KR20010052991A - 전사 인자 ＮＦ-κＢ의 저해제 - Google Patents

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제임스 에프. 칼라한
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스튜어트 알. 수터, 스티븐 베네티아너, 피터 존 기딩스
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Abstract

본 발명은 전사 인자 NF-κB의 살리실아닐리드의 약학 조성물, 및 NF-κB의 활성화와 관련된 질환을 치료하는 방법을 제공한다. 더욱 구체적으로는, 본 발명은 염증성 질환; 특히 류마티스양 관절염, 염증성 장 질환 및 천식; 건선 및 아토피성 피부염을 비롯한 피부병; 자가면역질환; 조직 및 장기 거부 반응; 알쯔하이머병; 발작; 죽상동맥경화증; 재발협착증; 호지킨 병을 포함하는 암; 및 AIDS를 포함하는 몇몇 바이러스 감염증; 골관절염; 골다공증; 및 모세혈관확장성운동실조증을 포함하는, NF-κB 활성화와 관련된 다양한 질병의 치료 방법을 제공한다.

Description

전사 인자 ＮＦ-κＢ의 저해제 {Inhibitors of Transcription Factor NF-κB}
최근, 급성 및 만성 염증성 질환 및 암에 관여하는 매개체에 대한 과학적 이해가 진보함으로써 효과적인 치료법을 찾기 위한 새로운 전략을 구상하게 되었다. 전형적인 방법에는 특이 항체, 수용체 길항제 또는 효소 저해제를 사용하는 것과 같은 직접 타깃 개입(direct target intervention)이 있다. 근래에, 다양한 매개체의 전사 및 번역과 관련된 조절 메카니즘의 해명에 있어서 획기적 약진이 이루어져서, 유전자 전사 수준의 치료 방법에 대한 관심이 증가하였다.
NF-κB는 폴리펩티드인 Rel/NF-κB 계열의 다양한 조합으로 이루어진, 밀접한 관련이 있는 이합체 전사 인자 복합체의 계열에 속한다. 이 계열은 포유동물의 개별적인 5가지 유전자 물질인 RelA(p65), NF-κB1(p50/p105), NF-κB2(p49/p100), c-Rel 및 RelB(이들은 모두 헤테로- 또는 호모-이합체를 형성할 수 있다)로 이루어진다. 이 단백질들은 DNA 결합 도메인 및 이합체화 도메인을 함유하는, 고도로 상동성인 300개 아미노산 "Rel 상동성 도메인"을 공유한다. Rel 상동성 도메인의 맨끝 C-말단은 세포질로부터 핵으로의 NF-κB의 수송에 중요한 핵 전위(translocation) 서열이다. 또한, p65 및 cRel은 C-말단에서 강력한 트랜스활성화 도메인을 갖는다.
NF-κB의 활성은 단백질인 저해제 IκB 계열의 구성원들과의 상호작용에 의해 조절된다. 이 상호작용은 NF-κB 단백질상의 핵 국소화(localization) 서열을 효과적으로 차단하여 이합체가 핵으로 이동하는 것을 방지한다. 다양한 자극은 다중 신호 변환(multiple signal transduction) 경로와 유사한 경로로 NF-κB를 활성화시킨다. 이러한 자극에는 박테리아성 물질(LPS), 몇몇 바이러스(HIV-1, HTLV-1), 염증성 사이토카인(TNFκ, IL-1) 및 환경적 스트레스가 포함된다. 그러나 모든 자극에 분명히 공통적인 것은 IκB의 인산화 및 후속되는 분해이다. IκB는 2개의 N-말단 세린이, 근래에 규명된 IκB 키나제(IKK-α 및 IKK-β)에 의해 인산화된다. 부위-지향(site-directed) 돌연변이 유발 연구를 통해서, 일단 인산화가 이루어지면 단백질은 유비퀴틴-프로테아좀(ubiquitin-proteasome) 경로에 의해 분해 신호를 받는다는 점에서, 이러한 인산화가 후속되는 NF-κB의 활성화에 결정적인 것임을 알 수가 있다. IκB가 없을 때, 활성 NF-κB 복합체는 핵으로 전위할 수 있으며, 핵에서 이들은 선택적인 방식으로 선호되는 유전자-특이 인핸서(enhancer) 서열에 결합한다. NF-κB에 의해 조절되는 유전자에는 수많은 사이토카인, 세포 유착(adhesion) 분자, 및 급성 상 단백질이 포함된다.
NF-κB는, IL-6 및 IL-8과 같은 사이토카인, ICAM 및 VCAM과 같은 세포 유착 분자, 및 유도성(inducible) 산화질소 신타제(synthase)(iNOS)를 포함하는 수많은 프로(pro)-염증성 매개체의 조절된 발현에서 중요한 역할을 수행하는 것으로 잘 알려져 있다. 이러한 매개체들은 염증 부위로 백혈구를 도입시키는 역할을 수행하는 것으로 알려져 있으며, iNOS의 경우, 몇몇 염증성 질환 및 자가면역질환에서 장 파괴를 유발시킬 수도 있다.
염증성 질환에서의 NF-κB의 중요성은, NF-κB가 활성화되는 것으로 나타난, 천식을 포함하는 기도 염증의 연구에 의해서 더욱 강조되었다. 이러한 활성화가 상기 질환의 사이토카인 생산량의 증가 및 백혈구의 침윤 특성의 기초가 될 수 있다. 또한, 스테로이드를 흡입하면 기도 과민반응이 감소되고 천식성 기도에서 염증성 반응이 억제되는 것으로 알려져 있다. NF-κB의 글루코코르티코이드 저해와 관련된 근래의 발견을 통해 볼 때, 이러한 효과들은 NF-κB의 저해를 통해 매개되는 것으로 추측할 수 있다.
염증성 질환에서 NF-κB의 역할에 대한 또다른 증거는 류마티스양 활액의 연구에서 찾아볼 수 있다. NF-κB는 통상적으로는 불활성 세포질 복합체로서 존재하지만, 근래의 면역조직화학적 연구에 따르면 NF-κB는 핵내에 존재하고 따라서 류마티스양 활액을 포함하는 세포내에서 활성이라는 것이다. 더욱이, NF-κB는 TNF-κ의 자극에 반응하여 인간 활액 세포내에서 활성화되는 것으로 밝혀졌다. 이것은 상기 조직의 사이토카인 및 에이코사노이드 생성의 증가에 대해 근거가 되는 메카니즘일 수 있다{로삭, 에이 케이(Roshak, A. K.) 등의 문헌[J.Biol.Chem., 271, 31496-31501(1996)]을 참조}.
NF-κB/Rel 및 IκB 단백질은 또한 종양성 형질전환에도 중요한 역할을 하는 것 같다. 이들은 과다발현(overexpression), 유전자 증폭, 유전자 재배열(rearrangement) 또는 전위의 결과로, 생체내 및 시험관내에서 세포 형질전환과 관련되어 있다. 또한 이러한 단백질을 코딩(encoding)하는 유전자의 재배열 및/또는 증폭은 특정 인간 림프성 종양의 20 내지 25%에서 나타난다. 또한, 세포자멸사(apoptosis)의 조절에서의 NF-κB의 역할은 세포 증식의 제어에서 이러한 전사 인자가 수행하는 역할을 바로잡는 것이라고 보고되었다.
몇몇 NF-κB 저해제가 씨 왈(C.Wahl) 등의 문헌[J.Clin.Invest., 101(5), 1163-1174(1998)], 알 더블유 설리반(R.W.Sullivan) 등의 문헌[J.Med.Chem., 41, 413-419(1998)], 제이 더블유 피어스(J.W.Pierce) 등의 문헌[J.Biol.Chem., 272, 21096-21103(1997)]에 기술되어 있다.
천연 해양 물질인 히메니알디신(hymenialdisine)이 NF-κB를 저해하는 것으로 알려져 있다(로삭, 에이 등의 문헌[JPET, 283, 955-961(1997)], 브레톤, 제이 제이(Breton, J. J.) 및 샤보트-플레처, 엠 씨(Chabot-Fletcher, M. C.)의 문헌[JPET, 282, 459-466(1997)을 참조).
살리실아닐리드는 공지된 화합물이다. 살리시아닐리드의 일반적 제조 방법은 클라크(M.T. Clark), 코번(R.A. Coburn), 에반스(R.T. Evans), 젠코(Genco)의 문헌[J.Med.Chem., 1986, 29, 25-29]에 기술되어 있다.
본 발명의 발명자들은 살리실아닐리드를 사용하여 전사 인자 NF-κB의 활성을 저해하는 신규한 방법을 발견하였다.
＜발명의 개요＞
본 발명의 목적은 전사 인자 NF-κB의 활성을 변경시킴으로써 치료학적으로 개선될 수 있는 질환의 치료 방법을 제공하는 것이다.
따라서, 본 발명의 첫번째 양태는 후술될 화학식 I에 따른 화합물과 약학적으로 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제를 포함하는 약학 조성물을 제공한다.
본 발명의 또다른 양태는 NF-κB를 저해함으로써 치료학적으로 개선될 수 있는 질환을 치료하는 방법을 제공한다.
특히, 본 발명은 염증성 질환; 특히 류마티스양 관절염, 염증성 장 질환 및 천식; 건선 및 아토피성 피부염을 포함하는 피부병; 자가면역질환; 조직 및 장기 거부 반응; 알쯔하이머병; 발작; 죽상동맥경화증; 재발협착증; 호지킨 병을 포함하는 암; 및 AIDS를 포함하는 특정 바이러스 감염증; 골관절염; 골다공증; 및 모세혈관확장성운동실조증을 포함하는, NF-κB 활성화와 관련된 다양한 질병을 치료하는 방법을 제공한다.
본 발명은 전사 인자 NF-κB의 살리실아닐리드 저해제에 관한 것이다. 본 발명의 화합물은 특히 NF-κB의 활성화와 관련된 질병의 치료에 유용하다. 더욱 구체적으로는, 본 발명의 화합물은 IκB 인산화 및 후속되는 분해를 저해한다. 본 발명의 화합물은 염증성 질환; 특히 류마티스양 관절염, 염증성 장 질환 및 천식; 건선 및 아토피성 피부염을 비롯한 피부병; 자가면역질환; 조직 및 장기 거부 반응; 알쯔하이머병; 발작; 죽상동맥경화증; 재발협착증; 호지킨 병을 포함하는 암; 및 AIDS를 포함하는 특정 바이러스 감염증; 골관절염; 골다공증; 및 모세혈관확장성운동실조증을 포함하는, NF-κB 활성화와 관련된 다양한 질병의 치료에 유용하다.
본 발명은 하기 화학식 I의 화합물 및 그의 약학적으로 허용되는 염, 수화물 및 용매화물을, NF-κB 활성화와 관련된 질환의 치료를 필요로 하는 동물, 구체적으로는 포유동물, 가장 구체적으로는 인간에게 투여함을 포함하는, 상기 질환의 치료 방법을 제공한다.
상기 식에서, RA는 고리 A에서 0개 내지 3개 치환되고 NO2, 할로겐, C1-C6알킬, 트리플루오로메틸, O-C1-6알킬 및 S-C1-8알킬로 이루어진 군에서 독립적으로 선택되며, RB는 고리 B에서 0개 내지 3개 치환되고 할로겐, C(O)C1-6알킬, C1-6알킬, O-C1-6알킬, S-C1-8알킬, CH2-아릴 및 아릴로 이루어진 군에서 독립적으로 선택된다.
또한, 본 발명은 동물, 특히 포유류, 가장 구체적으로는 치료를 원하는 사람에게 하기 화학식 II의 화합물을 투여하는 것을 포함하는, NF-κB와 관련된 질환을 치료하는 바람직한 방법을 제공한다.
상기 식에서, 화학식 I의 RA는 1개 치환되고 R1이며, 화학식 I의 RB는 2개 치환되고 독립적으로 R2및 R3이다. 보다 구체적으로, R1은 H, NO2, CF3, F, Cl, Br 및 I로 이루어진 군에서 선택되고, R2는 H 및 F로 이루어진 군에서 선택되며, R3은 F, Cl, Br, I, 페닐 및 C(O)C1-6알킬이고, 바람직하게는 C1-6알킬은 CH3이다.
본 발명의 방법에 사용하기에 가장 바람직한 화합물은 N-(4-페닐-페닐)-2-히드록시-5-트리플루오로메틸카르복사미드, N-(2,4-디플루오로페닐)-2-히드록시-5-니트로카르복사미드, N-(2,4-디플루오로페닐)-2-히드록시-5-요오도카르복사미드 및 N-(4-아세틸페닐)-2-히드록시-5-요오도카르복사미드로 이루어진 군에서 선택된 화학식 II의 화합물이다.
＜정의＞
본 발명은 본 발명의 화합물의 모든 수화물, 용매화물, 복합체 및 전구약물의 사용을 포함한다. 전구약물은 생체내에서 화학식 I 및 화학식 II의 활성 모체(parent) 약물을 방출하는, 임의의 공유결합된 화합물이다. 본 발명의 화합물내에 키랄(chiral) 중심 또는 임의의 형태의 이성질 중심이 존재하는 경우, 거울상이성질체 및 부분입체이성질체를 포함하는 모든 형태의 이성질체가 본 발명에 포함된다. 키랄 중심을 함유하는 화합물은 라세미 혼합물 또는 거울상이성질체가 풍부한 혼합물로서 사용될 수 있고, 또는 라세미 혼합물은 공지된 방법에 의해 분리될 수 있고, 개별적인 거울상이성질체가 단독으로 사용될 수도 있다. 화합물이 불포화 탄소-탄소 이중결합을 갖는 경우, 시스(Z) 및 트란스(E) 이성질체 둘다가 본 발명의 범주에 포함된다. 화합물이 케토-엔올 호변이성질체(keto-enol tautomer)와 같이 호변이성질체 형태로 존재할 경우, 이들이 평형을 이루는지 또는 주로 한가지 형태로 존재하는지에 상관없이 각 호변이성질체가 본 발명의 범주에 포함되는 것으로 한다.
화학식 I 또는 그의 부속 일반식에 나오는 임의의 치환체의 의미는, 달리 언급이 없는 한, 서로 독립적이다.
"C1-C6알킬"이란 치환되거나 치환되지 않은 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸 및 t-부틸, 펜틸, n-펜틸, 이소펜틸, 네오펜틸, 헥실 및 그의 단순 지방족 이성질체를 말한다. 임의의 C1-C6알킬기는 1개 또는 2개의 할로겐, SR', OR', N(R')2, C(O)N(R')2, 카바밀 또는 C1-C4알킬(R'은 C1-C6알킬임)에 의해 선택적으로 독립적으로 치환될 수 있다.
"할로겐"이란 F, Cl, Br 및 I를 말한다.
"Ar" 또는 "아릴"이란 하나이상의 Ph-C0-C6알킬, Het-C0-C6알킬, C1-C6알킬, C1-C6알콕시, Ph-C0-C6알콕시, Het-C0-C6알콕시, OH, CN, CO2R' 또는 할로겐에 의해 선택적으로 독립적으로 치환된 페닐 또는 나프틸을 말한다. C0알킬이란 잔기에 알킬기가 존재하지 않음을 뜻한다. 따라서, Ar-C0알킬은 Ar이다. 2개의 C1-C6알킬기가 결합하여 포화되거나 불포화되고 Ar 고리에 융합된, 5 내지 7원 고리를 형성할 수 있다. Ph는 하나이상의 C1-C6알킬, C1-C6알콕시, OH, CO2R' 또는 할로겐으로 선택적으로 치환될 수 있다.
＜제조 방법＞
본 발명의 방법에 사용되는 화합물을, 하기 반응식 I 및 II에 도시된 방법으로 편리하게 제조할 수있다.
살리시아닐리드의 일반적 제조 방법은 클라크(M.T. Clark), 코번(R.A. Coburn), 에반스(R.T. Evans) 및 젠코(R.J. Genco)의 문헌[J.Med.Chem; 1986;29;25-29]에 기술되어 있다. 또한, 이 화합물은 라이브러리 형태를 포함하는 고상 기술에 의해 편리하게 제조할 수 있다.
＜일반적 제조 방법＞
일반적인 제조 방법을 반응식 I 및 반응식 II에 도시하였다. 치환된 살리실산과 치환된 아닐린을 건조 클로로벤젠 중 삼염화 인의 존재하에 축합반응시켜 살리실아닐리드를 제조하였다(반응식 I). 마찬가지로, 촉매 DMF 함유 톨루엔 중 염화티오닐을 사용하여 치환된 살리실산을 그의 상응하는 산 염화물로 전환시킴으로써 살리실아닐리드를 제조하였다. 그 후에, 생성된 살리실산 염화물과 치환된 아닐린을 톨루엔 중 가열하여 살리시아닐리드를 형성시켰다(반응식 II).
상기 반응식 I 및 반응식 II에 도시된 화학식 I의 화합물의 제조 방법에서, 당해 분야의 숙련자라면 본 발명은 화학식 I의 화합물을 제조하는데 요구되는 모든 신규한 중간체들을 포함함을 알 것이다.
본원에서 사용된 출발 물질은 시판되고 있거나, 당해 분야의 숙련자들에게 공지된 통상적인 방법에 의해 제조되거나, 문헌[COMPENDIUM OF ORGANIC SYNTHETIC METHODS, Vol. I-VI(Wiley-Interscience 출간)]과 같은 표준 참고서에 나와 있다.
화학식 I의 화합물의 산 부가 염을, 염산, 브롬화수소산, 불화수소산, 황산, 인산, 아세트산, 삼불화아세트산, 말레산, 숙신산 또는 메탄설폰산과 같은 과량의 산과 모체 화합물로부터 적합한 용매중에서 표준 방법으로 제조할 수 있다. 어떤 화합물들은 허용가능한 내부 염(inner salt) 또는 쯔비터이온(zwitterion)을 형성한다. 적당한 양이온을 함유하는 수산화물, 탄산염 또는 알콕사이드와 같은 알칼리성 시약 과량 또는 적당한 유기 아민으로 모체 화합물을 처리함으로써 양이온성 염을 제조한다. 약학적으로 허용되는 염내에 존재하는 양이온의 구체적인 예는 Li+, Na+, K+, Ca++, Mg++및 NH4 +이다. 약학적으로 허용되는 염에 존재하는 음이온의 예는 할라이드, 설페이트, 포스페이트, 알카노에이트(예를 들면 아세테이트 및 트리플루오로아세테이트),벤조에이트 및 설포네이트(예를 들면 메실레이트)이다.
본 발명은 화학식 I에 따른 화합물과 약학적으로 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제를 포함하는 약학 조성물을 제공한다. 따라서, 화학식 I의 화합물을 약품의 제조에 사용할 수 있다. 전술된 방법으로 제조된 화학식 I의 화합물의 약학 조성물을 비경구 투여용 용액 또는 동결건조 분말로서 배합할 수 있다. 분말은 사용전에 적합한 희석제 또는 기타 약학적으로 허용되는 담체에 타서 쓸 수 있다. 액상 배합물은 완충된 등장성 수용액일 수 있다. 적합한 희석제의 예는 표준 등장성 식염수로서, 물 또는 완충된 아세트산나트륨 또는 아세트산암모늄 용액중 표준 5% 덱스트로스이다. 이러한 배합물은 특히 비경구 투여에 적합하지만, 이를 경구 투여에도 사용할 수 있고, 약물 흡입용의 흡입기(inhaler) 또는 연무기(nebulizer)내에 일정 용량으로 넣을 수도 있다. 폴리비닐 피롤리돈, 젤라틴, 하이드록시 셀룰로스, 아카시아, 폴리에틸렌 글리콜, 만니톨, 염화나트륨 또는 시트르산나트륨과 같은 부형제를 첨가하는 것이 바람직할 수도 있다.
한편으로는, 본 발명의 화합물을 캡슐화시키거나, 정제화하거나, 경구 투여용 유화액 또는 시럽으로 제조할 수도 있다. 약학적으로 허용되는 고형 또는 액상 담체를 첨가하여 조성물을 향상시키거나 안정화시키거나, 조성물의 제조를 보다 용이하게 할 수 있다. 고형 담체에는 전분, 락토스, 칼슘 설페이트 디하이드레이트, 테라알바, 마그네슘 스테아레이트 또는 스테아르산, 활석, 펙틴, 아카시아, 아가 또는 젤라틴이 포함된다. 액상 담체에는 시럽, 땅콩유, 올리브유, 식염수 및 물이 포함된다. 담체내에는 또한 글리세릴 모노스테아레이트 또는 글리세릴 디스테아레이트와 같은 서방성 물질(sustained release material)이 단독으로, 또는 왁스와 함께 포함될 수도 있다. 고형 담체의 양은 다양하지만, 바람직하게는, 단위 투여량당 약 20㎎ 내지 약 1g이다. 약학 제제를, 분쇄(milling), 혼합(mixing), 과립화(granulating) 및 압축(compressing)을 포함하는 통상적인 약 조제법을 사용하여 정제로 만들거나, 분쇄, 혼합 및 충전 방법을 사용하여 경질 젤라틴 캡슐로 만들 수도 있다. 액상 담체를 사용하는 경우에, 제제는 시럽, 엘릭시르제, 유화액 또는 수성 또는 비수성 현탁액의 형태일 것이다. 이러한 액상 배합물을 직접 경구 투여하거나 연질 젤라틴 캡슐에 충전시켜 투여한다.
직장 투여의 경우, 화학식 I의 화합물을 코코아 버터, 글리세린, 젤라틴 또는 폴리에틸렌 글리콜과 같은 부형제와 혼합하거나 좌약으로 성형시킬 수도 있다.
본 발명의 방법은 화학식 I 및 화학식 II의 화합물을 국소 투여함을 포함한다. 국소 투여란 본 발명의 화합물을 표피 또는 구강(buccal cavity)에 외부적으로 도포시키는 것, 및 귀, 눈 및 코내에 흡입시키는 것을 포함하는 비-전신적 투여(화합물이 혈관에 현저한 정도로 침투하지는 않음)를 뜻한다. 전신적 투여란 경구, 정맥내, 복강내 및 근육내 투여를 말한다. 국소 투여로써 치료 효과 또는 예방 효과를 발휘하는데 필요한 화학식 I의 화합물(이하 활성 성분이라 칭함)의 양은 물론 화합물의 종류, 치료될 상태의 본질 및 중증도, 및 치료 대상 동물에 따라 달라지고, 궁극적으로 의사의 재량에 달려있다.
활성 성분을 원래 화학물질 상태로 단독으로 투여할 수도 있지만, 약학 배합물로서 제공하는 것이 바람직하다. 활성 성분은, 국소 투여의 경우, 약학 배합물의 0.01 내지 5.0 중량%를 구성할 수 있다.
본 발명의 동물 치료용 또는 인간 치료용 국소 투여 제제는 활성 성분과 함께, 하나이상의 허용가능한 담체, 및 선택적으로는 임의의 기타 치료 성분을 포함한다. 담체는 배합물내의 다른 성분들과 혼화성이면서 그의 수용자에게 해롭지 않다는 면에서 "허용가능"해야 한다.
국소 투여용으로 적합한 배합물에는 리니멘트제(liniment), 로션, 크림, 연고 또는 패이스트, 및 눈, 귀 또는 코에 투여하기에 적합한 적제(drops)와 같이, 치료가 요구되는 부위에 피부를 통해 침투하기에 적합한 액상 또는 반-액상 제제가 포함된다.
본 발명에 따른 점적제는 멸균 수성 또는 유성 용액 또는 현탁액을 포함할 수 있고, 살균제 및/또는 살진균제 및/또는 임의의 기타 적합한 보존제, 및 바람직하게는 표면활성화제의 적합한 수용액에 활성 성분을 용해시킴으로써 이를 제조할 수 있다. 이어서 이렇게 얻은 용액을 여과 정제시키고, 적합한 용기에 넣고, 이어서 이를 밀봉시키고 90 내지 100℃에서 30분동안 방치하거나 오토클레이빙(autoclaving)시켜 멸균시킨다. 다른 방법으로는, 용액을 멸균 여과시키고, 무균 방법으로 용기에 옮길 수 있다. 상기 점적제에 넣기에 적합한 살균제 및 살진균제의 예는 페닐머큐릭 니트레이트 또는 아세테이트(0.002%), 벤즈알코늄 클로라이드(0.01%) 및 클로르헥시딘 아세테이트(0.01%)이다. 유성 용액의 제조에 사용하기에 적합한 용매에는 글리세롤, 묽은 알콜 및 프로필렌 글리콜이 포함된다.
본 발명에 따른 로션에는 피부 또는 눈에 도포시키기에 적당한 것들이 포함된다. 눈 도포용 로션은 선택적으로는 살균제를 함유하는 멸균 수용액을 포함하고, 점적제의 제조 방법과 유사한 방법으로 이를 제조할 수 있다. 피부 도포용 로션또는 리니멘트제는 건조를 빠르게 하고 피부를 시원하게 하는 약물, 예를 들면 알콜 또는 아세톤, 및/또는 보습제, 예를 들면 글리세롤 또는 카스터유 또는 낙화생유와 같은 오일을 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 크림, 연고 또는 페이스트는 활성 성분을 외부적으로 도포시키기 위한 반-고형 제제이다. 미분된 형태 또는 분말 형태의 활성 성분을, 단독으로 또는 수성 또는 비수성 유체의 수용액 또는 현탁액에 녹은 상태로, 적합한 기계에 의해서, 유지상(greasy) 또는 비-유지상 기재와 혼합함으로써 이를 제조할 수 있다. 기재에는 경질, 연질 또는 액상 파라핀, 글리세롤, 밀랍, 금속 비누와 같은 탄화수소; 점질물(mucilage); 아몬드유, 옥수수유, 낙화생유, 카스터유 또는 올리브유와 같은 천연 오일; 양모지(wool fat) 또는 그의 유도체, 또는 스테아르산 또는 올레산과 같은 지방산 또는 프로필렌 글리콜 또는 마크로골과 같은 알콜과의 혼합물이 포함된다. 이 배합물은 음이온성, 양이온성 또는 비이온성 표면 활성화제와 같은 적합한 표면 활성화제, 예를 들면 소르비탄 에스테르 또는 그의 폴리옥시에틸렌 유도체를 포함할 수 있다. 현탁제, 예를 들면 천연 고무, 셀룰로스 유도체 또는 규산질 실리카와 같은 무기성 물질과, 라놀린과 같은 기타 성분들을 포함할 수도 있다.
＜본 발명의 유용성＞
화학식 I 및 화학식 II의 화합물은 NF-κB의 저해제로서 유용하다. 본 발명은 상기 화합물의 약학 조성물 및 배합물을 포함하여 상기 화합물의 유용한 약학 조성물 및 배합물을 제공한다.
본 발명은 또한 NF-κB 활성화와 관련된 질환의 치료를 필요로 하는 동물, 구체적으로는 포유동물, 가장 구체적으로는 인간에게 화학식 I 또는 화학식 II의 화합물을 투여함을 포함하는, NF-κB의 활성화와 관련된 질환의 치료 방법을 제공한다. 본 발명은 특히는 염증성 질환; 특히 류마티스양 관절염, 염증성 장 질환 및 천식; 건선 및 아토피성 피부염을 포함하는 피부병; 자가면역질환; 조직 및 장기 거부 반응; 알쯔하이머병; 발작; 죽상동맥경화증; 재발협착증; 호지킨 병을 포함하는 암; 및 AIDS를 포함하는 특정 바이러스 감염증; 골관절염; 골다공증; 및 모세혈관확장성운동실조증의 치료 방법을 제공한다.
급성 질환의 치료를 위해서는, 화학식 I 또는 화학식 II의 화합물을 비경구 투여하는 것이 바람직하다. 근육내 대량 주사하는 것도 유용하지만, 화합물이 물 또는 표준 식염수중 5% 덱스트로스에 용해된 것이나, 적합한 부형제가 포함된 상기와 유사한 배합물을 정맥내 주입하는 것이 가장 효과적이다. 전형적으로, 약물의 혈장내 농도를 NF-κB의 활성화를 저해하기에 효과적인 농도로 유지하도록, 비경구 투여량은 약 0.01 내지 약 50㎎/㎏, 바람직하게는 0.1 내지 20㎎/㎏이다. 1일 총 투여량이 약 0.4 내지 약 80㎎/㎏/일이 되도록 화합물을 1일 1 내지 4회 투여한다. 본 발명의 화합물이 치료 효과를 내도록 하는 정확한 투여량 및 이러한 화합물의 최상의 투여 방법을, 당해 분야의 숙련자가 약제의 혈장 수준과 치료 효과를 내는데 요구되는 농도를 비교함으로써 쉽게 결정할 수 있다.
화학식 I 및 화학식 II의 화합물을, 약물의 농도가 NF-κB를 저해하기에 충분한 농도가 되거나, 본원에서 개시된 임의의 기타 질병의 치료 효과를 내기에 충분한 농도가 되도록 환자에게 경구 투여할 수도 있다. 전형적으로, 상기 화합물을 함유하는 약학 조성물을 환자의 상태에 맞게 약 0.1 내지 약 50㎎/㎏의 경구 투여량으로 투여한다. 바람직하게는 경구 투여량은 약 0.5 내지 약 20㎎/㎏이다.
화학식 I 및 화학식 II의 화합물을, 약물의 농도가 NF-κB를 저해하기에 충분한 농도가 되거나, 본원에서 개시된 임의의 기타 질병의 치료 효과를 내기에 충분한 농도가 되도록 환자에게 국소 투여할 수도 있다. 전형적으로, 상기 화합물을 함유하는 약학 조성물은 약 0.01 내지 약 5%w/w의 국소적 배합물 형태로 투여된다.
본 발명의 화합물이 본 발명에 따라 투여되면, 어떠한 허용불가능한 중독 효과도 없다.
본원에서 기술된 화합물의 NF-κB 활성화의 저해능은 NF-κB-추진된 리포터(reporter) 유전자 활성의 저해능(하기 표 1을 참조)에 의해 확연하게 증명된다. 질환의 치료에 있어서 본 발명의 NF-κB 저해제의 유용성은 다양한 질환에서 NF-κB 활성화의 중요성에 대해 전술된 바와 같다.
NF-κB-추진된 리포터 유전자 활성의 저해
화합물 번호 R' R" X IC50㎛
1 I H 8.14
2 I H ∼
3 NO2 H 7.20
4 H Ph 불활성
5 Ph H 불활성
6 Br H 0.82
7 CF3 H 36.5
8 CF3 H 3.55
NF-κB는, IL-6 및 IL-8과 같은 사이토카인(무카이다(Mukaida) 등, 1990; 리베르만(Liberman) 및 발티모어(Baltimore), 1990; 마쓰사카(Matsusaka) 등, 1993), ICAM 및 VCAM과 같은 세포 유착 분자(마루이(Marui) 등, 1993; 카와이(Kawai) 등, 1995; 레데버(Ledebur) 및 팍스(Parks), 1995) 및 유도성 산화질소 신타제(iNOS)(싸이(Xie) 등, 1994; 애드콕(Adcock) 등, 1994)를 포함하는 수많은 프로-염증성 매개체의 조절된 발현에서 중요한 역할을 수행한다(상기 문헌들은 본 단락의 끝에 더 잘 인용되어 있다). 이러한 매개체들은 염증 부위로 백혈구를 도입시키는 역할을 수행하는 것으로 알려져 있으며, iNOS의 경우, 몇몇 염증성 질환 및 자가면역질환에서 장 파괴를 유발시킬 수도 있다(맥카트니-프란시스(McCartney-Francis) 등, 1993; 클리만(Kleemann) 등, 1993). 중요한 것은, 본원에서 기술된 화합물이 IL-8 합성 및 iNOS 활성의 생성물인 산화질소의 생성을 저해한다는 것이다.
표 1의 3번 화합물의 항염증 활성
생체내
U937 세포 중 TNF-자극 IL-8 생성 IC50=3 μM
RSF 중 IL-1-유도된 PGE2 생산 IC50=3 μM
IL-1-자극된 산화 질산 생산 IC50=5 μM
생체내
포볼(Phorbol)-에스테르-유도된 귀 염증귀 팽윤염증성 세포 침윤 ED50=0.2 mg/귀ED50=0.2 mg/귀
NF-κB가 염증성 질환에서 중요한 역할을 한다는 것에 대한 증거는 천식 환자의 연구에서 얻어진다. 미약한 아토피성 천식 환자에 대해 수행한 기관지 생검에서, 점막하조직을 염색했을 때, 활성화된 NF-κB, 총 NF-κB, 및 GM-CSF 및 TNFα와 같은 NF-κB-조절된 사이토카인의 세포수가 정상 비-아토피성 대조군에 대한 생검 결과에 비해 현저하게 증가함을 알 수 있다(윌슨(Wilson) 등, 1998). 더욱이, 생검 표본의 상피내 IL-8 면역반응성이 증가함에 따라 NF-κB 면역반응성을 발현시키는 혈관의 비율이 증가한다(윌슨 등, 1998). NF-κB의 저해를 통한 IL-8 생성의 저해는, 본 화합물에 의해 증명된 바와 같이, 기도 염증에 이로운 것으로 예측된다.
근래의 연구 결과, NF-κB는 염증성 장 질환(IBD)의 병인론에서도 중요한 역할을 함이 밝혀졌다. 크론병 및 궤양성 결장염으로부터 채취된 결장 생검 표본에서도 활성화된 NF-κB가 발견되었다(아디트(Ardite) 등, 1998; 로즐러(Rogler) 등, 1998; 쉬레이버(Schreiber) 등, 1998). 염증이 없는 점막에서가 아니라 염증이 있는 점막에서 활성화가 명백하고(아디트 등, 1998; 로즐러 등, 1998) 이는 그 부위에서의 IL-8 mRNA 발현의 증가와 관련이 있다(아디트 등, 1998). 더욱이, 코르티코스테로이드 처치를 하면 장관의 NF-κB 활성화가 강하게 저해되고, 결장 염증이 감소된다(아디트 등, 1998; 쉬레이버 등, 1998). 여기서도 역시 NF-κB의 저해를 통한 IL-8 생성의 저해는, 본 화합물에 의해 증명된 바와 같이, 염증성 장 질환에 이로운 것으로 예측된다.
또한, 위장 염증의 동물 모델도 NF-κB가 결장 염증의 중요한 조절자(regulator)로서의 역할을 수행한다는 것을 뒷받침하는 증거를 제공한다. 2,4,6-트리니트로벤젠 설폰산(TNBS)-유도된 결장염에 걸린 쥐 모델의 고유판 대식세포에서, p65를 활성화된 복합체의 주요 성분으로 하는 NF-κB의 활성이 증가됨이 관찰되었다(네우라쓰(Neurath) 등, 1996; 네우라쓰 및 페터슨(Pettersson), 1997). p65 안티쎈스(antisense)를 국소 적용하면 처치된 동물내에서 아무런 독성 징후가 없이 결장염 신호가 없어진다(네우라쓰 등, 1996; 네우라쓰 및 페터슨, 1997). 이와 같이, NF-κB의 작은 저해제 분자가 IBD의 치료에 유용하다는 것을 알 수 있다.
염증성 질환에서의 NF-κB의 역할에 대한 또다른 증거는 류마티스양 활액의 연구에서 얻어졌다. NF-κB는 통상적으로는 불활성 세포질 복합체로서 존재하지만, 근래의 면역조직화학적 연구에 따르면, NF-κB는 핵에 존재하고, 따라서 인간 류마티스양 활액을 포함하는 세포(한델(Handel) 등, 1995; 마로크(Marok) 등, 1996; 시오우드(Sioud) 등, 1998) 및 이 질환에 걸린 동물 모델(차오(Tsao) 등, 1997)에서 활성이다. 염색 부위는 타입 A 활액세포 및 혈관 상피와 연관되어 있다(마로크(Marok) 등, 1996). 더욱이, 배양된 활액세포(로삭 등, 1996; 미야자와 등(Miyazawa), 1998) 및 IL-1β 또는 TNFα로 자극된 활액 세포 배양물에서(로삭 등, 1996; 후지사와(Fujisawa) 등, 1996; 로삭 등, 1997) NF-κB의 구성적(constitutive) 활성화가 발견되었다. 따라서, NF-κB의 활성화는 염증이 있는 활액의 사이토카인 생성 및 백혈구 침윤 특성의 증가의 기초가 될 수 있다. 본 화합물의 NF-κB 저해능과 그에 따른 상기 세포에 의한 에이코사노이드의 생성의 저해능은 류마티스양 관절염에 이로운 것으로 생각된다(표 2를 참조).
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＜생물학적 분석＞
본 발명의 화합물을 몇몇 생물학적 분석 방법으로 시험하여 일정 약리학적 효과를 얻는데 요구되는 화합물 농도를 결정할 수 있다.
브레톤 제이 제이(Breton J J) 및 샤보트-플레처 엠 씨의 문헌[JPET, 282, 459-466(1997)]에 기술된 세포 기재 루시퍼라제(luciferase) 리포터 분석법을 사용하여 NF-κB 활성을 분석한다. 요약하면, NF-κB 리포터 플라스미드로 영구히 형질감염된 U937 인간 조직구 림프종 세포주(아래를 참조)를 250㎍/㎖ 제네티신(Geneticin)(미국 뉴욕주 그란드 아일랜드 소재의 라이프 테크놀로지스(Life Technologies)제 G418 설페이트)이 첨가된 배지에서 배양시킨다. 루시퍼라제 리포터 분석을 형질감염된 U937 클론에서 수행한다. 이들을 300×g에서 5분동안 2회 원심분리시키고 10% FBS와 함께 RPMI 1640에서 1×106개 세포/㎖의 밀도로 재현탁시킨다. 1㎖ 방울을 24-웰 플레이트의 웰에 첨가한다. 화합물 또는 디메틸 설폭사이드(DMSO) 담체(1㎕)를 적당한 웰에 첨가하고, 플레이트를 37℃에서 5% CO2중에서 30분동안 배양시킨다. 자극을 가하고(5ng/㎖ TNFκ, 100ng/㎖ LPS 또는 0.1μM PMA), 샘플을 37℃에서 5% CO2중에서 5시간동안 배양시키고, 1.9㎖ 폴리프로필렌 관에 넣고, 200×g에서 5분동안 원심분리시킨다. 세포 펠렛을 Ca2+및 Mg2+를 함유하지 않는 1㎖ PBS로 2회 세척하고, 전술된 바와 같이 원심분리시킨다. 이렇게 얻은 세포 펠렛을 50㎕ 1×용균 완충액(미국 위스콘신주 매디슨 소재의 프로메가 코포레이션(Promega Corporation))에서 용균시키고, 와류시키고(vortexed), 실온에서 15분동안 배양시킨다. 각 용균물 20㎕ 방울을 불투명 백색 96-웰 플레이트(미국 매릴랜드주 가이터스버그 소재의 왈락 인코포레이티드(Wallac Inc.))에 옮기고 마이크로루마트(MicroLumat) LB 96 P 루미노메터(luminometer)(독일 바트 빌바트 소재의 에게 운트 게 베르트홀트(EG＆G Berthold))에서 루시퍼라제 생성을 분석한다. 루미노메터로 100㎕ 루시퍼라제 분석 시약(미국 위스콘신주 매디슨 소재의 프로메가 코포레이션)을 각 웰에 분배시키고, 20초 동안 적분된 광 아웃풋(integrated light output)을 기록한다. 광 아웃풋은 상대적 광 단위(RLU)로 측정된다.
핵내의 NF-κB 단백질의 존재를 분석하는 전기영동 이동도 변동 분석(EMSA: electrophoretic mobility shift assay)법으로 NF-κB 활성을 측정할 수 있다. 세포를 1×106/㎖의 밀도로 배양시킨다. 세포를 원심분리에 의해 수확하고, 이를 Ca2+및 Mg2+를 함유하지 않는 PBS로 세척하고, Ca2+및 Mg2+를 함유하지 않는 PBS에 1×107개 세포/㎖로 재현탁시킨다. NF-κB의 활성화에 미치는 화합물의 효과를 검사하기 위해서, 세포 현탁액을 다양한 농도의 약물 또는 비히클(DMSO, 0.1%)로 37℃에서 30분동안 처리한 후, 추가의 15분동안 TNFα(5.0ng/㎖)로 자극시킨다. 세포 추출물 및 핵 추출물을 다음과 같이 만든다. 요약하면, 배양기가 끝날 무렵에, 세포(1×107개 세포)를 Ca2+및 Mg2+를 함유하지 않는 PBS로 2회 세척한다. 이렇게 얻은 세포 펠렛을 20㎕의 완충액 A(10mM 헤페스(Hepes)(pH 7.9), 10mM KCl, 1.5mM MgCl2, 0.5mM 디티오트레이톨(DTT) 및 0.1% NP-40)에 재현탁시키고 얼음에서 10분간 배양시킨다. 핵을 4℃에서 10분간 3500rpm으로 초원심분리시킴으로써 펠렛화시킨다. 이렇게 얻은 상층액을 세포 추출물로서 수거하고 핵 펠렛을 15㎕ 완충액 C(20mM 헤페스(pH 7.9), 0.42M NaCl, 1.5mM MgCl2, 25% 글리세롤, 0.2mM EDTA, 0.5mM DTT 및 0.5mM 페닐메틸설포닐 플루오라이드(PMSF))에 재현탁시킨다. 현탁액을 4℃에서 20분동안 약하게 혼합하고 4℃에서 10분동안 14000rpm으로 초원심분리시킨다. 현탁액을 수거하고 60㎕의 완충액 D(20mM 헤페스(pH 7.9), 50mM KCl, 20% 글리세롤, 0.2mM EDTA, 0.5mM DTT 및 0.5mM PMSF)로 희석시킨다. 분석전까지 모든 샘플을 -80℃에서 보관한다. 바이오라드(BioRad) 시약을 사용하는 브라드포드(Bradford, 1976) 방법에 따라 추출물의 단백질 농도를 결정한다.
전사 인자 활성화에 대한 본 화합물의 효과를, 전술된 바와 같이 처리된 세포로부터 얻은 핵 추출물을 사용하여 전기영동 이동도 변동 분석법(EMSA)을 사용하여 분석한다. 이중 가닥 NF-κB 콘센서스(consensus) 올리고누클레오티드(5'-AGTTGAGGGGACTTTCCCAGGC-3')를 T4폴리누클레오티드 키나제 및 [g-32P]ATP로 표지한다. 결합 혼합물(25㎕)은 10mM 헤페스-NaOH(pH 7.9), 4mM 트리스-HCl(pH 7.9), 60mM KCl, 1mM EDTA, 1mM 디티오트레이톨, 10% 글리세롤, 0.3㎎/㎖ 소 혈청 알부민 , 및 1μg 폴리(dI-dC)ㆍ폴리(dI-dC)를 함유한다. 표지되지 않은 경쟁자(competitor)의 존재 또는 부재중에서, 0.5ng의32P-표지된 올리고누클레오티드(50000 내지 100000cpm)과 함께 결합 혼합물(10μg의 핵 추출물 단백질)을 실온에서 20분동안 배양시킨 후, 이 혼합물을 1×트리스 보레이트/EDTA중에서 제조된 4% 폴리아크릴아미드 겔 위에 놓고 200V에서 2시간동안 전기영동시킨다. 전기영동 후, 겔을 건조시키고 결합 반응을 감지하기 위해 필름에 노출시킨다.
IκB의 인산화에 대한 본 화합물의 효과를 웨스턴 블롯(Western blot) 방법으로 검사할 수 있다. 세포 추출물을 10% 겔(미국 캘리포니아주 헤르큘레스(Hercules)제 바이오라드)상에서 소디움 도데실 설페이트-폴리아크릴아미드 겔 전기영동(SDS-PAGE)에 적용시키고, 단백질을 니트로셀룰로스 시이트(미국 일리노이주 알링톤 하이츠 소재의 아머샴 코포레이션(Amersham Corp.)제 하이본드 이씨엘(Hybond-ECL))에 옮긴다. IκBα 또는 IκBβ에 대한 다클론성 래빗 항체를 사용한 후 퍼옥시다제-콘쥬게이트 당키(donkey) 안티-래빗 2차 항체(미국 일리노이주 알링톤 하이츠 소재의 아머샴 코포레이션)를 사용하여 이뮤노블롯(immunoblot) 분석을 수행한다. 증강된 화학발광(ECL: the Enchanced Chemiluminescence) 분석 시스템(미국 일리노이주 알링톤 하이츠 소재의 아머샴 코포레이션)을 사용하여 면역반응성 밴드를 검출한다.
인간 활액 섬유아세포(RSF)에 의한 에이코사노이드 생성에 대한 효과를 인간 RSF의 1차 배양물을 사용하여 분석한다. 이들은, 류마티스양에 걸린 성인 환자로부터 얻은 활액의 효소적 분해에 의해 얻어진다. 37℃에서 5% CO2중에서 10% 태아 소 혈청(FBS), 100units/㎖ 페니실린 및 100μg/㎖ 스트렙토마이신(미국 뉴욕주 그란드 아일랜드 소재의 GIBCO)을 함유하는 얼스 최소 필수 배지(EMEM: Earl's Minimal Essential Medium)에서 세포를 배양시킨다. 보다 균일한 형태의 I 섬유아세포 개체군을 얻기 위해서, 4 내지 9회 계대배양하여 사용한다. 어떤 연구에서는, 섬유아세포를 16mm(직경) 24 웰 플레이트(미국 매사추세츠주 캠브리지 소재의 코스타(Costar))에서 5×104개 세포/㎖로 도말시킨다. 예정된 시간동안 세포를 최적량의 IL-1β(1ng/㎖; 로삭 등, 1996a)(미국 매사추세츠주 젠자임(Genzyme))에 노출시킨다. DMSO 비히클(1%)에 용해된 약물을 세포 배양물에 첨가한 후 15분이 지나서 IL-1을 첨가한다. 배양기가 끝날 무렵에 수거된, 세포를 함유하지 않는 배지의 프로스타글란딘 E2수준을, 미국 미시간주 앤 아버 소재의 카이만 케미칼 캄파니(Cayman Chemical Co.)에서 구입한 효소 면역분석(EIA) 키트를 사용하여 직접 측정한다. 샘플 또는 효준 희석액을 실험 배지로 만든다.
쥐의 포볼(phorbol) 에스테르-유도된 귀 염증 모델을 사용하여 생체내 항염증 활성을 분석한다. 포볼 미리스테이트 아세테이트(PMA)(4μg/20㎕ 아세톤)를 수컷 Balb/c 쥐(6마리/군)(미국 매사추세츠주 윌밍톤 소재의 챨스 리버 브리딩 래보러토리즈(Charles River Breeding Laboratories))의 왼쪽 귀의 안쪽 부분과 바깥쪽 부분에 도포한다. 4시간후, 본 화합물을 25㎕ 아세톤에 용해된 것을 동일한 귀에 도포한다. 20시간후 각 귀의 두께를 다이알 마이크로메터(dial micrometer)(일본 미투토요(Mitutoyo))로 측정하고, 본 화합물을 2차 국소 투여한다. 24시간이 지나서, 귀 두께를 측정하고 처치된 귀와 처치되지 않은 귀의 두께의 변화(×10-3㎝)를 기록한다. 이어서 염증이 있는 왼쪽 귀를 제거하고 염증성 세포 침윤의 척도인 미엘로퍼옥시다제(MPO: myeloperoxidase)를 분석하기 전까지 -70℃에서 저장한다.
염증이 있는 귀 조직에 존재하는 미엘로퍼옥시다제 활성을 측정함으로써 염증성 세포 침윤을 분석한다. 부분적으로 해동된 귀 조직을 잘게 다진 후, 0.5% HTAB를 함유하는 50mM 인산염 완충액(pH 6)중 티슈미저(Tissumizer) 균질화기(미국 오하이오주 신시네티 소재의 테크마 캄파니(Tekmar Co.))로 균질화시킨다(10% w/v). 조직 균질화물을 3회의 냉동-해동 사이클을 거쳐 수득하고, 이어서 짧게 초음파처리(sonication)(10초)한다. 균질화물에서의 MPO 활성을 다음과 같이 결정한다. o-디아니시딘(0.167㎎/㎖, 미국 미주리주 세인트 루이스 소재의 시그마 케미칼(Sigma Chemical))과 과산화수소(0.0005%)의 MPO-의존 반응으로부터 생성된 착색물의 외관을 460nm에서 분광광도법으로 측정한다. 베크만(Beckman) DU-7 분광광도계 및 역학 분석 패키지(미국 뉴저지주 섬머셋 소재의 베크만 인스트루먼츠 인코포레이티드(Beckman Instruments, Inc.))를 사용하여 상층액 MPO 활성을 역학적으로 정량분석한다(3분동안 15초 간격으로 샘플을 채취하여 흡광도 변화를 측정). 1단위 MPO 활성은 25℃에서 1분당 퍼옥사이드 1마이크로몰이 분해되는 것과 같다.
염증-매개된 연골 손상에 대한 효과를 생체내 연골 외이식 시스템에서 측정한다. 이 모델에서는 시험 화합물의 존재 또는 부재중에서 연골 손상을 자극하기 위해 rHuIL-1 α의 존재 또는 부재중에서 소 관절 연골 외이식편을 4일/96시간동안 배양시킨다. 산화질소 분석을 위해 상층액을 제거한다. 그레이스(Greiss) 반응을 사용하여 산화질소를 측정하고 530nm에서 분광광도법으로 데이타를 판독한다. 이 반응은 산화질소의 안정한 최종 생성물인 아질산염(NO2)을 측정한다.
＜총론＞
각각 브루커(Bruker) AM 250, 브루커, 브루커 ARX 300 또는 브루커 AC 400 분광광도계를 사용하여 250, 300 또는 400MHz에서 핵자기공명 스펙트럼을 기록하였다. CDCl3는 듀테리오클로로포름이고, DMSO-d6는 헥사듀테리오디메틸설폭사이드이고, CD3OD는 테트라듀테리오메탄올이다. 내부 표준 테트라메틸실란으로부터 아래쪽으로의 화학적 이동(chemical shifts)을 백만분의 일(d)로 기록하였다. NMR 데이타에 사용된 약어는 다음과 같다: s=단일선, d=이중선, t=삼중선, q=사중선, m=다중선, dd=이중선의 이중선, dt=삼중선의 이중선, app=또렷한 선, br=넓은 선. J는 헤르쯔(Hertz)로 측정된 NMR 커플링 상수를 나타낸다. 연속파 적외선(IR: infrared) 스펙트럼을 퍼킨-엘머 683 적외선 분광계(Perkin-Elmer 683 infrared spectrometer)에 기록하였고, 푸리에 전환 적외선(FTIR: Fourier transform infrared) 스펙트럼을 니콜렛 임펙트(Nicolet Impact) 400 D 적외선 분광계상에 기록하였다. IR 및 FTIR 스펙트럼을 전송 모드로 기록하고, 밴드 위치를 역 파수(㎝-1)로 기록하였다. 고속 원자 충격(FAB: fast atom bombardment) 또는 일렉트로스프레이(ES: electrospray) 이온화 기법을 사용하여, VG 70 FE, PE Syx API III 또는 VG ZAB HF 장치상에서 질량 스펙트럼을 측정하였다. 퍼킨-엘머 240C 원소 분석기를 사용하여 원소 분석을 수행하였다. 토마스-후버(Thomas-Hoover) 융점 장치상에서 융점을 측정하고 이를 보정하지 않았다. 모든 온도를 섭씨로 기록하였다.
아날테크(Analtech) 실리카겔 GF 및 이 머크(E.Merck) 실리카겔 60 F-254 박막 플레이트를 박막 크로마토그래피에 사용하였다. 플래쉬 및 중력 크로마토그래피 둘다를 이 머크 키젤겔(Kieselgel) 60(230 내지 400 메쉬) 실리카겔상에서 수행하였다.
언급된 어떤 물질은 미국 위스콘신주 밀워키 소재의 알드리치 케미칼 캄파니(Aldrich Chemical Co.)에서 구입된 것이다.
다음의 합성 실시예에서, 온도는 섭씨(℃)로 기록되었다. 달리 언급이 없는 한, 모든 출발 물질은 시판되는 것들이다. 본 발명을 더 상세하게 설명하지 않더라도, 당해 분야의 숙련자들이라면 전술된 내용을 바탕으로 본 발명을 충분히 이용할 수 있을 것이다. 본 실시예들은 본 발명을 예시하려는 것이지 제한하려는 것은 아니다. 본문 끝에 첨부된 청구의 범위를 참조하도록 한다.
＜실시예 1＞
N-(4-아세틸페닐)-2-히드록시-5-요오도카르복사미드의 제조
클로로벤젠(40 mL) 중 요오도살리실산(1.9 g, 7.4 mmol) 및 4-아미노아세토페논(0.97 g, 7.4 mmol)의 용액을 PCl3(0.323 mL, 3.7 mmol)로 처리하였다. 이 용액을 아르곤 분위기하에서 환류하면서 가열하였다. 2시간 후에, 용액을 가열 여과하고 여액을 실온에서 방치하였다. 18시간 후에, 용액을 여과하고, 생성된 고체를 MeOH로부터 재결정화하여 표제 화합물(0.095 g, 수율 5 %)을 수득하였다.1H NMR(400 MHz, DMSO-d6)δ2.5-2.6(s, 3H), 6.8-8.2(m, 7H), 10.1-10.2(s, 1H).
＜실시예 2＞
N-(2,4-플루오로페닐)-2-히드록시-5-요오도페닐카르복사미드의 제조
a) 5-요오도살리실산 클로라이드
1시간 동안 환류하면서 톨루엔 중 5-요오도살리실산(2.0 g, 7.58 mmol)을 SOCl2(1.66 mL, 22.7 mmol) 및 촉매 DMF로 처리하였다. 반응 혼합물을 증발 건조하고, 이 산 염화물을 정제없이 다음 단계에 사용하였다.
b) 2,4-디플루오로페닐-2-히드록시-5-요오도페닐카르복사미드
톨루엔 중 실시예 3(a)의 화합물(3.79 mmol) 및 2,4-디플루오로아닐린(380 ㎕, 3.79 mmol)을 24시간 동안 환류하에 가열하였다. 반응 혼합물을 증발시키고, 잔류물을 에테르로 세척하고, 고상 잔류물을 MeOH로부터 재결정화하여 N-(2,4-디플루오로페닐)-2-히드록시-5-요오도페닐카르복사미드 159 mg을 수득하였다. ES MS(M+H)-m/e 373.7
본 명세서 및 실시예는 본 발명의 화합물을 만드는 방법과 사용하는 방법을 완전하게 개시한다. 그러나, 본 발명은 전술된 특정 실시양태에만 국한되지는 않고, 다음에 기술되는 청구의 범위에 따라 변형되는 모든 것들을 포함한다. 본원에서 언급된 다양한 저널, 특허문헌 및 기타 문헌은 당해 분야에 속하는 것들이며, 본원에서 전문이 참고로 인용된다.

Claims (21)

  1. 하기 화학식 I의 화합물 및 그의 약학적으로 허용가능한 염, 수화물 및 용매화물을 포함하는 약학 조성물.
    ＜화학식 I＞
    상기 식에서, RA는 고리 A에서 0개 내지 3개 치환되고 NO2, 할로겐, C1-C6알킬, 트리플루오로메틸, O-C1-6알킬 및 S-C1-6알킬로 이루어진 군에서 독립적으로 선택되며, RB는 고리 B에서 0개 내지 3개 치환되고 할로겐, C(O)C1-6알킬, C1-6알킬, O-C1-6알킬, S-C1-6알킬, CH2-아릴 및 아릴로 이루어진 군에서 독립적으로 선택된다.
  2. 제 1 항에 있어서, RA는 1개 치환되고 R1이며, RB는 2개 치환되고 독립적으로 R2및 R3인 약학 조성물.
  3. 제 1 항에 있어서, 하기 화학식 II의 화합물 및 약학적으로 허용가능한 담체, 희석제 또는 부형제를 포함하는 약학 조성물.
    ＜화학식 II＞
    상기 식에서, R1은 H, NO2, CF3, F, Cl, Br 및 I로 이루어진 군에서 선택되고, R2는 H 및 F로 이루어진 군에서 선택되며, R3은 F, Cl, Br, I, 페닐 및 C(O)C1-6알킬로 이루어진 군으로부터 선택된다.
  4. 제 3 항에 있어서, C(O)C1-6알킬이 C(O)CH3인 약학 조성물.
  5. 제 3 항에 있어서, 상기 화합물이 N-(4-페닐-페닐)-2-히드록시-5-트리플루오로메틸카르복사미드, N-(2,4-디플루오로페닐)-2-히드록시-5-니트로카르복사미드, N-(2,4-디플루오로페닐)-2-히드록시-5-요오도카르복사미드 및 N-(4-아세틸페닐)-2-히드록시-5-요오도카르복사미드로 이루어진 군으로부터 선택된 약학 조성물.
  6. NF-κB의 저해를 필요로 하는 환자에게 하기 화학식 I의 화합물 및 그의 약학적으로 허용가능한 염, 수화물 및 용매화물을 효과량 투여하는 것을 포함하는, NF-κB의 저해 방법.
    ＜화학식 I＞
    상기 식에서, RA는 고리 A에서 0개 내지 3개 치환되고 NO2, 할로겐, C1-C6알킬, 트리플루오로메틸, O-C1-6알킬 및 S-C1-6알킬로 이루어진 군에서 독립적으로 선택되며, RB는 고리 B에서 0개 내지 3개 치환되고 할로겐, C(O)C1-6알킬, C1-6알킬, O-C1-6알킬, S-C1-6알킬, CH2-아릴 및 아릴로 이루어진 군에서 독립적으로 선택된다.
  7. 제 6 항에 있어서, RA는 1개 치환되고 R1이며, RB는 2개 치환되고 독립적으로 R2및 R3인 방법.
  8. 제 7 항에 있어서, 하기 화학식 II의 화합물을 필요로 하는 환자에게 효과량 투여하는 것을 포함하는 방법.
    ＜화학식 II＞
    상기 식에서, R1은 H, NO2, CF3, F, Cl, Br 및 I로 이루어진 군에서 선택되고, R2는 H 및 F로 이루어진 군에서 선택되며, R3은 F, Cl, Br, I, 페닐 및 C(O)C1-6알킬로 이루어진 군에서 선택된다.
  9. 제 8 항에 있어서, 상기 화합물이 N-(4-페닐-페닐)-2-히드록시-5-트리플루오로메틸카르복사미드, N-(2,4-디플루오로페닐)-2-히드록시-5-니트로카르복사미드, N-(2,4-디플루오로페닐)-2-히드록시-5-요오도카르복사미드 및 N-(4-아세틸페닐)-2-히드록시-5-요오도카르복사미드로 이루어진 군에서 선택된 것인 방법.
  10. 과도한 NF-κB 활성화의 저해를 필요로 하는 환자에게 하기 화학식 I의 화합물 및 그의 약학적으로 허용가능한 염, 수화물 및 용매화물을 효과량 투여함으로써 과도한 NF-κB 활성화를 저해하는 것을 포함하는, 과도한 NF-κB 활성화를 특징으로 하는 질환의 치료 방법.
    ＜화학식 I＞
    상기 식에서, RA는 고리 A에서 0개 내지 3개 치환되고 NO2, 할로겐, C1-C6알킬, 트리플루오로메틸, O-C1-6알킬 및 S-C1-6알킬로 이루어진 군에서 독립적으로 선택되며, RB는 고리 B에서 0개 내지 3개 치환되고 할로겐, C(O)C1-6알킬, C1-6알킬, O-C1-6알킬, S-C1-6알킬, CH2-아릴 및 아릴로 이루어진 군에서 독립적으로 선택된다.
  11. 제 10 항에 있어서, RA는 1개 치환되고 R1이며, RB는 2개 치환되고 독립적으로 R2및 R3인 방법.
  12. 제 11 항에 있어서, 하기 화학식 II의 화합물을 필요로 하는 환자에게 효과량 투여하는 것을 포함하는 방법.
    ＜화학식 II＞
    상기 식에서, R1은 H, NO2, CF3, F, Cl, Br 및 I로 이루어진 군에서 선택되고, R2는 H 및 F로 이루어진 군에서 선택되며, R3은 F, Cl, Br, I, 페닐 및 C(O)C1-6알킬로 이루어진 군에서 선택된다.
  13. 제 12 항에 있어서, 상기 화합물이 N-(4-페닐-페닐)-2-히드록시-5-트리플루오로메틸카르복사미드, N-(2,4-디플루오로페닐)-2-히드록시-5-니트로카르복사미드, N-(2,4-디플루오로페닐)-2-히드록시-5-요오도카르복사미드 및 N-(4-아세틸페닐)-2-히드록시-5-요오도카르복사미드로 이루어진 군에서 선택된 것인 방법.
  14. 제 10 항 내지 제 13 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 질환이 염증성 질환인 방법.
  15. 제 14 항에 있어서, 상기 질환이 류마티스양 관절염, 염증성 장 질환 및 천식으로 이루어진 군에서 선택된 것인 방법.
  16. 제 10 항 내지 제 13 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 질환이 피부염인 방법.
  17. 제 16 항에 있어서, 상기 질환이 건선 및 아토피성 피부염으로 이루어진 군에서 선택된 것인 방법.
  18. 제 10 항 내지 제 13 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 질환이 자가면역질환; 조직 및 장기 거부 반응; 알쯔하이머병; 발작; 죽상동맥경화증; 재발협착증; 골관절염; 골다공증; 및 모세혈관확장성운동실조증으로 이루어진 군에서 선택된 것인 방법.
  19. 제 10 항 내지 제 13 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 질환이 암인 방법.
  20. 제 19 항에 있어서, 상기 암이 호지킨병인 방법.
  21. 제 10 항 내지 제 13 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 질환이 AIDS인 방법.
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