DE69937997T2

DE69937997T2 - Inhibitoren des transkriptionsfaktors nf-kappa b

Info

Publication number: DE69937997T2
Application number: DE69937997T
Authority: DE
Inventors: James F. Philadelphia CALLAHAN; Marie C. Phoenixville CHABOT-FLETCHER
Original assignee: SmithKline Beecham Corp
Current assignee: SmithKline Beecham Corp
Priority date: 1998-06-19
Filing date: 1999-06-18
Publication date: 2009-02-19
Anticipated expiration: 2019-06-19
Also published as: IL140328A0; DE69937997D1; HUP0102782A3; CZ20004761A3; NO20006451D0; EP1085848A4; CO5021213A1; ATE383769T1; CA2335294A1; KR20010052991A; PL348969A1; CN1311629A; EP1085848B1; AU4690099A; NO20006451L; EP1085848A2; US6492425B1; ZA200007447B; HUP0102782A2; WO1999065449A8

Description

Gebiet der Erfindung
Diese Erfindung betrifft im allgemeinen Salicylanilid-Inhibitoren für den Transkriptionsfaktor NF-κB. Solche Verbindungen sind insbesondere zur Behandlung von Krankheiten nützlich, mit denen eine Aktivierung von NF-κB in Verbindung gebracht wird. Genauer gesagt inhibieren diese Verbindungen die IκB-Phosphorylierung und anschließende Degradation. Solche Verbindungen sind in der Behandlung einer Vielzahl von Krankheiten nützlich, die mit NF-κB-Aktivierung assoziiert sind, einschließlich Entzündungsstörungen; insbesondere rheumatoide Arthritis, entzündliche Darmerkrankung und Asthma; Dermatose, einschließlich Psoriasis und atopische Dermatitis; Autoimmunerkrankungen; Gewebe- und Organabstoßung; Alzheimer-Erkrankung; Schlaganfall; Atherosklerose; Restenose; Krebs, einschließlich Hodgkin-Erkrankung; und bestimmte virale Infektionen, einschließlich AIDS; Osteoarthritis; Osteoporose und Ataxia Telangiestasia.
Hintergrund der Erfindung
Kürzliche Fortschritte in der Wissenschaft bezüglich Mediatoren, die an akuten und chronischen entzündlichen Erkrankungen und Krebs beteiligt sind, haben zu neuen Strategien bei der Suche nach effektiven Therapeutika geführt. Traditionelle Ansätze beinhalten direkte Zielintervention, wie zum Beispiel die Verwendung von spezifischen Antikörpern, Rezeptorantagonisten oder Enzyminhibitoren. Ein Durchbruch der letzten Zeit bei der Aufklärung regulatorischer Mechanismen, die an der Transkription und Translation einer Vielzahl von Mediatoren beteiligt sind, haben zu einem gestiegenen Interesse an therapeutischen Ansätzen geführt, die auf der Ebene der Gentranskription gerichtet sind.
NE-κB gehört zu einer Familie von engverwandten dimeren Transkriptionsfaktorkomplexen, die aus verschiedenen Kombinationen der Rel/NF-κB-Familie von Polypeptiden gehören. Die Familie besteht aus fünf individuellen Genprodukten bei Säugern, RelA (p65), NF-κB1 (p50/p105), NF-κB2 (p49/p/100), c-Rel und RelB, von denen alle Hetero- oder Homodimere bilden können. Diese Proteine teilen sich eine hochhomologe 300-Aminosäure-"Rel-Homologiedomäne", die die DNA-Bindung und Dimerisierungsdomänen enthält. Am extremen C-Terminus der Rel-Homologiedomäne befindet sich eine nukleare Translokationssequenz, die beim Transport von NE-κB vom Cytoplasma zum Kern wichtig ist. Zusätzlich besitzen p65 und cRel starke Transaktivierungsdomänen an ihren C-terminalen Enden.
Die Aktivität von NF-κB wird durch seine Wechselwirkung mit einem Mitglied der Inhibitoren IκB-Familie von Proteinen reguliert. Diese Wechselwirkung blockiert effektiv die nukleare Lokalisierungssequenz der NF-κB-Proteine und verhindert so eine Migration des Dimers zum Kern. Eine breite Vielzahl von Stimuli aktiviert NF-κB über was vermutlich multiple Signaltransduktionswege sind. Beinhaltet sind bakterielle Produkte (LPS), einige Viren (HIV-1, HTLV-1), entzündliche Cytokine (TNFα, IL-1) und Umweltstreß. Offensichtlich ist allen Stimuli jedoch die Phosphorylierung und der darauffolgende Abbau von IκB gemeinsam. IκB wird an zwei N-terminalen Serinen durch die kürzlich identifizierten IκB-Kinasen (IKK-α und IKK-β) phosphoryliert. Ortsgerichtete Mutagenesestudien zeigen an, daß diese Phosphorylierungen für die darauffolgende Aktivierung von NE-κB darin kritisch sind, daß sie sobald sie phosphoryliert sind, das Protein für einen Abbau über den Ubiquitin-Proteasom-Weg markiert ist. Frei von IκB sind die aktiven NF-κB-Komplexe dazu in der Lage, sich zum Kern zu translozieren, wo sie auf selektive Weise an bevorzugte Gen-spezifische Enhancer-Sequenzen binden. Beinhaltet in den durch NF-κB-regulierten Genen sind eine Anzahl von Cytokinen, Zelladhäsionsmolekülen und Akutphasenproteine.
Es ist wohlbekannt, daß NE-κB eine Schlüsselrolle bei der regulierten Expression einer großen Anzahl von pro-inflammatorischen Mediatoren, einschließlich Cytokinen spielt, wie zum Beispiel IL-6 und IL-8, Zelladhäsionsmolekülen wie ICAM und VCAM und der induzierbaren Stickoxidsynthase (iNOS). Es ist bekannt, daß solche Mediatoren eine Rolle bei der Anziehung von Leukozyten zu Entzündungsstellen spielen und im Fall von iNOS kann dies zu einer Organzerstörung bei einigen entzündlichen und Autoimmunerkrankungen führen.
Die Wichtigkeit von NE-κB bei entzündlichen Störungen wird weiter durch Studien von Luftwegeentzündungen einschließlich Asthma bestärkt, wobei gezeigt wurde, daß NE-κB aktiviert wurde. Diese Aktivierung könnte der erhöhten Cytokinproduktion wie auch den Leukozyteninfiltrations eigenschaften dieser Störung zugrund liegen. Es ist zusätzlich bekannt, daß inhalierte Steroide die Luftweghyperreaktivität reduzieren und die entzündliche Reaktion in den asthmatischen Luftwegen unterdrücken. Im Lichte der kürzlichen Feststellungen im Hinblick auf die Glucocorticoid-Inhibition von NF-κB kann man spekulieren, daß diese Wirkungen durch eine Inhibition von NF-κB vermittelt werden.
Weitere Hinweise auf eine Rolle von NF-κB bei entzündlichen Störungen ergeben sich aus Studien der rheumatoiden Gelenkhaut. Obwohl NE-κB normalerweise als inaktiver cytoplasmatischer Komplex vorliegt, haben kürzliche immunhistochemische Studien angezeigt, daß NE-κB in den Kernen vorliegt und daher in den Zellen aktiv ist, die die rheumatoide Gelenkhaut umfassen. Weiterhin wurde gezeigt, daß NF-κB in menschlichen Synovialzellen als Reaktion auf eine Stimulierung mit TNF-α aktiviert wird. Eine solche Verteilung kann der zugrundeliegende Mechanismus für die erhöhte Cytokin- und Eicosanoid-Produktionseigenschaften dieses Gewebes sein. Siehe A. K. Roshak et al., J. Biol. Chem. 271, 31496–31501 (1996).
Es ist auch wahrscheinlich, daß die NF-κB/Rel- und IκB-Proteine eine Schlüsselrolle bei der neoplastischen Transformation spielen. Familienmitglieder sind mit einer Zelltransformation in vitro und in vivo als Ergebnis einer Überexpression, Gen-Amplifikation, Gen-Umordnungen oder Translokationen assoziiert. Zusätzlich wird eine Umordnung und/oder Amplifikation der Gene, die diese Proteine codieren, bei 20–25% bestimmter menschlicher Lymphoidtumoren beobachtet. Zusätzlich wurde eine Rolle für NE-κB in der Regulation von Apoptose berichtet, was die Rolle dieses Transkriptionsfaktors in der Kontrolle der Zellproliferation stärkt.
Etliche NE-κB Inhibitoren werden in C. Wahl et al., J. Clin. Invest. 101(5), 1163–1174 (1998), R. W. Sullivan et al., J. Med. Chem. 41, 413–419 (1998), J. W. Pierce et al., J. Biol. Chem. 272, 21096–21103 (1997) beschrieben.
Salicylanilide sind bekannte Verbindungen. Eine allgemeine Lösungszubereitung von Salicylaniliden wird durch M. T. Clark, R. A. Coburn, R. T. Evans, R. J. Genco, J. Med. Chem., 1986, 29, 25–29 beschrieben.
Wir haben nun ein neues Verfahren zur Inhibierung der Aktivierung des Transkriptionsfaktor NE-κB unter Verwendung von Salicylaniliden ermittelt.
Zusammenfassung der Erfindung
Es ist eine Aufgabe der vorliegenden Erfindung ein Verfahren zur Behandlung von Erkrankungen bereitzustellen, die durch Veränderung der Aktivität des Transkriptionsfaktors NF-κB therapeutisch modifiziert werden können.
Dementsprechend stellt diese Erfindung in einem ersten Aspekt eine pharmazeutische Zusammensetzung bereit, die eine Verbindung umfaßt, die folgende ist:
N-(4-Acetylphenyl)-2-hydroxy-5-iodphenylcarboxamid;
N-(2,4-Difluorphenyl)-2-hydroxy-5-nitrophenylcarboxamid;
N-(2,4-Difluorphenyl)-2-hydroxy-5-iodphenylcarboxamid;
oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz, Hydrat oder Solvat davon.
In noch einem anderen Aspekt stellt diese Erfindung die Verwendung einer Verbindung wie zuvor beschrieben bei der Herstellung eines Medikaments für die Behandlung von Krankheiten bereit, deren Krankheitspathologie durch die Inhibierung von NF-κB therapeutisch modifiziert werden kann.
In einem besonderen Aspekt stellt diese Erfindung die Verwendung einer Verbindung wie zuvor beschrieben bei der Herstellung eines Medikaments für die Behandlung einer Vielzahl von Krankheiten bereit, die mit NF-κB-Aktivierung assoziiert sind, einschließlich Entzündungsstörungen; insbesondere rheumatoide Arthritis, entzündliche Darmerkrankung und Asthma; Dermatose, einschließlich Psoriasis und atopische Dermatitis; Autoimmunerkrankungen; Gewebe- und Organabstoßung; Alzheimer-Erkrankung; Schlaganfall; Atherosklerose; Restenose; Krebs, einschließlich Hodgkin-Erkrankung; und bestimmte virale Infektionen, einschließlich AIDS; Osteoarthritis; Osteoporose und Ataxia Telangiestasia.
Detaillierte Beschreibung der Erfindung
Die vorliegende Erfindung stellt eine Verbindung bereit, die folgende ist:
N-(4-Acetylphenyl)-2-hydroxy-5-iodphenylcarboxamid;
N-(2,4-Difluorphenyl)-2-hydroxy-5-nitrophenylcarboxamid;
N-(2,4-Difluorphenyl)-2-hydroxy-5-iodphenylcarboxamid;
oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz, Hydrat oder Solvat davon.
Herstellungsverfahren
Die Verbindungen der vorliegenden Erfindung können in geeigneter Weise durch die nachfolgend in Schema 1 und 2 dargelegten Verfahren hergestellt werden.
Eine allgemeine Lösungszubereitung von Salicylaniliden wird durch M. T. Clark, R. A. Coburn, R. T. Evans, R. J. Genco; J. Med. Chem.; 1986; 29; 25–29 beschrieben. Diese Verbindungen können ebenfalls in geeigneter Weise durch Festphasentechniken, einschließlich in der Form einer Bibliothek, hergestellt werden.
Allgemeine Herstellung:
Die allgemeine Lösungszubereitung ist in Schema 1 und 2 gezeigt. Ein Salicylanilid wird durch die Kondensation einer substituierten Salicylsäure mit einem substituierten Anilin in Gegenwart von Phosphortrichlorid in trockenem Chlorbenzol hergestellt (Schema 1). Ein Salicylanilid kann ebenfalls durch Umwandlung einer substituierten Salicylsäure in ihr entsprechendes Säurechlorid mit Thionylchlorid in Toluol mit katalytischen DMF hergestellt werden. Das resultierende Salicylsäurechlorid und ein substituiertes Anilin werden dann in Toluol erhitzt, um ein Salicylanilid zu bilden (Schema 2). Schema 1
Die Ausgangsmaterialien, die hier verwendet werden, sind kommerziell erhältlich oder werden durch Routineverfahren hergestellt, die dem Fachmann wohlbekannt sind und in Standardreferenztexten wie COMPENDIUM OF ORGANIC SYNTHETIC METHODS, Bd. I–VI (veröffentlicht von Wiley-Interscience) gefunden werden.
Säureadditionssalze der beanspruchten Verbindungen werden in einer Standardweise in einem geeigneten Lösungsmittel aus der Stammverbindung und einem Überschuß einer Säure, wie zum Beispiel Chlorwasserstoffsäure, Bromwasserstoffsäure, Fluorwasserstoffsäure, Schwefelsäure, Phosphorsäure, Essigsäure, Trifluoressigsäure, Maleinsäure, Bernsteinsäure oder Methan sulfonsäure, hergestellt. Bestimmte der Verbindungen bilden innere Salze oder Zwitterione, die annehmbar sein können. Kationische Salze werden durch Behandlung der Stammverbindung mit einem Überschuß eines alkalischen Reagenzes, wie zum Beispiel einem Hydroxid, Carbonat oder Alkoxid, das das geeignete Kation enthält, oder mit einem geeigneten organischen Amin hergestellt. Katione wie Li⁺, Na⁺, K⁺, Ca⁺⁺, Mg⁺⁺ und NH₄ ⁺ sind spezifische Beispiele von Kationen, die in pharmazeutisch annehmbaren Salzen vorliegen. Halogenide, Sulfat, Phosphat, Alkanoate (wie zum Beispiel Acetat und Trifluoracetat), Benzoate und Sulfonate (wie zum Beispiel Mesylate) sind Beispiele für Anione, die in pharmazeutisch annehmbaren Salzen vorkommen.
Diese Erfindung stellt eine pharmazeutische Zusammensetzung bereit, die eine Verbindung der Erfindung und einen pharmazeutisch annehmbaren Träger, Verdünnungsstoff oder Exzipienten umfaßt. Dementsprechend können die Verbindungen der Erfindung bei der Herstellung eines Medikaments verwendet werden. Pharmazeutische Zusammensetzungen dieser Verbindungen, die wie vorstehend beschrieben hergestellt werden, können als Lösungen oder lyophilisierte Pulver für die parenterale Verabreichung formuliert sein. Pulver können durch Zugabe eines geeigneten Verdünnungsmittels oder eines anderen pharmazeutisch annehmbaren Trägers vor der Verwendung rekonstituiert werden. Die flüssige Formulierung kann eine gepufferte, isotonische, wäßrige Lösung sein. Beispiele für geeignete Verdünnungsmittel sind normale isotonische Salzlösung, Standard-5%-Dextrose in Wasser oder gepufferte Natrium- oder Ammoniumacetat-Lösung. Solche Formulierungen sind insbesondere für die parenterale Verabreichung geeignet, können jedoch auf die orale Verabreichung verwendet werden, oder in einem geeigneten Dosisinhalator oder Zerstäuber für das Einatmen enthalten sein. Es kann wünschenswert sein, Exzipienten wie Polyvinylpyrrolidon, Gelatine, Hydroxycellulose, Gummi arabicum, Polyethylenglykol, Mannit, Natriumchlorid oder Natriumcitrat zuzufügen.
Alternativ kann diese Verbindung verkapselt, tablettiert oder als Emulsion oder Sirup für die orale Verabreichung hergestellt werden. Pharmazeutisch annehmbare feste oder flüssige Träger können zugefügt werden, um die Zusammensetzung zu verstärken oder zu stabilisieren oder um die Herstellung der Zusammensetzung zu erleichtern. Feste Träger beinhalten Stärke, Lactose, Calciumsulfatdihydrat, Terra Alba, Magnesiumstearat oder Stearinsäure, Talkum, Pektin, Gummi arabicum, Agar oder Gelatine. Flüssige Träger beinhalten Sirup, Erdnußöl, Olivenöl, Kochsalzlösung und Wasser. Die Träger können auch ein Material zur verzögerten Freisetzung enthalten wie Glycerylmonostearat oder Glyceryldistearat, allein oder mit einem Wachs. Die Menge an festem Träger variiert, wird jedoch vorzugsweise zwischen ungefähr 20 mg und ungefähr 1 g pro Dosierungseinheit liegen. Die pharmazeutischen Zubereitungen werden folgend den konventionellen Techniken der Pharmazie hergestellt, die ein Mahlen, Vermischen, Granulieren und Verpressen involvieren, falls nötig für Tablettenformen; oder ein Mahlen, Vermischen und Füllen für Hartgelatinekapselformen. Wenn ein flüssiger Träger verwendet wird, wird sich die Zubereitung in Form eines Sirups, Elixiers, einer Emulsion oder einer wäßrigen oder nicht-wäßrigen Suspension befinden. Eine solche flüssige Formulierung kann direkt p. o. verabreicht werden oder in eine Weichgelatinekapsel gefüllt werden.
Für die rektale Verabreichung können die Verbindungen dieser Erfindung ebenfalls mit Elixieren wie Kakaobutter, Glycerin, Gelatine oder Polyethylenglykolen kombiniert und in ein Suppositorium geformt werden.
Die Verfahren der vorliegenden Erfindung schließen die topische Verabreichung der beanspruchten Verbindungen ein. Unter topischer Verabreichung wird eine nicht-systemische Verabreichung verstanden, einschließlich einer Anwendung einer Verbindung der Erfindung äußerlich auf die Epidermis, der Bukkalhöhle und des Eintröpfelns einer solchen Verbindung in das Ohr, das Auge und die Nase, wobei die Verbindung den Blutstrom nicht signifikant betritt. Unter systemischer Verabreichung wird eine orale, intravenöse, intraperitoneale und intramuskuläre Verabreichung verstanden. Die Menge einer Verbindung der Erfindung (hiernach als aktiver Bestandteil bezeichnet), die für eine therapeutische oder prophylaktische Wirkung bei topischer Verabreichung nötig ist, wird natürlich je nach dieser gewählten Verbindung, der Art und Schwere des zu behandelnden Zustands und dem die Behandlung durchmachenden Tier variieren und befindet sich schlußendlich in der Entscheidungsgewalt des behandelnden Arztes.
Während es möglich ist, daß ein aktiver Bestandteil allein als Rohchemikalie verabreicht wird, wird es bevorzugt ihn als pharmazeutische Formulierung darzubieten. Der aktive Bestandteil kann für die topische Verabreichung 0,01 bis 5,0 Gew.% der Formulierung umfassen.
Die topischen Formulierungen der vorliegenden Erfindung, sowohl für veterinärmedizinische als auch für die humanmedizinische Verwendung, umfassen einen aktiven Bestandteil zusammen mit einem oder mehreren annehmbaren Trägern hierfür und optional irgendwelchen anderen therapeutischen Bestandteilen. Der Träger muß in dem Sinne "annehmbar" sein, daß er mit den anderen Bestandteilen der Formulierung kompatibel ist und sich auf den Empfänger nicht nachteilig auswirkt.
Für die topische Verabreichung geeignete Formulierungen schließen flüssige oder halbflüssige Zubereitungen, die für die Durchdringung der Haut zu der Stelle, an der eine Behandlung nötig ist, geeignet sind, ein, wie zum Beispiel: Einreibemittel, Lotionen, Cremen, Salben oder Pasten und für die Verabreichung an das Auge, Ohr oder die Nase geeignete Tropfen.
Die Tropfen gemäß der vorliegenden Erfindung können sterile wäßrige oder ölige Lösungen oder Suspensionen umfassen und können hergestellt werden, indem der aktive Bestandteil in eine geeigneten wäßrigen Lösung eines bakteriziden und/oder fungiziden Mittels und/oder irgendeinem anderen geeigneten Konservierungsmittel gelöst wird und beinhaltet vorzugsweise ein Tensid. Die resultierende Lösung kann durch Filtration geklärt, in einem geeigneten Behälter übertragen werden, der dann versiegelt wird und durch Autoklavieren oder Haltung bei 90–100°C für eine halbe Stunde sterilisiert wird. Alternativ kann die Lösung durch Filtration sterilisiert werden und durch eine aseptische Technik in den Behälter übertragen werden. Beispiele für bakterizide und fungizide Mittel, die zum Einschluß in die Tropfen geeignet sind, sind Phenylquecksilbernitrat oder -acetat (0,002%), Benzalkoniumchlorid (0,01%) und Chlorhexidinacetat (0,01%). Geeignete Lösungsmittel für die Herstellung einer öligen Lösung beinhalten Glycerin, verdünnten Alkohol und Propylenglykol.
Lotionen gemäß der vorliegenden Erfindung beinhalten diejenigen die für die Anwendung auf die Haut oder das Auge geeignet sind. Eine Augenlotion kann eine sterile wäßrige Lösung umfassen, die optional ein Bakterizid enthält und kann durch Verfahren hergestellt werden, die denjenigen für die Herstellung von Tropfen ähnlich sind. Lotionen oder Einreibemittel für die Anwendung auf die Haut können auch ein Mittel beinhalten, um das Trocknen zu beschleunigen und die Haut zu kühlen, wie zum Beispiel einen Alkohol oder Aceton und/oder ein Anfeuchtungsmittel wie Glycerin oder ein Öl wie Rizinusöl oder Erdnußöl.
Cremen, Salben oder Pasten gemäß der vorliegenden Erfindung sind halbfeste Formulierungen des aktiven Bestandteils für die äußere Anwendung. Sie können durch Vermischen des aktiven Bestandteils in feinverteilter oder pulverförmiger Form, allein oder in Lösung oder Suspension in einem wäßrigen oder nicht-wäßrigen Fluid hergestellt werden, unter Zuhilfenahme einer geeigneten Maschine, mit fettiger oder nicht-fettiger Basis. Die Basis kann Kohlenwasserstoffe umfassen, wie zum Beispiel hartes, weiches oder flüssiges Paraffin, Glycerin, Bienenwachs, eine metallische Seife, ein Mucilage, ein Öl natürlichen Ursprungs, wie zum Beispiel Mandelöl, Maisöl, Erdnußöl, Rizinusöl, oder Olivenöl, Wollfett oder seine Derivate oder eine Fettsäure wie zum Beispiel Stearin- oder Oleinsäure zusammen mit einem Alkohol wie Propylenglykol oder Macrogolen. Die Formulierung kann jedes geeignete Tensid wie zum Beispiel ein anionisches, kationisches oder nichtionisches Tensid wie Sorbitanester oder Polyoxyethylen-Derivate davon beinhalten. Suspendiermittel wie natürliche Kautschuke, Cellulose-Derivate oder anorganische Materialien wie silicahaltige Kieselerden und andere Bestandteile wie Lanolin können ebenfalls beinhaltet sein.
Verwendbarkeit der vorliegenden Erfindung
Die Verbindungen der Erfindung sind als Inhibitoren des NF-κB nützlich. Die vorliegende Erfindung stellt nützliche Zusammensetzungen und Formulierungen der Verbindungen, einschließlich pharmazeutische Zusammensetzungen und Formulierungen der Verbindungen bereit.
Die vorliegende Erfindung stellt ebenfalls ihre Verwendung bei der Herstellung eines Medikaments für die Behandlung von Krankheiten bereit, die mit NF-κB-Aktivierung assoziiert sind. Die vorliegende Erfindung stellt insbesondere eine Verwendung zur Behandlung von entzündlichen Störungen; insbesondere rheumatoider Arthritis, entzündlicher Darmerkrankung und Asthma; Dermatose, einschließlich Psoriasis und atopischer Dermatitis; Autoimmunerkrankungen; Gewebe- und Organabstoßung; Alzheimer-Erkrankung; Schlaganfall; Atherosklerose; Restenose; Krebs, einschließlich Hodgkin-Erkrankung; und bestimmter viraler Infektionen, einschließlich AIDS; Osteoarthritis; Osteoporose und Ataxia Telangiestasia bereit.
Für die akute Verwendung wird eine parenterale Verabreichung einer Verbindung der beanspruchten Erfindung bevorzugt. Eine intravenöse Infusion der Verbindung in 5% Dextrose in Wasser oder normaler Kochsalzlösung oder eine ähnliche Formulierung mit geeigneten Exzipienten ist besonders effektiv, obwohl eine intramuskuläre Bolusinjektion auch nützlich ist. Typischerweise wird die parenterale Dosis bei ungefähr 0,01 bis ungefähr 50 mg/kg liegen; vorzugsweise zwischen 0,1 und 20 mg/kg auf eine Weise um die Konzentration eines Arzneistoffs im Plasma bei einer effektiven Konzentration zur Inhibierung einer Aktivierung von NF-κB zu erhalten. Die Verbindungen werden 1- bis 4-mal täglich auf einem Niveau verabreicht, um eine gesamte tägliche Dosis von ca. 0,4 bis ca. 80 mg/kg/Tag zu erreichen. Die präzise Menge einer Verbindung der Erfindung, die therapeutisch effektiv ist, und die Art und Weise, durch die die Verbindung am besten verabreicht wird, wird durch den Fachmann auf dem Gebiet einfach bestimmt, indem das Blutniveau des Mittels mit der nötigen Konzentration für einen therapeutischen Effekt verglichen wird.
Die Verbindungen der Erfindung können ebenfalls oral an den Patienten in einer Weise verabreicht werden, so daß die Konzentration des Arzneistoffs ausreichend ist, NE-κB zu inhibieren. Typischerweise wird eine pharmazeutische Zusammensetzung, die die Verbindung enthält, mit einer oralen Dosis von ungefähr 0,1 bis ungefähr 50 mg/kg auf eine Weise verabreicht, die dem Zustand des Patienten entspricht. Vorzugsweise würde die orale Dosis bei ungefähr 0,5 bis ungefähr 20 mg/kg liegen.
Die Verbindungen der Erfindung können dem Patienten ebenfalls topisch verabreicht werden, auf eine Weise, daß die Konzentration des Arzneistoffs ausreicht, um NF-κB zu inhibieren oder um irgendeine andere therapeutische Indikation wie hier offenbart zu erreichen. Typischerweise wird eine pharmazeutische Zusammensetzung, die die Verbindung enthält, in einer topischen Formulierung mit ungefähr 0,01 bis ungefähr 5% G/G verabreicht.
Es werden keine nicht-annehmbaren toxikologischen Wirkungen erwartet, wenn die Verbindungen der vorliegenden Erfindung gemäß der vorliegenden Erfindung verabreicht werden.
Die Fähigkeit der hier beschriebenen Verbindungen, die Aktivierung von NE-κB zu inhibieren, wird deutlich durch ihre Fähigkeit belegt, die NF-κB-geführte Reportergenaktivität zu inhibieren (siehe Tabelle 1). Die Brauchbarkeit der vorliegenden NF-κB-Inhibitoren in der Therapie von Krankheiten setzt die Bedeutung der NF-κB-Aktivierung in einer Auswahl von Krankheiten voraus. Tabelle 1 Inhibierung der NF-κB-geführten Reportergenaktivität

NF-κB spielt eine Schlüsselrolle bei der Regulierung der Expression einer großen Anzahl von pro-inflammatorischen Mediatoren einschließlich Cytokinen wie IL-6 und IL-8 (Mukaida et al., 1990; Liberman und Baltimore, 1990; Matsusaka et al., 1993), Zelladhäsionsmolekülen wie ICAM und VCAM (Marui et al., 1993; Kawai et al., 1995; Ledebur und Parks, 1995) und der induzierbaren Stickoxidsynthase (iNOS) (Xie et al., 1994; Adcock et al., 1994). (Vollständige Referenzzitate befinden sich am Ende dieses Abschnitts.) Von solchen Mediatoren ist bekannt, daß sie eine Rolle beim Anziehen von Leukozyten an Entzündungsstellen spielen und im Fall von iNOS zu einer Organzerstörung bei einigen entzündlichen und Autoimmunerkrankungen führen können (McCartney-Francis et al., 1993; Kleemann et al., 1993). Wichtig, die hier beschriebenen Verbindungen inhibieren die IL-8-Synthese und die Produktion von Stickstoffoxid, einem Produkt der iNOS-Aktivität (siehe Tabelle 2). Tabelle 2 Entzündungshemmende Aktivität der Verbindung 3 aus Tabelle 1

in vitro
TNF-stimulierte IL-8-Produktion in U937-Zellen	IC₅₀ = 3 μM
IL-1-induzierte PGE2-Produktion in RSF	IC₅₀ = 3 μM
IL-1-stimulierte Stickoxid-Produktion	IC₅₀ = 5 μM
in vivo
Phorbolester-induzierte Ohrentzündung Ohrschwellung entzündliche Zellinfiltration	ED₅₀ = 0,2 mg/Ohr ED₅₀ = 0,2 mg/Ohr

Beweise für eine wichtige Rolle von NE-κB bei entzündlichen Störungen werden durch Studien asthmatischer Patienten erhalten. Bronchialbiopsien, die von mild atopischen Asthmatikern entnommen wurden, zeigen einen signifikanten Anstieg der Zahl der Zellen in der Submucosa-Färbung für aktiviertes NE-κB, Gesamt-NF-κB und NF-κB-regulierte Cytokine, wie zum Beispiel GM-CSF und TNFα im Vergleich mit Biopsien von normalen nicht-atopischen Kontrollen (Wilson et al., 1998). Weiterhin ist der Prozentsatz an Gefäßen, die eine NF-κB-Immunreaktivität exprimieren, erhöht, wie die IL-8-Immunreaktivität im Epithel der Biopsieproben (Wilson et al., 1998). Als solche würde vorhergesagt werden, daß die Inhibierung der IL-8-Produktion durch Inhibierung von NE-κB, wie durch diese Verbindungen demonstriert, für Atemwegsentzündungen günstig sein würden.
Studien in letzter Zeit legen nahe, daß NF-κB auch eine kritische Rolle bei der Pathogenese von entzündlicher Darmerkrankung (IBD) spielen kann. Aktiviertes NE-κB wird in Kolon-Biopsieproben der Morbus Chron und Patienten mit ulzerativer Kolitis beobachtet (Ardite et al., 1998; Rogler et al.; 1998; Schreiber et al., 1998). Eine Aktivierung ist in der entzündeten Mukosa evident, jedoch nicht in der nicht-entzündeten Mukosa (Ardite et al., 1998; Rogler et al., 1998) und ist mit einer erhöhten IL-8-mRNA-Expression an denselben Stellen assoziiert (Ardite et al., 1998). Weiterhin inhibiert die Corticosteroid-Behandlung die intestinale NE-κB-Aktivierung deutlich und reduziert die Kolonentzündung (Ardite et al., 1998; Schreiber et al., 1998). Wiederum würde vorhergesagt werden, daß die Inhibierung die IL-8-Produktion durch Inhibierung von NE-κB, wie durch diese Verbindungen demonstriert, für entzündliche Darmerkrankung nützlich sein würden.
Tiermodelle der gastrointestinalen Entzündung stellen weitere Stützen für NE-κB als Schlüsselregulator der Kolonentzündung bereit. Eine erhöhte NF-κB-Aktivität wird in Lamina-Propria-Makrophagen bei 2,4,6-Trinitrobenzolsulfonsäure(TNBS)-induzierter Kolitis bei Mäusen beobachtet, wobei p65 ein Hauptbestandteil der aktivierten Komplexe ist (Neurath et al., 1996; Neurath und Pettersson, 1997). Eine lokale Verabreichung von p65-Antisense hebt die Zeichen der etablierten Kolitis bei behandelten Tieren ohne Zeichen einer Toxizität auf (Neurath et al., 1996; Neurath und Pettersson, 1997). Als solches würde man vorhersagen, daß niedermolekulare Inhibitoren von NE-κB bei der Behandlung von IBD nützlich sein würden.
Weitere Beweise für eine Rolle von NE-κB bei entzündlichen Störungen ergeben sich aus Studien der rheumatoiden Gelenkhaut. Obwohl NF-κB nor malerweise als inaktiver Cytoplasmakomplex vorliegt, haben kürzliche immunhistochemische Studien angezeigt, daß NF-κB in den Kernen vorliegt und daher in den Zellen aktiv ist, die menschliche rheumatoide Gelenkhaut umfassen (Handel et al., 1995; Marok et al., 1996; Sioud et al., 1998) und in Tiermodellen der Erkrankung (Tsao et al., 1997). Die Färbung ist mit Wildtyp A-Synoviozyten und vaskulärem Epithel assoziiert (Marok et al., 1996). Weiterhin wird eine konstitutive Aktivierung von NF-κB bei kultivierten Synoviozyten beobachtet (Roshak et al., 1996; Miyazawa et al., 1998) und bei Synovial-Zellkulturen, die mit IL-1β oder TNFα stimuliert wurden (Roshak et al., 1996; Fujisawa et al., 1996; Roshak et al., 1997). So kann die Aktivierung von NF-κB der erhöhten Cytokinproduktion und der Leukozyteninfiltrationseigenschaft der entzündeten Gelenkhaut zugrundeliegen. Die Fähigkeit dieser Verbindungen NF-κB zu inhibieren und dadurch die Erzeugung von Eicosanoiden durch diese Zellen, würde sie damit für die rheumatoide Arthritis vorteilhaft erscheinen lassen (siehe Tabelle 2).

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Biologische Tests
Die Verbindungen dieser Erfindung können in einen von etlichen biologischen Tests getestet werden, um die Konzentration der Verbindung zu bestimmen, die nötig ist, um einen gegebenen pharmakologischen Effekt zu erreichen.
NF-κB-Aktivitätstests werden unter Verwendung eines zellbasierenden Luciferase-Reportertests, wie in J. J. Breton und M. C. Chabot-Fletcher, JPET, 282, 459–466 (1997) beschrieben, durchgeführt. In Kürze, U937 humane histiocytische Lymphoma-Zelllinien, die permanent mit den NF-κB-Reporterplasmiden (siehe nachfolgend) transfiziert sind, werden in dem zuvor genannten Medium mit dem Zusatz von 250 μg/ml Geneticin (G418 Sulfat, Life Technologies, Grand Island, NY) kultiviert. Der Luciferase-Reportertest wird in den transfizierten U937-Klonen durchgeführt. Diese werden zweimal bei 300 × g für 5 min zentrifugiert und in RPMI 1640 mit 10% FBS auf eine Dichte von 1 × 10⁶ Zellen/ml resuspendiert. 1 ml Aliquots werden zu den Vertiefungen einer Platte mit 24 Vertiefungen gegeben. Verbindung oder Dimethylsulfoxid(DMSO)-Träger (1 μl) wird zu den entsprechenden Vertiefungen hinzugegeben und die Platten bei 37°C, 5% CO₂ für 30 min inkubiert. Der Stimulus wird hinzugegeben (5 ng/ml TNFα, 100 ng/ml LPS oder 0,1 μM PMA) und die Proben für 5 Stunden bei 37°C, 5% CO₂ inkubiert, in 1,9 ml Polypropylen-Gefäße überführt und bei 200 × g für 5 min zentrifugiert. Die Zellpellets werden zweimal in 1 ml PBS ohne Ca²⁺ und Mg²⁺ gewaschen und wie oben angegeben zentrifugiert. Die resultierenden Zellpellets werden in 50 μl 1 × Lysispuffer (Promega Corporation, Madison, WI) lysiert, gevortext und für 15 min bei Raumtemperatur inkubiert. Ein 20 μl-Aliquot jedes Lysats wird in eine undurchsichtige weiße Platte mit 96 Vertiefungen (Wallac Inc., Gaithersburg, MD) überführt und auf Luciferase-Produktion in einem MicroLumat LB 96P-Luminometer (E. G. & G. Berthold, Bad Wilbad, Deutschland) untersucht. Der Luminometer spendet 100 μl Luciferase-Testreagens (Promega Corporation, Madison, WI) in jede Vertiefung und die integrierte Lichtausgabe wird für 20 Sekunden aufgezeichnet. Die Lichtausgabe wird in relative Lichteinheiten (RLUs) gemessen.
Die NF-κB-Aktivität kann auch in einem Elektrophorese-Mobilitäts-Shiftassay (EMSA) gemessen werden, um die Gegenwart von NF-κB-Protein im Kern zu bewerten. Die Zellen von Interesse werden auf eine Dichte von 1 × 10⁶ /ml kultiviert. Die Zellen werden durch Zentrifugation geerntet, in PBS ohne Ca²⁺ und Mg²⁺ gewaschen und in PBS mit Ca²⁺ und Mg²⁺ bei 1 × 10⁷ Zellen/ml resuspendiert. Um die Wirkung der Verbindung auf die Aktivierung von NP-κB zu überprüfen, werden die Zellsuspensionen mit verschiedenen Konzentrationen von Arzneistoff oder Vehikel (DMSO, 0,1%) für 30 min bei 37°C vor der Stimulierung mit TNFα (5,0 ng/ml) für zusätzliche 15 min behandelt. Zelluläre und nukleäre Extrakte werden wie folgt hergestellt: Kurz gefaßt werden nach Ende der Inkubationszeitspanne die Zellen (1 × 10⁷ Zellen) zweimal in PBS ohne Ca²⁺ und Mg²⁺ gewaschen. Die resultierenden Zellpellets werden in 20 μl Puffer A (10 mM Hepes (pH 7,9), 10 mM KCl, 1,5 mM MgCl₂, 0,5 mM Dithiothreitol (DTT) und 0,1% NP-40) resuspendiert und 10 min auf Eis inkubiert. Die Kerne werden durch Mikrozentrifugation bei 3500 Upm 10 min bei 4°C pelletisiert. Der resultierende Überstand wird als zellulärer Extrakt gesammelt und das Kernpellet wird in 15 μl Puffer C (20 mM Hepes (pH 7,9), 0,42 M NaCl, 1,5 mM MgCl₂, 25% Glycerin, 0,2 mM EDTA, 0,5 mM DTT und 0,5 mM Phenylmethylsulfonylfluorid (PMSF)) resuspendiert. Die Suspensionen werden vorsichtig für 20 min bei 4°C gemischt und dann bei 14 000 Upm für 10 min bei 4°C mikrozentrifugiert. Der Überstand wird gesammelt und auf 60 μl mit Puffer D (20 mM Hepes (pH 7,9), 50 mM KCl, 20% Glycerin, 0,2 mM EDTA, 0,5 mM DTT und 0,5 mM PMSF) verdünnt. Alle Proben werden bei –80°C gelagert bis sie analysiert werden. Die Protein-Konzentration der Extrakte wird gemäß dem Verfahren von Bradford (Bradford, 1976) mit BioRad-Reagentien bestimmt.
Die Wirkung der Verbindungen auf die Transkriptionsfaktoraktivierung wird in einem Elektrophorese-Mobilitäts-Shiftassay (EMSA) unter Verwendung von Kernextrakten von behandelten Zellen wie oben beschrieben bewertet. Die Doppelstrang-NF-κB-Konsensus-Oligonukleotide (5'-AGTTGAGGGGACTTTCCCAGGC-3') werden mit T₄-Polynukleotidkinase und [g-³²P]ATP markiert. Die Bindungsmischung (25 μl) enthält 10 mM Hepes-NaOH (pH 7,9), 4 mM Tris-HCl (pH 7,9), 60 mM KCl, 1 mM EDTA, 1 mM Dithiothreitol, 10% Glycerin, 0,3 mg/ml Rinderserumalbumin und 1 μg Poly(dI – dC)·Poly(dI – dC). Die Bindungsmischungen (10 μg Kernextraktprotein) werden 20 min bei Raumtemperatur mit 0,5 ng ³²P-markiertem Oligonukleotid (50 000–100 000 cpm) in Gegenwart oder Abwesenheit von nicht-markiertem Kompetitor inkubiert, woraufhin die Mischung auf ein 4%iges Polyacrylamidgel geladen, hergestellt in 1X Trisborat/EDTA, und bei 200 V 2 h elektrophoretisch aufgetrennt wird. Folgend auf die Elektrophorese werden die Gels getrocknet und belichtet, um einen Nachweis der Bindungsreaktion zu ermöglichen.
Die Wirkung der Verbindungen auf die Phosphorylierung von IκB können in einem Western-Blot überwacht werden. Zelluläre Extrakte werden in einer Natriumdodecylsulfat-Polyacrylamid-Gelelektrophorese (SDS-PAGE) auf 10% Gelen (BioRad, Hercules, CA) unterworfen und die Proteine auf Nitrocellulose-Sheets (Hybond^TM-ECL, Amersham Corp., Arlington Heights, IL) übertragen. Immunblot-Tests werden unter Verwendung eines polyklonalen Kaninchen-Antikörpers gegen IκBα oder IκBβ durchgeführt, gefolgt von einem Peroxidase-konjugierten Esel-Antikaninchen-sekundären-Antikörper (Amersham Corp., Arlington Heights, IL). Immunreaktive Banden werden unter Verwendung des Enchanced Chemiluminescence(ECL)-Testsystems (Amersham Corp., Arlington Heights, IL) nachgewiesen.
Die Wirkungen auf die Eicosanoid-Produktion durch humane Synovialfibroblasten (RSF) werden unter Verwendung primärer Kulturen des humanen RSF bewertet. Diese werden durch enzymatischen Verdau der Gelenkhaut, die von erwachsenen Patienten mit rheumatoider Gelenkhaut erhalten wurde, erhalten. Die Zellen werden in Earl's Minimal Essential Medium (EMEM), das 10% fötales Rinderserum (FBS), 100 Einheiten/ml Penicillin und 100 μg/ml Streptomycin (GIBCO, Grand Island, NY) enthält, bei 37°C und 5% CO₂ kultiviert. Die Kulturen werden bei Durchläufen 4 bis 9 verwendet, um eine gleichförmigere Typ-I-Fibroblasten-Population zu erhalten. Für einige Untersuchungen werden Fibroblasten bei 5 × 10⁴ Zellen/ml in 16 mm (Durchmesser)-Platten mit 24 Vertiefungen (Costar, Cambridge, MA) ausplattiert. Die Zellen werden einer optimalen Dosis an IL-1β (1 ng/ml; Roshak et al. 1996a) (Genzyme, Cambridge, MA) in der vorbestimmten Zeit ausgesetzt. Arzneistoffe im DMSO-Vehikel (1%) werden 15 Minuten vor der Zugabe von IL-1 zu den Zellkulturen hinzugegeben. Prostaglandin E₂-Level im zellfreien Medium, das nach Beendigung der Kulturperiode gesammelt wurde, werden direkt unter Verwendung eines Enzym-Immuntest(EIA)-Kits gemessen, das von Cayman Chemical Co. (Ann Arbor, MI) erworben wurde. Proben- oder Standardverdünnungen werden mit experimentellem Medium gemacht.
Die entzündungshemmende Aktivität in vivo wird unter Verwendung des Phorbolester-induzierten Ohr-Entzündungsmodell in Mäusen bewertet. Phorbolmyristatacetat (PMA) (4 μg/20 μl Aceton) wird auf die inneren und äußeren Oberflächen des linken Ohrs von männlichen Balb/c-Mäusen (6 pro Gruppe) (Charles River Breeding Laboratories, Wilmington, MA) aufgetragen. Vier Stunden später wird Verbindung gelöst in 25 μl Aceton, auf das gleiche Ohr aufgetragen. Die Dicke beider Ohren wird mit einem Dial-Mikrometer (Mitutoyo, Japan) nach 20 Stunden gemessen und eine zweite topische Dosis der Verbindung wird aufgetragen. 24 Stunden später werden Messungen der Ohrdicke genommen und die Daten als die Veränderung in der Dicke (× 10^–3 cm) zwischen behandelten und unbehandelten Ohren ausgedrückt. Die entzündeten linken Ohren werden dann entfernt und bei –70°C bis zur Bewertung der Myeloperoxidase(MPO)-Aktivität, einer Messung der entzündlichen Zellinfiltration, gelagert.
Die entzündliche Zellinfiltration wird durch die Messung der Myeloperoxidase-Aktivität, die im entzündeten Ohrgewebe vorliegt, beurteilt. Partiell aufgetaute Ohrgewebe werden zerkleinert und dann mit einem Tissumizer-Homogenisator (Tekmar Co., Cincinnati, OH) in 50 mM Phosphatpuffer (pH 6), der 0,5% HTAB enthält, homogenisiert (10% G/V). Diese Gewebehomogenate werden durch drei Einfrier-Auftau-Zyklen geführt, gefolgt durch kurze Ultraschallbehandlung (10 s). Die MPO-Aktivität in den Homogenaten wird wie folgt bestimmt. Das Erscheinen von gefärbtem Produkt aus der MPO-abhängigen Reaktion von o-Dianisidin (0,167 mg/ml, Sigma Chemical, St. Louis, MO) und Wasserstoffperoxid (0,0005%) wird spektralphotometrisch bei 460 nm gemessen. Die MPO-Aktivität des Überstands wird kinetisch (Veränderung in der Absorption, die über 3 min gemessen wurde, entnommen in 15 s-Intervallen) unter Verwendung eines Beckman-DU-7-Spektralophotometers und eines Kinetik-Analyse-Pakets (Beckmann Instruments, Inc., Sommerset, NJ) quantifiziert. Eine Einheit der MPO-Aktivität wird definiert als der Abbau eines Mikromols an Peroxid pro Minute bei 25°C.
Die Wirkungen auf den entzündungsvermittelten Knorpelzusammenbruch wird in einem In-vitro-Knorpel-Explant-System gemessen. In diesem Modell werden bovine artikuläre Knorpel-Explants für 4 Tage/96 Stunden mit oder ohne rHuIL-1-alpha inkubiert, um den Knorpelzusammenbruch in Gegenwart oder Abwesenheit einer Testverbindung zu stimulieren. Die Überstände werden für die Stickoxid-Tests entfernt. Stickoxid wurde unter Verwendung der Greiss-Reaktion gemessen und bei 530 nm spektralphotometrisch ausgelesen. Diese Reaktion mißt Nitrit (NO₂), das das stabile Endprodukt von Stickoxid ist.
Allgemein
Die kernmagnetischen Resonanzspektren wurden mit entweder 250, 300 oder 400 MHz unter Verwendung von entweder einem Bruker AM 250-, Bruker ARX 300- oder Bruker AC 400-Spektrometer aufgezeichnet. CDCl₃ ist Deuteriochloroform, DMSO-d₆ ist Hexadeuteriodimethylsulfoxid und CD₃OD ist Tetradeuteriomethanol. Chemische Shifts werden als Teile pro Million (d) feldabwärts von dem inneren Standard Tetramethylsilan berichtet. Abkürzungen für die NMR-Daten sind wie folgt: s = Singulett, d = Dublett, t = Triplett, q = Quartett, m = Multiplett, dd = Dublett von Dubletts, dt = Dublett von Tripletts, app = anscheinend, br = breit. J zeigt die NMR-Kupplungskonstante, gemessen in Hertz, an. Kontinuierliche Wellen-Infrarot(IR)-Spektren wurden auf einem Perkin-Elmer 683 Infrarot-Spektrometer aufgezeichnet und die Fourier-Transform-Infrarot(FTIR)-Spektren wurden auf einem Nicolet-Impact 400 D-Infrarot-Spektrometer aufgezeichnet. Die IR- und FTIR-Spektren wurden im Transmissionsmodus aufgezeichnet und die Bandenpositionen werden als inverse Wellenzahlen (cm^–1) angegeben. Die Massenspektren wurden auf entweder einem VG 70 FE-, PE Syx API III- oder VG ZAB HF-Instrument unter Verwendung von "Fast Atom Bombardement" (FAB) oder Elektrospray-(ES)-Ionisierungstechniken genommen. Die Elementaranalysen wurden unter Verwendung eines Perkin-Elmer-240C-Elementaranalysierers erhalten. Die Schmelzpunkte wurden auf einem Thomas-Hoover-Schmelzpunktapparat genommen und sind nicht korrigiert. Alle Temperaturen werden in Grad Celsius angegeben.
Analtech Kieselgel GF und E. Merck Kieselgel 60 F-254-Dünnschichtplatten wurden für die Dünnschichtchromatographie verwendet. Sowohl "Flash"- als auch Schwerkraftchromatographie wurden auf E. Merck Kieselgel 60 (230–400 mesh) Kieselgel durchgeführt.
Wo angegeben, wurden bestimmte Materialien von Aldrich Chemical Co., Milwaukee, Wisconsin, TCI America, Portland, OR erworben.
Beispiele
In den folgenden synthetischen Beispielen ist die Temperatur in Grad Celsius (°C) angegeben. Soweit nicht anderweitig angegeben, wurden alle Ausgangsmaterialien von kommerziellen Quellen erworben. Ohne weitere Ausführung wird angenommen, daß ein Fachmann unter Verwendung der vorherigen Beschreibung die vorliegende Erfindung in ihrem vollen Umfang verwenden kann. Diese Beispiele sind zur Veranschaulichung der Erfindung gegeben. Bezug wird auf die Ansprüche genommen für das, was für die Erfinder reserviert ist.
Beispiel 1
Herstellung von N-(4-Acetylphenyl)-2-hydroxy-5-iodcarboxamid
Eine Lösung aus Iodsalicylsäure (1,9 g, 7,4 mmol) und 4-Aminoacetophenon (0,97 g, 7,4 mmol) in Chlorbenzol (40 ml) wurde mit PCl₃ (0,323 ml, 3,7 mmol) behandelt. Die Lösung wurde bei Rückfluß unter einer Argonatmosphäre erhitzt. Nach 2 h wurde die Lösung heiß abfiltriert und das Filtrat bei Raumtemperatur stehengelassen. Nach 18 h wurde die Lösung filtriert und der Feststoff aus MeOH umkristallisiert, um die Titelverbindung (0,095 g, 5% Ausbeute) zu ergeben:
¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ: 2,5–2,6 (s, 3H), 6,8–8,2 (m, 7H), 10,1–10,2 (s, 1H)
Beispiel 2
Herstellung von N-(2,4-Difluorphenyl)-2-hydroxy-5-nitrophenylcarboxamid
Eine Lösung aus 5-Nitrosalicylsäure (1,4 g, 7,7 mmol) und 2,4-Difluoranilin (0,8 ml, 7,7 mmol) in Chlorbenzol (40 ml) wurde mit PCl₃ (0,338 ml, 3,8 mmol) behandelt. Die Lösung wurde bei Rückfluß unter einer Argonatmosphäre erhitzt. Nach 2 h wurde die Lösung heiß abfiltriert und das Filtrat bei Raumtemperatur stehengelassen. Nach 18 h wurde die Lösung filtriert und der Feststoff aus MeOH umkristallisiert, um die Titelverbindung (0,733 g, 35% Ausbeute) zu ergeben:
¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ: 2,5–2,6 (s, 3H), 7,1–8,9 (m, 6H), 10,6–10,7 (s, 1H)
Beispiel 3
Herstellung von N-(2,4-Difluorphenyl)-2-hydroxy-5-iodphenylcarboxamid
a) 5-Iodsalicylsäurechlorid
5-Iodsalicylsäure (2,0 g, 7,58 mmol) in Toluol wurde mit SOCl₂ (1,66 ml, 22,7 mmol) und katalytischem DMF bei Rückfluß für 1 h behandelt. Das Reaktionsgemisch wurde bis auf Trockenheit eingedampft und das Säurechlorid ohne Aufreinigung im nächsten Schritt verwendet.
b) (2,4-Difluorphenyl)-2-hydroxy-5-iodphenylcarboxamid
Die Verbindung aus Beispiel 3(a) (3,79 mmol) und 2,4-Difluoranilin (380 μl, 3,79 mmol) in Toluol wurde bei Rückfluß für 24 h erhitzt. Das Reaktionsgemisch wurde eingedampft, der Rückstand mit Ether gewaschen und der Feststoffrückstand aus MeOH umkristallisiert, um 159 mg von N-(2,4-Difluorphenyl)-2-hydroxy-5-iodphenylcarboxamid zu ergeben.
ES MS (M+H)^– m/e 373,7.

Claims

Verbindung, die folgende ist: N-(4-Acetylphenyl)-2-hydroxy-5-iodphenylcarboxamid; N-(2,4-Difluorphenyl)-2-hydroxy-5-nitrophenylcarboxamid; N-(2,4-Difluorphenyl)-2-hydroxy-5-iodphenylcarboxamid; oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz, Hydrat oder Solvat davon.
Verwendung einer Verbindung gemäß Anspruch 1 oder eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes, Hydrats oder Solvats davon in der Herstellung eines Medikaments zur Inhibierung einer Krankheit, die durch exzessive NF-κB-Aktivierung gekennzeichnet ist.
Verwendung gemäß Anspruch 2, worin die Krankheit eine Entzündungsstörung ist.
Verwendung gemäß Anspruch 3, worin die Krankheit aus der Gruppe ausgewählt ist, die aus folgenden besteht: rheumatoide Arthritis, entzündliche Darmerkrankung und Asthma.
Verwendung gemäß Anspruch 3, worin die Krankheit Dermatose ist.
Verwendung gemäß Anspruch 5, worin die Krankheit aus der Gruppe ausgewählt ist, die aus folgenden besteht: Psoriasis und atopische Dermatitis.
Verwendung gemäß Anspruch 3, worin die Krankheit aus der Gruppe ausgewählt ist, die aus folgenden besteht: Autoimmunerkrankungen; Gewebe- und Organabstoßung; Alzheimer-Erkrankung; Schlaganfall; Atherosklerose; Restenose; Osteoarthritis; Osteoporose und Ataxia Telangiestasia.
Verwendung gemäß Anspruch 3, worin die Krankheit Krebs ist.
Verwendung gemäß Anspruch 8, worin der Krebs Hodgkin-Erkrankung ist.
Verwendung gemäß Anspruch 3, worin die Krankheit AIDS ist.