DK154654B - Analogifremgangsmaade til fremstilling af immunmodulerende 2-oe2-acylamino-2-desoxy-(d)-glucosyl-3-oaa-alkancarboxylsyrepeptid-derivater eller farmaceutisk acceptable salte deraf - Google Patents

Description

Opfindelsen angår en analogifremgangsmåde til fremstillingaf hidtil ukendte, immunmodulerende 2-[ 2-acylamino-2-desoxy-(D)-glucosyl-3-0 ]-alkancarboxylsyrepeptid-derivater med denalmene formel

hvori X betyder en carbonylgruppe, R betyder en alkyl-gruppe med 2-17 carbonatomer eller en phenylgruppe, someventuelt er substitueret med alkyl med højst 7 carbon¬atomer, Ri betyder hydrogen, alkyl med højst 7 carbon¬atomer eller benzyl, R£ betyder hydrogen eller alkyl medhøjst 7 carbonatomer, R4 og Rg betyder hydrogen elleralkanoyl med 2-18 carbonatomer, R7 betyder hydrogen, alkylmed højst 7 carbonatomer, hydroxymethyl eller phenyl, Rgbetyder carboxyl, carbamoyl, N-Ci_7-alkyl-carbamoyl,N-benzylcarbamoyl, N-(carbamoyl-methyl)-carbamoyl eller

Ci_7-alkoxycarbonyl, og Rg betyder carboxyl, carbamoyl,N-Ci_7-alkylcarbamoyl eller Ci_7-alkoxycarbonyl, idet dogalkylgruppen R indeholder mere end et carbonatom, når R2betyder methyl, eller når R2 betyder hydrogen, og Rg og Rghver for sig betyder en carboxylgruppe, eller farmaceutiskacceptable salte af forbindelser med frie carboxylgrupper.

Fremgangsmåden ifølge opfindelsen er ejendommelig ved, atman a) omsætter en forbindelse med formlen

hvori X og R har de ovenfor angivne betydninger, og Ri°, R40og Rg° betyder de ovenfor anførte grupper R^, R4 og Rq ellerhver for sig en let fraspaltelig beskyttelsesgruppe, med enforbindelse med formlen

hvori Z betyder en reaktionsdygtigt forestret hydroxy-gruppe, R2 har den ovenfor angivne betydning, og R70, Rø0 ogRg° har de ovenfor for grupperne R7, Rq og Rg anførtebetydninger, idet dog i disse grupper forekommende carboxyl-og frie hydroxygrupper er beskyttede med let fraspalteligebeskyttelsesgrupper, og fraspalter eventuelt tilstedeværendebeskyttelsesgrupper eller b) kondenserer en forbindelse med formlen \

hvori X, R og R2 har de ovenfor angivne betydninger, og Ri°,R40 og Rg° har de for grupperne R^, R4 og Rg anførtebetydninger eller hver for sig betyder en let fraspalteligbeskyttelsesgruppe eller et reaktionsdygtigt syrederivatderaf, med en forbindelse med formlen

hvori R70, R8° og Rg° har de ovenfor for gruppernehenholdsvis R7, Rg og Rg anførte betydninger, idet dog idisse grupper tilstedeværende carboxyl- og, om ønsket, friehydroxygrupper er beskyttede med let fraspalteligebeskyttelsesgrupper, og fraspalter eventuelt tilstede¬værende beskyttelsesgrupper eller c) kondenserer en forbindelse med formlen

hvori Ri, Ri°, R2, R40, Rg° og R70 har de ovenfor angivnebetydninger, med en forbindelse med formlen

hvori Rg° og Rg° har de ovenfor angivne betydninger, idetdog i grupperne R70, Rg° og Rg° tilstedeværende carboxyl-og, om ønsket, frie hydroxylgrupper er beskyttede med letfraspaltelige beskyttelsesgrupper, og fraspalter eventuelttilstedeværende beskyttelsesgrupper eller d) i en forbindelse med formlen

hvori R, R2, R70, R8° og Rg° har de ovenfor angivne betyd¬ninger, og R5 betyder en alkyliden- eller cycloalkyliden-gruppe, under sure betingelser opspalter oxazolin- ogdioxolanringen, og fraspalter eventuelt tilstedeværendebeskyttelsesgrupper eller e) i en forbindelse med formlen

hvori substituenterne har de ovenfor angivne betydninger, idet dog tilstedeværende funktionelle grupper, om ønsket, erbeskyttede med let fraspaltelige beskyttelsesgrupper,acylerer aminogruppen med et acyleringsmiddel, som indførergruppen R-X-, og fraspalter eventuelt tilstedeværendebeskyttelsesgrupper eller f) i en forbindelse med formlen

hvori Ri°, R40 og Rg° har de ovenfor for henholdsvis Rj_, R4og Rg anførte betydninger eller betyder en let fraspalteligbeskyttelsesgruppe, R70, Rg° og Rg° har de ovenfor forhenholdsvis R7, Rg og Rg anførte betydninger, idet i dissegrupper forekommende carboxyl- og hydroxygrupper kan værebeskyttede med let fraspaltelige beskyttelsesgrupper, og X,R og R2 har de ovenfor angivne betydninger, idet der dog ien forbindelse med formlen X forekommer mindst én letfraspaltelig beskyttelsesgruppe, fraspalter de forekommendebeskyttelsesgrupper og, om ønsket, overfører en ved en af fremgangsmåderne a)til f) dannet forbindelse med formlen I med mindst éncarboxylgruppe til et farmaceutisk acceptabelt salt deraf.

N-Acetyl-muramyl-L-alanyl-D-isoglutamin er den mindste strukturenhed, som har de for bakteriecellevægge karakteri- stiske immunadjuvans-egenskaber, jf. S. Kotani et al., BikenJ. 1975, 18(2), 105-111 (Chemical Abstr. 83 (1975), 161981z). Alle de i ovennævnte litteratursted beskrevne forsøg påstrukturel omdannelse af denne strukturenhed, som findes ibakteriecellevæggene, fører til forbindelser med ingen ellerkun svag virkning.

Det har overraskende vist sig, at de omhandlede syntetiskeforbindelser med den ovenfor anførte formel I og deressyreadditionssalte har fremragende adjuvansegenskaber iforening med formindskede uønskede bivirkninger.

Den ovenfor omtalte kendte forbindelse, N-acetyl-muramyl-L-alanyl-D-isoglutamin, betegnes i nærværende beskrivelse som2-acetamido-3-0-<D-l-[L-l-(D-l-carbamoyl-3-carboxypropyl)-carbamoyl-ethyl ]-carbamoyl-ethyl>-2-desoxy-D-glucose og kanogså betegnes som 2-(2-acetamido-2-desoxy-D-glucos-3-0-yl)-D-propionyl-L-alanyl-D-isoglutamin.

Denne kendte forbindelses egenskaber er i DE-offentliggørel-sesskrift nr. 2.718.010 sammenlignet med forbindelser, somfor en dels vedkommende også fremstilles ved fremgangsmådenifølge den foreliggende opfindelse.

I tabel I, eksempel 16, i ovennævnte tyske offentliggørel¬sesskrift svarer forbindelse 1 på side 205 til den ovenforomtalte kendte forbindelse, der anvendes som sammen¬ligningsforbindelse, forbindelse 1 på side 206 i nævnteDE-offentliggørelsesskrift til slutproduktet fremstillet idet efterfølgende eksempel 5, forbindelse 2 på side 206svarer til slutproduktet fremstillet i det efterfølgendeeksempel 2, forbindelse 3 på side 206 svarer tilslutproduktet fremstillet i det efterfølgende eksempel 37,forbindelse 4 på side 206 svarer til slutproduktetfremstillet i det efterfølgende eksempel 39, forbindelse 9på side 206 svarer til slutproduktet fremstillet i det efterfølgende eksempel 7, og forbindelse 1 på side 207svarer til slutproduktet fremstillet i det efterfølgendeeksempel 4.

Det fremgår af tabel I i nævnte DE-offentliggørelsesskrift,at alle de ifølge ovennævnte eksempler fremstillede forbin¬delser har en overraskende god virkning i forhold til denkendte sammenligningsforbindelse. Denne overlegenhed ved deomhandlede forbindelser er især udtalt ved en sammenligningaf de uønskede bivirkninger. Det fremgår eksempelvis afeksempel 17B, side 210 og 211 i ovennævnte DE-offentliggø-relsesskrift, at katte, som indgives den kendte sammenlig¬ningsforbindelse i en dosis på 1500 μg, reagerer medbrækninger, diaré, depression, appetitmangel og høj feber,hvorimod indgivelse af forbindelsen fremstillet i detefterfølgende eksempel 2 i samme dosis ikke fremkalder nogensom helst forstyrrelse af kattenes velbefindende.

De omhandlede forbindelser adskiller sig således såvelstrukturmæssigt som også med deres samlede virkning fra dekendte forbindelser. Forbindelserne med formlen X, hvori R2betyder hydrogen, er som følge af det manglende asymmetri-oentrum tilmed meget lettere at fremstille end analogeforbindelser, hvori R2 betyder lavalkyl.

Alkyl er f.eks. isopropyl, ligekædet eller forgrenet, ivilkårlig stilling bundet butyl, pentyl, hexyl eller heptylog fremfor alt methyl, ethyl eller n-propyl.

Alkanoyl med 2-18 carbonatomer er f.eks. acetyl ellerpropionyl.

Alkyl som substituent i de ovennævnte grupper er i førsterække methyl eller ethyl, men også n-propyl, isopropyl ellerligekædet eller forgrenet butyl.

Alkoxy er især methoxy eller ethoxy, endvidere n-propoxy,isopropoxy, n-butoxy eller iso-butoxy.

N-Alkoxycarbonyl er især methoxycarbonyl ellerethoxycarbonyl, men også n-propoxycarbonyl eller isoprop-oxycarbonyl. Blandt carbamoylgrupperne foretrækkes isærcarbamoylgruppen selv.

I de ovennævnte forbindelser, hvori R2 betyder en alkylgruppe, er den med oxygenatomet i 3-stillingen iglucosamingruppen forbundne R2~eddikesyreamidgruppe optiskaktiv, dvs. den foreligger i D-form. Når R7 ikke erhydrogen, foreligger Ry-aminoeddikesyren i L-form.

Forbindelserne med formlen I er alt efter arten af deressubstituenter neutrale eller sure forbindelser. Såfremt derforekommer sure grupper, danner de salte med baser, såsomammoniumsalte eller salte med alkali- ellerjordalkalimetaller, f.eks. natrium, kalium, calcium ellermagnesium.

De omhandlede forbindelser fremviser værdifuldefarmakologiske egenskaber, især en udpræget immunpotenserende virkning. Dette kan vises ved hjælp af dennedenfor beskrevne forsøgsrække.

1. Potensering af den cellulære immunitet in vivo:

Forøgelse af sentype-overfølsomhed overfor ovalbuminhos marsvin.

Pirbright marsvin immuniseres på dag 0 med 10 mg ovalbumin ifuldstændig Freunds adjuvans ved injektion af 0,1 ml af enantigen-adjuvansblanding i hver af de to bagpoter. 4 ugersenere udløses hudreaktioner ved intrakutan injektion af 100μg ovalbumin i 0,1 ml pufret fysiologisk saltopløsning, ogreaktionerne kvantificeres på grundlag af det 24 timer senere ved hjælp af erytemfladen og hudtykkelsesforøgelsenberegnede reaktionsvolumen. Den efter 24 timer (sentype-reaktion) iagttagne antigenspecifikke forøgelse af reak¬tionsvolumenet gælder som et mål for celleformidletimmunitet. Ovalbumin er et svagt immunogen til alene eller ivand-olie-emulsion med ufuldstændig Freunds adjuvans (10dele ovalbuminopløsning i 0,9% NaCl blandet med 8,5 dele"Bayol F" og 1,5 dele "Arlacel A") at inducere ensentypereaktion, men må for en effektiv immuniseringappliceres i fuldstændig adjuvans, hvortil der sættesmycobakterier (5 mg dræbte og lyofiliserede Mycobacteriumbutyricum pr. 10 ml "Bayol F"/"Arlacel A"). Til eftervisningaf den immunpotenserende virkning af prøvestoffer kan dissenu i stedet for mycobakterierne i doser på 10 til 100 /*gblandes i antigen-olie-blandingen.

De omhandlede glucosaminpeptider er i stand til atefterligne virkningen af mycobakterierne i den beskrevneforsøgsrække og til kvantitativt at overgå disse.

En signifikant potensering af sentypeaktiviteten overforovalbumin kan også opnås ved, at forbindelser af denbeskrevne art ikke inkorporeres i antigen-olie-blandingen,men derimod indgives subkutant i doser på 10 til 100 /*g pr.dyr i løbet af nogle dage efter immuniseringen (f.eks. pådag 0, 1, 2, 5, 6 og 7) i natriumchloridopløsning.

Dermed vises det, at forbindelser af den beskrevne artformår at forøge den cellulære immunitet betydeligt og detsåvel i blanding med antigenet selv (adjuvanseffekt isnævrere forstand) som ved en med hensyn til tid og sted fraantigeninjektionen adskilt tilførsel (systemisk immunpotensering).

2. Potensering af den humorale immunitet in vivo:

Forøgelse af antistofproduktionen overfor bovint serum¬albumin (BSA) hos mus.

NMRI mus immuniseres ved intraperitoneal (i.p.) injektion af10 μg præcipitatfrit BSA på dag 0, 9, 15 og 29 dage senereudtages serumprøver, og deres indhold af anti-BSA-antistofundersøges ved passiv hæmaglutinationsteknik. X den anvendtedosis er opløseligt BSA subimmunogent for dyrene, sommodtager det, dvs. at det ikke eller kun i ringe grad formårat udløse produktion af antistof. Supplerende behandling afmusene med visse immunpotenserende stoffer før eller efterantigenindgivelsen fører til en stigning af antistoftitereni serumet. Behandlingens virkning udtrykkes ved den opnåedescoreværdi, dvs. ved summen af log 2 titerforskellene på detre blødningsdage.

De omhandlede forbindelser er i stand til vedintraperitoneal eller subkutan (s.c.) applikation af 100-300mg/kg/dyr på fem på hinanden følgende dage (dag 0 til 4)efter immunisering med BSA at forøge antistofproduktionenoverfor BSA signifikant.

Den immunstimulerende virkning af de nævnte forbindelser eri modsætning til de andre bakterielle immunoleptika (f.eks.LPS fra Escherichia coli) antigenafhængig. Injektion af denye forbindelser har kun hos BSA-immuniserede, men ikke hosikke-immuniserede mus, en forhøjelse af antirBSA-titeren tilfølge. Det er værd at bemærke, at subkutan indgivelse af denævnte forbindelser er lige så effektiv som intraperitonealapplikation, dvs. at den iagttagne immunpoteserende virkninger systemisk og ikke afhænger af, at stimulansen indgives adsamme vej som antigenet eller behøver at blandes medantigenet, som det er tilfældet ved klassiske adjuvanser.

Ved de skildrede forsøg vises det, at forbindelser af denbeskrevne art også formår at forøge den humorale immunitetspecifikt, at de forbedrer den immunologiske sensibilitet,og at deres immunpotenserende virkninger beror på ensystemisk aktivering af immunapparatet.

3. Potensering af den humorale immunitet in vitro:T-celle-substituerende virkning ved antistofreaktionenhos musemiltceller overfor fåreerythrocyter (SE).

Til induktion af en antistofreaktion er i mange tilfælde defra thymus stammende lymfocyter (T-celler) nødvendige. Disseceller koopererer med forløberne for antistofdannendelymfocyter (B-celler) og hjælper dem til, ved stimuleringmed såkaldte T-afhængige antigener, at reagere medproliferation, differentiering og antistofsyntese. Miltcel-lesuspensionen fra kongenital athymiske nu/nu mus indeholderingen funktionelle T-celler og formår f.eks. in vitro undertilstedeværelse af SE ikke at danne anti-SE-antistoffer. Deomhandlede forbindelser er overraskende nok i stand tilfunktionelt at erstatte T-celler i sådanne kulturer ogmuliggøre en antistofreaktion overfor SE. Tilsætning afdisse stoffer til nu/nu miltcellekulturer under tilstede¬værelse af SE fører indenfor 4 dage til en betydeligforøgelse af antallet af antistofdannende celler.

Undersøgelsesresultaterne viser, at de nævnte forbindelserformår at forøge den humorale antistofdannelse in vitro ogat kompensere for en defekt i T-celle-systemet.

4. Selektiv mitogenitet for B-celler:Proliferationsfremmende virkning i B-lymfocyt-kulturer.

Suspensioner af højberigede B-lymfocyter (lymfeknudecellerfra kongenital athymiske nu/nu mus) samt vidtgående reneumodne og- modne T-lymfocyter (thymusceller ellercortisonresistente, dvs. 48 timer efter en cortisoninjek- tion persisterende thymusceller fra Balb/c-mus) inkuberes itre dage under tilstedeværelse af prøvestofferne. Inkorpo¬rationen af H3-thymidin i lymfocyterne i løbet af de sidste18 timer af kulturperioden gælder som mål for prolifera-tionsaktiviteten.

De omhandlede forbindelser er mitogene for B-lymfocyter(dvs. for forløberne for de antistofdannende celler), menikke for T-lymfocyter. De er dermed i stand til at stimulereproliferationen af lymfocyter, som deltager i den humoraleimmunreaktion.

5. Forene1ighed

Skønt forbindelser af den beskrevne art udfolder derespotenserende virkning på marsvin eksempelvis allerede efteren enkeltdosis på 0,05 mg/kg subkutant, på mus efterapplikaiton af 5 x 10 mg/kg subkutant, iagttages der vedapplikation af 5 x 300 mg/kg interperitonealt på mus helleringen toksiske virkninger. De nævnte stoffer råder derforover en udmærket terapeutisk bredde.

De omhandlede forbindelser kan på den ene side ved blandingmed et antigen forhøje immunogeniteten af dette, på denanden side ved systemisk applikation forøge denimmunologiske reaktivitet af den behandlede organisme.Således er de nævnte stoffer i stand til at fremme såvel dencellulære som den humorale immunitet og at aktivere de forantistofdannelsen ansvarlige lymfocyter.

De nye forbindelser kan dermed som adjuvanser i blanding medvacciner benyttes til at forbedre vaccinationsresultatet ogtil at forbedre den ved humorale antistoffer og/ellercellulær immunitet formidlede infektionsbeskyttelse overforbakterielle, virale eller parasitære sygdomsvækkere.

Sluttelig egner de beskrevne forbindelser sig i blanding medde mest forskelligartede antigener som adjuvanser ved deneksperimentelle og industrielle fremstilling af antisera tilterapi og diagnostik og ved induktion af immunologiksaktiverede lymfocytpopulationer til celleoverførelsesfrem¬gangsmåder .

Desuden kan de nye forbindelser også uden samtidigantigentilførsel benyttes til at fremme allerede undertærskelværdien forløbende immunreaktioner hos mennesker ogdyr. Forbindelserne egner sig følgelig især til stimulationaf legemets eget forsvar, f.eks. ved kroniske og akutteinfektioner eller ved selektive (antigenspecifikke) immuno¬logiske defekter samt ved medfødte, men også ved erhvervedealmene (dvs. ikke antigenspecifikke) immunologiske defekttilstande, som optræder ved alderdom, i løbet afalvorlige primærsygdomme og fremfor alt efter terapi medioniserende stråler eller med immunosuppressivt virkendehormoner. De nævnte stoffer kan følgelig fortrinsvis ogsåindgives i kombination med antiinfektiøse antibiotika,kemoterapeutika eller andre helbredelsesfremgangsmåder forat modvirke immunologiske beskadigelser. Endvidere er deomhandlede forbindelser også egnede til almen profylakse afinfektionssygdomme hos mennesker og dyr.

Særligt foretrukne er forbindelser med formlen X, hvori R2er hydrogen, og de andre grupper har de ovennævntebetydninger, og deres salte.

Især skal fremhæves forbindelser med formlen I, hvori Rbetyder alkyl eller phenyl, R^ er hydrogen eller alkyl, R2er hydrogen eller methyl, R4 og Rg betyder hydrogen, R7 erhydrogen, alkyl eller hydroxymethyl, Rg er carbamoyl, og Rger carboxyl, idet dog alkylgruppen R indeholder mere end 1carbonatom, såfremt R2 betyder methyl, og deres salte.

I første række skal nævnes forbindelser med formlen I, hvori R betyder alkyl eller phenyl, Ri er hydrogen, R2 erhydrogen eller methyl, R4 og R5 er hydrogen, R7 er hydrogen,methyl eller hydroxymethyl, Rg er carbamoyl, og Rg ercarboxyl, idet dog alkylgruppen R indeholder mere end 1carbonatom, såfremt R2 betyder methyl, og deres salte.

Ved fremgangsmåde b) gennemføres kondensationen f.eks. påden måde, at man omsætter forbindelsen III i form af denaktiverede carboxylsyre med aminoforbindelsen IV, eller atman omsætter syren III med forbindelsen IV, hvis aminogruppeforeligger i aktiveret form. Den aktiverede carboxylgruppekan eksempel være et syreanhydrid, fortrinsvis et blandetsyreanhydrid, såsom et syreazid, et syreamid, såsom etimidazolid, isoxazolid eller en aktiveret ester. Somaktiverede estere skal især nævnes cyanmethylester,carboxymethylester, p-nitrophenylthioester, p-nitrophenyl-ester, 2,4,5-trichlorphenylester, pentachlorphenylester, N-hydroxysuccinimidester, N-hydroxyphthalimidester, 8-hydroxyquinolinester, 2-hydroxy-l,2-dihydro-l-carbo- ethoxy-quinolinester, N-hydroxypiperidinester eller enolestere, der vindes med N-ethyl-5-phenyl-isoxazolium-3'-sulfonat. Aktiverede estere kan eventuelt også fås med etcarbodiimid under tilsætning af N-hydroxysuccinimid eller enusubstitueret eller f.eks. med halogen, methyl eller methoxysubstitueret 1-hydroxy-benzotriazol, 3-hydroxy- 4-oxo-3,4-dihydro-benzo-[ d ]-l,2,3-triazin.

Aminogruppen er eksempelvis aktiveret ved reaktion med etphosphit.

Blandt fremgangsmåderne til reaktion med aktiverede estereskal især omtales sådanne med N-ethyl-5-phenyl-isoxazolium-3'-sulfonat (Woodward reagens K) eller 2-ethoxy-l,2-dihydro- 1-carboethoxy-quinolin eller carbodiimid.

Let fraspaltelige beskyttelsesgrupper er sådanne, som erkendt fra peptid- eller sukkerkemien. For carboxylgrupperskal iasr nævnes tert-butyl, benzyl eller benzhydryl og forhydroxygrupper iær acylgrupper, f.eks. lavalkanoylgrupper,såsom acetyl, aroylgrupper, såsom benzoyl, og fremfor altgrupper, der kan afledes af kulsyre, såsom benzyloxycarbonyleller lavalkoxycarbonyl, eller alkyl, især tert-butyl,eventuelt med nitro, lavalkoxy eller halogen substitueretbenzyl eler tetrahydropyranyl eller eventuelt substitueredealkylidengrupper, der forbinder oxygenatomerne i 4- og6-stillingerne. Sådanne alkylidengrupper er især enlavalkyliden-, i første række ethyliden-, isopropyliden-eller propylidengruppe eller også en eventuelt substitueret,fortrinsvis i p-stilling substitueret, benzylidengruppe.

Disse beskyttelsesgrupper kan fraspaltes på i og for sigkendt måde. Således kan man fjerne dem hydrogenolytisk,f.eks. med hydrogen under tilstedeværelse af enædelmetalkatalysator, såsom palladium- eller platinka¬talysator, eller ved sur hydrolyse.

De anvendte udgangsstoffer er kendte eller kan fremstillespå i og for sig kendt måde. Således kan man fåforbindelserne med formlen III f.eks. ved omsætning af dettilsvarende i 3-stillingen usubstituerede sukker med enhalogen-R2-eddikesyre, hvor R2 har den ovennævnte betydning,og deres estere, under tilstedeværelse af en stærk base.Deri er halogen fortrinsvis brom eller i første række chlor.

Ved fremgangsmåde c) gennemføres kondensationen f.eks. påden måde, at man omsætter forbindelsen V i form af denaktiverede carboxylsyre med aminoforbindelsen VI, eller atman omsætter syren V med forbindelsen VI, hvis aminogruppeforeligger i aktiveret form. Den aktiverede carboxylgruppekan eksempelvis være et syreanhydrid, fortrinsvis et blan¬det syreanhydrid, et syreamid eller en aktiveret ester. Som sådanne kommer især de ovennævnte syreanhydrider, amidereller estere på tale. Aminogruppen er eksempelvis aktiveretved reaktion med et phosphit.

Også de letfraspaltelige beskyttelsesgrupper svarer til deallerede ovenfor nævnte. De kan fraspaltes på i og for sigkendt måde, f.eks. hydrogenolytisk, eksempelvis med hydrogenunder tilstedeværelse af en ædelmetalkatalysator, såsompalladium- eller platinkatalysator, eller ved sur hydrolyse.

Udgangsstofferne kan fås på i og for sig kendt måde. Såledeskan man f.eks. på den ovenfor viste måde omsætte tilsvarendei 3-stilling usubstitueret sukker med enhalogen-R2-acetamido-R7°-eddikesyre eller en forbindelse medformlen III med en amino-Ryeddikesyre, hvis carboxylgruppeer beskyttet, og fraspalte beskyttelses- gruppen.

Ved fremgangsmåde a) er en reaktionsdygtigt forestrethydroxylgruppe især en med en stærk uorganisk eller organisksyre forestret hydroxylgruppe, i første række en sådan, somer forestret med hydrogenhalogenider, såsom saltsyre ellerhydrogenbromid eller -iodid.

De letfraspaltelige beskyttelsesgrupper svarer til deallerede ovenfor nævnte. De kan fraspaltes på i og for sigkendt måde, f.eks. hydrogenolytisk, eksempelvis med hydrogenunder tilstedeværelse af en ædelmetalkatalysator, såsompalladium- eller platinkatalysator, eller ved sur hydrolyse.

De anvendte udgangsstoffer er kendte.

Ved fremgangsmåde d) opspaltes oxazolin- og dioxolanringensurt, og eventuelt tilstedeværende beskyttelsesgrupperfraspaltes.

Alkyliden R5 er især lavalkyliden, såsom isopropyliden, og cycloalkyliden R5 er i første række cyclopentyliden ellercyclohexyliden.

Spaltningen gennemføres på i og for sig kendt måde, f.eks.med en sur ionbytter, især sådanne med sulfonsyregrupper,såsom "Amberlite"® IR-120 (en styrenharpiks med stærkt suresulfogrupper) eller "Dowex"® 50 (polystyrensulfonsyrer) eller en stærk uorganisk eller organisk syre, såsomsaltsyre, hydrogenbromidsyre, svovlsyre eller en sulfonsyre,f.eks. methansulfonsyre, eller en eventuelt i den aromatiskering substitueret phenylsulfonsyre, såsom p-toluensulfonsyreeller trifluoreddikesyre. Hvis man arbejder undertilstedeværelse af vand, får man i 1-stilling en frihydroxylgruppe. Hvis man derimod arbejder under tilstede¬værelse af en alkohol med formlen HO-Ri, hvori er eneventuelt substitueret alkylgruppe, får man l-O-R^-for-bindelsen. Hvis en af carboxylgrupperne Rg og/eller Rg ogsåer forestret med en alkohol, især en lavalkanol, kan den,især ved højere temperatur, hydrolyseres med en vandig syre.

De ved fremgangsmåde e) anvendte udgangsmaterialer medformlen II kan eksempelvis fremstilles ved spaltning afdioxolanringen i en forbindelse med formlen IX.

I de opnåede forbindelser kan beskyttelsesgrupper ipeptiddelen senere fraspaltes, f.eks. ved hydrogenolyse,såsom med katalytisk aktiveret hydrogen, eller vedhydrolyse.

De derved anvendte udgangsstoffer kan f.eks. fås ved, at mani en tilsvarende oxazolin, med en fri hydroxylgruppe isukkergruppens 3-stilling, indfører R2~acetamidopeptid¬gruppen i et eller flere trin.

De opnåede forbindelser med mindst én carboxylgruppe kan påi og for sig kendt måde overføres til deres salte, f.eks.

ved omsætning af opnåede sure forbindelser med alkali- ellerj ordalkalimetalhydroxider.

De ovenfor beskrevne fremgangsmåder gennemføres på i og forsig kendt måde, i fraværelse eller fortrinsvis undertilstedeværelse af fortyndings- eller opløsningsmidler, omnødvendigt under afkøling eller opvarmning, under forhøjettryk og/eller i en inert gasatmosfære, såsom nitrogenatmo¬sfære.

Under hensyntagen til alle tilstedeværende substituenterskal der, om nødvendigt, især ved tilstedeværelse af lethydrolyserbare O-acylgrupper, anvendes særligt skånsommereaktionsbetingelser, såsom korte reaktionstider, anvendelseaf milde sure eller basiske midler i lav koncentration,støkiometriske mængdeforhold, valg af egnede katalysatorer,opløsningsmidler, temperatur- og/eller trykbetingelser.

Ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen kan udgangsmate¬rialerne eventuelt anvendes i form af et salt.

De omhandlede forbindelser kan anvendes i form affarmaceutiske præparater, som indeholder forbindelser medformlen I.

De efterfølgende eksempler belyser fremgangsmåden ifølgeopfindelsen.

Eksempel 1

En opløsning af 2,6 g benzyl-3-0-<D-l-[ L-l-(D-l-carbamoyl-3-carboxy-propyl)-carbamoyl-ethyl ]-carbamoyl-ethyl>-2-deoxy- 2-propionylamino-a-D-glucopyranosid-benzylester i 67 ml60%fs eddikesyre hydrogeneres med 0,6 g 5%’s palladium-kulsom katalysator ved normaltryk og ved stuetemperatur tilstilstand (hydrogeneringsvarighed ca. 20 minutter).

Katalysatoren filtreres fra og vaskes efter med lidt 60%'seddikesyre, og filtratet inddampes til tørhed ivandstrålevakuum. Remanensen krystalliseres fra ethanol/ether. Man får således benzyl-3-0-<D-l-[L-1-(D- l-carbamoyl-3-carboxy-propyl)-carbamoyl-ethyl ]-carbamoyl-ethyl)-2-deoxy-2-propionylamino-a-D-glucopyranosid med smp.155-160°C (sønderdeling) og optisk drejning [α]§0 = +105° ± 1° (dimethylformamid, c = 0,58).

Den som udgangsmateriale anvendte benzyl-3-0-<D-l-[L-l-(D-l-carbamoyl-3-carboxy-propyl)-carbamoyl-ethyl ]-carbamoyl-ethyl>-2-deoxy-2-propiony1amino-a-D-glucopyranosid-benzyl-ester kan opnås som følger: 4,1 g benzyl-2-amino-4,6-0-benzyliden-3-0-(D-l-carboxy-ethyl)-2-deoxy-a“D-glucopyranosid opløses i 200 ml methanolog 3 ml triethylamin, og der tilsættes dråbevis 0,95 mlpropionsyrechlorid under omrøring ved stuetemperatur. Efter2 timers omrøring inddampes reaktionsblandingen til tørhed,og remanensen opløses i 100 ml vand. Man indstiller mediskold 2 N saltsyre denne opløsning til pH-værdi 4, sugerdet uskilte produkt fra, vasker efter med vand og tørrer ivakuum over natriumhydroxid. Det således opnåedebenzyl-4,6-0-benzyliden-3-0-(D-l-carboxyethyl)-2-deoxy-2-propionylamino-a-D-glucopyranosid kan omkrystalli¬seres fra methanol, smp. 257°C, [a]2® = +132° ± 1° (dimethylformamid, c « 1,086).

Til en opløsning af 3,1 g af den opnåede forbindelse i 150ml acetonitril og 0,9 ml triethylamin sættes 1,5 g N-ethyl-5-phenyl-isoxazolium-3’-sulfonat (Woodwards reagens K), ogder omrøres ved stuetemperatur indtil fuldstændig opløsning(ca. 60 minutter). Man tilsætter nu 2,2 g L-alanyl-D-glut-aminsyre-l-amid-y-benzylester-hydrochlorid og 0,9 mltriethylamin og omrører ved stuetemperatur i yderligere 18timer. Efter afdestillation af opløsningsmidlet i vandstrå- levakuum sættes der vand til remanensen, det uopløseligesuges fra, vaskes grundigt med vand og tørres. Den opnåedebenzyl-4,6-0-benzyliden-3-0-<D-l-[ L-l-(D-l-carbamoyl-3-carboxypropyl)-carbamoyl-ethyl ]-carbamoyl-ethyl)-2-deoxy- 2-propionylamino-a-D-glucopyranosid-benzylester med Rf-værdi0,45 på kiselgel-tyndtlagsplader i systemet methylenchlorid/methanol 10/1 opløses i 200 ml 60%'seddikesyre og henstår 1,5 timer ved 95-100°C. Efterafkøling destillerer man opløsningsmidlet fra. Remanensenoptages endnu 2 gange i lidt vand og inddampes hver gang tiltørhed. Den opnåede benzyl-3-0-<D-l-[ L-l-(D-l-carbamoyl-3-carboxy-propyl)-carbamoyl-ethyl ]-carbamoyl-ethyl>-2-deoxy-2-propionylamino-a-D-glucopyranosid-benzylester krystalli¬seres fra methanol, smp. 189°C, [a]2^ = - +100° ± 1° (dimethylformamid, c = 1,268).

Eksempel 2

En opløsning af 4 g benzyl-2-acetamido-3-0-<[ L-l-(D-l-carb-amoyl-3-carboxy-propyl)-carbamoyl-ethyl ]-carbamoyl-methyl}-2-deoxy-a-D-glucopyranosid-benzylester i 80 ml methanolhydrogeneres med 0,4 g 5%' s palladium-kul som katalysatorved normaltryk og ved stuetemperatur indtil stilstand. Manfiltrerer katalysatoren fra, vasker den efter med lidtmethanol og inddamper filtratet til tørhed i vandstrå-levakuum. Remanensen opløses i 50 ml destilleret vand oghydrogeneres videre med 1 g 5%’s palladium-kul somkatalysator ved normaltryk og stuetemperatur indtilstilstand. Man filtrerer katalysatoren fra, vasker den eftermed lidt vand og inddamper filtratet til tørhed. Den opnåede2-acetamido-3-0-<[L-l-(D-l-carbamoyl-3-carboxy-propyl)-carbamoyl-ethyl ]-carbamoyl-methyl)-2-deoxy-D-glucose tørresi høj vakuum over phosphorpentoxid, [a]§® = +10° ± 1° (vand,c - 0,930).

Udgangsmaterialet kan fremstilles som følger:

Til en opløsning af 9,5 g benzyl-2-acetamido-4,6-0-benzyl-iden-3-0-carboxymethyl-2-deoxy-a-D-glucopyranosid i 400 mlacetonitril og 3 ml triethylamin sættes 5,3 g N-ethyl-5-phenyl-isoxazolium-3'-sulfonat (Woodwards reagens K), og deromrøres ved stuetemperatur, indtil der opstår en klaropløsning. Man tilsætter nu 7,15 g L-alanyl-D-glutaminsyre- 1- amid-Y-benzylester-hydrochlorid, 3 ml triethylamin og 200ml acetonitril og omrører reaktionsblandingen i yderligere18 timer ved stuetemperatur. Den udkrystalliserede benzyl- 2- acetamido-4,6-0-benzyliden-3-0-<[ L-l-(D-l-carbamoyl-3-carboxy-propyl)-carbamoyl-ethyl ]-carbamoyl-methyl>-2-deoxy-a-D-glucopyranosid-benzylester suges fra, vaskes medhalvmættet natriumhydrogencarbonatopløsning og vand ogtørres, [ <x ]§0 = +81° ± 1° (dimethylformamid, c = 0,816).

En opløsning af 8 g af denne forbindelse i 400 ml 60%’ seddikesyre henstår i en time ved 80°C. Efter afkølinginddampes opløsningen til tørhed, og til remanensen sættesder endnu to gange 50 ml vand og inddampes hver gang tiltørhed. Den opnåede krystallinske remanens omrøres med lidtvand, og krystallerne suges fra og tørres. Man får såledesbenzyl-2-acetamido-3-0-<[ L-l-(D-l-carbamoyl-3-carboxy-propyl)-carbamoyl-ethyl ]-carbamoyl-methyl>-2-deoxy-a-D-glucopyranosid-benzylester med smp. 200-202°C, [a]20 = +77° ± 1° (dimethylformamid, c = 0,599).

Eksempel 3

En opløsning af 0,9 g benzyl-2-acetamido-3-0-[L-l-(D-l-carb-amoyl-3-carboxy-propyl)-carbamoyl-ethyl ]-carbamoylmethyl-2-deoxy-6-0-steaoyl-a-D-glucopyranosid-benzylester i 40 mlmethanol hydrogeneres med 0,2 g 5%’s palladium-kul somkatalysator ved normaltryk og stuetemperatur, indtil der eroptaget 22,4 ml hydrogen. Man filtrerer katalysatoren fra,vasker efter med methanol og inddamper filtratet til tørhed.Man får således benzyl-2-acetamido-3-0-[ L-l-(D-l-carbamoyl- 3- carboxypropyl)-carbamoylethyl ]-carbamoyl-methyl-2-deoxy- 6-0-stearoyl-a-D-glucopyranosid, [ a = +33° ± 1° (chloroform, c = 1,046).

Udgangsmaterialet kan fremstilles som følger:benzyl-2-acetamido-3-0-[ L-l-(D-l-carbamoyl-3-carboxypropyl)- carbamoylethyl ]-carbamoylmethy1-2-deoxy-α-D-glucopyranosid-benzy 1ester x 30 ml pyridin sættes under omrøring og udelukkelse affugtighed dråbevis en opløsning af 1,4 g stearinsyrechloridi 7,5 ml methylenchlorid i løbet af en time, og der omrøresi 48 timer ved stuetemperatur. Man hælder reaktionsblan¬dingen i isvand og ekstraherer med methylenchlorid. Denorganiske fase vaskes med iskold 2 N saltsyre og vand,tørres med magnesiumsulfat og inddampes til tørhed.Remanensen renses søjlekromatografisk på kiselgel vedeluering med ethylacetat.

Man får således benzyl-2-acetamido-3-0-[ L-l-(D-l-carbamoyl- 3-carboxypropyl)-carbamoylethyl ]-carbamoyl-methyl-2-deoxy-6-0-stearoyl-a-D-glucopyranosid-benzylester med [α ]§0 = +30° ± 1° (chloroform, c = 1,203).

Eksempel 4

Analogt med eksempel 2 kondenserer man benzyl-2-acetamido-4,6-0-benzyliden-3-0-(D-l-carboxy-propyl)-2-deoxy-a-D-glucopyranosid med L-alanyl-D-glutaminsyre-l-amid-y-benzyl-ester-hydrochlorid og spalter beskyttelsesgruppen fra. Manfår således 2-acetamido-3-0-<(D-l-[ L-l-(D-l-carbamoyl-3-carb-oxy-propyl)-carbamoyl-ethyl ]-carbamoyl-propyl >-2-deoxy-D-glucose.

Udgangsmaterialet kan fremstilles som følger:

Til en opløsning af 60 g benzyl-2-acetamido-4,6-0-benzyl-iden-2-deoxy-<x-D-glucopyranosid i 600 ml dimethyl formamidsættes 10 g natriumhydrid, og der omrøres 1,5 timer i en nitrogenatmosfære ved 45°C. Efter afkøling til 0°C tilsæt¬ter man 75 ml D,L-a-bromsmørsyre-ethylester. Man omrørerreaktionsblandingen i en time ved stuetemperatur og en timeved 50°C, neutraliserer med eddikesyre og afdamper opløs¬ningsmidlet i vandstrålevakuum. Man fordeler remanensenmellem methylenchlorid og vand, vasker endnu en gang denorganiske fase med vand, tørrer den med magnesiumsulfat ogafdamper opløsningsmidlet. Den i højvakuum tørrede remanensrenses søjlekromatografisk på kiselgel. Ved eluering medmethylenchlorid/ethylacetat (85:15) får man benzyl-2-acet-amido-4,6-0-benzyliden-3-0- (D-l-carboxy-propyl) -2-deoxy-o:-D-glucopyranosid-ethylester med [ a = +113° t 1°(chloroform, c = 0,5), smp. 154°C (fra methylenchlor-id/ether) og Rf-værdi 0,21 og benzyl-2-acetamido-4,6-0-benzyliden-3-0-(L-l-carboxy-propyl)-2-deoxy-a-D-glucopyra-nosid-ethylester med [ α = +42° ± 1° (chloroform, c = 0,511), smp. 240°C (fra ethylacetat) og Rf-værdi 0,04.

Til en opløsning af 38,1 g benzyl-2-acetamido-4,6-0-benzyl-iden-3-0-(D-l-carboxy-propyl)-2-deoxy-a-D-glucopyranosid-ethylester i 300 ml methanol sættes 100 ml 1 N natrium¬hydroxidopløsning, og blandingen henstår i en time ved 60°C.Derefter afkøles opløsningen, den inddampes til ca. 150 ml,fortyndes med 400 ml isvand, og der tilsættes 100 ml 1 Niskold saltsyre. Det udkrystalliserede produkt suges fra,vaskes med vand og tørres. Man får benzyl-2-acetamido-4,6- O-benzyliden-3-0-(D-l-carboxy-propyl)-2-deoxy-a-D-glucopyranosid med smp. 210-213°C og [a]2® = +H0° ±1° (diemthylformamid, c = 0,554).

På analog måde får man benzyl-2-acetamido-4,6-0-benzyl-iden-3-0-(L-l-carboxy-propyl)-2-deoxy-a-D-glucopyrano-sid med smp. 285’C og [α]β0 = +71° ± l® (dimethylformamid, c= 0,589).

Eksempel 5 3,77 g 2-phenyl-4,5-[3-0-(D-l-carboxyethyl)-5,6-0-isoprop-yliden-D-glucofuranoJ-A^-oxazolin i 60 ml acetonitril og 15ml dimethyl formamid røres sammen med 1,4 ml triethylamin og 2.55 g N-ethyl-5-phenyl-isoxazolium-3’-sulfonat i 1,5 timerved 0°C, hvorved næsten alt går i opløsning. Dereftertilsætter mn 3,44 g L-alanyl-D-glutaminsyre-l-amid-7-benzyl-ester-hydrochlorid og yderligere 1,4 ml triethylamin ogomrører i 24 timer ved stuetemperatur. Man inddamper ioliepumpevakuum til en sirup og kromatograferer på kiselgelmed en blanding af chloroform og acetone (8:2). Man får enfarveløs fast sirup, der krystalliserer ved gnidning medether. Smp. 96-99°C, [a]2®= +13° (i chloroform).

Den krystallinske benzylester hydrogeneres med 5%’s palla¬dium-kul i dioxan ved stuetemperatur og normaltryk og giverefter inddampning i vakuum den tilhørende syre som sirup.Man omrører denne i vand med 10 ml "Dowex"® 50-H+ vedstuetemperatur i 15 timer. Efter filtrering og frysetørringfår man et farveløst pulver med sønderdelingspunkt 140°C.Den opnåede 2-benzoylamino-3-0-<D-l-[ L-l-(D-l-carbamoyl-3-carboxy-propyl)-1-carbamoyl-ethyl ]-carbamoyl-ethyl>-2-deoxy- а, β -D-glucose indeholder alt efter tørringsbetingelservekslende mængder krystalvand, i ovenstående tilfælde eftertørring ved 60°C, 0,01 mm Hg, i 15 timer: 1/3 vand.

Eksempel 6 б, 0 g 2-phenyl-4,5-[ 3-0-(D-l-carboxypropyl)-5,6-0-isoprop-yliden-D-glucofurano ]-A2-oxazolin, 4,08 g N-ethyl-5-phenyl-isoxazolium-3'-sulfonat og 2,25 ml triethylamin omrøres i100 ml acetonitril og 25 ml dimethyl formamid i en time ved0-5°C, hvorved alt går i opløsning. Derefter tilsætter man 5.55 g L-alanyl-D-glutaminsyre-l-amid-7-benzylester-hydro-chlorid og yderligere 2,35 ml triethylamin og omrører i 48 timer ved stuetemperatur. Man inddamper i oliepumpevakuum ogkromatograferer på kiselgel i en blanding af chloroform ogethanol (19:1). 9 g af den således opnåede farveløse siruphydrogeneres i dioxan med 5%?s palladium-kul, filtreres frakatalysatoren, inddampes i vakuum og hydrolyseres i enblanding af 40 ml tetrahydrofuran og 30 ml vand med 1,5 mltrifluoreddikesyre ved stuetemperatur. Derefter afdamper manvandet i vakuum fire gange til tørhed, opløser i vand oglyofiliserer. Den opnåede 2-benzoylamino- 3-0-<D-l-[ L-l-(D-l-carbamoyl-3-carboxy-propyl)-carbamoyl-ethyl ]-carbamo-ylpropyl>-2-deoxy-a,Ø-D-glucose krystalliserer med 0,5 molvand, smp. 114-152°C, [a]S®- +17° (i methanol).

Eksempel 7 3,63 g 2-phenyl-4,5-[ 3-0-carboxymethyl-5,6-0-isopropyliden-D-glucofurano ]-Å2-oxazolin, 3,43 g L-alanyl-D-glutaminsyre- l-amid-Y-benzylester-hydrochlorid, 1,21 g N-hydroxysuccin-imid, 2,16 g dicyclohexylcarbodiimid og 1,45 ml triethyl-amin opløses i 40 ml dimethyl formamid og omrøres i 24 timerved stuetemperatur. Man inddamper i oliepumpevakuum, optageri dichlorethan og vand, suger det udfældede dicyclohexyl-urinstof fra og udryster den organiske fase to gange medvand og den vandige fase to gange med dichlorethan. Eftertørring og inddampning af de organiske faser får man en fastsirup, der kromatograferes på kiselgel med en blanding afchloroform/ethanol (9:1). Den opnåede peptidester, derkrystalliserer ved gnidning med ether, smelter ved167-168°C, [α]δ°= “5° (chloroform).

4,5 g af den nævnte ester hydrogeneres i dioxan med 5%'spalladium-kul, katalysatoren filtreres fra og eftereks-traheres med ethanol. De samlede filtrater inddampes, ogremanensen omkrystalliseres fra isopropylalkohol. Den opnåede syre smelter ved 200-207°C.

2,85 g af denne omrøres i en blanding af 30 ml vand og 15 mltetrahydrofuran med 5 ml "Dowex"® 50-H+ i 15 timer ved stue¬temperatur, filtreres gennem et hårdfilter og inddampes ivakuum til tørhed. Ved gnidning med ether får man etfarveløst pulver, 2-benzoylamino-3-0-<[ L-l-(D-l-carbamoyl-3-carboxy-propyl)-l-carbamoyl-ethyl ]-carbamoyl-methyl)-2~deoxy-α,(S-D-glucose med smp. 175-177°C (som hydrat).

Ved variation af den i Acta Chem. Scand. 18, 185 (1964), beskrevne fremgangsmåde kan udgangsmaterialet fremstillessom følger: 100 g 2-phenyl-4,5-[5,6-O-isopropyliden-D-glucofurano ]-δ2-oxazolin opløses under udelukkelse af fugtighed og carbondioxid i 1 liter acetonitril, og der tilsættesportionsvis 15,2 g af en 55%'s NaH-mineralolie-dispersionunder god omrøring, som fortsættes i en time ved stuetemperatur. Derefter tildrypper man ved 0°C 42 ml chlor-eddikesyreethylester og efter 1,5 timer yderligere 42 ml.Efter 1,5 timer tilsætter man endnu en gang 11,4 gNaH-dispersion, omrører en halv time og tildrypper ved 0°Cyderligere 42 ml chloreddikesyreethylester. Efter yderligere2 timer lader man opvarme til stuetemperatur og inddamper ivakuum, til slut i oliepumpevakuum, til en sirup. Denneoptager man med ether, udryster 3 gange med vand, tørreretherfasen over natriumsulfat og får efter inddampning 155 gaf en brun olie. Man opløser denne i 150 ml methanol ogtilsætter en opløsning af 30 g kaliumhydroxid i 150 ml vand,ekstraherer to gange med ether og vasker etherfasen én gangmed vand. Vandfaserne befries for ether i vakuum ogindstilles med 1 N saltsyre med pH-meter til pH-værdi 4.

Det udfældede krystallinske 2-phenyl-4,5-[ 3-0-(carboxymeth-yl)-5,6-0-isopropyliden-D-glucofuranoJ-A^-oxazolin suges fra, vaskes med vand og tørres. Man får 107 g, 93% af detteoretiske, med smp. 186-188°C, [a]§0= -9° (CHC1 3 c = 0,9)og +23° (CHCl3, c = 3).

Eksempel 8 2,5 g 2-benzamido-2-desoxy-3-0-[L-l-(D-l-carbamoyl-3-carb-oxy-propyl)-carbamoylethyl ]-carbamoylmethyl-D-glucopyranoseopløses i en blanding af 17 ml absolut pyridin og 4 mlsmørsyreanhydrid. Efter 20 timer ved stuetemperatur og 2timer ved 50°C tilsætter man vand og inddamper i vakuum. Manopløser remanensen i chloroform, udryster med 1 N saltsyreog vand, tørrer over natriumsulfat og inddamper chloroform¬fasen. Den olieagtige remanens ekstraherer man flere gangemed ether og får således en fast amorf masse med smp.110-120°C, a,/3—1,4,6-tributyroyl-2-benzamido-2-desoxy-3-0-[L-l-(D-l-carbamoyl-3-carboxy-propyl)-carbamoylethyl ]-carbamoylmethyl-D-glucopyranose, Rf = 0,52 i CHCIøjCHøOH =7:2 (kiselgeltyndtlag, Merck).

Eksempel 9 2,3 g 2-benzamido-2-desoxy-3-0-[L-l-(D-l-carbamoyl-3-carb-oxy-propyl)-carbamoylethyl ]-carbamoylmethyl-D-glucopyranoseopløses i 20 ml pyridin og 5 ml eddikesyreanhydrid. Efter 3timer ved stuetemperatur tilsætter man vand og inddamper ivakuum. Man renser på 70 g kiselgel med CHCl3iCH30H = 3:1 ogfår et farveløst pulver med smp. 122-158°C, = +48° (CH3OH, c = 1,074), a,/3-l,4,6-triacetyl-2-benzamido-2-des-oxy-3-0-[L-l-(D-l-carbamoyl-3-carboxypropyl)-carbamoyl-ethyl ]-carbamoylmethyl-D-glucopyranose, Rf = 0,54, CHCI3:CH3OH = 3:2 (kiselgeltyndtlag, Merck).

Eksempel 10 6,33 g 2-phenyl-4,5-(3-0-carboxymethyl-5,6-0-isopropyliden-D-glucofurano-A^-oxazolin, 5,75 g 2-ethoxy-N-carbethoxy-1,2-dihydroquinolin (EEDQ) og 9,3 ml triethylamin sættes tilen opløsning af trifluoracetatet af L-alanyl-D-glutaminsyre-dibenzylester (opnået af 8,3 g N-tert-butoxycarbonyl-L- alanyl-D-glutaminsyredibenzylester med 5,1 ml trifluoreddikesyre og 2,6 ml dichlorethan ved 4 timershydrolyse ved 40°C) i 70 ml dichlorethan. Man laderblandingen reagere i 15 timer ved 40°C, fortynder medchloroform, udryster to gange med vand og vandfaserne éngang med chloroform. Efter tørring over natriumsulfat oginddampning af chloroformopløsningen får man 19,9 g af enolie, der renses over 400 g kiselgel (Merck) ved elueringmed ether, derefter med chloroform/acetone (17:3). Man fårsåledes rent 2-phenyl-4,5-[ 3-0-(l-L-<l-D,3-dibenzyloxycarb-onyl-propyl>-carbamoyl-ethyl)-carbamoylmethyl-5,6-0-iso-propyliden-D-glucofurano J-A^-oxazolin med smp. 113-116°C og[αβ° = -47° (CHC13, c = 1,54).

7 g af ovenstående forbindelse hydrogeneres med 1,8 g 5%’spalladium-kul i en blanding af 80 ml tetrahydrofuran og 20ml vand til stilstand, man suger katalysatoren fra,inddamper i vakuum og gnider remanensen med ether. Man fårsåledes 4,9 g af dicarboxylsyren som et farveløst pulver.

4,4 g af ovenstående dicarboxylsyre omrøres i 20 timer ved40°C med 11 ml af ionbytteren "Dowex-50"® W x 4 i enblanding af 45 ml tetrahydrofuran og 20 ml vand. Efterfiltrering og klaring med kul "Darco G 60", frysetørrer manopløsningen og får farveløst, amorft 2-benzamido-2-desoxy-3-0-[ l-L-(l-D,3-dicarboxy-propyl)-carbamoyl-ethyl ]-carb-amoylmethyl-D-glucopyranose med den optiske drejning [ <x ]3° -+25° (Η·ρ, c = 0,997).

Eksempel 11

Analogt med eksempel 10 kondenserer man 5,7 g 2-phenyl-4,5-[3-0-carboxymethyl-5,6-0-isopropyliden-D-glucofurano ]-δ2-οχ-azolin med 4,9 g L-seryl-D-glutaminsyre-o!-amid-7-tert-butyl-ester-hydrochlorid under tilsætning af 2,3 ml triethylamin og 5,2 g 2-ethoxy-N-carbethoxy-l,2-dihydroquinolin i 45 mldichlorethan. Efter 18 timer ved 40°C er der opstået etkrystallisat. Man tilsætter yderligere 50 ml dichlorethan,afkøler i is, suger fra og vasker krystallerne med koldtdichlorethan. De analyserene, farveløse krystaller af 2-phenyl-4,5-[ 3 - 0 - (1 - L - < 1 -D - c ar bamoy1-3-1ert-butoxycarbony1-propyl)-carbamoyl-2-hydroxyethyl)-carbamoylmethyl-5,6-0-iso-propyliden-D-glucofuranoJ-A^-oxazolin har snip. 187-188°C og[agO = +7° (CH^DH, c = 1,125).

2 g af denne forbindelse hydrolyseres ved stuetemperatur i20 timer med en blanding af 15 ml methylenchlorid og 5 mltrifluoreddikesyre. Man inddamper i oliepumpevakuum, gniderremanensen med ether og får 2-benzamido-2-desoxy-3-0-[1-L-(l-D-carbamoyl-3-carboxypropyl)-carbamoyl-2-hydroxyethyl ]-carbamoylmethyl-D-glucopyranose som et beige pulver med smp.100-115°C, [a]g° = +23° (H #, c = 0,886), der krystalliserer med 2 mol vand og 1 mol trifluoreddikesyre.Rf = 0,28, CHCløiCHøOH = 1:1 (kiselgeltyndtlag, Merck).

Eksempel 12

Analogt med eksempel 10 kondenserer man 5,25 g 2-phenyl-4,5-[ 3-0-carboxymethyl-5,6-0-isopropyliden-D-glucofuranooxazolin og det trifluoreddikesure salt af L-alanyl-D-glut-aminsyre-a-n-propylamid-y-benzylester, opnået af 6,2 gN-tert-butoxy-carbonyl-L-alanyl-D-glutaminsyre-a-n-propyl-amid-y-benzylester og 4,2 ml trifluoreddikesyre i 2,5 mldichlorethan, 6 timer ved 40°C i 60 ml dichlorethan undertilsætning af 7,75 ml triethylamin og 4,8 g 2-ethoxy-N-carbethoxy-l, 2-dihydroquinolin. Efter 20 timer ved 40°Cfortynder man med 50 ml chloroform, udryster to gange medvand og vandet to gange med chloroform. Efter tørring oginddampning af chlorof ormf asen får man 15 g af en olie, derrenses over 200 g kiselgel (Merck) ved eluering med ether,derefter med chloroform/acetone = 7:3. Man får 6,4 g af et farveløst, amorft stof med Rf = 0,35, CHCI3:acetone = 7:3 (kiselgeltyndtlag, Merck). Dette hydrogeneres med 1,8 g5%’s palladium-kul i 80 ml tetrahydrofuran og 20 ml vand tilstilstand, filtreres fra katalysatoren og inddampes. Syrenviser Rf = 0,58, CHClsiCHøOH = 3:1 (kiselgeltyndtlag,

Merck). Derefter omrører man med 10 ml af ionbytteren "Dowex50"® w x 4, 50 ml tetrahydrofuran og 25 ml vand i 15 timerved stuetemperatur og i 12 timer ved 40°C. Efter filtrering,klaring med kul "Darco-G-60", endnu en gang filtrering ogfrysetørring får man den farveløse, amorfe2-benzamido-2-desoxy-3-0-[ 1-L-(D-l-N-n-propyl-carbamoyl-3-carboxy-propyl)-carbamoylethyl ]-carbamoyl-methyl-D-gluco-pyranose med smp. 65-140°C og [α]β0 = +28° (vand, c = 1,03),Rf = 0,48, CHCI3:CH3OH = 1:1 (kiselgeltyndtlag, Merck).

Eksempel 13 7,3 g 2-phenyl-4,5-[ 3-0-carboxymethyl-5,6-0-isopropyliden-D-glucofurano ]-Å2-oxazolin, 6,5 g a-amino-isobutyroyl-D-glutaminsyre-a-amid-7-tert-butylester-hydrochlorid og 2,9 gchlormyresyre-isobutylester opløses i 25 ml dimethylformamidog 50 ml dichlorethan. Hertil drypper man ved -15 til -10°Ci løbet af 30 minutter en opløsning af 6,1 ml triethylamin i20 ml dichlorethan. Derefter lader man opvarme til stuetem¬peratur og omrører endnu 15 timer ved stuetemperatur. Manfortynder med 50 ml dichlorethan, udryster med vand,, togange med 0,5 N NaOH og tre gange med vand, de vandige faserto gange med dichlorethan, tørrer de organiske faser og fårefter inddampning 16,6 g olie. Denne renser man på kiselgel(Merck) ved eluering med CHCl3:C2H50H = 19:1. Man får 9,7 gfarveløst, amorft 2-phenyl-4,5-<3-0-[ l-methyl-l-(1-D-carb-amoyl-3-tert-butoxycarbonyl-propyl)-carbamoylethyl ]-5,6-0-isopropyliden-D-glucofurano)-Å2-oxazolin med optisk drejning: [ α = +6° (CHCI3, c = 1,027), smp. 75-89°C, Rf =0,35, CHCl3:C2H50H = 9:1 (kiselgeltyndtlag, Merck).

8,3 g af den ovenstående forbindelse lader man stå i 15timer ved stuetemperatur i en blanding af 20 mltrifluoreddikesyre, 60 ml methylenchlorid og 2 ml vand.Derefter inddamper man i vakuum og gnider remanensen medether. Det opståede rosafarvede pulver opløser man i 200 mlvand og klarer med 0,5 g kul "Darco G 60”. Efter filtreringog inddampning får man den farveløse, amorfe 2-benzamido-2-desoxy-3-0-[ l-methyl-l-(D-l-carbamoyl-3-carboxypropyl)-carbamoylethyl ]-carbamoylmethyl-D-glucopyranose med smp.110-120eC, [a]g° = +31° (H £, c = 0,88), Rf = 0,52, acetone/ethanol = 1:1 (kisegeltyndtlag, Merck), der krystalliserer med 0,6 mol trifluoreddikesyre og 1,7 molvand.

Eksempel 14

Analogt med eksempel 10 får man af 2-benzamido-2-desoxy-3-0-carboxymethyl-|3-ethyl-D-glucopyranosid og det trifluor-eddikesure salt af L-alanyl-D-glutaminsyre-a-ainid-Y-tert-butylester med 2-ethoxy-N-carbethoxy-l,2-dihydroquinolin dettilsvarende glycopeptid med [a]2° ? -23° (CH^pH, c = 1,107)og Rf = 0,47 (CH2Cl2:C2H50H = 8:2) og efter hydrogeneringmed 5%fs palladium-kul i tetrahydrofuran/vand 2-benz-amido-2-desoxy-3-0-[ L-l-(D-l-carbamoyl-3-carboxyprop-yl)-carbamoylethyl ]-carbamoylmethyl-0-ethyl-D-glucopyranosidmed smp. 215-217°C, [a]g° = -22° (CH $)H, c = 0,97), Rf =0,36 i CHCI3:CH3OH = 1:1 (kiselgeltyndtlag, Merck).

Det som udgangsmateriale anvendte 2-benzamido-2-desoxy-3-0-carboxymethyl-/3-ethyl-D-glucopyranosid får man som følger: 2-Phenyl-4,5-[ 3-0-carboxymethyl-5,6-0-isopropyliden-D-gluco-furano ]-å2-oxazolin opløses i 0,1 N HCI/C2H5OH og henstår i6 timer ved stuetemperatur. Man neutraliserer mednatriumethylat i ethanol, inddamper til tørhed og optagermed acetone. Opløsningen filtreres over et lag kiselgel (Merck), eluatet inddampes til tørhed, og remanensen eks-traheres to gange med ether ved stuetemperatur. Efteromkrystallisation fra ethylacetat får man 2-benzamido-2-des-oxy-3-0-carbethoxymethyl-/3-ethyl-D-glucopyranosid med smp.185-188°C og [a]2° = -35° (CH φΗ, c = 1,121).

9,4 g af denne ester hydrogeneres med en opløsning af 1,7 gkaliumhydroxid i 250 ml ethanol og 25 ml vand i 2 timer vedstuetemperatur. Derefter indstiller man pH-værdien med 1 Nsaltsyre til 3,5 og inddamper i vakuum. Remanensen gnidesførst med ether, derefter 3 gange , hver gang med 20 mlisvand, og suges fra. Man får således krystaller af 2-benz-amido-2-desoxy-3-0-carboxymethyl-/3-ethyl-D-glucopyranosidmed smp. 205-210°C og [a]2° = -40° (CH φΗ, c = 1,04).

Eksempel 15 2-Benzamido-2-desoxy-3-0-[ (D-l-carbamoyl-3-carboxy-propyl)-carbamoylmethyl ]-carbamoylmethyl-D-glucose får man af 3 g2-phenyl-4,5-[ 3-0-<(D-l-carbamoyl-3-carboxypropyl)-carbamo¬ylmethyl >-carbamoylmethyl-5,6-0-isopropyliden-D-gluco-furano J-A^-oxazolin ved hydrolyse med 1,5 ml trifluor-eddikesyre i en blanding af 15 ml dimethoxyethan og 15 mlvand ved 40°C i 3 timer. Man inddamper i vakuum til tørhedog ekstraherer endnu en gang remanensen med ether. Dettilbageblevne pulver opløses i vand og behandles med kul"Darco G 60", filtreres og frysetørres. Man får således etfarveløst, amorft stof med smp. 115-155°C og [a]2® = +34°(vand, c = 0,81), Rf = 0,28, CHC13:CH30H = 1:1 (kiselgeltyndtlag, Merck).

Udgangsmaterialet hertil får man som følger: 8,0 g N-tert-butoxycarbonyl-glycyl-D-glutaminsyre-a-amid-γ-benzylester opløses i en blanding af 6,3 ml trifluoreddi-kesyre og 7 ml dichlorethan og reagerer i 2 dage ved stue- temperatur og 3 timer ved 45°C. Dertil sætter man underafkøling 12,1 ml triethylamin, 7,0 g 2-ethoxy-N-carbethoxy-1,2-dihydroquinolin (EEDQ) og 8,1 g 2-phenyl-4,5-[3-0-carb-oxymethyl-5,6-0-isopropyliden-D-glucofurano J-A^-oxazolin og20 ml dimethylformamid. Efter 20 timer ved 40°C inddamperman i olievakuum og fordeler remanensen mellemmethylenchlorid og vand. Efter tørring og inddampning afmethylenchloridfasen får man en fast remanens, derekstraheres to gange med ether og omkrystalliseres fratoluen. Udbytte 8,25 g, smp. 1576C, [a]3® = +10° (CHC1 3. c =1,48), Rf = 0,35 (CHCI3:ethanol = 9:1) (kiselgeltyndtlag, Merck).

Den således opnåede benzyléster hydrogeneres med 1 g 5%'spalladium-kul i 100 ml tetrahydrofuran og 25 ml vand tilstilstand. Efter frafiltrering af katalysatoren oginddampning kromatograferer man stoffet på 250 g kiselgel(Merck) i CHCløiCHøOH = 4:1. Man får 5,8 g farveløst, amorft2-phenyl-4,5-[3-0-<(D-l-carbamoyl-3-carboxypropyl)-carbamo-ylmethyl>-carbamoylmethyl-5,6-0-isopropyliden-D-glucofu-rano J-A^-oxazolin med Rf = 0,43, CHd^CHøOH = 3:2 (kiselgeltyndtlag, Merck).

Eksempel 16

Analogt med eksempel 10 kondenserer man 9,5 g 2-phenyl-4,5-[ 3-0-carboxymethyl-5,6-O-isopropyliden-D-glucofurano \-δΡ—oxazolin med 6,25 g L-alanyl-D-glutaminsyre-a,y-diamid-hydrochlorid under tilsætning af 3,4 ml triethylamin og 7,95g 2-ethoxy-N-carbethoxy-l,2-dihydroquinolin (EEDQ) i enblanding af 50 ml dichlorethan og 150 ml dimethyl formamid.Man lader under omrøring i 2 dage ved stuetemperatur og 4timer ved 40°C blandingen reagere. Man inddamper i oliepum¬pevakuum og ekstraherer remanensen, først to gange medether, derefter to gange med isvand. Efter tørring kanproduktet omkrystalliseres fra dichlorethan. Man får såle- des farveløse krystaller med smp. 170-184°C, [o!]gO = +3°(DMSO, c = 1,43), Rf = 0,64, CHC13:CH30H = 3:1 (kiselgeltyndtlag, Merck).

6,1 g af denne forbindelse hydrolyseres med 13,5 ml afionbytteren "Dowex 50"® i en blanding af 60 ml dimethoxyethan og 60 ml vand i 15 timer ved stuetemperatur.Efter filtrering og inddampning optager man remanensen medvand, klarer med kul "Darco-G-60", suger fra og frysetørrerfiltratet. Man får farveløs amorf 2-benzamido-2-desoxy-3-0-[ L-l-(D-l,3-dicarbamoylpropyl)-carbamoylethyl ]-carbamoyl-methyl-D-glucopyranose med smp. 82-143°C, [ a ]3° = +24° (H £,c = 0,98), Rf = 0,45, CHC13:CH30H = 1:1 (kiselgel¬tyndtlag, Merck). Stoffet krystalliserer med 1,23 molkrystalvand.

Eksempel 17

Analogt med eksempel 16 får man af ethyl-2-benzamido-2-des-oxy-3-0-carboxymethyl-0-D-glucopyranosid og L-alanyl-D-glutaminsyre-a-7-bis-methylamid-hydrochlorid |3-ethyl-2-benzamido-2-desoxy-3-0-[ L-l-(D-l,3-bis-N-methyl-carbamoyl-propyl)-carbamoylethyl ]-carbamoylmethyl-D-glucopyranosid medsmp. 233-240°C, [a]g°= -20° (CH $>H, c = 0,937), Rf = 0,38 iCHCl3:ethanol 7:3 (kiselgel, tyndtlagsplader, Merck).

Eksempel 18

Analogt med eksempel 16 får man af 2-benzamido-2-desoxy-3-0-carboxymethyl-D-glucopyranose 2-benzamido-2-desoxy- 3-0-[ L-l-(D-l,3-bis-N-methyl-carbamoyl-propyl)-carbamoyl-ethyl ]-carbamoylmethyl-D-glucopyranose med smp. 125-132°C,[a]g° = +24° (H^), c = 0,93), Rf = 0,26 CHC13:ethanol = 7:3(kiselgel, tyndtlagsplader, Merck).

Eksempel 19

Analogt med eksempel 16 får man af 2-benzamido-2-desoxy-3-0-carboxymethyl-D-glucopyranose og hydrochloridet af L-ala-nyl-D-glutaminsyre-dimethylester 2-benzamido-2-desoxy-3-0-[L-l-(D-l,3-bis-methoxycarbonyl-propyl)-carbamoylethyl ]-carbamoylmethyl-D-glucopyranose som hydrat med smp. 80-90°C,[a]g° = +25° (CH cpH, c = 1,017), Rf-værdi = 0,23 i CHCI3:ethanol = 9:1 (kiselgel, tyndtlagsplade, Merck).

Eksempel 20

Analogt med eksempel 16 får man af ethyl-2-benzamido-2-des-oxy-3-0-carboxymethyl-/3-D-glucopyranosid ethyl-2-benzamido-2-desoxy-3-0-[ L-1-(D-1,3-bis-methoxycarbonyl~propyl)-carb¬amoyl ethyl ]-carbamoyl-methyl-(3-D-glucopyranosid med smp.

127-135°C, [a]g° = -17° (CH $>H, c = 1,024), Rf = 0,26 i ethylacetat:acetone = 2:1 (kiselgel, tyndtlagsplader,

Merck).

Eksempel 21

Analogt med eksempel 12 får man 2-benzamido-2-desoxy-3-0-[L-l-(D-l-N-benzyl-carbamoyl-3-carboxypropyl)-carbamoyleth-yl ]-carbamoylmethyl-D-glucopyranose.

γ-Carboxygruppen i glutaminsyren frigøres i dette tilfældefra en tert-butylester ved hydrolyse med "Dowex-50"®H+ itetrahydrofuranvand.

Eksempel 22

Analogt med eksempel 12 får man 2-benzamido-2-desoxy-3-0-[ L-l-(D-l-N-carbamoylmethyl-carbamoyl-3-carboxypropyl)-carbamoylethyl ]-carbamoylmethyl-D-glucopyranose med smp.163-170eC. Udgangsmaterialet til peptiddelen er N-tert-but- oxYcarbonYl-L-alanyl-D-glutaminsyre-7-benzylester-a-glycin- amid.

Eksempel 23

Analogt med eksempel 12 får man af hydrochloridet af L-a-amino-valeroyl-D-glutaminsyre“o:“amid-7-tert-butYlester 2-benzamidO“2-desoxy-3“0-[L-l-(D-l-carbamoyl-3-carboxyprop-yl)-carbamoylbutyl ]-carbamoylmethyl-D-glucopyranose.

Eksempel 24

Analogt med eksempel 12 får man 2-benzamido-2-desoxy-3-0-[ L-l-(D-l-carbamoyl-3-carboxypropyl)-carbamoylpropyl ]-carb-amoylmethyl-D-glucopyranose.

Eksempel 25

Analogt med eksempel 12 får man 2-benzamido-2-desoxy-3-0-[L-l-(D-l-carbamoyl-3-carboxypropyl)-carbamoyl-2-methyl-propyl ]-l-carbamoylmethyl-D-glucopyranose, [α]δ® = +32° (vand, c = 0,78).

Eksempel 26

En opløsning af 10,7 g benzyl-2-acetamido-4,6-0-benzyliden-3-0-[ (D-l-carbamoy1-3-carboxypropy1)-carbamoylmethy1-carb-amoylmethyl ]-2-desoxy-a-D-glucopyranosid-benzylester i 200ml iseddike og 100 ml vand hydrogeneres med 2 g 5%' spalladium-kul ved normaltryk og ved stuetemperatur i 57timer. Man filtrerer katalysatoren fra, vasker den efter medvand og inddamper filtratet. Remanensen optages i vand ogfiltreres over 100 ml af ionbytteren "Amberlite IR"®120 (H+ form), og filtratet frysetørres. 2-Acetamido-3-0-[ (D-l-carbamoyl-3-carboxypropyl)-carbamoylmethyl-carbamoyl-methyl ]-2-deoxy-D-glucosen krystalliseres fra methan- ol/ethylacetat og tørres i højvakuum. Produktet, somindeholder 1/4 mol ethylacetat, viser den optiske drejning[ a ]§° = +27° ± 1° (vand, c = 0,944).

Det anvendte udgangsmateriale kan fremstilles som følger: 8 g N-tert-butoxycarbonyl-glycyl-D-isoglutamiribenzylesteropløses ved stuetemperatur og under udelukkelse af fugtighedi en blanding af 18 ml 1,2-dichlorethan og 8,4 ml trifluor-eddikesyre og henstår i 16 timer. Reaktionsblandingenfortyndes med 200 ml tetrahydrofuran og neutraliseres underudvendig køling med triethylamin, og der tilsættes enopløsning af 8,3 g benzyl-2-acetamido-4,6-0-benzyliden-3-0-carboxy-methyl-2-deoxy-a-D-glucopyranosid i 100 ml tetra¬hydrofuran og 2,52 ml triethylamin. Efter tilsætning af 5,05g 2-ethoxy-N-ethoxycarbonyl-l,2-dihydro- quinolin (EEDQ)omrører man i 24 timer ved stuetemperatur. Detudkrystalliserede produkt suges fra, vaskes med tetra¬hydrofuran og ether og tørres. Den opnåede benzyl-2-acetamido-4,6-0-benzyliden-3-0-[ (D-l-carbamoyl-3-carboxy-propyl)-carbamoylmethyl-carbamoylmethylJ-2-deoxy-a-D-gluco-pyranosid-benzylester viser den optiske drejning [ a 8° -+66° ± 1° (Ν,Ν-dimethylformamid, c = 1,308).

Eksempel 27

En opløsning af 4,5 g methyl-2-acetamido-3-0-<[ L-1-(D-1-carbamoyl-3-carboxypropyl)-carbamoyl-ethyl]-carbamoylmeth-yl)-2-deoxy-a-D-glucopyranosid-benzylester i 125 ml 50%'svandigt methanol hydrogeneres med 1,0 g 5%'s palladium-kulved normaltryk og stuetemperatur til optagelse af 178 mlhydrogen. Man filtrerer katalysatoren fra og inddamperfiltratet i vandstrålevakuum. Remanensen opløses i 50 mldestilleret vand og frysetørres. Man får således methyl-2-acetamido-3-0-<[ L-l-(D-l-carbamoyl-3-carboxypropyl)-carbamoyl-ethyl ]-carbamoymethyl)-2-deoxy-a-D-glucopyranosid med [α]§0 = +49 ± 1° (vand, c = 0,939).

Udgangsmaterialet kan fremstilles som følger: 8,1 g N-tert-butoxycarbonyl-L-alanyl-D-isoglutamin-benzyl-ester opløses ved stuetemperatur og under udelukkelse affugtighed i en blanding af 8,1 ml 1,2-dichlorethan og 8,1 mltrifluoreddikesyre og henstår i 16 timer. Man fortynderreaktionsblandingen med 200 ml tetrahydrofuran,neutraliserer under udvendig køling med triethylamin ogtilsætter en opløsning af 7,62 g methyl-2-acetamido-4,6-0-benzyliden-3-0-carboxymethyl-2-deoxy-æ-D-glucopyranosid og2,77 ml triethylamin i 100 ml tetrahydrofuran. Eftertilsætning af 5,0 g 2-ethoxy-N-ethoxycarbonyl-l,2-dihydro-quinolin (EEDQ) opvarmer man reaktionsblandingen til 40°C,omrører ved denne temperatur i 30 timer og lader den ståyderligere 24 timer ved stuetemperatur. Det udfældedeprodukt, methyl-2-acetamido-4,6-0-benzyliden-3-0-<[ L-1-(D- l-carbamoyl-3-carboxypropyl)-carbamoylethyl ]-carbamoylmeth¬yl )-2-deoxy-or-D-glucopyranosid-benzylester, suges fra,vaskes med tetrahydrofuran og ether og tørres, [ a. ]2° - +58°± 1° (N,N-dimethylformamid, c = 1,125).

En opløsning af 10,5 g methyl-2-acetamido-4,6-0-benzyliden-3-0-<[ L-l-(D-l-carbamoyl-3-carboxypropyl)-carbamoylethyl ]-carbamoylmethyl>-2-deoxy-a-D-glucopyranosid-benzylester i320 ml iseddike fortyndes under omrøring med 200 ml vand, ogdet hele omrøres i 2 timer ved 50-55°C. Efter afkølinginddampes opløsningen til tørhed, til remanensen sættesendnu fire gange 100 ml vand, og der inddampes hver gang tiltørhed. Man får således methyl-2-acetamido-3-0-<[ L-l-(D-l-carbamoyl-3-carboxypropyl)-carbamoylethyl ]-carb-amoylmethyl>-2-deoxy-a-D-glucopyranosid-benzylester med [<x]§0 = +64° ± 1° (Ν,Ν-dimethylformamid, c = 1,268).

Eksempel 28

En opløsnning af 3,0 g methyl-2-acetamido-3-0-<[L-l-(D-l-carbamoyl-3-carboxypropyl)-carbamoylethyl ]-carb-amoylmethyl>-2-deoxy-6-0-stearoyl-a-D-glucopyranosid-benzylesteii 100 ml ethanol og 100 ml tetrahydrofuran hydrogeneres med0,6 g 5%'s palladium-kul ved stuetemperatur og normaltryk,filtreres fra katalysatoren og inddampes i vandstrålevakuumtil tørhed. Den krystallinske remanens er methyl-2-acet-amido-3-0-<[L-l-(D-l-carbamoyl-3-carboxypropyl)-carbamoylethyl ]-carbamoylmethyl}-2-deoxy-6-0-stearoyl-a-D-glucopyranosid med [α]δ^ = +50° ± 1° (N,N-dime thyl form¬amid, c = 0,921).

Udgangsmaterialet kan fremstilles som følger:

Til en opløsning af 3,98 g methyl-2-acetamido-3-0-<[L-l-(D-l-carbamoyl-3-carboxypropyl)-carbamoylethyl ]-carbamoyl-methyl)-2-deoxy-o:-D-glucopyranosid-benzylester i 40 mlabsolut pyridin sættes under omrøring og udelukkelse af fug¬tighed ved 0-5°C dråbevis i løbet af 3 timer en opløsning af2,12 g stearinsyrechlorid i 20 ml 1,2-dichlorethan, ogblandingen henstår i 18 timer ved stuetemperatur.Reaktionsblandingen fortyndes med chloroform, vaskes medvand, iskold 2 N saltsyre og vand, tørres overmagnesiumsulfat og inddampes til tørhed. Produktet,methyl-2-acetamido-3-0-<[ L-l-(D-l-carbamoyl-3-carboxyprop-yl)-carbamoylethyl ]-carbamoylmethyl)-2-deoxy-6-0-stearoyl-α-D-glucopyranosid-benzylester, krystalliseres fra ethan-ol/ether, [a]fP = +22° ± 1° (chloroform, c = 1,030).

Eksempel 29

En opløsning af 6,8 g benzyl-2-acetamido-3-0-<[ L-1-(D-1,3-dicarbamoylpropyl)-carbamoylethyl ]-carbamoylmethyl>~2-deoxy-a-D-glucopyranosid i 200 ml 50%’s vandigt methanol - hydrogeneres med 5%' s palladium-kul ved normaltryk ogstuetemperatur i 60 timer. Man filtrerer katalysatoren fraog inddamper filtratet. Remanensen optages i 50 ml vand oglyofiliseres. Man får således 2-acetamido-3-0-<[L-1-(D-1,3-dicarbamoylpropyl)-carbamoylethyl]-carbamoylmethyl>-2-deoxy-D-glucose, som indeholder 1,24 mol vand, som et hvidtpulver med [or]§0 = +7° ± 1° (vand, c = 0,514).

Udgangsmaterialet kan fremstilles som følger:

Til en opløsning af 9,1 g benzyl-2-acetamido-4,6-0-benzyl-iden-3-0-carboxymethyl-2~deoxy-a-D-glucopyranosid i 100 mlN,N-dimethylformamid og 2,77 ml triethylamin sættes 5,0 gL-alanyl-D-glutaminsyre-diamid-hydrochlorid og 5,1 g 2-ethoxy-N-ethoxycarbonyl-l,2-dihydroquinolin (EEDQ), ogblandingen henstår i 48 timer ved stuetemperatur. Efterafdestillation af opløsningsmidlet ekstraheres remanensengrundigt med ether og vand, tørres og omkrystalliseres frachloroform/methanol, [ a = +83° ± 1° (N,N-dimethylform¬amid, c = 0,531).

En opløsning af 4 g benzyl-2-acetamido-4,6-0-benzyliden-3-0-<[ L-l-(D-l,3-dicarbamoylpropyl)-carbamoylethyl ]-carbamoyl-methyl)-2-deoxy-o:-D-glucopyranosid i 120 ml iseddike fortyndes med 80 ml vand og omrøres i 3 timer ved 60°C.Derefter afkøles reaktionsblandingen, den inddampes, og tilremanensen sættes endnu tre gange 100 ml vand, som hver gangafdestilleres. Det opnåede benzyl-2-acetamido-3-0-<[ L-l- (D-l,3-dicarbamoylpropyl)-carbamoylethyl ]-carbamoy1-meth¬yl )-2-deoxy-a-D-glucopyranosid omkrystalliseres fa methanol,smp. 223-225°C.

Eksempel 30

En opløsning af 5,7 g benzyl-2-acetamido-3-0-<D-l-[ (D-l-carbamoyl-3-carboxypropyl)-carbamoylmethylj-carbamoylprop¬yl >-2-deoxy-a-D-glucopyranosid-benzylester i 100 ml iseddikehydrogeneres under tilstedeværelse af 5%'s palladium-kul vednormaltryk og stuetemperatur. Man filtrerer kataly- satorenfra og inddamper filtratet. Den tilbageblevne2-acetamido-3-0-<D-l-[ (D-l-carbamoyl-3-carboxypropyl)-carba¬moylmethyl J-carbamoylpropyl)-2-deoxy-D-glucose optages i 50ml vand og frysetørres, [ a = +46° ± 1° (vand, c = 0,630).

Det anvendte udgangsmateriale kan fremstilles som følger: 5,1 g N-tert-butoxycarbonyl-glycyl-D-isoglutamin-benzyl-ester opløses ved stuetemperatur og under udelukkelse affugtighed i en blanding af 5,1 ml 1,2-dichlorethan og 5,1 mltrifluoreddikesyre og henstår i 16 timer. Man fortynderdenne opløsning med 100 ml tetrahydrofuran, neutralisererunder udvendig køling med triethylamin og tilsætter enopløsning af 6,3 g benzyl-2-acetamido-4,6-0-benzyliden-3-0-(D-l-carboxypropyl)-2-deoxy-a-D-glucopyranosid og 1,8 mltriethylamin i 100 ml tetrahydrofuran og 3,2 g 2-ethoxy-N-ethoxycarbonyl-1,2-dihydroquinolin (EEDQ). Efter 24 timerinddampes til tørhed, og remanensen fordeles mellemethylacetat og vand. Den organiske fase vaskes også mediskold 2 N saltsyre, vand, en mættet natriumhydrogencarbo-natopløsning og vand og inddampes. Den tilbageblevnebenzyl-2-acetamido-4,6-0-benzyliden-3-0-<D-l-[ (D-l-carb-amoyl-3-carboxypropyl)~carbamoylméthylj-carbamoylpropyl>-2-deoxy-a-D-glucopyranosid-benzylester krystalliseres fratetrahydrofuran/ether, [ a = +76° ± 1° (N,N-dimethyl- formamid, c = 0,457).

En mild sur hydrolyse af dette produkt i 60%’s vandigeddikesyre fører til benzyl-2-acetamido-3-0-<D-l-[ (D-l-carbamoyl-3-carboxypropyl)-carbamoylmethyl ]-carbamoyl-propyl>-2-deoxy-a-D-glucopyranosid-benzylester, der krystalliserer fra methanol/ether, smp. 180-185°C/ [ a J2° =+87° ± 1° (methanol, c = 1,035).

Eksempel 31 4 g N-^tert-butoxycarbonyl-L-alanyl-D-isoglutamin-benzylesteropløses ved stuetemperatur og under udelukkelse af fugtighedi en blanding af 4 ml trifluoreddikesyre og 4 ml1,2-dichlorethan og henstår i 16 timer. Denne reaktionsblanding fortyndes nu med 30 ml 1,2-dichlorethan ogneutraliseres under udvendig køling med triethylamin, og dertilsættes en opløsning 3,7 g benzyl-2-acetamido-3-0-carboxy-methyl-2-deoxy-a-D-glucopyranosid og 1,38 ml triethylamin i100 ml tetrahydrofuran. Efter tilsætning af 2,6 g2-ethoxy-N-ethoxycarbonyl-l,2-dihydroquinolin (EEDQ) laderman blandingen henstå i 24 timer ved stuetemperatur oginddamper til tørhed. Man opløser remanensen i chloroform/methanol 9:1 og vasker denne opløsning med vand,iskold 2 N saltsyre, vand, en mættet natriumhydrogencar-bonatopløsning og vand og afdamper opløsningsmidlet. Densåledes opnåede benzyl-2-acetamido-3-0-<[ L-l-(D-l-carbamo-yl-3-carboxypropyl)-carbamoylethyl ]-carbamoylmethyl>-2-de-oxy-a-D-glucopyranosid-benzylester omkrystalliseres fraethanol, smp. 208-2l2°C, [a]2®= +77° ± 1° (N,N-dimethyl-formamid, c = 0,546).

Efter den hydrogenolytiske fraspaltning af de to benzylgrup-per, som i eksempel 2 beskrevet, får man 2-acetamido-3-0-<[ L-l-(D-l-carbamoyl-3-carboxypropyl)-carbamoylethyl ]-carb-amoylmethyl>-2-deoxy-D-glucose.

Eksempel 32

En opløsning af 3,8 g benzyl-2-acetamido-3-0-<[L-1-(D-1,3-dicarboxypropyl)-carbamoylethyl ]-carbamoylmethyl)-2-deoxy-or-D-glucopyranosid-dimethylester i 100 ml methanol hydroge¬neres under tilstedeværelse af 5%'s palladium-kul vednormaltryk og stuetemperatur. Efter endt hydrogenoptagelsefiltreres katalysatoren fra, og filtratet inddampes tiltørhed. Remanensen optages i 70 ml vand og frysetørres. Detopnåede skum er 2-acetamido-3-0-<[ L-l-(D-l,3-dicarboxy-propyl) -carbamoylethyl ]-carbamoylmethyl >-2-deoxy-D-glucose-dimethylester med [ot]§0 = +23° ± 1° (vand, c = 0,814).

Det anvendte udgangsmateriale kan fremstilles som følger:

Til en opløsning af 12,9 g benzyl-2-acetamido-4,6-0-benzyliden-3-0-carboxymethyl-2-deoxy-Q!-D-glucopyranosid og 4,0 mltriethylamin i 100 ml Ν,Ν-dimethylformamid sættes 8,1 gL-alanyl-D-glutaminsyredimethylester-hydrochlorid og 6,95 g 2- ethoxy-N-ethoxycarbonyl-l,2-dihydroquinolin (EEDQ), og blandingen henstår i 20 timer ved stuetemperatur, derefterafdamper man opløsningsmidlet, optager remanensen i chloroform og vasker denne opløsning med vand, iskold 2 Nsaltsyre, vand, en mættet natriumhydrogencarbonatopløsningog vand. Efter tørring med magnesiumsulfat inddamper man tiltørhed. Remanensen ekstraheres med varmt ethanol, og denuopløste benzyl-2-acetamido-4,6-0-benzyliden-3-0-<[ L-1-(D- 1,3-dicarboxypropyl)-carbamoylethyl ]-carbamoylmethyl>-2-de-oxy-a-D-glucopyranosid-dimethylester filtreres fra og tørres, [a ]§0 = +22° ± 1° (chloroform, c = 1,160).

En opløsning af 15,6 g benzyl-2-acetamido-4,6-0-benzyliden- 3- 0-<[L-1-(D-1,3-dicarboxypropyl)-carbamoylethyl ]-carbamoylmethyl )-2-deoxy-o;-D-glucopyranosid-dimethylester i 420 ml iseddike og 280 ml vand opvarmes til 10°C. Efter 4timers omrøring ved denne temperatur afkøles reaktionsbian- dingen, og der inddampes til tørhed. Til remanensen sættesendnu tre gange 100 ml vand, og hver gang inddampes tiltørhed. Remanensen optages også i chloroform. Denneopløsning vaskes med vand, tørres med magnesiumsulfat oginddampes til tørhed. Man får således benzyl-2-acetamido-3-0-<[ L-l-(D-l,3-dicarboxypropyl)-carbamoylethyl ]-carbamo-ylmethyl>-2-deoxy-a-D-glucopyranosid-dimethylester som engullig harpiks med [ a = +31° ± 1° (chloroform, c = 1,070).

Eksempel 33

En opløsning af 6,1 g benzyl-3-0-<[ L-l-(D-l-carbamoyl-3-carboxypropyl)-carbamoylethyl ]-carbamoylmethyl>-2-deoxy-2-propionamido-a-D-glucopyranosid-benzylester i 200 mltetrahydrofuran/vand 2:1 hydrogeneres under tilstedeværelseaf 0,6 g 5%'s palladium-kul ved normaltryk og stuetempera¬tur. Efter endt hydrogenoptagelse suges katalysatoren fra,og filtratet inddampes. Til remanensen sættes 150 ml vand,og den hydrogeneres under tilstedeværelse af 5%’s palladium¬kul, indtil der ikke optages mere hydrogen. Man filtrererkatalysatoren fra og lyofiliserer. Man får således 3-0-<[L- 1-(D-l-carbamoyl-3-carboxypropyl)-carbamoylethyl ]-carbamoyl-methyl)-2-deoxy-2-propionamido-D-glucose med [ α ]§0 = +8° (vand, c = 1,146).

Det anvendte udgangsmateriale kan fremstilles som følger:

Til en opløsning af 90 g benzyl-2-acetamido-2-deoxy-o:-D-glucopyranosid i 900 ml Ν,Ν-dimethylformamid sættes underomrøring, udelukkelse af fugtighed og isvandkøling 0,3 mlmethansulfonsyre. Derefter tildrypper man i løbet af en timeen opløsning af 60 ml isopropenylmethylether i 240 ml N,N-dimethylformamid, omrører i endnu to timer ved stuetemperatur og indstiller med triethylamin til basiskreaktion. Opløsningsmidlet destilleres af, og remanensen optages i ethylacetat. Denne opløsning vaskes med vand,tørres med magnesiumsulfat og inddampes til tørhed.Produktet, benzyl-2-acetamido-2-deoxy-4,6-0-isopropyliden-α-D-glucopyranosid, krystalliseres fra ether, smp.136-137°C, [a]g° = +103° ± 1° (chloroform, c = 1,125).

52,5 g benzyl-2-acetamido-2-deoxy-4,6-0-isopropyliden-α-D-glucopyranosid opløses i en opløsning af 225 gkaliumhydroxid i 750 ml ethanol og 40 ml destilleret vand ogkoges i 4 1/2 time under tilbagesvaling. Efter afkølinginddampes reaktionsblandingen til halvt volumen og hældes påis. Man ekstraherer med chloroform, vasker den organiskefase med vand, tørrer med magnesiumsulfat og inddamper tiltørhed. Remanensen, benzyl-2-amino-2-deoxy-4,6-0-isopropyl-iden-a-D-glucopyranosid, krystalliseres fra ether, smp.145-146°C, [o:]§0= +117° ± 1° (chloroform, c = 1,295).

Til en opløsning af 24,7 g benzyl-2-amino-2-deoxy-4,6-0-isopropyliden-a-D-glucopyranosid i 192 ml chloroform sættesen opløsning af 16,0 g kaliumhydrogencarbonat i 192 mldestilleret vand, og der afkøles til 0°C. Nu tildrypper manunder omrøring i løbet af 20 minutter 8,16 g propionsyre-chlorid og omrører blandingen ved denne temperatur iyderligere 50 minutter. Nu skilles den organiske fase fra,den vaskes med vand, tørres med magnesiumsulfat og inddampestil tørhed. Produktet, benzyl-2-deoxy-4,6-0-isopropyliden- 2-propionamido-a-D-glucopyranosid; krystalliseres fraethylacetat/petroleumsether, smp. 121-122°C, [a]2® = +112° ±1° (choroform, c = 0,977).

Til en opløsning af 9,1 g benzyl-2-deoxy-4,6-0-isopropyl-iden-2-propionamido-a-D-glucopyranosid i 90 ml acetonitrilsættes 1,25 g natriumhydrid (tekn. Fluka), og der omrøres i2 timer ved 40°C. Derefter afkøler man til -5 til -10°C ogtilsætter 4,2 ml bromeddikesyreethylester. Efter yderligere20 minutter tilsættes 10 ml ethanol, reaktionsblandingen neutraliseres med iseddike og inddampes til tørhed.Remanensen fordeles mellem ether og vand, etheropløsningenvaskes med vand, tørres med magnesiumsulfat og inddampes.Produktet, benzyl-3-0-carboxymethyl-2-deoxy-4,6-0-iso-propyliden-2-propionamido-a-D-glucopyranosid-ethylester,krystalliseres fra ether/petroleumsether, smp. 94-95°C, [ a ]§0 = +145° ± 1° (chloroform, c = 1,218).

Til en opløsning af 6,8 g benzyl-3-O-carboxymethyl- 2- deoxy-4,6-0-isopropyliden-2-propionamido-a-D- glucopyranosid-ethylester i 70 ml methanol sættes 22,5 ml 1N natriumhydridopløsning. Efter endt esterhydrolyse tilsætter man 7,5 ml 1 N saltsyre og inddamper til tørhed.Produktet opløses i 50 ml N,N-dimethylformamid og kondenseres med 15 mmol L-alanin-D-isoglutaminbenzylester-trifluoracetat under tilstedeværelse af 3,72 g 2-ethoxy-N-ethoxycarbonyl-1,2-dihydroquinolin (EEDQ). Derefter inddamper man til tørhed og optager remanensen i chloro¬form. Man vasker denne opløsning med vand, iskold 2 Nsaltsyre, vand, en mættet natriumhydrogencarbonatopløs-ning og vand, tørrer med magnesiumsulfat og inddamper tiltørhed. Produktet krystalliseres fra fortyndet ethanol, smp.177-180°C, [a]g° = +71° ± 1° (chloroform, c = 1,047).

Til en opløsning 8,1 g benzyl-3-0-<[ L-l-(D-l-carbamoyl- 3- carboxypropyl)-carbamoylethyl ]-carbamoylmethyl>-2-deoxy- 4,6-0-isopropyliden-2-propionamido-o:-D-glucopyranosid-ben-zylester i 150 ml methanol sættes 15 ml 1 N saltsyre, ogblandingen henstår i en time ved stuetemperatur. Mantilsætter nu 15 ml 1 N natriumhydroxidopløsning og inddampertil tørhed. Den opnåede benzyl-3-0-<[ L-l-(D-l-carbamoyl- 3-carboxypropyl)-carbamoylethyl ]-carbamoylmethyl>-2-deoxy-2-propionamido-a-D-glucopyranosid-benzylester krystalliseresfra methanol/vand og tørres. Smp. 208-210°C, = +75° ± 1° (N,N-dimethylformamid, c = 1,120).

Eksempel 34

Ved katalytisk hydrogenering af benzyl-3-0-<[ L-l-(D-l-carb-amoyl-3-carboxypropyl)-carbamoylethyl ]-carbamoylmethyl>-2-caprinoylamido-2-deoxy-D-glucopyranosid-benzylester iΝ,Ν-dimethylformamid under tilstedeværelse af 5%' spalladium-kul får man 3-0-<[ L-l-(D-l-carb-amoyl-3-carboxypropyl)-carbamoylethyl ]-carbamoylmethyl>-2-caprinoylamido-2-deoxy-a-D-glucose som hvidt skum med [ or= +11° (vand, c = 1,052).

Det anvendte udgangsmateriale kan fremstilles som følger:

Analogt med eksempel 46 omsættes 24,7 gbenzyl-2-amino-2-deoxy-4,6-0-isopropyliden-or-D-glucopyranosidmed 16,7 g caprinoylchorid og oparbejdes. Man får benzyl-2-caprinoylamido-2-deoxy-4,6-0-isopropyliden-or-D-glucopyranosidmed [ o; = +81° ± 1° (chloroform, c = 1,019).

Til en opløsning af 3,8 g benzyl-2-caprinoylamido-2-deoxy- 4,6-0-isopropyliden-or-D-glucopyranosid i 40 ml acetonitrilsættes 0,4 g natriumhydrid af teknisk kvalitet, og deromrøres i 2 timer ved 40°C. Derefter afkøler man denneblanding til -10°C, tilsætter 1,4 ml bromeddikesyre-ethyl-ester og omrører endnu en time ved 0°C. Oparbejdet som ieksempel 33 beskrevet får man benzyl-3-0-carboxymethyl-2-caprinoylamido-4,6-0-isopropylideii-2-deoxy-or-D-glucopyra-nosid-ethylester som en gulbrun olie med [or ]g° = +114° ± 1°(chloroform, c = 1,242).

Analogt med eksempel 33 hydrolyseres ethylesteren, produktetkondenseres med L-alanin-D-isoglutaminbenzylestertrifluor-acetat under tilstedeværelse af EEDQ, og isopropyliden-ketalen spaltes ved mild sur hydrolyse. Således fås benzyl- 3-0-<[ L-l-(D-l-carbamoyl-3-carboxypropyl)-carbamoylethyl ]-carbamoylmethyl )-2-caprinoylamido-2-deoxy-or-D-glucopyrano- sid-benzylester som en gullig harpiks, snip. 192-193°C.

Eksempel 35

En 5%'s opløsning af benzyl-2-acetamido-2-deoxy-3-0-<[L-l-(D-l,3-bis-methylcarbamoylpropyl)-carbamoylethyl ]-carbamoyl-methyl>-a-D-glucopyranosid i destilleret vand/methanol 1:1hydrogeneres med 5%'s palladium-kul. Katalysatoren filtreresfra, og filtratet inddampes. Produktet, 2-acetamido-2-deoxy-3—0—<[ L-l-(D-l,3-bis-methyl-carbamoylpropyl)-carbamoyleth¬yl ]-carbamoylmethyl>-D-glucose, frysetørres, [a]j§0 = +31° (vand, c = 0,41).

Udgangsmaterialet kan fremstilles som følger:

Til en opløsning af 9,1 g benzyl-2-acetamido-4,6-0-benzyl-iden-3-0-carboxymethyl-2-deoxy-a-D-glucopyranosid i 100 mlΝ,Ν-dimethylformamid og 2,77 ml triethylamin sættes 5,6 gL-alanyl-D-glutaminsyre-bis-methylamid-hydrochlorid og 5,1 g2-ethoxy-N-ethoxycarbonyl-l,2-dihydroquinolin, og blandingenhenstår i 48 timer ved stuetemperatur. Opløsningsmidletafdestilleres nu, og til den olieagtige remanens sættesvand, det uopløselige filtreres fra, vaskes med vand ogtørres. Dette produkt bliver endnu to gange omrørt medether, filtreret fra og tørret og er benzyl-2-acetamido- 4,6-0-benzyliden-2-deoxy-3-0-<[ L-l-(D-l,3-bis-methylcarb-amoylpropyl)-carbamoylethyl ]-carbamoylmethyl >-a-D-glucopy-ranosid.

Ved mild sur hydrolyse, som beskrevet i eksempel 29, med60%'s eddikesyre fraspaltes benzylidengruppen, og produktet,benzyl-2-acetamido-2-deoxy-3-0-<[ L-l-(D-l,3-bis-methylcarb-amoylpropyl)-carbamoylethyl ]-carbamoylmethyl>-a-D-glucopy-ranosid, isoleres.

Eksempel 36

En 5%’s vandig opløsning af benzyl-2-acetamido-3-0-<[L-l-(D-l-carbamoyl-3-carboxypropyl)-carbamoyl-2-hydroxyethyl ]-carbamoylmethyl}-2-deoxy-a-D-glucopyranosid hydrogeneres under tilstedeværelse af 5%'s palladium-kul, filtreres ogfrysetørres. Man får således 2-acetamido-3-0-<[ L-l-(D-l-carbamoyl-3-carboxypropyl)-carbamoyl-2-hydroxyethyl ]-carbamoylmethyl)-2-deoxy-D-glucose med [α J§° = +10° (vand, c- 1,653).

Udgangsmaterialet kan fremstilles som følger:

Til en opløsning af 3,7 g benzyl-2-acetamido-3-0-carboxy-methyl-2-deoxy-G!-D-glucopyranosid og 1,38 ml triethylamin i150 ml tetrahydrofuran sættes 3,26 g L-serin-D-isoglutamin-tert-butylester-hydrochlorid og 2,6 g 2-ethoxy-N-ethoxycar-bonyl-1,2-dihydroquinolin (EEDQ), og blandingen henstår i 20timer ved stuetemperatur. Efter afdampning afopløsningsmidlet opløses remanensen i chloroform/methanol9:1, vaskes med vand, iskold 2 N saltsyre, vand, en mættetnatriumhydrogencarbonatopløsning og vand, filtreres ogbefries for opløsningsmiddel. Man får således benzyl-2-acetamido-3-0-<[ L-l-(D-l-carbamoyl-3-carboxylpropyl)-carb¬amoyl-2-hydroxyethyl ]-carbamoylmethyl >-2-deoxy-or-D-gluco-pyranosid-tert-butylester.

Ved mild sur hydrolyse, som beskrevet i eksempel 11,hydrolyseres tert-butylesteren, og der fås benzyl-2-acet-amido-3-0-<[L-l-(D-l-carbamoyl-3-carboxypropyl)-carbamoYl-2-hydroxyethyl ]-carbamoylmethyl>-2-deoxy-a-D-glucopyranosid.

Eksempel 37

En 5%'s opløsning af benzyl-2-acetamido-3-0-<[L-l-(D-l-carb-amoyl-3-carboxypropyl)-carbamoylbutyl ]-carbamoylmethyl>-2- deoxy-a-D-glucopyranosid i methanol/vand 1:1 hydrogeneresunder tilstedeværelse af 5%'s palladium-kul, filtreres oginddampes. Remanensen opløses i destilleret vand ogfrysetørres. Man får således 2-acetamido-3-0-<[ L-1-(D-1-carbamoyl-3-carboxypropyl)-carbamoylbutyl ]-carbamoylmeth-yl)-2-deoxy-D-glucose, [ a ]§0 = +12° (vand, c = 0,722).

Udgangsmaterialet kan fremstilles som følger:

Til en opløsning af 3,7 g benzyl-2-acetamido-3-0-carboxy-methyl-2-deoxy-G!-D-glucopyranosid og 1,38 ml triethylamin i100 ml tetrahydrofuran sættes 3,28 g L-norvalin-D-isoglut-amin-tert-butylesterhydrochlorid og 2,6 g 2-ethoxy-N-ethoxy-carbonyl-l,2-dihydroquinolin (EEDQ), og blandingen henstår i24 timer ved stuetemperatur. Reaktionsblandingen oparbej¬des som i eksempel 36. Man får benzyl-2-acetamido-3-0-<[ L- 1- (D-l-carbamoyl-3-carboxypropyl)-carbamoylbutyl ]-carbamo- ylmethyl >-2-deoxy-o!-D-glucopyranosid-tert-butylester, smp.

202-204°C.

Tert-butylesteren spaltes ved mild sur hydrolyse.

Eksempel 38

En opløsning af 8,3 g benzyl-3-0-<[ L-l-(D-l-carbamoyl-3-carboxypropyl)-carbamoylethyl ]-carbamoylmethyl>-2-deoxy- 2- stearoylamido-a-D-glucopyranosid-benzylester i 200 ml iseddike hydrogeneres under tilstedeværelse af 5%'spalladium-kul ved normaltryk og stuetemperatur. Efteroparbejdning får man 3-0-<[ L-l-(D-l-carbamoyl-3-carboxypropyl)-carbamoylethyl ]-carbamoylmethyl>-2-deoxy-2-stearoylamido-D-glucose som et hvidt pulver, [ a ]β0 = +24° (dimethylformamid, c = 0,663).

Det anvendte udgangsmateriale kan fremstilles som følger:

Til en opløsning af 6,2 g benzyl-4,6-0-benzyliden-2-deoxy- 2- stearoylamido-a-D-glucopyranosid i 150 ml N,N-d'imethyl- formamid sættes 0,75 g natriumhydrid (teknisk), og deromrøres i 1 1/2 time ved 40°C. Nu afkøles blandingen til-5°C, der tilsættes 2,2 ml bromeddikesyreethylester ogomrøres i 4 timer ved stuetemperatur. Efter tilsætning af 10ml iseddike og 400 ml destilleret vand ekstraheres medchloroform, den organiske fase vaskes med vand, tørres oginddampes til tørhed. Den opnåede benzyl-4,6-0-benzyliden- 3- 0-carboxymethyl-2-deoxy-2-stearoylamido-a-D-glucopyrano-sid-ethylester krystalliseres fra ethanol, smp. 151-154°C, [ α ]§0 = +94° ± 1° (chloroform, c = 1,186).

Til en opløsning af 23,4 g benzyl-4,6-0-benzyliden-3-0-carboxymethyl-2-deoxy-2-stearoylamido-a-D-glucopyranosid-ethylester i 334 ml methanol og 334 ml tetrahydrofuransættes 50,1 ml 1 N natriumhydroxidopløsning, der omrøres i90 minutter ved 50°C og inddampes. Remanensen omrøres iisvand, og produktet suges fra, vaskes med vand, tørres ogomkrystalliseres fra ethanol. Benzyl-4,6-0-benzyliden-3-0-carboxymethyl-2-deoxy-2-stearoylamido-o!-D-glucopyranosid-natriumsalt.lH20 smelter ved 225-242°C (under sønderde¬ling), [ α ]§0 = +45° ± 1° (chloroform, c = 1,097).

Til en opløsning af 14,4 g (20 mmol) benzyl-4,6-0-benzyl-iden-3-0-carboxymethyl~2-deoxy-2-stearoylamido-a-O-gluco-pyranosid-natriumsalt-monohydrat i 120 ml tetrahydrofuransættes 20 mmol L-alanin-D-isoglutaminbenzylester-trifluor-acetat og 4,95 g (20 mmol) 2-ethoxy-N-ethoxycarbonyl-l,2-dihydroquinolin (EEDQ). Blandingen henstår i 20 timer vedstuetemperatur og inddampes til tørhed. Man opløserremanensen i chloroform, vasker denne opløsning med vand,iskold 2 N saltsyre, vand, en mættet natriumhydrogencarbo-natopløsning og vand, tørrer med magnesiumsulfat oginddamper. Produktet, benzyl-4,6-0-benzyliden-3-0-<[ L-l-(D-l-carbamoyl-3-carboxypropyl)-carbamoylethyl ]-carbamoyl- methyl>-2-deoxy-2-stearoylamido-a-D-glucopyranosid-benzyl-ester, omkrystalliseres fra ethanol , [a]20 = +62· 1 1· (Ν,Ν-dimethylformamid, c = 1,148).

Mild sur hydrolyse af dette benzylidenderivat i 65%’seddikesyre fører til benzyl-3-0-<[ L-l-(D-l-carbamoyl-3-carb-oxypropyl)-carbamoylethyl ]-carbamoylmethyl>-2-deoxy-2-stearoylamido-a-D-glucopyranosid-benzylester, smp.

188-189°C, = +59° ± 1° (Ν,Ν-dimethylformamid, c = 1,022).

Eksempel 39

En 5%'s vandig opløsning af benzyl-2-acetamido-3-0-<[ L-l-(D-l-carbamoyl-3-carboxypropyl)-carbamoyl-2-methylpropyl ]-carbamoylmethyl>-2-deoxy-a-D-glucopyranosid hydrogeneres under tilstedeværelse af 5%’s palladium-kul, filtreres, ogfiltratet lyofiliseres. Man får således 2-acetamido-3-0-[ L-l-(D-l-carbamoyl-3-carboxypropyl)-carbamoyl-2-methylpropyl ]-carbamoylmethyl-2-deoxy-D-glucose, [a W -+11° (vand, c = 1,096).

Udgangsmaterialet kan fremstilles som følger:

Til en opløsning af 3,7 g benzyl-2-acetamido-3-0-carboxy-methyl-2-deoxy-a-D-glucopyranosid og 1,38 ml triethylamin i100 ml tetrahydrofuran sættes 3,38 g L-valin-D-isoglutamin-tert-butylester-hydrochlorid og 2,6 g 2-ethoxy-N-ethoxycar-bonyl-l,2-dihydroquinolin. Blandingen henstår i 24 timer vedstuetemperatur og oparbejdes som beskrevet i eksempel 38.Man får således benzyl-2-acetamido-3-0-<[L-l-(D-l-carba-moyl-3-carboxypropyl)-carbamoyl-2-methylpropyl ]-carbamoyl-methyl)-2-deoxy-or-D-glucopyranosid-tert-butylester, - derhydrolyseres mildt surt til benzyl-2-acetamido-3-0-<[ L-l-(D-l-carbamoyl-3-carboxypropyl)-carbamoyl-2-methylpropyl ]-carbamoylmethyl>-2-deoxy-a-D-glucopyranosid.

Eksempel 40

En 5%'s opløsning af benzyl-2-acetamido-3-0-<[ L-l-.(D-l-carb-amoyl-3-carboxypropyl)-carbamoyl-3-methylbutyl ]-carbamoyl-methyl)-2-deoxy-a-D-glucopyranosid i 50%'s vandigt methanolhydrogeneres under tilstedeværelse af 5%'s palladium-kul,filtreres og inddampes. Remanensen opløses i destilleretvand, filtreres endnu en gang og frysetørres. Man fårsåledes 2-acetamido-3-0-<[ L-l-(D-l-carbamoyl-3-carboxyprop-yl)-carbamoyl-3-methylbutyl ]-carbamoylmethyl>-2-deoxy-D-glucose, [a]§0 = +16° (vand, c = 1,06).

Det anvendte udgangsmateriale kan fremstilles som følger:

Til en opløsning af 3,7 g benzyl-2-acetamido-3-0-carboxy-methyl-2-deoxy-a-D-glucopyranosid og 1,58 ml triethylamin i100 ml tetrahydrofuran sættes 3,52 g L-leucin-D-isoglutamin-tert-butylester-hydrochlorid og 2,6 g 2-ethoxy-N-ethoxycar-bonyl-l,2-dihydroquinolin (EEDQ). Blandingen henstår i 24timer ved stuetemperatur og oparbejdes som beskrevet ieksempel 38. Man får benzyl-2-acetamido-3-0-<[ L-1-(D-1-carbamoyl-3-carboxypropyl)-carbamoyl-3-methylbutyl ]-carba-moylmethyl>-2-deoxy-a-D-glucopyranosid-tert-butylester, somved mild sur hydrolyse fører til benzyl-2-acetamido-3-0-<[ L-l-(D-l-carbamoy1-3-carboxypropyl)-carbamoy1-3-methyl-butyl ]-carbamoylmethyl )-2-deoxy-Q!-D-glucopyranosid.

Eksempel 41

En 5%'s opløsning af benzyl-2-acetamido-3-0-<[L-1-(D-1-carbamoyl-3-carboxypropyl)-carbamoylpropyl ]-carbamoyl-methyl>-2-deoxy-a-D-glucopyranosid i 50%'s vandigt methanolhydrogeneres under tilstedeværelse af 5%'s palladium-kul vednormaltryk og stuetemperatur, filtreres fra katalysatoren oginddampes. Remanensen opløses i destilleret vand ogfrysetørres. Man får således 2-acetamido-3-0-<[L-1-(D-1- carbamoyl-3-carboxypropyl)-carbamoylpropyl ]-carbamoylmeth-yl>-2-deoxy-D-glucose, [a]§® = +11° (vand, c = 1,019).

Udgangsmaterialet kan fremstilles som følger:

Til en opløsning af 3,7 g benzyl-2-acetamido-3-0-carboxy-methyl-2-desoxy-a-D-g,lucopyranosid og 1,38 ml triethylamin i100 ml tetrahydrofuran sættes 3,24 g N-a-L-aminobutyryl-D-isoglutamin-tert-butylester-hydrochlorid og 2,6 g 2-ethoxy-N-ethoxycarbony1-1,2-dihydroquinolin, og efter 24 timer vedstuetemperatur oparbejdes blandingen som beskrevet ieksempel 36. Den opståede benzyl-2-acetamido-3-0-<[ L-l-(D-l-carbamoyl-3-carboxypropyl)-carbamoylpropyl ]-carbamoyl-methyl>-2-deoxy-a-D-glucopyranosid-tert-butylester hydroly¬seres derefter mildt surt til benzyl-2-acetamido-3-0-<[ L-l-(D-l-carbamoyl-3-carboxypropyl)-carbamoylpropyl ]-carbamoyl-methyl)-2-deoxy-a-D-glucopyranosid.

Eksempel 42

En 5%'s opløsning af benzyl-2-acetamido-3-0-<[-L-1-(D-1-carbamoyl-3-carboxypropyl)-carbamoylphenylmethyl ]-carbamo-ylmethyl)-2-deoxy-a-D-glucopyranosid i 50%'s vandigtmethanol hydrogeneres under tilstedeværelse af 5%'spalladium-kul ved normaltryk og stuetemperatur, filtreresfra katalysatoren og inddampes. Remanensen opløses idestilleret vand og frysetørres og er 2-acetamido-3-0-<[ L- 1-(D-l-carbamoyl-3-carboxypropyl)-carbamoylphenylmethyl ]-carbamoylmethyl>-2-deoxy-D-glucose.

Udgangsmaterialet kan fremstilles som følger:

Til en opløsning af 3,7 g benzyl-2-acetamido-3-0-carboxy-methyl-2-desoxy-a-D-glucopyranosid og 1,38 ml triethylamin i100 ml tetrahydrofuran sættes 3,72 g 1-phenylglycin-D-iso-glutamin-tert-butylester-hydrochlorid og 2,6 g 2-ethoxy-N- ethoxycarbonyl-1,2-dihydroquinol±n (EEDQ). Blandingen henstår i 24 timer ved stuetemperatur og oparbejdes sombeskrevet i eksempel 36. Man får således benzyl-2-acetami-do-3-0-<[ L-l-(D-l-carbamoyl-3-carboxypropyl)-carbamoylphen-ylmethyl ]-carbamoylmethyl>-2-deoxy-a-D-glucopyranasid-tert-butylester, der hydrolyseres mildt under sure betingelsertil benzyl-2-acetamido-3-0-<[ L-l-(D-l-carbamoyl-3-carboxy-propyl)-carbamoylphenylmethyl ]-carbamoylmethyl)-2-deoxy-a-D-glucopyranosid.

Eksempel 43

Til en opløsning af 3,5 g benzyl-2-acetamido-3-0-<[L-1-(D-1,3-bis-carbamoylpropyl)-carbamoylethyl ]-carbamoylmethyl>- 2-deoxy-4,6-0-isopropyliden-j3-D-glucopyranosid i 50 mliseddike sættes under omrøring ved 55eC dråbevis i løbet af15 minutter 50 ml destilleret vand, og der omrøres i en timeved denne temperatur. Efter afkøling tilsætter man endnu 100ml destilleret vand og afdamper opløsningsmidlet ivandstrålevakuum. Til remanensen sættes 20 ml vand, og derfrysetørres. Man får således benzyl-2-acetamido-3-0-<[L-l-(D-l,3-bis-carbamoylpropyl)-carbamoylethyl ]-carbamoylmeth-yl)-2-deoxy-0-D-glucopyranosid med [a]§0 = -44° ± 1° (N,N-dimethylformamid, c = 0,989).

Det anvendte udgangsmateriale kan fremstilles som følger:

Til en opløsning af 30 g benzyl-2-acetamido-2-deoxy-/3-D-glucopyranosid i 300 ml Ν,Ν-dimethylformamid sættes underomrøring, udvendig køling og udelukkelse af fugtighed 0,1 mlmethansulfonsyre. Nu tildrypper man i løbet af en time enopløsning af 20 ml isopropenylmethylether i 60 mlΝ,Ν-dimethylformamid, omrører derefter i to timer, vedstuetemperatur og indstiller med triethylamin til basiskreaktion. Efter afdampning af opløsningsmidletkrystalliseres benzyl-2-acetamido-2-deoxy-4,6-0-isopropyl- iden-Ø-D-glucopyranosidet fra ethylacetat, smp. 194°C, [a ]2°= -104° ± 1° (chloroform, c = 0,850).

Til en opløsning af 36,2 g benzyl-2-acetamido-2-deoxy-4,6-O-isopropyliden-Ø-D-glucopyranosid i 400 ml acetonitril og100 ml Ν,Ν-dimethylformamid sættes 4,95 g natriumhydrid(teknisk), og der omrøres i 2 timer ved 40°C. Nu afkølesdenne blanding til -10°C, der tilsættes 17,2 mlbromeddikesyreethylester og omrøres i 30 minutter ved 0°C.Man tilsætter nu 40 ml ethanol, neutraliserer med iseddikeog inddamper til tørhed. Remanensen fordeles mellem ether ogdestilleret vand, etherfasen vaskes med vand, tørres medmagnesiumsulfat og inddampes. Produktet, benzyl-2-acetamido- 3-0“carboxymethyl-2-deoxy-4,6-0-isopropyliden-Ø-D-gluco-pyranosid-ethylester, krystalliseres fra ether, smp.93-94°C, [a]g° = -49° t 1° (CHC1 3 c = 1,001).

Til en opløsning af 6,56 g benzyl-2-acetamido-3-0-carbamo-ylmethyl-2-deoxy-4,6-0-isopropyliden-/3-D-glucopyranosid-ethylester i 70 ml methanol sættes 22,5 ml 1 N natrium¬hydroxidopløsning. Efter endt esterhydrolyse tilsætter man 7,5 ml 1 N saltsyre og inddamper til tørhed. Det opnåedenatriumsalt opløses i 50 ml Ν,Ν-dimethylformamid, og dertilsættes 3,7 g L-alanyl-D-glutaminsyre-diamid-hydrochloridog 3,72 g 2-ethoxy-N-ethoxycarbonyl-l,2-dihydroquinolin(EEDQ). Efter 24 timers henstand ved stuetemperaturinddampes til tørhed, remanensen opløses i vand ogekstraheres med methylenchlorid og to gange med n-butanol.Produktet, som er tilbage efter afdestillation afn-butanolet, er benzyl-2-acetamido-3-0-<[ L-1-(D-1,3-bis-carbamoylpropyl)-carbamoylethyl ]-carbamoylmethyl>-2-de-oxy-4,6-0-isopropyliden-(3-D-glucopyranosid.

Eksempel 44

Til en opløsning 5,1 g benzyl-2-acetamido-3-0-<[L-1-(D-1,3-bis-carboxypropyl)-carbamoylethyl ]-carbamoylmethyl>-2-deoxy-4,6-0-isopropyliden-Ø-D-glucopyranosid-dimethylester i 120ml iseddike sættes under omrøring ved 50°C dråbevis 80 mldestilleret vand, og der omrøres i 1 time ved dennetemperatur. Efter afdampning af eddikesyren får man benzyl-2-acetamido-3-0-<[ L-l-(D-l,3-bis-carboxypropyl)-carbamoyl¬ethyl ]-carbamoylmethyl >-2-deoxy-/3 -D-glucopyranosid-dimethylester,smp. 195-197°C.

Det anvendte udgangsmateriale kan fremstilles som følger: 6,56 g benzyl-2-acetamido-3-0-carboxymethyl-2-deoxy-4,6-0-isopropyliden-Ø-D-glucopyranosid-ethylester hydrolyseres sombeskrevet i eksempel 43 med natriumhydroxidopløsning ogkondenseres med 4,24 g L-alanyl-D-glutaminsyre-dimethyl-ester-hydrochlorid under tilstedeværelse af 3,72 g 2-ethoxy-N-ethoxycarbonyl-l,2-dihydroquinolin. Efter afdampning af opløsningsmidlet optages remanensen ichloroform og vaskes med vand, iskold 2 N saltsyre, vand,en mættet natriumhydrogencarbonatopløsning og vand, tørresover magnesiumsulfat og inddampes til tørhed. Remanensener benzyl-2-acetamido-3-0-<[ L-l-(D-l,3-bis-carboxypropyl)-carbamoylethyl ]-carbamoylmethyl)-2-deoxy-4,6-0-isopropyl-iden-β-D-glucopyranosid-dimethylester.

Eksempel 45

En 5%’s opløsning af benzyl-2-acetamido-3-0-<[L-1-(D-1-carbamoylmethylcarbamoyl-3-carboxypropyl)-carbamoylethyl ]-carbamoylmethyl)-2-deoxy-a-D-glucopyranosid-benzylester itetrahydrofuran/vand 2:1 hydrogeneres under tilstedeværelseaf 5%'s palladium-kul ved normaltryk og stuetemperatur.Efter at ca. 50% af den teoretiske mængde hydrogen er opta- get, filtrerer man katalysatoren fra og inddamper.Remanensen opløses nu i destilleret vand og hydrogeneresvidere. Efter at den teoretiske mængde hydrogen er optaget,filtreres katalysatoren fra, og filtratet frysetørres. Manfår således 2-acetamido-3-0-<[ L-l-(D-l-carbamoylmethylcarb-amoyl-3-carboxypropyl)-carbamoylethyl ]-carbamoylmethyl>-2-deoxy-D-glucose som et hvidt pulver, [a ]§0 = +10° (vand, c= 0,706).

Udgangsmaterialet kan fremstilles som følger: 4,8 g N-tert-butoxycarbonyl-L-alanin-D-glutamin-7-benzyl-ester-glycinamid-monohydrat opløses i en blanding af 5 mltrifluoreddikesyre og 5 ml 1,2-dichlorethan og henstår underudelukkelse af fugtighed i 16 timer ved stuetemperatur. Manfortynder denne opløsning med 50 ml tetrahydrofuran, afkøleri isbad og neutraliserer med triethylamin. Efter tilsætningaf opløsningen af 3,7 g benzyl-2-acetamido-3-carboxymethyl-2-deoxy-a-D-glucopyranosid og 1,38 ml triethylamin i 100 mltetrahydrofuran sættes der til det hele 2,6 g 2-ethoxy-N-ethoxycarbonyl-l,2-dihydroquinolin, og blandingen henstår i24 timer ved stuetemperatur og oparbejdes som beskrevet ieksempel 36. Man får således benzyl-2-acetamido-3-0-<[L-l-(D-l-carbamoylmethylcarbamoyl-3-carboxypropyl)-carbamoyl-ethyl ]-carbamoylmethyl>-2-deoxy-a-D-glucopyranosid-benzyl-ester.

Eksempel 46

En opløsning af 5,2 g benzyl-4,6-0-benzyliden-3-0-<[ L-l-(D-l-carbamoyl-3-carboxypropyl)-carbamoylethyl ]-carbamoyl-methyl>-2-desoxy-2-p-tolylsulfonylamino-a-D-glucopyranosid-benzylester i 120 ml 70%'s vandig eddikesyre hydrogeneresunder tilstedeværelse af palladium-kul ved normaltryk ogstuetemperatur. Efter at den teoretiske hydrogenmængde eroptaget, filtrerer man katalysatoren fra og inddamper tiltørhed. Remanensen opløses i 30 ml destilleret vand og frysetørres.Man får således 3-0-<[ L-l-(D-l-carbamoyl-3-carb-oxypropyl)-carbamoylethyl ]-carbamoylmethyl>-2-desoxy-2-p-tolyl-sulfonylamino-D-glucose som et hvidt pulver.

Det anvendte udgangsmateriale kan fremstilles som følger:

Til en opløsning af 6,0 g benzyl-2-amino-4,6-0-benzyliden-3-0-carboxymethyl-2-desoxy-a-D-glucopyranosid i 100 mlmethyl enchlorid og 6,3 ml triethylamin sættes ved 5°Cdråbevis en opløsning af 3,1 g p-toluensulfonsyrechlorid i30 ml methylenchlorid, og blandingen henstår i 16 timer vedstuetemperatur. Derefter vasker man denne opløsning medvand, 2 N natriumhydroxidopløsning, vand, kold 2 N saltsyreog vand, tørrer over magnesiumsulfat og inddamper tiltørhed. Remanensen ekstraheres gentagne gange med ether ogtørres og er benzyl-4,6-0-benzyliden-3-0-carboxymethyl-2-desoxy-2-tolylsulfonylamino-a-D-glucopyranosid med smp.185-187°C, [a]$0 = +75° ± 1° (chloroform, c = 0,855).

Til en opløsning af 5,7 g benzyl-4,6-0-benzyliden-3-0-carboxymethyl-2-desoxy-2-tolylsulfonylamino-o:-D-glucopYra-nosid og 1,01 g triethylamin i 80 ml Ν,Ν-dimethylformamidsættes 10 mmol L-alanyl-D-isoglutaminbenzylester-trifluor-acetat og 2,5 g 2-ethoxy-N-ethoxycarbonyl-l,2-dihydroquin-olin, og blandingen henstår i 24 timer ved stuetemperatur.Derefter inddamper man til tørhed, tilsætter vand,filtrerer det uopløste fra, vasker efter med vand og etherog tørrer i vakuum. Man får således benzyl-4,6-0-benz-yliden-3-0-<[L-l-(D-l-carbamoyl-3-carboxypropyl)-carbamo-ylethyl ]-carbamoylmethyl)-2-desoxy-2-tolylsulfonylamino-α-D-glucopyranosid-benzylester som et hvidt pulver.

Eksempel 47 20 g 2-amino-2-desoxy-3-(carboxymethyl)-D-glucopyranose(30%'s blanding med KC1) anbringes finpulveriseret i 100 ml absolut acetonitril. Under god omrøring og let kølingtilsætter man først 26,6 ml trimethylchiorsilan, derefter 31.5 ml triethylamin. Efter 4 timer ved stuetemperatur viser der sig i tyndtlagskromatogrammet (kiselgel, Merck) medløbemidlet chloroform:methanol = 3:1 praktisk taget kun enninhydrinpositiv plet (Rf = 0,7) af den persilylerede aminosyre. Man tilsætter yderligere 3,4 ml triethylamin og 42.5 ml af en 0,62 N opløsning af 2-methyloxazolinon-(5) iabsolut dimethylformamid og lader blandingen stå i 15 timerved stuetemperatur. Opløsningen af 2-methyloxazolinon-(5)tilberedte man af 5,85 g N-acetylglycin og 11,4 g dicyclo-hexylcarbodiimid i 40 ml dimethylformamid, idet 85% (9,6 g)af det dannede dicyclohexylurinstof filtreres fra.

Efter frafiltrering af saltene, fordeling mellem methylen-chlorid og vand og hydrolyse af silyletheren i CH2Cl2~fasenmed nogle dråber eddikesyre opnår man 2-(acetaminomethyl-carbonylamino)-2-desoxy-3-carboxymethyl-D-glucopyranose somet farveløst pulver ved gnidning med ethylacetat.

Omsætningen med L-alanyl-D-glutaminsyre-a-amid-7-benzyl-ester-trifluoracetat og 2-ethoxy-N-carbethoxy-l,2-dihydro-quinolin i DMF:methylenchlorid = 1:1 sker analogt med eksempel 33. Efter hydrogenering med 5%'s palladium-kul fårman 2-(acetaminomethylcarbonylamino)-2-desoxy-3-0-<[ L-l-(D-l-carbamoyl-3-carboxypropyl)-1-carbamoylethyl ]-carba-moylmethyl>-a, /3-D-glucose som lyofilisat.

Eksempel 48 3,2 g 2-amino-2-desoxy-3-carboxymethyl-D-glucopyranose, 2,5g K2CO3 og 4,5 g pivalinsyre-/3-nitrophenylester omrøres i100 ml dimethyl formamid ved 100°C i 15 timer. Derefterfiltrerer man saltene fra, inddamper filtratet ioliepumpevakuum og hælder dette i en vandig opløsning overionbytteren "IR-120”. Eluatet udrystes med CHCI3 og inddam- pes i vakuum til en sirup. Ved gnidning med ethylacetatopstår der et svagt gult pulver af 2-pivaloylamido-2-des-oxy-3-carboxymethyl-D-glucopyranose, smp. 89-93°C.

Udgangsstoffet 2-amino-2-desoxy-3-carboxymethyl-D-glucopyra-nose får man som følger: 100 g 2-phenyl-4,5-(3-0-carboxymethyl-5,6-isopropyliden-D-glucofurano)-Å^-oxazolin i 1000 ml 2,6 N saltsyre koges i 4timer under tilbagesvaling. Man filtrerer den udfældedebenzoesyre fra og ekstraherer filtratet tre gange med ether.Vandfasen indstiller man efter pH-meter med 3 N KOHnøjagtigt på pH-værdien 7 og klarer med aktivt kul.Derefter inddamper man i vakuum til ca. 500 ml og tilsætter3 liter acetone, køler med is og suger det udfældedebundfald fra. Efter tørring ved 40°C i vakuum får man 247 gaf et gulligt pulver, hvoraf 85% er KC1, og 15% er dennævnte forbindelse.

Af moderluden får man endnu 22 g af en blanding af dennævnte forbindelse og det tilhørende lactam.

Omsætningen af 2-pivaloylamido-2-desoxy-3-carboxymethyl-D-glucopyranose med L-alanyl-D-glutaminsyre-G;-amid—y-benzyl-ester-trifluoracetat sker analogt med eksempel 33 med2-ethoxy-N-carbethoxy-l,2-dihydroquinolin i DMF/CH2CI2 =1:1. Efter hydrogenering med 5%'s'palladium-kul får man2-trimethylacetamido-2-desoxy-3-0-<[ L-l-(D-l-carbamoyl-3-carboxypropyl)-l-carbamoylethyl ]-carbamoylmethyl0-D-glucose som lyofilisat. [ a ]β0 = -7° (methanol, c = 0,6).

Eksempel 49 4,1 g benzyl-2-acetamido-2-desoxy-4,6-benzyliden-a-D-gluco-pyranosid opløses i 30 ml Ν,Ν-dimethylformamid, og deromrøres ved en temperatur fra stuetemperatur op til 40°C med0,5 g natriumhydrid-mineralolie-dispersion under udelukkelse af fugtighed til dannelse af en homogen opløsning. Derpåtilsættes dråbevis under afkøling ved 10°C en opløsning af4,76 g N-iodacetyl-L-alanyl-D-isoglutamin-Y-benzylester i 15ml Ν,Ν-dimethylformamid, og blandingen omrøres i 24 timerved stuetemperatur, hvorpå der inddampes i vakuum til ensirup.

En opløsning af 8 g af denne forbindelse i 400 ml 60%' seddikesyre opvarmes i en time til 80°C. Efter afkølinginddampes opløsningen til tørhed, til remanensen sættes 2 x50 ml vand, idet der hver gang inddampes til tørhed. Dendannede krystallinske remanens udrøres med lidt vand,krystallerne frasuges og tørres. På denne måde opnår manbenzyl-2-acetamido-3-0-<[ L-l-(D-l-carbamoyl-3-carboxyprop-yl)-carbamoyl ethyl ]-carbamoylmethyl)-2-desoxy-o:-D-glucopy-ranosid-benzylester, smp. 200-202°C, [or]2® = +77 ± 1°

Cdimethylformamid, c = 0,599).

En opløsning af 4 g benzyl-2-acetamido-3-0-<[L-l-(D-l-carb-amoyl-3-carboxypropyl)-carbamoylethyl ]-carbamoylmethyl>-2-desoxy-a-D-glucopyranosid-benzylester i 80 ml methanolhydrogeneres med 0,4 g 5%'s palladium-kul som katalysatorved normaltryk og stuetemperatur, indtil reaktionen erophørt. Katalysatoren frafiltreres, eftervaskes med lidtmethanol, og filtratet inddampes til tørhed i vandstrå-levakuum. Remanensen opløses i 50 ml destilleret vand,hvorpå der atter hydrogeneres med 1 g 5%’s palladium-kul somkatalysator ved normaltryk og stuetemperatur til endtreaktion. Katalysatoren frafiltreres, eftervaskes med lidtvand, og filtratet inddampes til tørhed. Den dannede2-acetamido-3-0-<[L-l-(D-l-carbamoyl-3-carboxypropyl)-carbamoylethyl ]-carbamoylmethyl)-2-desoxy-D-glucose tørres ihøjvakuum over phosphorpentoxid, [ a ]§0 = +10° ± 1° ( vand, c= 0,930).

Eksempel 50

Til 5,31 g benzyl-2-acetamido-3-0-carboxymethyl2-deoxy-G!-D-glucopyranosid opløst i 40 ml absolut dimethylformamidsættes 3,87 g L-alaninbenzylester-p-toluensulfonat, 1,07 mlN-methylmorpholin og 3,00 g 2-ethoxy-N-ethoxycarbonyl-1,2-dihydroquinolin, og blandingen omrøres i 24 timer vedstuetemperatur. Opløsningsmidlet afdampes til dannelse af enolieformig remanens, som oparbejdes analogt med den ieksempel 31 beskrevne fremgangsmåde. Efter afdampning afopløsningsmidlet og omkrystallisation fra ethylacetat opnås 4,5 g benzyl-2-acetamido-3-0-[ (L-l-carboxyethyl)-carbamoyl-methyl ]-2-deoxy-a-D-glucopyranosid-benzylester med smp.180-181°C, [ a ]j§° = +82° (97) ± 1° (methanol, c = 1), Rf =0,61 (system: acetonitril/vand 3:1) og Rf = 0,B1 (system:ethylacetat/n-butanol/pyxidin/eddikesyre/vand = 42:21:21:6:10).

4,32 g benzyl-2-acetamido-3-0-[ (L-l-carboxyethyl)-carbamoyl-methyl ]-2-deoxy-a-D-glucopyranosid-benzylester, opløst i 40ml ethylenglycoldimethylether/vand 9:1, omsættes i 2 timermed hydrogen i nærværelse af 0,4 g palladium-kul. (10%’s).Katalysatoren frafiltreres, og filtratet inddampes tiltørhed. Remanensen tørres over phosphorpentoxid, hvorved manfår 2,84 g, Rf = 0,47 (system: ethylacetat/n-butanol/pyr-idin/eddikesyre/vand = 42:21:21:6:10), optages i 40 ml absolut dimethylformamid, hvorpå der tilsættes 2,18 gD-iso-glutamin-Y-benzylester-hydrochlorid, 0,89 g N-methylmorpholin og til sidst 2,16 g 2-ethoxy-N-ethoxycar-bony1-1,2-dihydroquinolin, hvorpå blandingen omrøres i 23timer ved stuetemperatur. Ved oparbejdning på samme mådesom beskrevet i eksempel 31 opnås 3,95 g benzyl-2-acetamido-3-0-<[L-l-(D-l-carbamoyl-3-carboxypropyl)-carbamoylethyl ]-carbamoylmethyl>-2-deoxy-a-D-glucopyranosid-benzylester medsmp. 203-205°C, [a]§0 = +66° (90) ± 1° (dime thyl formamid, c= 1,) Rf = 0,59 (system: acetonitril/vand = 3:1),

Rf = 0,66 (system: methylenchlorid/methanol/eddikesyre).

Claims (9)

1. Analogifremgangsmåde til fremstilling af immun- modulerende 2-[ 2-acylamino-2-desoxy-(D)-glucosyl-3-0 ]-alkancarboxylsyrepeptid-derivater med den almene formel

hvori X betyder en carbonylgruppe, R betyder en alkyl-gruppe med 2-17 carbonatomer eller en phenylgruppe, someventuelt er substitueret med alkyl med højst 7 carbon¬atomer, R^ betyder hydrogen, alkyl med højst 7 carbon¬atomer eller benzyl, R2 betyder hydrogen eller alkyl medhøjst 7 carbonatomer, R4 og Rq betyder hydrogen elleralkanoyl med 2-18 carbonatomer, R7 betyder hydrogen, alkylmed højst 7 carbonatomer, hydroxymethyl eller phenyl, Rgbetyder carboxyl, carbamoyl, N-Ci_7~alkyl- carbamoyl,N-benzylcarbamoyl, N-(carbamoyl-methyl)- carbamoyl ellerCi_7-alkoxycarbonyl, og Rg betyder carboxyl, carbamoyl,N-Ci_7-alkylcarbamoyl eller Ci_7~alkoxycarbonyl, idet dogalkylgruppen R indeholder mere end et carbonatom, når R2betyder methyl, eller når R2 betyder hydrogen, og Rg og Rghver for sig betyder en carboxylgruppe, eller farmaceutiskacceptable salte af forbin- delser med frie carboxylgrupper,kendetegnet ved, at man a) omsætter en forbindelse med formlen

hvori X og R har de ovenfor angivne betydninger, og Ri°, R40og Rg° betyder de ovenfor anførte grupper R^, R4 og Rg ellerhver for sig en let fraspaltelig beskyttelsesgruppe, med enforbindelse med formlen

hvori Z betyder en reaktionsdygtigt forestret hydroxy-gruppe, R2 har den ovenfor angivne betydning, og R70, R8° ogRg° har de ovenfor for grupperne R7, Rg og Rg anførtebetydninger, idet dog i disse grupper forekommende carboxyl-og frie hydroxygrupper er beskyttede med let fraspalteligebeskyttelsesgrupper, og fraspalter eventuelt tilstedeværendebeskyttelsesgrupper eller b) kondenserer en forbindelse med formlen

hvori X, R og Rg har de ovenfor angivne betydninger, og Rx°,R40 og Rg° har de for grupperne R^, R4 og Rg anførtebetydninger eller hver for sig betyder en let fraspalte- ligbeskyttelsesgruppe eller et reaktionsdygtigt syrederivatderaf, med en forbindelse med formlen

hvori R70, R8° og Rg° har de ovenfor for gruppernehenholdsvis R7, Rg og Rg anførte betydninger, idet dog idisse grupper tilstedeværende carboxyl- og, om ønsket, friehydroxygrupper er beskyttede med let fraspalteligebeskyttelsesgrupper, og fraspalter eventuelt tilstede¬værende beskyttelsesgrupper eller c) kondenserer en forbindelse med formlen

hvori R^, Rx°, R2, R40, R6° °9 R7° har de ovenfor angivnebetydninger, med en forbindelse med formlen

hvori Rg° og Rg° har de ovenfor angivne betydninger, idetdog i grupperne R7°, Rg° og Rg° tilstedeværende carboxyl-og, om ønsket, frie hydroxylgrupper er beskyttede med letfraspaltelige beskyttelsesgrupper, og fraspalter eventuelttilstedeværende beskyttelsesgrupper eller d) i en forbindelse med formlen

hvori R, R2, R70, 1*8° °9 ^9° ^ar ovenfor angivne betyd¬ninger, og R5 betyder en alkyliden- eller cyc'loalkyliden-gruppe, under sure betingelser opspalter oxazolin- ogdioxolanringen, og fraspalter eventuelt tilstedeværendebeskyttelsesgrupper eller e) i en forbindelse med formlen I

hvori substituenterne har de ovenfor angivne betydninger, idet dog tilstedeværende funktionelle grupper, om ønsket, erbeskyttede med let fraspaltelige beskyttelsesgrupper,acylerer aminogruppen med et acyleringsmiddel, som indførergruppen R-X-, og fraspalter eventuelt tilstede- værendebeskyttelsesgrupper eller f) i en forbindelse med formlen

hvori Ri°, R40 og R50 har de ovenfor for henholdsvis Rj, R4og Rg anførte betydninger eller betyder en let fraspalteligbeskyttelsesgruppe, R70, Rg° og Rg° har de ovenfor forhenholdsvis R7, Rg og Rg anførte betydninger, idet i dissegrupper forekommende carboxyl- og hydroxy- gruppe kan værebeskyttede med let fraspaltelige beskyttelsesgrupper, og X,R og R2 har de ovenfor angivne betydninger, idet der dog ien forbindelse med formlen X forekommer mindst én letfraspaltelig beskyttelsesgruppe, fraspalter de forekommendebeskyttelsesgrupper og, om ønsket, overfører en ved en af fremgangsmåderne a)til f) dannet forbindelse med formlen I med mindst éncarboxylgruppe til et farmaceutisk acceptabelt salt deraf.

2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at man anvender udgangsforbindeIser, hvori R2 betyder hydrogen.

3. Fremgangsmåde ifølge krav 1 eller 2, kendetegnet ved, at man anvender udgangsforbindeIser, hvori betyderhydrogen eller en let fraspaltelig beskyttelsesgruppe.

4. Fremgangsmåde ifølge et af kravene 1—3, kende¬ tegnet ved, at man anvender udgangsforbindelser, hvori R4 ogRø betyder hydrogen eller en let fraspalteligbeskyttelsesgruppe.

5. Fremgangsmåde ifølge et af kravene 1—4, kende¬ tegnet ved, at man anvender udgangsforbindelser,, hvori Rbetyder alkyl med 1-7 carbonatomer eller phenyl.

6. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at man anvender sådanne udgangsforbindelser, at man fremstil¬ler en forbindelse med den almene formel I, hvori. R betyderalkyl med højst 7 carbonatomer eller phenyl, iR^ betyderhydrogen eller alkyl med højst 7 carbonatomer, betyderhydrogen eller methyl, R4 og Rø betyder hydrogen, R7 betyderhydrogen, alkyl med højst 7 carbonatomer ellerhydroxymethyl, Rg betyder carbamoyl og Rg betyder carboxy,idet dog alkylgruppen R indeholder mere end et riar bona tom,når R2 betyder methyl, eller et farmaceutisk acceptabeltsalt deraf.

7. Fremgangsmåde ifølge krav 5, kendetegnet ved, atman anvender sådanne udgangsforbindelser, at man fremstil¬ler en forbindelse med formlen I, hvori Rj betyder hydrogen,eller et farmaceutisk acceptabelt salt deraf.

8. Fremgangsmåde ifølge krav 1 b) eller c), kende¬tegnet ved, at man vælger udgangsforbindelserne således, atman fremstiller 2-acetamido-3-0-<[ L-l-(D-l-carbamoyl-3-carboxypropyl)-carbamoyl-ethyl ]-carbamoyl-methyI>-2-desoxy-D-glucose eller et farmaceutisk anvendeligt saltderaf.

9. Fremgangsmåde ifølge krav 1 til fremstilling af 2- acetamido-3-0-<[L-l-(D-l-carbamoyl-3-carboxypropYl)- carbamoyl-ethyl ]-carbamoyl-methyl>-2-desoxy-D-glucose elleret farmaceutisk anvendeligt salt deraf, kendetegnet ved, atman omsætter benzyl-2-acetamido-4,6-0-benzyliden- 3- 0-carboxymethyl-2-desoxy-a-D-glucopyranosid medL-alanyl-D-glutaminsyre-l-amid-Y-benzylester-hydrochlorid,fraspalter beskyttelsesgrupperne i den dannede forbin¬delse og, om ønsket, overfører den dannede forbindelse i etfarmaceutisk anvendeligt salt deraf.