DE964631C - Verfahren zur Gewinnung von kolloidal loeslichen Polysacchariden von Dematium pullulans - Google Patents

Description

• Verfahren zur Gewinnung von kolloidal löslichen Polysacchariden von Dematium pullulans Kolloidal lösliche Polysaccharide werden in der Industrie in, zunehmendem Maße benötigt. Sie finden Anwendung als. Verdickungsmittel für Arzneimittel-Lösungen, als geschmacksüberdeckende Stoffe bei der Tablett7p-nhers:tellung u. dgl. m.
• Die Eigenschaften, der in großen Mengen zur Verfügung stehenden Polysaccharide, Cellulose und Stärke sind für diese Zwecke unbefriedigend, da sie entweder gar nicht oder zu schwer in Wasser löslich sind,. Eine Überführung in. wasserlösliche Derivate ist mit tiefen chemischen, Eingriffen verbunden. Die von Mikroorganismen gebildeten Po@lysaccharide zeichnen sich demgegenüber oft durch eine gute Löslichkeit in Wasser aus: Es war aber bisher nichrt einfach, die reinen, Kolloide aus Kulturlösungen herzustellen.. Aus diesem Grunde wurden nur wenige Mikroorganismen, zur Erzeugung von Podysacchariden, herangezogen.
• Es wurde nun. gefunden, daß es, leicht möglich ist, aus der Con.idienform von Dematium pullulans kol:loida,l wasserlösliche Polysaocharide zu gewinnen und rein darzustellen.. Erfindungsgemäß läßt man Dematium pullu.lans auf Nährböden wachsen, die Mono- oder Oligo-Sa,ccharide enthalten und bricht den. mikrobiologischen Prozeß dann ab, wenn genügend Schleimstoffe gebildet sind, was meist nach 2 bis 5 Tagen der Fall ist. Man läßt die Fermentation zweckmäßig bei 2o bis 4o° C submers unter Belüftung ablaufen.
• Ein besonderer Vorteil der Verwendung von Dematium pullulans zur Erzeugung von kolloidal löslichen Polysacchariden besteht darin, daß es sehr leicht gelingt, das Zellmaterial von: den Kulturlösungen abzutrennen.. So genügt z. B. schon einmaliges Zentrifugieren, um ein völlig zellfreies Kulturfiltrat zu erhalten. Die quantitative Abtrennung des Zellmaterials ist aber die Voraussetzung für eine pharmazeutische Verwendbarkeit der erhaItenen Polysaccharide. Dieser Schritt stößt bei viskösen bakteriellen Kulturlösungen anderer Herkunft auf erhebliche Schwierigkeiten.. Die Aufarbeitung des zellfreien Kulturfiltrates kann durch Fällen der Polysaccharide mit organischen Lösungsmitteln erfolgen. Zu besonders reinen. Präparaten gelangt man, wenn die Polysaccharide nach dem Verfahren des. Patents 948 910 an Calciumhydroxyd adsorbiert und die Adsorptionsverbindungen mit Säure versetzt werden. Beispiel i ioo Ccm einer Nährlösung der Zusammensetzung Hefewasser . . . . . . . . . . . . . . , . . . . . . 50,0 ccm Rohrzucker ...................... 30,0 g K2 H P 04 ....... .............. 1,0 g MgS04 - 7H20 ................ 0,5 g K Cl ............................ 0,5 g Na N 03 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2,0 g Fe C13 .......................... 0,01 g Leitungswasser .................. i,o 1 wurden 30 Minuten bei i io° in Schüttelkulturkolben sterilisiert, mit Dematium pullulans beimpft, 2 Tage bei 26° C kultiviert und sodann mit weiteren 5 % Rohrzucker in Form einer konzentrierten. sterilen wäßrigen Lösung versetzt. Nach wiederum 36stündiger Kulturdauer wurde die Kulturlösung bei 3oöo Umdrehungen. pro Minute zentrifugiert, die überstehende Lösung mit 2 Teilen Methanol gefällt und das so gewonnene rohe Polysaccharid zweimal mit Methanol aus wäßriger Lösung umgefällt. Es resultierte ein weißes, klar wasserlösliches Polysaccharid, dessen Hydrolyseprodukt sich papierchromatographisch als einheitlich erwies. Beispiel 2 251 einer Nährlösung folgender Zusammenzetzung Rohrzucker ....................... 750,0 g K, H P 04 ........................ 2510 g MgS04 - 7H20 .................. z2,5 g K Cl ................ , .. .. ....... 12,5 g Na N03 ........................... 50,0 g Fe C13 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 0,25 g Maisquedlwassertrockensubstanz .... 62.5 g Mit Leitungswasser aufgefüllt auf . 25,0 1 wurden 3o Minuten, bei i io° C sterilisiert und in einem Rührfermenter mit Dem.atium pullulans beimpft. Unter Belüftung wurde 24 Stunden. bei 26° C kultiviert. Sodann wurden. i25o g Rohrzucker in Form einer konzentrierten., sterilen wäßrigen Lösung zur Kultur zugesetzt und die Fermentation bis zur Aufarbeitung des Kulturansatzes weitere 48 Stunden fortgesetzt.. Die Kulturlösung wurde zentrifugiert und dadurch zel.lfrei erhalten.. Mit 3 1 4oo/oiger Ca,lciumchloridlösung und 3 1 4 n-Natronlauge, die nacheinander zum Filtrat gegeben wurden, fielen die gesamten kolloidalen Polysaccharide in Form ihrer unlöslichen Calciumhydroxydadsö.rptionsverbindungen aus. Die Adsorptionsverbindung wurde mit Wasser und mit Methanol gewaschen und in methanolischer Suspension, mit o,81 i/2konzentrierter Salzsäure zerlegt. Das ungelöste zurückbleibende Polysaccharid wurde mit Methanol gewaschen und getrocknet. Es stellt ein weißes kolloidal in Wasser lösliches Pulver dar.

Claims (3)

1. PATENTANSPRÜCHE: i. Die Verwendung von Dematium pullulans für die Herstellung kolloidal wasserlöslicher Polysaccharide.
2. 2. Verfahren zur Herstellung von kolloidal löslichen Polysacchariden, dadurch gekennzeichnet, daß man Dematium pullulans auf Nährböden wachsen läßt, die Mono- oder Oligo-Saccharide enthalten, den mikrobiologischen Prozeß, vorzugsweise nach 2 bis 5 Tagen, abbricht, die Zellen abtrennt und. aus den erhaltenen Lösuilgen die Polysaccharide gewinnt.
3. 3. Verfahren nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß man Dematium pullulans auf rohrzuckerhaltigen Nährböden, bei Temperaturen zwischen 2o und 40° C submers unter aeroben Bedingungen. wachsen läßt.