DK162020B - N-acyleret polyethylenimin-bundet chromatografisk fyldning, dens fremstilling og anvendelse - Google Patents

N-acyleret polyethylenimin-bundet chromatografisk fyldning, dens fremstilling og anvendelse Download PDF

Info

Publication number
DK162020B
DK162020B DK181886A DK181886A DK162020B DK 162020 B DK162020 B DK 162020B DK 181886 A DK181886 A DK 181886A DK 181886 A DK181886 A DK 181886A DK 162020 B DK162020 B DK 162020B
Authority
DK
Denmark
Prior art keywords
approx
silica gel
pore size
pei
average
Prior art date
Application number
DK181886A
Other languages
English (en)
Other versions
DK181886A (da
DK162020C (da
DK181886D0 (da
Inventor
Hugh E Ramsden
Michael Henry
Original Assignee
Baker Chem Co J T
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Baker Chem Co J T filed Critical Baker Chem Co J T
Publication of DK181886D0 publication Critical patent/DK181886D0/da
Publication of DK181886A publication Critical patent/DK181886A/da
Publication of DK162020B publication Critical patent/DK162020B/da
Application granted granted Critical
Publication of DK162020C publication Critical patent/DK162020C/da

Links

Classifications

    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
    • B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/22—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof comprising organic material
    • B01J20/26—Synthetic macromolecular compounds
    • B01J20/262—Synthetic macromolecular compounds obtained otherwise than by reactions only involving carbon to carbon unsaturated bonds, e.g. obtained by polycondensation
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/02—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof comprising inorganic material
    • B01J20/10—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof comprising inorganic material comprising silica or silicate
    • B01J20/103—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof comprising inorganic material comprising silica or silicate comprising silica
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/28—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof characterised by their form or physical properties
    • B01J20/28002—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof characterised by their form or physical properties characterised by their physical properties
    • B01J20/28004—Sorbent size or size distribution, e.g. particle size
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/28—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof characterised by their form or physical properties
    • B01J20/28054—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof characterised by their form or physical properties characterised by their surface properties or porosity
    • B01J20/28078—Pore diameter
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/281—Sorbents specially adapted for preparative, analytical or investigative chromatography
    • B01J20/286—Phases chemically bonded to a substrate, e.g. to silica or to polymers
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/281—Sorbents specially adapted for preparative, analytical or investigative chromatography
    • B01J20/291—Gel sorbents
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
    • B01J20/3092—Packing of a container, e.g. packing a cartridge or column
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
    • B01J20/32—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating
    • B01J20/3202—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating characterised by the carrier, support or substrate used for impregnation or coating
    • B01J20/3204—Inorganic carriers, supports or substrates
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
    • B01J20/32—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating
    • B01J20/3214—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating characterised by the method for obtaining this coating or impregnating
    • B01J20/3217—Resulting in a chemical bond between the coating or impregnating layer and the carrier, support or substrate, e.g. a covalent bond
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
    • B01J20/32—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating
    • B01J20/3214—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating characterised by the method for obtaining this coating or impregnating
    • B01J20/3217—Resulting in a chemical bond between the coating or impregnating layer and the carrier, support or substrate, e.g. a covalent bond
    • B01J20/3219—Resulting in a chemical bond between the coating or impregnating layer and the carrier, support or substrate, e.g. a covalent bond involving a particular spacer or linking group, e.g. for attaching an active group
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
    • B01J20/32—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating
    • B01J20/3231—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating characterised by the coating or impregnating layer
    • B01J20/3242—Layers with a functional group, e.g. an affinity material, a ligand, a reactant or a complexing group
    • B01J20/3244—Non-macromolecular compounds
    • B01J20/3246—Non-macromolecular compounds having a well defined chemical structure
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/30—Processes for preparing, regenerating, or reactivating
    • B01J20/32—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating
    • B01J20/3231—Impregnating or coating ; Solid sorbent compositions obtained from processes involving impregnating or coating characterised by the coating or impregnating layer
    • B01J20/3242—Layers with a functional group, e.g. an affinity material, a ligand, a reactant or a complexing group
    • B01J20/3268—Macromolecular compounds
    • B01J20/3272—Polymers obtained by reactions otherwise than involving only carbon to carbon unsaturated bonds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F7/00—Compounds containing elements of Groups 4 or 14 of the Periodic Table
    • C07F7/02—Silicon compounds
    • C07F7/08—Compounds having one or more C—Si linkages
    • C07F7/12—Organo silicon halides
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J2220/00—Aspects relating to sorbent materials
    • B01J2220/50—Aspects relating to the use of sorbent or filter aid materials
    • B01J2220/54—Sorbents specially adapted for analytical or investigative chromatography
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J2220/00—Aspects relating to sorbent materials
    • B01J2220/50—Aspects relating to the use of sorbent or filter aid materials
    • B01J2220/58—Use in a single column

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)
  • Macromolecular Compounds Obtained By Forming Nitrogen-Containing Linkages In General (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)

Description

i
DK 162020 B
o X overensstemmelse med den foreliggende opfindelse N-acyleres det kovalent bundne, ikke-tværbundne polyethy-lenimin-reaktionsprodukt af partikelformigt silicagel med en gennemsnitlig partikeldiameter fra ca. 3 til ca. 70 pm 5 og en gennemsnitlig porestørrelse fra ca. 50 til ca. 1000 Å eller partikelformigt glas med kontrolleret porestørrelse (CPG) med en gennemsnitlig partikeldiameter fra ca. 37 til 177 pm og en gennemsnitlig porestørrelse fra ca. 40 til ca. 1000 Å med polyethylenimino-propyltrimethoxysilan 10 (PEI-Pr-triMeO-silan) med en gennemsnitlig molekylvægt fra ca. 400 til ca. 1800 med et syrehalogenid eller syreanhy-drid, hvori acylfunktionen ikke har en endestillet carboxyl-gruppe. De fremkomne acylerede PEI-PrSi-silicagel- hhv. PEI-PrSi-CPG-produkter er anvendelige som faste faser, der 15 egner sig til søjlefyldning ved væskechromatografi til rensning og fraskillelse af proteiner.
Alpert og Regnier, se J. Chromatogr. 185, s. 375-392 (1979) har vist, at polyethylenimin (PEI) kan adsorberes på siliciumdioxidoverflader og derved tilvejebringe til-20 strækkelige primære og sekundære iminogrupper på tilstødende adsorberede PEI-molekyler, som skal tværbindes med multi-funktionelle oxiraner til et polymert lag. For nylig er fraskillelsen af syntetiske oligonucleotider under anvendelse af høj-ydelse-væskechromatografi (HPLC) med søjler 25 af mikropartikelformigt siliciumdioxid overtrukket med tværbundet polyethylenimin blevet beskrevet i litteraturen af T.G. Lawson et al., se Anal. Biochem. 133, s. 85-93 (1983). I modsætning hertil tilvejebringer den foreliggende opfindelse en porøs siliciumdioxid- eller glasbærer, til 30 hvilken en ikke-tværbundet polyethyleniminopropylsilan er bundet kovalent i stedet for at være adsorberet derpå, idet imino- og aminofunktionerne deraf er acyleret med en endestillet ikke-carboxyleret acylgruppe.
Den foreliggende opfindelse tilvejebringer en acyle-35 ret modifikation af de ikke-tværbundne, kovalent bundne PEI-PrSi-silicagel-og PEI-PrSi-CPG-produkter beskrevet i 2
DK 162020 B
EP patentskrift nr. 143.423. PEI-PrSi-silicagel-produkterne beskrevet i det ovennævnte patentskrift er også beskrevet i us patentskrift nr. 4.469.630.
Da de ikke-tværbundne, kovalent bundne PEI-PrSi- 5 -silicagel- og PEI-PrSi-CPG-produkter beskrevet i de nævnte patentskrifter udgør de underlag, som skal acyleres i overensstemmelse med opfindelsen, gengives det følgende relevante uddrag fra de ovennævnte ansøgninger hermed.
Uddrag fra EP patentskrift nr. 143.423: 10 "De ikke-tværbundne, kovalent bundne PEI-silicagel- og -glasprodukter ifølge den foreliggende opfindelse fremstilles hensigtmæssigt i overensstemmelse med de følgende trin: A. Omsætning af enten partikelformigt silicagel med en 15 gennemsnitlig partikeldiameter fra ca. 3 til ca. 70 pm og en gennemsnitlig porestørrelse fra ca. 50 til ca.
1000 Å eller partikelformigt glas med kontrolleret porestørrelse med en gennemsnitlig partikeldiameter fra ca.
37 til 177 pm og en gennemsnitlig porestørrelse fra ca, 20 40 til ca. 1000 Å i en indifferent organisk opløsnings mi ddelopslæmning med en lavere alkanol-opløsning af poly-ethyleniminopropyltrimethoxysilan med en gennemsnitlig molekylvægt fra ca. 400 til ea. 1800,- idet reaktionen gennemføres ved omgivelses- til tilbagesvalingstemperatur 25 i ca. 2 til ca. 50 timer; B. udvinding af den fremkomne faste fraktion fra reaktionsblandingen; og C. opvarmning af deri nævnte faste fraktion ved en temperatur og i et tidsrum, som er tilstrækkelige til at tørre og 30 fuldstændig binde silanet til hhv. silicagelen eller glasset med kontrolleret porestørrelse.
Som anvendt i den foreliggende beskrivelse betyder udtrykket "kovalent bundet", at PEI-grupperne er knyttet kovalent til silicagelen eller glasset med kontrolleret pore-35 størrelse ved hjælp af kemisk vekselvirkning, der resulterer i en propyl-silyl(Pr-Si)-binding, og udtrykket "ikke-tvær-
O
3
DK 162020 B
bundet” betyder, at imino- og axninogrupperne på tilstødende kovalent bundne PEI-grupper ikke er tværbundet eller omsat med et tværbindingsmiddel til dannelse af et polymert lag.
5 Uden at være bundet deraf, menes det, at omsætningen forløber til afslutning i to trin som følger:
Trin 1; Siliciumdioxidhydroxylgrupper og methoxygrup-perne på silanet omsættes til dannelse af Si-O-Si-bindinger og frit methanol, idet nogen resterende methoxygrupper for-10 bliver uomsatte.
i »i—OH MeO ^Pr-PEI iJi-Q^^/Pr-PEI
+ Si -2 MeOH, ySi / \ * / \ 15 Si—OH MeO OMe |i”° 0Me 20 Trin 2: Omsætningen med de resterende methoxygrupper bringes til afslutning under varmehærdning ved a) og b).
a)
Si-O JPr-PEI $i-0.
Si "^Si-Pr-PEI
25 / \ Si—O'^
Si-O OMe -MeOMe ^ "· ? o varme si-o .OMe 30 /\ Jl-PC-PEI ·
Si-O NPr-PEI !>i—0^ h) i 1.
Si—0^ ^Pr-PEI »i-O.
35 Si -MeOH ^ \ .
/ varme ' o i—O--Si-Pr-PEI
Si-O7 OMe /
Si-OH Si-O7^
DK 162020 B
0 4 '
Silicagel/ der består af amorft siliciumdioxid, er kommercielt tilgængelig i uregelmæssige og sfæriske (foretrukne) partikelformige former og i forskellige kommercielle kvaliteter med meshstørrelser fra 3 til 325 (ASTM). I 5 stedet for at stole på en numerisk angivelse af meshstør-relse er mere nøjagtige angivelser hvad den foreliggende opfindelse angår imidlertid hhv. den gennemsnitlige diameter og den gennemsnitlige porestørrelse af silicagelpartiklerne fra ca. 3 til ca. 70 pm og fra ca. 50 til ca. 1000, fortrins-10 vis 250-500 Å. Til slutproduktanvendelse ved fyldning af HPLC-chromatografisøj ler foretrækkes et silicagel-udgangs-materiale fra ca. 3 til ca. 10 pm, og til fyldning af lav-tryks-chromatografisøjler foretrækkes fra ca. 40 til ca. 70 pm.
15 Glas med kontrolleret porestørrelse (CPG), som er et silicatholdigt bæremateriale, som kemisk ligner siliciumdioxid til anvendelse ved væskechromatografi, er f.eks. kommercielt tilgængeligt fra Pierce Chemical Co., Rockford, Illinois, med en gennemsnitlig partikeldiameter på 37-177 20 pm og en gennemsnitlig porestørrelse på 40-1000 Å, fortrinsvis 40-500 Å.
Blandt de indifferente organiske opløsningsmidler, som egner sig til fremstilling af silicagel" eller CPG-opslæm-ningen, er al’iphatiske carbonhydrider, f.eks. hexan, heptan 25 og lignende, aromatiske carbonhydrider, f.eks. benzen, toluen, xylen* og* lignende, lavere alkanoler, f.eks. ethanol, isopropanol, butanol og lignende, chlorerede methaner, f.eks. methylenchlorid, chloroform, carbontetrachlorid og lignende (bemærk: sådanne chloropløsningsmidler kan reagere ved høje-30 re temperaturer) og sådanne andre indifferente opløsningsmidler som tetrahydrofuran, glyrn, diglym og lignende. Sædvanligvis giver et l:5-forhold mellem silicagel eller CPG i g og opløsningsmiddel 1 ml en egnet opslæmning. På grund af den fine, uopløselige natur af den partikelformige silica-35 gel og CPG fås snarere en opslæmning end en rigtig opløsning.
Polyethyleniminopropyltrimethoxysilan, også kendt som (N-trimethoxysilylpropyl)-polyethylenimin, er reaktionspro-
O
5
DK 162020 B
duktet af polyethylenimin og aminopropyltrimethoxysilan og kan repræsenteres ved den følgende formel OMe ς Me0-Si~CH„CHoCHo-NH-(CHoCH«NH) -CH0CH0-NH„ (I) ® I u 6 m 6 μ Π tt <b « OMe hvori, forsåvidt angår den foreliggende opfindelse, n er et helt tal fra ca. 4 til ca. 37 eller, hvis n udtrykkes i gen-10 nemsnitlig molekylvægt, fra ca. 400 til ca. 1800.
Silanet med formlen (I) anvendes ved omsætningen med silicagelen eller CPG'et i form af en lavere C^-Cg-alkanolisk opløsning under anvendelse af tilstrækkeligt alkanol til at opløseliggøre silanet. En 50 vægt-%'s isopropanolisk opløs-15 ning foretrækkes. Sædvanligvis anvendes ca. 25-100 g af silanet eller alternativt ca. 50-200 ml af en 50 vægt-%'s alkano-lisk opløsning af silanet til omsætning med hver 100 g sili-cagel eller CPG. Reaktionen kan gennemføres ved omgivelsestemperatur, selv om forhøjede temperaturer op til tilbage-2o svalingstemperaturen af reaktionsopløsningsmiddelsystemet kan anvendes til forøgelse af reaktionshastigheden. Reaktionen forløber let til hovedsagelig afslutning (Trin 1) i løbet af 2-50 timer. Fordelagtigt anvendes omrøring under blandingen af reaktanterne, selv om reaktionen derefter kan 25 fortsætte uden yderligere omrøring. Vandfri betingelser er ikke kritiske, idet det har vist sig, at tilstedeværelsen af en lille mængde vand, f.eks. ca. 0,1-1,0 ml pr. 50 ml af opslæmningsopløsningsmediet, ikke påvirker reaktionen uheldigt.
30 Den fremkomne faste fraktion udvindes af reaktions blandingen ved konventionelle fysiske metoder, f.eks. filtrering, centrifugering osv. Sædvanligvis er et filtreringsmiddel, som er tilstrækkeligt til at tilbageholde en partikelstørrelse på 5 pm, egnet, hvorimod centrifugering er egnet til 35 en partikelstørrelse på 3 pm.
Den udvundne faste fraktion varmehærdes derpå ved en temperatur og et tidsrum, som er tilstrækkelige til at tørre
O
DK 162020B
6 cg fuldstændig binde silanet kovalent til silicagelen eller CPG'et. Sædvanligvis har ca. 1-4 timer ved ca. 40-120°C vist sig tilstrækkelige. Det således dannede, kovalent bundne, ikke-tværbundne, færdige produkt indeholder fortrinsvis 5 fra ca. 0,5 til ca. 3,8% nitrogen." (Slut på uddrag).
Det har nu vist sig, at imino- og aminofunktionerne af de ovennævnte ikke-tværbundne, kovalent bundne PEI-PrSi-silicagel- og PEI-PrSi-CPG-produkter kan N-acyleres med et passende syrehalogenid eller syreanhydrid som acylerings-10 middel til tilvejebringelse af en acylfunktion med formlen R-CO-, hvori R er valgt blandt C^-Cg-alkyl, phenyl, aralkyl og phenyl substitueret med én eller flere substituenter valgt blandt C^-C^-alkyl, C^-C^-alkoxy, halogen og nitro. Udtrykket "halogen" omfatter brom, chlor, fluor og iod. Udtrykket 15 "aralkyl" omfatter benzyl, 1-phenethyl, 2-phenethyl, a--naphthyl og lignende.
Procentdelen af nitrogen i PEI-Pr-Si-silicagel- eller PEI-PrSi-CPG-underlaget, som let kan bestemmes ved konventionel elementæranalyse, angiver den relative kombinerede 20 totale mængde imino- og aminofunktioner på PEI-delen. Der anvendes tilstrækkeligt acyleringsmiddel til omsætning med i alt væsentligt alle imino- og aminofunktionerne på PEI-delen. Sædvanligvis udføres N-acyleringstrinnet let med en ækvivalent mængde eller et ringe overskud af acyleringsmidlet i 25 et indifferent aprotisk organisk opløsningsmiddel. Typiske acyleringsmidler omfatter acetylchlorid, eddikesyreanhydrid, propionylchlorid, propionsyreanhydrid, butyrylchlorid, hexanoylchlorid, octanoylchlorid, benzoylchlorid, p-nitro-benzoylchlorid, 3,5-dinitrobenzoylchlorid, o-, m- og p-30 -methoxybenzoylchlorid, o-, m- og p-chlorbenzoylchlorid, 2,4,6-trichlorbenzoylchlorid, o-, m- og p-methylbenzoylchlo-rid, phenylacetylchlorid og lignende. Typiske aprotiske opløsningsmidler omfatter et aromatisk carbonhydrid, f.eks. benzen, toluen, xylen og lignende, en ether, såsom tetrahy-35 drofuran, dioxan og lignende, og et aliphatisk carbonhydrid, såsom hexan, heptan og lignende. Fordelagtigt anvendes en ækvivalent mængde eller et ringe overskud af et syrebindende 7
DK 162020 B
middel, f.eks. en tertiær amin, fortrinsvis en tertiær alkyl-amin, til at optage syren frigjort under acyleringsreak-tionen.
I overensstemmelse hermed tilvejebringes der ifølge 5 opfindelsen en ikke-tværbundet polyethylenimin(PEI)-funktion, som er kovalent bundet til silicagel eller glas med kontrolleret porestørrelse ved hjælp af en propylsilyl (Pr-Si)--binding, hvori i alt væsentligt alle, dvs. mere end 80% og fortrinsvis mere end 95% af imino- og aminofunktionerne af 10 PEI-delen er acyleret med en acylfunktion med formlen R-CO-, som tidligere defineret.
Opfindelsen angår således en kovalent bundet, ikke-tværbundet polyethylenimin-chromatografisøj le-fyldning omfattende reaktionsproduktet af partikelformigt silicagel med 15 en gennemsnitlig partikeldiameter på ca. 3 til ca. 70 /um og en gennemsnitlig porestørrelse på ca. 50 til ca. 1000 Å eller partikelformigt glas med kontrolleret porestørrelse og med en gennemsnitlig partikeldiameter på ca. 37 til ca.
177 μιη og en gennemsnitlig porestørrelse på ca. 40 til ca.
20 1000 Å med polyethyleniminopropyltrimethoxysilan med en gennemsnitlig molekylvægt på ca. 400 til ca. 1800, hvilken fyldning er ejendommelig ved, at reaktionsproduktet er N-acyleret, og at N-acylgruppen har formlen R-CO-, hvori R er valgt blandt C^Cg-alkyl, phenyl, aralkyl og phenyl sub-25 stitueret med én eller flere substituenter valgt blandt C]^--C4-alkyl, C^-C^alkoxy, halogen og nitro.
Opfindelsen angår også en fremgangsmåde til fremstilling af fyldningen ifølge opfindelsen, hvilken fremgangsmåde er ejendommelig ved, at det kovalent bundne, ikke-tværbundne 30 polyethylenimin-reaktionsprodukt af partikelformigt silicagel med en gennemsnitlig partikeldiameter på ca. 3 til ca. 70 Mm og en gennemsnitlig porestørrelse på ca. 50 til ca. 1000 Å eller partikelformigt glas med kontrolleret porestørrelse med en gennemsnitlig partikeldiameter på ca. 37 til ca. 177 35 Mm og en gennemsnitlig porestørrelse på ca. 40 til ca.
1000 Å med polyethyleniminopropyltrimethoxysilan med en 8
DK 162020 B
gennemsnitlig molekylvægt på ca. 400 til ca. 1800 N-acyleres med et syrehalogenid eller syreanhydrid som acyleringsmiddel, hvori acylfunktionen har formlen R-CO-, hvori R er valgt blandt Cx-Cg-alkyl, phenyl, aralkyl og phenyl substitueret 5 med én eller flere substituenter valgt blandt C^-c^-alkyl, 0^-04-alkoxy, halogen og nitro.
De omhandlede N-acylerede PEI-PrSi-silicagel- eller PEI-PrSi-CPG-produkter udgør hidtil ukendte og anvendelige bundne faser til rensning og fraskillelse af proteiner ved 10 søjlechromatografi og er især egnede med moderne HPLC-in-strumentation. Fyldningen kan have forskellige meshstørrel- ser, f.eks. fra ca. 50 til ca. 600 mesh.
De foretrukne N-acylerede PEI-PrSi-silicagel-produkter er dem, der fås fra reaktionsproduktet af partikelformigt 15 silicagel med en gennemsnitlig partikeldiameter på ca. 5 til ca. 40 pm og en gennemsnitlig porestørrelse på ca. 50 til ca. 330 Å og polyethyleniminopropyltrimethoxysilan med en gennemsnitlig molekylvægt på ca. 400 til ca. 600, og dem, der fås fra partikelformigt silicagel med en gennemsnitlig 20 partikeldiameter på ca. 40 til ca. 62 pm og en gennemsnitlig porestørrelse på ca. 250 til ca. 500 Å og polyethylenimino-propyltrimethoxysilan med en gennemsnitlig molekylvægt på ca. 1000.
Det menes, at de omhandlede N-acylerede PEI-PrSi- 2^ -silicagel- og PEI-PrSi-CPG-produkter fraskiller proteiner på basis af svage hydrofobe vekselvirkninger. De markante fordele ved fraskillelse af proteiner med de omhandlede produkter anses for overraskende og usædvanlige, da de for tiden tilgængelige chromatografi-matrikser, som fraskillér 30 på denne basis, sædvanligvis giver brede toppe med ringe selektivitet og ikke-kvantitativ udvinding af proteiner.
I modsætning hertil giver de her omhandlede chromatografi- matrikser skarpe velafgrænsede toppe med god selektivitet og kvantitativ udvinding af både proteinmasse og, når der 35 er tale om enzymudvinding, uden væsentligt tab af enzymaktivitet .
9
DK 162020 B
Den foreliggende opfindelse er endog mere overraskende, da man normalt ville forvente, at de i den foreliggende beskrivelse beskrevne chromatografi-matrikser ville være hy-drolytisk ustabile i vandige mobile faser med høj ion-5 styrke anvendt til hydrofob vekselvirkningschromatografi på grund af de iboende opløselighedsegenskaber af silicium-dioxid i sådanne vandige opløsninger med høj ionstyrke.
Således ville man normalt forvente, at anvendelse af sili-ciumdioxid-baserede matrikser nødvendigvis ville resultere 10 i korte søjle-levetider. Det modsatte er imidlertid tilfældet med de omhandlede N-acylerede PEI-PrSi-silicagel- og PEI--PrSi-CPG-produkter. Som illustreret i eksempel 17, er HPL.C-søjler fyldt med de omhandlede chromatografi-matrikser anvendelige i over 1000 timer med mobile pufferfaser med 15 meget lille .ændring i søjlefunktionskvaliteten.
Den foreliggende opfindelse angår derfor også en chromatografisøjle, som er egnet til væskechromatografi, og som er ejendommelig ved, at den er fyldt med fyldningen ifølge opfindelsen.
20 De følgende eksempler tjener til at illustrere den foreliggende opfindelse.
Eksempel 1 A. Til en opslæmning af 10 g silicagel med en gennem-25 snitlig partikeldiameter på 40 Jim og en gennemsnitlig porestørrelse på 60 Å, som er kommercielt tilgængelig fra J.T.
Baker Chemical Co., Phillipsburg, N.J. i uregelmæssig form som "Silica Gel #7024", i 50 ml toluen sættes under omrøring 19,71 g af en 50 vægt-l's isopropanolopløsning af polyethylen-30 iminopropyltrimethoxysilan med en gennemsnitlig molekylvægt på 400-600 (der antages en værdi på 500) , som er kommercielt tilgængelig fra Petrarch Systems Inc., Bristol, PA, som "(N-Trimethoxysilylpropyl)-Polyethylenimine PS076". Blandingen omrøres ved stuetemperatur (ca. 25°C) i ca. 1 time og 10 35 minutter, hvorpå den henstilles natten over (ca. 17 timer) uden omrøring. Omrøringen påbegyndes igen i yderligere 5 10
DK 162020 B
o timer og 40 minutter ved stuetemperatur, og blandingen henstilles igen natten over. Dernæst filtreres blandingen over et middel-filter af frittet glas. Filtratet vaskes med 50 ml toluen to gange og med 50 ml methanol to gange for at sikre 5 fjernelse af enhver overskydende silanreaktant og ovntørres derpå ved 80-85°C i ca. 3 timer og 30 minutter til dannelse af ca. 12 g af det kovalent bundne PEI-silicagelprodukt; ca.
3,9% N.
B. Proceduren i eksempel 1-A gentages bortset fra, at 10 der sættes 1 ml vand til silicagel/silanblandingen. Udbyttet af det PEI-bundne silicagelprodukt er på ca. 13,3 g; ca.
5,5% N.
Eksempel 2 15
En opslæmning af 20 g silicagel med en gennemsnitlig partikeldiameter på 5,25 pm og en gennemsnitlig porestørrelse på 330 Å, som er kommercielt tilgængelig fra The Sep A Ra Tions Group, Hesperia, CA, som en sfærisk silicagel under handelsnavnet "Vydac A", katalog nr. 101TPB5, i 100 20 ml toluen og 2 ml vand fremstilles og omrøres i 10 minutter ved stuetemperatur. Til denne sættes under omrøring 39,4 g af en 5Ό vægt-%'s isopropanolisk opløsning af polyethylenimino- propyltrimethoxysilan med en gennemsnitlig molekylvægt på 500, og blandingen omrøres i yderligere 5 minutter. Bian-25 dingen henstilles derpå natten over ved stuetemperatur. Blandingen filtreres dernæst ved anvendelse af en 1,0 pm filtertragt. Filtratet vaskes med 50 ml toluen to gange og 50 ml methanol to gange, hvorpå det lufttørres på tragten og til sidst ovntørres ved 80-85°C i ca. 3 timer og 30 minutter til 30 dannelse af det PEI-bundne silicagelprodukt; ca. 2,85% N.
Eksempel 3
En opslæmning af 20 g 230-400 mesh (ASTM) silicagel med en gennemsnitlig partikeldiameter på 40-63 pm og en gen-35 nemsnitlig porestørrelse på 420 Å, som er kommercielt tilgængelig fra E. Merck Reagents, Tyskland, under varemærket 11
DK 162020 B
o "Fractosil 500", i 50 ml methanol og 1 ml vand fremstilles og omrøres i 5 minutter ved stuetemperatur. Der fremstilles også en særskilt opløsning af 11,2 g af en 50 vægt-%'s isopropanolisk opløsning af polyethyleniminopropyltrimethoxy-5 silan med en gennemsnitlig molekylvægt på 1800 i 100 ml methanol. Silanopløsningen sættes derpå til silicagel-op-slæmningen i løbet af 5 minutter under omrøring. Når tilsætningen er afsluttet, afbrydes omrøringen, og blandingen henstilles ved stuetemperatur i 50 timer. Blandingen filtre-10 res dernæst over sintret glas med middelstor størrelse. Filtratet vaskes med 3 x 50 ml methanol under vakuum og ovntørres derpå ved 80-85°C i ca. 4 timer til dannelse af det PEI-bundne silicagelprodukt; ca. 1,1% N.
15 Eksempel 4
De følgende reaktionsblandinger fremstilles i overensstemmelse med de foregående eksempler.
Bestanddele 20
Silicagel (5 pi, 330 Å) 10 g 10 g 10 g
Isopropanol 50 ml 50 ml 50 ml 25
Vand 0,5 ml 0,25 ml 0,1 ml PEIPr-triMeO-silan (molekylvægt = 600) 30 som 50 vægt-%'s i-PrOH- opløsning 9,9 g 4,95 g 2 g
Hver reaktionsblanding omrøres i 5 minutter ved stue-35 temperatur og henstilles derpå uden omrøring i 41 timer og 30 minutter. Hver blanding filtreres, vaskes én gang med 50
-DK 162020B
O
12 ml isopropanol og to gange med 50 ml methanol. Hvert filtrat ovntørres ved 80-85°C i ca. 3 timer og 12 minuttér til dan-nelse af de respektive PEI-bundne silicagelprodukter.
A: 1,2% N; B: 1,0% Ny C: 0,9% N.
5
Eksempel 5 A. Til en opslæmning af 10 g silicagel med en gennemsnitlig partikeldiameter på 40 jim og en gennemsnitlig pore-størrelse på 50 Å i 50 ml hexan sættes 19,71 g af en 50 vægt-%'s 10 i-PrOH-opløsning af PEI-PrtriMeO-silan med en gennemsnitlig molekylvægt på 500. Blandingen omrøres i 5 minutter ved stuetemperatur og opvarmes derpå til tilbagesvalingstemperatur i ca. 2 timer. Blandingen henstilles til afkøling til stuetemperatur, filtreres og vaskes med 50 ml hexan to 15 gange og 50 ml methanol to gange. Filtratet ovntørres derpå ved 80-85°C i ca. 3 timer til dannelse af det PEI-bundne silicagelprodukt.
B. Proceduren i eksempel 5-A gentages bortset fra, at der anvendes en tilsvarende mængde glas med kontrolleret 20 porestørrelse (125 μπι, 240 Å) i stedet for den anvendte silicagel til dannelse af det tilsvarende kovalent bundne, ikke-tværbundne PÉI-PrSi-CPG-produkt.
Eksempel 6 25 Til 5 g af PEI-PrSi-silicagelproduktet ifølge eksem pel 2 (ca. 5 pm, ca. 330 Å, ca. 3% N) i 25 ml toluen sættes 2 ml triethylamin og derefter 0,6 ml eddikesyreanhydrid. Blandingen rystes til homogenitet og henstilles med lejlighedsvis omrøring natten over (ca. 17 1/2 time). Det N-acy-30 lerede produkt frafiltreres, vaskes successivt med toluen, methanol, MeOH/HOH (50/50), vand og tre gange med methanol.
Det ovntørres derpå ved 80-85°C til tørhed. Produktudbytte: 5 g.
Analyse: 8,52% C; 2,01% Hy 2,81% N.
35
O
13
DK 162020 B
Eksempel 7
Proceduren i eksempel 6 gentages bortset fra, at der anvendes en ækvivalent mængde butyrylchlorid i stedet for eddikesyreanhydridet. Produktudbyttet af det tilsvarende 5 N-butanoylprodukt er på ca. 5,04 g.
Analyse: 9,12% C; 2,21% Hj 2,62% N.
Eksempel 8
Proceduren i eksempel 2 gentages bortset fra, at der 10 anvendes 0,8 ml hexanoylchlorid i stedet for eddikesyreanhydridet. Udbyttet af det tilsvarende N-hexanoylprodukt er på ca. 5,05 g.
Analyse: 9,59% C; 2,26% H; 2,58% N.
15 Eksempel 9 20 g PEI-PrSi-siliagel (ca. 15-20 pmj ca. 300 Å; ca.
1,2% N) behandles med 8 ml triethylamin og 2,4 ml butyrylchlorid i overensstemmelse med proceduren i eksempel 2, bortset fra, at det fremkomne N-butanoylprodukt vaskes én 20 gang med toluen og derpå én gang med methanol. Produktudbytte: 19,3 g.
Analyse: 5,96% C; 1,63% H; 1,17% N.
Eksempel 10 25 Proceduren i eksempel 2 gentages, bortset fra, at der anvendes en ækvivalent mængde af PEI-PrSi-CPG-produktet i-følge eksempel 5B i stedet for PEI-PrSi-silicagelproduktet til dannelse af det tilsvarende N-acylerede PEI-PrSi-CPG-produkt.
30
Eksempel 11
En 10 g's prøve af PEI-PrSi-silicagel (ca. 5 pm; ca.
300 Å; ca. 1,71% N) behandles med 150%'s overskud af butyrylchlorid og en ækvivalent mængde triethylamin (1,38 ml 35 BuOCl; 2,54 ml Et^N) i overensstemmelse med proceduren i eksempel 9. Udbytte: 10,2 g.
Analyse: 6,68% C; 1,26% H; 1,65% N.
O
14
DK 162020 B
Eksempel 12 20 g PEI-PrSi-silicagel (ca. 40 pm; ca. 250 Å; ca.
3,5% N) i 20 ml toluen behandles med 10,5 g benzoylchlorid og 7,6 g triethylamin i ca. 18 timer. Det fremkomne benzoy-5 lerede PEI-PrSi-silicagelprodukt filtreres og vaskes derpå successivt med 200 ml toluen, 200 ml methanol, 200 ml vand og tre gange med 200 ml methanol og tørres ved 80-85°C.
Udbytte: 22,2 g.
Analyse: 16,78% C; 1,94% H; 2,87% N.
10
Eksempel 13
Proceduren i eksempel 12 gentages, bortset fra, at 11.5 g 3,5-dinitrobenzoylchlorid anvendes som acyleringsmiddel i nærværelse af 7,0 g triethylamin til dannelse af 15 det tilsvarende 3,5-dinitrobenzoylerede PEI-PrSi-silicagel-produkt. Udbytte: 23,6 g.
Analyse: 13,33% C; 1,62% H; 3,37% N.
Eksempel 14 20 Proceduren i eksempel 12 gentages, bortset fra, at 10.5 g p-anisoylchlorid anvendes som acyleringsmiddel i nærværelse af 7,6 g triethylamin til dannelse af det tilsvarende p-anisoylerede PEI-PrSi-silicagelprodukt. Udbytte: 22,8 g.
25
Eksempel 15
Proceduren i eksempel 12 gentages, bortset fra, at 13,1 g p-chlorbenzoylchlorid anvendes som acyleringsmiddel i nærværelse af en ækvivalent mængde triethylamin til dan-30 nelse af det tilsvarende p-chlorbenzoylerede PEI-PrSi-sili-cagelprodukt. Udbytte: 26,5 g.
Eksempel 16
Proceduren i eksempel 12 gentages, bortset fra, at 35 11,6 g p-toluoylchlorid anvendes som acyleringsmiddel i nærværelse af 10,6 ml (7,6 g) triethylamin til dannelse af
O
15
DK 162020 B
det tilsvarende p-toluoylerede PEI-PrSi-silicagelprodukt. Udbytte: 22,0 g.
Eksempel 17 5 En standard-analysesøjle (4,6 mm indvendig diameter x 250 mm længde) opslæmningsfyldes ved højt tryk (527 kg/-cm ) med butyryleret PEI-PrSi-silicagel (ca. 5 pm; ca. 300 Å) fremstillet i eksempel 11 som den bundne fase. Opslæmningen består af 3,6 g af den butyrylerede PEI-PrSi-silicagel 10 i 25 ml methanol. Efter at opslæmningen er pumpet ind i søjlen, pumpes der yderligere 100 ml methanol gennem søjlen ved det samme tryk. Søjlen fastgøres til en højtryksvæske-chromatograf, og en opløsning af 25 mM KH2PC>4 med en pH-værdi på 7 pumpes gennem søjlen med en strømningshastighed 15 på 1 ml/min. ved 527 kg/cm , indtil en stabil basislinje konstateres ved 280 nm. En opløsning af 2 M (NH4)2S04 og 25 mM KH2P04 med en pH-værdi på 7 pumpes derpå ved ca. den samme strømningshastighed gennem søjlen, indtil der er opnået en stabil basislinje. En opløsning (100 pi) af en 20 proteinblanding opløst i puffer A med højt saltindhold, sammensat af 2M (NH4)2S04 + 25mM KH2P04, injiceres ind i søjlen, og proteinbestanddelene elueres ved formindskelse af saltkoncentrationen til 25 mM KH2P04 (puffer B) i løbet af 30 minutter ved 1 ml/min. Blandingen af proteiner omfat-25 ter 58 pg cytochrom C? 377 pg myoglobin, 203 pg lysozym, 580 pg ovalbumin og 232 pg α-chymotrypsinogen A. Hvert protein eluerer som et koncentreret bånd, godt adskilt fra hinanden. Typiske masseudvindinger af de individuelle proteiner er større end 90% af den oprindelige mængde, f.eks. 95% 30 cytochrom C, 94% myoglobin og 92% lysozym. Søjlen i dette eksempel udviser intet signifikant tab af chromatografisk ydeevne, selv efter 1000 timers chromatografisk anvendelse til proteinfraskillelse.
35

Claims (6)

1. Kovalent bundet, ikke-tværbundet polyethylenimin--chromatografisøjle-fyldning omfattende reaktionsproduktet af partikelformigt silicagel med en gennemsnitlig partikel- 5 diameter på ca. 3 til ca. 70 μη og en gennemsnitlig porestørrelse på ca. 50 til ca. 1000 Å eller partikelformigt glas med kontrolleret porestørrelse med en gennemsnitlig partikeldiameter på ca. 37 til ca. 177 μια og en gennemsnitlig porestørrelse på ca. 40 til ca. 1000 Å med polyethyleniminopro-10 pyltrimethoxysilan med en gennemsnitlig molekylvægt på ca. 400 til ca. 1800, kendetegnet ved, at reaktionsproduktet er N-acyleret, og at N-acyl-funktionen har formlen R-CO-, hvori R er valgt blandt C^-Cg-alkyl, phenyl, aralkyl og phenyl sub st itueret med én eller flere substituenter 15 valgt blandt C^-C^-alkyl, C^-C^alkoxy, halogen og nitro.
2. Fyldning ifølge krav 1, kendetegnet ved, at N-acyl-delen er butyryl.
3. Fyldning ifølge krav 2, kendetegnet ved, at den partikelformige silicagel har en gennemsnitlig 20 partikeldiameter på ca. 5 til ca. 40 μια og en gennemsnitlig porestørrelse på ca. 50 til ca. 330 Å og polyethyleniminopro-pyltrimethoxysilanet har en gennemsnitlig molekylvægt på ca. 400 til ca. 600.
4. Fyldning ifølge krav 2, kendetegnet 25 ved, at den partikelformige silicagel har en gennemsnitlig partikeldiameter på ca. 40-62 μια og en gennemsnitlig porestørrelse på ca. 210 til ca. 520 Å og polyethyleniminopropyl-trimethoxysilanet har en gennemsnitlig molekylvægt på ca. 1000.
5. Fremgangsmåde til fremstilling af fyldningen ifølge krav 1, kendetegnet ved, at det kovalent bundne, ikke-tværbundne polyethylenimin-reaktionsprodukt af partikelformigt silicagel med en gennemsnitlig partikeldiameter på ca. 3 til ca. 70 μιη og en gennemsnitlig porestørrelse på 35 ca. 50 til ca. 1000 Å eller partikelformigt glas med kontrolleret porestørrelse med en gennemsnitlig partikeldiameter DK 162020 B på ca. 37 til ca. 177 μχη og en gennemsnitlig porestørrelse på ca. 40 til ca. 1000 Å med polyethyleniminopropyltrimeth-oxysilan med en gennemsnitlig molekylvægt på ca. 400 til ca. 1800 N-acyleres med et syrehalogenid eller syreanhydrid 5 som acyleringsmiddel, hvori acylfunktionen har formlen R-co-, hvori R er valgt blandt Ci-C8-alkyl, phenyl, aralkyl og phenyl substitueret med én eller flere substituenter valgt blandt -alkyl, C^-C^alkoxy, halogen og nitro.
6. Chromatografisøjle, som er egnet til væskechroma-10 tografi, kendetegnet ved, at den er fyldt med fyldningen ifølge et af kravene 1-4.
DK181886A 1985-04-22 1986-04-21 N-acyleret polyethylenimin-bundet chromatografisk fyldning, dens fremstilling og anvendelse DK162020C (da)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US06/725,807 US4551245A (en) 1985-04-22 1985-04-22 Acylated polyethylenimine bound chromatographic packing
US72580785 1985-04-22

Publications (4)

Publication Number Publication Date
DK181886D0 DK181886D0 (da) 1986-04-21
DK181886A DK181886A (da) 1986-10-23
DK162020B true DK162020B (da) 1991-09-09
DK162020C DK162020C (da) 1992-02-10

Family

ID=24916047

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DK181886A DK162020C (da) 1985-04-22 1986-04-21 N-acyleret polyethylenimin-bundet chromatografisk fyldning, dens fremstilling og anvendelse

Country Status (13)

Country Link
US (1) US4551245A (da)
EP (1) EP0199222B1 (da)
JP (1) JPS61264254A (da)
KR (1) KR890002847B1 (da)
AT (1) ATE46281T1 (da)
AU (1) AU576144B2 (da)
CA (1) CA1256418A (da)
DE (1) DE3665547D1 (da)
DK (1) DK162020C (da)
IE (1) IE59080B1 (da)
IL (1) IL78226A (da)
NZ (1) NZ215556A (da)
ZA (1) ZA862052B (da)

Families Citing this family (33)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS6177760A (ja) * 1984-09-26 1986-04-21 Daicel Chem Ind Ltd 分離剤
JPS6276457A (ja) * 1985-09-30 1987-04-08 Shimadzu Corp 液体クロマトグラフイ用充填剤
US4680121A (en) * 1986-02-20 1987-07-14 J. T. Baker Chemical Company Bonded phase of silica for solid phase extraction
US4650784A (en) * 1986-02-20 1987-03-17 J. T. Baker Chemical Company Bonded phase of silica for solid phase extraction
US5066395A (en) * 1986-03-06 1991-11-19 J. T. Baker Inc. N-acylated derivatives of polyethyleneimine bonded phase silica products
US4721573A (en) * 1986-03-06 1988-01-26 J. T. Baker Chemical Company Use of sulfonic derivatives of acylated polyethyleneimine bonded phase silica products
US4661248A (en) * 1986-03-06 1987-04-28 J. T. Baker Chemical Company Sulfonic derivatives of acylated polyethyleneimine bonded phase silica products
US4920152A (en) * 1986-05-13 1990-04-24 Purdue Research Foundation Reversed-phase packing material and method
US4804686A (en) * 1986-05-13 1989-02-14 Purdue Research Foundation Cation-exchange support materials and method
SE464687B (sv) * 1987-11-10 1991-06-03 Biocarb Ab Foerfarande foer framstaellning av en gelprodukt
DE3811042A1 (de) * 1988-03-31 1989-10-19 Merck Patent Gmbh Ionenaustauscher
EP0386926A3 (en) * 1989-03-02 1991-12-18 Supelco, Inc. Silica gel supports suitable for chromatographic separations
CA1332598C (en) * 1989-06-20 1994-10-18 Laura J. Crane Polyethyleneimine matrixes for affinity chromatography
JP3583429B2 (ja) * 1993-07-16 2004-11-04 メルク パテント ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフトング 疎水クロマトグラフィーのための分離剤
DE4333674A1 (de) * 1993-10-02 1995-04-06 Merck Patent Gmbh Nukleotidhaltiges Sorbens für die Affinitätschromatographie
DE4333821A1 (de) * 1993-10-04 1995-04-06 Merck Patent Gmbh Ionenaustauscher
DE4334353A1 (de) * 1993-10-08 1995-04-13 Merck Patent Gmbh Verfahren und Träger für die Gelpermeationschromatographie
US5695882A (en) * 1995-08-17 1997-12-09 The University Of Montana System for extracting soluble heavy metals from liquid solutions
US5869152A (en) * 1996-03-01 1999-02-09 The Research Foundation Of State University Of New York Silica materials
CA2415294A1 (en) * 2000-07-17 2002-01-24 President And Fellows Of Harvard College Surfaces that resist the adsorption of biological species
DE10120821A1 (de) * 2001-04-27 2002-10-31 Sachtleben Chemie Gmbh Mit Polyalken beschichtete, poröse Füllstoffe
US6987079B2 (en) * 2001-08-14 2006-01-17 W.R. Grace & Co.-Conn. Supported catalyst systems
US6802966B2 (en) 2001-08-14 2004-10-12 W. R. Grace & Co. Conn. Solid compositions for selective adsorption from complex mixtures
US6923895B2 (en) * 2002-09-09 2005-08-02 Beckman Coulter, Inc. Coated capillary electrophoresis tubes and system
MY144940A (en) * 2005-01-25 2011-11-30 Avantor Performance Mat Inc Chromatographic media
TW201138974A (en) 2010-04-05 2011-11-16 Avantor Performance Mat Inc Process for trypsin and chymotrypsin purification utilizing hydrophobic interaction chromatography
US20140263011A1 (en) * 2011-05-03 2014-09-18 Avantor Performance Materials, Inc. Novel chromatographic media based on allylamine and its derivative for protein purification
ES2868093T3 (es) 2012-09-17 2021-10-21 Grace W R & Co Medio y dispositivos de cromatografía
ES2929099T3 (es) 2014-05-02 2022-11-24 Grace W R & Co Material de soporte funcionalizado y métodos de fabricación y uso de material de soporte funcionalizado
JP2016006410A (ja) * 2014-05-27 2016-01-14 Jnc株式会社 クロマトグラフィー担体およびそれを用いたタンパク質精製方法
PL3302784T3 (pl) 2015-06-05 2022-01-17 W.R. Grace & Co.-Conn. Adsorbentowe środki klarujące do bioprzetwarzania oraz sposoby ich wytwarzania i stosowania
WO2020044813A1 (ja) * 2018-08-31 2020-03-05 昭和電工株式会社 イオンクロマトグラフィー用充填剤及びその製造方法
US12409441B2 (en) 2020-02-19 2025-09-09 Bio-Rad Laboratories, Inc. Method of preparing polymer-filled chromatography resin

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3722181A (en) * 1970-05-22 1973-03-27 Du Pont Chromatographic packing with chemically bonded organic stationary phases
DE2236862C2 (de) * 1972-07-27 1974-09-05 Istvan Prof. Dr. 6600 Saarbruecken Halasz Sorptionsmittel für die Chromatographie
US4212905A (en) * 1976-06-30 1980-07-15 Board of Reagents, for and on behalf of the University of Florida Method of coating supports using addition copolymers of aminimides
US4290892A (en) * 1978-10-23 1981-09-22 Varian Associates, Inc. Anion exchange chromatographic separation of polyfunctional compounds
US4245005A (en) * 1979-02-28 1981-01-13 Purdue Research Foundation Pellicular coated support and method
DE3271828D1 (en) * 1981-04-27 1986-07-31 Health Lab Service Board High pressure liquid affinity chromatography
US4469630A (en) * 1983-11-25 1984-09-04 J. T. Baker Chemical Co. Purification of monoclonal antibodies

Also Published As

Publication number Publication date
DK181886A (da) 1986-10-23
IE860686L (en) 1986-10-22
JPH0370182B2 (da) 1991-11-06
ZA862052B (en) 1987-02-25
IL78226A (en) 1989-10-31
IE59080B1 (en) 1994-01-12
US4551245A (en) 1985-11-05
KR890002847B1 (ko) 1989-08-05
AU5504586A (en) 1986-10-30
IL78226A0 (en) 1986-07-31
CA1256418A (en) 1989-06-27
ATE46281T1 (de) 1989-09-15
DK162020C (da) 1992-02-10
JPS61264254A (ja) 1986-11-22
EP0199222A2 (en) 1986-10-29
DK181886D0 (da) 1986-04-21
EP0199222B1 (en) 1989-09-13
NZ215556A (en) 1989-04-26
KR860008190A (ko) 1986-11-12
DE3665547D1 (en) 1989-10-19
AU576144B2 (en) 1988-08-11
EP0199222A3 (en) 1987-05-06

Similar Documents

Publication Publication Date Title
DK162020B (da) N-acyleret polyethylenimin-bundet chromatografisk fyldning, dens fremstilling og anvendelse
EP0143423B1 (en) Polyethylenimide bound chromatographic packing
RU2586296C2 (ru) Композиции норибогаина
DK173805B1 (da) Silicaprodukt med bundet fase, fremgangsmåde og mellemprodukt til fremstilling deraf samt chromatografisk søjle pakket med produktet
DK165925B (da) Fremgangsmaade til rensning af immunoglobulin g ved hjaelp af immobiliseret carboxyleret polyethyleniminsilan
EP0240013A2 (en) Separation agent for optical isomers, process for preparing it and use thereof
EP1594912B1 (en) Silica gel bonded with cucurbiturils
US4721573A (en) Use of sulfonic derivatives of acylated polyethyleneimine bonded phase silica products
CA2477782C (en) Polar silanes and their use on silica supports
CN101180318B (zh) 脱乙酰壳多糖衍生物及其制备方法
WO2001098370A1 (en) Materials comprising oligo- or polysaccharide cross linked and chemically bonded to a support via urea linkages useful for chromatography and electrophoresis applications
US20050282294A1 (en) Affinity supports with immobilised protein A
CN111039809B (zh) 固载化的核酸适配体的连接臂及其制备方法和应用
US20080093301A1 (en) Disubstituted Cucurbituril-Bonded Silica Gel
CN112375226B (zh) 键合型直链淀粉衍生物及其制备方法和应用
DK173826B1 (da) Fast-fase-ekstraktionsproces til rensning og fraskillelse af protein fra en prøve
EP2239565B1 (en) Optical-isomer separating agent for chromatography and process for producing the same
JP2001527090A (ja) アルブミンを結合する方法およびその方法で使用すべき手段
JPH038511B2 (da)
DK171394B1 (da) Understøtning eller bærer i fast fase, immobiliseret enzym i fast fase på en sådan understøtning, ligandbundet chromatografiaffinitetsmatrix samt fremgangsmåde til adskillelse eller rensning af et stof fra opløsning under anvendelse af understøtningen
JP3845850B2 (ja) Ｎ−シアノ−ジアミノフマロニトリル及びその製造方法
CZ295121B6 (cs) Chirální stacionární fáze pro kapalinovou chromatografii

Legal Events

Date Code Title Description
PUP Patent expired