et andet insekt, kan behandles ved, at dyret påføres eller indgives en aktiv forbindelse, hvor den aktive forbindelse er en forbindelse med 35 formlen II.

Dyr eller planter kan beskyttes mod beskadigelse af parasitiske midler, indvoldsorme og insekter ved at tilføre en aktiv

DK 164912 B

4 forbindelse til dyrene, planterne eller planternes frø eller stedet for frøene eller planterne, hvorhos den aktive forbindelse er en forbindelse med formlen II.

5 Når R3 betegner en gruppe afledt af en eventuelt beskyttet uronyloxygruppe, kan denne f.eks. være en glucuronyloxygruppe eller en galacturonyloxygruppe.

Eksempler på beskyttelsesgrupper for hydroxygruppen i disse 10 grupper er: en alifatisk acylgruppe afledt af en carboxylsyre såsom formyl eller acetyl, tetrahydro-2-furany1 eller tetra-hydro-2-pyrany1, en 1-alkoxyethylgruppe såsom 1-methoxyethy1 eller 1-ethoxyethyl, og en trialkylsilylgruppe såsom trime-thylsilyl eller t-butyldimethylsilyl. Andre eksempler, hvor en 15 enkelt beskyttelsesgruppe skal beskytte begge hydroxygrupper i 1,2-diol- eller 1,3-dioldelen, er: alkylen-, aralkylen- eller cykloalkylengrupper såsom methylen, ethylen, isopropylen, ben-zylen eller cyklohexylen.

20 Alkylen- eller alky1 idengruppen repræsenteret af A er en Cj-Ce-alkylen- eller alkylidengruppe såsom methylen, ethylen, ethyliden, trimethylen, propylen, propyliden, tetramethylen, -pentamethylen eller hexamethylen. Methylen- eller ethylengrup-perne foretrækkes.

25

Halogenatomerne, som kan være repræsenteret af R3, er et fluor-, chlor-, brom- eller jodatom og fortrinsvis chlor eller jod.

30 I forbindelserne med formlen II, hvor alkylgrupper eller al-kyldele, der indgår under pkt. f) i definitionen for R3, betegner en Cj-Cg-alkylgruppe eller en substitueret alkylgruppe, kan denne være en ligekædet eller forgrenet gruppe og er fortrinsvis en Ci-Cs-alkylgruppe, f.eks. en methyl-, ethyl-, 35 propyl-, butyl- eller pentylgruppe. Det er fortrinsvis en Ci“C3-al kylgruppe.

DK 164912B

5

Acyldelen i en alkanoylaminoacyloxygruppe R3 er fortrinsvis en alkanoylgruppe (såsom formyl, acetyl, propionyl eller butyryl) eller en benzoylgruppe, især en acetylgruppe.

5 Heterocykliske grupper, der kan være repræsenteret ved R5, er 5- eller 6-leddede cykliske grupper indeholdende et ringoxy-genatom, især furanyl, dihydrofuranyl, tetrahydrofuranyl, di-hydropyranyl og tetrahydropyranyl, især pyranyl, dihydropyra-nyl og tetrahydropyranyl.

10

Nogle af grupperne, der er repræsenteret ved R2 i forbindelserne med formlen II, indeholder asymmetriske carbonatomer og kan således danne optisk aktive forbindelser. Disse optisk aktive forbindelser og også optisk inaktive former såsom race-15 mater udgør en del af den foreliggende opfindelse. Især i tilfældet med grupper afledt af uronsyrer kan både naturligt forekommende former og former, som ikke optræder i naturen, anvendes.

20 Foretrukne klasser af forbindelser med formlen II er som følger: 1. Forbindelser, hvori 25 R2 betegner en A *-R3'-gruppe, hvor A' er Cj_2-alkylen, og R3' er a) halogen, b) -Q-C0-R®', hvor R®' er en 6-leddet mættet eller umættet 30 heterocyklisk gruppe med 1 oxygenatom, c) en eventuelt hydroxybeskyttet uronyloxygruppe, hvor beskyttelsesgruppen eller beskyttelsesgrupperne er valgt blandt alifatiske acylgrupper afledt af en carboxylsyre, tetrahydro-2-furanyl, tetrahydro-2-pyrany1, 1-alkoxyethylgrupper, trialkyl- 35 silylgrupper, alkylengrupper, aralkylengrupper og cykloalky-lengrupper, d) en alkanoylaminoacyloxygruppe, hvor alkanoylgruppen har 1-3

DK 164912B

6 r\ -atomer, og aminoacylgruppen er afledt af en aminosyre, e) en hydroxyalkanoyloxygruppe med 1-3 C-atomer, en dialkylaminoalkylthiogruppe, hvor hver alkylgruppe har ^ *-3 C-atomer, 9) en 2,2-dimethy1-l,3-dioxolan-4-ylgruppe, eller en 1,2-dihydroxyethylgruppe.

Forbindelser, hvori R1 betegner en ethyl- eller isopro-f*yigruppe (dvs. milbemycin A4- og D-derivater).

Eksempler på forbindelser ifølge opfindelsen er anført nedenfor : 15 ** (c^l°rmethoxycarbonyl)milbemycin D.

3. 05-(jodmethoxycarbonyl)milbemycin D.

4· O5-[(3,4-dihydro-2H-pyran-2-ylcarbonyloxyJmethoxycarbonyl]- milbemycin D.

5. 05-[(l,2,3,4-dii sopropy1 i dengal acturonyloxy) methoxycarbo-nyl]milbemycin D.

2 0 6. 0®-(N-acetylglycyloxymethoxycarbonyl)milbemycin D.

7. 0®—(4-hydroxybutyry1oxymethoxycarbony1)mi1bemycin D.

8. o5-[2-(N,N-dimethyl ami no)ethylthiomethoxycarbony1]mi 1bemyci n 0.

9. 0^-(2,2-di methyl-1,3-di oxo1an-4-y1methoxycarbonyl)miIbe- 25 mycin D.

10. 05-(2,3-dihydroxypropoxycarbonylJmilbemycin D.

11. 0®-(2,2-di methy1-1,3-di oxo1an-4-y1 methoxycarbony1)mi 1bemyci η A4.

12. 05-(2,3-dihydroxypropoxycarbonyl)milbemycin A4.

30

Forbindelserne ifølge den foreliggende opfindelse kan fremstilles ved hjælp af de efterfølgende fremgangsmåder A og B.

35

DK 164912B

7

Fremgangsmåde A:

Forbindelser med formlen II kan fremstilles ved omsætning af 5 en forbindelse med formlen I

CH3 r^sY-CH3 10 I#, Γ Ύ Τ'Ο'Ν1 C«3 n Sr

71 V

is OH K (I)

OH

20 (hvori Ri har den ovenfor definerede betydning) med en halogenforbindelse med formlen III 25 X.CO.OR2 (III) (hvori X betegner et halogenatom, fortrinsvis et chlor- eller bromatom, og r2 har den ovenfor definerede betydning).

30

Reaktionen gennemføres fortrinsvis i nærværelse af et inaktivt opløsningsmiddel samt en base. Basen tjener som syrebindende middel, og en hvilken som helst base, der kan opfylde denne funktion uden at påvirke reagenserne negativt, kan anvendes.

35 Basen er fortrinsvis en organisk base såsom triethylamin, N,N-dimethylani1 in, pyridin, 4-dimethylaminopyridin, 1,5-diazabi-cyklo[4,3,0]non-5-en eller l,8-diazabicyklo[5,4,0]undec-7-en.

DK 164912 B

8

Der er ikke nogen særlig begrænsning med hensyn til arten af det i denne reaktion anvendte opløsningsmiddel, forudsat at det ikke påvirker reaktionen negativt. Egnede opløsningsmidler omfatter: hydrocarboner såsom hexan, benzen, toluen, eller 5 xylenerne, ethere såsom di ethyl ether, tetrahydrofuran, dioxan eller ethylenglycoldimethylether, estere såsom methylacetat eller ethylacetat, eller et overskud af den organiske base anvendes som syrebindende middel.

10 Reaktionstemperaturen er heller ikke særligt afgørende, og det foretrækkes normalt at gennemføre reaktionen ved en temperatur mellem 0°C og 50°C. Den til reaktionen nødvendige tid vil naturligvis variere, afhængigt af reagensernes art samt af reaktionstemperaturen, men fra 30 minutter til 3 timer vil 15 normalt være tilstrækkeligt.

Hvor R2 i forbindelsen med formlen III indeholder en eller flere hydroxygrupper, beskyttes grupperne fortrinsvis først for at hæmme sidereaktioner. Beskyttelsesgruppen fjernes der-20 efter om nødvendigt efter reaktionen på sædvanlig måde. Egnede hydroxybeskyttende grupper omfatter cykliske ethergrupper, 1-alkoxyethyl grupper, silylgrupper, alkylengrupper, cykloalky-lengrupper og alifatiske acylgrupper.

25 Når den hydroxybeskyttende gruppe er en cyklisk ethergruppe, en 1-alkoxyethy1 gruppe, en silylgruppe, en alkylengruppe eller en cykloalkylengruppe, fjernes den fortrinsvis ved at bringe forbindelsen i kontakt med en syre i nærværelse af et inaktivt opløsningsmiddel. Syren kan være en mineralsyre (såsom salt-30 syre, salpetersyre eller svovlsyre) eller en organisk syre (såsom eddikesyre, trifluoreddikesyre, methansulfonsyre, benzensul fonsyre eller p-toluensulfonsyre). Der er ikke nogen særlig begrænsning med hensyn til arten af det anvendte inaktive opløsningsmiddel, forudsat at det ikke påvirker reak-35 tionen negetivt. Egnede opløsningsmidler omfatter: hydrocarboner såsom hexan, benzen eller toluen, ethere såsom diethyl-ether, tetrahydrofuran eller dioxan, alkoholer såsom methanol,

DK 164912B

9 ethanol, propanol eller ethylenglycol, vand, samt blandinger af to eller flere af disse opløsningsmidler.

Når den hydroxybeskyttende gruppe er en silylgruppe, fjernes 5 denne fortrinsvis ved at behandle forbindelsen med tetrabutyl-ammoniumfluorid ved en temperatur fra 0 til 100ec i et tidsrum fra 30 minutter til 3 timer.

Når den hydroxybeskyttende gruppe er en alifatisk acylgruppe, 10 kan den fjernes ved at behandle forbindelsen med en base såsom ammoniak, i vand eller en alkohol (såsom methanol eller ethanol) ved omkring stuetemperatur i et tidsrum fra 30 minutter til 5 timer.

IS Fremgangsmåde B:

En alternativ række trin til fremstilling af nogle af forbindelserne ifølge opfindelsen er belyst i det efterfølgende 20 reaktionsskema: 25 30 35

DK 164912 B

10 CH3 /~YCH3 chA t

V 0%/0 + X-C-O-A-Y

1 OH 11

1 ™i O

Γ" Il 1IV1 °H CH3 ^v^CH3 111 \^Ύ "ο^ή1

CH3 I T

(B1) ^>1 °y°

- OH

f-'Y'«, 0^ .O-A-Y (V)

II

CH3 ^Y^CH3 o ^oA1 CH3A 1^

Il |L o _y ohT (vid ir7-h) |APs ° Y^CH3 0^0 -A-R7

II

DK 164912B

11 I de ovennævnte formler har R*, A og X de ovenfor definerede betydninger, R? har de under punkt b), c), d), e) eller f) angivne betydninger for gruppen R3, og Y betegner et halogenatom, fortrinsvis et brom- eller jodatom.

5

Trin Bl i denne proces omfatter fremstillingen af en forbindelse med formlen V ud fra det tilsvarende milbemycin med formlen I ved reaktion med en forbindelse med formlen IV. Dette trin er analogt med processen i fremgangsmåde A og kan 10 gennemføres under helt de samme betingelser som beskrevet i forbindelse hermed.

Den resulterende forbindelse med formlen V kan om nødvendigt omdannes til en analog forbindelse med et andet halogenatom Y 15 i stedet for det oprindelige halogenatom. Denne reaktion kan gennemføres på sædvanlig måde for halogenatom-bytning.

Hvis f.eks. forbindelsen med formlen V oprindeligt indeholder et chlor- eller et bromatom som det ved Y repræsenterede atom, 20 og dette skal byttes til et fluoratom, gennemføres reaktionen ved at omsætte udgangsmaterialet med kaliumfluorid. Hvis derimod forbindelsen med formlen V oprindeligt indeholder et chloratom som det af Y repræsenterede atom, kan dette byttes til et brom- eller jodatom ved at omsætte udgangsmaterialet 25 med henholdsvis et alkalimetalbromid eller .-jodid, især na- triumbromid, kaliumbromid, natriumjodid eller kaliumjodid.

Disse halogenbytningsreaktioner gennemføres fortrinsvis i et polært opløsningsmiddel (såsom acetonitril eller ethylengly-30 col) ved en temperatur fra 0 til 100eC i et tidsrum fra 30 minutter til 5 timer. Halogenbytningsreaktionen kan fremskyn-des ved tilstedeværelse af en kroneether, f.eks. 12-krone-4, 15-krone-5 eller 18-krone-6.

35 I trin B2 fremstilles en forbindelse med formlen VII ved at omsætte forbindelsen med formlen V med en forbindelse med formlen VI

DK 164912 B

12 R?-H (VI) (hvori R7 har den ovenfor definerede betydning) i et inaktivt opløsningsmiddel.

5

Det foretrækkes at forbindelsen med formlen VI omdannes til dets salt med et alkalimetal (såsom lithium, natrium eller kalium) før eller under reaktionen.

10 Forbindelsen med formlen VI kan også anvendes i form af et. salt med en organisk amin såsom triethylamin eller dicyklo-hexylamin.

Det er ikke afgørende, hvilket opløsningsmiddel, der anvendes 15 til disse reaktioner, forudsat at det ikke påvirker reaktionen negativt. Egnede opløsningsmidler omfatters amider såsom dimethyl formamid , dimethy1acetamid eller hexamethylphosphortri-amid, sulfoxider såsom dimethylsulfoxid, ketoner såsom acetone eller methylethylketon, samt nitriler såsom acetonitril.

20

Reaktionstemperaturen er heller ikke særligt afgørende, men et foretrukket temperaturområde er fra 0 til 100°C. Den til reaktionen nødvendige tid vil naturligvis afhænge af reagensernes art og reaktionstemperaturen, men det vil normalt være ti 1 -25 strækkeligt med et tidsrum på fra 30 minutter til 5 timer.

Hvis R7 i forbindelsen med formlen VI, der anvendes i denne reaktion, indeholder en hydroxygruppe, foretrækkes det, at en sådan gruppe beskyttes. Efter reaktionen kan beskyttelses-30 gruppen om nødvendigt fjernes på sædvanlig måde. Beskyttelsesgrupper og metoder til fjernelse heraf er beskrevet under fremgangsmåde A.

Efter at de ovennævnte reaktioner er afsluttet, kan det øns-35 kede produkt udvindes fra reaktionsblandingen på sædvanlig måde. En egnet udviklingsteknik omfatter f.eks., at reaktionsblandingen (om nødvendigt efter fjernelse af opløsningsmidlet

DK 164912 B

13 ved destillation) hældes i isvand, blandingen, om nødvendigt, neutraliseres med en base eller en syre, og blandingen derefter ekstraheres med et organisk opløsningsmiddel, der ikke er blandbart med vand. Efter tørring af den organiske ekstrakt og 5 afdestillation af opløsningsmidlet kan den resulterende rest om nødvendigt renses yderligere ved hjælp af sædvanlige metoder, f.eks. omkrystallisation og/eller søjlekromatografi.

Forbindelserne ifølge opfindelsen har en kraftig akaracid 10 virkning over for f.eks. fuldt udviklede former og æg af Te-tranychus, Panonychus og rustmider, som er parasitter på frugttræer, grøntsager og blomster. De er også virksomme mod Ixodidac, Dermanysside og Sarcoptidae, som er parasitter på dyr. De er endvidere virksomme mod eksoparasitter såsom 15 Oestrus, Lucilia, Hypoderma, Gasterophi1us, lus og fluer, som er parasitter på dyr og fugle, især husdyrbestande og fjerkræ, husinsekter såsom kakerlakker og stuefluer samt forskellige andre skadelige insekter i landbrug og gartneri såsom bladlus og Lepidoptera på larvestadiet. De er også virksomme mod Me-20 loidogyne i jorden, Bursaphelenchus og Phizoglyphus. De er også virksomme mod insekter af ordenerne Coleoptera, Homop-tera, Heteroptera, Diptera, Thysanoptera, Orthoptera, Anoplu-ra, Siphonaptera, Hallophage, Thysanura, Isoptera, Psocoptera og Hymenoptera.

25

Forbindelserne ifølge opfindelsen kan ligeledes anvendes til bekæmpelse af andre plantebeskadigende insekter, især insekter, som beskadiger planter ved at æde dem. Forbindelserne kan anvendes til at beskytte både prydplanter og nytteplanter, 30 især bomuld (f.eks. mod Spodoptera litteralis og Heliothis virescens), såvel som grøntsagsafgrøder (f.eks. mod Leptino-tarsa decemlineata og Myzus persicae) og risafgrøder (f.eks. mod Chilo suppressalis og Laodelphax).

35 Virkningen af forbindelserne ifølge opfindelsen er udpræget systemisk og ved kontakt. Forbindelserne er følgelig meget virksomme mod sugende insekter, især sugende insekter af orde

DK 164912B

14 nen Homoptera og særligt udpræget familien Aphididae (såsom Aphis fabae, Aphis craccivora og Myzus persicae), som det er vanskeligt at bekæmpe med kendte midler.

5 Forbindelserne ifølge opfindelsen kan følgelig anvendes til at behandle alle former for planter (såvel som frøene, hvoraf planterne dyrkes, og omgivelserne, som indeholder sådanne planter) med henblik på at beskytte dem mod insekter såsom de ovenfor eksemplificerede. Sådanne planter omfatter kornsorter 10 (f.eks. majs eller ris), grøntsager (f.eks. kartofler eller sojabønner), frugter og andre planter (f.eks. bomuld).

Forbindelserne ifølge opfindelsen kan ligeledes anvendes til at beskytte dyr mod en række eksoparasitter ved at tilføre 15 forbindelserne til dyrene eller til dyrenes omgivelser, f.eks. hvor husdyr opholder sig, dyrebåse, slagterier, græsgange og andre græsområder såvel som alle andre steder, som er udsat for at blive inficeret. Forbindelserne kan også påføres udvendige dele på dyrene, fortrinsvis før disse er inficeret.

20

Forbindelserne ifølge opfindelsen er desuden virksomme mod en række parasitiske indvoldsorme. Disse parasitter kan angribe husdyr, fjerkræ og kæledyr (såsom svin, får, geder, køer, heste, hunde, katte og fugle) og kan forårsage alvorlige øko-25 nomiske tab. Blandt indvoldsormene forårsager især nematoderne ofte alvorlige infektioner. Typiske slægter af nematoder, som er parasitter på disse dyr, og mod hvilke forbindelserne ifølge opfindelsen er virksomme, omfatter: 30 Haemonchus, Trichonema,

Trichostrongylus, Dictyocaulus,

Ostertagia, Capillaria,

Nematodirus, Heterakis,

Cooperia, Toxocara,

Ascaris, Ascaridia,

Bunostomum, Oxyuris, 35 Oesophagostomum, Ancylostoma,

Chabertia, Uncinaria,

Trichuris, Toxascaris og

Strongylus, Parascaris.

DK 164912 B

15

Visse parasitiske arter af slægterne Nematodirus, Cooperia og Oesophagostomum angriber tarmene, medens visse arter af slægterne Haemonchus og Ostertagia snylter i maven, og parasitter, som hører til slægten Dictyocaulus, er fundet i lunger-5 ne. Parasitter, der hører til familierne Filariidae og Seta-riidae, er fundet i de indre væv og organer, f.eks. i hjertet, blodkarrene, de subkutane væv og lymfekarrene. Forbindelserne ifølge opfindelsen er virksomme mod alle disse parasitter.

Forbindelserne ifølge opfindelsen er også virksomme mod para-10 sitter, som inficerer mennesker. Typiske eksempler på parasitterne, som mest almindeligt findes i menneskets fordøjelseskanal, er parasitter af slægterne Ancylostoma, Necator, Asca-ris, Strongyloides, Trichinella, Capillaria, Trichuris og Enterobius. Forbindelserne er også virksomme mod parasitter 15 af slægterne Wuechereria, Brugia, Onchocerca og Loa af familien Filariidae(som findes i blod, væv og andre organer ud over fordøjelseskanalen, og som er af medicinsk betydning), parasitter af slægten Dracunculus og parasitter af slægterne Strongyloides og Trichinella (som specielt inficerer den eksointestinale ka-20 nal).

Formen af midlerne ifølge opfindelsen og arten af de deri anvendte bærere eller fortyndingsmidler vil variere, afhængigt af den tilsigtede anvendelse af midlet. Hvor forbindelserne ifølge opfindelsen f.eks. skal anvendes som anthelmintiske midler 25 til mennesker og andre dyr, administreres de fortrinsvis oralt, parenteralt eller topisk, og formen af valgte midler vil være afpasset efter den planlagte ådministrationsvej.

Til oral administration har midlet ifølge opfindelsen fortrinsvis form af en flydende væske, som omfatter en ikke-toksisk op-30 løsning, suspension eller dispersion af den aktive forbindelse i vand eller en anden ikke-toksisk væske i blanding med et suspensionsmiddel (såsom bentonit), et befugtningsmiddel eller

DK 164912B

16 andre fortyndingsmidler. Væsken indeholder almindeligvis også et antiskummemiddel. Den aktive forbindelse vil normalt indgå i væsken i en mængde fra 0,01 til 0,5 vægt%, særligt fordelagtigt fra 0,01 til 0,1 vægt%.

5 Midler til oral administration kan også have form af tørre, faste stoffer, fortrinsvis i enhedsdosisform, såsom kapsler, piller eller tabletter, som indeholder den ønskede mængde af den aktive forbindelse. Disse midler kan fremstilles ved at blande den aktive forbindelse homogent med egnede findelte 10 fortyndingsmidler,fy Idstof fer, desintegrationsmidler og/eller bindemidler, f.eks. stivelse, lactose, talkum, magnesiumstea-rat og vegetabilsk gummi. Præparatets vægt og indhold vil variere meget, afhængigt af, hvilke dyr, der skal behandles, infektionsgraden, parasittens art og legemsvægten af dyret, 15 der skal behandles.

Forbindelserne kan også administreres som et additiv til dyrefoder, idet de kan fordeles ensartet i foderet, anvendes som et overfladelag eller anvendes i form af piller. Indholdet af den aktive forbindelse i foderet er fortrinsvis fra 20 0,0001 til 0,02% med henblik på at opnå den ønskede antftelmin- tiske virkning.

Til parenteral administration bliver forbindelsen ifølge opfindelsen fortrinsvis opløst eller suspenderet i en flydende bærer, fortrinsvis en vegetabilsk olie såsom jordnøddeolie 25 eller bomuldsfrøolie. Afhængigt af dyret, der skal behandles, kan injektionen være subkutan eller foretages i proventriculus, en muskel eller trachea, sådanne præparater vil normalt indeholde den aktive forbindelse i en koncentration fra 0,05 til 50 vægt%.

30 Forbindelserne ifølge opfindelsen kan også administreres topisk i blanding med en egnet bærer såsom dimethylsulfoxid, eller et hydrocarbon-opløsningsmiddel. Sådanne præparater vil

DK 164912 B

17 blive tilført direkte udvendigt på dyret ved sprøjtning (f.eks. ved hjælp af en håndsprøjte eller anden sprøjte), ved dypning (f.eks. i et dyppekar),med en overhældningsopløsning eller ved hjælp af manuelle metoder (f.eks. påføring med hånden).

5 Dosen af den virksomme forbindelse kan variere, afhængigt af arten af dyret, der skal behandles, og arten og graden af parasitinfektionen. De bedste resultater opnås imidlertid med oral administration, hver dosen er fra 0,01 til 100 mg, især fra 0,5 til 50 mg pr. kg legemsvægt. Forbindelsen kan admini-10 streres i en enkelt dosis eller i del-doser i et forholdsvis kort tidsrum, f.eks. fra 1 til 5 dage.

Når midlet ifølge opfindelsen er beregnet til anvendelse i landbrug eller gartneri, er der mulighed for en række former og formuleringer.For eksempel kan det formuleres som pudremid-15 ler, grove pulvere, opløselige pulvere, mikrokorn, fine mikro-korn, fugtbare pulvere, fortyndede emulsioner, emulgerbare koncentrater, vandige eller olieagtige suspensioner eller opløsninger (som kan være beregnet til direkte påsprøjtning eller til fortynding), aerosoler eller kapsler i f.eks. polymere 20 stoffer. Den anvendte bærer kan være naturlig eller syntetisk og organisk eller uorganisk. Den anvendes almindeligvis til at hjælpe med til, at den aktive forbindelse når den del, der skal behandles, og til at gøre det lettere at lagre, transportere eller håndtere den aktive forbindelse. Faste, flydende og 25 gasformige bærere kan anvendes og vælges blandt bærere, der er velkendt i teknikken til brug i forbindelse med midler af denne type.

Sådanne formuleringer kan fremstilles på sædvanlig måde, f.eks. ved omhyggelig blanding og/eller formaling af den aktive bestanddel 30 eller de aktive bestanddele med bæreren eller fortyndingsmidlet, f.eks. opløsningsmiddel, fast bærer eller, eventuelt, overfladeaktivt middel.

DK 164912 B

18

Egnede opløsningsmidler omfatter: aromatiske hydrocarboner, fortrinsvis Cg-C^2_faktionerne fra jordolie-destillation såsom xylehbl.andinger eller substituerede naphthalener, estere af phthalsyre såsom dibutyl- eller dioctylphthalat, 5 alifatiske eller alicykliske hydrocarboner såsom cyklohexan eller paraffinerne, alkoholer og glycoler eller ethere afledt fra disse såsom ethanol, ethylenglycol, ethylenglycolmonomethyl-ether eller ethylenglycolmonoethylether, ketoner såsom cyklo-hexanon, kraftigt polære opløsningsmidler såsom. N-methy1-2-10 pyrrolidon, dimethylsulfoxid eller Ν,Ν-dimethylformamid, eventuelt epoxiderede vegetabilske olier såsom epbxideret kokosolie eller sojabønneolie, samt vand.

Faste bærere, der kan anvendes, f.eks. i pudremidler og dis-pergerbare pulvere, omfatter naturlige mineralske fyldstoffer 15 såsom calcit, talkum, kaolin, montmorillonit eller attapulgit. Til forbedring af midlets fysiske egenskaber er det også muligt at tilsætte kraftigt dispergeret kiselsyre eller kraftigt dispergerede absorberende polymerer. Egnede granulerede absorberende bærere kan være porøse (såsom pimpsten, formalet 20 tegl, sepiolit eller bentonit) eller ikke-porøse (såsom calcit eller sand). En lang række for-granulerede stoffer, organiske eller uorganiske, kan også anvendes. Eksempler herpå omfatter dolomit og formalede planterester.

Overfladeaktive midler, der kan anvendes, er velkendte i tek-25 nikken og kan være ikke-ionogene, kationaktive eller anion- aktive midler med gode emulgerende, dispergerende og befugten-de egenskaber. Blandinger af sådanne midler kan også anvendes.

Midlerne kan også indeholde stabilisatorer, antiskummemidler, viskositetsregulerende midler, bindemidler eller klæbemidler 30 eller kombinationer heraf samt gødningsstoffer eller andre aktive stoffer til opnåelse af særlige virkninger.

DK 164912 B

19

Pesticide midler vil i almindelighed indeholde fra 0,01 til 99%, især fra 0,1 til 95 vægt% af den aktive forbindelse, fra 1 til 99,99 vægt% af et fast eller flydende additiv og fra 0 til 25%, især fra 0,1 til 25 vægt% af et overfladeaktivt 5 middel. Selv om kommercielle produkter almindeligvis sælges som koncentrerede midler, fortyndes de i almindelighed af den endelige bruger til en koncentration af aktiv bestanddel fra 0,001 til 0,0001 vægt% (fra 10 til 1 ppm).

Opfindelsen belyses yderligere ved hjælp af de efterfølgende 10 eksempler, hvor eksemplerne 1-11 belyser fremstillingen af forskellige forbindelser ifølge opfindelsen, eksemplerne 12 -14 belyser aktiviteten af forbindelserne ifølge opfindelsen, og fremstillingen af et udgangsmateriale for nogle af eksemplerne er belyst ved hjælp af den efterfølgende fremstillings-15 metode.

Fremstillingsmetode: 2,2-dimethyl-1,3-dioxolan-4-ylmethylchlorformiat.

10 ml af en 10% vægt/volumen-opløsning af phosgen i benzen blev tilsat til en opløsning af 1,0 g 2,3-isopropyliden-20 glycerol i 5 ml methylenchlorid, og blandingen fik lov til at reagere natten over ved stuetemperatur. Blandingen blev derpå koncentreret ved inddampning under reduceret tryk til opnåelse af 1,47 g af titelforbindelsen som en væske.

Infrarødt absorptionsspektrum (væskefilm): 25 'w·.'»-1 1775·

DK 164912B

20 EKSEMPEL 1.

5 (a) O - (chlormethoxycarbonyl)milbemycin D.

5 (b) O - (dichlormethoxycarbonyl) milbemycin D.

En opløsning af 158 mg pyridin i 5 ml benzen blev dråbevis under isafkøling sat til en opløsning af 1,11 g milbemycin D 5 og 243 mg urent chlormethoxycarbonylchlorid (indeholdende 40 vægt% dichlormethoxycarbonylchlorid) i 10 ml benzen. Blandingen fik derpå lov til at reagere ved stuetemperatur i en time, hvorefter der blev tilsat yderligere 30 mg af det urene chlormethoxycarbonylchlorid og 20 mg pyridin. Blandingen blev 10 omrørt ved stuetemperatur i 30 minutter, hvorefter der blev tilsat ethylacetat. Blandingen blev vasket, først med vand, derpå med fortyndet saltsyre, igen med vand, med en vandig opløsning af natriumbicarbonat og igen med vand, hvorefter den blev tørret over vandfrit natriumsulfat. Opløsningsmidlet 15 blev derefter fjernet ved afdampning under reduceret tryk.

Resten blev renset ved søjlekromatografi gennem silicagel, idet der som elueringsmidler blev anvendt blandinger af hexan og ethylacetat varierende fra rent hexan til et volumenforhold på 7:3. Der blev opnået 627 mg af monochlormethoxy-titel-20 forbindelsen samt 380 mg af den tilsvarende dichlormethoxy-forbindelse.

Chlormethoxy-forbindelse:

Infrarødt absorptionsspektrum (Nujol, varemærke, mull): vmaks Cm_1 3475' I770' 1740, 1710.

21

DK 164912B

Kernemagnetisk resonansspektrum (CDC1-.) 6 ppm (ppm = dele pr.

0 million): 1.53 (3H, singlet, 14-CH3), 1,82 (3H, bred singlet, 4-CH3) , 4.65 (2H, bred singlet, 26-CH2), 5 5,70 (IH, dublet, J=6,0Hz, -CHHCl), 5,81 (IH, dublet, J=6,0Hz, -CHHCl).

Massespektrum (m/e): 648 (M+), 209, 181.

Dichlormethoxy-forbindelse:

Infrarødt absorptionsspektrum (Nujol, mull): 10 vmaks Cm_1 3470, 1780, 1705'

Kernemagnetisk resonansspektrum (CDC13) 6 ppm: 1.53 (3H, singlet, 14-CH3), 1,84 (3H, bred singlet, 4-CH3), 5.66 (2H, bred singlet, 26-CH2), 15 7,72 (IH, singlet, -CHCl2).

Massespektrum (m/e): 682 (M+), 209, 181.

EKSEMPEL 2.

5 0 - (jodmethoxycarbonyl)milbemycin D.

5

En suspension af 1,18 g O - (chlormethoxycarbonyl)milbemycin D 20 (fremstillet som beskrevet i eksempel 1) og 0,85 g natrium-jodid i 10 ml acetonitril blev opvarmet under tilbagesvaling 1 en time og derpå fortyndet med ethylacetat. Den fortyndede blanding blev vasket, først med en vandig opløsning af natriumthio-sulfat og derpå med vand, hvorefter den blev tørret over vand- 25 frit natriumsulfat og inddampet til tørhed under reduceret

DK 164912B

22 tryk. Resten blev renset ved søjlekromatografi gennem silica-gel, idet der blev elueret med en blanding af 8 volumendele hexan og 2 volumendele ethylacetat. Der blev herved opnået 950 mg af titelforbindelsen.

5 Kernemagnetisk resonansspektrum (CDCl^) δ ppm: 1,52 (3H, singlet, 14-01^) , 1,80 (3H, bred singlet, 4-CH3), 4,59 (2H, bred singlet, 26-CH2), 5,90 (2H, singlet, -CH2I).

10 EKSEMPEL 3.

5 0 -(3,4-dihydro-2H-pyran-2-ylcarbonyloxy)methoxycarbonyl-milbemycin D.

En opløsning af 200 mg O'*- (jodmethoxycarbonyl)milbemycin D (fremstillet som beskrevet i eksempel 2) og 52,7 mg natrium-15 3,4-dihydro-2H-pyran-2-ylcarboxylat i 2 ml dimethylacetamid blev omrørt ved stuetemperatur i en time. Reaktionsblandingen blev derpå fortyndet med ethylacetat, vasket med vand, tørret over vandfrit natriumsulfat og til slut inddampet til tørhed under reduceret tryk. Resten blev renset ved søjlekromatografi 20 gennem silicagel, idet der blev elueret med en blanding af 8 volumendele hexan og 2 volumendele ethylacetat. Der blev herved opnået 175 mg af titelforbindelsen.

Infrarødt absorptionsspektrum (Nujol, mull): vmaks.Cm_1 3475, 1765, 1740, 1710, 1650.

25 Kernemagnetisk resonansspektrum (CDCl^) δ ppm:

DK 164912B

23 1,53 (3H, singlet, 14-CH3), 1,82 (3H, bred singlet, 4-CH3), 4,65 (2H, bred singlet, 26-CH2), 5,80 (IH, dublet, J=8,0Hz, -OCHHO-), 5 5,93 (IH, dublet, J=8,0Hz, -OCHHO-), 6,43 (IH, dublet, J=6,0Hz, 6-H af pyran).

Massespektrum (m/e): 740 (M+), 209, 181.

EKSEMPEL 4.

O'*- (1,2,3,4-di-0-isopropylidengalacturonyloxy)methoxycarbonyl-10 milbemycin D.

5

En suspension af 1,7 g O -(chlormethoxycarbonyl)milbemycin D (fremstillet som beskrevet i eksempel 1) og 1,2 g natrium-jodid i 30 ml acetonitril blev opvarmet under tilbagesvaling il 1/2 time og derefter inddampet til tørhed under reduceret 15 tryk. Ethylacetat blev tilsat til resten, og blandingen blev derpå vasket med vand, tørret over vandfrit natriumsulfat og endelig inddampet til tørhed under reduceret tryk til opnåelse af 2,047 g af den rå jodforbindelse.

Hele portionen af denne rå jodforbindelse blev opløst i 10 ml 20 dimethylacetamid. 960 mg kalium-1,2,3,4-diisopropyliden- galacturonat blev sat til opløsningen, og blandingen blev omrørt ved stuetemperatur i en time. Den blev derefter fortyndet med ethylacetat, vasket med vand, tørret over vandfrit natriumsulfat og inddampet til tørhed under reduceret tryk.

25 Resten blev underkastet søjlekromatografi gennem silicagel, idet der blev elueret successivt med blandinger af hexan og ethylacetat i varierende forhold fra 9:1 til 6:4. Produktet blev derpå renset yderligere på en silicagel-,,Lobar" (varemærke) -kolonne (fremstillet af Merck and Co.Inc., størrelse B), idet 30 der blev elueret med en blanding af 1 volumendel ethylacetat og 9 volumendele chloroform til opnåelse af 1,5 g af titel-

DK 164912B

24 forbindelsen.

Infrarødt absorptionsspektrum (Nujol, mull): vmaks cm_1 3500' 1790' 1765/ 1710·

Kernemagnetisk resonansspektrum (CDClg) δ ppm: 5 1,33 (6H, singlet, 2 x CH^ af isopropyliden), 1,44 (3H, singlet, 14-CHg) , 1,53 (6H, singlet, 2 x CH^ af isopropyliden), 1,82 (3H, bred singlet, 4-011^), 4,63 (2H, bred singlet, 26-CH2).

10 Massespektrum (m/e): 886 (M+), 209, 181.

EKSEMPEL 5.

5 0 - (N-acetylglycyloxymethoxycarbonyl)milbemycin D.

5 131 mg triethylamin blev sat til en opløsning af 740 mg O -(jodmethoxycarbonyl)milbemycin D (fremstillet som beskrevet 15 i eksempel 2) og 152 mg N-acetylglycin i 10 ml dimethylacet-amid, hvorefter blandingen blev omrørt ved stuetemperatur i 30 minutter. Den blev derefter fortyndet med ethylacetat, vasket med vand, tørret over vandfrit natriumsulfat og inddampet til tørhed under reduceret tryk. Resten blev renset ved 20 søjlekromatografi gennem silieagel, idet der blev elueret med blandinger af hexan og ethylacetat i et mængdeforhold fra 1:1 til 1:9 til opnåelse 470 mg af titelforbindelsen.

Infrarødt absorptionsspektrum (Nujol, mull):

Vmaks 3350' 1765' 1740* 1660.

DK 164912B

25

Kernemagnetisk resonansspektrum (CDCl^) δ ppm: 1,54 (3H, singlet, 14-CH0), 1,83 (3H, bred singlet, 4-CH3), 2,04 (3H, singlet, acetyl), 5 4,65 (2H, bred singlét, 26-CH2), 5,86 (2H, singlet, -0CH20-), 6,17 (IH, bred singlet, NH).

Massespektrum (m/e): 556 (M+-173),209, 181.

EKSEMPEL 6.

5 10 O - (4~hydroxybutyryloxymethoxycarbonyl)milbemycin D.

5 500 mg O - (jodmethoxycarbonyl)milbemycin D (fremstillet som beskrevet i eksempel 2) blev under isafkøling sat til en suspension af 176 mg natrium-4-hydroxybutyrat i 5 ml dimethylacetamid, og blandingen blev omrørt ved stuetemperatur i 30 minutter.

15 Den blev derpå fortyndet med en blanding af 2 volumendele ethylacetat og 1 volumendel hexan, vasket med vand, tørret over vandfrit natriumsulfat og inddampet til tørhed under reduceret tryk til opnåelse af 430 mg af titelforbindelsen.

Infrarødt absorptionsspektrum (Nujol, mull): 20 \aks CItl_1 3475' 1765' 1740' 1710*

Kernemagnetisk resonansspektrum (CDCl^)6 ppm: 1,53 (3H, singlet, 14-CH3) , 1.82 (3H, bred singlet, 4-CH3), 2,52 (2H, triplet, J=7,0Hz, -OCOCH2~), 25 3,69 (2H, triplet, J=6,0Hz, -CH2OH), 4,66 (2H, bred singlet, 26-CH2), 5.83 (2H, singlet, -0CH20-).

DK 164912B

26

Massespektrum (m/e): 556 (M+-160), 209, 181.

EKSEMPEL 7.

5 O - [2- (Ν,Ν-dimethylamino) ethylthiomethoxycarbonyl]iailbemycin D.

Der bev fremstillet en natriummethoxidopløsning af 10 ml 5 methanol og 200 mg af en 55% vægt/vægt·suspension af natrium- hydrid i mineralolie. 326 mg N,N-dimethylaminoethanthiol- 5 hydrochlorid, efterfulgt af 1,7 g O -(jodmethoxycarbonyl)-milbemycin D (fremstillet som beskrevet i eksempel 2), blev tilsat, medens opløsningen blev afkølet med is. Blandingen 10 blev omrørt ved stuetemperatur i 30 minutter og derpå fortyndet med ethylacetat. Den blev derefter vasket med vand og derpå med en vandig opløsning af natriumthiosulfat, hvorefter den blev tørret over vandfrit natriumsulfat og inddampet til tørhed under reduceret tryk. Resten blev renset ved hjælp af 15 søjlekromatografi gennem silicagel, idet der blev elueret med chloroform og methanol i varierende forhold fra ren chloroform til en 95:5 volumenblanding. Den blev yderligere renset ved kromatografi gennem en silicagel-"Lobar"-kolonne (Merck, størrelse B), idet der blev elueret med en 90:7:3 volumen/volumen/ 20 volumen-blanding af chloroform, isopropanol og methanol til opnåelse af 530 mg af titelforbindelsen.

Infrarødt absorptionsspektrum (Nujol, mull): v . cm"1 3475, 1745, 1710. maks.

Kernemagnetisk resonansspektrum (CDC13) δ ppm: 25 1,53 (3H, singlet, 14-CH3), 1,83 (3H, bred singlet, 4-CH3), 2,27 (6H, singlet, 2 x CH3 af dimethylamino), 2,45-2,95 (4H, multiplet, -SCH2CH2-N), 4,65 (2H, bred singlet, 26-CH2), 30 5,30 (2H, singlet, -0CHoS-).

DK 164912 B

27

Massespektrum (m/e): 556 (M+-161), 209, 181.

EKSEMPEL 8.

5 0 - (2,2-dimethyl-l,3-dioxolan-4-ylmethoxycarbonyl)milbemycin D.

1,47 g 2,2-dimethyl-l,3-dioxolan-4-ylmethylchlorformiat 5 (fremstillet som beskrevet under fremstillingsmetoden) blev dråbevis i to portioner sat til en isafkølet opløsning af 0,60 g milbemycin D og 1 ml pyridin i 10 ml ethylacetat. Blandingen fik lov til at reagere ved den samme temperatur 1 en time, hvorefter der blev tilsat ethylacetat. Blandingen 10 blev derefter vasket, først med vand, derpå med en vandig opløsning af kaliumbisulfat, en vandig opløsning af natrium-bicarbonat og en vandig opløsning af natriumchlorid og endelig tørret over vandfrit natriumsulfat. Opløsningsmidlet blev af-destilleret under reduceret tryk, og resten blev renset ved 15 søjlekromatografi gennem silicagel, idet der blev elueret med chloroform og ethylacetat i varierende forhold fra 100% chloroform til en 20:1 volumen/volumen-blanding. 0,80 g af titelforbindelsen blev opnået i form af glas.

Infrarødt absorptionsspektrum (Nujol, mull): 20 Vks.™"1 3410' 1725 ·

Kernemagnetisk resonansspektrum (CDCl^)6 ppm: 1,33 (3H, singlet, CHg ved 2-stillingen af dioxolan), 1,40 (3H, singlet, CH^ ved 2-stillingen af dioxolan), 1,51 (3H, singlet, 14-CH^), 25 1,78 (3H, bred singlet, 4-CH3), 4,01 (IH, singlet, 7-OH), 4,56 (2H, bred singlet, 26-CH ).

Massespektrum (m/e): 714 (M+), 537, 519.

EKSEMPEL 9.

DK 164912 B

28 O5- (2,3-dihydroxypropoxycarbonyl)milbemycin D.

5

En opløsning af 0,70 g O -(2,2-dimethyl-l,3-dioxolan-4-yl-methoxycarbonyl)milbemycin D (fremstillet som beskrevet i eksempel 8), 7 ml eddikesyre og 21 ml vand fik lov til at rea-5 gere ved 40°C i 3 timer. Derefter blev opløsningsmidlet af- destilleret under reduceret tryk, og toluen blev derefter tilsat. Blandingen blev opvarmet til fjernelse af så meget vand og eddikesyre som muligt i form af azeotroper. Resten blev renset ved søjlekromatografi gennem silicagel, idet der blev 10 elueret med en blanding af lige volumendele chloroform og ethylacetat. Der blev herved opnået 0,56 g af titelforbindelsen i form af af et pulver.

Infrarødt absorptionsspektrum (Nujol, mull): 'W.0”'"1 3430' 1735· 15 Kernemagnetisk resonansspektrum (CDC13) δ ppm: 1,53 (3H, singlet, 14-CH3), 1,82 (3H, bred singlet, 4-CH3), 2,67-3,22 (3H, multiplet, 2 x OH og 25-H), 3,43-3,85 (3H, multiplet, -CH2OH og 17-H), 20 3,86-4,13 (IH, multiplet, 2-H af propyl), 4,12 (IH, dublet, J=6,5Hz, 6-H), 4,24 (IH, singlet, 7-OH), 4,13-4,45 (2H, multiplet, 1-H af propyl x 2), 4,66 (2H, bred singlet, 26-CH2).

25 Massespektrum (m/e): 556, 429, 410.

DK 164912B

EKSEMPEL 10.

29 5 O -(2,2-dimethyl-l,3-dioxolan-4-ylmethoxycarbonyl)milbemycin

V

Den i eksempel 8 beskrevne fremgangsmåde blev gentaget, men under anvendelse af 0,50 g milbemycin A^, 0,5 ml pyridin og 5 1,30 g 2,2-dimethyl-l,3-dioxolan-4-ylméthylchlorformiat til opnåelse af 0,589 g af titelforbindelsen i glasagtig tilstand.

Kernemagnetisk resonansspektrum (CDC13) δ ppm: 1,36 (3H, singlet, 2-methyl af dioxolan), 1,44 (3H, singlet, 2-methyl af dioxolan), 10 1,53 (3H, singlet, 14-01^), 1,81 (3H, singlet, 4-CHg), 3,80 (IH, singlet, 7-OH), 4,64 (2H, bred singlet, 26-methylen).

Massespektrum (m/e): 699, 523, 506.

15 EKSEMPEL 11.

5 O -(2,3-dihydroxypropoxycarbonyl)milbemycin A4·

Den i eksempel 9 beskrevne fremgangsmåde blev gentaget, men un- 5 der anvendelse af 593 mg O -(2,2-dimethyl-l,3-dioxolan-4-yl-methoxycarbonyl) milbemycin A^ (fremstillet son beskrevet i eksempel 10 20 ovenfor) til opnåelse af 335 mg af titelforbindelsen i form af et pulver.

Infrarødt absorptionsspektrum (Nujol, mull): v , cm ^ 3460, 1745.

maks.

DK 164912B

30

Kernemagnetisk resonansspektrum (CDCl^) <S ppm: 1,53 (3H, singlet, 14-CH3), 1,82 (3H, singlet, 4-CH3), 3,08 (IH, triplet, 25-H), 5 3,33 (IH, multiplet, 2-H) , 3,6-3,75 (2H, multiplet, CH(OH)CH2OH), 3,99 (IH, multiplet, CH(OH)CH2OH), 4,12 (IH, dublet, 6-H), 4,2-4,35 (2H, multiplet, OCH2CH(OH)C^OH) / 10 4,64 (2H, bred singlet, 26-methylen).

Massespektrum (m/e): 542, 414, 396.

EKSEMPEL 12.

Anthelmintisk aktivitet mod larver af Ascaris suum, der vandrer ind i muselunger.

15 De anvendte forsøgsdyr var hanmus af DDY-stammen, hver med en vægt på 25 - 30 g. Dyrene blev anvendt i grupper på 5 til hvert forsøg. Ved forøgets begyndelse blev hver mus (bortset fra en ikke-inficeret kontrolgruppe) inficeret med Ascaris suum ved oral indgift af ca. 3.000 æg pr. mus gennem en mave-20 sonde.

24 timer efter infektionen blev forbindelsen, der skulle undersøges, indgivet (dog ikke til den ikke-inficerede kontrolgruppe og en inficeret kontrolgruppe), enten oralt eller ved subkutan injektion af en dosis på 0,8 mg/kg legemsvægt pr. mus. 25 Den undersøgte forbindelse blev indgivet som et præparat fremstillet ved blanding af 1,0 g af testforbindelsen, 0,1 g buty-leret hydroxytoluen og 10 ml acetamid med tilstrækkelig poly-ethylenglycol (PEG-400) til opnåelse af et samlet volumen på 100 ml.

31

DK 164912 B

Den syvende dag efter infektionen blev musene aflivet og obduceret til bestemmelse af omfanget af læsioner i lungerne og antallet af larver, som var vandret ind i lungerne. Omfanget af læsionerne blev vurderet ved hjælp af Brown et al.'s 5 metode [Am.J.Vet.Res.16, 613-615 (1955)]. Larverne blev opsamlet ved hjælp af Berman's metode,og antallet af larver blev beregnet ved hjælp af fortyndingsmetoden.

Legemsvægten for hver mus blev bestemt umiddelbart før infektionen og ved obduktion. Opretholdelsen af legemsvægten blev 10 beregnet som ændringen i legemsvægten mellem de to målinger divideret med den gennemsnitlige ændring i legemsvægt hos mus fra den ikke-inficerede kontrolgruppe og udtrykt som en procentdel.

Reduktionen i antallet af larver blev beregnet som forskellen 15 mellem det gennemsnitlige antal af larver hos den inficerede kontrolgruppe og antallet af larver i gruppen, der blev undersøgt, divideret med antallet af larver i den inficerede kontrolgruppe og udtrykt som en procentdel.

Resultaterne er vist i tabellerne I (ved oral indgift) og II 20 (ved subkutan injektion).

» 32

DK 164912 B

TABEL I

(oral indgift).

Oprethol- Reduktion i

Forbindelse Omfang af delse af antallet af fra eks. nr. læsioner legemsvægt (%) larver (%) 5 1(a) 3,6 80,2 65,1 4 3,4 79,8 66,9 6 3,4 80,5 65,5 7 3,4 86,1 70,8 9 3,0 83,0 65,3 10 Kontroller:

Ikke-inficeret 0 100 -

Inficeret 3,5 81,1 0

TABEL II

(subkutan indgift).

Oprethol- Reduktion i 15 Forbindelse Omfang af delse af antallet af fra eks. nr. læsioner legemsvægt (%) larver (%) 1(a) 3,6 81,4 67,9 4 3,4 81,9 61,1 6 3,6 81,3 65,5 20 7 3,4 84,4 69,6 9 3,4 78,8 58,3

Kontroller:

Ikke-inficeret 0 100 “

Inficeret 4,0 81,2 0 EKSEMPEL 13.

DK 164912B

33

Anthelmintisk aktivitet mod Derofilaria immitis.

Hunde med en legemsvægt på 8 - 17 kg, der var naturligt inficeret med Derofilaria immitis, blev anvendt som forsøgsdyr.

5 1,0 g af hver af de i tabellerne III og IV anførte forsøgs forbindelser blev blandet med 0,1 g butyleret hydroxytoluen, 10 ml acetamid og tilstrækkelig polyethylenglycol (PEG-400) til at opnå et samlet volumen på 100 ml.

Hver hund fik derefter oralt eller ved subkutan injektion til-10 strækkeligt af dette middel til at tilføre 0,1 mg af forsøgsforbindelsen pr. kg legemsvægt.

Der blev taget en blodprøve fra hundens saphena umiddelbart før indgift af midlet og derpå en uge og 2 uger efter indgift. Under anvendelse af en Zahli pipette blev 0,02 ml af blodprøven fordelt som et tykt lag på et objektglas, hvorefter blodet blev farvet med Giemsa-opløsning, og antallet af microfilaria blev talt mikroskopisk og bestemt som et gennemsnit over fire obj ektglas-prøver.

Resultaterne er anført i tabellerne III og IV som den procenti-20 ske reduktion af microfilaria ud fra værdien før indgift af midlet til værdien opnået en eller to uger efter indgift.

DK 164912 B

34 TABEL III (oral indgift) .

S reduktion af microfilaria

Forbindelse ---------------------------------- fra eks. nr. Efter en uge Efter to uger 5 1(a) 80,1 83,3 3 83,8 85,1 6 95,5 94,9 9 99,4 99,6 10 84,3 54,5

10 TABEL IV

(subkutan indgift).

% reduktion af microfilaria

Forbindelse ---------------------------------- fra eks. nr. Efter en uge Efter to uger 1(a) 42,8 79,8 15 3 72,6 74,1 6 97,7 97,6 9 88,9 88,0 EKSEMPEL 14.

Akaricid aktivitet mod Tetranychus urticae.

20 Primblade på planter af arten Phaseolus vulgaris blev inficeret ved kontakt med et bladstykke fra en massekultur af mider af arten Tetranychus urticae (organisk phosphat-sensitiv). 16 timer efter infektionen blev de inficerede planter sprøjtet, indtil de var dråbevåde, med en forsøgsopløsning indeholdende 25 forbindelsen, der skulle undersøges, i en koncentration på

DK 164912 B

35 0,2, 0,6 eller 1,0 ppm·. Planterne blev undersøgt efter 24 timers forløb og igen efter 7 dages forløb ved undersøgelse af fuldt udviklede insekter (imagoer) og larver (alle mobile stadier) under et dobbelt-mikroskop til bestemmelse af levende og 5 døde individer. Der blev anvendt én plante til hver koncentration og hver forsøgsforbindelse. Planterne blev under forsøget holdt ved drivhusbetingelser ved 25°C. Hver af forbindelserne fra eksemplerne 1 - 11 opnåede 100% dødelighed inden for forsøgsperioden mod mider af arten Tetranychus urticae ved kon-10 centrationer i intervallet fra 0,6 til 1,0 ppm.

Sammen!igninosforsøq 1

Under anvendelse af den i eksempel 12 beskrevne metode blev 15 der udført forsøg med den kendte ‘forbindelse milbemycin D ved oral administration (se tabel V) og ved subkutan administration (se tabel VI).

TABEL V (Oral indgift) 20 Reduktion

Omfang af Opretholdelse i antallet

Forbindelse læsioner af legemsvægt (%) af larver (%)

Milbemycin 3,8 79,8 52,5

25 D

TABEL VI (Subkutan indgift)

Redukt ion

Omfang af Opretholdelse i antallet 30 Forbindelse læsioner af legemsvægt (%) af larver (%)

Milbemycin 3,6 79,9 52,4

D

35 Af disse resultater og de i tabel I og tabel II i eksempel 12 anførte resultater fremgår det, at forbindelserne ifølge opfindelsen især er fremragende med hensyn til reduktion i antallet af larver sammenlignet med milbemycin D.

Claims (12)

1. Milbemyci n-5-carbonatderivater, kendetegnet ved formlen II 20 ^O^R1 CHiji Sr

25 V JjfflT (II) 30 °“^Y^CH3 0^ ,^0-r2 r II o 35 hvori DK 164912 B 37 Ri betegner en methylgruppe, en ethylgruppe eller en isopro-pylgruppe, r2 betegner en A-R3-gruppe, hvor A er alkylen eller alkyliden 5 med 1-6 C-atomer, og R3 er a) halogen, b) -O-CO-R®, hvor R$ er en 5- eller 6-leddet mættet eller umættet heterocykli sk gruppe med 1 oxygenatom, 10 c) en eventuelt hydroxybeskyttet urony1oxygruppe, hvor beskyttelsesgruppen eller beskyttelsesgrupperne er valgt blandt alifatiske acylgrupper afledt af en carboxylsyre, tetrahydro-2-furanyl, tetrahydro-2-pyrany1, 1-alkoxyethylgrupper, trialkyl-silylgrupper, alkylengrupper, aralkylengrupper og cykloalky-15 lengrupper, d) en alkanoylaminoacyloxygruppe, hvor alkanoylgruppen har 1-6 C-atomer, og aminoacylgruppen er afledt af en aminosyre, e) en hydroxyalkanoyloxygruppe med 1-6 C-atomer, f) en dialkylaminoalkylthiogruppe, hvor hver alkylgruppe har 20 1-6 C-atomer, g) en 2,2-dimethyl-l,3-dioxolan-4-ylgruppe, eller h) en 1,2-dihydroxyethylgruppe.

2. Forbindelser ifølge krav 1, kendetegnet ved, 25 at R2 betegner en A'-R3'-gruppe, hvor A' er ¢2.2-81kylen, og R3' er 30 a) halogen, b) -0-C0-R5', hvor r5‘ er en 6-leddet mættet eller umættet heterocyklisk gruppe med 1 oxygenatom, c) en eventuelt hydroxybeskyttet uronyloxygruppe, hvor beskyttelsesgruppen eller beskyttelsesgrupperne er valgt blandt ali- 35 fatiske acylgrupper afledt af en carboxylsyre, tetrahydro-2- furanyl, tetrahydro-2-pyrany1, 1-alkoxyethylgrupper, trialkyl- silylgrupper, alkylengrupper, aralkylengrupper og cykloalky- DK 164912B 38 lengrupper, d) en alkanoylaminoacyloxygruppe, hvor alkanoylgruppen har 1-3 C-atomer, og aminoacylgruppen er afledt af en aminosyre, e) en hydroxyalkanoyloxygruppe med 1-3 C-atomer, 5 f) en dialkylaminoalkylthiogruppe, hvor hver alkylgruppe har 1-3 C-atomer, g) en 2,2-dimethyl-l,3-dioxolan-4-ylgruppe, eller h) en 1,2-dihydroxyethylgruppe.

3. Forbindelser ifølge krav 1-2, kendetegnet ved, at fil betegner en ethyl- eller isopropylgruppe.

4. Forbindelse ifølge krav 1, kendetegnet ved, at den er O5-(chlormethoxycarbony1)mi 1bemycin D. 15

5. Forbindelse ifølge krav 1, kendetegnet ved, at den er 05-(3,4-dihydro-2H-pyran-2-ylcarbonyloxy)methoxycarbo-nyl-milbemycin D.

6. Forbindelse ifølge krav 1, kendetegnet ved, at den er 05-(l,2,3,4-di-0-isopropylidengalacturonyloxyj-methoxy-carbonyl-mi 1bemycin D.

7. Forbindelse ifølge krav 1, kendetegnet ved, at 25 den er O*»-(4-hydroxybutyryloxymethoxycarbony1)miIbemycin D.

8. Forbindelse ifølge krav 1, kendetegnet ved, at den er O5-[2-(Ν,Ν-dimethyl amino)ethylthiornethoxycarbony1]-mi1-bemycin D. 30

9. Forbindelse ifølge krav 1, kendetegnet ved, at den er O5-(2,3-dihydroxypropoxycarbonyl)miIbemycin A4.

10. Forbindelse ifølge krav 1, kendetegnet ved, at 35 den er 05-(2,3-dihydroxypropoxycarbonyl)miIbemycin D.

11. Forbindelse ifølge krav 1, kendetegnet ved, at den er 05-(2,2-dimethy1-l,3-dioxolan-4-ylmethoxycarbonyl)mil- DK 164912 B 39 bemycin A4.

12. Anthelmintiske, akaracide og insekticide midler omfattende en anthelminti sk, akaracid og insekticid forbindelse i blan-5 ding med et farmaceutisk, landbrugsmæssigt eller gartnerimæssigt acceptabelt bærestof eller fortyndingsmiddel, kendetegnet ved, at den anthelmintiske, akaracide og insekticide forbindelse ep mindst én forbindelse ifølge krav 1-10. 10 15 20 25 30 35