DK160335B - Immunkemisk fremgangsmaade til bestemmelser af en iodthyronin i en biologisk vaeske med 2-hydroxy-4-methoxybenzophenon-5-sulfonsyre eller et salt deraf som tbp-blokeringsmiddel, samt reagenssystem, testsaet og testmateriale til anvendelse ved metoden - Google Patents

Immunkemisk fremgangsmaade til bestemmelser af en iodthyronin i en biologisk vaeske med 2-hydroxy-4-methoxybenzophenon-5-sulfonsyre eller et salt deraf som tbp-blokeringsmiddel, samt reagenssystem, testsaet og testmateriale til anvendelse ved metoden Download PDF

Info

Publication number
DK160335B
DK160335B DK328584A DK328584A DK160335B DK 160335 B DK160335 B DK 160335B DK 328584 A DK328584 A DK 328584A DK 328584 A DK328584 A DK 328584A DK 160335 B DK160335 B DK 160335B
Authority
DK
Denmark
Prior art keywords
iodothyronine
binding
enzyme
thyroxine
biological fluid
Prior art date
Application number
DK328584A
Other languages
English (en)
Other versions
DK160335C (da
DK328584D0 (da
DK328584A (da
Inventor
Paul B Ellis
David L Morris
Original Assignee
Miles Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Miles Inc filed Critical Miles Inc
Publication of DK328584D0 publication Critical patent/DK328584D0/da
Publication of DK328584A publication Critical patent/DK328584A/da
Publication of DK160335B publication Critical patent/DK160335B/da
Application granted granted Critical
Publication of DK160335C publication Critical patent/DK160335C/da

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/74—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving hormones or other non-cytokine intercellular protein regulatory factors such as growth factors, including receptors to hormones and growth factors
    • G01N33/78—Thyroid gland hormones, e.g. T3, T4, TBH, TBG or their receptors
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/536—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with immune complex formed in liquid phase
    • G01N33/542—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with immune complex formed in liquid phase with steric inhibition or signal modification, e.g. fluorescent quenching
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/81—Packaged device or kit
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/962—Prevention or removal of interfering materials or reactants or other treatment to enhance results, e.g. determining or preventing nonspecific binding
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/97—Test strip or test slide
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/975—Kit
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10S436/804—Radioisotope, e.g. radioimmunoassay
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10S436/807—Apparatus included in process claim, e.g. physical support structures
    • Y10S436/808—Automated or kit

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
  • Steroid Compounds (AREA)

Description

DK 160335 B
o
Opfindelsen angår en immunkemisk fremgangsmåde til bestemmelse af en iodthyronin i en biologisk væske, såsom serum eller plasma, med 2-hydroxy-4-methoxybenzophenon-5--sulfonsyre som TBP-blokeringsmiddel, samt et reagenssystem, 5 et testsæt og et testmateriale til anvendelse ved metoden.
I særdeleshed angår opfindelsen kompetitive bindings-immuno-analysemetoder, reagenssystemer, testsæt og testmaterialer til bestemmelse af iodthyroniner i uekstraherede prøver af serum eller plasma ved anvendelse af blokerende eller dis-10 socierende midler til binding af iodthyroniner med thyroxin-bindende proteiner (TBP), der er til stede i sådanne prøver.
De principielle iodthyroniner, der har klinisk interesse, er 3,5,3',5'-tetraiodthyronin (thyoxin, T-4), 3,5,3'-triiodthyronin (T-3 eller blot "triiodthyronin"), 15 3,3 ' ,5'-triiodthyronin (’’omvendt T-3”) og 3,3'-diiodthy ronin. Den kvantitative bestemmelse af koncentrationen af de forskellige iodthyroniner, især hormonerne T-4 og T-3, i blodet er af betydning ved diagnosen af thyroide forstyrrelser.
20 I blodet er næsten alle de cirkulerende iodthyro niner kompleksbundet med forskellige bærerproteiner, herunder albumin, thyroxinbindende præalbumin og thyroxinbin-dende globulin (TBG), idet sådanne bærerproteiner her skal betegnes generisk som thyroxinbindende protein (TBP). Så-25 fremt man skal blive i stand til at måle koncentrationen af den totale mængde af en iodthyronin i en blodprøve, f.eks. serum eller plasma, skal de TBP-bundne former dissocieres i en analytisk signifikant grad, hvorpå den resulterende totale fri iodthyronin bestemmes. Dissocia-30 tionen af iodthyroniner fra TBP, navnlig TBG, blev oprindelig udført ved hjælp af en ekstraktionsproces, jfr.
US. patentskrift nr. 3.414.383. På teknikkens nuværende stade kan iodthyroniner bestemmes ved immunoanalyse i uekstraherede prøver ved anvendelse af forbindelser, der 35 empirisk har vist sig at blokere eller forårsage dissociation af TBP-binding. Ved gængse kompetitive bindings-iod-thyronin-immunoanalyser kombineres en testprøve med reagenser omfattende et antistof til den iodthyronin, der skal bestemmes, en mærket form (f.eks. radioaktivt mærket) af en
O
2 DK 160335B
sådan iodthyronin samt ét eller flere TBP-blokerende midler. Iodthyroninen i prøven, der er kompleksbundet med TBP, dissocieres derfra og konkurrerer med mærket iodthyronin om binding til antistoffet. Den andel af mærket iodthyronin, 5 der bliver antistofbundet, sammenlignet med den andel, der forbliver ubundet til antistoffet, er afhængig af den totale koncentration af iodthyroninen i prøven og kan måles på et stort antal måder, afhængigt af den bestemte immuno-analyseteknik, der anvendes.
10 Forskellige forbindelser har vist sig at være an vendelige som TBP-blokerende midler, herunder tetrachlor-thyronin, jfr. Mitsuma et al., J.Clin.Endocrinol.Metab., 33, 365 (1971), diphenylhydantoin, jfr. Lieblich og Utiger, J.Clin.Invest., 50_, 60a (1971), salicylat, jfr. Larson, Metab., 15 .20' 976 (1971) , de forskellige materialer, der er beskrevet af Hollander, jfr. US patentskrift nr. 3.928.553, og Chopra, jfr. US patentskrift nr. 3.911.096, især 8-anilino--1-naphthalensulfonsyre (ANS), og visse substituerede phenyleddikesyrer, navnlig fenclofenac og diclofenac, jfr.
20 US patentansøgning nr. 414.934, indleveret den 3. september 1982. Strukturerne og de generelle egenskaber for de kendte TBP-blokerende midler varierer over et yderst bredt område.
De egenskaber, der er kritiske for operabiliteten som et TBP-blokerende middel ved immunoanalyser, dvs. evnen til 25 i tilstrækkelig grad at dissociere iodthyroniner fra TBP ved koncentrationsniveauer, der er utilstrækkelige til at bevirke signifikant inhibering af antistof-bindingsreaktionen, betragtes i almindelighed som uforudsigelige ud fra rent strukturelle sammenligninger, omend der er blevet 30 fremsat nogle teorier vedrørende TBG-blokering, jfr. Brown og Metheany, J.Pharm. Sci., J53, 1214 (1974).
Det har nu ifølge opfindelsen vist sig, at 2--hydroxy-4-methoxybenzophenon-5-sulfonsyre (HMS) og salte deraf er særligt fordelagtige TBP-blokerende midler til 35 anvendelse ved iodthyronin-immunoanalyser. Blokeringsmiddelforbindelsen inkluderes i immunoanalysereaktionsblan-dingen i en koncentration, der er tilstrækkelig til at
3 DK 160335 B
O
frigøre og blokere bindingen af en analytisk signifikant procentdel af TBP-kompleksbundet iodthyronin, fortrinsvis mere end 50% og almindeligvis mere end 70%, medens koncentrationen skal være utilstrækkelig til på signifikant måde 5 at interferere med bindingen af antistof med iodthyronin.
Omend de nøjagtige koncentrationer af blokeringsmidlet, der ønskes til en bestemt iodthyroninimmunoanalyse, vil variere i overensstemmelse med den iodthyronin, der bestemmes, og den anvendte immunoanalyseteknik samt andre to faktorer, anvendes forbindelsen normalt i koncentrationer i reaktionsblandingen på mellem ca. 0,1 millimolær (mM) og ca. 10 mM, fortrinsvis mere end ca. 0,25 mM og sædvanligvis mindre end ca. 5,0 mM. Det her omhandlede HMS-blokerings-middel sættes til analysereaktionsblandingen i form af 15 syren eller en analytisk acceptabel saltform deraf, f.eks. et natrium-, kalium-, lithium-eller ammoniumsalt.
HMS frembyder særlige fordele som et TBP-bloke-rende middel ved immunoanalyser. Forbindelsen har vist sig 20 at være et i særlig grad potent blokerende middel. Dissociation af over 50% af TBP-bundet iodthyronin i løbet af nogle få minutter er mulig under anvendelse af reaktionsblandingskoncentrationer så lave som 1 mM, idet koncentrationer på kun 4 mM giver mere end 90% dissociation. HMS er 25 særdeles vandopløseligt og har vist sig at være effektivt over et forholdsvis bredt pH-område, hvilket skaber større frihed ved udformningen af testsæt.
Ydermere vil HMS ikke udvise nogen væsentlig in-hiberende effekt på den katalytiske aktivitet af mange 30 enzymer i koncentrationer, hvori forbindelsen er et effektivt TBP-blokerende middel. Ved uvæsentlig inhiberende effekt på enzymatisk aktivitet menes, at graden af katalyse ikke nedsættes mere end ca. 70%, mere normalt mindre end 50%, fortrinsvis mindre end 30%. Den nævnte forbindelse er 35 således yderligere fordelagtig som et TBP-blokerende middel ved homogene immunoanalyser, hvor den anvendte mærkning er
4 DK 160335B
O
en deltager i en enzymatisk reaktion, f.eks. et enzymsubstrat, en enzyminhibitor, en prosthetisk gruppe i et enzym, et coenzym, eller et enzym som sådant eller et fragment deraf. TBP-blokerende midler, der tilhører den kendte 5 teknik, især det mest populære middel, ANS, kan forårsage signifikant inhibering af enzymreaktioner, hvilket igen resulterer i nedsat analyseeffektivitet.
HMS og salte deraf finder derfor ifølge opfindelsen en ny anvendelse som TBP-blokerende midler ved immunoana-10 lyser i almindelighed, og forbindelserne er særligt fordelagtige, når de anvendes ved homogene immunoanalyser, især sådanne, hvor den anvendte mærkning er en deltager i en enzymkatalyseret reaktion. Med den foreliggende opfindelse tilvejebringes der yderligere et reagenssystem til 15 gennemførelse af de nye immunoanalyser, især i form af testsæt og testmaterialer, der almindeligt anvendes i kliniske laboratorier.
HMS, der har formlen
20 OH
0 V
(q)-c-(o)-o ch3
S°3H
25 har vist sig at være særlig fordelagtig som et TBP-blokerende middel til anvendelse ved iodthyronin-immunoanalyser.
Det vil imidlertid være åbenbart for enhver med almindeligt kendskab til dette område af teknikken, at der kan foreta-30 ges forskellige modifikationer af den til grund liggende benzophenonstruktur med den ovenfor angivne formel, uden at der derved afviges fra den foreliggende inventive idé.
Analoge forbindelser, der er i besiddelse af de her omhandlede TBP-blokeringsmiddel-træk, må betragtes som ækvivalen-35 ter, der falder under opfindelsens omfang. Eksempelvis, og uden at dette skal opfattes som en begrænsning, kan den
O
5
DK 160335 B
usubstituerede phenylring være passende substitueret, f.eks.
med én eller flere substituenter, der er udvalgt blandt alkyl, almindeligvis lavere alkyl , f.eks. methyl, ethyl og propyl, alkoxy, almindeligvis lavere alkoxy, f.eks. methoxy og ethoxy, hydroxyl, halogen, syregrupper 5 såsom carboxylsyre- og sulfonsyregrupper og deres alkyl-homologe og lignende. Substituenterne på phenylringen, der bærer sulfonsyregruppen, kan også flyttes til andre stillinger på ringen eller fjernes, og ringen kan yderligere substitueres med passende grupper, f.eks. som angivet ovenfor.
I overensstemmelse med det ovenfor anførte er testsættet ifølge opfindelsen til homogen immunoanalysebestem-melse af en iodthyronin i en biologisk væske ejendommeligt 15 ved, at det omfatter (1) et antistof til iodthyroninen, (2) et mærket iodthyronin-konjugat omfattende en mærkning, der giver et detekterbart respons, som er måleligt forskelligt, når konjugatet er bundet til antistoffet, og når det 2o ikke er således bundet, og (3) et thyroxin-bindende protein-blokerende middel bestående af 2-hydroxy-4-methoxybenzophenon-5-sulfonsyre eller et salt deraf og eventuelt andre thyroxin-bindende protein-blokerende midler.
25 Testmaterialet ifølge opfindelsen er tilsvarende ejen dommeligt ved, at det omfatter 2-hydroxy-4-methoxybenzophenon--5-sulfonsyre eller et salt deraf som et blokerende middel for bindingen af iodthyroninen til thyroxin-bindende protein, inkorporeret sammen med et fast bærestof.
30 Den immunkemiske fremgangsmåde ifølge opfindelsen til bestemmelse af en iodthyronin i en biologisk væske er ejendommelig ved, at der anvendes 2-hydroxy-4-methoxybenzo-phenon-5-sulfonsyre eller et salt deraf som et blokerende middel for bindingen af iodthyroninen til thyroxin-bindende 35 protein i den biologiske væske.
O
6
DK 160335 B
Reagenssystemet ifølge opfindelsen til immunoanalyse-bestemmelse af en iodthyronin i en biologisk væske er ejendommeligt ved, at det omfatter 2-hydroxy-4-methoxybenzo-phenon-5-sulfonsyre eller et salt deraf som et blokerende 5 middel for bindingen af iodthyroninen til thyroxin-bindende protein i den biologiske væske.
Den foreliggende opfindelse kan anvendes ved iodthyronin- immunoanalyser i almindelighed. I den her omhandlede sammenhæng skal der ved en immunoanalyse forstås en-10 hver analyse baseret på antigen-antistof-reaktioner, og der skal ved et antistof forstås et helt konventionelt eller et monoklont antistof, f.eks. af typerne IgG, IgM, IgA etc., eller et effektivt fragment deraf, f.eks. fragmenter af IgG såsom Fab, F(ab') etc. Den mest almindelige type 15 immunoanalyse, ved hvilken den foreliggende opfindelse kan udnyttes med fordel, er den kompetitive bindings-immuno-analyse. Ved en sådan immunoanalyse til bestemmelse af en iodthyronin kombineres en testprøve af en legemsvæske, sædvanligvis serum eller plasma, med et antistof til den 20 iodthyroinin, der skal bestemmes, en mærket form af iodthyroninen samt et blokeringsmiddel for TBP-binding. Den andel af mærket iodthyronin, der bliver bundet til antistoffet i konkurrence med enhver iodthyronin i prøven, sammenlignet med den andel, der forbliver ubundet, er relate-25 ret til koncentrationen af iodthyroninen i prøven.
Der kan anvendes såvel homogen som heterogen immunoanalyseteknik, idet den førstnævnte især foretrækkes.
Ved heterogene immunoanalyser adskilles den antistof-bundne form af den mærkede iodthyronin fysisk, således som det 30 er kendt i teknikken, fra den ubundne form, og mærkningen måles i den ene eller den anden af de adskilte faser. Der kendes forskellige mærkninger til anvendelse ved heterogene immunoanalyser, herunder radioaktive isotoper, jfr. f.eks. US patentskrifterne nr. 4.111.656 og nr. 3.911.096, 35 fluorescerende midler, jfr. f.eks. US patentskrifterne nr. 4.201.763, 4.171.311, 4.133.639 og 3.992.631, enzymer,
O
7
DK 160335 B
jfr. f.eks. US patentskrift nr. 3.654.090. Ved radioaktive immunoanalyser af iodthyroniner er det særlig fordelagtigt at anvende radioaktivt iod som mærkningen, idet dette erstatter eller substituerer ét af de native iod-5 atomer i iodthyroninen.
Ved homogene immunoanalyser, der i særlig grad foretrækkes ifølge opfindelsen, udtrykker den antistof-bund-ne form af den mærkede iodthyronin en egenskab forskellig fra den ubundne form, og man kan således undgå det adskil-10 lelsestrin, der kræves ved heterogene analyser. I teknikken kendes der et stort antal homogene immunoanalysemetoder. Særligt foretrukne er de metoder, hvor mærkningen, der er kemisk konjugeret til iodthyroninen, er et enzym eller et enzymfragment, f.eks. en prosthetisk gruppe, eller er en 15 deltager i en enzymkatalyseret reaktion, f.eks. et substrat, et coenzym, en inhibitor eller en aktivator. Anvendelsen af HMS kan være noget begrænset ved immunoanalyser, hvor en lysemission, f.eks. fluorescens eller kemiluminescens, er signalet og måles i nærværelse af blokeringsmidlet. HMS 20 har vist sig at absorbere ved bølgelængder over 360 nanometer (nm) og kan derfor potentielt undertrykke emissioner i dette område.
Den foreliggende opfindelse er specielt anvendelig i forbindelse med homogene, kompetitive bindings-immuno-25 analyser, hvor mærkningen er en deltager i en enzymkatalyseret reaktion. Sådanne immunoanalyser omfatter enzym-substratmærknings-teknik, jfr. US patentansøgning nr.
894.836 af 10. april 1978 og det tilsvarende britiske patentskrift nr. 1.552.607, teknik under anvendelse af mærk-30 ning med prosthetiske grupper, jfr. US patentskrift nr.
4.238.565, hvori der beskrives et særlig foretrkkent system, hvor mærkningen er flavin-adenin-dinucleotid (FAD) og måles ved tilsætning af apo(glucoseoxidase), teknik under anvendelse af coenzym-mærkning, jfr. US patentansøgning 35 nr. 894.836, der er nævnt ovenfor, teknik under anvendelse af enzymmodulator-mærkning, jfr. US patentskrift nr.
O
8
DK 160335 B
4.134.792 og nr. 4.273.866, og teknik under anvendelse af enzym-mærkning, jfr. US patentskrifterne nr. 3.817.837 og nr. 4.043.872. Andre metoder under anvendelse af homogen, kompetitiv bindings-immunoanalyseteknik kan anvendes, uden 5 at der afviges fra den foreliggende opfindelses idé.
Yderligere enkeltheder er angivet i US patentansøgning nr. 414.934 af 3. september 1982.
Den biologiske væske, der skal testes, kan være enhver sådan, i hvilken den eller de iodthyroniner, der er 10 af interesse, kan være forbundet med bindingsproteiner på uønsket måde. I den sædvanlige situation er den biologiske væske en blodprøve såsom serum eller plasma.
Reagenssystemet ifølge den foreliggende opfindelse indeholder alle de essentielle kemiske elementer, der 15 kræves til gennemførelse af en ønsket iodthyronin-immuno-analysemetode som omfattet af opfindelsen. Reagensmidlerne foreligger i en kommercielt pakket form, som et materiale eller en blanding, når reagensernes forenelighed tillader dette, i en testmaterialekonfiguration eller i form af et 20 testsæt, dvs. en pakket kombination af én eller flere beholdere indeholdende de nødvendige reagenser. Omfattet af reagenssystemet er de reagenser, der er passende til det ønskede bindings-reaktionssystem, og som har en her omhandlet forbindelse, f.eks. HMS, som et TBP-blokerende mid-25 del. Sådanne bindings-reaktionsreagenser omfatter sædvanligvis, ud over det her omhandlede blokeringsmiddel, et mærket iodthyronin-konjugat, antistof til den iodthyronin, der bestemmes, og eventuelt andre TBP-blokerende midler efter ønske. Naturligvis kan reagenssysternet omfatte andre 30 materialer, der er kendte i teknikken, og som kan være ønskelige set fra et kommercielt synspunkt og et anvendelsessynspunkt, f.eks. puffere, fortyndingsmidler og standarder. Særlig foretrukkent er et testsæt til den her omhandlede homogene, kompetitive bindings-immunoanalyse indeholdende 35 (a) et antistof til den iodthyronin, der skal bestemmes, (b) et mærket iodthyronin-konjugat, der har en detekterbar
DK 160335 B
9
O
egenskab, som ændres ved binding af antistoffet, og (c) en her omhandlet forbindelse som et TBP-blokerende middel. Den specifikke mærkning, der anvendes, vil afhænge af den benyttede teknik, jfr. ovenfor. Foretrukkent er endvidere et 5 testmateriale indeholdende en reagenssammensætning omfattende et iodthyronin-antistof, et mærket iodthyronin-konju-gat, der har en detekterbar egenskab, som ændres ved binding til antistoffet, og en her omhandlet forbindelse som et TBP-blokerende middel, samt et fast bærermateriale, der er 10 inkorporeret med reagenssammensætningen. Nogle af de forskellige former for et sådant testmateriale er beskrevet i US patentansøgning nr. 202.378 af 30. oktober 1980, hvortil der henvises, jfr. den tilsvarende publikation i EP-ansøg-ning nr. 51.213.
15 Opfindelsen skal i det følgende illustreres nærmere i en række eksempler.
Eksempler.
I. Dissociation af thyroxin fra humane serumproteiner med HMS.
i 20 Med radioaktivt iod mærket thyroxin ( I-thyroxm fra New England Nuclear, Boston, MA, USA) ækvilibreres med 3,5 ml normalt humant serum i 48 timer ved 4°C. Aliquoter af dette serum (50 ^μΐ) sættes til 450 pi 0,1 M natriumphosphat (pH=6,0) indeholdende forskellige koncentrationer af HMS 25 til opnåelse af de slutkoncentrationer, der er angivet i tabel I. Efter 5 eller 30 minutters inkubering ved stuetemperatur sættes der en 500 yul aliquot til en Sephadeji®-kolonne fra et Seralute®-thyroxin-analysesæt (Miles Laboratories, Inc. Ames Division, Elkhart, IN, USA), der er blevet 30 ækvilibreret med 0,1 M natriumphosphat (pH=6,0). Den totale radioaktivitet, der påføres kolonnerne, måles, og det udissocierede materiale vaskes gennem kolonnen. Kolonnerne tælles til bestemmelse af den procentdel thyroxin, der er dissocieret fra serumproteinerne.
35 10
DK 160335 B
o
Tabel I
HMS-koncen- Procent dissocieret Procent dissocieret trationj på 5 minutter på 30 minutter millimolær (mM)_ _ _ 50 30 31 1 65 73 2 74 84 4 91 94 6 93 95 10 II. Virkning af pH-værdi på dissociationen af iodthyronin fra serumproteiner med BMS._
Der udføres bestemmelser i 3 ml polystyren-reagens-rør in duplo. Der fremstilles en opløsning (betegnet "MIX") 15 indeholdende 27 ml 0,1 M natriumphosphat ved den angivne pH-værdi, 73 ml 21%'s polyethylenglycol, 1,0 mM HMS og 100 mikrogram (pg) (40 ^il) I-125-thyroxin for hver 100 ml. Analyseopløsningerne fyldes op ved tilsætning af 50 yul af en serumprøve, 0,1 ml anti(thyroxin)-antiserum fortyndet i 20 0,1 M natriumphosphat (ved den givne pH-værdi) og 1,0 ml af MIX-opløsningen. Der udføres analyser af maksimal binding af mærkning og ikke-specifik binding. Resultaterne er som følger:
Tabel II.
25 pH % Dissocieret 6.0 73 6.5 73 7.0 69 7.5 72 30
De angivne data viser, at pH-værdien praktisk taget ikke har nogen virkning på effektiviteten af dissociation i området fra 6,0 til 7,5.
35 11
DK 160335 B
o III. Virkning af HMS på aktiveringen af apo(glucoseoxidase) _med et FAD-mærket thyroxin-konj ugat.
Aktiveringen af apoglucoseoxidase tilvejebringes med forskellige koncentrationer af HMS og udføres ved 37°C.
5 Prøver indeholdende 50 mM natriumphosphat, pH=6,5, 200 mM glucose, 2,0 mM natriumdichlorhydroxybenzensulfonat (DHSA), 25 μg peroxidase pr. ml, forskellige koncentrationer af HMS og en slutkoncentration på 2,5 mM af et FAD-thyroxin--konjugat (se USA-patentskrift nr. 4.213.893) bestemmes ved 10 tilsætning af apo(glucoseoxidase), 4-aminoantipyrin og anti(glucoseoxidase) ved slutkoncentrationer på henholdsvis 125 nM, 400 ^aM og 8 yul/ml. Absorbansen ved 520 nm bestemmes efter en inkubering på 5 minutter. De opnåede data er i tabel III angivet som en procentdel af den absorbans, der 15 måles, når der ikke er HMS til stede.
Tabel III
HMS (mM) % Aktivitet 0 100 20 0,05 100 0,10 100 0,50 99 1.00 97 5.00 86 25 10,00 72 IV. Anvendelsen af HMS i apoenzym-reaktiverings-immunoana- lysesystemet (ARIS)' for serum-thyroxin._
En ARIS-procedure, jfr. US patentskrift nr.
30 4.238.565, udføres på følgende måde. Der frembringes stan dardkurver for serum-thyroxin under anvendelse af et Ames/Gilford-OPTIMATE®-instrumentsystem (Miles Laboratories, Inc. Elkhart, IN, USA) med en automatiseret sekventiel tilsætningsprocedure. (Serum og antiserum sættes til reaktions-35 beholderen, efterfulgt af 18 minutters forinkubering. FAD--konjugatet og apoenzym tilsættes til initiering af bestem- »* 12
DK 160335 B
O
melsen. Efter 5 minutters inkubering ved 37°C noteres absorbansen ved 520 nm). Slutkoncentrationen for de reagenser* der anvendes ved analysen, er 50 mM natriumphos-phat, pH=6,5, 2 mM dichlorhydroxybenzensulfonat (DNSA), 5 25 ug peroxidase pr. ml, 200 mM glucose, 2 mM HMS, 50 yul serumprøve pr. ml, 4 pi anti(thyroxin)-antiserum, 10 ^ul anti(glucoseoxidase)-antiserum, 2,5 nM T^-FAD-konjugat, 50 nM apoglucoseoxidase og 320 nM 4-aminoantipyrin. Serumstandarderne fremstilles ved tilsætning af thyroxin til 10 T4,T 3~frit humant serum (AMF Biological and Diagnostic Products, Sequin, TX, USA) til opnåelse af den ønskede totalkoncentration. Resultaterne er som følger:
Tabel IV.
15 Thyroxin-standard Absorbans (Mg/1)_ ' -.......
0 0,239 20 0,278 40 0,315 20 80 0,406 120 0,529 200 0,821
Med HMS som iodthyronin-dissocieringsmidlet kan 25 der iagttages en korrelation mellem den iagttagne absorbans ved 520 nm og koncentrationerne af thyroxin i serum, når man anvender det homogene apoenzym-reaktiverings-immu-noanalysesystem.
30 35

Claims (10)

1. Testsæt til homogen immunoanalysebestemmelse af en iodthyronin i en biologisk væske, kendetegnet ved, at det omfatter 5 (1) et antistof til iodthyroninen, (2) et mærket iodthyronin-konjugat omfattende en mærkning, der giver et detekterbart respons, som er måleligt forskelligt, når konjugatet er bundet til antistoffet, og når det ikke er således bundet, og 10 (3) et thyroxin-bindende protein-blokerende middel bestående af 2-hydroxy-4-methoxybenzophenon-5-sulfonsyre eller et salt deraf og eventuelt andre thyroxin-bindende protein-blokerende midler.
2. Testsæt ifølge krav 1, kendetegnet 15 ved, at mærkningen er en deltager i en enzym-katalyseret reaktion.
3. Testsæt ifølge krav 2, kendetegnet ved, at mærkningen er et enzymsubstrat, et coenzym, en enzyminhibitor, en enzym-prosthetisk gruppe eller et 20 enzym.
4. Testsæt ifølge krav 3, kendetegnet ved, at mærkningen er en enzym-prosthetisk gruppe, der kombineres med et apoenzym til dannelse af et aktivt enzym, hvis aktivitet måles ved hjælp af dets evne til 25 at katalysere en reaktion, hvorved der dannes et detekterbart produkt, idet apoenzymets evne til kombination med den prosthetiske gruppe i det mærkede konjugat ændres ved binding af antistoffet til det mærkede konjugat.
5. Testmateriale til immunoanalysebestemmelse af 30 en iodthyronin i en biologisk væske, kendetegnet ved, at det omfatter 2"hydroxy-4-methoxybenzophenon-5--sulfonsyre eller et salt deraf som et blokerende middel for bindingen af iodthyroninen til thyroxin-bindende protein, inkorporeret sammen med et fast bærestof.
6. Testmateriale ifølge krav 5, kendeteg net ved, at reagenssystemet omfatter: (1) et antistof til iodthyroninen, (2) et mærket iodthyronin-konjugat, der omfatter en mærkning, DK 160335 B O som giver et detekterbart respons, der er måleligt forskelligt, når konjugatet er bundet til antistoffet, og når det ikke er således bundet, og (3) blokeringsmiddelforbindelsen eller et salt deraf.
7. Testmateriale ifølge krav 6, kendeteg net ved, at mærkningen er en deltager i en enzym-katalyseret reaktion.
8. Immunkemisk fremgangsmåde til bestemmelse af en iodthyronin i en biologisk væske, kendetegnet 10 ved, at der anvendes 2-hydroxy-4-methoxybenzophenon-5- -sulfonsyre eller et salt deraf som et blokerende middel for bindingen af iodthyroninen til thyroxin-bindende protein i den biologiske væske.
9. Fremgangsmåde ifølge krav 8, kendete g-15 net ved, at den er en kompetitiv bindings-immunoanalyse- metode, ved hvilken en prøve af den biologiske væske kombineres med et antistof til iodthyroninen, en mærket form af iodthyroninen og et blokerende middel for bindingen af iodthyroninen til thyroxin-bindende protein i 20 prøven, og ved hvilken den anden af mærket iodthyronin, der bliver bundet til antistoffet, sammenlignet med den del, der forbliver ubundet, er relateret til koncentrationen af iodthyroninen i prøven.
10. Reagenssystem til immunoanalysebestemmelse af 25 en iodthyronin i en biologisk væske, kendetegnet ved, at det omfatter 2-hydroxy-4-methoxybenzophenon-5--sulfonsyre eller et salt deraf som et blokerende middel for bindingen af iodthyroninen til thyroxin-bindende protein i den biologiske væske. 30 35
DK328584A 1983-07-05 1984-07-04 Immunkemisk fremgangsmaade til bestemmelser af en iodthyronin i en biologisk vaeske med 2-hydroxy-4-methoxybenzophenon-5-sulfonsyre eller et salt deraf som tbp-blokeringsmiddel, samt reagenssystem, testsaet og testmateriale til anvendelse ved metoden DK160335C (da)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US51081483 1983-07-05
US06/510,814 US4622293A (en) 1983-07-05 1983-07-05 Iodothyronine immunoassays employing HMS as TBP blocking agent

Publications (4)

Publication Number Publication Date
DK328584D0 DK328584D0 (da) 1984-07-04
DK328584A DK328584A (da) 1985-01-06
DK160335B true DK160335B (da) 1991-02-25
DK160335C DK160335C (da) 1991-07-29

Family

ID=24032316

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DK328584A DK160335C (da) 1983-07-05 1984-07-04 Immunkemisk fremgangsmaade til bestemmelser af en iodthyronin i en biologisk vaeske med 2-hydroxy-4-methoxybenzophenon-5-sulfonsyre eller et salt deraf som tbp-blokeringsmiddel, samt reagenssystem, testsaet og testmateriale til anvendelse ved metoden

Country Status (12)

Country Link
US (1) US4622293A (da)
EP (1) EP0133464B1 (da)
JP (1) JPS6038654A (da)
AT (1) ATE24971T1 (da)
AU (1) AU545412B2 (da)
CA (1) CA1225024A (da)
DE (1) DE3462072D1 (da)
DK (1) DK160335C (da)
ES (1) ES8604694A1 (da)
IE (1) IE55677B1 (da)
IL (1) IL71435A (da)
NO (1) NO163586C (da)

Families Citing this family (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0165669A1 (en) * 1984-05-04 1985-12-27 Corning Glass Works Improved method of measuring free ligand
ATE169410T1 (de) * 1985-10-04 1998-08-15 Diagnostic Products Corp Verfahren zum messen von freitestosteronen in biologischen flüssigkeiten
US5102786A (en) * 1987-05-21 1992-04-07 Pb Diagnostic Systems, Inc. Biological diagnostic assay system
EP0312897A1 (en) * 1987-10-21 1989-04-26 Abbott Laboratories Thyroid hormone assay and reagent system employing furosemide
US5256575A (en) * 1988-12-22 1993-10-26 Syntex (U.S.A.) Inc. Geminal diphenyl derivatives and their use in immunoassays
US5063165A (en) * 1988-12-22 1991-11-05 Syntex (U.S.A.) Inc. Geminal diphenyl derivatives and their use in immunoassays
US5210017A (en) * 1990-11-19 1993-05-11 Genentech, Inc. Ligand-mediated immunofunctional hormone binding protein assay method
US5593844A (en) * 1990-11-19 1997-01-14 Genentech, Inc. Ligand-mediated immunofunctional hormone binding protein assay method
US6326154B1 (en) 1990-11-19 2001-12-04 Genentech, Inc. Ligand-mediated immunofunctional hormone binding protein assay method
DE4103167A1 (de) * 1991-02-02 1992-08-06 Boehringer Mannheim Gmbh Diphenylmethanderivate, verfahren zu deren herstellung und ihre verwendung zur verdraengung von jodthyroninen von diesen bindenden proteinen
US7141436B2 (en) * 1999-11-03 2006-11-28 Science And Technology Corp. Immunoassay and reagents and kits for performing the same
US20070243632A1 (en) 2003-07-08 2007-10-18 Coller Barry S Methods for measuring platelet reactivity of patients that have received drug eluting stents
EP1641492B1 (en) 2003-07-08 2011-12-14 Accumetrics, Inc. Controlled platelet activation to monitor therapy of adp antagonists
JP2008521007A (ja) * 2004-11-17 2008-06-19 バイオヴェリス コーポレイション 電気化学発光測定法
US20060275841A1 (en) * 2004-12-20 2006-12-07 Martin Blankfard Assay method and apparatus with reduced sample matrix effects

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3928553A (en) * 1972-03-23 1975-12-23 Univ New York Radioimmunoassay method for triiodothyronine and thyroxine
US3911096A (en) * 1972-06-23 1975-10-07 Professional Staff Ass Of The Radioimmunoassay for measurement of thyroxine (T{HD 4{B ) and triiodothyonine (T{HD 3{B ) in blood serum
US4111656A (en) * 1975-06-26 1978-09-05 Mallinckrodt, Inc. Radioimmunoassay methods for the determination of l-triiodothyronine and thyroxine
CA1183450A (en) * 1980-10-30 1985-03-05 Alfred C. Greenquist Homogeneous specific binding assay device and method
US4468469A (en) * 1981-11-04 1984-08-28 Miles Laboratories, Inc. Substituted phenylacetic acids and salts as TBP blocking agents in iodothyronine immunoassays

Also Published As

Publication number Publication date
DE3462072D1 (en) 1987-02-19
IL71435A0 (en) 1984-07-31
EP0133464B1 (en) 1987-01-14
IL71435A (en) 1987-10-20
DK160335C (da) 1991-07-29
DK328584D0 (da) 1984-07-04
NO163586C (no) 1990-06-20
DK328584A (da) 1985-01-06
AU2677684A (en) 1985-01-10
ES534023A0 (es) 1986-02-01
US4622293A (en) 1986-11-11
CA1225024A (en) 1987-08-04
IE841702L (en) 1985-01-05
NO842519L (no) 1985-01-07
EP0133464A1 (en) 1985-02-27
ES8604694A1 (es) 1986-02-01
IE55677B1 (en) 1990-12-19
AU545412B2 (en) 1985-07-11
NO163586B (no) 1990-03-12
JPS6038654A (ja) 1985-02-28
ATE24971T1 (de) 1987-01-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP4130958B2 (ja) ビタミンｄアッセイ
JP3611579B2 (ja) 抗体検出用化学発光イムノアッセイ
Viitala et al. Serum IgA, IgG, and IgM antibodies directed against acetaldehyde‐derived epitopes: relationship to liver disease severity and alcohol consumption
DK160335B (da) Immunkemisk fremgangsmaade til bestemmelser af en iodthyronin i en biologisk vaeske med 2-hydroxy-4-methoxybenzophenon-5-sulfonsyre eller et salt deraf som tbp-blokeringsmiddel, samt reagenssystem, testsaet og testmateriale til anvendelse ved metoden
JP2599192B2 (ja) 結合アッセイ装置
JPS58213253A (ja) 酵素／免疫螢光検定法
EP0078477B1 (en) Fenclofenac as tbp blocking agent in iodothyronine immunoassays
JP3447010B2 (ja) 抗Ｆｄ抗体を用いたリウマチ因子干渉の排除
JP3436444B2 (ja) 酸化ｈｄｌの測定法及びキット
EP0121303B1 (en) Diagnostic agent, a process for its preparation and its use in diagnostic methods
JPH07104348B2 (ja) Ｂ１２酵素イムノアッセイ及びサンプルの予備処理
AU654761B2 (en) Binding protein capture assay
JPS58211662A (ja) 試験試料中の被検体を測定するための均一系結合分析方法および該方法に用いる試薬系
EP0166583A2 (en) Compositions for enzyme immunoassay of prostaglandins
Kuemmerle et al. Automated assay of vitamin B-12 by the Abbott IMx® analyzer
US6383766B1 (en) Reduced cortisol conjugates
JP3873576B2 (ja) 抗原結合固相の製造方法
US5360717A (en) Agent, for immunochemical assays, containing amine oxides
JPH06148193A (ja) 抗リン脂質抗体結合用担体及び該担体を用いた免疫学的測定法
JPH0854392A (ja) 分離工程のない特異的結合アッセイ、試験キットおよび乾式分析要素
JP2004037209A (ja) アロマターゼ活性の測定方法、並びにアロマターゼの活性阻害の評価方法、およびそれらの方法のための組成物
JPS62233761A (ja) カテコ−ルアミン酸性代謝物の酵素標識体
JP3712963B2 (ja) ペルオキシダーゼ標識抗体を含有する水溶液
JP2003083976A (ja) ＨＢｓ抗原測定試薬
JP2985224B2 (ja) アルカリ性フォスファターゼの測定方法

Legal Events

Date Code Title Description
PBP Patent lapsed