JP2001527090A

JP2001527090A - アルブミンを結合する方法およびその方法で使用すべき手段

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Publication number: JP2001527090A
Application number: JP2000526535A
Authority: JP
Inventors: オケ・ピロッティ; トール・レッグバリィ; クリステル・エルストレーム; シャーロッタ・リンドクイスト; アン・エカルステン; ラッシュ・フェイェルスタム
Original assignee: アメルシャム・ファルマシア・バイオテック・アクチボラグ
Priority date: 1997-12-31
Filing date: 1998-12-30
Publication date: 2001-12-25
Also published as: WO1999033860A1; AU2083499A; CA2316766A1; EP1044214A1

Abstract

(57)【要約】アルブミンを含む水性液を、骨格 −ＣＯ−ＮＨ−Ｃ(＝Ｃ−)−ＣＯ− を含むアルブミン結合性化合物から選択されるアルブミン結合性化合物と接触させることによりアルブミンを結合する方法、アルブミンを結合して、骨格 −ＣＯ−ＮＨ−Ｃ(＝Ｃ−)−ＣＯ− を示すことができるコンジュゲート。骨格 −ＣＯ−ＮＨ−Ｃ(＝Ｃ−)−ＣＯ− を示すアルブミン結合剤の構造を変えることにより得られたアルブミン化合物。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】発明の背景発明の分野本発明は、アルブミンに結合することができる化合物の使用に関する。

【０００２】関連技術の説明固相に結合したアルブミン結合性リガンドは、主に２つの目的：ａ）アルブミ
ンの精製、およびｂ）アルブミンの不存在下における液状サンプルのさらなる処
理のための、液状サンプルからのアルブミンの除去に使用されている。十分な品
質の最終アルブミン調製物を得るためには、アルブミンリガンドへの結合を伴う
工程を、イオン交換および疎水的相互作用に基づいた結合が含まれる他の工程と
組み合わせることが多い。バッチ方式およびクロマトグラフ処理は両方とも記載
されている。

【０００３】可溶性型でのアルブミン結合性リガンドは、アルブミン結合性リガンドによっ
てマトリックスに吸着されたアルブミンの脱着(例えば、吸着剤の再生)に使用さ
れている。そこで、可溶性リガンドは、アルブミン上の同じ結合部位を、マトリ
ックスに共有結合したリガンドと競争する。

【０００４】骨格Ｉを示す化合物群および単一化合物は、ＷＯ９６２２５２９、ＷＯ９４００５０９およびＷＯ９４０１１０２に記載されている。しかしながら、この文献には、先に記載したこれらの群の個々のメンバーの中から有効なアルブミ
ン結合性リガンドを見出す可能性は認識されていない。

【０００５】発明の要約上に述べた方法により良く適合した親和性、選択性および／または特異性を有
する、改良されたアルブミン結合剤の需要がある。液状サンプルからのアルブミ
ンの精製および除去に要する工程の数を最少とする必要もある。

【０００６】異なる種のアルブミンを互いから分離する、例えば、トランスジェニックウシ
により産生された血清アルブミンに関して、ヒト血清アルブミンをウシ血清アル
ブミンから精製する必要もある。

【０００７】本発明は、これらの需要および必要に合った溶液を提供しようとするものであ
る。

【０００８】本発明の第一態様は、アルブミンを含む水性液を、構造(骨格)： −ＣＯ−ＮＨ−Ｃ(＝ＣＨ−)−ＣＯ− (Ｉ) を含んでなるアルブミン結合性化合物と接触させることにより、アルブミンを結
合する方法を提供する。その結合の性質は不明であるが、イオン性、疎水的、双
極子−双極子相互作用および非共有性の他の相互作用が、水素結合、およびアル
ブミン分子上での化合物と結合部位との間の良好な幾何適合性と共に含まれると
考えられる。

【０００９】以下に記載するように、該骨格は、コンジュゲートまたは遊離化合物の一部で
あり得る。その使用は、アルブミンをアルブミン結合性化合物に結合する方法と
して表現され得、ここで、該化合物は、骨格Ｉを含むアルブミン結合性化合物から選択される。

【００１０】本発明の第二態様は、アルブミンに対する親和性によって結合を最適化するよ
う、式Ｉにおける自由原子価での置換基を新規方法で組み合わせた場合に骨格
Ｉの活性を示す新規コンジュゲートである。

【００１１】アルブミンという用語は、典型的には、哺乳動物からの血清アルブミンおよび
他の脊椎動物において類似の機能を有するタンパク質を意図する。アルブミンと
いう用語は、上に定義した１つ以上の脊椎動物のアルブミンに独特な結合部位に
類似している１つ以上の結合部位を有する、遺伝的に操作された形、変異型、お
よびフラグメント等といったようなアルブミン変種も包含する。本発明に関して
、類似の結合部位という語は、１つのリガンド構造および同じリガンド構造への
結合を互いに競争することができる構造を意図する。血清アルブミンに加えて、
アルブミンは、ラクトアルブミン、オボアルブミン等も包含する。

【００１２】アルブミン分子上での１つ以上の単一結合部位へ親和性によって結合する低分
子量(Ｍw)の化合物はさらに、アルブミン結合性リガンド、または単にリガンドと呼ばれている。担体分子に共有結合したアルブミン結合性リガンドは、アルブ
ミン結合性リガンド−担体のコンジュゲート、または単にリガンド−担体のコン
ジュゲートもしくはコンジュゲートを与える。その担体分子は、コンジュゲート
・パートナーとも呼ばれ得る。コンジュゲートは、アルブミンに結合する１つ以
上のリガンド構造を含み得る。特異的なコンジュゲートの場合、担体のＭwは概して、骨格ＩのＭwより大きい、すなわち、９６ダルトンより大きい。

【００１３】「アルブミン結合剤」という用語を総称的に使用して、アルブミン結合性リガ
ンド、アルブミン結合性リガンド−担体のコンジュゲートおよびアルブミンに対
して親和性を発揮する他の化合物を包含する。

【００１４】発明の詳細な説明このように、我々は、改良されたアルブミン結合剤が、式 II： (Ａ-ＣＯ-ＮＨ-Ｃ(=ＣＨ-Ｂ)-ＣＯ-Ｌ-Ｇ)-----(コンジュゲート・パートナー)_m リガンド担体コンジュゲートの化合物の中から見出され得ることを発見した。

【００１５】 −Ｃ＝Ｃ−の周囲の立体配置は、ＺまたはＥのいずれか、好ましいのはＺ異性
体である可能性が高い。それも式Ｉに当てはまる。ｍは、０または１である。-
----は、コンジュゲート・パートナーが、Ａ、Ｂ、または−Ｌ−Ｇにおける水素
を置換していることを表わす。ｍ＝０の場合、式 IIの化合物はリガンドになり、ｍ＝１の場合、その化合物はコンジュゲートである。式 IIの化合物に関してのアルブミンを結合する能力の測定は、以下に記載するように行うことができる
が、先行技術の方法を使用することもできる。

【００１６】本発明の第一態様は、アルブミンと結合剤との間の結合を可能にする条件下、
アルブミンを含む液状媒体をアルブミン結合剤と接触させることにより、アルブ
ミンを結合する方法をであり、ここで、該結合剤は、骨格 −ＣＯ−ＮＨ−Ｃ(＝
ＣＨ−)−ＣＯ− を含んでなるアルブミン結合剤、特に式 IIを充足するアルブミン結合剤の中から選択される。

【００１７】本発明のこの態様は、液状サンプルからのアルブミンの除去または精製に使用
することができる。アルブミンを含む液状サンプルを、ｍが１に等しく、および
コンジュゲート・パートナーが、水性液状媒体に可溶性、不溶性または不溶化可
能の担体(マトリックス)である、式 IIによるコンジュゲートと接触させる。

【００１８】アルブミンの精製の場合には、その後の工程において、アルブミンを結合した
マトリックスを液体から分離し、結合アルブミンを解離し、集めて、当業界で知
られている方法を使用して、さらに処理する。不溶性担体および不溶性にした不
溶化可能の担体の場合、結合工程は吸着、そして解離工程は脱着と呼ばれる。

【００１９】担体からのアルブミンの解離は、当業界で知られている一般的な原理により、
例えば、アルブミン上でリガンドと同じ部位に結合する物質を用いて、または結
合を困難または不可能にするよう、その部位を変える物質を用いて行うことがで
きる。特にｍ＝０である、式 IIの可溶性アルブミン結合性化合物は、強力な解離剤として作用し得る。吸着／脱着するための条件(pＨ、イオン強度、温度等) は、特に不可逆変性に関して、アルブミンを変性させるべきではない。媒体から
のアルブミンとリガンド−担体のコンジュゲートとの間の複合体の物理的分離を
促進するために、結合工程の後、可溶性担体を不溶化するのがよい。不溶化工程
は、典型的には、全ての解離段階の前に行う。

【００２０】本発明の副次的態様は、例えば、上に定義した典型的なアルブミン以外の化合
物の精製の場合、上に述べたアルブミンを１つも含有しないサンプルを得る方法
である。リガンド−担体物質を再利用することができるように、解離および洗浄
工程がアルブミンの従来の精製でのように含まれ得る。

【００２１】本発明の第一態様によるアルブミンの除去は、粒子／ビーズのモノリスまたは
集塊の形態での不溶性担体を、コンジュゲート・パートナーとして、本発明のア
ルブミン結合剤を固定化した表面上に利用するクロマトグラフ法の一部であり得
る。粒子／ビーズは、充填または流動床の形態であり得る。流動床を安定に膨張
させて、クロマトグラフ法を行えるようにするのがよい。あるいはまた、粒状担
体を、例えば、縣濁液の撹拌を伴うバッチ様式法で使用することができる。

【００２２】リガンドＡおよびＢ基骨格(−ＣＯ−ＮＨ−Ｃ(＝ＣＨ−)−ＣＯ−)における２つの自由原子価には、
典型的には、各々、骨格(−ＣＯ−ＮＨ−Ｃ(＝ＣＨ−)−ＣＯ−)のカルボニル基
、好ましくは左端のカルボニル基、または炭素−炭素の二重結合と共役した２つ
または３つの二重結合を提供する、５員または６員の芳香族環を含む基が存在し
得る。その芳香族環は、典型的には、少なくとも１つの自由電子対を与え、酸素
、窒素または硫黄の中から選択される、１個、２個または３個のヘテロ原子を含
んでなり得る。その芳香族環は、各々が上に論じたヘテロ原子を有し得る他の芳
香族または非芳香族環に縮合し得る。式 IIにおいて、芳香族環を含む２つの基は、ＡおよびＢ部分で表わされる。これらの部分は、交換可能であることが多い
。

【００２３】５員または６員の芳香族環は、式：

【化２】［式中、----は、Ｒ₁およびＲ₂が、Ｒ₃、Ｒ₄、またはＤにおける水素を置換して
いることを表わす。］で表わされ得る。

【００２４】芳香族環から骨格Ｉまでの結合は、Ｄにおける水素、またはＲ₁およびＲ₂の一方、またはＲ₃およびＲ₄の一方の置換を介するものである。Ｒ₃およびＲ₄が、
式 IIIの芳香族環に縮合した環の一部である二価構造を定義しないとすれば、Ｒ ₃ およびＲ₄の一方の置換を介しての骨格Ｉへの結合しか可能ではない。

【００２５】式 IIIにおけるＤは、典型的には、−ＮＨ−ＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＨ＝Ｎ−ＣＨ
−、−ＮＨ−ＣＨ＝Ｎ−、−ＮＨ−Ｎ＝ＣＨ−、−Ｎ＝Ｎ−ＮＨ−、−Ｓ−ＣＨ
＝ＣＨ−、−Ｏ−ＣＨ＝ＣＨ−、−Ｏ−ＣＨ＝Ｎ−、−Ｓ−ＣＨ＝Ｎ−、−ＣＨ
＝ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ＝Ｎ−、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｎ＝ＣＨ−
、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｎ＝Ｎ−、−ＣＨ＝ＮＨ−ＣＨ＝Ｎ−、−Ｎ＝ＣＨ−ＣＨ＝Ｎ
−、−Ｎ＝ＣＨ−Ｎ＝Ｎ−、および−Ｎ＝ＣＨ−Ｎ＝Ｎ−の中から選択される。
これらの構造単位は、式 IIIにいずれかの方向で挿入することができる。典型的
には、式 IIIで定義した芳香族環系には、フェニル、１−および２−ナフチル、
１−および２−チエニル、２−、３−および４−ピリジル、２−、３−および４
−キノリル、１−、３−および４−イソキノリル、２−および３−インドリル、
２−および３−フラニル、１−、２−および３−ピロリル等が含まれる。

【００２６】Ｒ₁およびＲ₂は、ａ）水素(非置換)、アルキル、アリール、アルコキシ、アリールオキシ、
およびそれらのチオアナログ、典型的には、場合により、１つ以上のハロ基で置
換されていることがあるＣ_1-10アルキルまたはＣ_5-15アリール基(例えば、ＣＦ₃ −、ＣＨ₃−、フェニル等)；ｂ）フルオロまたはクロロまたはブロモといったようなハロ；ｃ）ニトロ；ｄ）シアノ、カルボキシアミド(−ＣＯＮＨ₂)およびカルボキシ(−ＣＯＯ
Ｈ)。１個または２個のアミノ水素がヒドロカルビルおよびヒドロカルビルエステルおよびカルボキシの塩で置換されているＮ置換カルボキシアミド(−ＣＯＮＨ₂)のような基は各々、カルボキシアミドおよびカルボキシに含まれる。典型的
なヒドロカルビルは、アリールアルキルもしくは非置換アルキルといったような
Ｃ_1-10アルキル、または例えば、５個−１５個の炭素を含むアルキルアリールも
しくは非置換アリールである。アリール基には、フェニル、１−および２−ナフ
チル、１−、２−または３−ピリジル等が含まれ得る；ｅ）第一級、第二級および第三級アミノといったようなアミノ、並びに第
四級アンモニウムが含まれる、対応するアンモニウム基およびそれらのアシル化
およびアルキル化型。典型的なアルキル化およびアシル化型は、１つ、２つまた
は３つの低級アルキル(Ｃ_1-12)または低級アシル(Ｃ_1-13)、典型的には、各々、
メチルまたはアセチルで置換されているものである；から選択され得る。

【００２７】Ｒ₃およびＲ₄は、水素であり得るか、または一緒になって、上に記したＤ構造
の中、加えて、−ＣＨ₂−Ｓ−ＣＨ₂−、−ＣＨ₂−Ｏ−ＣＨ₂−、−Ｓ−ＣＨ₂− ＣＨ₂−、−Ｏ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−、−Ｏ−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ₂−、−ＣＨ₂−Ｏ− ＣＨ＝ＣＨ−、−Ｓ−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ₂−、−ＣＨ₂−Ｓ−ＣＨ＝ＣＨ−、−Ｓ
−ＣＨ＝ＣＨ−ＮＨ−、−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−、−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−Ｃ
Ｈ₂−、−ＣＨ₂−ＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＨ₂−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ₂−、−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ＝ＣＨ−の中から選択される二価構造を形成し得る。アルブミン結合活性は、本明細書に詳述するＲ₃およびＲ₄以外のＲ₃およびＲ₄(例えば、上のａ −ｅに詳述した基)の場合にも手近となり得るかもしれないと考えることができる。通常の原子価規定を適用する。

【００２８】Ｌ−Ｇ基Ｌは、Ｇを、残りの自由原子価で、好ましい変種においては、式 IIに示す右のカルボニル基で、骨格 −ＣＯ−ＮＨ−Ｃ(＝ＣＨ−)−ＣＯ− に結合するリン
カーである。

【００２９】Ｌは、有機構造であって、−(ＣＨ₂)_n(Ｘ)_m'(ＣＨ₂)_n'−であり得、ここで、左および右の自由原子価は各々、該骨格の右のカルボニル基およびＧ基に結合す
る。Ｘは、酸素、硫黄、または水素がメチル基もしくはＣ_2-10アルキルで置換さ
れているのが好ましいＮＨであり得る。ｎおよびｎ'は、０−３の整数であって、ｍ'は、０または１の整数であるが、ただし、ｎ＋ｎ'＋ｍ'は、１、２または３である。リンカーのＣＨ₂基における１つ以上の水素原子は、Ｃ_1-10アルキル基、またはヒドロキシ、カルボキシもしくはアミノ基、またはさらなる誘導体化
および担体への結合を可能とする官能基を含むいずれかの他の基で置換され得る
。

【００３０】アルブミンに対する最良の親和性は、これまで、Ｘが、水素が前述の段落で提
示したように置換されている、および／または１つ以上のＣＨ₂基がメチルおよび／または前述の段落で提示した幾つかの他の基で置換されているＮＨである、
アルブミン結合剤に関して得られている。

【００３１】本発明の好ましいリンカー鎖は、リンカー鎖における結合の周囲の回転を妨害
するよう、リンカーＬ上に置換基を有する。分子のこの部分における回転を妨害する他の方法、例えば、Ｌ−Ｇにおけるある位置をＡもしくはＢまたは骨格に
おけるある位置と架橋する二価基は、アルブミンに対する親和性に同様の効果を
有し得る。

【００３２】Ｇは、典型的には、例えば、ハロまたはヒドロキシ基等で置換されているかも
しれない、直鎖状、分枝鎖状または環状のヒドロカルビルといったような疎水基
である。典型的には、Ｇは、Ｌに結合する環の位置に関してオルト、メタまたは
パラ位がヒドロキシおよび／またはＣ_1-10アルキル(例えば、メチル)で置換され
得る、フェニルのような芳香族基であり得る。

【００３３】コンジュゲート・パートナー本発明のコンジュゲートにおいて、ｍは１である。コンジュゲート・パートナ
ーは、式 IIに定義したアルブミン結合性リガンドへ架橋によって結合する。その架橋は、リガンドまたはコンジュゲート・パートナーから全体的または部分的
に誘導され得る。簡易化のために、特に指定しない限り、その架橋をコンジュゲ
ート・パートナーの固有部分として論ずる。

【００３４】そのコンジュゲート・パートナー自体は、式 IIに示すリガンドと同じまたは異なった構造のさらなるアルブミン結合性リガンドを含んでなり得る。

【００３５】コンジュゲート・パートナーは、Ａ、ＢまたはＬ−Ｇ基におけるある位置でリ
ガンドに結合し得る。そのコンジュゲート・パートナーをリガンド構造に結合す
る架橋が、芳香族環からの２個の原子の間隔内にsp³混成炭素を含むよう、（ａ）上に提示したリンカーＬにおける官能基；または（ｂ）Ａ部分またはＢ部分のいずれかにおける芳香族環構造；で結合した共有パートナーを有するのが好ましい。このように、架橋は、Ａまた
はＢ部分の芳香族環の隣に−ＣＨ₂−ＣＨ₂−、−ＣＨ₂ＮＨ−、−ＮＨＣＨ₂−、
−ＣＨ₂Ｓ−、−ＳＣＨ₂−、−ＣＨ₂Ｏ−、または−ＯＣＨ₂−を有し得る。

【００３６】有機化学および生化学において、「コンジュゲート」という用語は周知であり
って、各々の化合物由来の性質がコンジュゲートにおいて保持されるよう、一緒
に共有結合した２つ以上の化合物を包含する。本発明に関して、コンジュゲート
という用語は、式 II(ｍ＝０)に定義したアルブミン結合性リガンドが、コンジュゲートにおいて保持される性質を有する化合物(コンジュゲート・パートナー)
に共有結合する(共役する)ことを意味する。典型的には、コンジュゲート・パー
トナーは、コンジュゲートを、濃縮した、分析により検出可能な、生物特異的な
対応物等のような指定する標的に対して反応性の媒体に可溶性、不溶性または不
溶化可能とする。

【００３７】コンジュゲート・パートナー(担体)は、当該液状媒体に不溶性、不溶化可能ま
たは可溶性であり得る。典型的な媒体は、水混和性の有機液体を含むかもしれな
い水および他の液状媒体を含め、水性であり、その中でアルブミンに対する結合
が行われる。典型的な担体は、合成または生物起源のもの(バイオポリマー)であ
り得る、有機または無機ポリマーに基づく。

【００３８】不溶性担体は、クロマトグラフィーにおいて支持体として使用する担体と同じ
種類のものであり得る。

【００３９】適当な不溶性担体は、モノリス、粒子、チューブ壁等といったような、様々な
物理的形態のものであり得る。その担体は、多孔性または非多孔性であり得る。

【００４０】担体は、ポリマーに包埋した密度調節充填物質(粒子)を含み得る。

【００４１】周知の親水性有機不溶性担体は、それらの液体接触面上に複数の親水基(例えば、ヒドロキシおよび／またはアミノおよび／またはカルボキシ)を有するポリマーである。典型的な親水性担体は、水不溶性型のポリビニルアルコール、ポリ
(ヒドロキシアルキルメタクリレート)および対応するアクリレート、ポリアクリ
ルアミドおよびポリメタクリルアミド(例えば、トリスアクリルアミドおよびトリスメタクリルアミド(トリス＝ (ＨＯＣＨ₂ＣＨ₂)₃ＣＮＨ₂または(ＨＯＣＨ₂) ₃ ＣＮＨ₂))といったようなポリヒドロキシポリマーおよびポリアミド、アガロー
ス、デキストラン、デンプン、プルランおよびセルロースといったような多糖類
であり、これらは、それらを吸着／クロマトグラフィーのマトリックスとしての
使用により良く適合させるために橋かけされているかもしれない。外および内( 孔)表面上を疎水化した(例えば、親水性化合物で被覆した)疎水性担体もこの担体群に属する。

【００４２】典型的な疎水性の不溶性担体は、スチレン−ジビニル−ベンゼンポリマー、ポ
リ(アルキルメタクリレート)、ペルフルオロ炭化水素(ＰＦＣ)のポリマー等に基
づく。

【００４３】担体の無機変種は、ガラス、ゼオライト、シリカ、複合体、酸化ジルコニウム
等といったような物質に基づき得る。

【００４４】上に定義した水性媒体に可溶性である担体の典型的な例は、デキストランのよ
うな水溶性ポリマーである。

【００４５】コンジュゲート・パートナーは、酵素的に活性な部分、発蛍光団／蛍光助剤お
よび発色団／色原体等といったような、分析により検出可能な標識、ビオチンま
たは化学的に反応性の基といったような、コンジュゲートに予測される反応性を
与える部分を含み得る。分析により検出可能なコンジュゲートは、イムノアッセ
イ法のようなアッセイにおいて有用であり得る。ビオチンまたは化学的に反応性
の基といったような、予測される反応性をもつコンジュゲートは、例えば、上に
述べたアルブミンの除去方法で使用する場合、様々な種類の他の担体上への、骨
格Ｉを含むアルブミン結合構造の導入を可能にする。これらの種類のコンジュゲート・パートナーは、通常、可溶性コンジュゲートとなる。

【００４６】式 IIの化合物は、アルブミンに結合し得るか、または結合し得えない。しかしながら、ある化合物のアルブミン結合能力を調べるのは慣行の事項である。例
えば、非常に長い期間、アルブミンに対する親和性を与える様々なリガンド構造
をもつ、多数の十分に特性決定された吸着剤が利用できている。多数の化合物を
スクリーニングして、ある一般構造を最適化するためには、以下の実施例に概説
するアルブミン結合実験が特に有用である。このスクリーニング方法は、迅速な
スクリーニングおよび本発明のアルブミン結合骨格を含む化合物の最適化を可能
とする。多数のアルブミン親和性化合物が見出されている。原則的には、２つの
化合物の間の親和性を調べる既知の方法をいずれも変更および適用して、アルブ
ミン結合性リガンドをスクリーニングすることができる。例えば、ＷＯ−Ａ−９
６２２５３０を参照されたい。

【００４７】本発明の第二態様のコンジュゲートは、式（II）： (Ａ-ＣＯ-ＮＨ-Ｃ(=ＣＨ-Ｂ)-ＣＯ-Ｌ-Ｇ)-----(コンジュゲート・パートナー)（
II）［式中、Ａ、Ｂ、およびＬ−Ｇ、および----は、上に定義した通りである。］を有する。コンジュゲート・パートナーはポリマー担体である。そのコンジュゲ
ート・パートナーは、ＡもしくはＢ部分のいずれかで、またはＬでリガンドに結
合する。好ましい変種は、本発明の第一態様での使用に好ましい変種である。

【００４８】式Ｉにおける骨格を有する、特に式 IIに従う各々のアルブミン結合剤の場合
、分子の様々な部分を変えることにより、結合活性のさらなる最適化を期待する
ことができる。この方法で見出された新たなアルブミン結合剤は、式ＩまたはI
Iに必ずしも従わなければならないというわけではないと考えることができる。従って、本発明の第三態様は、式Ｉ、特に式 IIに従うアルブミン結合剤の構造
の１つ以上の構造エレメントを変えることにより得られた新たなアルブミン結合
剤である。これは、例えば、メンバーが、式Ｉ、特に式 IIに従うアルブミン結
合剤の１つの構造エレメントの周囲とは異なる化学ライブラリーを作成して、ス
クリーニングすることにより成し遂げることができる。変えるべき構造エレメン
トは、ここに特許請求するアルブミン結合剤の骨格Ｉ、またはＡ部分、ＢもしくはＬ−Ｇ部分であり得る。典型的には、これらのエレメントの少なくとも１つ
が本発明のこの態様によるアルブミン結合剤において保持される。化学ライブラ
リーという語は、２つ、３つ以上の構造的に異なった化合物の集合(群)を意図す
る。

【００４９】式 IIの化合物の合成式 II(ｍ＝０)の化合物は、適当なオキサゾロン(４位で置換されていない)から出発し、これを芳香族アルデヒドと縮合して、環の４位にある−ＣＨ₂−基を −Ｃ(＝ＣＨ−Ａr)−基(ここで、Ａrは、芳香族アルデヒドの芳香族基である)で
置換して、合成することができる。その後、オキサゾロン環を、構造Ｇを含んでなるアミンまたはアルコールで開環する。利用する様々な工程は、ＷＯ−Ａ−
９４００５０９、ＷＯ−Ａ−９４０１１０２、ＷＯ−Ａ−９５１８１８６、ＷＯ
９５１８６２７、ＷＯ９５１８９７２、ＷＯ−Ａ−９５１７９０３およびＷＯ
９６２２５２９(この文献に記載されている内容は全て、本発明の一部を構成す
る)に記載されている。式（II）の化合物の合成をさらに記載している実施例− 合成も参照されたい。

【００５０】実施例スクリーニング方法アルブミン結合性リガンドをスクリーニングするために、クロマトグラフィー
を非平衡条件下でのリガンド結合の間接測定に使用する方法を開発する。非平衡
条件を使用することから、相互作用の動態学的速度定数は、得られた結合「シグ
ナル」に対して著しい効果を有する。これは、解離速度定数にとりわけ当てはま
り、解離速度定数が標的に対して同じ親和性をもつ様々なリガンド種に関して異
なるならば、様々な結合「シグナル」振幅を与える。Ｚuckermannら(Ｐroc. Ｎa
tl. Ａcad. Ｓci. ＵＳＡ８９（１９９２）４５０５−４５０９)(この文献に記
載されている内容は、本発明の一部を構成する)により、同様の方法が使用された。

【００５１】その方法は、１．標的をリガンドとインキュベートする；２．遊離リガンドから標的を分離する；３．標的画分をリガンドの存在に関して分析する；という工程を含んでなる。

【００５２】標準アッセイアッセイすべきリガンドをＰＢＳに溶解して、ＨＳＡ(ＰＢＳ中の１００mＭＨＳＡ)と混合した。最終濃度がリガンドに関して１０μＭＨＳＡ(ヒト血清アルブミン)中の５０μＭであり、リガンドとＨＳＡとの間の比率が５：１となるよう、その溶液の容量を選択した。次いで、ＨＳＡに結合していない遊離リガン
ドを、ＨＩＴＲＡＰ脱塩カラム(ＳＥＰＨＡＤＥＸＧ２５；Ｐharmacia Ｂiote
ch ＡＢ，Ｕppsala，Ｓweden)を通しての迅速通過により除去した。ＨＳＡおよびＨＳＡに複合した可能なリガンドを含む脱塩カラムからのボイド画分を集めて
、ＨＩＳＥＰ４.６／５０(ＳＵＰＥＬＣＯ，Ｕ.Ｓ.Ａ.)での逆相クロマトグラフィー(ＲＰＣ)により分析した。

【００５３】ＲＰＣ工程から得られる結果は、元のリガンドサンプル中のリガンド濃度の変
化および様々なリガンドに関する吸光係数の差といったような因子により影響を
及ぼされ得る。

【００５４】計測混合工程：深いウェルのマイクロタイタープレート用のＲＡＣＫ２０５を備えた希釈装置をもつＧＩＬＳＯＮ２１５ＬＩＱＵＩＤＨＡＮＤＬＥＲ。１ml の希釈シリンジおよび１.５mlの注入チューブを備えたＥＬＬＥＲＭＡＮチューブ(ＫＥＢＯ，Ｓweden)用のＲＡＣＫ２０２。

【００５５】分離工程：ＥＬＬＥＲＭＡＮチューブ(ＫＥＢＯ，Ｓweden)用のＲＡＣＫ２０
２、１mlの希釈シリンジおよび１.５mlの注入チューブ、並びにＲＨＥＯＤＹＮＥ充填口を備えた希釈装置をもつＧＩＬＳＯＮ２１５ＬＩＱＵＩＤＨＡＮＤＬＥＲ。ＨＩＴＲＡＰ脱塩カラム(ＳＥＰＨＡＤＥＸＧ２５)(ＰＨＡＲＭＡＣＩ
ＡＢＩＯＴＥＣＨＡＢ，Ｕppsala)を備えたＦＰＬＣシステム。ＦＰＬＣにおけるサンプル希釈緩衝液および緩衝液Ａ：ＰＢＳ(０.０５Ｍリン酸塩、０.１５ＭＮaＣl、pＨ７.０)。ゲル濾過用のインスタント緩衝液(ＭＩＫＲＯＫＥＭ
ＩＡＢ，Ｕppsala，Ｓweden)。ＦＰＬＣにおける緩衝液Ｂ：緩衝液Ａ＋２０％(容量) アセトニトリル。緩衝液Ａをゲル濾過工程に使用して、緩衝液ＢをＨＩＴＲＡＰカラムを再生するために使用した。

【００５６】分析工程：m−Ｐeak ＭonitorをもつＳＭＡＲＴＳystem。ＧＩＬＳＯＮ２３４
ＡＵＴＯＩＮＪＥＣＴＯＲ(同期接触子入力をＳＭＡＲＴの補助出力に接続した
)。ＨＩＳＥＰ４.６×５０mmのカラム(ＳＵＰＥＬＣＯ，Ｕ.Ｓ.Ａ.)。溶離液Ａ：１８０mＭ酢酸アンモニウム／アセトニトリル(１９：１容量／容量)。溶離液Ｂ：１８０mＭ酢酸アンモニウム／アセトニトリル(１：９容量／容量)。

【００５７】それらのライブラリーおよびスクリーニング出発ライブラリー：スクリーニングの構築および結果ＩgＧに対して親和性を有するリガンドをスクリーニングするために、スクリーニングライブラリー(スクリーニングライブラリー１)を設けた。有効なＩgＧ
結合性リガンドは見出されなかった。そのライブラリーは手近であることから、
それをアルブミン結合剤に関しても調べた。

【００５８】スクリーニングライブラリー１を、４つの異なったオキサゾロン：

【化３】から構築した。そのオキサゾロンを、１０個の異なったヘテロ環式アルデヒド：

【化４】と縮合した。その後、得られた置換オキサゾロンを、４０個の異なったアミン：

【化５】で開環した（表４）。ライブラリー群における生成物は、さらに精製しなかった
。最終収率は、典型的には、約８０％であった。このように、粗製の生成物(リガンドサンプル)は、時に、最終および／または中間の生成物および／または出発物質の混合物からなっていた。

【００５９】オキサゾロンをアルデヒドと反応させる場合、二重結合の立体配置が異なって
いる異性体を形成し得る。Ｚ／Ｅの比率は、典型的には、９：１であり、安定な
Ｚ異性体が優性な異性体であった。これをＨＰＬＣおよび¹ＨＮＭＲにより確認
した。オキサゾロンをアミンで開環した後も、Ｚ／Ｅの比率はまだ９：１であっ
た(後処理することなく)。例えば、塩化スズでの還元によって、Ａ部分における
ニトロ基をアミノ基へと変換するのに使用する強い酸性／還元条件により、この
比率を変えることができた。

【００６０】スクリーニングライブラリー１を標的物質としてのヒト血清アルブミン(ＨＳ
Ａ)でスクリーニングすると、試験した化合物の約１０％に関してヒットした。弱い親和性から非常に強い親和性までの様々な親和性が、本発明の一部と考えら
れる、以下に示す標準化合物１に関して見出された。

【化６】標準化合物１は、表４における化合物２３である。ＨＳＡへの結合に関して陽性
であるライブラリーメンバーを、ヒトＩgＧ、リゾチームおよびヒトインシュリンへの結合に関しても調べた。

【００６１】次いで、標準化合物１のモチーフをマップするために、指示されたライブラリ
ーおよびサブライブラリーを構築した。担体に対するハンドルおよび結合点を含
む化合物を、元のライブラリーの合成に使用した条件と同様の条件に基づいて合
成した。実施例−合成。

【００６２】標準化合物１との結合における実験３−(２−チエニル)オキサゾロンをＮ−メチル−インドール−３−アルデヒド
と反応させた後、続いて、エフェドリンで開環することにより、標準化合物１を
含む個々のリガンドサンプルを得た。

【００６３】標的物質(ＨＳＡ＝ヒト血清アルブミン)およびリガンドサンプルを等モル濃度
(１０mＭ)で混合して、ＲＰＣカラムに直接適用した場合、このリガンドサンプルは、少なくとも４つの異なった化合物を含み、このうちの１つは、ＨＳＡに対
して反応性を示すことが見出された。そのため、そのリガンドサンプル自体を分
取ＲＰＣにかけ、４つの化合物を単離して、質量分析法により試験した。ＨＳＡ
に結合する化合物の分子量は、４７３の分子量を有することが測定された。別の
実験では、その反応混合物から誘導可能であって、それらがＥおよびＺ異性体で
あることをＮＭＲスペクトルが提示する、Ｍw ４７３である２つの化合物を各々
試験した。標準化合物１のみがＨＳＡへの結合において活性であった。その結果
は、Ｚ異性体がアルブミンへの結合において活性であることを提示した。最終的
な結果は、これまで、Ｅ異性体に関して得られていない。

【００６４】標準化合物１での動態学的解離実験ＨＳＡおよび化合物１の混合物をＨＩＴＲＡＰカラムに様々な流速(０.６３ml
／分、１.２５ml／分、２.５ml／分、５ml／分、１０ml／分)で通過させることにより、１７２〜１０.８秒の解離時間に対応する複合体の安定性を評価することができた。

【００６５】クロマトグラムにおけるＨＳＡおよびリガンドのピークを積分した後、サンプ
ル濃度の差をＨＳＡピークの標準化により補正した。解離時間の関数としてのリ
ガンドピーク領域を、以下の表１で示すように測定することができた。非線形曲
線を当てはめることにより、そのデータは、 [ＴＬ]_t ＝ [ＴＬ(１)]₀ ^* ｅ^-kdiss1*t ＋ [ＴＬ(２)]₀ ^* ｅ^-kdiss2*t ［ここで、ＴＬ(１)およびＴＬ(２)は各々、見掛け解離速度定数ｋｄｉｓｓ１およびｋｄｉｓｓ２をもつ２つの種類の複合体を意味し；およびｔは、解離の開始からの時間を意味する。］により、ＨＳＡ分子上での２つの異なった結合部位からのリガンドの並行および
独立解離を表わすと解釈された。

【００６６】表１．

【表１】ＡＵminは、動態学的試験で記録したクロマトグラムにおいて積分したピーク領域を表わす(ｙ軸には吸光度単位およびｘ軸には分)。領域１および領域２は、解
離してから１０.８秒後(ｔ０)の、各々の部位に結合したリガンドの量を反映する。０時間までの外挿により、インキュベーション混合物における複合体の化学
量論(飽和での)を推定することができる。ＨＳＡおよびリガンドに関する標準曲
線を作成し、モル比を計算するために使用して、これにより、２：１(リガンド／ＨＳＡ)にほぼ近いことが見出された。

【００６７】標準ライブラリーＷＯ−Ａ−９６２２５２９に記載されているＡＮ１００１を標準ライブラリー
として使用した。ＡＮ１００１は、オキサゾロンに基づいた群であり、８０００
の化合物を含む。ＡＮ１００１は、Ａ、ＢおよびＬ−Ｇ基のような、既知の薬作
用発生団構造、通常、芳香族化合物をもつ、式 IIで表わされるメンバーを有する一般ライブラリーである。多くのメンバーを可溶性するのが困難であることに
より、ＡＮ１００１は、アルブミン結合剤に関して完全にはスクリーニングされ
なかった。そのライブラリーは、血清アルブミンへの結合に関して試験すべき重
要な構造を選択する源として使用した。

【００６８】スクリーニングの結果Ａ基における変化出発オキサゾロン(Ａ基)における芳香族環の周囲の合成設計作業の主要な目的
は、アルブミンリガンド結合のためのハンドルをマトリックスに導入することで
あった。様々なＡ基アナログの合成に関しては、実施例−合成を参照されたい。
１つ以上のカルボン酸官能基、アミノ、ニトロ、アミノメチル、クロロメチル、
シアノおよびビニル基、例えば、直接結合に使用することができるか、または結
合基に転換することができる基で置換されているフェニル環が考慮された。

【００６９】重合化により、ビニルフェニルおよびクロロメチルベンジルオキサゾロンを使
用することができなかった。シアノフェニルオキサゾロン誘導体を合成によって
上手くもたらすことはできたが、次いで、シアノ基を、マトリックスへの後の結
合のためのカルボン酸に変換することはできなかった。これらの不成功に終わっ
た合成経路は、計画された最終生成物がアルブミンに結合することを意味しない
。

【００７０】Ａ基においてハンドルを導入する目的で合成した化合物のための出発物質(Ａ、ＢおよびＬ−Ｇ基)を表２に記し、これには、血清アルブミンへの結合に関して試験した化合物が含まれる。

【００７１】表２．Ａ部分において様々なハンドル、およびＢ部分において様々な縮合した２
つの環の芳香族基をもつオキサゾロン

【表２】化合物２および３は異性体である。「＋」は強い結合、「(＋)」は弱い結合、および「−」は結合していないことを
表わす。「Ｘ」は骨格への結合を表わす。「Ａct」は活性であり、および「Ｉ」は不溶性
である。合成の詳細に関しては、実施例−合成を参照されたい。アルブミンに対する親和
性に関する試験の結果は、表２より明らかである。アミノで置換されているフェ
ニルオキサゾロンは全て、幾分活性であったが、ニトロ、シアノ、アミドで置換
されている化合物は、活性が異なっていた。

【００７２】不溶性担体への、フェニル環(Ａ基)に直接結合した官能基での活性化合物の結
合は、アルブミンへの結合において幾分不活性であるコンジュゲートを与えた。
メチレン基を、コンジュゲート・パートナーの結合に使用する官能基とＡ基の芳
香族環との間に挿入した場合に、アルブミンへの結合において活性であるコンジ
ュゲートを得た。この原理は、メチレン基およびこの位置でsp³混成原子を含んでなる他の鎖が、リガンド構造とコンジュゲート・パートナーとの間の結合をよ
り柔軟なものとして、回転を促進することであり得る。

【００７３】Ｂ部分における変化ライブラリー１のスクリーニングおよび標準ライブラリーからの化合物の選択
は、この部分の要件に対して理解を与えた。二環系およびピリジン環にも縮合し
た、フルオロを含む単一芳香族環のような構造が有利であるらしい。

【００７４】ハンドルをＢ部分に導入するための合成は、インドールに限定される。Ｎ−ア
リル−インドール−３−アルデヒドおよびＮ−クロロブチルインドール−３−ア
ルデヒドを合成した。出発インドールの幾つかは、様々な位置でメチル置換基も
示した。試験した化合物を表３に記載する。

【００７５】表３．Ｂ部分における変化

【表３】Ｉ、Ａct、Ｘ、(＋)、＋および−は、表２と同じ意味を有する。活性アルブミン
結合性リガンドがコンジュゲート・パートナーに結合する場合の、アルブミンに
対する親和性を保持するＢ部分に関する規則は、Ａ部分に関する規則と同様でな
ければならない。

【００７６】Ｌ−Ｇ部分における変化血清アルブミンおよび幾つかの他のタンパク質に対するライブラリー１のスク
リーニングから、Ｌ−Ｇ部分、特にエフェドリン部分は、血清アルブミンに対す
る高い活性および選択性に重要であるという結論が下された。他の基、主に疎水性アミン(Ｒ−ＮＨ₂、ここで、Ｒは、アリールまたはアルキル基といったよ
うなヒドロカルビル基であり得る)で開環したオキサゾロン環から派生した基に関して、低い結合活性を得ることができた。この効果は、たとえヒドロカルビル
基が、水性を完全に克服しない１つ以上のより小さい親水基を有するとしても、
保持されるらしい。従って、標準ライブラリーからのリガンドを試験のために選
択する場合には、エフェドリンから得られるＬ−Ｇ部分をもつリガンドを選択す
る。

【００７７】合成作業の大部分は、分子のＬ−Ｇ部分に焦点を合わせた。標準化合物１の様
々なＬ−Ｇ部分アナログを、エフェドリンおよびノルエフェドリン(これは、Ｎ −メチル基がない)並びに幾つかの他のエフェドリンアナログ：

【化７】から製造した。エフェドリンアナログに関する結果を表４および５に記す。

【００７８】表４．１−メチルインドール−３−チエニルオキサゾロンと様々なアミンとの反
応からの生成物に関する活性における結果

【表４】Ｉ、Ａct、Ｘ、(＋)、＋および−は、表２と同じ意味を有する。

【００７９】表５．オキサゾロンの開環を様々なアミンで行った場合の、開環により得られた
化合物に関する活性

【表５】

【表６】（表５．の続き）

【表７】（表５．の続き）Ｉ、Ａct、Ｘ、(＋)、＋および−は、表２と同じ意味を有する。

【００８０】表４に提示した結果は、Ｌが、エフェドリンにおける窒素およびＣ１炭素の周
囲の回転バリヤーの導入により立体配置を安定化することができる基を含むなら
ば、アルブミン結合活性が高められ得ることを説明する(この場合、メチルは、フェニル環に対してγである)。コンジュゲート・パートナーへの結合を可能にする官能基をＬ−Ｇ部分に導入することができるという発見は重要であった(Ｎ −メチル−フェニルアラニン)。

【００８１】表５に提示した結果は、Ｌ−Ｇ部分がエフェドリンアナログから得られる場合
には、フェニルオキサゾロンおよびチエニルオキサゾロン並びにインドリルおよ
びナフチルアルデヒドを使用して、各々、ＡおよびＢ部分を導入することができ
ることを説明する。溶解性の問題は、ＡおよびＢ部分における基が非常に疎水性
である場合に現れた。

【００８２】結合特異性血清アルブミンに対する特異性を試験するために、標準化合物１並びにそのＮ
−メチルアラニンのＤおよびＬアナログＡ３およびＢ３：

【化８】を各々、ＨＳＡ、リゾチーム、ＩgＧおよびインシュリンへの結合に関する普通のスクリーニング条件下に試験した。ＨＳＡを除き、どのタンパク質もこれらの
リガンドには結合しなかった。他の種からの血清アルブミンの結合も試験した。
後者の場合における結果は、新規アルブミン結合剤が、例えば、仔ウシおよびヒ
ト血清アルブミンを区別するリガンドを含んでなるかどうかという疑問を未解決
としたまま、最終的なものではなかった。

【００８３】標準ライブラリー：血清アルブミンに対して親和性を有する試験化合物Ｌ−Ｇ部分をエフェドリンでの開環から得た。以下のＡ基に関して、Ｂ基は次
の通りであった。Ａ＝フェニル：Ｂ＝３−トリフルオロメチルフェニル、４−トリフルオロメチル
フェニル、１−ナフチル。Ａ＝３−メトキシフェニル：２,４−ジフルオロフェニル、２−フルオロフェニル、３−フルオロフェニル、４−トリフルオロメチルフェニル、２−メチルフェ
ニル、３−ピリジル、２−ピリジル。Ａ＝２−ナフチル：２,４−ジフルオロフェニル、３−フルオロフェニル、４− フルオロフェニル、２−メチルフェニル。Ａ＝２−チエニル：３−フルオロフェニル、４−フルオロフェニル、１−ナフチ
ル。Ａ＝４−トリフルオロメチルフェニル：２,４−ジフルオロフェニル、３−フルオロフェニル、４−フルオロフェニル、２−メチルフェニル、３−クロロフェニ
ル、３−ピリジル、４−ピリジル、４−クロロフェニル、３−キノリル。Ａ＝２,４−ジクロロフェニル：２,４−ジフルオロフェニル、２−フルオロフェ
ニル、２−トリフルオロメチルフェニル、３−トリフルオロメチルフェニル、２
−メチルフェニル、４−メトキシフェニル、４−フェニルフェニル、１−ナフチ
ル、３,５−ジフルオロフェニル、４−ピリジル、３−キノリル。Ａ＝４−メチルフェニル：２−フルオロフェニル、２−メチルフェニル、４−メ
チオキシフェニル、３,５−ジフルオロフェニル。Ａ＝３−メチルフェニル：３−フルオロフェニル、４−フルオロフェニル、２−
トリフルオロメチル、フェニル、１−ナフチル、４−トリフルオロメトキシフェ
ニル、３−フェノキシフェニル。

【００８４】方法および分析特性決定をＪＥＯＬＥＣＬＩＰＳＥ−２７０ＭＨz ＮＭＲで行った。サンプルを５mm単位で操作し；プローブおよび物質をＣＤＣl₃またはＤＭＳＯ−ｄ₆に溶解した。ＴＭＳを内部標準として使用した。ＴＬＣをＭＥＲＣＫＫＩＥＳＥＬＧＥＬＦ₂₅₄で操作して、酢酸エチルで溶出した後、ＵＶ光(２５４nm)下に展
開させた。ＨＰＬＣをＳＵＰＥＬＣＯＨＩＳＥＰカラムでのＳＭＡＲＴシステムで行った。

【００８５】１．Ｙ. Ｓ. ＲaoおよびＲ. Ｆiller，２−アリール(アルアルキル)−４−アリーリデン(アルキリデン)−５(４Ｈ)−オキサゾロンの幾何学異性体、Ｓynthes
is ７４９−７６４、１９７５(この文献に記載されている内容は全て、本発明の
一部を構成する)。

【００８６】実施例−合成以下に提示する実施例１−８の各々において、使用する反応物に適合するよう
、溶媒、温度、添加の順序、反応時間および後処理のプロトコル等といったよう
な因子を選択する。¹ＨＮＭＲ、ＭＳおよびＨＰＬＣの結果は、所望の化合物が
得られたという支持を与える。調べるために他の基準が必要ならば、個々の反応
結果を使用した。

【００８７】実施例１．Ａ＝チエン−２−イル；Ｂ＝１−メチル−インドール−３−イル、１
−アリル−２−メチル−インドール−３−イル、ナフチ−１−イルまたは１−( ４−クロロブチ−１−イル)−インドール−３−イルである、式 IIの化合物Ａ．出発オキサゾロンの合成Ｎ−チオフェン−２−カルボキシアミドグリシン：１０００mlの三ツ口フラス
コ中、グリシン７７.０ｇを機械撹拌機で水６００mlに溶解した。ＮaＯＨ(１２.
０ｇ)を加えて、グリシン酸ナトリウムを形成した。次いで、その反応混合物を５℃まで冷却した。塩化チオフェンカルボニルを滴加し、濃ＮaＯＨ溶液(５０％
)を定期的に加えて、pＨを約１０に１.５時間保った。添加の間、温度を１２℃ まで上げると、その溶液が均一となった。さらに１時間後、その混合物を濃ＨＣ
l(７０ml)でpＨ２まで酸性にして、２時間撹拌し続けた。沈殿した結晶を濾過して取り出し、水で洗浄した。真空オーブン中、６０℃で乾燥させた後、生成物
をＮＭＲで確認した。¹ ＨＮＭＲシフト：δ＝４.０５（ｓ，２Ｈ）、δ＝７.１２（dd，１Ｈ）、δ＝
７.６５（dd，１Ｈ）、δ＝７.７１（dd，１Ｈ）。収率：９０−１００％（約１３０ｇ）。

【００８８】２−(チエン−２−イル)−オキサゾール：２Ｌの三ツ口フラスコ中、ジシクロヘキシルカルボジイミド(ＤＣＣ)６６.８ｇを無水ＴＨＦ１００mlに機械撹拌機で溶解した。無水ＴＨＦ６００mlに溶解したチオフェン−２−カルボキ
シアミドグリシンを３０分間滴加した。次いで、その反応混合物を室温で２４時
間撹拌した。その混合物を５℃まで冷却して、ジシクロヘキシル尿素を濾過して
取り除いた。ＴＨＦを蒸発させた後、固形生成物を熱時ジクロロメタンに溶解し
た後、より多くのジシクロヘキシル尿素を濾過して取り除くことができるように
冷却した。その溶液を蒸発させて、ジクロロメタンで１５cmの広幅カラムに通す
シリカ４００ｇでのクロマトグラフにかけた。最初の３Ｌを集め、蒸発させて、
生成物１９ｇを得た。¹ ＨＮＭＲシフト：δ＝７.１４（dd，１Ｈ）、δ＝７.５９（dd，１Ｈ）、δ＝
７.７ppm（dd，１Ｈ）。収率：３５％（１９ｇ）。

【００８９】Ｂ１．環系Ｂとしての１−メチル−インドール−３−イルの導入スクリューキャップ管中、２−(チエン−２−イル)−オキサゾロン３.０ｇ(１
８mmol)をトルエン１２ml中の１−メチルインドール−３−アルデヒド２.０ｇ( １２.６mmol)と混合した。トリエチルアミン(０.８ml)を加えて、密閉した管を加熱ブロック上に７０℃で一晩置いた。結晶の入った暗赤色−褐色の反応混合物
をトルエンおよびアセトン２００mlで希釈した後、水３×１００mlで抽出した。
トルエン層をＭgＳＯ₄で乾燥させ、２０mlまで蒸発させた後、結晶を一晩析出さ
せて、真空オーブン中、これらを６０℃で乾燥させた。¹ＨＮＭＲにより生成物
を確認した。¹ ＨＮＭＲシフト：δ＝３.９３（ｓ，３Ｈ）、δ＝７.１７（dd，１Ｈ）、δ＝
７.３−７.４（ｍ，３Ｈ）、δ＝７.６０（dd，１Ｈ）、δ＝７.６２（ｓ，１Ｈ
）、δ＝７.８１（dd，１Ｈ）、δ＝７.９５（ｄ，１Ｈ）、δ＝８.４２（ｓ，１Ｈ）。収率：２３％（０.８９ｇ）。

【００９０】Ｂ２．環系Ｂとしてのナフチ−１−イルの導入スクリューキャップ管中、２−(チエン−２−イル)−オキサゾール２.５ｇ(１
５mmol)をトルエン１２ml中のナフタレン−１−アルデヒド２.３ｇ(１５mmol)と
混合した。トリエチルアミン(１.０ml)を加えて、密閉した管を加熱ブロック上に７０℃で一晩(１７時間)置いた。沈殿した結晶をトルエン１００mlおよびアセ
トン５０mlに溶解して、その混合物を全てが溶液となるまで加熱した。結晶を析
出させて、集めた後、¹ＨＮＭＲスペクトルを操作すると、幾つかの出発物質が
残っていることを示した。トルエン中で再結晶化させた後、¹ＨＮＭＲにより純
粋な生成物を確認した。¹ ＨＮＭＲシフト：δ＝７.２１（dd，１Ｈ）、δ＝７.４０−７.６６（ｍ，４Ｈ）、δ＝７.６９（dd，１Ｈ）、δ＝７.９０（ｄ，１Ｈ）、δ＝７.９２（dd ，１Ｈ）、δ＝７.９７（ｄ，１Ｈ）、δ＝８.０８（ｓ，１Ｈ）、δ＝８.３０（ｄ，１Ｈ）、δ＝８.９７（ｄ，１Ｈ）。収率：１８％（０.８３ｇ）。

【００９１】Ｂ３．環系Ｂとしての１−アリル−２−メチル−インドール−３−イルの導入１．Ｎ−アリル−２−メチル−インドール−３−アルデヒドの合成ＤＭＳＯ１５mlに溶解した２−メチル−インドール−３−アルデヒド(３.１８
ｇ、２０mmol)およびＫＯＨ(１ｇ)を、ＤＭＳＯ５mlに溶解した臭化アリル(２. ６ml、３０mmol)に６０℃で滴加して、撹拌した。その反応をpＨ１０−１１に保つ間、ＫＯＨの飽和水溶液を加えた。全部で約４mlのＫＯＨ溶液を加えた。そ
の反応混合物をトルエンと水との間で分配した。トルエン層を水で数回注意して
抽出した。有機相を蒸発させて、ＤＭＳＯを含む油状物質とした。それをジエチ
ルエーテル／トルエンおよび水の間で再び抽出して、有機相を蒸発させて、油状
物質を得た。ジエチルエーテル５mlを加えると、結晶化が直ちに起こった。結晶
を濾過して、ジエチルエーテル／ヘキサンで洗浄した後、それらをジエチルエー
テル２５mlから再結晶化させた。トルエン／ＥtＯＡc(１：１)中でのＴＬＣが純
度約９５％を示して、¹ＨＮＭＲにより生成物を確認した。¹ ＨＮＭＲシフト：δ＝２.６４（ｓ，３Ｈ）、δ＝４.７１（ｄ，１Ｈ）、δ＝
５.１７（ｄ，１Ｈ）、δ＝５.８５（ｄ，１Ｈ）、δ＝５.９０（ｍ，１Ｈ）、 δ＝７.２５（ｍ，３Ｈ）、δ＝８.２７（ｄ，１Ｈ）、δ＝１０.１８（ｓ，１Ｈ＝アルデヒド）。収率：５８％（２.３ｇ）。

【００９２】２．環系Ｂとしての１−アリル−２−メチル−インドール−３−イルの導入スクリューキャップ管中、２−(チエン−２−イル)オキサゾロン(４００mg、２.４mmol)および１−アリル−２−メチル−インドール−３−アルデヒド(４７７mg、２.４mmol)をトルエン２.５mlに溶解した。トリエチルアミン(１６３μl 、２.４mmol)を加えて、密閉した管を加熱ブロック上に７０℃で一晩(１７時間)
置いた。その管を冷却すると、結晶が形成され、これらを集めて、冷トルエンで
洗浄した。次いで、結晶をトルエンから２回再結晶化させ、真空オーブン中、６
０℃で乾燥させた後、¹ＨＮＭＲにより生成物を確認した。¹ ＨＮＭＲシフト：δ＝２.６１（ｓ，３Ｈ）、δ＝４.７５（ｄ，２Ｈ）、δ＝
４.８８（dd，１Ｈ）、δ＝５.２０（dd，１Ｈ）、δ＝５.９３（ｍ，１Ｈ）、 δ＝７.２５−７.３６（ｍ，３Ｈ）、δ＝７.５１（ｓ，１Ｈ）、δ＝７.５７（
dd，１Ｈ）、δ＝７.７９（dd，１Ｈ）、δ＝９.１８（ｄ，１Ｈ）。収率：１３％（１１０mg）。

【００９３】Ｂ４．環構造Ｂとしての１−(４−クロロブチ−１−イル)−インドール−３−イ
ルの導入１．１−(４−クロロブチ−１−イル)−インドール−３−アルデヒドの合成インドール−３−アルデヒド(１.４５ｇ、１０mmol)を無水ＤＭＳＯ５.０mlに
溶解して、ＫＯＨ(０.５ｇ)を加えた。ＤＭＳＯ３mlに溶解した１−ブロモ−４ −クロロブタン(２.５７ｇ、１５mmol)を３時間の間滴加した。その反応物を６０度で振盪した。１−ブロモ−４−クロロブタンの添加で各々、４５℃ ＫＯＨ０.５mlを加えた(全部で１.５ml)。反応が完了した後、その反応混合物をＨ₂Ｏ／トルエンで数回抽出した。有機相を蒸発させて、油状物質を得、これをジエチ
ルエーテル(４５ml)に溶解して、−２０℃で３日間保持した。固体を濾過して取
り出し、エーテルで洗浄して、乾燥させた。収率：７６％＝１.８ｇ。ＴＬＣが、Ｃ−２クロロブタン誘導体かもしれない、不純物の非常に小さなスポットを示した。これにより、生成物をジエチルエーテルから少量のアセトン(全容量約１０ml)で再結晶化させた。短いシリカカラムを操作して、生成物を共結晶化させ、生成物をトルエン／ＥtＯＡc ２：１で溶出して、純粋な化合物を得た。¹ ＨＮＭＲシフト：δ＝１.８０（ｑ，２Ｈ）、δ＝２.０７（ｑ，２Ｈ）、δ＝
３.５３（ｔ，２Ｈ）、δ＝４.２０（ｔ，２Ｈ）、δ＝７.２５−７.３５（ｍ，
３Ｈ）、δ＝７.７０（ｓ，１Ｈ）、δ＝８.３０（ｄ，１Ｈ）、δ＝９.９９（ｓ，１Ｈ）。

【００９４】２．環構造Ｂの導入スクリューキャップ管中、２−(チエン−２−イル)オキサゾール(５００mg、３mmol)およびＮ−(４−クロロブタン)インドール−３−アルデヒド(７００mg、
３mmol)をトルエン３mlに溶解した。トリエチルアミン(２００μl、３mmol)を加
えて、密閉した管を振盪加熱ブロック上に７０℃で一晩(１７時間)置いた。その
反応混合物をトルエン１０mlおよびアセトン５mlに溶解し、水３×１０mlで抽出
した。トルエン相をＭgＳＯ₄で乾燥させて、蒸発させた。短いシリカカラムを操
作し、生成物をトルエン／ＥtＯＡc ９：１で溶出して、純粋な化合物を得た。¹ ＨＮＭＲシフト：δ＝１.８６（ｑ，２Ｈ）、δ＝２.１３（ｑ，２Ｈ）、δ＝
３.５７（ｔ，２Ｈ）、δ＝４.２９（ｔ，２Ｈ）、δ＝７.１３−７.２２（ｍ＋
dd，１＋１Ｈ）、δ＝７.２９−７.４１（ｍ，３Ｈ）、δ＝７.６０（dd，１Ｈ）、δ＝７.６１（ｓ，１Ｈ）、δ＝７.８２（dd，１Ｈ）、δ＝７.９５（ｍ，１Ｈ）、δ＝８.４２（ｓ，１Ｈ）。収率：２４％（２８０mg）。

【００９５】Ｃ．オキサゾロンとアミンとの反応(環構造Ｃ(すなわち、−Ｌ−Ｇ)の導入) スクリューキャップ管中、オキサゾロンをアミンおよび溶媒と混合する。その
管を加熱ブロック上に一晩(１８時間)置いた後、溶媒を熱および／または窒素で
蒸発させる。合成生成物をさらに精製することなく、そのまま使用した。未精製
の生成物をＨＰＬＣ、ＴＬＣ並びに¹ＨＮＭＲおよびＥＳＭＳを伴うそれらの幾
つかで分析して、期待の化合物と一致することを見出した。使用するアミンを上
の「Ｌ−Ｇ部分における変化」という標題の下に記す。溶媒、温度およびトリエ
チルアミンの添加を表４−５に与える。

【００９６】実施例２．Ａ＝フェニル；Ｂ＝１−メチル−インドール−３−イルまたはナフチ
−１−イルである、式 IIの化合物Ａ１．環系Ｂとしての１−メチル−インドール−３−イルの導入スクリューキャップ管中、フェニルオキサゾロン５ｇ(３１mmol)をトルエン３
０ml中の１−メチルインドール−３−アルデヒド４.９３ｇ(３１mmol)で溶解した。トリエチルアミン(２.０ml)を加えて、密閉した管を加熱ブロック上に７０ ℃で一晩(１７時間)置いた。沈殿した結晶をトルエン２００mlおよびアセトン１
００mlに溶解して、その混合物を全てが溶液となるまで加熱した。結晶を析出さ
せて、集めた後、¹ＨＮＭＲスペクトルを操作すると、幾つかの出発物質が残っ
ていることを示した。トルエンから再結晶化させた後、¹ＨＮＭＲにより純粋な
生成物を確認した。¹ ＨＮＭＲシフト：δ＝３.９５（ｓ，３Ｈ）、δ＝７.３０−７.４０（ｍ，３Ｈ）、δ＝７.４７−７.５８（ｍ，３Ｈ）、δ＝７.６５（ｓ，１Ｈ）、δ＝７.
９９（dd，１Ｈ）、δ＝８.１５（dd，２Ｈ）、δ＝８.４５（ｓ，１Ｈ）。収率：３７％（３.４６ｇ）。

【００９７】Ａ２．環構造Ｂとしてのナフチ−１−イルの導入スクリューキャップ管中、２−フェニルオキサゾロン２.５ｇ(１６mmol)を１ −ナフタルアルデヒド２.４２ｇ(１６mmol)と一緒にトルエン１５mlに溶解した。トリエチルアミン(１.０ml)を加えて、密閉した管を加熱ブロック上に７０℃ で一晩(１７時間)置いた。溶媒を熱および窒素で蒸発させて、その反応混合物を
熱時酢酸エチルおよびメタノール数滴に溶解した後、冷却した。その溶液から析
出した結晶を¹ＨＮＭＲにより生成物であると特性決定した。¹ ＨＮＭＲシフト：δ＝７.５０−７.６８（ｍ，６Ｈ）、δ＝７.９０（ｄ，１Ｈ）、δ＝７.９７（ｄ，１Ｈ）、δ＝８.１４（ｓ，１Ｈ）、δ＝８.２１（dd ，２Ｈ）、δ＝８.３１（ｄ，１Ｈ）、δ＝９.２（ｄ，１Ｈ）。収率：３４％（１.６４ｇ）。

【００９８】Ｂ．オキサゾロンとアミンとの反応(環構造Ｇ(すなわち、−Ｌ−Ｇ)の導入) スクリューキャップ管中、オキサゾロンをアミンおよび溶媒と混合する。その
管を加熱ブロック上に一晩(１８時間)置いた後、溶媒を熱および／または窒素で
蒸発させる。合成生成物をさらに精製することなく、そのまま使用した。未精製
の生成物をＨＰＬＣ、ＴＬＣ並びに¹ＨＮＭＲおよびＥＳＭＳを伴うそれらの幾
つかで分析した。使用するアミンを上の「Ｌ−Ｇ部分における変化」という標題
の下に与える。溶媒、温度およびトリエチルアミンの添加を表４−５に記す。

【００９９】実施例３．Ａ＝４−ニトロ−フェニル；Ｂ＝１−メチルインドール−３−イルま
たはキノール−４−イル；(−)−(１Ｒ,２Ｓ)−エフェドリンから得られる−Ｌ −Ｇ−である、式 IIの化合物使用する反応物に適合するよう、溶媒、温度、添加の順序、反応時間および後
処理のプロトコルを選択した。¹ＨＮＭＲ、ＭＳ、ＨＰＬＣの結果は、所望の化
合物が得られたという支持を与える。

【０１００】Ａ．２−(４−ニトロ−フェニル)オキサゾロンこの化合物を４−ニトロ馬尿酸の無水酢酸結晶化により製造した。

【０１０１】Ｂ１．環系Ｂとしての１−メチルインドール−３−イルおよび(−)−(１Ｒ,２Ｓ
)−エフェドリンでのオキサゾロン開環による構造 −Ｌ−Ｇの導入これらの２工程は、他のオキサゾロン、アルデビトおよびアミンに関して上に
記載したように行ったが、ここで、そのアルデヒドは、１−メチルインドール−
３−アルデヒドである。

【０１０２】Ｂ２．(−)−(１Ｒ,２Ｓ)−エフェドリンでのオキサゾロン開環による構造 −Ｌ
−Ｇの環系Ｂとしてのナフチ−１−イルの導入これらの２工程は、他のオキサゾロン、アルデビトおよびアミンに関して上に
記載したように行ったが、ここで、そのアルデヒドは、ナフタレン−１−アルデ
ヒドである。

【０１０３】Ｂ３．環系Ｂとしてのキノール−４−イルおよび(−)−(１Ｒ,２Ｓ)−エフェドリンでのオキサゾロン開環による構造 −Ｌ−Ｇの導入これらの２工程は、他のオキサゾロン、アルデビトおよびアミンに関して上に
記載したように行ったが、ここで、そのアルデヒドは、キノリン−４−アルデヒ
ドである。

【０１０４】実施例４．Ａ＝４−アミノフェニルおよびＮ−アセチル−４−アミノフェニル；
Ｂ＝１−メチルインドール−３−イル、ナフチ−１−イルまたはキノール−４−
イル；および(−)−(１Ｒ,２Ｓ)−エフェドリンから得られる−Ｌ−Ｇ−である、式 IIの化合物Ａ１.１．実施例３Ｂ１の開環した生成物のＳnＣl₂還元Ａ＝４−アミノフェニル；Ｂ＝１−メチルインドール−３−イル。実施例３Ｂ
１で得られた化合物をＳnＣl₂で還元した。

【０１０５】Ａ１.２．実施例３Ｂ２の開環した生成物のＳnＣl₂還元Ａ＝４−アミノフェニル；Ｂ＝１−ナフチ−１−イル。実施例３Ｂ２で得られ
た化合物をＳnＣl₂で還元した。

【０１０６】Ａ１.３．実施例３Ｂ３からの開環した生成物の、そのアミンアナログへのＳnＣ
l₂還元Ａ＝４−アミノフェニル；Ｂ＝キノール−４−イル。実施例３Ｂ３で得られた
化合物をＳnＣl₂で還元した。

【０１０７】Ａ２．実施例３Ｂ１の開環した生成物の触媒還元Ａ＝４−アミノフェニル；Ｂ＝１−メチルインドール−３−イル。実施例３Ｂ
１で得られた化合物をＰd／Ｃ上のＨ₂で還元した。生成物が実施例４Ａ１.１．での生成物と同じであると同定した。

【０１０８】Ｂ１．Ａ部分における４−アミノフェニル基のアシル化実施例４Ａ１.１．からの生成物を無水酢酸でアシル化した。

【０１０９】実施例５．Ａ＝Ｎ−アセチル−４−アミノフェニル；Ｂ＝ナフチ−１−イル；お
よび(−)−(１Ｒ,２Ｓ)−エフェドリンから得られる−Ｌ−Ｇ−である、式 IIの
化合物Ａ．環系ＡおよびＢの導入これは、２−(Ｎ−アセト−４−アミノフェニル)オキサゾロンをナフタレン−
１−アルデヒドと反応させることにより行った。

【０１１０】Ｂ．(−)−(１Ｒ,２Ｓ)−エフェドリンでのオキサゾロン開環による構造 −Ｌ−
Ｇの導入これは、上に記した方法と同様に、オキサゾロン、アルデヒドおよびアミンの
他の組み合わせで行った。

【０１１１】実施例６．Ａ＝４−シアノフェニル；Ｂ＝ナフチ−１−イル；および(−)−(１Ｒ,２Ｓ)−エフェドリンから得られる−Ｌ−Ｇ−である、式 IIの化合物Ａ．２−(４−シアノフェニル)オキサゾロン４−シアノベンゾイルクロリドをグリシンと反応させて、４−シアノ馬尿酸を
得、その後、これをＡc₂Ｏで環化することから、この化合物を得た。

【０１１２】Ｂ．２−(４−シアノフェニル)オキサゾロンおよびナフタレン−１−アルデヒド
の縮合この反応は、他のオキサゾロンおよびアルデヒドに関して上に記した方法と同
様に行った。

【０１１３】Ｃ．(−)−(１Ｒ,２Ｓ)−エフェドリンでのオキサゾロン環の開環他のオキサゾロンに関して上に概説したように、前述の工程からのオキサゾロ
ン生成物をアミンと反応させた。

【０１１４】実施例７．Ａ＝４−Ｈ₂ＮＣＯ−フェニル；Ｂ＝ナフチ−１−イル；および(−) −(１Ｒ,２Ｓ)−エフェドリンから得られる−Ｌ−Ｇ−である、式 IIの化合物実施例６Ｃの生成物を酸化条件下に加水分解することにより、この生成物を得
た。

【０１１５】実施例８．Ａ＝４−アミノメチルフェニル；Ｂ＝ナフチ−１−イル；および(−)
−(１Ｒ,２Ｓ)−エフェドリンから得られる−Ｌ−Ｇ−である、式 IIの化合物Ａ．−ＮＨＣbzで保護された４−アミノ馬尿酸の形成Ｎ−Ｃbzで保護された４−アミノメチル安息香酸と塩化オキサリルとの反応か
ら得られたＮ−Ｃbz(Ｃ₆Ｈ₅ＣＨ₂ＯＣＯ−)で保護された４−アミノメチル−ベンゾイルクロリドをグリシンと反応させた。

【０１１６】Ｂ．オキサゾロンの形成工程ＡからのＮＨＣbzで保護された馬尿酸をジシクロヘキシルカルボジイミド
で環化した。

【０１１７】Ｃ．環系Ｂとしてのナフチ−１−イルの導入および(１Ｒ,２Ｓ)−エフェドリンでのオキサゾロン開環これは、オキサゾロン、アルデヒドおよびアミンの他の組み合わせに関して上
に記した方法と同様に行った。保護基を最終工程で除去した。

【０１１８】実施例９．ＥＡＨＳＥＰＨＡＲＯＳＥ４ＢおよびＥＣＨＳＥＰＨＡＲＯＳＥへのリガンドの結合ＥＡＨＳＥＰＨＡＲＯＳＥ４Ｂ(１,６−ジアミノ−ヘキサンと反応させたエ
ポキシ活性化アガロース)またはＥＣＨＳＥＰＨＡＲＯＳＥ(６−アミノ−ヘキサンカルボン酸と反応させたエポキシ活性化アガロース)を２０％エタノール中
で予め膨張させておいた。エタノール溶液をデカントして、ゲルをガラス繊維上
にて水で洗浄した。そのゲルをＴＨＦへと繰り返し洗浄する。リガンド(１００ −１５０μmol)およびジシクロヘキシルカルボジイミド(２００μmol)をＴＨＦに溶解した後、ゲル１０ml(アミノ基１００μmol)と混合する。縣濁液を室温で一晩(１８時間)回転させる。そのゲルをＴＨＦ３００ml、アセトン３００ml、水
３００ml、イソプロパノール３００ml、アセトニトリル３００ml、および最後に
水３００mlで洗浄する。残りの基をジオキサン中の１.７Ｍ酢酸および１Ｍジシクロヘキシルカルボジイミド(ＤＣＣ)でブロックする。そのゲルを４０℃のイ
ソプロパノール１５０ml、アセトン３００ml、ＴＨＦ３００ml、アセトニトリル
３００ml、４０℃のイソプロパノール３００ml、エタノール３００mlおよび水３
００mlで洗浄する。最後に、そのゲルを、高いpＨ(０.１Ｍトリス−ＨＣl ＋０.５ＭＮaＣl pＨ８.５)および低いpＨ(０.１ＭＮaＡcＯ＋０.５ＭＮaＣ
l 酢酸でpＨ４.５)の緩衝液で交互に洗浄する。高いpＨの緩衝液３００mlおよび低いpＨの緩衝液３００mlを全て一緒に使用した。結果を表６に記す。

【０１１９】表６．ＨＳＡに対して親和性を有する結合リガンド

【表８】 −Ｌ−Ｇは、指示されたアミノ酸をオキサゾロン環の開環に使用することを示す
。^*ＥＡＨＳＥＰＨＡＲＯＳＥに結合した最終リガンド。^**ＥＣＨＳＰＨＡＲＯＳＥに結合した最終リガンド。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＡＵ，ＣＡ，ＪＰ，ＵＳ (72)発明者クリステル・エルストレームスウェーデン、エスエー−754 33ウプサラ、ヨハネスヴェークスガータン36アー番 (72)発明者シャーロッタ・リンドクイストスウェーデン、エスエー−753 10ウプサラ、グロップグレンド４番 (72)発明者アン・エカルステンスウェーデン、エスエー−756 53ウプサラ、チェーデルヴェーゲン25ベー番 (72)発明者ラッシュ・フェイェルスタムスウェーデン、エスエー−754 40ウプサラ、ヴァットールマヴェーゲン71番Ｆターム(参考） 4H045 AA10 AA20 AA30 BA51 BA61 EA50 EA61 FA44 FA81

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】アルブミンを結合する方法であって、アルブミンを含む水性
液を、骨格 −ＣＯ−ＮＨ−Ｃ(＝Ｃ−)−ＣＯ− を含むアルブミン結合性化合物
(化合物１)と接触させることを含んでなる方法。
【請求項２】該化合物が、式 II： (Ａ-ＣＯ-ＮＨ-Ｃ(=ＣＨ-Ｂ)-ＣＯ-Ｌ-Ｇ)-----(コンジュゲート・パートナー)_m リガンド担体コンジュゲート［式中、ａ．ＡおよびＢは、同じであるか、または異なっており、各々、該骨格のカル
ボニルまたは炭素−炭素の二重結合に直接結合した５員または６員の芳香族環を
含み；ｂ．Ｌは、リンカー −(ＣＨ₂)_n(Ｘ)_m'(ＣＨ₂)_n'− であり、ここで、左および右の自由原子価は各々、該骨格の右のカルボニル基およびＧ基に結合し；Ｘは
、酸素、硫黄またはＮＨであり、そのＮＨのＨに関しては、場合により、メチル
基またはＣ₂−Ｃ₁₀アルキル基で置換されていることがあり；リンカーのＣＨ₂基
における１つ以上の水素原子は、場合により、Ｃ_1-10アルキル基、またはヒドロ
キシ、カルボキシもしくはアミノ基、またはさらなる誘導体化および担体／コン
ジュゲート・パートナーへの結合を可能とする官能基を含むいずれかの基で置換
されていることがあり；ｎおよびｎ'は、０−３の整数であって、ｍ'は、０また
は１の整数であるが、ただし、ｎ＋ｎ'＋ｍ'は、１、２または３であり；ｃ．Ｇは、疎水基であり；ｄ．ｍは、０または１であり；ｅ．-------は、担体／コンジュゲート・パートナーが、存在するならば、リガンドにおける水素を置換していることを意味し；ｆ．担体／コンジュゲート・パートナーは、１１８ダルトンを超える分子量を
有し、化合物２から誘導される残基である。］を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】ｎ＝０、ｍ'＝１およびｎ'＝２；Ｘが、Ｏ、またはＨが低級
Ｃ_1-10アルキルで置換されているＮＨであり；リンカーのＣＨ₂基における１つ以上の水素原子が、Ｃ_1-10アルキル基、またはヒドロキシ、カルボキシもしくは
アミノ基で置換されている、請求項２に記載の方法。
【請求項４】ＡおよびＢにおける一方または両方の芳香族環が、少なくと
も１つの自由電子対を与え、酸素、窒素または硫黄の中から選択される、１個、
２個または３個のヘテロ原子を含んでなる、請求項２−３のいずれかに記載の方
法。
【請求項５】ＡおよびＢが各々、式：【化１】［式中、Ａ）----は、Ｒ₁およびＲ₂が、Ｒ₃、Ｒ₄、またはＤにおける水素を置換してい
ることを表わし；Ｂ）芳香族環から骨格 −ＣＯ−ＮＨ−Ｃ(＝Ｃ−)−ＣＯ− までの結合は、Ｄ
における水素、またはＲ₁およびＲ₂の一方、またはＲ₃およびＲ₄の一方の置換を
介するものであり；Ｃ）式 IIIにおけるＤは、−ＮＨ−ＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＨ＝Ｎ−ＣＨ−、−Ｎ
Ｈ−ＣＨ＝Ｎ−、−ＮＨ−Ｎ＝ＣＨ−、−Ｎ＝Ｎ−ＮＨ−、−Ｓ−ＣＨ＝ＣＨ−
、−Ｏ−ＣＨ＝ＣＨ−、−Ｏ−ＣＨ＝Ｎ−、−Ｓ−ＣＨ＝Ｎ−、−ＣＨ＝ＣＨ−
ＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ＝Ｎ−、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｎ＝ＣＨ−、−ＣＨ
＝ＣＨ−Ｎ＝Ｎ−、−ＣＨ＝ＮＨ−ＣＨ＝Ｎ−、−Ｎ＝ＣＨ−ＣＨ＝Ｎ−、−Ｎ
＝ＣＨ−Ｎ＝Ｎ−、および−Ｎ＝ＣＨ−Ｎ＝Ｎ−の中から選択され、Ｄ）Ｒ₁およびＲ₂は、ａ）場合により置換されていることがある、水素(非置換)、アルキル、ア
リール、アルコキシ、アリールオキシおよびそれらのチオアナログ；ｂ）ハロ；ｃ）ニトロ；ｄ）シアノ、カルボキシアミドおよびカルボキシ；およびｅ）第一級、第二級および第三級アミノといったようなアミノ、並びに第
四級アンモニウムが含まれる、対応するアンモニウム基およびそれらのアシル化
およびアルキル化型；よりなる群から選択され；Ｅ）Ｒ₃およびＲ₄は、水素であり得るか、または一緒になって、上に記したＤ
構造の中、加えて、−ＣＨ₂−Ｓ−ＣＨ₂−、−ＣＨ₂−Ｏ−ＣＨ₂−、−Ｓ−ＣＨ ₂ −ＣＨ₂−、−Ｏ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−、−Ｏ−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ₂−、−ＣＨ₂−Ｏ
−ＣＨ＝ＣＨ−、−Ｓ−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ₂−、−ＣＨ₂−Ｓ−ＣＨ＝ＣＨ−、−
Ｓ−ＣＨ＝ＣＨ−ＮＨ−、−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−、−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−
ＣＨ₂−、−ＣＨ₂−ＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＨ₂−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ₂−、および−Ｃ
Ｈ₂−ＣＨ₂−ＣＨ＝ＣＨ−の中から選択される二価構造を形成し得る。］で表わされる、請求項２−４のいずれかに記載の方法。
【請求項６】一方または両方の芳香族環が、フェニル、１−および２−ナ
フチル、１−および２−チエニル、２−および３−および４−ピリジル、２−お
よび３−および４−キノリル、１−および３−および４−イソキノリル、２−お
よび３−インドリル、２−および３−フラニル、並びに１−、２−および３−ピ
ロリルよりなる群から選択される、請求項２−５のいずれかに記載の方法。
【請求項７】Ｇが、アリール基、またはＬに結合する環の位置に関してオ
ルト、メタもしくはパラ位がヒドロキシおよび／またはＣ_1-10アルキルで置換さ
れているアリール基である、請求項２−６のいずれかに記載の方法。
【請求項８】ｍ＝１、およびコンジュゲート・パートナーが、ポリマー担
体または分析により検出可能な担体から選択される、請求項２−７のいずれかに
記載の方法。
【請求項９】コンジュゲート・パートナーが、Ａ、Ｂ、またはＬ部分のい
ずれかでリガンドに結合する、請求項２−８のいずれかに記載の方法。
【請求項１０】コンジュゲート・パートナーが、ＡまたはＢ部分のいずれ
かで結合して、そのコンジュゲート・パートナーが、結合が生ずるＡ部分または
Ｂ部分における芳香族環からの２個の原子の間隔内にsp³混成原子を与える、請求項２−８のいずれかに記載の方法。
【請求項１１】コンジュゲート・パートナーが、芳香族環の隣に−ＣＨ₂ −ＣＨ₂−、−ＣＨ₂ＮＨ−、−ＮＨＣＨ₂−、−ＣＨ₂Ｏ−、または−ＯＣＨ₂− 基を与える、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】コンジュゲート・パートナーが、Ｌにおける水素を置換し
ている−ＣＯＮＨ−または−ＣＯＯ−基でＬに結合する、請求項２−８のいずれ
かに記載の方法。
【請求項１３】ｎ＝０、ｎ'＝２、ｍ'＝１、Ｘ＝ＯまたはＮＨ、そのＮＨ
におけるＨに関しては、場合により、低級Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキルで置換されていることがある、請求項２−１２のいずれかに記載の方法。
【請求項１４】コンジュゲート・パートナーが、親和性吸着のための支持
体マトリックスである、請求項２−１２のいずれかに記載の方法。
【請求項１５】式 II： (Ａ-ＣＯ-ＮＨ-Ｃ(=ＣＨ-Ｂ)-ＣＯ-Ｌ-Ｇ)-----(コンジュゲート・パートナー)_m ［式中、Ａ、Ｂ、およびＧ、および----は、請求項２−１４のいずれかに定義した通り
であり；ｍ＝１、ここで、コンジュゲート・パートナーは、Ａ、Ｂ、またはＬ部分のい
ずれかでリガンドに結合する。］を有するコンジュゲート。
【請求項１６】コンジュゲート・パートナーが、ＡまたはＢ部分のいずれ
かの芳香族環でリガンドに結合して、そのコンジュゲート・パートナーが、結合
が生ずるＡまたはＢ部分の芳香族環からの２個の原子の間隔内にsp³混成炭素原子を与える、請求項１５に記載のコンジュゲート。
【請求項１７】コンジュゲート・パートナーが、芳香族環の隣に−ＣＨ₂ −ＣＨ₂−、−ＣＨ₂ＮＨ−、−ＮＨＣＨ₂−、−ＣＨ₂Ｏ−、または−ＯＣＨ₂− を与える、請求項１６に記載のコンジュゲート。
【請求項１８】コンジュゲート・パートナーが、Ｌにおける水素を置換し
ている−ＣＯＮＨ−または−ＣＯＯ−基でＬに結合する、請求項１５に記載のコ
ンジュゲート。
【請求項１９】ｎ＝０、ｎ'＝２、ｍ'＝１、Ｘ＝ＯまたはＮＨ、そのＮＨ
におけるＨに関しては、場合により、低級Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキルで置換されていることがある、請求項１５に記載のコンジュゲート。
【請求項２０】コンジュゲート・パートナーが、親和性吸着のための支持
体マトリックスである、請求項１５−１９のいずれかに記載のコンジュゲート。
【請求項２１】ＬのＮＨにおける水素が、メチル基またはＣ_2-10アルキル
基で置換されている、請求項２−１４のいずれかに記載の方法。
【請求項２２】該Ｒ₁およびＲ₂基が、少なくとも１つのハロ基で置換され
ている、請求項５−１４のいずれかに記載の方法。
【請求項２３】該Ｒ₁およびＲ₂が、場合により、１つ以上の低級アルキル
またはハロ基で置換されていることがあるＣ_1-10アルキルまたはＣ_5-15アリール
基(例えば、−ＣＦ₃、−ＣＨ₃)である、請求項５−１４のいずれかに記載の方法
。
【請求項２４】Ｒ₁およびＲ₂がフェニルである、請求項５−１４のいずれ
かに記載の方法。
【請求項２５】ＬのＮＨにおける水素が、メチル基またはＣ_2-10アルキル
基で置換されている、請求項５−１４のいずれかに記載の方法。
【請求項２６】該支持体マトリックスがクロマトグラフ用支持体マトリッ
クスである、請求項５−１４のいずれかに記載の方法。
【請求項２７】該支持体マトリックスがクロマトグラフ用支持体マトリッ
クスである、請求項５−１４のいずれかに記載のコンジュゲート。
【請求項２８】前述の請求項のいずれかに定義したアルブミン結合剤の構
造の一部を変えることにより得られるアルブミン結合性化合物。