JPH03251544A - 光学異性体用分離剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は光学異性体の分離剤に関し、詳しくは担体に結
合したフラボプロティンが使用されることを特徴とする
光学異性体用分離剤に関する。

従って本発明は光学異性体の分離が技術課題として提起
されている化学の分野、とりわけ医薬品の分野において
利用される。

〔従来の技術及び発明が解決しようとする課題〕不斉炭
素原子を含むキラルな化学物質について、その光学異性
体を分離することが特に医薬品の分野において強く要求
されている。すなわち一つのラセミ体を構成する複数の
光学異性体の中の一つのものが特別に顕著な医薬上の有
用性、例えば顕著な薬理作用、顕著な生体内利用性を示
し、あるいは反対に顕著な毒性を示すことが一般事実と
して明らかになり、従って医薬品としてはラセミ体によ
って投与されるよりも、分離された光学異性体によって
投与される方がより合理的であり、治療効果を高める結
果となるからである。

光学異性体の分離については従来から幾多の実験室的方
法が報告されてきたが、工業的規模において実施できる
ものは少なく、これは非常に困難な技術課題であると考
えられてきた。しかしカラムクロマトグラフィーの進歩
により、とりわけ液体クロマトグラフィーにより光学異
性体を分離する方法が一般に知られるようになり、例え
ば下記文献１）〜９）に示されるごとくである。

１）デイ−・ダブル′・アームストロングら：ジャーナ
ル・オプ・クロマトグラフィツク・サイエンス、２２巻
（１９８４）　４１１頁−４１５頁（ＤＪ。

Ａｒｓｓｔｒｏｎｇ　ｅｔ　ａｌ：Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏ
ｆ　Ｃｈｒｏｓ＋ａｔｏｇｒａｐｈｉｃＳｃｉｅｎｃｅ
、　Ｖｏｌ　２２　（１９８４）　４１１−４１５）２
）　イエルゲン・ヘルマンソン：ジャーナル・オブ・ク
ロマトグラフィー、井５　（１９８５）　３７９頁−３
８４頁（Ｊｏｒｇｅｎ　ｆｌｅｒｍａｎｓｓｏｎ　：　
Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆＣｈｒｏｓ＋ａｔｏｇｒａｐｈＬ
　３２５　（１９８５）　３７９−３８４）３）　アイ
・ダブル・ウニイナーら：ジャーナル・オブ・クロマト
グラフィー、　２８４　（１９８４）１１７頁−１２４
頁（ＩＪ、Ｗａｉｎｅｒ　ｅｔ　ａｌ　：　Ｊｏｕｒｎ
ａｌｏｆ　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　、　２８４
　（１９８４）　１１７−１２４）４）　ニス・アレン
マルクら：ジャーナル・オプ・クロマトグラフィー、　
２６４工（１９８３）　６３頁＝６８頁　（Ｓ、Ａｌｌ
ｅｎｍａｒｋ　　ｅｔ　　ａｌ　　　：　Ｊｏｕｒｎａ
ｌ　　ｏｆ　　Ｃｈ−ｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ、　　
２６４　　（１９８３）　　６３　−６８）５）　ニス
・アレンマルクら：ジャーナル・オブ・クロマトグラフ
ィー、匪（１９８２）　４７３頁４７７　頁　（Ｓ、＾
ｌｌｅｎｍａｒｋ　　ｅｔ　　ａｌ　　　：　Ｊｏｕｒ
ｎａｌ　　ｏｆＣｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ＋　２３
７　（１９Ｂ２）　４７３　４７７）６）米国特許第４
，５３９．３９９号明細書７）特開昭６０−４１６１９
号公報 ８）特開昭６３−３０７８２９号公報 ９）特開昭６４−３１２９号公報 上記文献のうち、１）はキラルなシクロデキストリンを
使用する分離方法を開示し、６）は該シクロデキストリ
ンをシリカゲルに結合せしめた固定相を使用して分離す
る方法を開示している。

２）はキラルなα１−酸性糖蛋白を使用する技術を開示
しており、３）は（Ｒ）　−Ｎ　−（３，５−ジニトロ
ベンゾイル）フェニルグリシンを使用する技術を開示し
ている。４）および５）は牛血清アルブミンをそれぞれ
シリカおよびアガロースに結合せしめた固定相を使用し
て分離する方法を開示している。７）はオロソムコイド
、その官能類像体等を使用して分離する方法を開示して
いる。

８）はオボムコイドを担体に結合せしめた固定相を使用
して分離する方法を開示している。９）はアビジンを担
体に結合せしめた固定相を使用して分離する方法を開示
している。

しかしながら１）〜７）の技術における使用資材は一般
に高価である。またこれらの技術における分離方法は主
として多量の有機溶媒を使用する液体クロマトグラフィ
ーによって行われるので、使用資材は有機溶媒による変
性に対して安定でなければならないが、例えばアルブミ
ン、オロソムコイドはこの条件を十分に満足することが
できない。

８）は比較的安価な資材を使用し、有機溶媒による変成
に対しても安定で塩基性の物質の分離に広く用いられて
いる。一方、９）は酸性の物質の分離に用いられている
。

しかし、開示されている上記技術を用いても化合物によ
っては光学異性体の分離ができない場合もあり、新しい
光学異性体分離剤の開発が要望されていた。

〔課題を解決するための手段〕

前記の課題にかんがみ、本発明者らは卵白に含まれる糖
蛋白質を利用して従来の技術では分離の難しいメキシレ
チンやオクスプレノロール等の光学異性体を分離する技
術の捷供を目的として種々の検討を行った。その結果、
卵白より簡単に入手することができるフラボプロティン
を使用することにより目的を達成することができること
を見出し、本発明を完成するに到った。

即ち本発明は、フラボプロティンを担体に結合した固定
相からなることを特徴とする光学異性体用分離剤を開示
するものである。

以下に本発明の詳細な説明する。

フラボプロティンは卵白中に存在し、分子量が約３２．
０００〜３６，０００、等電点が３．９〜４．１の糖蛋
白質である。卵白からフラボプロティンを精製する方法
としては、イオン交換クロマトグラフィー法等がある０
例えば、卵白をｐＨ４，３に調整したのち、陰イオン交
換樹脂を加えてフラボプロティンを吸着させ、その後樹
脂からフラボプロティンをｐＨ３，１の溶離液を用いて
溶出させる方法、あるいは分子ふるいによるゲルクロマ
トゲラフイーを行う方法、さらには疎水性クロマトグラ
フィーを用いる方法等により容易にフラボプロティンが
得られる。しかし卵白よりリゾチームあるいはコンアル
ブミンを採取した後の残液からこれらの副産物として容
易に分画することもできる。従って本発明においては、
フラボプロティンはこのようにして安価に製造したフラ
ボプロティンを入手して使用すればよく、フラボプロテ
ィンの入手方法は特別に限定される必要はない。

本発明に用いられる担体はフラボプロティンと結合し、
固定相を形成し得るものであればよい０本発明による光
学異性体の分離は主として液体クロマトグラフィーによ
って行われるので、担体としては例えばシリカゲル、セ
ルロース、合成ポリマー等が好ましく用いられる。

フラボプロティンを担体に結合する方法は、固定相を形
成するために通常に行われている方法に従って行えばよ
い。従って、例えばアミノプロピルシリカゲルを担体と
し、Ｎ、Ｎ−ジサクシニミジルカーボネートを架橋剤と
してフラボプロティンを結合したり、あるいはシリカゲ
ルを担体とし、３−グリシドキシプロピルトリメトキシ
シランを架橋剤としてフラボプロティンを結合したり、
あるいはセルロースを担体とし、ブロムシアンで活性化
してからこれにフラボプロティンを結合したり、イオン
交換合成ポリマーにフラボプロティンを結合したりする
方法が挙げられる。

本発明の主要な点は光学異性体の分離にあたりフラボプ
ロティンが使用されることにあるので、本発明は担体と
の結合方法によって特別に限定されるものではない。

本発明の分離剤は前記したごとく、フラボプロティンを
担体に結合して得られた固定相からなることを特徴とす
る。従って本発明の分離剤には当該固定相が必須の構成
成分として含まれるが、同時に分離剤中に他の成分、例
えばシリカゲルやセルロースが任意に選択されて加えら
れることは自由であり、分離効率の向上のために適宜行
うことができる。

本発明において光学異性体とは分子内に不斉炭素原子を
有するキラル化合物を言い、多くの医薬品にその例を見
ることができる。例えばイブプロフェン、ケトプロフェ
ン、プロゲルミド、フルルビプロフェン、クロルフェネ
シン、ピンドロール、クロルフェニラミン、クロルプレ
ナリン、タレマスチン、アロプレノロール、オクスブレ
ノロール、アスコルビン酸、プロプラノロール、メキシ
レチン等を挙げることができる。

これらにおいては互いに鏡像関係にある複数の光学異性
体が存在し、一体となってラセミ体を形成している０本
発明の分離剤はこれらラセミ体を対象として、それらか
らそれらを構成する光学異性体を分離するのに特に有効
である。

本発明の分離剤は主として液体クロマトグラフィーにお
いて使用される。従ってその使用方法は液体クロマトグ
ラフィーにおける通常の操作によって行えばよく、例え
ば本発明分離剤をカラムに充填し、光学異性体に係るラ
セミ体をチャージし、次にリン酸緩衝液、エタノール水
溶液、イソプロパツール等の移動相を流通せしめ、保持
時間の差によって、所用の光学異性体を単離すればよい
。

〔実施例〕

以下に記載する実施例によって本発明を更に具体的に説
明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるもので
はない。

実施例１ アミノプロピルシリカゲル３ｇおよびＮ、Ｎ　−ジサク
シニミジルカーボネート２ｇをＱ、　１Ｍ炭酸水素ナト
リウム緩衝液（ｐＨ６，８）１００　ｗに入れ、−夜撹
拌し、ガラスフィルター上にとり、水洗して活性化アミ
ノプロピルシリカゲルの懸濁液を用意した。別にフラボ
プロティン２ｇを０．１Ｍ炭酸水素ナトリウム緩衝液（
ｐＨ６，８）３０ｒｎｌに溶解した溶液を用意し、それ
を前記懸濁液に加え、本発明分離剤を得た。

得られた分離剤をスチールカラムに充填し、光学異性体
分離用カラムとした。

実施例２ シリカゲル１０ｇを１４０℃にて２４時間乾燥し、冷却
後、トルエン１４０−に懸濁し、３−グリシドキシプロ
ビルトリメトキシシラン１５−を加え、加熱還流し、５
時間後に上部より低沸点留分を除き、ガラスフィルター
上にとり、トルエン、テトラヒドロフラン、メタノール
で順次洗浄し、６０°Ｃで２時間乾燥して、エポキシ活
性化シリカゲルを得た。この５ｇをｐＨ８，５のホウ酸
緩衝液５０−に懸濁し、これにフラボプロティン５００
■を加え、室温にて２４時間反応させた。ガラスフィル
ター上にとり、水洗して本発明分離剤を得た。

得られた分離剤を２０ｍＭ’Ｊン酸緩衝液（ｐＨ７，０
）に懸濁し、カラムに充填し、光学異性体分離用カラム
とした。

実施例３ ０．１Ｍ炭酸水素ナトリウム緩衝液（ｐＨ８，３）に市
販のブロムシアン活性化セファローズ４Ｂを加えて膨潤
させ、これにフラボプロティンを加えて混合し、本発明
分離剤を得た。

実施例４ 市販の陰イオン交換合成ポリマーをスチールカラムに充
填し、このカラムにｐＨ５，０でフラボプロティン水溶
液を流通させフラボプロティンを結合せしめ光学異性体
分離用カラムとした。

〔発明の効果〕

以下の実験例によって本発明の効果を示す。

実験例１ 実施例１で用意された光学異性体分離用カラムを用いて
塩酸メキシレチンのエナンチオマーにおける分離を試み
た。

なお、移動相は１０％の２−プロパツールを含む２０＠
Ｍリン酸緩衝液（ｋ　／　ｋ２）　（ｐＨ６，０）を使
用し、流速を１．Ｏｌ１７／ｗｉｎとした。

結果を第１図に示す。

第１図より本発明分離剤によって各光学異性体が分離さ
れたことが判明した。

実験例２ 実験例１と同様にしてケトプロフェンのラセミ体におけ
る分離を試みた。但し移動相のｐＨは５．５とした。

結果を第２図に示す。

第２図より本発明分離剤によって各光学異性体が分離さ
れたことが判明した。

実験例３ 実験例２と同様にしてオクスブレノロールのラセミ体に
おける分離を試みた。

結果を第３図に示す。

第３図より本発明分離剤によって各光学異性体が分離さ
れたことが判明した。

【図面の簡単な説明】

第１図は実験例１の結果を示す液体クロマトグラム、第
２図は実験例２の結果を示す液体クロマトグラム、第３
図は実験例３の結果を示す液体クロマトグラムである。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、フラボプロテインを担体に結合した固定相からなる
   ことを特徴とする光学異性体用分離剤。 ２、担体がシリカゲル、セルロース又は合成ポリマーで
   ある請求項１記載の光学異性体用分離剤。