DE69923974T2

DE69923974T2 - Koagulierungskontrolle für pt- und aptt-tests

Info

Publication number: DE69923974T2
Application number: DE69923974T
Authority: DE
Inventors: L. Pamela HAWKINS
Original assignee: Trinity Biotech Manufacturing Ltd
Current assignee: Trinity Biotech Manufacturing Ltd
Priority date: 1998-07-01
Filing date: 1999-06-21
Publication date: 2005-07-21
Anticipated expiration: 2019-06-22
Also published as: AU742965B2; EP1092157A1; WO2000002054A1; US6194394B1; EP1092157B1; AU4580799A; US6528273B2; JP2002519703A; ES2237114T3; DE69923974D1; CA2334582C; CA2334582A1; US20010004641A1; ATE290216T1

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft allgemein diagnostische Koagulationsprüfungen und insbesondere Kontrollproben, die für die Verwendung in Verbindung hiermit geeignet sind. Die Erfindung bezieht sich insbesondere auf Koagulationskontrollen, die für Prüfungen der Prothrombinzeit und der aktivierten partiellen Thromboplastinzeit geeignet sind.
Koagulationskontrollmaterialien dienen im klinischen Labor zur Qualitätskontrolle der Prüfungen der Prothrombinzeit (PT) und aktivierten partiellen Thromboplastinzeit (APTT). PT-Prüfungen benutzen Thromboplastin-Reagenzien und wurde weithin für die zahlenmäßige Bestimmung der Blutkoagulation in Verbindung mit dem äußeren Weg benutzt. APTT-Prüfungen benutzen einen Innenweg-Aktivator, wie mikronisiertes Siliziumdioxid, und einen Phospholipid-Bestandteil eines Thromboplastin-Reagenz (ohne Gewebefaktorprotein) zur zahlenmäßigen Bestimmung der Koagulation in Verbindung mit dem inneren Weg. PT- und APTT-Prüfungen werden klinisch zur Untersuchung von Patientenplasma auf Mängel des Gerinnungsfaktor benutzt. Klinische Prüfungen werden z. B. angewandt bei ärztlichen Routineuntersuchungen und vor Operationen. PT- und APTT-Tests werden auch für die Überwachung der Behandlung mit Antikoagulanzien eingesetzt. Beispielsweise kommen PT-Prüfungen routinemäßig zum Einsatz, um die orale Anti-koagulanzienbehandlung mit Coumarin (Warfarin^®, Coumadin^®) zu überwachen, und APPT-Prüfungen werden typischerweise zur Überwachung der Antikoagulanzienbehandlung mit Heparin benutzt.
Koagulationskontrollen dienen für Qualitätskontrollbestimmungen der PT- und APTT-Testsysteme. Die Kontrollen sind wesentlich im Hinblick auf potentielle Veränderungen bei den in diesen Prüfungen benutzten Reagenzien, potentielle Ungenauigkeiten bei den zur Messung der Gerin nungszeit benutzten Geräte und potentielle Wirkungen ungenauer Antikoagulanziendosierung. Im Handel übliche Koagulationskontrollen wurden ausgelegt, um drei physiologische Bedingungen nachzuahmen: (1) „Kontrollstufe I" kontrolliert mimische Normalgerinnung und soll für eine Einzelperson ohne Koagulationsmängel repräsentativ sein; (2) „Kontrollstufe II"-Kontrollen sollen die Koagulation einer Einzelperson nachahmen, die einer milden Antikoagulanzientherapie unterworfen wird; und (3) „Kontrollstufe III"-Kontrollen sollen die Koagulation einer Einzelperson nachahmen, die einer relativ starken Antikoagulanzientherapie unterworfen wird.
Verschiedene Arten von Koagulationskontrollen sind in der Technik bekannt. Typischerweise werden Koagulationskontrollen so ausgelegt, dass sie für den Einsatz bei (1) dem PT- und APTT-Test, (2) nur dem PT-Test oder (3) nur dem APTT-Test geeignet sind. Die Kontrollen, die ausschließlich zur Verwendung nur bei der zahlenmäßigen Bestimmung des APTT-Tests ausgelegt sind, werden in der Technik als Heparinkontrollen bezeichnet. Während diese Kontrollen für APTT-Tests wirksam sind, sind sie für die zahlenmäßige Bestimmung bei PT-Testsystemen unwirksam. Die vorliegende Erfindung ist gerichtet auf allgemeine Koagulationskontrollen, die für die zahlenmäßige Bestimmung von PT- und APTT-Testsystemen eingesetzt werden kann.
Ein primäres Leistungskriterium für eine Koagulationskontrolle ist ihre Stabilität über die Zeit. Zucker et al. berichteten, dass Koagulationskontrollen, die durch Pufferung von Plasmaproben mit N-2-Hydroxyethylpiperazin-N'-2-ethansulfonsäure (HEPES) und Gefriertrocknung hergestellt wurden, eine Stabilität in der wiederhergestellten Kontrolle von 8 Stunden bei 25°C ergaben. Zucker et al., Herstellung von Qualitätskontrollproben für Koagulation, Am. J. Clin. Path. 53:924-927 (1970). Brozovic und Mitarbeiter stellten Kontrollgemische aus Plasmaproben von Patienten bei oraler Antikoagulanzientherapie in Kombination mit HEPES, Trinatriumcitrat und Aprotinin her und berichteten eine Beständigkeit von 4-6 Stunden nach der Wiederherstellung, wenn sie bei 4°C aufbewahrt wurden. Brozovic et al., Stabilität von gefriergetrocknetem Plasma von Patienten bei oralen Antikoagulanzien, J. Clin. Path. 26:857-863 (1973). US-Patent Nr. 5,721,140 von Speck et al. beschreiben eine eigene Koagulationskontrolle mit normalem menschlichem Plasma, Nichtprimat-Säugerplasma mit Gerinnungsfaktormangel und Aprotinin und berichten, dass die Kontrollen bei Abwesenheit eines Puffers bis zu 5 Tage beständig sind. Zahlreiche andere Patente und Literaturstellen beschreiben verschiedene Koagulationskontrollen. Beispielhafte Patente sind US-Patent Nr. 3,947,378 von Babson, US-Patent Nr. 4,007,008 von Becker et al., US-Patent Nr. 4,056,484 von Heimburger et al., US-Patent Nr. 4,127,502 von Li Mutti et al..
Obgleich in der Technik über viele verschiedene Koagulationskontrollgemische berichtet wurde, bleiben diese Kontrollgemische in Bezug auf die Beständigkeit beschränkt, insbesondere sobald sie aus der gefriergetrockneten Form, in der sie typischerweise verkauft werden, wiederhergestellt sind. Wiederhergestellte, im Handel erhältliche Koagulationskontrollgemische, die länger als etwa 8 Stunden aufbewahrt wurden, ergeben bei Bestimmung durch PT- und/oder APTT-Prüfungen keine widerspruchsfreien, reproduzierbaren Gerinnungszeiten. Außerdem wurden in diesen wiederhergestellten Kontrollgemischen Niederschläge und Fibrin beobachtet. Es verbleibt daher ein Bedarf an für den Einsatz in Verbindung mit PT- und APTT-Prüfungen geeigneten Koagulationskontrollen, die eine erhöhte Beständigkeit haben.
Abriss der Erfindung
Es ist daher eine Aufgabe der vorliegenden Erfindung, Koagulationskontrollen mit erhöhter Beständigkeit über die Zeit herzustellen, wie sie sich durch widerspruchsfreie Gerinnungszeiten bei PT- und APTT-Tests und die fehlende Bildung von teilchenförmigem und/oder Fibrinmaterial zeigt. Es ist auch eine Aufgabe der Erfindung, diese Kontrollzusammensetzungen in wirtschaftlichem Maßstab unter Benutzung leicht erhältlicher Ausgangsmaterialien, herkömmlicher Verarbeitungseinrichtungen und der bestehenden guten Herstellungspraxis (GMP) der U.S. Food and Drug Administration (FDA) herstellen zu können.
Kurz gesagt ist daher die vorliegende Erfindung gerichtet auf Koagulationskontrollen für den Einsatz in Verbindung mit Prüfungen der Prothrombinzeit (PT) und der aktivierten partiellen Thromboplastinzeit (APTT). Die Koagulationskontrolle enthält Plasma und ein Antikoagulans mit Aktivität zur Verstärkung der Aktivität von Antithrombin III (ATIII) und/oder von Heparin-Cofaktor II (HCII) gegen Thrombin und/oder gegen Blutgerinnungsfaktoren, wie die Faktoren IXa, Xa und/oder XIa. Das Plasma enthält vorzugsweise Primat-Plasma und ein Nichtprimat-Säugerplasma. Das Antikoagulans ist vorzugsweise ein Glykoseaminoglykan, wie Heparin.
Nach der vorliegenden Erfindung wird eine Koagulationskontrollzusammensetzung zur Bestimmung der Prothrombinzeit (PT) oder aktivierten partiellen Thromboplastinzeit (APTT) geschaffen, wobei die Koagulationskontrollzusammensetzung
Nichtprimat-Säugerplasma und Primat-Plasma in dem Verhältnis von Nichtprimat-Säugerplasma zu Primat-Plasma in dem Bereich von 1:200 bis 1:5, und
ein Antikoagulans enthält.
Die Erfindung ist außerdem gerichtet auf eine Koagulationskontrollzusammensetzung mit Primat-Plasma, Nichtprimat-Säugerplasma und einem Antikoagulans, wie einem Glykosaminoglykan mit einer Aktivität wie oben beschrieben, wobei die Konzentration des Antikoagulans in dem Bereich von etwa 0,01 U/ml bis etwa 0,15 U/ml, vorzugsweise von etwa 0,01 U/ml bis etwa 0,1 U/ml liegt und U heparinäquivalente Einheiten sind. Das Humanplasma kann normales Humanplasma oder ein abnormales Humanplasma sein, wie etwa ein aktiviertes Plasma oder ein Plasma mit Faktormangel. Das Nichtprimat-Säugerplasma ist vorzugsweise Rinderplasma. Das Glykosaminoglykan ist vorzugsweise Heparin, ein Heparinderivat oder ein Heparinanalogon. Eine bevorzugte Koagulationskontrolle der Stufe I umfasst normales Humanplasma, Rinderplasma, Heparin oder ein Heparinderivat und wahlweise aktiviertes Plasma und hat eine Prothrombinzeit in dem Bereich von etwa 11 Sekunden bis etwa 13 Sekunden. Eine bevorzugte Koagulationskontrolle der Stufe II umfasst Humanplasma mit Faktormangel, normales Humanplasma, Rinderplasma und Heparin oder ein Heparinderivat und hat eine Prothrombinzeit in dem Bereich von etwa 17 Sekunden bis etwa 22 Sekunden. Eine bevorzugte Koagulationskontrolle der Stufe III umfasst Humanplasma mit Faktormangel, normales Humanplasma, Rinderplasma und Heparin oder ein Heparinderivat und hat eine Prothrombinzeit in dem Bereich von etwa 25 Sekunden bis etwa 33 Sekunden. Jede der vorgenannten Prothrombinzeiten wird unter Benutzung eines Thromboplastin-Reagenz mit einem Wert des International Sensivity Index (ISI) von etwa 2 bestimmt.
Die Erfindung ist auch gerichtet auf eine Koagulationskontrolle, typischerweise in gefriergetrockneter Form, die sich nach Wiederherstellung für den Einsatz bei Prüfungen der Prothrombinzeit (PT) und der aktivierten partiellen Thromboplastinzeit (APTT) eignet. Das gefriergetrocknete Koagulationskontrollgemisch enthält Primat-Plasma, Nichtprimat-Säugerplasma und ein Antikoagulans, wie etwa ein Glykosaminoglykan mit einer Aktivität wie oben beschrieben, das in dem Gemisch in einer Konzentration in dem Bereich von etwa 0,1 U/g bis etwa 1,8 U/g auf Basis des Trockengewichts vorliegt, wobei U heparinäquivalente Einheiten bedeutet.
Die Erfindung ist ferner auf eine Koagulationskontrolle gerichtet, die Humanplasma und Nichtprimat-Säugerplasma enthält, wobei das Verhältnis von Nichtprimat-Säugerplasma zu Humanplasma in dem Bereich von etwa 1:200 bis etwa 1:5, vorzugsweise von etwa 1:50 bis etwa 1:20 liegt. Wenn die Koagulationskontrolle eine Lösung ist, liegt die Menge des Nichtprimat-Säugerplasmas in der Lösung vorzugsweise im Bereich von etwa 0,5 Volumenprozent bis etwa 12 Volumenprozent.
Die Erfindung ist auch auf Methoden zur Herstellung dieser Koagulationskontrollzusammensetzungen gerichtet. Nach einer Methode werden Primat-Plasma, Nichtprimat-Säugerplasma und Antikoagulans, wie Glykosaminoglykan, mit einer wie oben beschriebenen Aktivität unter Bildung einer Kontrolllösung vereinigt, die eine Antikoagulanskonzentration in dem Bereich von etwa 0,01 U/ml bis etwa 0,15 U/ml und vorzugsweise von 0,01 U/ml bis etwa 0,1 U/ml hat.
Vorzugsweise werden das Humanplasma und das Rinderplasma mit einem heparinisierten Puffer direkt nach dem Auftauen vereinigt, um heparinisierte Plasmalösung zu bilden, die anschließend vereinigt werden kann, um Kontrolllösungen zu bilden. Nach einer anderen unabhängigen, aber ergänzenden Methode wird eine Koagulationskontrollzusammensetzung dadurch hergestellt, dass man Humanplasma und Nichtprimat-Säugerplasma unter Bildung einer Kontrolllösung vereinigt, die Nichtprimat-Säugerplasma in einer Menge in dem Bereich von etwa 0,5 bis etwa 12 Volumenprozent enthält.
Bevorzugte Aspekte der Erfindung umfassen ferner diese Methoden, bei denen das Nichtprimat-Säugerplasma ein gereinigtes Rinderplasma ist. Bei diesen Methoden wird gefrorenes Rinderplasma hergestellt oder (z. B. aus handelsüblichen Quellen) beschafft, in einer Umgebung (z. B. einem Gefrierschrank) aufgetaut, die auf einer Temperatur in dem Bereich von etwa 2°C bis etwa 8°C gehalten wird, um die Bildung von Teilchen und ihre Ausscheidung aus der Lösung zu ermöglichen, und dann behandelt, um die Teilchen aus dem aufgetauten Rinderplasma zu entfernen. Das Gefrieren und Tieftemperaturauftauen wird vorzugsweise wenigstens einmal wiederholt.
Die Erfindung ist ferner auf Verfahren zur Bewertung eines PT- oder APTT-Testsystems gerichtet. Diese Qualitätskontrollmethoden umfassen im Allgemeinen die Vereinigung eines PT-Reagenz oder eines APTT-Reagenz mit einer Koagulationskontrolle unter Bildung einer Testlösung, die Feststellung der Gerinnselbildung in der Testlösung und die Bestimmung der Zeit, die von der Bildung der Testlösung bis zur Bestimmung der Gerinnselbildung in der Testlösung vergangen ist. Ein Vergleich der bestimmten Zeiten mit Zielzeiten für die besondere zahlenmäßig bestimmte Kontrolle kann dann durchgeführt werden. Zur Bestimmung eines PT-Testsystems enthält die Koagulationskontrolle ein Plasma und ein Antikoagulans mit einer Aktivität zur Verstärkung der Aktivität von Antithrombin III (ATIII) und/oder Heparin-Cofaktor II (HCII) gegen Thrombin und/oder gegen Blutgerinnungsfaktoren, wie die Faktoren IXa, Xa und/oder XIa. Das Antikoagulans ist vorzugsweise ein Glykosaminoglykan und insbesondere Heparin, ein Heparinderivat oder ein Heparinanalogon. Zur Bewertung des PT- oder APTT-Prüfsystems enthält die Koagulationskontrollzusammensetzung ein abnormales Plasma und ein Antikoagulans, wie Glykosaminoglykan mit einer Aktivität, wie sie oben beschrieben wurde. Alternativ enthält die Koagulationskontrollzusammensetzung für die Qualitätskontrolle von PT- oder APTT-Testsystemen Primat-Plasma, Nichtprimat-Säugerplasma und ein Antikoagulans, wie Glykosaminoglykan, mit einer Aktivität, wie sie oben beschrieben wurde.
Die Koagulationskontrollzusammensetzungen und Methoden der vorliegenden Erfindung bieten signifikante Vorteile gegenüber bekannten Kontrollmaterialien und Methoden. Die hier beschriebenen und beanspruchten Kontrollmaterialien haben in wiederhergestellter Form eine außergewöhnliche Beständigkeit, selbst wenn sie in großtechnischen, kommerziellen Produktionsanlagen hergestellt wurden. Die Kontrollmaterialien können aus leicht erhältlichen Materialien unter Benutzung herkömmlicher Einrichtungen unter guten FDA-Herstellungspraktiken hergestellt werden. Die Koagulationskontrollen der Erfindung bieten als solche eine kommerziell attraktive Alternative zu bestehenden Koagulationskontrollen für den Einsatz in Verbindung mit PT- und APTT-Prüfungen.
Andere Merkmale, Aufgaben und Vorteile der vorliegenden Erfindung sind dem Fachmann teilweise ersichtlich und werden teilweise nachfolgend ausgeführt. Alle in der vorliegenden Beschreibung zitierten Literaturstellen werden hier durch Bezugnahme eingefügt. Da außerdem die Patent- und Nichtpatentliteratur zu dem hier beschriebenen und/oder beanspruchten Gegenstand beträchtlich ist, sind dem Fachmann viele bedeutende Literaturstellen verfügbar, die weitere Erläuterungen zu diesem Gegenstand geben.
Kurze Beschreibung der Zeichnungen
1 ist eine grafische Darstellung von Prothrombinzeit(PT)-Stabilitätsdaten für Koagulationskontrollen der Stufe I, Stufe II und Stufe III, die nach den Methoden der vorliegenden Erfindung hergestellt und nach der Wiederherstellung bei 2-8°C aufbewahrt wurden. Die Daten wurden auf einem Koagulationsanalysator Amelung AMAX CS-190 unter Benutzung eine PT-Reagenz mit einem ISI-Wert von 2,0 (Sigma ThromboMAX^®) auf Basis optischer (1A) und mechanischer (1B) Tests gesammelt.
2 ist eine grafische Darstellung aktivierter, partieller Thromboplastinzeit(APTT)-Stabilitätsdaten für Koagulationskontrollen der Stufe I, Stufe II und Stufe III, die nach den Methoden der vorliegenden Erfindung hergestellt und nach Wiederherstellung bei 2-8°C aufbewahrt wurden. Die Daten wurden auf einem Koagulationsanalysator Amelung AMAX CS-190 unter Benutzung eines APTT-Reagenz gesammelt, das gegen Heparin und Lupus-Antikoagulans (Sigma APTT-FSL) mäßig empfindlich ist. Es wurden optische (2A) und mechanische (2B) Bestimmungen gemacht.
Detaillierte Beschreibung der Erfindung
In der vorliegenden Erfindung werden Koagulationskontrollzusammensetzungen mit erhöhter zeitlicher Stabilität – wie sie sich durch widerspruchsfreie Gerinnungszeiten bei PT- und APTT-Tests und durch substantielle Abwesenheit von teilchenförmigem Material und/oder Fibrinmaterial zeigten – durch Zusatz eines Agens mit Antikoagulansaktivität zu einem oder mehreren in den Kontrollgemischen eingesetzten Plasmen hergestellt. Plasmen sind aufgrund ihrer großen Zahl von Enzymen und ihrer komplexen Natur ziemlich unbeständig. Das Antikoagulans wird als solches vorzugsweise früh in dem Herstellungsverfahren zugegeben, um jegliche Aktivierung dieser Enzyme abzumildern, die während der Herstellungsverfahren von Natur aus auftreten. Eine solche Lösung ist ein signifikanter Fortschritt in der Technik – besonders für die Herstellung von Koagulationskontrollen in wirtschaftlichem Maßstab. Die bei Produktionsverfahren in großem Maßstab eigentümlichen Manipulationen wurden in der Technik bisher nicht als ursächlicher Faktor für die beobachteten Unbeständigkeiten der Koagulationskontrollzusammensetzungen erkannt. Außerdem hat die Technik bisher keine Lösung für dieses Problem angeboten.
Nach einem Aspekt der Erfindung wird daher eine für den Einsatz in Verbindung mit PT- und/oder APTT-Tests geeignete Koagulationskontrollzusammensetzung durch Zusammenbringen eines Plasmas und eines Antikoagulans hergestellt. Vorzugsweise werden ein Primat-Plasma (z. B. Humanplasma) und ein Nichtprimat-Säugerplasma (z. B. Rinderplasma) mit einem Antikoagulans vereinigt. Bevorzugte Antikoagulanzien sind jene mit einer Aktivität zur Verstärkung der Aktivität von Antithrombin III (ATIII) und/oder Heparin-Cofaktor II (HCII) gegen Thrombin und/oder gegen Blutgerinnungsfaktoren, wie die Faktoren IXa, Xa und/oder XIa. Das Antikoagulans ist vorzugsweise ein Glykosaminoglykan, wie Heparin, ein Heparinderivat und/oder ein Heparinanalogon mit Antikoagulansaktivität (siehe Beispiel 1). Ohne Festlegung auf eine Theorie, die in den Ansprüchen nicht im Einzelnen angegeben ist, sind Glykosaminoglykan-Antikoagulanzien gegenüber anderen die Koagulation beeinflussenden Molekülgruppen, wie etwa Proteasehemmern, wegen der Unterschiede in ihrem Antikoagulationsmechanismus von Vorteil. Während Proteasehemmer, wie Aprotinin, direkt wirksam sind, um besondere Blutgerinnungsfaktoren zu hemmen, sind Glykosaminoglykan-Antikoagulanzien, wie Heparin, Heparinderivate und Heparinanaloge, indirekt wirksam – wobei ihre Hemmwirkung auf Blutgerinnungsfaktoren durch Zwischenstoffe, wie Antithrombin III (ATIII) und/oder Heparin-Cofaktor II (HCII) vermittelt wird. Die Glykosaminoglykan-Antikoagulanzien haben als solche einen subtileren Effekt, sind aber noch gegen ein breites Spektrum von Blutgerinnungsfaktoren wirksam. Daher sind die Glykosaminoglykan-Antikoagulationsmittel besonders nützlich zur Erhöhung der Stabilität von Kontrollzusammensetzungen.
Nach einem anderen Aspekt der Erfindung wird Humanplasma mit im Vergleich zu bekannten Zusammensetzungen relativ kleinen Mengen Nichtprimat-Säugerplasma kombiniert. Im Einzelnen werden Koagulationskontrollzusammensetzungen durch Vereinigen von Humanplasma und nicht mehr als etwa 12 Volumenprozent und vorzugsweise etwa 0,5 bis etwa 12 Volumenprozent Nichtprimat-Säugerplasma hergestellt. Die Verwendung von wenigstens etwas Nichtprimat-Säugerplasma in der Koagulationskontrollzusammensetzung bietet eine vorteilhafte Lösung zur Kontrolle von PT- und APTT-Zeiten, wie im Einzelnen weiter unten beschrieben wird. Die Zusammensetzungen mit etwa 12 % oder weniger Nichtprimat-Säugerplasma bleiben mit Vorteil mit Bezug auf PT- und APTT-Tests beständig. Zusammensetzungen mit mehr als etwa 12 % Nichtprimat-Säugerplasma sind mit Bezug auf den PT-Test unbeständig.
Die Bezeichnung „Plasma", wie sie hier benutzt wird, bezieht sich im Allgemeinen auf eine Proteine enthaltende Lösung, die eine Prokoagulansaktivität hat, wenn sie mit einem Prothrombinzeit(PT)-Reagenz oder mit einem aktivierten, partiellen Thromboplastinreagenz (APTT) vereinigt wird. Proteine in dem Plasma sind vorzugsweise: Blutgerinnungsfaktoren, die bei dem äußeren Weg (z. B. Faktor VII) und/oder bei dem inneren Weg (z. B. Faktoren XII, XI, IX und/oder VIII) beteiligt sind, Blutgerinnungsfaktoren, die beiden Wegen gemeinsam sind (z. B. Faktoren X, II und/oder V), Thrombin, und Fibrinogen. Das Plasma enthält vorzugsweise auch andere Plasmaproteine, Zucker und/oder Salze. Das Plasma kann Vollplasma sein, das aus Menschen oder Tieren erhalten wird. Das Plasma kann auch ein Plasmaderivat sein, das Prokoagulansaktivität hat und aus einem oder mehreren Vollplasmen abgeleitet ist. Das Plasmaderivat kann z. B. eine Plasmafraktion oder ein Plasma sein, das gereinigt oder in anderer Weise behandelt wurde, um etwas ihrer Proteine, Zucker, Salze oder ihrer anderen Bestandteile zu entfernen. Das Plasma kann alternativ ein Plasmaersatzstoff sein, der aus Komponenten aus separaten Quellen einschließlich natürlicher oder künstlich hergestellter Komponenten gebildet wurde und Prokoagulansaktivität hat. Beispielhafte künstlich her gestellte Komponenten sind Plasmaproteine, die im Wesentlichen aus natürlichen Quellen isoliert und/oder gereinigt wurden, und Plasmaproteine, die unter Benutzung der Rekombinationstechnik hergestellt wurden. Vollplasmen, Plasmaderivate und Plasmaersatzstoffe sind im Handel erhältlich und/oder können unter Benutzung von Methoden hergestellt werden, die gegenwärtig bekannt sind und/oder später in der Technik entwickelt werden.
Ein bevorzugtes Plasma in der Koagulationskontrollzusammensetzung ist ein Primat-Plasma und vorzugsweise ein Humanplasma. Das Primat-Plasma kann ein normales Primat-Plasma oder ein anormales Primat-Plasma sein. Normale Primat-Plasmen, wie normale Humanplasmen (NHP) sind Plasmen, die aus einzelnen Menschen oder anderen Primaten ohne Gerinnungsmängel erhalten wurden. Bei Bewertung unter Benutzung eines PT-Tests mit einem Thromboplastinreagenz mit einem Internationalen Empfindlichkeitsindex von etwa 2 würden normale Humanplasmen vorzugsweise eine Gerinnungszeit in dem Bereich von etwa 9 Sekunden bis etwa 14 Sekunden, vorzugsweise von etwa 11 Sekunden bis etwa 13 Sekunden und insbesondere von etwa 12 Sekunden haben. Bei Bewertung unter Benutzung eines APTT-Tests mit einem APTT-Reagenz, das gegen Heparin und Lupus-Antikoagulans (z. B. Sigma APTT-FSL, Sigma Chemical, St. Louis, MO) mäßig empfindlich ist, und einem geeigneten Koagulationsanalysator (z. B. Amelung AMAX CS-190), würden normale Humanplasmen vorzugsweise eine Gerinnungszeit in dem Bereich von etwa 22 Sekunden bis etwa 32 Sekunden haben. Normale Primat-Plasmen werden typischerweise nach der Sammlung mit einem Antikoagulans, wie Citrat, behandelt und dann zur Aufbewahrung bei einer Temperatur in dem Bereich von etwa –50°C bis etwa –100°C eingefroren. Wenn gefrorene normale Primat-Plasmen als Ausgangsmaterialien dienen, werden sie vorzugsweise in einer Umgebung (z. B. etwa einem Wasserbad) bei einer Temperatur von etwa 37°C aufgetaut, bevor sie Verwendung bei der vorliegenden Erfindung finden. Die normalen Primat-Plasmen sind vorzugsweise normale Primat-Poolplasmen, die durch Vereinigen von wenigstens etwa 5, vorzugsweise etwa 10 Plasmaproben hergestellt wurden, die von Einzelpersonen oder anderen Primaten ohne Gerinnungsmängel erhalten wurden. Die normalen Primat-Plasmen können vor dem Gefrieren vereinigt werden oder, falls vor dem Vereinigen eingefroren, nach dem Auftauen vereinigt werden.
Ein anormales Plasma kann im Allgemeinen irgendein Plasma sein, das im Vergleich zu einem normalen Plasma bezüglich der Gerinnungszeit Mängel aufweist. Der Mangel kann eine erhöhte Gerinnungszeit oder eine verringerte Gerinnungszeit relativ zum normalen Plasma sein. Ein anormales Plasma kann ein Plasma sein, das aus Einzelpersonen, anderen Primaten oder nicht-menschlichen Säugern gesammelt wurde, die natürlich vorkommende Gerinnungsmängel aufweisen oder einer Antikoagulansbehandlung unterworfen werden. Das anormale Plasma kann jedoch auch Gerinnungsmängel haben, die durch Behandlung des Plasmas in vitro unter Benutzung von in der Technik bekannten Methoden künstlich induziert werden.
Beispielhafte anormale Plasmen umfassen aktivierte Plasmen, die typischerweise unternormale Gerinnungszeiten haben und in einer Koagulationskontrollzusammensetzung zur Verringerung der Gerinnungszeit der Kontrolle eingesetzt werden, sowie Plasmen mit Faktormangel, die typischerweise übernormale Gerinnungszeiten aufweisen und in einer Koagulationskontrollzusammensetzung zur Erhöhung der Gerinnungszeit der Kontrolle eingesetzt werden. Die Bezeichnung „aktiviertes Plasma" bezieht sich wie hier benutzt auf ein anormales Plasma mit relativ zu normalem Plasma erhöhten Gehalten an Gerinnungsfaktor Xa. Ein aktiviertes Plasma kann Humanplasma oder Nichthumanplasma, wie Nichthuman-Primatplasma oder Nichtprimat-Säugerplasma sein. Ein aktiviertes Humanplasma ist ein bevorzugtes aktiviertes Plasma. Das aktivierte Plasma kann für den äußeren Weg (z. B. unter Benutzung von Thromboplastin und/oder anderen bekannten den äußeren Weg aktivierenden Mitteln) und/oder für den inneren Weg aktiviert sein (z. B. dadurch, dass man das Plasma den inneren Weg aktivierenden Mitteln aussetzt, wie etwa negativ geladenen Molekülgruppen mit einer großen spezifischen Oberfläche). Beispielhafte, den inneren Weg aktivierende Mittel sind organische Säuresalze, wie Salze der Ellagsäure, und Siliziumdioxid enthaltende Spezies, wie mikronisiertes Silziumdioxid, Kaolin, Celit und Glaswolle. Das aktivierte Plasma ist vorzugsweise ein durch Glaswolle aktiviertes Plasma. Die hier benutzte Bezeichnung „Plasma mit Faktormangel" bezieht sich auf ein anormales Plasma, das Mangel an einem oder mehreren Gerinnungsfaktoren hat, die aus der aus Faktor II, Faktor VII, Faktor IX und/oder Faktor X bestehenden Gruppe ausgewählt sind. Plasmen mit Faktormangel können natürlich auftreten und durch Sammlung aus Einzelpersonen oder anderen Säugern erhalten werden, oder sie können alternativ in vitro dadurch induziert werden, dass man aus normalem Plasma nach in der Technik bekannten Methoden Gerinnungsfaktoren entfernt. Bei einer bevorzugten Lösung werden Plasmen mit Faktormangel dadurch hergestellt, dass man das Plasma u. a. mit Absorbenzien, wie Aluminiumhydroxid, Bariumchlorid, Bariumcitrat und/Bariumsulfat in Kontakt bringt. Andere Methoden können ebenfalls benutzt werden, um Plasmen mit Faktormangel herzustellen. Beispielsweise kann ein Plasma mit Mangel an Faktor VII unter Benutzung von Antifaktor-VII-Antikörpern und Immunoaffinitätsreinigungsprotokollen hergestellt werden.
Das Primat-Plasma, vorzugsweise ein Humanplasma liegt in einer Koagulationskontrolllösung im Allgemeinen relativ zu dem Lösungsgesamtvolumen in einer Menge von etwa 25 bis etwa 99,55 Volumenprozent, vorzugsweise in einer Menge von etwa 50 bis etwa 99,5 Volumenprozent, noch bevorzugter in einer Mengen von 75 bis etwa 99,5 Volumenprozent und insbesondere in einer Menge von etwa 78 bis etwa 99,8 Volumenprozent vor. Die besondere Menge Primat-Plasma (z. B. Humanplasma) hängt nach der unten folgenden Diskussion von der Art und Qualität der Primat-Plasmen (z. B. normale und/oder anormale Plasmen), der Anwesenheit anderer Arten von Plasmen (z. B. Nichtprimat-Säugerplasmen) und der Art der in Herstellung befindlichen Kontrollzusammensetzung (z. B. Stufe I, II oder III) ab.
Ein anderes bevorzugtes Plasma bei der Koagulationskontrolle ist ein Nichtprimat-Säugerplasma. Bevorzugte Nichtprimat-Säugerplasmen im Einsatz in Verbindung mit der vorliegenden Erfindung sind u. a.: Rinderplasma, Schweineplasma, Ziegenplasma, Schafplasma, Pferdeplasma und Kaninchenplasma. Rinderplasma ist ein am meisten bevorzugtes Nichtprimat-Säugerplasma. Das Nichtprimat-Säugerplasma ist vorzugsweise ein normales Plasma, kann aber auch ein anormales Plasma sein, wie etwa ein Plasma mit Faktormangel und/oder ein aktiviertes Plasma. Normales Rinderplasma und normale Plasmen von anderen Nichtprimat-Säugern erhält man typischerweise aus Tieren ohne Gerinnungsmängel und können nach Sammlung zitriert, vereinigt und/oder zur Aufbewahrung gefroren werden.
Die Nichtprimat-Säugerplasmen werden vorzugsweise vor der Verwendung im Zusammenhang mit der vorliegenden Erfindung gereinigt. Gefrorenes Nichtprimat-Säugerplasma, wie gefrorenes Rinderplasma, wird entweder hergestellt oder z. B. von einer geschäftlichen Quelle bezogen. Das gefrorene Plasma wird dann in einer Umgebung aufgetaut, die auf einer Temperatur in dem Bereich von etwa 2°C bis etwa 8°C gehalten wird. Bestimmte Plasmabestandteile (z. B. Plasmaproteine) sind bei diesen tiefen Temperaturen nicht löslich und werden aus der Lösung als Niederschläge und/oder Teilchen ausfallen. Die in dem aufgetauten Plasma gebildeten Teilchen werden dann durch geeignete Trennungsmaßnahmen, wie Filtration oder Zentrifugierung, daraus entfernt. Diese Gefrier- und Auftaustufen werden dann vorzugsweise wenigstens einmal und vorzugsweise zwei- oder mehrfach dadurch wiederholt, dass man das teilweise gereinigte Plasma wieder einfriert, das wieder eingefrorene Plasma bei einer Temperatur in dem Bereich von etwa 2°C bis etwa 8°C wieder auftaut und dann in dem wieder aufgetauten Plasma gebildete zusätzliche Teilchen entfernt. Das anfallende gereinigte Nichtprimat-Säugerplasma ist in vorteilhafter Weise frei von Bestandteilen (z. B. Plasmaproteinen), die bei tieferen Temperaturen unlöslich sind. In signifikanter Weise erlaubt das Auftauen bei den genannten tiefen Temperaturen die Entfernung dieser Teilchen vor der Gefriertrocknung. Wenn das gefrorene Plasma bei höheren Temperaturen aufgetaut würde, wären diese Teilchen in Lösung geblieben und in dem gefriergetrockneten Gemisch eingeschlossen worden. Wenn diese gefriergetrocknete Zusammensetzung dann wiederhergestellt wird, würden sich viele von diesen Teilchen nicht wieder aufgelöst haben und daher in der wiederhergestellten Kontrollzusammensetzung unerwünschterweise als Teilchen vorliegen.
Das Nichtprimat-Säugerplasma liegt im Allgemeinen in einer Koagulationskontrolllösung in einer Menge vor, die in dem Bereich von etwa 0,5 bis etwa 12 Volumenprozent, vorzugsweise in dem Bereich von etwa 1 bis etwa 10 Volumenprozent, noch bevorzugter in einem Bereich von etwa 1 bis etwa 8 Volumenprozent, noch bevorzugter in einem Bereich von etwa 1 bis etwa 6 Volumenprozent, noch weiter bevorzugt in einem Bereich von etwa 2 bis etwa 5 Volumenprozent und insbesondere in einem Bereich von etwa 2 bis etwa 4 Volumenprozent, bezogen auf das Gesamtlösungsvolumen vorliegt. Das Nichtprimat-Säugerplasma und insbesondere Rinderplasma kann mit Vorteil innerhalb der genannten Bereiche eingesetzt werden, um PT und APTT-Zeiten zu kontrollieren. Ein Anstieg der Menge des Nichtprimat-Säugerplasmas in den genannten Bereichen erhöht z. B. die PT, während die APTT verringert wird, und erhöht die Stabilität der APTT – siehe Beispiel 2. Die Verwendung relativ niedriger Gehalte an Nichtprimat-Säugerplasma in einer Kontrollzusammensetzung kann unabhängig von dem Einsatz der Antikoagulanzien, etwa der Glykosaminoglykane sein oder ihn ergänzen.
Glykosaminoglykane sind Heteropolysaccharide mit sich wiederholenden Disaccharideinheiten, die einen Hexosaminrest und einen Hexose- oder Hexuronsäurerest enthalten. Der Hexosaminrest kann ein N-Acetylhexosamin sein. Einer oder beide der Reste können sulfatiert sein. Bevorzugte Glykosaminoglykane umfassen Heparin, Heparinderivate und/oder Heparinanaloge. Heparin ist das am meisten bevorzugte Glykosaminoglykan. Heparin kann unfraktioniertes Heparin, ein hochmolekulares Heparin oder ein niedermolekulares Heparin oder Kombinationen aus verschiedenen ausgewählten Heparinfraktionen sein. Das Heparinderivat kann irgendein Heteropolysaccharid sein, das aus Heparin hergestellt oder chemisch synthetisiert wird, um heparinartige Disaccharid-Untereinheiten zu enthalten, und eine Aktivität zur Verstärkung der Antithrombinaktivität von Antithrombin III (ATIII) und/oder Heparin-Cofaktor II (HCII) hat. Die Heparinderivate sind vorzugsweise wenigstens etwa 5 Saccharideinheiten lang, bevorzugter wenigstens etwa 8 Saccharideinheiten lang und insbesondere wenigstens etwa 18 Saccharideinheiten lang und enthalten vorzugsweise auch Schlüsselsequenzdomänen, die dem Heparinderivat Antikoagulansaktivität verleihen – durch Verstärkung der Wechselwirkung von Antithrombin III (ATIII) mit den Gerinnungsfaktoren IXa, Xa und/oder XIa und/oder durch Verstärkung der Wechselwirkung von ATIII und/oder Heparin-Cofaktor II (HCII) mit Thrombin. Siehe Rosenberg et al., Das Heparin-Antithrombin-System: Ein natürlicher Antikoagulansmechanismus, Kapitel 41, S. 837-860 des Textes Hämostase und Thrombose: Grundlagen und klinische Praxis, 3. Auflage, herausgegeben von R. Coleman et al., J. B. Lippincott Company, Philadelphia (1994). Beispielhafte Heparinderivate sind z. B. Enzym-behandeltes Heparin, wie das Chondroitinase-behandelte Heparin, das in dem gleichzeitig anhängigen US 5985582 beschrieben ist und das für die Verstärkung der Antithrombin III-Aktivität gegen Thrombin wirksam ist, aber für die Verstärkung der Heparin-Cofaktor II-Aktivität gegen Thrombin weniger wirksam ist als unmodifiziertes Heparin. Bevorzugte Heparinanaloga sind Heparansulfat, Dermatansulfate, Chondroitinsulfate, Keratansulfate, Mesoglykan, Sulodexid und Hyaluronsäure. Die Heparinanaloga umfassen auch andere Glykosaminoglykane mit Antikoagulansaktivität, und insbesondere mit Aktivität zur Verstärkung der Antithrombinaktivität von ATIII und/oder HCII und/oder zur Verstärkung der Wechselwirkung zwischen ATIII und den Gerinnungsfaktoren IXa, Xa und/oder XIa. Heparin und Heparinanaloga sind aus vielen kommerziellen Quellen erhältlich. Heparinderivate sind ebenfalls im Handel erhältlich und/oder nach bekannten oder später in der Technik entwickelten Vorschriften herstellbar. Siehe Oosta et al., Multiple funktionelle Domänen des Heparinmoleküls, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 78:829 (1981).
Die Konzentration der Antikoagulantien, etwa der Glykosaminoglykane in der Koagulationskontrolllösung liegt vorzugsweise in dem Bereich von etwa 0,01 U/ml bis etwa 0,15 U/ml, bevorzugter von etwa 0,01 U/ml bis etwa 0,1 U/ml, noch bevorzugter von etwa 0,03 U/ml bis etwa 0,07 U/ml und insbesondere bei etwa 0,05 U/ml, wobei U heparinäquivalente Einheiten gemäß unten stehender Definition und ml Milliliter der Koagulationskontrolllösung sind. Diese Konzentrationen werden in der Kontrolllösung so wie sie eingesetzt wird als bevorzugt angegeben, ohne Rücksicht darauf, ob die Lösung eine als solche hergestellte Lösung oder eine aus einem festen (z. B. gefriergetrockneten) Gemisch wiederhergestellte Lösung ist. Die entsprechende Konzentration an Glykosaminoglykan in einer festen Zusammensetzung liegt vorzugsweise in dem Bereich von etwa 0,1 U/g bis etwa 1,8 U/g, bevorzugter von etwa 0,3 U/g bis etwa 1,2 U/g, noch bevorzugter von etwa 0,4 U/g bis etwa 0,8 U/g und insbesondere bei etwa 0,6 U/g auf Trockengewichtsbasis, wobei U heparinäquivalente Einheiten sind.
Andere Konzentrationen in der festen Zusammensetzung können zur Anwendung kommen, jedoch mit notwendigen Einstellungen, um eine Kontrolllösung mit den oben genannten bevorzugten Konzentrationen des Antikoagulans in der Kontrolllösung zu erreichen. Wie angegeben, sind die Einheiten U des Glykosaminoglykans hier als heparinäquivalente Einheiten angegeben. D. h. die Einheit U stellt die Menge eines gegebenen Antikoagulans (z. B. des Glykosaminoglykans) dar, die ausreicht, um eine Antikoagulansaktivität, vorzugsweise eine Antifaktor-X-Aktivität zu haben, die etwa gleich der Antikoagulansaktivität, vorzugsweise der Antifaktor-X-Aktivität von normalem unfraktioniertem Heparin (UFH) bei den angegebenen Zahlenwerten ist. Die angegebenen Zahlenwerte stellen daher für unfraktioniertes Heparin und für Heparinfraktionen oder Heparinderivate mit der gleichen spezifischen Aktivität (je nachdem auf Gewicht oder Volumen bezogen) wie unfraktioniertes Heparin aktuelle Einheiten der Heparinaktivität U_hep dar, wobei eine Einheit der Heparinaktivität in der United States Pharmacopeia (USP) definiert ist. Siehe auch Yin et al., Heparin-Accelarated Inhibition of Activated Factor X by Its Plasma Inhibitor, Biochem. Biophys. Acts 201:387 (1970); Yin et al., Plasma-Heparin: A Unique, Practical Submicrogram Sensitive Assay, J. Lab. Clin. Med. 81:298 (1973). Bei Heparinanalogen, einigen Heparinfraktionen, Heparinderivaten oder anderen Antikoagulanzien, die eine andere spezifische Aktivität (bezogen auf Gewicht oder Volumen je nach dem) als unfraktioniertes Heparin haben, sollten deren Mengen demgegenüber jedoch ausreichend sein, die gleich starke Antikoagulansaktivität wie unfraktioniertes Heparin zu bewirken, falls das UHF bei den genannten Konzentrationswerten eingesetzt würde. Äquivalente Antikoagulansaktivitäten werden vorzugsweise durch einen Aktivitätstest bestimmt, der ein Substrat einbezieht, das unfraktioniertem Heparin und Nicht-UHF-Glykosaminoglykan gemeinsam ist. Wenn das Glykosaminoglykan z. B. Dermatansulfat ist, kann die heparinäquivalente Aktivität unter Benutzung eines Tests bestimmt werden, der die Glykosaminoglykanaktivität für Gerinnungsfaktor Xa bestimmt.
Die Koagulationskontrollzusammensetzung kann neben dem Primat-Plasma, Nichtprimat-Säugerplasma und Antikoagulans andere Bestandteile enthalten. Die Kontrollzusammensetzung enthält z. B. vorzugsweise Puffer und Streckmittel. Der Puffer kann irgendein geeigneter Puffer sein und hat vorzugsweise einen pK_a in dem Bereich von etwa 6 bis 8, bevorzugter von etwa 7 bis 8 und insbesondere von etwa 7,1 bis etwa 7,6. Bevorzugte Puffer sind z. B. N-2-Hydroxyethylpiperazin-N-2-ethansulfonsäure (HEPES) und 3-(N-Morpholino)-propansulfonsäure (MOPS), wobei HEPES der am meisten bevorzugte Puffer ist. Andere beispielhafte Puffer sind Tris, N,N-bis-(Hydroxyethyl)-2-aminoethansulfonsäure (BES), N-tris-(hydroxymethyl)-methyl-2-aminoethansulfonsäure (TES), 3-[N-tris(Hydroxymethyl)methylamino]-2-hydroxypropansulfonsäure (TAPSO) und 3-[N-tris(Hydroxymethyl-methylamino]-propansulfonsäure (TAPS) neben anderen. Die Menge des enthaltenen Puffers kann im Allgemeinen auf PT- und/oder APTT-Zeiten basieren und vorzugsweise von etwa 20 mM bis etwa 200 mM reichen und insbesondere etwa 50 mM in der Kontrolllösung betragen. Die Streckmittel, die in der Kontrollzusammensetzung enthalten sein können, sind Glycin, Glucit, Mannit, Sorbit, Lactose, Dextrose und dergleichen. Glycin ist ein bevorzugtes Streckmittel. Streckmittel sind vorzugsweise in einer Menge enthalten, die von etwa 0,5 Gew.-% bis etwa 5 Gew.-% reicht und insbesondere etwa 1 Gew.-% bezogen auf das Gewicht der Gesamtlösung beträgt unter der Annahme einer Lösungsdichte von etwa 1 g/ml. D, h., 1 Gew.-% Streckmittel ist gleich 10 g Streckmittel je 1 Lösung. Stabilisatoren, Konservierungsmittel und andere in der Technik bekannte Bestandteile können ebenfalls in der Koagulationskontrollzusammensetzung eingesetzt werden. Stabilisatoren können nützlicherweise z. B. Goodspuffer, Tris, Rinderserumalbumin (BSA), Piperazin-N,N-bis(2-ethansulfonsäure, 1,5 Natriumsalz (PIPES), Imidazol, 3-(N-Morpholino)-2-hydroxypropansulfonsäure (MOPSO), MOPS, BES, TES, HEPES, TAPSO, TAPS, 3-[N-bis(Hydroxyethyl)amino]-2-hydroxypropansulfonsäure (DIPSO), Piperazin-N,N'-bis(2-hydroxypropansulfonsäure (POPSO), N-Hydroxyethylpiperazin-N'-2-hydroxypropansulfonsäure (HEPSO), Tricin und Bicin sein. Konservierungsmittel, die zur Verhinderung des Wachstums von Mikroorganismen hilfreich sein können, wie antifungale, antibakterielle und Antihefe-Zusammensetzungen können ebenfalls im Gemisch enthalten sein. Beispielhafte Konservierungsmittel sind organische Säuren, wie Propionsäure, Natriumazid, Thimerosal, BHA, BHT und vorformulierte Multiaktivitätsformulierungen, wie ProClin^®. Die Konzentrationen dieser zusätzlichen Mischungsbestandteile können durch einen Fachmann bestimmt und optimiert werden. Der gesamte Volumenbeitrag dieser zusätzlichen Bestandteile zu einer Koagulationskontrolllösung kann im Allgemeinen von etwa 0 bis 3 Volumenprozent und vorzugsweise von etwa 0 bis 2 Volumenprozent relativ zum Volumen der Gesamtlösung reichen. Kontrollzusammensetzungen enthalten typischerweise etwa 1 Volumenprozent, bezogen auf das Volumen der Gesamtlösung, dieser anderen Bestandteile.
Das Primat-Plasma und das Nichtprimat-Säugerplasma werden vorzugsweise in ausreichenden Mengen miteinander vereinigt, um die gewünschte Prothrombinzeit(PT)- und/oder aktivierte partielle Thromboplastinzeit(APTT)-Koagulationszeit für Kontrollen der Stufe I, II oder Stufe III zu erreichen – vorzugsweise, jedoch nicht notwendigerweise, in einer Endzusammensetzung, die ein Glykosaminoglykan in den oben angegebenen Konzentrationsbereichen enthält. Die Koagulationskontrolle kann im Allgemeinen eine PT in dem Bereich von etwa 9 Sekunden bis etwa 35 Sekunden und eine APTT in dem Bereich von etwa 20 Sekunden bis etwa 100 Sekunden haben. Insbesondere für eine Koagulationskontrollzusammensetzung der Stufe I liegt die PT vorzugsweise in dem Bereich von etwa 9 Sekunden bis etwa 14 Sekunden, bevorzugter in dem Bereich von etwa 11 Sekunden bis etwa 13 Sekunden und insbesondere bei etwa 12 Sekunden. Die APTT für eine Kontrolle der Stufe I liegt vorzugsweise in dem Bereich von etwa 20 Sekunden bis etwa 34 Sekunden, bevorzugter in dem Bereich von etwa 22 Sekunden bis etwa 32 Sekunden und insbesondere bei etwa 30 Sekunden. Für eine Koagulationskontrolle der Stufe II liegt die PT vorzugsweise in dem Bereich von etwa 15 Sekunden bis etwa 25 Sekunden, bevorzugter von etwa 17 Sekunden bis etwa 22 Sekunden und insbesondere bei etwa 20 Sekunden. Die APTT für eine Kontrolle der Stufe II liegt vorzugsweise in dem Bereich von etwa 40 Sekunden bis etwa 60 Sekunden, bevorzugter in dem Bereich von etwa 47 Sekunden bis etwa 53 Sekunden und insbesondere bei etwa 50 Sekunden. Für eine Koagulationskontrolle der Stufe III liegt die PT vorzugsweise in dem Bereich von etwa 25 Sekunden bis etwa 33 Sekunden, bevorzugter von etwa 27 Sekunden bis etwa 31 Sekunden und insbesondere bei etwa 28 Sekunden. Die APTT für eine Kontrolle der Stufe III liegt vorzugsweise in dem Bereich von etwa 70 Sekunden bis etwa 100 Sekunden, bevorzugter in dem Bereich von etwa 75 Sekunden bis etwa 85 Sekunden und insbesondere bei etwa 78 Sekunden. Jede der vorerwähnten PT-Testzeiten wird vorzugsweise bestimmt unter Benutzung eines Thromboplastin-Reagenz mit einem Internationalen Empfindlichkeitsindex (ISI) von etwa 2, wie etwa ThromboMAX^® (Sigma, St. Louis, MO). Jede der vorerwähnten APTT-Testzeiten wird vorzugsweise bestimmt mit einem APTT-Reagenz, das als solches gegen Heparin und Lupus-Antikoagulans (Sigma APTT-FSL) mäßig empfindlich ist, und unter Benutzung eines geeigneten Analysators (z. B. AMAX CS-190).
Das Primat-Plasma und das Nichtprimat-Säugerplasma werden im Allgemeinen miteinander vereinigt, so dass das Verhältnis von Nichtprimat-Säugerplasma zu Primat-Plasma in dem Bereich von etwa 1:200 bis etwa 1:5, bevorzugter in dem Bereich von etwa 1:200 bis etwa 1:10 und insbesondere in dem Bereich von etwa 1:50 bis etwa 1:20 liegt, wobei das Verhältnis auf das Volumen (für eine Kontrolllösung) oder das Gewicht (für eine Kontrollzusammensetzung in gefriergetrockneter Form) bezogen ist. Eine Koaqulationskontrolllösung enthält vorzugsweise Primat-Plasma, wie Humanplasma, in einer Menge in dem Bereich von etwa 78 bis etwa 99,5 Volumenprozent und ein Nichtprimat-Säugerplasma, wie Rinderplasma, in einer Menge in dem Bereich von etwa 0,5 bis etwa 12 Volumenprozent. Die am meisten bevorzugten Verhältnisse und/oder Volumenprozente für einzelne Kontrollstufen variieren in Abhängigkeit von der Art und Qualität des Primat- oder Humanplasmas (z. B. normales Humanplasma gegenüber anormalem Humanplasma und Art des anormalen Plasmas) und von der Art und Qualität des Nichtprimat-Säugerplasmas (z. B. Rind gegenüber Schwein; normal gegenüber anormal), die in der Koagulationszusammensetzung eingesetzt sind.
Das Antikoagulans wird den Plasmalösungen vorzugsweise als eine erste Stufe (z. B. unmittelbar nach Sammlung oder unmittelbar nach dem Auftauen der Plasmen) oder wenigstens als eine frühe Stufe bei der Herstellung der Koagulations kontrolle zugesetzt. Ohne Festlegung auf eine in den Ansprüchen nicht spezifisch angegebene Theorie wird die frühe Zugabe des Antikoagulans (z. B. Heparin) die Antikoagulationsaktivität von Plasmabestandteilen, wie Antithrombin III und Heparin-Cofaktor II, verstärken und dadurch die Aktivierung von Gerinnungsfaktoren ausschließen und/oder abschwächen. Obgleich die folgenden Betrachtungen mit Bezug auf Humanplasmen und Glykosaminoglykane beschrieben werden, sind sie in gleicher Weise auf die Bildung von Kontrollzusammensetzungen mit anderen Primat-Plasmen und anderen Antikoagulanzien anwendbar. Bei einer bevorzugten Lösung wird Humanplasma mit dem Glykosaminoglykan unter Bildung einer Humanplasmalösung vereinigt, das Nichtprimat-Säugerplasma wird mit dem Glykosaminoglykan unter Bildung einer Nichtprimat-Säugerplasmalösung vereinigt, und die Humanplasmalösung und dann die Nichtprimat-Säugerplasmalösung werden vereinigt.
Bei dieser bevorzugten Lösung ist die Konzentration des Glykosaminoglykans in der Humanplasmalösung und der Nichtprimat-Säugerplasmalösung vorzugsweise in jeder solchen Lösung die gleiche und vorzugsweise gleich der Zielkonzentration für die Koagulationskontrolle, aber sie könnte jedoch gewünschtenfalls in jeder Lösung verschieden sein. Wenn eine oder mehrere der Plasmen behandelt werden, z. B. zur Reinigung, kann das Heparin ebenfalls vor dieser Behandlung zugesetzt werden.
Im Allgemeinen könnten jedoch auch andere Wege bei der Vereinigung von Primat-Plasma, Nichtprimat-Säugerplasma und Glykosaminoglykan zur Anwendung kommen. Bei einem anderen Weg z. B. wird das Humanplasma zuerst mit dem Nichtprimat-Säugerplasma unter Bildung eines Plasmagemisches vereinigt, und das Glykosaminoglykan wird dann mit dem Plasmagemisch vereinigt. Bei einem weiteren alternativen Weg wird das Humanplasma mit dem Glykosaminoglykan unter Bildung einer Humanplasmalösung vereinigt, und die Humanplasmalösung wird dann mit dem Nichtprimat-Säugerplasma vereinigt. Auf einem ähnlichen Weg wird Nichtprimat-Säugerplasma mit dem Glykosaminoglykan unter Bildung einer Nichtprimat-Säugerplasmalösung vereinigt, und dann wird die Nichtprimat-Säugerplasmalösung mit dem Humanplasma vereinigt.
Bei allen vorgenannten Vorgehensweisen wird Glykosaminoglykan, das in seiner handelsüblichen Form typischerweise ein Feststoff ist, vorzugsweise in einem Puffer in Lösung gebracht, bevor es mit dem Humanplasma und/oder mit dem Nichtprimat-Säugerplasma vereinigt wird. Die vorherige Löslichmachung des Glykosaminoglykans in dem Puffer anstatt direkt in dem Plasma vermeidet eine extensive Mischung, die zur Löslichmachung des Glykans in dem Plasma erforderlich ist, und trägt dadurch dazu bei, die Aktivierung von Plasmaenzymen zu vermeiden. Die Streckmittel (z. B. Glycin), Stabilisatoren und/oder Konservierungsmittel können heparinisierten Plasmalösungen vor oder nach ihrer Vereinigung zugesetzt werden.
Bevorzugte Koagulationskontrollzusammensetzungen enthalten normales Humanplasma, Rinderplasma und Heparin oder ein Heparinderivat. Obgleich bevorzugte Kontrollen der Stufe I, Stufe II und Stufe III unten unter Bezugnahme auf Rinderplasma als das Nichtprimat-Säugerplasma und unter Bezugnahme auf Heparin oder ein Heparinderivat als das Glykosaminoglykan beschrieben werden, könnten diese in dieser Beschreibung in äquivalenter Weise durch andere Nichtprimat-Säugerplasmen und andere Glykosaminoglykane ersetzt werden. Dieser Austausch liegt im Hinblick auf die hier gegebene Unterweisung innerhalb des fachlichen Könnens. Obgleich außerdem bevorzugte relative Mengen der verschiedenen Plasmakomponenten unten für die Koagulationskontrollzusammensetzungen der Stufen I, II und III angegeben werden, können von den Fachleuten auch Kombinationen der verschiedenen Plasmalösungen außerhalb der angegebenen Bereiche, aber noch in den Erfindungsumfang fallend entwickelt werden.
Eine bevorzugte Koagulationskontrolle der Stufe I enthält normales Humanplasma, normales Rinderplasma, Heparin oder ein Heparinderivat, ein oder mehrere Puffer und wahlweise ein aktiviertes Plasma, ein Streckmittel, ein Konservierungsmittel und/oder einen Stabilisator – siehe Beispiel 3. Nach einem bevorzugten Verfahren wird die bevorzugte Kontrolle der Stufe I dadurch hergestellt, dass man Heparin oder ein Heparinderivat in einem Puffer in Lösung bringt und dann das gepufferte Heparin (oder gepufferte Heparinderivat) mit normalem Humanplasma unter Bildung einer heparinisierten Humanplasmalösung vereinigt, die Heparin oder Heparinderivat in einer Konzentration in dem Bereich von etwa 0,01 U/ml bis etwa 0,15 U/ml enthält. Ein Streckmittel kann ebenfalls in die heparinisierte Rinderrplasmalösung eingebracht werden. In ähnlicher Weise wird das gepufferte Heparin (oder gepufferte Heparinderivat) mit wie oben beschrieben gereinigtem Rinderplasma unter Bildung einer heparinisierten Rinderplasmalösung vereinigt, die Heparin oder Heparinderivat in einer Konzentration in dem Bereich von etwa 0,01 U/ml bis etwa 0,15 U/ml enthält. Ein Streckmittel kann in die heparinisierte Humanplasmalösung ebenfalls eingebracht werden. Falls in der Kontrollzusammensetzung eingesetzt, wird ein aktiviertes Plasma vorzugsweise aus der heparinisierten normalen Humanplasmalösung hergestellt. Beispielsweise kann durch Glaswolle aktiviertes Plasma in der Weise hergestellt werden, dass man die heparinisierte Humanplasmalösung mit Glaswolle über einen Zeitraum in dem Bereich von etwa 12 Stunden bis etwa 30 Stunden, vorzugsweise für einen Zeitraum von etwa 15 Stunden bis etwa 18 Stunden bei einer Temperatur in dem Bereich von etwa 2°C bis etwa 8°C in Berührung bringt. Ein Streckmittel kann der heparinisierten aktivierten Plasmalösung zugesetzt werden. Die heparinisierte normale Humanplasmalösung, die heparinisierte Rinderplasmalösung und, falls enthalten, die heparinisierte aktivierte Plasmalösung werden dann in geeigneten relativen Mengen zu einer Kontrollzusammensetzung der Stufe I mit dem gewünschten PT- und APTT-Wert vereinigt.
Die heparinisierten Plasmalösungen werden vorzugsweise in relativen Verhältnissen vereinigt, um eine Kontrolllösung der Stufe I zu bilden, die normales Humanplasma in einer Menge in dem Bereich von etwa 78 Volumenprozent bis etwa 99,5 Volumenprozent, Rinderplasma in einer Menge in dem Bereich von etwa 0,5 Volumenprozent bis etwa 12 Volumenprozent, aktiviertes Plasma in einer Menge von nicht mehr als etwa 7 Volumenprozent enthält, wobei andere Bestandteile (z. B. Puffer, Streckmittel, usw.) nicht mehr als etwa 3 Volumenprozent ausmachen. Die heparinisierten Plasmalösungen werden noch bevorzugter in relativen Anteilen zu einer Kontrolllösung der Stufe I vereinigt, die normales Humanplasma in einer Menge in dem Bereich von etwa 86 Volumenprozent bis etwa 99 Volumenprozent, Rinderplasma in einer Menge in dem Bereich von etwa 1 Volumenprozent bis etwa 6 Volumenprozent, aktiviertes Plasma in einer Menge von nicht mehr als etwa 5 Volumenprozent enthält, wobei andere Bestandteile (z. B. Puffer, Streckmittel usw.) nicht mehr als etwa 2 Volumenprozent ausmachen. Die heparinisierten Plasmalösungen werden insbesondere in relativen Anteilen zu einer Kontrolllösung der Stufe I vereinigt, die normales Humanplasma in einer Menge in dem Bereich von etwa 88 Volumenprozent bis etwa 95 Volumenprozent, Rinderplasma in einer Menge in dem Bereich von etwa 2 Volumenprozent bis etwa 4 Volumenprozent, aktiviertes Plasma in einer Menge in dem Bereich von etwa 3 Volumenprozent bis etwa 5 Volumenprozent enthält, wobei andere Bestandteile (z. B. Puffer, Streckmittel usw.) in dem Bereich von etwa 1 Volumenprozent bis etwa 2 Volumenprozent liegen.
Die bevorzugten Koagulationskontrollen der Stufe II und Stufe III enthalten normales Humanplasma, normales Rinderplasma, Plasma mit Faktormangel, Heparin oder ein Heparinderivat, ein oder mehrere Puffer, ein Streckmittel und wahlweise ein Konservierungsmittel und/oder einen Stabilisator. Siehe Beispiel 4 (Stufe II) und Beispiel 5 (Stufe III). Die bevorzugte Kontrolle der Stufe II und der Stufe III werden in der Weise hergestellt, dass man eine heparinisierte Humanplasmalösung aus normalem Humanplasma bildet und eine heparinisierte Rinderplasmalösung bildet, wie oben für die Kontrolle der Stufe I beschrieben wurde. Eine heparinisierte Faktormangel-Plasmalösung wird ebenfalls hergestellt, vorzugsweise aus der heparinisierten normalen Humanplasmalösung durch Absorbieren derselben nach bekannten Methoden mit einem Absorbtionsmittel, vorzugsweise mit Aluminiumhydroxid. Die heparinisierte normale Humanplasmalösung, die heparinisierte Rinderplasmalösung und die heparinisierte Faktormangel-Plasmalösung werden dann in geeigneten relativen Mengen unter Bildung einer Kontrollzusammensetzung der Stufe II oder einer Kontrollzusammensetzung der Stufe III mit den gewünschten PT- bzw. APTT-Werten vereinigt.
Zur Bildung einer bevorzugten Kontrollzusammensetzung der Stufe II werden diese heparinisierten Plasmalösungen vorzugsweise in relativen Verhältnissen zusammengebracht, um eine Kontrolllösung zu bilden, die Plasma mit Faktormangel in einer Menge im Bereich von etwa 75 Volumenprozent bis etwa 85 Volumenprozent, Rinderplasma in einer Menge in dem Bereich von etwa 0,5 Volumenprozent bis etwa 12 Volumenprozent und normales Humanplasma in einer Menge in dem Bereich von etwa 0,5 Volumenprozent bis etwa 24,5 Volumenprozent enthält, wobei andere Bestandteile (z. B. Puffer, Streckmittel usw.) nicht mehr als etwa 3 Volumen prozent ausmachen. Die heparinisierten Plasmalösungen werden bevorzugter in relativen Verhältnissen vereinigt, um eine Kontrolllösung der Stufe II zu bilden, die Plasma mit Faktormangel in einer Menge in dem Bereich von etwa 77 Volumenprozent bis etwa 83 Volumenprozent, Rinderplasma in einer Menge in dem Bereich von etwa 1 Volumenprozent bis etwa 6 Volumenprozent und normales Humanplasma in einer Menge in dem Bereich von etwa 8 Volumenprozent bis etwa 22 Volumenprozent enthält, wobei andere Bestandteile (z. B. Puffer, Streckmittel usw.) nicht mehr als etwa 2 Volumenprozent ausmachen. Die heparinisierten Plasmalösungen werden insbesondere in relativen Verhältnissen vereinigt, um eine Kontrolllösung der Stufe II zu bilden, die Plasma mit Faktormangel in einer Menge in dem Bereich von etwa 78 Volumenprozent bis etwa 82 Volumenprozent, Rinderplasma in einer Menge in dem Bereich von etwa 2 Volumenprozent bis etwa 4 Volumenprozent und normales Humanplasma in einer Menge in dem Bereich von etwa 11 Volumenprozent bis etwa 20 Volumenprozent enthält, wobei andere Bestandteile (z. B. Puffer, Streckmittel usw.) in dem Bereich von etwa 1 Volumenprozent bis etwa 2 Volumenprozent liegen.
Eine bevorzugte Kontrollzusammensetzung der Stufe III wird durch Vereinigung dieser heparinisierten Plasmalösungen in relativen Verhältnissen unter Bildung einer Kontrolllösung gebildet, die Plasma mit Faktormangel in einer Menge in dem Bereich von etwa 85 Volumenprozent bis etwa 95 Volumenprozent, Rinderplasma in einer Menge in dem Bereich von etwa 0,5 Volumenprozent bis etwa 12 Volumenprozent und normales Humanplasma in einer Menge in dem Bereich von etwa 0,5 Volumenprozent bis etwa 14,5 Volumenprozent enthält, wobei andere Komponenten (z. B. Puffer, Streckmittel usw.) nicht mehr als etwa 3 Volumenprozent ausmachen. Die heparinisierten Plasmalösungen werden bevorzugter in relativen Verhältnissen zusammengebracht, um eine Kontrolllösung der Stufe III zu bilden, die Plasma mit Faktarmangel in einer Menge in dem Bereich von etwa 87 Volumenprozent bis etwa 93 Volumenprozent, Rinderplasma in einer Menge in dem Bereich von etwa 1 Volumenprozent bis etwa 6 Volumenprozent und normales Humanplasma in einer Menge in dem Bereich von etwa 0,5 Volumenprozent bis etwa 12 Volumenprozent enthält, wobei andere Bestandteile (z. B. Puffer, Streckmittel usw.) nicht mehr als etwa 2 Volumenprozent ausmachen. Die heparinisierten Plasmalösungen werden insbesondere in relativen Verhältnissen zusammengebracht, um eine Kontrolllösung der Stufe III zu bilden, die Plasma mit Faktormangel in einer Menge in dem Bereich von etwa 88 Volumenprozent bis etwa 92 Volumenprozent, Rinderplasma in einer Menge in dem Bereich von 2 Volumenprozent bis etwa 4 Volumenprozent und normales Humanplasma in einer Menge in dem Bereich von etwa 1 Volumenprozent bis etwa 10 Volumenprozent enthält, wobei andere Bestandteile (z. B. Puffer, Streckmittel usw.) in dem Bereich von etwa 1 Volumenprozent bis etwa 2 Volumenprozent liegen.
Die wie oben beschriebenen Koagulationskontrolllösungen können nach in der Technik bekannten Methoden gefriergetrocknet werden. Die Zusammensetzungen können z. B. durch Einfrieren bei einer Temperatur und unter Vakuum für eine zur Bildung der gefriergetrockneten Kontrollzusammensetzung ausreichenden Zeitdauer gefriergetrocknet werden. Die Temperatur, das Vakuum und die Zeitdauer sind nicht in enger Weise kritisch, jedoch kann die Gefriertrocknung im Allgemeinen wie folgt durchgeführt werden. Die Zusammensetzungen werden auf eine Tiefgefriertemperatur, typischerweise in dem Bereich von etwa –60°C bis etwa –20°C ohne Vakuum für eine Zeitdauer eingefroren, die in dem Bereich von etwa 2 Stunden bis etwa 24 Stunden liegt. Dann wird ein Vakuum angelegt, vorzugsweise bei einem absoluten Druck in dem Bereich von etwa 10 Millitorr bis etwa 200 Millitorr. Die Lagerungstemperatur wird dann etwas angehoben, typischerweise auf eine Temperatur in dem Bereich von etwa 0°C bis etwa 25°C, und für eine Zeitdauer, die ausreicht, um die Zusammensetzung gefrierzutrocknen. Die Gefriertrocknung wird bevorzugter in der Weise durchgeführt, dass die Zusammensetzung zuerst in einer Kammer ohne Vakuum während einer Zeitdauer von etwa 4 Stunden auf eine Temperatur von etwa –40°C tiefgefroren wird, dann in der Kammer ein Vakuum von weniger als etwa 200 Millitorr angelegt wird und anschließend die Temperatur vorzugsweise auf etwa 25°C für eine Zeitspanne angehoben wird, die ausreicht, dass das Produkt etwa 4 Stunden lang etwa 25°C erreicht. Bei einer bevorzugten Ausführungsform werden etwa 1 ml bis etwa 5 ml und vorzugsweise etwa 1 ml bis etwa 3 ml der Kontrolllösung einer Ampulle zugeführt und ohne Vakuum durch etwa 4-stündiges Gefrieren bei etwa –40°C gefriergetrocknet. Anschließend wird ein Vakuum von weniger als etwa 200 Millitorr angelegt, und die Lagertemperatur wird eine ausreichende Zeitdauer auf etwa 25°C angehoben, um die Lösung gefrierzutrocknen. Die gefriergetrocknete Zusammensetzung wird vorzugsweise unter Vakuum abgedichtet. Die gefriergetrocknete Zusammensetzung kann vor der Wiederherstellung etwa 2 Jahre bei Temperaturen von etwa 2°C bis etwa 8°C aufbewahrt werden.
Die gefriergetrocknete Kontrollzusammensetzung kann unter Benutzung von Wasser, einem geeigneten Puffer oder anderer Wiederherstellungslösung wiederhergestellt werden. Vorzugsweise reicht das Volumen der Wiederherstellungslösung aus, um Koagulationskontrolllösungen mit den verschiedenen Plasmen bei den oben erwähnten relativen Volumina zu bilden. Wenn die Verwendung eines größeren oder kleineren Wiederherstellungsvolumens gewünscht wird, sollten die in den als solche hergestellten Kontrolllösungen vorliegenden Mengen der verschiedenen Plasmen vor der Gefriertrocknung demgemäss eingestellt werden, damit nach der Gefriertrocknung wiederhergestellte Koagulations kontrolllösungen gebildet werden, die die verschiedenen Plasmen in den vorerwähnten relativen Volumina enthalten.
Die wiederhergestellten Koagulationskontrollzusammensetzungen der vorliegenden Erfindung haben eine erhöhte Stabilität in Bezug auf PT- und APTT-Tests. Wie z. B. in Beispiel 6 gezeigt ist, haben wie beschrieben hergestellte und hier beanspruchte Kontrollen der Stufe I, Stufe II und Stufe III eine ausgezeichnete Beständigkeit bis zu 48 Stunden nach der Wiederherstellung – etwa 6 × länger als die gegenwärtigen im Handel erhältlichen Kontrollen.
Die oben beschriebenen Koagulationskontrollen können verwendet werden, um PT- und/oder APTT-Testsysteme für Qualitätskontrollzwecke zu bewerten. Diese Qualitätskontrollmethoden umfassen im Allgemeinen die Vereinigung eines PT-Reagenz oder eines APTT-Reagenz mit einer der oben beschriebenen Koagulationskontrollen unter Bildung einer Testlösung, Feststellung einer Gerinnselbildung in der Testlösung und Bestimmung der Zeit, die von der Bildung der Testlösung bis zur Feststellung der Gerinnselbildung in der Testlösung vergangen ist. Zur Bewertung eines PT-Testsystems kann die Koagulationskontrolle ein Antikoagulans und irgendein geeignetes Plasma enthalten. Zur Bewertung von PT- oder APTT-Testsystemen enthält die Koagulationskontrolle gemäß einer Lösung ein Antikoagulans und ein anormales Plasma. Bei einer anderen Lösung für die Qualitätskontrolle des PT- oder APTT-Testsystems enthält die Koagulationskontrolle Primat-Plasma, Nichtprimat-Säugerplasma und einen Antikoagulans.
Prothrombinzeit(PT)-Reagenzien, wie sie hier eingesetzt werden, beziehen sich auf eine Lösung mit einem Gewebefaktor und kationischen Ionen, vorzugsweise Calciumionen (Ca⁺⁺). Gewebefaktor ist ein integrales Membran-Glykoprotein, das zur Einleitung der Blutgerinnung über den äußeren Weg biologisch aktiv ist. Gewebefaktor enthält eine Proteinkomponente, Gewebefaktorprotein und eine Lipid komponente. Die Lipidkomponente des Gewebefaktors umfasst hauptsächlich Phospholipide. Der Gewebefaktor kann natürlich auftretender Gewebefaktor, wie der in Säugergewebeextrakten, oder alternativ synthetisch hergestellt sein, z. B. durch Vereinigung von isoliertem oder rekombinant erzeugtem Gewebefaktorprotein und Phospholipiden in geeigneten Verhältnissen. Siehe US-Patent Nr. 5,017,556 und die darin zitierten Literaturstellen.
Die hier benutzten aktivierten partiellen Thromboplastinzeit(APTT)-Reagenzien beziehen sich auf eine Lösung, die den Gewebefaktor-Lipidbestandteil ohne Gewebefaktorprotein und einen Innenweg-Aktivierungsfaktor enthält. Innenweg-Aktivierungsfaktoren sind typischerweise negativ geladene Molekülteile mit einer großen spezifischen Oberfläche und können z. B. Salze organischer Säuren umfassen, wie Salze der Ellagsäure, und Siliziumdioxid enthaltende Spezies, wie mikronisiertes Siliziumdioxid, Kaolin, Celit und Glaswolle.
Eine Gerinnselbildung kann festgestellt werden und die für diese Gerinnselbildung erforderliche Zeit kann bestimmt werden unter Benutzung von manuellen und/oder automatisierten Protokollen. Beispielhafte Methoden zur Bestimmung der Gerinnselbildung sind u. a. visuelle Beobachtungen mit einer „Kipprohr"-Technik, elektrochemische Methoden (z. B. Fibrometer) und optische Methoden (z. B. aufgrund des Absorptionsvermögens oder der Änderungsgeschwindigkeit des Absorptionsvermögens). Beispielhafte automatisierte Analysatoren sind der AMAX CS-190 (Sigma Chemical, St. Louis, MO).
Es kann dann ein Vergleich der bestimmten Zeiten mit Zielbereichen für die besondere, in Auswertung befindliche Kontrollzusammensetzung angestellt werden. Wo die Koagulationskontrolle mit einem PT-Reagenz kombiniert wird, kann die bestimmte Zeit wie oben angegeben mit den PT-Zielzeiten für die Kontrollen der Stufe I, Stufe II und Stufe III verglichen werden. Wo die Koagulationskontrolle mit einem APTT-Reagenz kombiniert wird, kann die bestimmte Zeit wie oben angegeben mit den APTT-Zielzeiten für die Kontrollen der Stufe I, Stufe II und Stufe III verglichen werden. Bestimmte Zeiten, die außerhalb der Zielzeiten liegen, weisen für das Testsystem auf Besorgnis bezüglich der Qualitätskontrolle hin. Diese Besorgnisse beziehen sich typischerweise auf das PT-/APTT-Reagenz oder das Gerät und/oder die Protokolle, die zur Bestimmung der Gerinnungszeit benutzt wurden.
Die folgende Beispiele erläutern die Grundlagen und Vorteile der Erfindung.
Beispiele
Beispiel 1: Wirkung von Heparin auf Koagulationskontrollen
Um die Wirkung der Heparinzugabe zu einer Koagulationskontrollzusammensetzung zu testen, wurden drei Kontrollzusammensetzungen der Stufe III, die als Vorversuch Nr. A, B und C bezeichnet sind, hergestellt und wie folgt bestimmt:
Eine heparinisierte normale Humanplasmalösung wurde aus normalem Humanplasma hergestellt. Gefrorenes, citriertes Humanplasma (3-4 % Citrat) wurde in einem Wasserbad bei 30-37°C aufgetaut. In dem Vorversuch Nr. A, der als eine Versuchskontrolle diente, wurde HEPES-Puffer (ohne Heparin) dem aufgetauten Plasma bis zu einer Konzentration von 50 mM HEPES zugesetzt. Im Vorversuch Nr. B und C wurde Heparin enthaltender HEPES-Puffer dem aufgetauten Plasma bis zu einer Konzentration von 50 mM HEPES und 0,05 U/ml Heparin zugesetzt, um eine heparinisierte normale Humanplasmalösung zu bilden. In jedem Fall war der pH des HEPES-Puffers 7,2-7,4, und der Puffer wurde im Voraus als ein 40-faches Konzentrat hergestellt, um Verdünnungseffekte bei Zugabe zu dem Plasma zu minimieren. Das Heparin war aus Rinderlunge stammendes Heparin von pharmazeutischer Qualität, das auf 1000 U/ml in 0,85 %iger Salzlösung verdünnt war (Upjohn Co., Kalamazoo, MI).
Ein Humanplasma mit Faktormangel wurde aus einem Teil der oben hergestellten, heparinisierten, normalen Humanplasmalösung hergestellt. Die Gerinnungsfaktoren II, VII, IX und X wurden durch 30-45 minütiges Mischen der heparinisierten Humanplasmalösung mit Aluminiumhydroxid (25 g/l) bei einer auf etwa 2-8°C gehaltenen Temperatur absorbiert. Das Aluminiumoxid wurde durch Zentrifugierung entfernt.
Eine heparinisierte normale Rinderplasmalösung wurde ebenfalls hergestellt. Geforenes, citriertes normales Rinderplasma wurde in einem auf einer Temperatur in dem Bereich von etwa 2°C bis etwa 8°C gehaltenen Kühlschrank aufgetaut und dann unter Benutzung eines groben Filters (Whitman Nr. 1) filtriert, um Fällungsmittel und/oder Teilchen zu entfernen, die sich bei der Tieftemperaturauftauung gebildet hatten. Das Gefrieren, Auftauen und Entfernen der ausgefallenen Teilchen wurde wiederholt. Das gereinigte Rinderplasma wurde unverpackt hergestellt und dann bei –70°C aufbewahrt. Zur Herstellung der heparinisierten Rinderplasmalösung wurde gefrorenes gereinigtes Rinderplasma in einem Wasserbad bei einer Temperatur von etwa 30-37°C aufgetaut und ein Heparin enthaltender HEPES-Puffer wurde dem aufgetauten Rinderplasma bis zu einer Konzentration von 50 mM HEPES und 0,05 U/ml Heparin zugesetzt.
Dann wurden Kontrollzusammensetzungen der Stufe III dadurch hergestellt, dass die heparinisierte (absorbierte) Humanplasmalösung mit Faktormangel (etwa 89 Volumenprozent), die heparinisierte normale Humanplasmalösung (etwa 7 Volumenprozent) und die heparinisierte Rinderplasmalösung (etwa 4 Volumenprozent) vereinigt wurden. In dem Vorversuch Nr. C wurden nach Vereinigung der verschiedenen Plasmalösungen zusätzliche 0,05 U/ml Heparin zugesetzt, um die Heparingesamtkonzentration auf 0,1 U/ml zu bringen. Jedem der Vorversuchzusammensetzungen wurde bis 1 Gew.-% Glycin zugesetzt, und die Vorversuchzusammensetzungen wurden dann in Ampullen gefüllt und gefriergetrocknet.
Alle Vorversuchzusammensetzungen wurden anschließend nach Wiederherstellung mit Wasser auf das gleiche Volumen, auf das die Ampullen vor der Gefriertrocknung gefüllt wurden, unter Benutzung der Prothrombinzeit(PT)- und aktivierten partiellen Thromboplastinzeit(APTT)-Tests bewertet. Zur Stabilitätsprüfung wurden die wiederhergestellten Proben unmittelbar nach der Wiederherstellung und nach 24-stündiger und 48-stündiger Aufbewahrung an Bord des Analysators bei 15-22°C analysiert. Die Daten wurden auf einem Koagulationsanalysator Amelung AMAX CS-190 unter Benutzung eines PT-Reagenz mit einem ISI-Wert von 2,0 (Sigma Thromboplastin-XS) und eines APTT-Reagenz gesammelt, das gegen Heparin und Lupus-Antikoagulans (Sigma APTT-FSL) mäßig empfindlich ist. Es wurden mechanische und optische Bestimmungen durchgeführt.
Die Ergebnisse sind unten für PT-Tests (Tabelle 1A) und APTT-Tests (Tabelle 1B) angegeben. Die angegebenen Daten in diesen Tabellen zeigen, dass Koagulationskontrollen mit Heparin, das nach dem Auftauen und vor der Adsorption (Vorversuch Nr. B und C) zugesetzt wurde, beständiger waren als Kontrollen ohne Heparin (Vorversuch Nr. A). Der Vergleich der Daten für die Vorversuche Nr. B und C zeigt, dass Heparin, welches nach Vereinigung der verschiedenen Plasmen zugesetzt wurde, die APTT weiter erhöhte, aber geringe zusätzliche Wirkung, wenn überhaupt, auf die Stabilität hatte.
Beispiel 2: Wirkung von Rinderplasma auf Roagulationskontrollen
Um die Wirkung von Rinderplasmakonzentrationen auf Koagulationskontrollzusammensetzung zu testen, wurden Kontrollzusammensetzungen der Stufe III mit verschiedenen relativen Mengen an Humanplasma mit Faktormangel, normalem Humanplasma und Rinderplasma hergestellt und wie folgt bewertet.
Eine heparinisierte normale Humanplasmalösung, eine heparinisierte Lösung von Humanplasma mit Faktormangel und eine heparinisierte normale Rinderplasmalösung wurden wie in Beispiel 1 beschrieben hergestellt.
Diese Plasmalösungen wurden dann in verschiedenen relativen Mengen zusammengegeben, wie in Tabelle 2 summarisch angeführt ist. Allen Zusammensetzungen wurde Glycin bis auf 1 Gew.-% zugesetzt, und die Kontrolllösungen wurden dann in Ampullen gefüllt und gefriergetrocknet.
Alle Kontrollzusammensetzungen wurden dann nach Wiederherstellung mit Wasser auf das gleiche Volumen wie das Volumen, mit dem die Ampullen vor der Gefriertrocknung ursprünglich befüllt wurden, unter Benutzung von Prothrombinzeit(PT)-Tests und aktivierten partiellen Thromboplastinzeit(APTT)-Tests zahlenmäßig bewertet. Zur Stabilitätsprüfung wurden die wiederhergestellten Proben unmittelbar nach der Wiederherstellung und nach 24-stündiger und 48-stündiger Aufbewahrung an Bord des Analysators bei 15-22°C analysiert. Die Daten wurden auf einem Koagulationsanalysator Amelung AMAX CS-190 unter Benutzung eines PT-Reagenz mit einem ISI-Wert von 2,0 (Sigma Thromboplastin-XS) und eines APTT-Reagenz gesammelt, das gegen Heparin und Lupus-Antikoagulans (Sigma APTT-FSL) mäßig empfindlich ist. Es wurden mechanische und optische Bestimmungen vorgenommen.
Die Ergebnisse sind in Tabelle 2 für PT-Tests (Tabelle 2A) und APTT-Tests (Tabelle 2B) angegeben. Die in Tabelle 2 angegebenen Werte zeigen, dass erhöhte Gehalte an Rinderplasma die PT erhöhten und die APTT herabsetzten. Während Rinderplasma die APTT-Stabilität anscheinend schützt und bei Mengen von 11 Volumenprozent oder weniger geringen Einfluss auf die PT-Stabilität hat, setzt Rinderplasma bei Gehalten von 13 Volumenprozent die PT-Stabilität anscheinend herab.
Beispiel 3: Herstellung von Koagulationskontrollen der Stufe I
Zur Herstellung von Koagulationskontrollen der Stufe I, die sich zur Nachahmung von normalem Plasma eignen, wurden vier Kontrollzusammensetzungen der Stufe I, die als Vorversuche Nr. 1, 2, 3 und 4 bezeichnet wurden, hergestellt und wie folgt ausgewertet.
Heparinisierte normale Humanplasmalösung und heparinisierte normale Rinderplasmalösung mit jeweils 0,05 U/ml Heparin und 50 mM HEPES wurden wie in Beispiel 1 beschrieben aus normalen Plasmen hergestellt mit der Ausnahme, dass das verwendete Heparin ein aus Rinderlunge stammendes Natriumsalz des Heparins war (Sigma Chemical, St. Louis, MO, Cat.-Nr. H4898).
Ein heparinisiertes aktiviertes Plasma wurde aus einem Teil der oben beschriebenen heparinisierten normalen Humanplasmalösung dadurch hergestellt, dass man die heparinisierte Humanplasmalösung bei einer Konzentration von 5 g/l Plasma etwa 15-18 Stunden bei einer Temperatur von etwa 2-8°C mit Glaswolle in Berührung brachte. Die Glaswolle wurde anschließend durch Filtrieren aus der Lösung entfernt.
Den heparinisierten Humanplasma-, Rinderplasma- und aktivierten Plasmalösungen wurde bis 1 Gew.-% Glycin zugesetzt, und die Plasmalösungen wurden dann in verschiedenen relativen Mengen als Mini-Vorversuche von 1 ml vereinigt, wie in Tabelle 3A summarisch angegeben ist.
Jede der Kontrollzusammensetzungen wurde anschließend so wie hergestellt ohne Gefriertrocknung und Wiederherstellung durch Prothrombinzeit(PT)-Test und aktiviertem partiellem Thromboplastinzeit(APTT)-Test ausgewertet. Die Daten wurden auf einem Koagulationsanalysator Amelung AMAX CS-190 unter Benutzung eines PT-Reagenz mit einem ISI-Wert von 2,0 (Sigma ThromboMAX^®) und eines APTT-Reagenz gesammelt, das gegen Heparin und Lupus-Antikoagulans (Sigma APTT-FSL) mäßig empfindlich ist. Es wurde eine mechanische und eine optische Bestimmung vorgenommen. Die Ergebnisse sind in Tabelle 3A für die PT-Tests und APTT-Tests angegeben.
Vorversuch Nr. 3 mit etwa 96 Volumenprozent normalem Humanplasma, etwa 3 Volumenprozent mit Glaswolle aktiviertem Plasma und etwa 1 Volumenprozent Rinderplasma lag innerhalb der Vorversuchszielwerte für mechanische PT (11,3-12,8 Sekunden) und mechanische APTT (21-30 Sekunden). Eine Koagulationskontrolle mit der gleichen Zusammensetzung wie Vorversuch Nr. 3 wurde anschließend in einem Prozess im Produktionsmaßstab (20 Liter) unverpackt hergestellt, wobei bis 1 Gew.-% Glycin den Massengemischen zugesetzt wurde. Die Kontrollzusammensetzung der Stufe I im Produktionsmaßstab wurde wie hergestellt („Hauptmasse") und nach Gefriertrocknung und Wiederherstellung („Fertiggestellt") bewertet, wobei die Datensammlung wie oben beschrieben, jedoch nur durch mechanische Prüfung erfolgte. Die in Tabelle 3B aufgeführten Ergebnisse zeigen, dass die Kontrollzusammensetzung des Vorversuchs der Stufe I ohne Stabilitätsverlust auf wirtschaftliche Mengen übertragbar war. Die Kontrollen von Stufe I im Produktionsmaßstab waren außerdem für mechanische PT (11,2-12,8 Sekunden) und mechanische APTT (20-32 Sekunden) innerhalb der Zielwerte der Hauptmasse. Es wurden weitere Produktionsläufe mit Volumina bis zu 40 Litern mit ähnlichen Ergebnissen durchgeführt (Daten nicht angegeben).
Tabelle 3B: Kontrollzusammensetzung der Stufe I im Produktionsmaßstab (PT- und APTT-Daten)
Beispiel 4: Herstellung von Koagulationskontrollen der Stufe II
Zur Herstellung von Koagulationskontrollen der Stufe II, die zur Nachbildung des Plasmas von Patienten unter einer milden Antikoagulationstherapie geeignet sind, wurden neun Kontrollzusammensetzungen der Stufe II, die als Vorversuche Nr. 1-9 bezeichnet sind, hergestellt und wie folgt ausgewertet.
Heparinisierte normale Humanplasmalösung, heparinisierte normale Rinderplasmalösung und heparinisierte Humanplasmalösung mit Faktormangel, die jeweils 0,05 U/ml Heparin und 50 mM HEPES enthalten, wurden wie in Beispiel 3 beschrieben hergestellt.
Die heparinisierte normale Humanplasma-, normale Rinderplasma- und Faktormangel-Humanplasmalösung wurden dann in verschiedenen relativen Mengen als Mini-Vorversuche von 1 ml vereinigt, wie in Tabelle 4A summarisch angegeben ist.
Alle Kontrollzusammensetzungen wurden dann wie hergestellt ohne Gefriertrocknung und Wiederherstellung unter Benutzung des Prothrombinzeit(PT)-Tests und der aktivierten partiellen Thromboplastinzeit(APTT)-Tests bewertet. Die Daten wurden auf einem Koagulationsanalysator Amelung AMAX CS-190 unter Benutzung eines PT-Reagenz mit einem ISI-Wert von 2,0 (Sigma ThromboMAX^®) und eines APTT-Reagenz gesammelt, das gegen Heparin und Lupus-Antikoagulans (Sigma APTT-FSL) mäßig empfindlich ist. Es wurden nur mechanische Bestimmungen durchgeführt. Die Ergebnisse sind in Tabelle 4A für die PT-Tests und APTT-Tests angegeben.
Vorversuch Nr. 8, der etwa 77 Volumenprozent Humanplasma mit Faktormangel, 19 Volumenprozent normales Humanplasma und etwa 4 Volumenprozent Rinderplasma enthielt, lag innerhalb der Vorversuchszielwerte für mechanische PT (18-21 Sekunden) und mechanische APTT (51-55 Sekunden). Eine Koagulationskontrolle mit derselben Zusammensetzung wie Vorversuch Nr. 8, jedoch mit Zusatz von 1 Gew.-% Glycin, wurde anschließend in einem Verfahren im Produktionsmaßstab (20 Liter) unverpackt hergestellt. Die Kontrollzusammensetzung im Produktionsmaßstab der Stufe II wurde wie hergestellt („Hauptmasse") und nach Gefriertrocknung und Wiederherstellung („Fertiggestellt") mit der wie oben beschriebenen Datensammlung bewertet. Die in Tabelle 4B gezeigten Ergebnisse demonstrieren, dass die Kontrollvorversuchszusammensetzung der Stufe II ohne Verlust an Stabilität auf kommerzielle Mengen übertragbar war. Außerdem lagen die Kontrollen der Stufe II im Produktionsmaßstab innerhalb der Zielwerte der Hauptmasse für mechanische PT (17-22 Sekunden) und mechanische APTT (50-57 Sekunden). Zusätzliche Produktionsläufe mit bis zu 40 Litern wurden ebenfalls mit ähnlichen Ergebnissen durchgeführt (Daten nicht gezeigt).
Tabelle 4A: Vorversuchskontrollzusammensetzungen der Stufe II (PT- und APTT-Daten)
Tabelle 4B: Kontrollzusammensetzung der Stufe II im Produktionsmaßstab (PT- und APTT-Daten)
Beispiel 5: Herstellung von Roagulationskontrollen der Stufe III
Zur Herstellung von Koagulationskontrollen der Stufe III, die zur Nachbildung des Plasmas von Patienten unter einer starken Antikoagulationstherapie geeignet sind, wurden elf Kontrollzusammensetzungen der Stufe III, die als Versuche Nr. 1-11 bezeichnet sind, hergestellt und wie folgt ausgewertet.
Heparinisierte normale Humanplasmalösung, heparinisierte normale Rinderplasmalösung und heparinisierte Humanplasmalösung mit Faktormangel, die jeweils 0,05 U/ml Heparin und 50 mM HEPES enthalten, wurden wie in Beispiel 3 beschrieben hergestellt.
Die heparinisierte normale Humanplasma-, normale Rinderplasma- und Faktormangel-Humanplasmalösung wurden dann in verschiedenen relativen Mengen als Minivorversuche von 1 ml vereinigt, wie in Tabelle 5A summarisch angegeben ist.
Alle Kontrollzusammensetzungen wurden dann wie hergestellt ohne Gefriertrocknung und Wiederherstellung unter Benutzung des Prothrombinzeit(PT)-Tests und der aktivierten partiellen Thromboplastinzeit(APTT)-Tests bewertet. Die Daten wurden auf einem Koagulationsanalysator Amelung AMAX CS-190 unter Benutzung eines PT-Reagenz mit einem ISI-Wert von 2,0 (Sigma ThromboMAX^®) und eines APTT-Reagenz gesammelt, das gegen Heparin und Lupus-Antikoagulans (Sigma APTT-FSL) mäßig empfindlich ist. Es wurden nur mechanische Bestimmungen durchgeführt. Die Ergebnisse sind in Tabelle 5A für die PT-Tests und APTT-Tests angegeben.
Vorversuch Nr. 11 mit etwa 90 Volumenprozent Humanplasma mit Faktormangel, 6 Volumenprozent normalem Humanplasma und etwa 4 Volumenprozent Rinderplasma lag für mechanische PT (25-31 Sekunden) und mechanische APTT (71-79 Sekunden) innerhalb der Vorversuchszielwerte. Eine Koagulationskontrolle mit der gleichen Zusammensetzung wie Vorversuch Nr. 11, jedoch mit Zusatz von 1 Gew.-% Glycin, wurde anschließend in einem Verfahren im großtechnischen Maßstab (10 Liter) unverpackt hergestellt. Die Kontrollzusammensetzung im Produktionsmaßstab der Stufe III wurde wie hergestellt („Hauptmasse") und nach Gefriertrocknung und Wiederherstellung („Fertiggestellt") mit der wie oben beschriebenen Datensammlung bewertet. Die in Tabelle 5B gezeigten Ergebnisse demonstrieren, dass die Kontrollvorversuchszusammensetzung der Stufe III ohne Verlust an Stabilität auf kommerzielle Mengen übertragbar war. Außerdem lagen die Kontrollen der Stufe III im Produktionsmaßstab innerhalb der Zielwerte der Hauptmasse für mechanische PT (25-31 Sekunden) und mechanische APTT (71-80 Sekunden). Zusätzliche Produktionsläufe mit bis zu 40 Litern wurden ebenfalls mit ähnlichen Ergebnissen durchgeführt (Daten nicht gezeigt). Tabelle 5A: Vorversuchskontrollzusammensetzungen der Stufe III (PT- und APTT-Daten)
Tabelle 5B: Kontrollzusammensetzung der Stufe III im Produktionsmaßstab (PT- und APTT-Daten)
Beispiel 6: Stalailitätsstudien der Koagulations- Kontrollen der Stufe I, II und III im Produktionsmaßstab
Die Koagulationskontrollen der Stufe I, Stufe II und Stufe III, die wie in den Beispielen 3, 4 bzw. 5 beschrieben in Läufen im Produktionsmaßstab hergestellt wurden, wurden nach wiederhergestellter Stabilität bewertet.
Alle Kontrollzusammensetzungen wurden unter Benutzung von Tests der Prothrombinzeit(PT) und der aktivierten partiellen Thromboplastinzeit(APTT) bewertet. Die Tests wurden durchgeführt an Kontrollen unmittelbar nach Wiederherstellung mit Wasser auf das gleiche Volumen wie dem, mit dem die Ampullen vor der Gefriertrocknung gefüllt wurden, und auch zu Zeitpunkten 8 Stunden, 24 Stunden, 48 Stunden nach Wiederherstellung. Die wiederhergestellten Lösungen wurden bei 2-8°C aufbewahrt. Daten wurden auf einem Koagulationsanalysator Amelung AMAX CS-190 unter Benutzung eines PT-Reagenz mit einem ISI-Wert von 2,0 (Sigma ThromboMAX^®) und eines APTT-Reagenz gesammelt, das gegen Heparin und Lupus-Antikoagulans (Sigma APTT-FSL) mäßig empfindlich war. Es wurden optische und mechanische Bestimmungen durchgeführt.
Die Ergebnisse sind in Tabelle 6A für die PT-Tests und in Tabelle 6B für APTT-Tests angegeben.
Die Daten in diesen Tabellen sind auch in den 1A und 1B für optische PT bzw. mechanische PT und in den 2A und 2B für optische APTT bzw. mechanische APTT angegeben. Diese Daten zeigen, dass die nach den beschriebenen Protokollen hergestellten und hier beanspruchten Kontrollen der Stufe I, II und III eine überlegene Stabilität selbst bis zu 48 Stunden nach Wiederherstellung haben.
Im Lichte der detaillierten Beschreibung der Erfindung und der oben vorgelegten Beispiele ist anzuerkennen, dass die verschiedenen Ziele der Erfindung erreicht werden.
Die hier vorgelegten Erläuterungen und Darstellungen sollen andere Fachleute mit der Erfindung, ihren Grundlagen und ihrer praktischen Anwendung vertraut machen. Diese Fachleute können die Erfindung ihren zahlreichen Ausführungsformen so anpassen und anwenden, wie sie für die Erfordernisse eines besonderen Einsatzes am besten geeignet ist. Die angegebenen spezifischen Ausführungsformen der vorliegenden Erfindung sollen demgemäss die Erfindung nicht erschöpfend behandeln oder einschränken.

Claims

Koagulationskontrollzusammensetzung zur Bestimmung der Prothrombinzeit (PT) oder aktivierten partiellen Thromboplastinzeit (APTT), wobei die Koagulationskontrollzusammensetzung Nichtprimat-Säugerplasma und Primat-Plasma in dem Verhältnis von Nichtprimat-Säugerplasma zu Primat-Plasma in dem Bereich von 1:200 bis 1:5, und ein Antikoagulans enthält.
Koagulationskontrollzusammensetzung des Anspruchs 1, in der das Primat-Plasma anormales Primat-Plasma aufweist.
Koagulationskontrollzusammensetzung des Anspruchs 1 oder 2, in der das Plasma anormales Nichtprimat-Säugerplasma aufweist.
Koagulationskontrollzusammensetzung nach einem der Ansprüche 1 bis 3, in der das Antikoagulans Aktivität für die Verstärkung der Aktivität von Antithrombin III (ATIII) oder von Heparin-Cofaktor II (HCII) gegen (i) Thrombin oder (ii) einen Blutgerinnungsfaktor hat, der aus der aus den Faktoren IXa, Xa und XIa bestehenden Gruppe ausgewählt ist.
Koagulationskontrollzusammensetzung nach Anspruch 2 oder 3, in der das anormale Primat- oder Nichtprimat-Säugerplasma ein aktiviertes Plasma, Vollplasma, ein Plasmaderivat oder ein Faktormangelplasma mit Mangel an einem oder mehreren Blutgerinnungsfaktoren ist, die aus der aus den Faktoren II, VII, IX und X bestehenden Gruppe ausgewählt sind.
Koagulationskontrollzusammensetzung des Anspruchs 4 oder 5, in der die Konzentration des Antikoagulans in dem Bereich von 0,01 U/ml bis 0,15 U/ml in Lösung oder von 0,1 U/g bis 1,80 U/g auf Trockengewichtsbasis liegt, wobei U Heparin-äquivalente Einheiten bedeutet.
Koagulationskontrollzusammensetzung nach einem der Ansprüche 4 bis 6, in der das Antikoagulans ein Glycosaminoglycan ist.
Koagulationskontrollzusammensetzung nach Anspruch 7, in der das Glycosaminoglycan Heparin, ein Heparinderivat oder ein Heparinanalogon ist.
Koagulationskontrollzusammensetzung nach einem der Ansprüche 1 bis 8, in der das Primat-Plasma oder das Nichtprimat-Säugerplasma ein Vollplasma, ein Plasmaderivat oder normales Plasma ist.
Koagulationskontrollzusammensetzung nach einem der Ansprüche 2, 3 oder 5, in der das anormale Plasma ein Faktormangelplasma mit Mangel an einem oder mehreren Blutgerinnungsfaktoren enthält, die aus der aus den Faktoren II, VII, IX oder X bestehenden Gruppe ausgewählt sind.
Koagulationskontrollzusammensetzung nach einem der Ansprüche 1 bis 10 mit einer Menge des Nichtprimat-Säugerplasmas in dem Bereich von 0,5 bis 12 Vol.-%.
Koagulationskontrollzusammensetzung nach einem der Ansprüche 1 bis 11, in der Primat-Plasma menschliches Plasma enthält.
Koagulationskontrollzusammensetzung nach einem der Ansprüche 1 bis 12, in der das Nichtprimat-Säugerplasma Rinderplasma enthält.
Verfahren zur Herstellung einer Koagulationskontrollzusammensetzung für die Bestimmung von Untersuchungen der Prothrombinzeit (PT) und der aktivierten partiellen Thromboplastinzeit (APTT), bei dem man Nichtprimat-Säugerplasma, Primat-Plasma und ein Antikoagulans unter Bildung einer Kontroll-Lösung vereinigt, die ein Verhältnis von Nichtprimat-Säugerplasma zu Primat-Plasma in dem Bereich von 1:200 bis 1:5 aufweist.
Verfahren des Anspruchs 14, bei dem das Antikoagulans eine Akti vität für die Verstärkung der Aktivität von Antithrombin III (APIII) oder von Heparin-Cofaktor II (HCII) gegen Thrombin oder gegen einen Blutgerinnungsfaktor hat, der aus der aus den Faktoren IXa, Xa und XIa bestehenden Gruppe ausgewählt ist.
Verfahren für die Qualitätskontrolle eines Prothrombinzeit(PT)- oder eines aktivierten partiellen Thromboplastinzeit(APTT)-Prüfsystems, bei dem man ein PT-Reagens oder ein APTT-Reagens mit einer Koagulationskontrollzusammensetzung unter Bildung einer Prüflösung vereinigt, wobei die Koagulationskontrollzusammensetzung ein Nichtprimat-Säugerplasma und Primar-Plasma in einem Verhältnis von 1:200 bis 1:5 und ein Antikoagulans mit Aktivität zur Verstärkung der Aktivität von Antithrombin III (ATIII) oder von Heparin-Cofaktor II (HCII) gegen Thrombin oder gegen einen Blutgerinnungsfaktor enthält, der aus der aus den Faktoren IXa, Xa und XIa bestehenden Gruppe ausgewählt ist, in der Prüflösung die Gerinnungsbildung nachweist, und die Zeit bestimmt, die von der Bildung der Prüflösung bis zum Nachweis der Gerinnungsbildung in der Prüflösung vergangen ist.
Verfahren nach einem der Ansprüche 14 bis 16, bei dem die Kontroll-Lösung eine Menge Nichtprimat-Säugerplasma in dem Bereich von 0,5 bis 12 Vol.-% enthält.
Verfahren nach einem der Ansprüche 15 bis 17, bei dem die Konzentration des Antikoagulans in der Koagulationskontroll-Lösung in dem Bereich von 0,01 U/ml bis 0,15 U/ml liegt, wobei U Heparin-äquivalente Einheiten bedeutet.
Verfahren nach einem der Ansprüche 14 bis 18, bei dem das Primat-Plasma ein anormales Plasma enthält.
Verfahren nach einem der Ansprüche 14 bis 19, bei dem das Nichtprimat-Säugerplasma ein anormales Plasma enthält.
Verfahren nach einem der Ansprüche 14 bis 20, bei dem das Primat-Plasma menschliches Plasma enthält.
Verfahren nach einem der Ansprüche 14 bis 21, bei dem das Nichtprimat-Säugerplasma Rinderplasma enthält.
Verfahren nach Anspruch 22, bei dem das Nichtprimat-Säugerplasma ein gereinigtes Rinderplasma ist, das unter Benutzung der folgenden Stufen hergestellt wurde: Herstellung oder Beschaffung von gefrorenem Rinderplasma, Auftauen des gefrorenen Rinderplasmas bei einer Temperatur von etwa 2°C bis etwa 8°C, wodurch in dem aufgetauten Rinderplasma Teilchen gebildet werden, und Entfernung der Teilchen aus dem aufgetauten Rinderplasma, um ein gereinigtes Rinderplasma zu bilden.
Verfahren nach Anspruch 23, ferner mit Wiedergefrierung des gereinigten Rinderplasmas, Wiederauftauen des wiedergefrorenen Plasmas bei einer Temperatur in dem Bereich von etwa 2°C bis etwa 8°C, wodurch in dem wieder aufgetauten Rinderplasma zusätzliche Teilchen gebildet werden, und Entfernung der zusätzlichen Teilchen aus dem wieder aufgetauten Rinderplasma.