DK149612B - Analogifremgangsmaade til fremstilling af et enkephalinanalogt pentapeptidderivat eller farmakologisk og farmaceutisk acceptable salte eller syreadditionssalte deraf - Google Patents
Analogifremgangsmaade til fremstilling af et enkephalinanalogt pentapeptidderivat eller farmakologisk og farmaceutisk acceptable salte eller syreadditionssalte deraf Download PDFInfo
- Publication number
- DK149612B DK149612B DK523078AA DK523078A DK149612B DK 149612 B DK149612 B DK 149612B DK 523078A A DK523078A A DK 523078AA DK 523078 A DK523078 A DK 523078A DK 149612 B DK149612 B DK 149612B
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- formula
- peptide
- gly
- phe
- met
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/665—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans derived from pro-opiomelanocortin, pro-enkephalin or pro-dynorphin
- C07K14/675—Beta-endorphins
- C07K14/6755—Beta-endorphins with at least 1 amino acid in D-form
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/12—Antidiarrhoeals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/04—Centrally acting analgesics, e.g. opioids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/665—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans derived from pro-opiomelanocortin, pro-enkephalin or pro-dynorphin
- C07K14/70—Enkephalins
- C07K14/702—Enkephalins with at least 1 amino acid in D-form
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Neurology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Description
i 149612
Den foreliggende opfindelse angår en analogifremgangsmåde til fremstilling af et hidtil ukendt enkepha-lin-analogt pentapeptidderivat med den almene formel (I): 5 R^-X3-X4-Gly-X^-X7-R^ (X) eller et farmakologisk og farmaceutisk acceptabelt salt (med peptidet som carboxylat-anion sammen med en kationl eller syreadditionssalt deraf, hvor: 10 R1 er hydrogen eller (C,-C.1alkyl, 3 Α ’2 X er L-tyrosyl eventuelt N -substitueret med en (C^-C^l-alkylgruppe, 4 X er D-methionyl, D-methionylsulfoxid eller D-methionyl-sulfon, g 15 X er L-4-halogenphenylalanyl, L-4-trifluormethylphenyl-alanyl eller L-4-nitrophenylalanyl, 7 X er L-prolyl, D-prolyl, D-leucyl eller D-methionyl, og 2 5 5 R er NH2 eller OR , hvor R er hydrogen eller {C^-C^}-alkyl.
20 Fremgangsmåden ifølge opfindelsen er ejendommelig ved det i krav 11 s kendetegnende del angivne.
Som enkephalin-analogt peptid er der tale om et peptid, der udviser morfinagonist-aktivitet. Som alment accepteret og også i den foreliggende sammenhæng forstås 25 ved en morfinagonist en forbindelse, hvis biologiske aktivitet antager lighed med aktiviteten af det naturlige alkaloid.
De farmakologiske egenskaber og terapeutiske anvendelser af morfin er veldokumenterede i litteraturen, 30 se for eksempel "The Pharmacological Basis of Therapeutics", Goodman, L.S. og Gilman, A., ed., udgivet af The MacMillan Company, New York, 3. udgave (1965), navnlig kapitel 15, side 247-266, og "Martindale: The Extra Pharmacopoeia", Blacow, N.W. ed., udgivet af the 35 Pharmaceutical Press, London, 26. udgave (1972), navnlig side 1100-1106. Det er imidlertid velkendt (Goodman, L.
S. et al., loc. cit., kapitel 16), at gentagen indgift af 149612 2 morfin kan bringe modtageren til at udvikle en tilvænning til lægemidlet og tolerance over for dets virkninger og til at vise abstinenssymptomer, når indgift afbrydes. I mange år har der derfor været forsket med det formål at 5 tilvejebringe en forbindelse med morfinets aktivitetsspektrum, samtidig med at den er fri for morfinets ulemper.
I dansk patentansøgning nr. 283/77 er omtalt en gruppe enkephalin-analoge polypeptidderivater, der navnlig har analgetiske egenskaber og derfor kan anvendes til 10 behandling af smerter af forskellig genese. Forbindelserne har endvidere vist egenskaber, der gør dem anvendelige som psychoterapeutica, især som neuroleptica.
I dansk patentansøgning nr. 1580/77 er omtalt en gruppe enkephalin-analoge polypeptidderivater, for hvilke 15 der udelukkende er omtalt en analgetisk aktivitet.
De ifølge den foreliggende opfindelse fremstillede peptider med den almene formel I adskiller sig navnlig fra og udmærker sig sammenlignet med nævnte kendte polypeptidderivater ved også at udvise en effektiv antidiar-20 révirkning, således som nedenfor nærmere omtalt og demonstreret .
De forkortelser, der i det følgende er anvendt for aminosyrer og aminosyrerester, er de på området sædvanligt benyttede, og de kan findes i for eksempel Biochemi-25 stry, 11, 1726 (1972). Overalt i det følgende er alle henvisninger til L-aminosyrer og -aminosyrerester undtagen i tilfælde af glycin, og medmindre andet er anført.
I syreadditionssaltene af peptiderne med formlen I ligger aktiviteten i basen, og syren er af mindre be-30 tydning, men er af hensyn til de terapeutiske formål farmakologisk og farmaceutisk acceptabel for recipienten. Eksempler på sådanne egnede syrer omfatter (a) mineral-syrer: saltsyre, hydrogenbromidsyre, phosphorsyre, meta-phosphorsyre, salpetersyre og svovlsyre, (b) organiske 35 syrer: vinsyre, eddikesyre, citronsyre, æblesyre, mælkesyre, fumarsyre, benzoesyre, glycolsyre, gluconsyre, gu-lonsyre, ravsyre og arylsulfonsyrer, f.eks. p-toluensul- 149612 3 fonsyre. De farmaceutisk og farmakologisk acceptable syreadditionssalte er anvendelige både i sig selv og ved isolering og rensning af baserne. De peptider, der indeholder flere frie aminogrupper, kan vindes i form af 5 mono- eller poly-syreadditionssalte eller som blandede salte af flere syrer.
Ligeledes er hos saltene af peptiderne (omfattende peptidet som carboxylatanionen sammen med en kation) identiteten af kationen af mindre betydning, selv om den 10 med henblik på de terapeutiske formål er farmakologisk og farmaceutisk acceptabel for recipienten. Eksempler på sådanne egnede kationer er natrium og kalium.
Morfinagonistegenskaberne hos peptiderne med formlen (I) og deres salte og syreadditionssalte omfat-15 ter følgende: (A) In vitro: (i) Hæmning af neutralt fremkaldte kontraktioner på isoleret vas deferens fra mus prøvet ved metoden i-følge Hughes et al (Brain Research 88, (1975) 296) (un- 20 der anvendelse af impulser ved 0,1 Hz), idet hæmningen ophæves ved hjælp af den kendte narkotiske antagonist naloxon (l-N-allyl-7,8-dihydro-14-hydroxy-normorfinon).
(ii) Reduktion af elektrisk inducerede kontraktioner på isoleret ileum fra marsvin, når præpareret for 25 stimulation ved metoden ifølge Paton (Brit. J. Pharmacol,.
12 (1957) 119-127). (Hvert intestinalsegment blev struk-ket fast med anoden og udstrakt med en vægt på 2-3 g. Stimulus-parametre: frekvens: 0,1 Hz, varighed: 0,4 min., spænding (supramaksimal) 30-40V, kontraktionerne blev 30 transduceret isotonisk).
(B) In Vivo: (i) Forbindelserne udviser analgetisk aktivitet, idet de for eksempel er effektive på mus ved den på området kendte standard-"varmplade"-metode, når de under-35 søges ved en modificeret udførelsesform for metoden i-følge Eddy, N.B. et al (J. Pharm. Exp. Therap. 107, 385 149612 4 (1953)), idet forbindelserne indgives ved intracerebro-veiitriculær injektion, og denne aktivitet ophæves med naloxon.
Som et yderligere eksempel er forbindelserne ef-5 fektive ved reduktion af eddikesyre-induceret vridning hos mus, når de prøves ved en modificeret udførelsesform for metoden ifølge Hendershot et al, J. Pharm. Exp.
Therap. 125 (1959), 237. Forbindelserne indgives oralt, og denne reduktion i vridning ophæves med naloxon.
10 (ii) Forbindelserne udviser antihostevirkning, for eksempel når de prøves på marsvin ved metoden ifølge Boura et al, Brit. J. Pharmacol., 3j) (1970), 225.
(iii) Forbindelserne udviser antidiarrévirkning, idet de for eksempel er effektive til at reducere rici-15 nusolie-induceret diarré hos rotter.
Peptiderne med formlen (I), deres salte og syreadditionssalte har, ved undersøgelse ved en række farmakologiske standardmetoder, også vist sig både at inducere og at opretholde anæstesi hos laboratoriedyr omfat-20 tende rotter og mus. Forbindelserne er effektive i denne henseende, når de indgives ad forskellige veje omfattende parenteral indgift, for eksempel ved intravenøs eller intracerebroventriculær injektion. Illustrerende for forbindelsernes anæstetiske virkninger er følgende, der 25 skal forstås som værende ikke-begrænsende: (i) Ophævelse af stabilitetsrefleksen. Denne egenskab er karakteristisk for anerkendte anæstetiske midler, såsom chloralhydrat (2,2,2-trichloro-l,l-ethan-diol),' urethan (ethylcarbamat) og barbiturater (deriva-30 ter af barbitursyre). Et dyr, der mangler denne refleks, ruller ikke over eller forsøger, ikke at genvinde sin normale stilling, når det anbringes på ryggen.
(ii) Ophævelse af pinnal-refleksen. Ved denne metode indføres en tråd eller lignende prøve i øre-pinna, 35 og hos det normale dyr (kontrol) fremkommer reflektorisk trækning eller rystning af den påvirkede pinna.
149612 5 (iii) Ophævelse af corneal-refleksen. Ved denne metode bliver cornea let berørt med en tråd eller lignende. Hos det normale dyr (kontrol) er der en reflektorisk blinken med øjenlågene. Denne refleks er af klinisk 5 betydning hos mennesker, idet den er en af de sidste reflekser, der ophæves ved induktion af generel anæstesi.
Hver af de foregående virkninger (i), (ii) og (iii) kan reverseres ved indgift af den kendte narkotiske antagonist naloxon (l-N-allyl-7,8-dihydro-14-hydroxy-10 normorfinon). Det har imidlertid vist sig, at morfin selv ikke ophæver stabilitetsrefleksen hos laboratoriedyr, såsom mus, når det indgives ved akut bolusinjektion i op til letale doser.
Peptiderne med formlen (I) eller deres farmakolo^ 15 gisk og farmaceutisk acceptable salte eller syreadditi-salte fremstilles ifølge opfindelsen ved, at a) en forbindelse med den almene formel (II): R1 - Y1 - OH (II) 20 hvor R1 er som defineret for formel (I), og Y1 er en del-aminosyresekvens af den ønskede forbindelse med formlen Ί, regnet fra den N-terminale ende, omsættes med en forbindelse med den almene formel (ΙΙΪ1; 25 H - Y2 - R2 (III) 2 o hvor R er som defineret for formel (I), og Y er delsekvensen af den resterende del af den ønskede forbindel-30 se, hvorhos forbindelserne med formlen (II) og (III) eventuelt er beskyttet og/eller aktiveret hvor og som egnet, efterfulgt, om nødvendigt, af afbeskyttelse af produktet, eller b) til fremstilling af en forbindelse med formlen 2 35 (I), hvor R er NH9, et tilsvarende, eventuelt beskyttet 2 5 5 peptid med formlen (I), hvor R er OR , hvor R er (C^-C^)alkyl, omsættes med ammoniak efterfulgt, om nødven- 149612 6 digt, af afbeskyttelse af produktet, eller c) til fremstilling af en forbindelse med formlen (I), hvor X^ er D-methionylsulfoxid, det tilsvarende peptid med formlen (I), hvor er D-methionyl, oxideres 5 selektivt, og at, om nødvendigt, det vundne produkt omdannes til den frie base og/eller omdannes til et farmakologisk og farmaceutisk acceptabelt salt (méd peptidet som carboxy-lat-anion sammen med en kation) eller syreadditionssalt 10 deraf.
Nævnte aktivering, for eksempel af carboxylsyre-gruppen i forbindelsen med formlen II, og/eller beskyttelse f.eks. af de ikke-reagerende amino- og carboxyl-syregrupper er standardpraksis på peptidområdet. Detal-15 jer vedrørende egnede aktiverende og beskyttende (maskerende) grupper og vedrørende egnede reaktionsbetingelser (både for koblingsreaktionerne og for fjernelsen af beskyttelsesgrupper), der giver et minimum af racemi-sering, kan findes i følgende litteratursteder: 20 (a) Alment tilgængelige GB-patentskrifter nr. 1.042.487, nr. 1.048.086 og nr. 1.291.383.
(b) Schroder og Luebke, "The Peptides" (Academic Press) (1965).
(c) Bellean og Malek, J. A. Chem. Soc., 90, 165 25 (1968).
(d) Tilak, Tetrahedron Letters, 849 (1970).
(e) Beyerman, Belv. Chim. Acta., 56, 1729 (1973).
(f) Stewart og Young, "Solid Phase Peptide Synthssis" (W.H. Freeman and Co.) (1969).
14ίΜ> 12 7
Alt efter reaktionsbetingelserne vindes peptiderne med formlen (I) i form af den fri base eller som et syreadditionssalt eller salt deraf. Syreadditionssaltene kan omdannes til de frie baser eller salte af and-5 re syrer, og baserne kan omdannes til syreadditionssalte deraf ved den på området velkendte teknik. Ligeledes kan peptiderne omdannes til salte deraf, og saltene kan omdannes til peptiderne eller til andre salte ved velkendt teknik.
10 Et på grund af sin aktivitet, navnlig som anti- diarrémiddel, foretrukket peptid blandt de omhandlede er peptidet med formlen: H-Tyr-D-Met(O)-Gly-Phe(4N02)-Pro-NH2 15 eller et farmakologisk og farmaceutisk acceptabelt syreadditionssalt deraf, der ifølge opfindelsen fremstilles ved, at a) en forbindelse med den almene formel (IIA): 20 H - Y1 - OH (IIA) hvor Y1 er en delaminosyresekvens af den ønskede forbin-delse, regnet fra den N-terminale ende, omsættes med en 25 forbindelse med den almene formel (IIIA): H - Y2 - NH2 (IIIA) 2 hvor Y er delsekvensen af den resterende del af den øn-30 skede forbindelse, hvorhos forbindelserne med formlen (IIA) og (IIIA) eventuelt er beskyttet og/eller aktiveret hvor og som egnet, efterfulgt om nødvendigt af afbeskyttelse af produktet, eller b) et peptid med den almene formel: H-Tyr-D-Met(O)-Gly-Phe(4N021-Pro-OR5 35 8 149612 hvor R"* er (C^-C^)alkyl, hvilket peptid eventuelt er beskyttet, omsættes med ammoniak efterfulgt, om nødvendigt, af afbeskyttelse af produktet, eller c) peptidet med formlen: H-Tyr-D-Met-Gly-Phe(4NO2)-Pro-NH2 5 oxideres selektivt, og at, om nødvendigt, det vundne produkt omdannes til 10 den frie base og/eller omdannes til et farmakologisk og farmaceutisk acceptabelt syreadditionssalt deraf.
Et andet foretrukket peptid med formel I er pep-tidet med formlen: 15 H-Tyr-D-Met-Gly-Phe(4N02)-Pro-NH2 eller et farmakologisk og farmaceutisk acceptabelt syreadditionssalt deraf, der ifølge opfindelsen fremstilles ved, at a) en forbindelse med den almene formel (IIB): 20 H - Y1 - OH (IIB) hvor Y1 er en delaminosyresekvens af den ønskede forbindelse, regnet fra den N-terminale ende, omsættes med en 25 forbindelse med den almene formel (HIB): H - Y2 - NH2 (HIB) 2 hvor Y er delsekvensen af den resterende del af den Øn-30 skede forbindelse, hvorhos forbindelserne med formlen (IIB) og (HIB) eventuelt er beskyttet og/ eller aktiveret hvor og som egnet, efterfulgt, om nødvendigt, at afbeskyttelse af produktet, eller b) et peptid med den almene formel:
H-Tyr-D-Met-Gly-Phe(4N02)-Pro-OR
35 5 149612 9 hvor er (C^-C^)alkyl, hvilket peptid eventuelt er beskyttet, omsættes med ammoniak efterfulgt, om nødvendigt, at afbeskyttelse af produktet, og at, om nødvendigt, det vundne produkt omdannes til 5 den frie base og/eller omdannes til et farmakologisk og farmaceutisk acceptabelt syreadditionssalt deraf.
På grund af deres allerede omtalte morfinagonist-aktivitet kan peptiderne med formlen (I) tillige med de- 10 res farmakologisk og farmaceutisk acceptable salte og syreadditionssalte anvendes ved behandling af pattedyr både inden for den humane og veterinære medicin i ethvert tilfælde, hvor et middel med morfinlignende virkning er foreskrevet. Specifikke anvendelser, der 15 eksempelvis kan nævnes,, er følgende: (1) lindring af smerte (analgesi), for eksempel smerte stammende fra kramper i glatte muskler, såsom ved syre- eller galde-kolik, smerte, der skyldes dødelig sygdom, såsom kræft, smerte inden for den post-operative 20 periode og fødselssmerter.
(2) Sedation, f.eks. ved præ-anæstesibehandling, beroligelse, inducering af søvn, navnlig hvor søvnløshed skyldes smerte eller hoste, og lindring af angst i almindelighed .
25 (3) Bekæmpelse af hoste.
(4) Lindring af dyspnoea, for eksempel ved akut venstre ventrikular-svigt eller lungeødemer.
(5) Induktion af konstipation, f.eks. efter ileostomi eller colostomi, og behandling af diarré og 30 dysenteri.
(6) Induktion af eufori og behandling af depression, f.eks. i forbindelse med lindring af smerte ved dødelig sygdom, såsom kræft.
Peptiderne med formlen (I) og deres farmakolo- 149612 ίο gisk og farmaceutisk acceptable salte og syreadditions-salte kan også anvendes på området for både human og veterinær medicin til induktion og/eller opretholdelse af anæstesi hos et pattedyr.
5 Et peptid eller et salt deraf kan indgives enten alene som det eneste anæstesimiddel eller i kombination med ét eller flere andre stoffer, der kan komplettere og/eller supplere dets virkning. Sådanne yderligere stoffer kan indgives før, samtidigt med eller efter ind-10 gift af peptidet eller saltet deraf, og i tilfælde af samtidig indgift kan de forskellige midler indgives enten som separate doser eller som en kombinationskomposition.
Som en mulighed kan peptidet eller saltet deraf 15 indgives efter indgift af et beroligende benzodiazepin-middel, såsom chlordiazepoxid (7-chlor—2-methylamino- 5-phenyl-3H-l,4-benzodiazepin-4-oxid), diazepam (7-chlor-—1,3-dihydro-l-methyl-5-phenyl-2H-l,4-benzodiazepin- 2-on) og oxazepam (7-chlor—1,3-dihydro-3-hydroxy-5-20 phenyl-2H-l,4-benzodiazepin-2-on).
Som en anden mulighed kan peptidet eller et salt deraf indgives med henblik på at opretholde anæstesi, efter at anæstesi indledningsvis er induceret ved forudgående indgift .af et andet anæstetisk middel, for ek-25 sempel et barbiturat, såsom thiopentalnatrium (natrium- 5-ethyl-5-(1-methylbutyl)-2-thiobarbiturat).
En særlig anvendelse for peptiderne med formlen (I) og deres farmakologisk og farmaceutisk acceptable salte og syreadditionssalte, inden for anæstesiområdet, 30 er til induktion og/eller opretholdelse af den tilstand, der betegnes "neuroleptanalgesi", en tilstand, der kendetegnes ved ro, psykisk indifferens over for ydre stimuli, og analgesi (se for eksempel Dorland's Illustrated Medical Dictionary, 25. udgave, udgivet af W.B.
35 Saunders, 1974, side 1041, og "The Pharmacological Basis of Therapeutics", Goodman, L.S. og Gilman, A., ed., 5. udgave, udgivet af Macmillan Publishing Co. Inc., 1975, 149612 11 navnlig kapitel 8, side 97 - 101. Denne tilstand anses af læger som ønskelig med henblik på gennemførelse af sådanne operationer som bronchoskopi, røntgenstråle-5 undersøgelser, brandsårsforbindinger og cystoskopi, hvor et vist samarbejde fra patientens side er af værdi, og en færdigdosiskombination omfattende det narkotiske analgetiske middel fentanylcitrat (N-(l-phenethyl-4-pi-peridyl)-propionanilid-citrat) og det neuroleptiske mid-10 del droperidol (1-{1-[3-(p-rfluorbenzoyl)propyl]-1,2,3, 6-tetrahydro-4-pyridyl}-2-benzimidazolinon) er accepteret til anvendelse under sådanne omstændigheder.
Inden for den veterinære medicin er to færdig-dosiskombinationer omfattende det narkotiske analgetiske 15 middel etorphinhydrochlorid (4,5a-epoxy-3-hydroxy-6- methoxy-α,17-dimethyl-a-propyl-6,14-ethenomorphinan-7a-(R)-methanol-hydrochlorid) sammen med enten acepromazin (1-[10-[3-(dimethylamino)propyl]-lOH-phenothiazin-2-yl]-ethanon) eller methotrimeprazin (2-methoxy-N rN,β-tri-20 methyl-10H-phenothiazin-10-propanamin) blevet accepteret til anvendelse under omstændigheder, hvor en neurolept-analgetisk virkning ønskes, for eksempel ved frakturre-duktion, sårsyning og kastration.
Peptiderne med formlen (I) og deres acceptable 25 salte og syreadditionssalte kan anvendt alene tilvejebringe nævnte virkning, uden at der kræves noget yderligere lægemiddel.
For hver af de ovennævnte anvendelser for peptiderne med formlen (I) og deres salte og syreadditions-3Q salte, dvs. uanset om der er tale om anvendelse til in-ducering og/eller opretholdelse af anæstesi (for eksempel inducering og/eller opretholdelse af neuroleptanal-gesi) eller til anvendelse ved en tilstand, hvor et middel med morfinlignende virkning foreskrives (for eksempel 35 til de anvendelser, der ovenfor er specielt omtalt under (1), (2), (3) , (4), (5) eller (6)). vil den nødvendige 12 U9S12 mængde af peptidet eller saltet eller syreadditionssaltet deraf (i det følgende omtalt som den aktive bestanddel) variere med indgiftvejen og med arten og graden af den ønskede virkning, og vil i sidste instans blive be-5 stemt af lægen eller dyrlægen. I almindelighed vil imidlertid for hver af disse anvendelser dosen ligge inden for området fra 0,0025 yg og 40 mg pr. kilogram legemsvægt for pattedyret, fortrinsvis fra 0,025 yg til 10,0 mg pr. kg, navnlig fra 0,01 yg til 4,0 mg/kg og optimalt 10 fra 0,25 til 400 yg/kg (alle doser beregnet på grundlag af peptidbasen). Til anvendelse som et anti-diarrémiddel er en effektiv oral dosis for mennesker en enkeltdosis på 3 mg givet to eller tre gange daglig, og for anti-hosteanvendelse er en effektiv oral dosis en enkeltdo-15 sis på 30 mg givet to eller tre gange daglig.
De aktive bestanddele kan indgives ad en hvilken som helst vej, der er egnet for den virkning, der skal opnås, idet egnede veje omfatter oral, rectal, nasal, lokal (buccal), vaginal og parenteral (omfattende sub-20 cutan, intramusculær og intravenøs) indgift. Det vil forstås, at den foretrukne vej vil variere med den virkning, der skal opnås, og for eksempel ved lindring af fødselssmerter kan indgift direkte ind i rygmarven være fordelagtig.
25 Selvom det er muligt at indgive de aktive be standdele som rå kemiske stoffer, foretrækkes det, at de foreligger som en farmaceutisk komposition.
Når kompositionen, til human eller veterinær anvendelse, foreligger i enhedsdosisform, indeholder hver 30 enhed hensigtsmæssigt den aktive bestanddel (som ovenfor defineret) i en mængde inden for området fra 0,125 yg til 2 g, fortrinsvis fra 1,25 yg til 200 mg og optimalt fra 12,5 yg til 20 mg (alle vægte beregnet på grundlag af peptidbasen).
35 Fremgangsmåden ifølge opfindelsen beskrives nær mere gennem følgende eksempler: 13 1Λ9612
De følgende forkortelser er anvendt overalts HOBT 1-hydroxybenzotriazol DCCI dicyclohexylcarbodiimid DCU dicyclohexylurinstof 5 NMM N-methylmorpholin DMF dimethylformaraid THF tetrahydrofuran
Pr isopropanol P^O diisopropylether lo Pe petroleumsether
EtOAc ethylacetat Z benzyloxycarbonyl
Bu tertiært butyl BOC tertiært butyloxycarbonyl 15 Bzl benzyl
Peptider blev undersøgt ved TLC på Merck-silica-gelplader med følgende opløsningsmiddelsystemer: 1 Methylethylketon 2 n.Butanol:eddikesyre:vand (3:1:1) 20 3 Chloroform:methanol:32% eddikesyre (120:90:40) 4 Chloroform:methanol:32% ammoniak (120:90:40) 5 n.Butanol:eddikesyre:ethylacetat:vand 25 (1:1:1:1) 6 Chloroformsmethanol (8:1) 7 Chloroform:methanol:32% eddikesyre (120:90:5) 8 Chloroformsmethanol:32% ammoniak 30 (120:90:5) og ved HPLC: Søjle: Zorbax C-8 (handelsnavn), 4,6 mm x 25 cm
Mobil fase: Acetonitril/0,1M ammoniumacetat, 35 pH 4,0
Strømningshastighed: 2 ml/min.
Påvisning: 254 nm.
149612 14
Optiske drejninger er bestemt på et "Bendix"® NPL automatisk polarimeter.
Aminosyresammensætningerne for peptidhydrolysater (6N HC1 ved 110°C i 24 timer i evakuerede forseglede rør) 5 blev bestemt med et "Beckman" ®-Spinco Model 120C-amino-syreanalyseapparat eller med et "Rank" ®Chromostak-ami-nosyreanalyseapparat.
De følgende almene metoder anvendtes overalt ved syntetiseringerne af peptiderne.
10 a) Koblinger blev gennemført i DMF og blev for midlet af DCCI.
b) Aminosyreesterhydrochlorider blev omdannet til de frie estre' ved tilsætning af en tertiær base, enten triethylamin eller N-methyl-morpholin.
15 c) HOBT blev tilsat ved koblingstrinnet, når fragmentkondensation involverede et peptid med en optisk aktiv C-terminal aminosyre.
d) Koblinger fik lov at forløbe over 24 timer i koldt· rum ved +4°C.
20 e) Efter kobling blev der foretaget rensning ved vask med syre og base for at fjerne uforandrede reaktanter .
f) Alkaliske forsæbninger blev gennemført i vandig methanol med en autotitrator ved pH 11,5 til 12,0 25 med IN NaOH.
g) Benzyloxycarbonyl-beskyttelsesgrupper blev fjernet ved hydrogenolyse i methanol/eddikesyre med 10% palladium-på-trækul.
h) De resulterende acetatsalte fra ovennævnte 30 hydrogenolyse blev omdannet til de tilsvarende hydro- chlorider ved tilsætning af methanolisk hydrogenchlorid.
i) Benzyl-beskyttelsesgrupper blev fjernet ved hydrogenolyse i methanol med 10% palladium-på-trækul.
j) (Tertiær butyl)- og (tertiær butyloxycarbo- 35 nyl)-beskyttelsesgrupper blev fjernet med IN hydrogenchlorid i eddikesyre i nærværelse af anisol, der fun- 15 143612 gerer som rensemiddel. Spaltning fik lov at forløbe gennem 60 til 90 minutter.
k) OBu-beskyttelsesgrupper på alkoholfunktionerne af threonin og serin blev fjernet med trifluoreddi,-- - 5 kesyre indeholdende 10% vand, idet spaltning fik lov at forløbe gennem90 minutter.
l) De endelige peptider blev isoleret som deres hydrochlorider og blev lyofiliseret fra vandig opløsning.
10 Eksempel 1 H. Tyr.D-Met.Gly.Phe(4N02).Pro.NH2.
Dette blev fremstillet ifølge det .nedenfor anførte skema. Produktet blev først isoleret som hydro-chlorid-additionssaltet og derefter renset på carboxy-15 methylcellulose (CMC 52) ved gradienteluering med ammo-niumacetatpuffere (0,001M til 0,5M). Efter lyofilisering fra vandig opløsning havde acetat-additionssaltet følgende karakteriseringsdata:
Rf: 0,522, 0,833, 0,478 20 [a]^8: +8/1° (c = O'2 ^ methanol).
H-Tyr - D-Met - Gly - Phe(4N02) - Pro.NELj
BOC.D-Met.OH H.Gly.OMe J^HOBT/DCCI
25 BOC. D-Met-Gly.OMe HC £/HOAc BOC.Tyr.OH. H.D-Met-Gly.OMe B0C.Phe(4N02) .OH H.Pro.NH2 |hobt/dcci Jhobt/dcci BOC.Tyr- D-Met- Gly.OMe BOC.Phe(4NO„)- Pro.NH- 2, i 2 30 JlN MaOH/MeOH ( IN BCl/HOAc BOC.Tyr- D-Met- Gly-OH H.Phe(4N02) - Pro.NH2
I HOBT/DCCI
BOC.Tyr- D-Met- Gly -Phe(4N02) - Pro.NH2 i IN HC VHOAc 35 H.Tyr - D-Met- Gly -Phe(4N02) - Pjco.NHj 149612 16
Eksempel 2 Η. Tyr.D-Met(O).Gly.Phe(4NO2).Pro.NI^.
Dette vandtes ud fra acetat-additions s altet fra Eksempel 1 ved oxidation med hydrogenperoxid i iseddike-5 syre. Produktet, som acetat-additionssaltet, havde følgende karakteriseringsdata efter lyofilisering fra vandig opløsning:
Hf: 0,4O2, 0,684 [a]p5: +6,1° (c =0,12 i methanol).
10 De følgende peptider blev fremstillet, med de anførte respektive karakteriseringsdata, ved standardmetoder inden for peptidkemien analoge med de, der er anført i de foregående eksempler.
OTerminale derivater er anført ifølge konven-15 tionen, dvs.: -NH2 : amid -NHEt : ethylamid -OMe : methylester.
149612 17 25
Eks.nr. . .forbindelse Rf . [ctlD. (i methanol) 3 H.Tyr.D-Met.Gly.Phe(4N09) .Pro. o s n 0H,HC1 0,44 ,0,46° -2,8° (c = 0,2) 5 4 H.T^r.D-I4et(02) .Gly.Phe(4N02). 0,322,0,653,
Pro.NH2-acetat 0,644 + 6,3° (c = 0,2) 5 H.Tyr.D-Met.Gly.Phe(4Cl).Pro. 0,492,0,923, NH2,HC1 0,824 +10,0° (c = 0,2) 10 S H.Tyr.D-Met(O) .Gly.Phe(4Cl). 0,604 +11,6° (c = 0,1)
Pro.NH2,HCl 7 H.Tyr.D-Met.Gly.Phe(4N02). 0,532,0,567 +35,4° (c = 0,2) EHIet.KE2,H00CCH3 S H.Tyr.D-Ifet.Gly.Phe(4N02). 0,492,0,557, 15 D-Pro.NH2,HCl 0,548 +45,3° (c = 0,2) 9 H.TsTr.D-Met(O) .Gly.Phe(4N02).
D-?ro.NK2,HOOCCH3 0/527 +17,3° (c = 0,2) 10 H.iyr.D-MstiO).Gly.Phe(4CF3). 0,552,0,507,
Pro.NH2,HCl 0,638 + 6,43° (c = 0,4) 20 11 H.Tvr.D-Met.Gly.Phe(4CF3). 0,482,0,457, +4,1° (c = 0,4)
Pro.NH2,HCl 0,428
De følgende to eksempler illustrerer fremstilling 25 af samme peptid som i Eksempel 2, men ved andre af de angivne fremstillingsmetoder: 18 U9612
Eksempel 12 4fz
Tyr D-Met Gly Phe Pro 5 BOC--OH H-j-OMe BOC---OMs 1Q BOC--OH H-----OMe B0C----—=--OMe BOC—OH H —-OMe B0C--------OH BOC--g--OMe
15 O
BOC---^-g--OH H-j----OMe
O
BOC---------OMe
O
o 20 BOC'-;-;-—--g—---NH2 /0 H ___Y___NH2
TO
2’5 BOC-D-Met. Gly. OMe (1) BOC-D-Met.DCHA-salt (28,38 g) blev suspenderet i ethylacetat (150 ml) og omrørt med en opløsning af KHSO^ (13,5 g) i vand (75 ml). Efter endt opløsning blev den organiske fase fraskilt, vasket to gange med vand (2 x 3Q 60 ml), tørret over vandfrit MgSO^ og koncentreret. Den resulterende olie blev opløst i THF (90 ml), afkølet til -25°C og behandlet med NMM (6,66 g) og isobutylchlorform-iat (8,60 g). Reaktionsblandingen blev omrørt ved -15°C i 2 minutter og derefter behandlet med en forafkølet (-25°C) 35 opløsning af Gly.OMe.HCl (7,53 g) og NMM (6,06 g), i DMF (90 ml). Efter 2 timer ved -15°C blev reaktionsblandingen 149612 19 overført til et isbad, behandlet med 2M KHCO^-opløsning (72 ml) og omrørt i 30 minutter. Opløsningsmidler blev fjernet i vakuum, og inddampningsresten blev fordelt mellem ethylacetat (350 ml) og vand (75 ml). Det organi-5 ske lag blev derefter vasket med 5% citronsyreopløsning (2 x 50 ml), 5% NaHCO^-opløsning (2 x 50 ml) og vand (2 x 50 ml). Ekstrakten blev tørret over vandfrit MgSO^ og inddampet, hvorved vandtes et fast stof, der blev tritu-reret med petroleumsether.
10 Udbytte: 18,12 g, 94%. TLC; enkelt plet i 2, 7, 8.
H.D-Met.Gly.OMe.HCl (2) BOC-D-Met.Gly.OMe (1) (18,1 g) blev suspenderet i anisol (150 ml) og behandlet med 1M HCl/eddikesyre (440 ml). Blandingen blev omrørt ved stuetemperatur i 15 30 minutter. Produktet blev udfældet ved tilsætning af tør ether, frafiltreret og vasket godt med tør ether.
Det rå produkt blev opløst i vand (450 ml), og opløsningen blev vasket to gange med ether for at fjerne resterende anisol. Den vandige opløsning blev frysetørret, 20 hvorved vandtes 13,77 g produkt, 95%. TLC: rent (2, 7, 8).
BOC-Tyr .D-Met.Giv. OMe (3) BOC-Tyr (16,59 g) blev opløst i THF (80 ml) og afkølet til -25°C, NMM (5,96 g) blev tilsat efterfulgt af isobutylchlorformiat (7,69 g) under hurtig omrøring.
25 Efter 2 minutter ved -15°C blev en forafkølet opløsning af D-Met.Gly.OMe (13,77 g) og NMM (5,42 g) i DMF (80 ml) tilsat, og omrøring blev fortsat ved -15°C i 2,5 timer. Blandingen blev anbragt i et isbad og behandlet med 2M KHCOg —opløsning (65 ml) i 30 minutter. Inddampningsresten 30 vundet efter fjernelse af opløsningsmidlerne ved fordampning i vakuum blev opløst i en blanding af ethylacetat (360 ml) og vand (70 ml). Den organiske fase blev fraskilt og vasket med 5% citronsyreopløsning (2 x 50 ml), 5% NaHCQg-opløsning (2 x 50 ml) og til slut med vand (2 x 35 50 ml). Efter tørring (MgS04) og fjernelse af opløsnings middel blev den faste inddampningsrest tritureret med ether, hvorved vandtes 21,16 g (81,6%) beskyttet tripep-tid. Rent ved TLC (2, 7, 8).
149612 20 BOC-Tyr.D-Met.6ly-0H (4) !
Beskyttet tripeptid (3) (21,1 g) blev opløst i en blanding af methanol (350 ml) og vand (150 ml) og forsæbet ved behandling med 2M NaOH (55 ml). Reaktionen 5 fulgtes ved TLC (7) og fandtes at være tilendebragt efter 45 minutter. Methanol blev fjernet i vakuum, og den , vandige opløsning blev afkølet i is og neutraliseret med , 1M HC1 (110 ml). Det udfældede produkt blev frafiltreret, ; vasket flere gange med vand og tørret over P203.
10 Udbytte: 20,18 g, 98%. TLC: Enkelt plet i 2, 7, 8.
Beregnet for C: 53,73, H: 6,61, N: 8,96%
Fundet: C: 53,55, H: 6,62, N; 8,76%.
BOC-Tyr.D-Met(O).Gly-OH (5)
En opløsning af BOC-Tyr.D.Met.Gly-OH (5,48 g) i me-15 thanol (120 ml) blev behandlet med 2 ækvivalenter hydro-genperoxid (2,7 ml 29,4% opløsning). Reaktionen fulgtes ved HPLC. Efter 20 timer ved stuetemperatur blev blandingen inddampet til tørhed og tritureret med ether.
Udbytte: 5,46 g, 96,5%.
20 Smp,; 186-188°C (dek.) [a]33'5 + 1,0° (c = 1, DMF) [a]33'5 1,3° (c = 1, DMF)
Beregnet for C2iH3iN3°8S: C: 51,96, H: 6,39, N: 8,66 23 Fundet: C: 52,13, H: 6,38, N: 8,53.
BOC-Phe(N02).ProYOMe (6) " B0C-Phe(N02) (31,0 g) blev opløst i DMF (150 ml) der blev tilsat HOBT (27,0 g), og blandingen blev afkølet til -5°C forud for tilsætning af DCCl (20,6 g). Tempera-30 turen holdtes ved -5°C i 30 minutter, på hvilket tidspunkt en opløsning af Pro-OMe.HCl (16,55 g) og NMM (10,1 g) i DMF (30 ml) blev tilsat. Reaktionsblandingen blev omrørt ved 5°C i 20 timer og derefter filtreret for at fjerne DCU. Inddampning i vakuum gav en olie, der blev 35 opløst i ethylacetat (1500 ml) og vasket med 5% citronsyreopløsning (2 x 250 ml), 5% NaHCOg-opløsning (2 x 250 mlj og halvmættet NaCl (2 x 25Q ml). Den organiske fase 149612 21 blev tørret og koncentreret til 500 ml. DCU blev frafiltreret, og filtratet blev inddampet, hvorved vandtes et gummiagtigt produkt, der ikke blev karakteriseret.
H.Phe(N02).Pro.OMe.HCl (7) 5 Det beskyttede dipeptid (21,41 g) blev opløst i ethylacetat (300 ml), og opløsningen blev afkølet til 0°C. Tørt luftformigt HC1 blev ledt ind i opløsningen i 45 minutter, idet temperaturen holdtes ved 0°C. Opløsningen blev koncentreret til 50 ml og fortyndet med tør 10 ether (30Q ml). Efter afkøling i køleskab blev produktet frafiltreret, vasket grundigt med tør ether og tørret over P205/NaOH.
Udbytte: 15,64 g, 85%. Smp,: 145-148°C.
[a]^5'5 15,7° (c = 1, MeOH) 15 [α]£5'5 - 17,6° (c = 1, MeOH)
Beregnet for C15H2()N305C1; C: 50,35, H: 5,59, N: 11,75%.
Fundet: C: 50,03, H: 5,81, N; 11,45%.
B0C-Tyr..D-Met.(0.) .Gly,Phe (N02) .Pra.OMe (.8) 20 En opløsning af BOC-Tyr.D-Met(O) .Gly-OH (1,0 g i DMF (30 ml) blev afkølet til -5°C og behandlet med HOBT (0,56 g) og DCC1 (0,42 g). Blandingen blev omrørt ved -5°C i 40 minutter, og derefter blev der tilsat en opløsning af H-Phe(N02).Pro.OMe.HCl (0,74 g) og NMM (0,21 g) 25 i DMF (5 ml), og koblingsreaktionen fik lov at forløbe ved 5°C i 20 timer, DCU blev frafiltreret, og filtratet blev koncentreret i vakuum. Det rå produkt blev fordelt mellem ethylacetat (100 ml) og vand (20 ml). Det organiske lag blev vasket med 5% citronsyreopløsning (2 x 20 30 ml), 5% NaHCO^-opløsning (2 x 20 ml) og til slut med vand (2 x 20 ml), Der blev tørret over vandfrit MgSO^ og inddampet, hvorved vandtes et amorft fast stof, der efter triturering med ether vejede 1,0 g (62%). TLC (2) viste tilstedeværelse af noget DCU i produktet, der ikke 35 blev renset yderligere.
149612 22 BOC-Tyr.D-Met(0).Gly.Phe(N02).Pro.NH2 (9)
Det fuldt beskyttede pentapeptid (1,0 g) blev opløst i methanol (150 ml), og opløsningen blev afkølet i is/salt og mættet med ammoniak. Kolben blev forseglet, 5 og blandingen henstod ved stuetemperatur i 6 dage. Efter omhyggelig fjernelse af ammoniak og methanol vandtes produktet af ethylacetat/ether, 0,81 g, 83%. TLC (2, 7, 8) viste tilstedeværelse af DCU og en lille mængde udgangsmateriale. Dette materiale blev anvendt i det næste 10 trin uden yderligere rensning.
H.Tyr.D-Met(0) .Gly.Phe(N02) .Pro.NH2 (10) BOC-Tyr.D-Met(0).Gly.Phe.(N02).Pro.NH2 (0,81 g) blev suspenderet i anisol (14 ml) og behandlet med 1M HCl/eddikesyre (80 ml). Efter 45 minutter ved stuetempe-15 ratur blev reaktionsblandingen inddampet til tørhed, og inddampningsresten blev tritureret med ether. Det rå produkt blev renset ved ionbytningschromatografi på en 2,5 x 25 cm søjle af carboxymethylcellulose. Eluering var med lineær gradient af 0,005M til 0,2M ammonium-20 acetat ved pH 5,1.
Udbytte: 0,33 g. Rent ved TLC & HPLC.
Beregnet for C3oH39N7°9S'CH3C02H'H20: C; 51,13, H: 6,00, N: 13,05%
Fundet: C: 50,83, H: 6,06, N: 12,91%.
25
Eksempel 13 ^
Tyr D-Met Gly Phe Pro B0C---OMe 30 6 B0C----NH2 p B0C -1-K---OH H--rø--NH2 35 . 0 B0C------NH2 13 H —J-L- —-NH2 149612 23 BQC-Phe.(Ν.0·2) .Pro.NH2 (11) BOC-Phe(N02).Pro.OMe (6) (22,9 g) blev opløst i methanol (250 ml), og opløsningen blev afkølet i is. Ammoniak blev boblet ind, indtil der forelå en mættet op-5 løsning, hvorefter kolben blev forseglet og henstillet ved stuetemperatur i 7 dage. Reaktionsblandingen blev inddampet i vakuum, og det rå produkt blev krystalliseret af ethylacetat. Rent ved TLC og HPLC.
Smp.: 176-178,5°C.
10 [et]33 -29,4° (c = 1, MeOH) [a]-35,7° (c = 1, MeOH)
Beregnet for C^gH^N^Og: 56,16, H: 6,40, Ns 13,79%
Fundet; C; 55,60, H: 6,33, Ns 14,04%, 15 H.Phe (N02) ,Pra.NH2.,HC.l .(12} BOC-Phe(N02).Pro.NH2 (8,0 g) blev opløst i en blanding af methanol (20 ml), isopropanol (40 ml} og ethylacetat (375 ml). Opløsningen blev afkølet i is, og 20 temperaturen holdtes ved 15°C, mens tørt luftformigt HC1 blev boblet ind i 1 time. Nitrogen blev ledt gennem re^ aktionsblandingen i 5 minutter forud for fortynding med tør ether (450 ml}. Produktet blev frafiltreret, vasket grundigt med ether og tørret i vakuum over P20^/Na0H.
25 Udbytte: 6,28 g, 93%. Smp.; 156-159°C.
[et]34'5 -13,5° (c = 1, MeOH) [a]34'5 ~15'3° (c = 1# MeOH).
BOC-Tyr.D-Me.t (O) .Gly.Phe (N02) .Pro ,NH2 (.13) 30 BOC-Tyr.D-Met(O).Gly—OH (5) (1,0 g) blev opløst i DMF (20 ml} og afkølet til -25°C. NMM (0,21 g) og iso-butylchlorformiat (0,28 g) blev tilsat under kraftig omrøring, idet temperaturen holdtes ved -15°C i 2 minutter. Derefter blev en forafkølet (-25°) opløsning af H-35 Phe(N02).Pro.NH2.HCl (0,71 g) og NMM (0,33 g) tilsat, og blandingen blev omrørt ved -15°C i 2,5 timer. Reaktions- 149612 24 blandingen blev overført til et isbad og behandlet med .
2M KHCOg (2,5 ml) i 30 minutter. Opløsningsmidler blev fjernet i vakuum, og inddampningsresten blev fordelt mellem ethylacetat (270 ml) og vand (40 ml). Den organiske 5 fase blev fraskilt og vasket med 5% citronsyre (2 x 40 ml), 5% NaHCOj (2 x 40 ml) og vand (2 x 40 ml). Ekstrakten blev tørret og inddampet til tørhed. Triturering med ether gav 0,56 g, 35%. Dette materiale blev anvendt i næste trin uden yderligere rensning.
10 H.Tyr.D-Met(O).Gly.Phe(N02).Pro.NH2 (14) BOC-Tyr.D-Met(O).Gly.Phe(N02).Pro.NH2 (0,56 g) blev afbeskyttet i 1M HCl/eddikesyre (56 ml) i nærværelse af anisol (20 ml). Efter 30 minutter ved stuetemperatur blev reagenserne fjernet i vakuum, og det rå produkt 15 vandtes ved triturering med ether. Dette materiale blev chromatograferet på en 2,5 x 25 cm søjle af carboxymethyt cellulose, idet der blev elueret med en lineær gradient af 0,005M til Q,2m ammoniumacetat, pH 5,1. Det partielt rensede peptid blev gencirkuleret gennem en 2,5 x 50 cm 20
søjle af carboxymethylcellulose under anvendelse af en lineær gradient fra 0,005M til 0,1M ammoniumacetat, pH
5,1. Efter fjernelse af flygtig puffer ved gentagen frysetørring vandtes det rene peptid.
Udbytte 50 mg. Rent ved TLC (2, 7, 8.) og HPLC.
25 Beregnet for C3QH39N7OgS, CH3C02H, 1,5 H20: C: 50,52, H; 6,05, N: 12,89%
Fundet: C; 50,59, H: 5,96, N: 12,97%.
Eksempel 14 30 Farmakologisk aktivitet.
Peptider fremstillet ifølge de foregående eksempler blev prøvet for følgende aktiviteter ved farmakologiske standardmetoder: (A) Analgesi på mus ved varmpladeprøven (modifika-35 tion af metoden ifølge Eddy, N.B. et al., J. Pharm. Exp.
Therap. (1953) 107, 385, idet peptidet blev indgivet ved intracerebroventriculær injektion).
149612 25 (B) Antidiarrévirkning på rotte. Ved denne metode blev rotter sultet i 24 timer, hvorefter peptidet blev indgivet enten subcutant eller oralt fulgt efter 15 minutter af 1 ml ricinusolie pr. rotte indgivet oralt.
5 (C) Til prøvning af anti-hostevirkning blev mar svin udsat for en aerosol indeholdende 20% citronsyre, 30 minutter efter indgift af forbindelse (oralt eller subcutant). Antallet af host inden for en 5 minutters eksponering taltes, og gennemsnitsværdien fandtes for 10 seks dyr pr. behandling. Metoden er den, der er beskrevet af Boura, A.L.A., Green, A.F. og Saunders, I.A.Br., J. Pharmac., Maj 1970, Vol. 39, Nr. 1, side 225.
(D) Analgesi på mus ved vridningsprøven (modifikation af metoden ifølge Hendershot et al. (J.Pharm.Exp.
15 Therap., 125, (1959), 237), idet peptidet blev indgivet oralt.
Ud fra de opnåede data blev de respektive ED5Q-værdier beregnet (dvs. den dosis, der kræves, for at fremkalde den pågældende effekt hos 50% af dyrene).
20 N.T.: ikke testet.
25
Peptid Resultater udtrykt scm EDcr.: fremstil- -—- let iføl- Analgesi: Antidiarrévirkning Antihoste- Analgesi: ge Mus, (rotte): mg/kg virkning: vridning eksempel varm plade s.c. p.o. mg/kg mg/kg nr. ug/mus iqy. (marsvin) (mus) 30 1 0,007 0,05 2 0,7 p.o. 35 p.o.
2 0,005 0,02 0,05 0,7 p.o. 2 p.o.
0,02 s.c.
3 0,07 0,2 Ingen NT NT
ved 10 (fortsættes)
Claims (3)
1. Analogifremgangsmåde til fremstilling af et enkephalin-analogt pentapeptidderivat med den almene formel (I): R^-X3-X 4-Gly-X 6-X7-R2 (I) 25 eller et farmakologisk og farmaceutisk acceptabelt salt (med peptidet som carboxylat-anion sammen med en kation) eller syreadditionssalt deraf, hvor: R1 er hydrogen eller (C1-C4)alkyl, 3 2 X er L-tyrosyl eventuelt N -substitueret med en (C^-C^)-30 alkylgruppe, 4 X er D-methionyl, D-methionylsulfoxid eller D-methionyl-sulfon, C X er L-4-halogenphenylalanyl, L-4-trifluormethylphenyl-alanyl eller L-4-nitrophenylalanyl, IC 7 03. er L-prolyl, D-prolyl, D-leucyl eller D-methionyl, og 2 5 5 R er NH2 eller OR , hvor R er hydrogen eller (C-^-C^) alkyl, 149612 kendetegnet ved, at a) en forbindelse med den almene formel (II): R1 - Y1 - OH (II) 5 hvor R1 er som defineret for formel (I), og Y1 er en del-aminosyresekvens af den Ønskede forbindelse med formlen I, regnet fra den N-terminale ende, omsættes med en forbindelse med den almene formel (III): 10 H - Y2 - R2 (III) 2. hvor R er som defineret for formel (I), og Y er delsekvensen af den resterende del af den ønskede forbindelse, 15 hvorhos forbindelserne med formlen (II) og (III) eventuelt er beskyttet og/eller aktiveret hvor og som egnet, efterfulgt, om nødvendigt, af afbeskyttelse af produktet, eller b) til fremstilling af en forbindelse med form- 2 20 len (I), hvor R er NH_, et tilsvarende, eventuelt be- z 2 5 5 skyttet peptid med formlen (I), hvor R er OR , hvor R er (C-^-C^)alkyl, omsættes med ammoniak efterfulgt, om nødvendigt, af afbeskyttelse af produktet, eller c) til fremstilling af en forbindelse med form-25 len (I), hvor X4 er D-methionylsulfoxid, det tilsvarende 4 peptid med formlen (I), hvor X er D-methionyl, oxideres selektivt, og at, om nødvendigt, det vundne produkt omdannes til den frie base og/eller omdannes til et farmakologisk og 30 farmaceutisk acceptabelt salt (med peptidet som carboxy-lat-anion sammen med en kation) eller syreadditionssalt deraf.
2. Fremgangsmåde ifølge krav 1 til fremstilling af peptidet med formlen: 35 H-Tyr-D-Met(0)-Gly-Phe(4N02)-Pro-NH2 149612 eller et farmakologisk og farmaceutisk acceptabelt syreadditionssalt deraf, kendetegnet ved, at a) en forbindelse med den almene formel (IIA):
5 H - Y1 - OH (IIA) hvor Y1 er en delaminosyresekvens af den ønskede forbindelse, regnet fra den N-terminale ende, omsættes med en forbindelse med den almene formel (IIIA): 10 H - Y2 - NH2 (IIIA) 2 hvor Y er delsekvensen af den resterende del af den ønskede forbindelse, hvorhos forbindelserne med formlen 15 (IIA) og (IIIA) eventuelt er beskyttet og/eller aktiveret hvor og som egnet, efterfulgt om nødvendigt af afbeskyttelse af produktet, eller b) et peptid med den almene formel:
20 H-Tyr-D-Met(O)-Gly-Phe(4N02)-Pro-OR5 5 hvor R er (C1~C4)alkyl, hvilket peptid eventuelt er beskyttet, omsættes med ammoniak efterfulgt, om nødvendigt, af afbeskyttelse af produktet, eller 25 c) peptidet med formlen: H-Tyr-D'-Met-Gly-Phe (4N02) -Pro-NH2 oxideres selektivt, 30 og at, om nødvendigt, det vundne produkt omdannes til den frie base og/eller omdannes til et farmakologisk og farmaceutisk acceptabelt syreadditionssalt deraf.
3. Fremgangsmåde ifølge krav 1 til fremstilling af peptidet med formlen: 35 H-Tyr-D-Met-Gly-Phe(4N02)-Pro-NH2
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB48980/77A GB1604850A (en) | 1977-11-24 | 1977-11-24 | Biologically active peptides |
| GB4898077 | 1977-11-24 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK523078A DK523078A (da) | 1979-05-25 |
| DK149612B true DK149612B (da) | 1986-08-11 |
| DK149612C DK149612C (da) | 1987-01-26 |
Family
ID=10450679
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK523078A DK149612C (da) | 1977-11-24 | 1978-11-23 | Analogifremgangsmaade til fremstilling af et enkephalinanalogt pentapeptidderivat eller farmakologisk og farmaceutisk acceptable salte eller syreadditionssalte deraf |
Country Status (20)
| Country | Link |
|---|---|
| US (5) | US4244944A (da) |
| EP (1) | EP0002236B1 (da) |
| JP (1) | JPS5492938A (da) |
| KR (3) | KR860000453B1 (da) |
| AT (1) | AT386211B (da) |
| AU (1) | AU530985B2 (da) |
| CA (1) | CA1197235A (da) |
| DE (1) | DE2862477D1 (da) |
| DK (1) | DK149612C (da) |
| ES (1) | ES475324A1 (da) |
| FI (1) | FI70415C (da) |
| GB (1) | GB1604850A (da) |
| HU (1) | HU186729B (da) |
| IE (1) | IE47517B1 (da) |
| IL (1) | IL56028A (da) |
| IT (1) | IT1106143B (da) |
| MY (1) | MY8500260A (da) |
| PL (1) | PL123797B1 (da) |
| SU (1) | SU1470199A3 (da) |
| ZA (1) | ZA786598B (da) |
Families Citing this family (19)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE2702711A1 (de) | 1976-02-02 | 1977-08-04 | Sandoz Ag | Neue organische verbindungen, ihre herstellung und verwendung |
| GB1604850A (en) * | 1977-11-24 | 1981-12-16 | Wellcome Found | Biologically active peptides |
| DE3163199D1 (en) * | 1980-07-17 | 1984-05-24 | Sandoz Ag | Novel pentapeptides, processes for their production, pharmaceutical compositions comprising said pentapeptides and their use |
| EP0076557B1 (en) * | 1981-06-22 | 1985-11-13 | Imperial Chemical Industries Plc | Peptides and pseudopeptides in which the n terminus bears two substituents |
| US4380535A (en) * | 1981-09-23 | 1983-04-19 | American Home Products Corporation | Enkephalin degrading enzyme inhibitors |
| US4492779A (en) * | 1981-12-07 | 1985-01-08 | Thiokol Corporation | Aramid polymer and powder filler reinforced elastomeric composition for use as a rocket motor insulation |
| DE3369327D1 (en) * | 1982-02-05 | 1987-02-26 | Wellcome Found | Pharmaceutical compounds, preparation, use and intermediates therefor and their preparation |
| DE3378121D1 (de) * | 1982-10-18 | 1988-11-03 | Ici Plc | Peptide and pseudopeptide derivatives |
| JPH0680079B2 (ja) * | 1984-11-09 | 1994-10-12 | エーザイ株式会社 | ポリペプチド |
| GB8608818D0 (en) * | 1986-04-11 | 1986-05-14 | Reckitt & Colmann Prod Ltd | Pharmaceutical compositions |
| GB8616741D0 (en) * | 1986-07-09 | 1986-08-13 | Wellcome Found | Pharmacologically active compounds |
| US5688519A (en) * | 1987-04-06 | 1997-11-18 | Leonard; Robert J. | Flash-flow fused medicinal implants |
| US5156787A (en) * | 1991-01-29 | 1992-10-20 | Booher Benjamin V | Pultrusion method of making brake linings |
| USRE37548E1 (en) | 1991-08-12 | 2002-02-19 | Bill J. Hays | Clutch design and manufacture |
| US5482772A (en) | 1992-12-28 | 1996-01-09 | Kimberly-Clark Corporation | Polymeric strands including a propylene polymer composition and nonwoven fabric and articles made therewith |
| US6488649B1 (en) | 1998-11-24 | 2002-12-03 | Edward M. Lichten | Implant device |
| IL165365A0 (en) | 2004-11-24 | 2006-01-15 | Q Core Ltd | Finger-type peristaltic pump |
| BRPI0710690A2 (pt) * | 2006-04-21 | 2011-08-23 | Luk Lamellen & Kupplungsbau | guarnição de embreagem de múltiplas camadas, particularmente de duas camadas, e processo para produção da mesma |
| US8005603B2 (en) | 2007-09-27 | 2011-08-23 | Continental Controls Corporation | Fuel control system and method for gas engines |
Family Cites Families (16)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB1577115A (en) * | 1976-07-27 | 1980-10-22 | Reckitt & Colmann Prod Ltd | Container closure units |
| NZ183712A (en) * | 1976-04-08 | 1979-10-25 | Ici Ltd | Polypeptide analogues of enkephalins, and pharmaceutical compositions |
| US4028319A (en) * | 1976-05-07 | 1977-06-07 | G. D. Searle & Co. | 2 and 3-substituted enkephalins |
| US4123523A (en) * | 1976-06-21 | 1978-10-31 | Imperial Chemical Industries Limited | Analgesic and sedative polypeptides |
| FR2359817A1 (fr) * | 1976-07-27 | 1978-02-24 | Reckitt & Colmann Prod Ltd | Nouveaux peptides, leur procede de preparation et composition therapeutique les contenant |
| US4092304A (en) * | 1976-08-09 | 1978-05-30 | G. D. Searle & Co. | 4-Substituted enkephalin derivatives |
| SE7709806L (sv) * | 1976-09-01 | 1978-03-02 | Coy David Howard | Forfarande for framstellning av peptider |
| HU178001B (en) * | 1976-09-16 | 1982-02-28 | Gyogyszekutato Intezet | Process for preparing new pentapeptides with morphine-like activity and derivatives thereof |
| US4128541A (en) * | 1976-12-27 | 1978-12-05 | American Home Products Corporation | Pentapeptide with morphine- like activity |
| DE2819277A1 (de) * | 1977-05-16 | 1978-11-23 | Sandoz Ag | Neue polypeptidderivate, ihre herstellung und verwendung |
| US4127532A (en) * | 1977-06-16 | 1978-11-28 | Coy David Howard | Novel heptapeptides, intermediates therefor, and compositions and methods employing said heptapeptides |
| US4127523A (en) * | 1977-06-16 | 1978-11-28 | Coy David Howard | Novel undecapeptides, intermediates therefor, and compositions and methods employing said undecapeptides |
| US4127531A (en) * | 1977-06-16 | 1978-11-28 | Coy David Howard | Novel hexapeptides, intermediates therefor, and compositions and methods employing said hexapeptides |
| US4127533A (en) * | 1977-06-16 | 1978-11-28 | Coy David Howard | Novel octapeptides, intermediates therefor, and compositions and methods employing said octapeptides |
| GB1604850A (en) * | 1977-11-24 | 1981-12-16 | Wellcome Found | Biologically active peptides |
| US4103005A (en) * | 1977-10-20 | 1978-07-25 | Hoffmann-La Roche Inc. | Novel-enkephalin analogs |
-
1977
- 1977-11-24 GB GB48980/77A patent/GB1604850A/en not_active Expired
-
1978
- 1978-07-24 US US05/927,271 patent/US4244944A/en not_active Expired - Lifetime
- 1978-11-22 KR KR7803518A patent/KR860000453B1/ko active
- 1978-11-23 AT AT0836278A patent/AT386211B/de not_active IP Right Cessation
- 1978-11-23 SU SU782691552A patent/SU1470199A3/ru active
- 1978-11-23 IE IE2317/78A patent/IE47517B1/en unknown
- 1978-11-23 PL PL1978211164A patent/PL123797B1/pl unknown
- 1978-11-23 EP EP78101447A patent/EP0002236B1/en not_active Expired
- 1978-11-23 AU AU41865/78A patent/AU530985B2/en not_active Expired
- 1978-11-23 CA CA000316793A patent/CA1197235A/en not_active Expired
- 1978-11-23 DE DE7878101447T patent/DE2862477D1/de not_active Expired
- 1978-11-23 IL IL56028A patent/IL56028A/xx unknown
- 1978-11-23 DK DK523078A patent/DK149612C/da not_active IP Right Cessation
- 1978-11-23 FI FI783589A patent/FI70415C/fi not_active IP Right Cessation
- 1978-11-23 HU HU78WE591A patent/HU186729B/hu not_active IP Right Cessation
- 1978-11-23 IT IT52041/78A patent/IT1106143B/it active
- 1978-11-23 ES ES475324A patent/ES475324A1/es not_active Expired
- 1978-11-24 ZA ZA786598A patent/ZA786598B/xx unknown
- 1978-11-24 JP JP14521278A patent/JPS5492938A/ja active Granted
-
1980
- 1980-09-25 US US06/191,150 patent/US4346083A/en not_active Expired - Lifetime
- 1980-09-25 US US06/190,704 patent/US4343795A/en not_active Expired - Lifetime
- 1980-09-28 US US06/192,071 patent/US4362717A/en not_active Expired - Lifetime
- 1980-09-30 US US06/192,292 patent/US4363800A/en not_active Expired - Lifetime
-
1982
- 1982-08-30 KR KR8203912A patent/KR880002609B1/ko active
- 1982-08-30 KR KR8203911A patent/KR880002608B1/ko active
-
1985
- 1985-12-30 MY MY260/85A patent/MY8500260A/xx unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DK149612B (da) | Analogifremgangsmaade til fremstilling af et enkephalinanalogt pentapeptidderivat eller farmakologisk og farmaceutisk acceptable salte eller syreadditionssalte deraf | |
| FI92326C (fi) | LHRH:n nonapeptidi- ja dekapeptidianalogeja, jotka ovat käyttökelpoisia LHRH:n antagonisteina | |
| KR101021632B1 (ko) | 성기능 장애 치료용 조성물 및 치료 방법 | |
| DE2602443A1 (de) | Biologisch aktive polypeptide | |
| CH644352A5 (en) | Process for the preparation of peptides | |
| CA2224434A1 (en) | Compounds with growth hormone releasing properties | |
| FI82254B (fi) | Foerfarande foer framstaellning av nya, terapeutiskt anvaendbara peptider och salter daerav. | |
| US7220725B2 (en) | Pharmaceutical composition comprising an analgesic peptide and method for treating pain | |
| US5620959A (en) | Bombesin antagonists | |
| DE69330838T2 (de) | Lhrh antagonisten mit modifizierten aminoacylresten an den positionen 5 und 6 | |
| US4244945A (en) | Biologically active substance | |
| AU653544B2 (en) | Bombesin antagonists | |
| DE60218199T2 (de) | Humane wachstumshormone freisetzende hormonanaloge, deren herstellung und verwendung | |
| EP0000559B1 (en) | Pentapeptide-n-alkylamides and their acid addition salts, methods for preparation of these compounds and pharmaceutical formulations containing them | |
| RU2242241C1 (ru) | Тетрапептид, регулирующий уровень глюкозы при сахарном диабете, фармакологическое средство на его основе и способ его применения | |
| JPH04312599A (ja) | ポリペプチド骨格筋弛緩薬 | |
| GB1577114A (en) | Biologically active peptides | |
| DE2752341A1 (de) | Biologisch wirksame amide, verfahren zu ihrer herstellung und sie enthaltende pharmazeutische formulierungen | |
| GB1596535A (en) | Biologically-active peptides | |
| JPS6178800A (ja) | 生物活性ペプチド |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PBP | Patent lapsed |