DE69919995T2

DE69919995T2 - Verwendung von cysteinprotease inhibitoren zur herstellung eines arzneimittels zur vorgbeugung und behandlung von gehirngewebezerrütung infolge hypertensive enzephalopathie oder encephalothlipsis

Info

Publication number: DE69919995T2
Application number: DE69919995T
Authority: DE
Inventors: Mitsuyoshi Nishinomiya-shi Azuma; Yukuo Kobe-shi YOSHIDA; Yuji Kobe-shi SAKAMOTO; Jun Kobe-shi Inoue
Original assignee: Senju Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Senju Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1998-03-20
Filing date: 1999-03-17
Publication date: 2005-09-22
Anticipated expiration: 2019-03-18
Also published as: WO1999048522A1; ATE275420T1; ES2224613T3; DE69919995D1; MY133063A; NO20004679L; EP1064021A1; CN1301173A; KR20010041967A; PL342970A1; CA2324566A1; BR9908948A; JP2002507579A; ID27507A; NO20004679D0; HUP0101428A2; US6342531B1; AU2852699A; MXPA00009188A; EP1064021B1

Description

Technisches Gebiet
Die vorliegende Erfindung bezieht sich auf einen prophylaktischen und therapeutischen Wirkstoff für eine Hirngewebeschädigung.
Stand der Technik
Das Gehirn liefert vielfältige Funktionen einschließlich der Regelung des autonomen Nervensystems, der Bewegungssteuerung, des Verständnisses der Sinne und geistiger Aktivitäten höherer Ordnung wie etwa das Denken. Wenn der Hirnblutstrom beeinträchtigt wird, endet die Glucose- und Sauerstoffaufnahme, die für die Hirnfunktion wesentlich sind und das Gehirn ist nicht länger in der Lage, seine Homöostase aufrecht zu erhalten, mit dem Ergebnis, daß das Arbeiten des Gehirns ernstlich behindert ist.
Eine Hirngewebeschädigung folgt aus einem ungenügenden Hirnblutstrom aufgrund verschiedener Faktoren oder als Ergebnis einer komplizierten Wechselwirkung systemischer Faktoren wie etwa Kardiopathie. Weiterhin wird das Hirngewebe nicht nur durch eine Enzephalothlipsie nach Hirntrauma, Hirnödem, Hirntumor usw., sondern auch durch Abnahmen des Hirnblutstroms aufgrund systemischer Ereignisse, die einen merklichen Abfall des Blutdrucks umfassen, wie etwa eine massive Blutung, Myokardinfarkt, Verabreichung eines Blutdrucksenkers und Arrhythmie beeinträchtigt. Die durch eine derartige Beeinträchtigung des Hirngewebes verursachte Krankheit schließt zerebrale Vasospasmen, Hirnthrombose, Hirninfarkt, Hirnembolie, intrazerebrale Blutung, subarachnoide Blutung, Hochdruckenzephalopathie, transitorische ischämische Attacke, Multiinfarktdemenz, Hirnarteriosklerose und Chorea Huntington ein, ist aber nicht darauf beschränkt.
Die gegenwärtige Pharmakotherapie einer Hirngewebeschädigung schließt die Verabreichung zerebraler Vasodilatatoren wie etwa Cinnarizin, Cyclandelat und Pentoxyfyllin, zerebraler Stoffwechselaktivatoren wie etwa Meclofenoxathydrochlorid, Liponsäure und GABA, Antikoagulanzien wie etwa Heparinnatrium, Thrombolytika wie etwa Urokinase und Blutplättchenaggregationshemmer wie etwa Aspirin und Dipyridamol ein. Keiner dieser Wirkstoffe ist jedoch ausreichend wirksam und somit bleiben die Probleme ungelöst.
Wie kürzlich berichtet schützt Leupeptin, das eine Calpaininhibitoraktivität aufweist, Neuronen gegen eine Schädigung durch Hirnischämie [Lee K. S., Frank S., Vanderklish, P., Arai A., Lynch G., Proc. Natl. Acad. Sci., 88, 7233–7237 (1991), Rami A., Krieglstein J., Brain Res., 609, 67–70 (1993), WO92/11850). Bei diesen mitgeteilten Untersuchungen wird der Wirkstoff jedoch in Anbetracht der Unfähigkeit von Leupeptin, die Blut-Hirn-Schranke zu überqueren, direkt in die Hirnventrikel des Tiers verabfolgt. Das heißt, diese Technik kann nicht realistisch beim Menschen angewendet werden. In der WO92/11850 wird offenbart, daß von gewissen, intraperitoneal verabreichten Verbindungen wie etwa Calpaininhibitor I gefunden wurde, daß sie Neuronen vor exzitotoxischen Faktoren schützen. Calpaininhibitor I wird jedoch als zytotoxisch berichtet [Inoue S., Sharma R. C., Schimke R. T., Simoni R. D.,). Biological Chem., 268 (8), 5894–5898 (1993)) und kann beim Menschen nicht sicher verwendet werden. Kürzlich ist berichtet worden, daß der intravenös verabfolgte Calpaininhibitor Cbz-Val-Phe-H bei Ratten eine Zytopathie aufgrund von Hirnischämie hemmte [Hong S. C., Goto Y., Lanzino G., Soleau S., Kassell N. F., Lee K. S., Stroke, 25 (3), 663-669 (1994)], seine Wirkung aber nicht ausreichend stark ist und der Wirkstoff daher noch nicht klinisch angewendet worden ist.
Die vorliegende Erfindung hat das Bereitstellen der Verwendung eines prophylaktischen und therapeutischen Wirkstoffs für eine Hirngewebeschädigung zum Gegenstand, der die vorstehend angeführten Nachteile überwindet.
Offenbarung der Erfindung
Die Erfinder der vorliegenden Erfindung bemühten sich, einen prophylaktischen und therapeutischen Wirkstoff für eine Hirngewebeschädigung zu entwickeln, der die Blut-Hirn-Schranke leicht durchqueren sicher angewandt werden kann, und sie fanden, daß eine Verbindung der folgenden Formel (I)
worin
R¹ eine Alkylgruppe mit 1–4 Kohlenstoffatomen oder eine Arylgruppe mit 6–10 Kohlenstoffatomen darstellt, die gegebenenfalls substituiert ist; R² und R³ gleich oder verschieden sein können und jeweils Wasserstoff oder eine Alkylgruppe mit 1–4 Kohlenstoffatomen darstellen oder R² und R³ gemeinsam einen Ring mit 3–7 Kohlenstoffatomen bilden können, und R⁴ eine Niederalkylgruppe darstellt, die gegebenenfalls durch Aryl, Cycloalkyl oder einen aromatischen, heterocyclischen Rest substituiert ist und ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon eine bemerkenswerte prophylaktische oder therapeutische Wirksamkeit gegen eine Hirngewebeschädigung zeigen. Die vorliegende Erfindung ist auf der Grundlage des vorstehenden Befundes entwickelt worden.
Im Zusammenhang mit der vorliegenden Erfindung schließt eine Hirngewebeschädigung eine mit Bluthochdruck-Enzephalopathie verbundene Hirngewebeschädigung und auch eine sekundäre Hirngewebeschädigung aufgrund von durch Hirntrauma, Hirnödem und Hirntumor verursachter Enzephalothlipsie ein.
Kurze Beschreibung der Zeichnungen
1 ist eine diagrammartige Darstellung der Wirkung auf die Zytopathie in der Hippocampus-CA1-Region von Rennmäusen. Die Ordinate stellt die Anzahl normaler Nervenzellen in der Hippocampus-CA1-Region dar. In dem Diagramm bezeichnet a) eine signifikante Abweichung (p < 0,01) von der normalen Gruppe im Student-t-Test; b) bezeichnet eine signifikante Abweichung (p < 0,05) von der Kontrollgruppe im Student-t-Test.
2 ist eine diagrammartige Darstellung der Wirkung auf die Apoptose in der Hippocampus-CA1-Region von Rennmäusen. Die Ordinate stellt die Anzahl apoptotischer Nervenzellen in der Hippocampus-CA1-Region dar. In dem Diagramm bezeichnet a) eine signifikante Abweichung (p < 0,01) von der normalen Gruppe im Student-t-Test; b) bezeichnet eine signifikante Abweichung (p < 0,01) von der Kontrollgruppe im Student-t-Test.
Die in der vorliegenden Erfindung verwendete Verbindung der Formel (I) und ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon werden in der ungeprüften japanischen Patentveröffentlichung Nr. 43464/1997 (EP-0 771 565) offenbart und können typischerweise durch die darin beschriebenen Verfahren hergestellt werden.
Wenn die Aminosäurestruktureinheiten bezüglich Formel (I) als optische Isomere vorliegen, sind sie solange nicht anders angegeben L-Isomere.
Weiter schließt die bezüglich Formel (I) für R¹ angeführte gerade oder verzweigte C₁-C₄-Alkylgruppe Methyl, Ethyl, Propyl, Isopropyl, Butyl, Isobutyl, sec-Butyl, tert-Butyl und dergleichen ein. Von diesen ist Methyl bevorzugt.
Die C₆-C₁₀-Arylgruppe für R¹ schließt Phenyl, Naphthyl, Indenyl, Azulenyl und so weiter ein. Phenyl und Naphthyl sind bevorzugt.
Die Substituentengruppe, die an der Arylgruppe vorhanden sein kann, schließt zum Beispiel Halogen (z. B. Fluor, Chlor usw.), gerades oder verzweigtes C₁-C₅-Alkyl (z. B. Methyl, Ethyl, Propyl, Isopropyl, Butyl, Isobutyl, sec-Butyl, tert-Butyl, Pentyl, Isopentyl, Neopentyl, tert-Pentyl und dergleichen), Trifluormethyl, gerades oder verzweigtes C₁-C₅-Alkoxy (z. B. Methoxy, Ethoxy, Propoxy, Isopropoxy, Butoxy, Isobutoxy, sec-Butoxy, tert-Butoxy, Pentoxy, Isopentoxy, Neopentoxy, tert-Pentoxy und dergleichen), Hydroxy, C₂-C_S-Acyloxy (z. B. Acetoxy, Propiony– loxy, Butyryloxy, Isobutyryloxy, Valeryloxy und dergleichen), Carboxy und C₂-C₅-Acyl (z. B. Acetyl, Propionyl, Butyryl, Isobutyryl, Valeryl, Isovaleryl, Pivaloyl und dergleichen) ein. Bevorzugt sind Halogen und C₁-C_S-Alkyl. Bevorzugter sind Fluor, Chlor und Methyl.
Bevorzugte Beispiele der gegebenenfalls substituierten C₆-C₁₀-Arylgruppe für R¹ sind 4-Fluorphenyl, 4-Chlorphenyl, p-Tolyl und 2-Naphthyl.
Die für R² und R³ angeführte gerade oder verzweigte C₁-C₄-Alkylgruppe schließt Methyl, Ethyl, Propyl, Isopropyl, Butyl, Isobutyl, sec-Butyl, tert-Butyl und dergleichen ein. Bevorzugt sind Propyl, Isopropyl und tert-Butyl. Isopropyl ist bevorzugter.
Bezüglich R² und R³ ist eines davon vorzugsweise Wasserstoff und ist das andere Propyl, Isopropyl, Isobutyl oder tert-Butyl. Bevorzugter ist R² Propyl, Isopropyl, Isobutyl oder tert-Butyl und ist R³ Wasserstoff. Noch bevorzugter ist R²Isopropyl und ist R³ Wasserstoff.
Der C₃-C₇-Ring, der durch R² und R³ zusammen gebildet werden kann, schließt Cyclopropyliden, Cyclobutyliden, Cyclopentyliden, Cyclohexyliden, Cycloheptyliden und so weiter ein. Cyclopentyliden und Cyclohexyliden sind besonders bevorzugt.
Die für R⁴ angeführte Niederalkylgruppe schließt gerade oder verzweigte Gruppen mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen wie etwa Methyl, Ethyl, Propyl, Isopropyl, Butyl, Isobutyl, sec-Butyl, tert-Butyl, Pentyl, Isopentyl, Neopentyl, tert-Pentyl, Hexyl, 4-Methylpentyl, 1,1-Dimethylbutyl, 2,2-Dimethylbutyl, 3,3-Dimethylbutyl, 2-Ethylbutyl und dergleichen ein. Bevorzugt sind Methyl und Isobutyl. Die vorstehend angeführte Niederalkylgruppe kann durch die folgende Arylgruppe, Cycloalkylgruppe oder aromatischen, heterocyclischen Rest substituiert sein.
Die Arylgruppe schließt Phenyl, 1-Naphthyl, 2-Naphthyl und so weiter ein. Besonders bevorzugt ist Phenyl.
Die Cycloalkylgruppe schließt bevorzugt C₃-C₆-Cycloalkyl, zum Beispiel Cyclopropyl, Cyclobutyl, Cyclopentyl, Cyclohexyl und so weiter ein. Besonders bevorzugt ist Cyclohexyl.
Der aromatische heterocyclische Rest schließt heteromonocyclische Reste, die als Ringelement jeweils wenigstens ein Heteroatom enthalten, das aus der aus Sauerstoff, Stickstoff und Schwefel bestehenden Gruppe ausgewählt ist, und die entsprechenden kondensierten heterocyclischen Reste ein. Der heteromonocyclische Rest schließt Pyrrolyl, Furyl, Thienyl, Oxazolyl, Thiazolyl, Imidazolyl, Pyrazolyl, Pyridyl und dergleichen ein, ist aber nicht darauf beschränkt. Der kondensierte heterocyclische Rest schließt Indolyl, Chinolyl, Benzothienyl, Benzofuryl, Indazo– lyl, Chinazolinyl, Phthalazinyl, Chinoxalinyl und dergleichen ein, ist aber nicht darauf beschränkt. Besonders bevorzugt ist Indolyl.
Bevorzugte Beispiele der durch R⁴ ausgedrückten Niederalkylgruppe, die durch Aryl, Cycloalkyl oder einen aromatischen heterocyclischen Rest substituiert sein kann, sind Isobutyl, Benzyl, Cyclohexylmethyl und Indol-3-ylmethyl.
Repräsentative Verbindungen der Formel (I) sind
N-(2-Naphthalinsulfonyl)-L-valyl-L-leucinal,
N-(4-Fluorphenylsulfonyl)-L-valyl-L-leucinal,
N-(4-Chlorphenylsulfonyl)-L-valyl-L-leucinal,
N-(4-Methylphenylsulfonyl)-L-valyl-L-leucinal,
N-(4-Fluorphenylsulfonyl)-L-valyl-L-phenylalaninal,
N-(2-Naphthalinsulfonyl)-L-valyl-L-phenylalaninal,
N-(4-Chlorphenylsulfonyl)-L-valyl-L-phenylalaninal,
N-(4-Methylphenylsulfonyl)-L-valyl-L-phenylalaninal,
N-(4-Chlorphenylsulfonyl)-L-valyl-L-tryptophanal,
N-(4-Fluorphenylsulfonyl)-L-valyl-L-cyclohexylalaninal,
N-(2-Naphthalinsulfonyl)-L-valyl-L-cyclohexylalaninal,
N-(4-Chlorphenylsulfonyl)-L-valyl-L-cyclohexylalaninal und pharmazeutisch annehmbare Salze davon.
Besonders bevorzugt sind N-(4-Fluorphenylsulfonyl)-L-valyl-L-leucinal und ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.
Das pharmazeutisch annehmbare Salz der Verbindung der Formel (I) schließt Salze mit anorganischen Basen, zum Beispiel Salze mit Alkalimetallsalzen wie etwa Natrium, Kalium usw., Salze mit Erdalkalimetallen wie etwa Calcium, Magnesium usw., Aluminiumsalz, Ammoniumsalz usw., Salze mit organischen Basen wie etwa Trimethylamin, Pyridin, Picolin, Ethanolamin, Diethanolamin, Triethanolamin, Dicyclohexylamin, N,N-Dibenzylethylendiamin usw., Salze mit anorganischen Säuren wie etwa Salzsäure, Bromwasserstoffsäure, Salpetersäure, Schwefelsäure, Phosphorsäure usw., Salze mit organischen Säuren wie etwa Ameisensäure, Essigsäure, Trifluoressigsäure, Fumarsäure, Oxalsäure, Weinsäure, Maleinsäure, Citronensäure, Bernsteinsäure, Äpfelsäure, Methansulfonsäure, Benzolsulfonsäure, p-Toluolsulfonsäure usw. und Salze mit Aminosäuren wie etwa Arginin, Lysin, Ornithin, Asparaginsäure, Glutaminsäure und so weiter ein.
Der bei der vorliegenden Erfindung verwendete prophylaktische und therapeuti– sche Wirkstoff kann gegebenenfalls in jeder in der Technik bekannten Dosierungsform bereitgestellt werden, die durch eine bekannte pharmazeutische Technologie hergestellt werden kann, die zum Beispiel das Mischen oder Lösen der aktiven Verbindung mit einem pharmazeutisch annehmbaren Träger oder Konstituens umfaßt. Von derartigen Dosierungsformen schließt die orale Dosierungsform zur Verwendung bei Menschen Pulver, Granulate, Tabletten, Kapseln, Sirupe und andere flüssige Zubereitungen ein. Pulver, Granulate, Tabletten und dergleichen können unter Verwenden wahlfreier, pharmazeutisch geeigneter Träger hergestellt werden, die für feste Zubereitungen geeignet sind, wie etwa Arzneimittelträger (z. B. Stärke, Glucose, Fructose, Sucrose, Lactose usw.), Gleitmittel (z. B. Magnesiumstearat, Calciumstearat usw.), Zerfallhilfsmittel (z. B. Stärke, kristalline Cellulose usw.), Bindemittel (z. B. Stärke, Gummiarabicum usw.) und so weiter. Eine derartige feste Zubereitung kann gegebenenfalls mit einem Beschichtungsmittel (z. B. Gelatine, Sucrose usw.) oder einer magensaftresistenten Beschichtung (z. B. Hydroxypropylmethylcellulosephthalat, Methacrylcopolymere, Schellack usw.) beschichtet werden, so daß die aktive Verbindung spezifisch im Darm freigesetzt werden kann. Zur Herstellung von Sirupen und anderen Flüssigkeiten können verschiedene Additive wie etwa Stabilisatoren (z. B. Natriumedetat usw.), Suspendiermittel (z. B. Gummiarabicum, Carmellose usw.), Korrigentien (z. B. Einfachsirup, Glucose usw.), Duftstoffe usw, geeignet zugefügt werden. Die Dosierungsform für die nicht-orale, systemische Verabreichung schließt Injektionen, Suppositorien usw. ein. Injektionen können durch Verwenden von Lösungsmitteln (z. B. Wasser zur Injektion usw.), Stabilisatoren (z. B. Natriumedetat usw.), Isotoniemitteln (z. B. Natriumchlorid, Glycerin, Mannit usw.), pH-Kontrollmitteln (z. B. Salzsäure, Citronensäure, Natriumhydroxid usw.), Suspendiermitteln (z. B. Methylcellulose, Natriumcarboxymethylcellulose usw.) und anderen geeigneten Additiven hergestellt werden. Zur Herstellung eines Suppositoriums kann eine Suppositoriumsgrundlage (z. B. Kakaobutter, Macrogol usw.) und dergleichen geeignet verwendet werden.
Der in der vorliegenden Erfindung verwendete prophylaktische und therapeutische Wirkstoff ist zur Prophylaxe und Behandlung einer Hirngewebeschädigung bei warmblütigen Tieren (z. B. Mensch, Rennmaus, Ratte, Maus, Kaninchen, Kuh, Schwein, Hund, Katze) und dergleichen brauchbar. Die mit einer Hirngewebe schädigung verbundene Krankheit schließt eine Bluthochdruck-Enzephalopathie ein, ist aber nicht darauf beschränkt.
Die Dosierung der Verbindung der Formel (I) oder eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes davon gemäß der vorliegenden Erfindung hängt von der Zielkrankheit, dem klinischen Zustand und anderen Patientenzuständen, dem Verabreichungsweg und anderen Faktoren ab. Allgemein gesagt, kann die beabsichtigte Wirkung bei einer allgemeinen Dosis von 1-1000 mg, vorzugsweise 10-500 mg zur oralen Verabreichung an einen erwachsenen Patienten oder allgemein 0,1-300 mg, vorzugsweise 1-150 mg zur parenteralen Verabreichung an einen erwachsenen Patienten ein- bis mehrmals täglich erzielt werden.
Solange es dem Gegenstand der vorliegenden Erfindung nicht widerspricht, kann der in der vorliegenden Erfindung verwendete prophylaktische und therapeutische Wirkstoff in Verbindung mit anderen aktiven Bestandteilen verabreicht werden. Die begleitenden Bestandteile, die insbesondere verwendet werden können, sind zerebrale Vasodilatatoren wie etwa Cinnarizin, Cyclandelat, Pentoxyfyllin usw., zerebrale Stoffwechselaktivatoren wie etwa Meclofenoxathydrochlorid, Liponsäure, GABA usw., Antikoagulanzien wie etwa Heparinnatrium usw., Thrombolytika wie etwa Urokinase usw., Blutplättchenaggregationshemmer wie etwa Aspirin, Dipyridamol usw., Adrenokortikoide wie etwa Hydrocortison, Dexamethason usw., hypertone Lösungen wie etwa Lösungen von Glycerin und Mannit, Blutdrucksenker wie etwa Reserpin, Hydralazinhydrochlorid usw., Antibiotika wie etwa halbsynthetische Penicilline, Cephalosporine usw. und Sedativa/Antikonvulsiva wie etwa Chlorpromazin, Diazepam, Primidon, Carbamazepin usw.
Beispiele
Die folgenden Beispiele und Versuchsbeispiele sind dazu bestimmt, die vorliegende Erfindung genauer zu veranschaulichen und sollten keinesfalls als den Erfindungsumfang definierend aufgefaßt werden. In den folgenden Beispielen und Versuchsbeispielen bedeutet Verbindung 1 N-(4-Fluorphenylsulfonyl)-L-valyl-L-leucinal. Beispiel 1 Tabletten

Verbindung 1 50 mg

Lactose 80 mg

Stärke 17 mg

Magnesiumstearat 3 mg

kristalline Cellulose 10 mg
Unter Verwenden der vorstehenden Materialbestandteile je Tablette wurden durch ein eingeführtes pharmazeutisches Verfahren Tabletten hergestellt. Wenn nötig können die Tabletten mit einer herkömmlichen magensaftresistenten Beschichtung (z. B. Hydroxypropylmethylcellulosephthalat), einer Zuckerbeschichtung oder einem Film (z. B. Ethylcellulose) beschichtet werden. Beispiel 2 Kapseln

Verbindung 1 75 mg

Mannit 75 mg

Stärke 17 mg

Calciumstearat 3 mg
Die vorstehenden Materialbestandteile wurden gleichförmig gemischt, durch ein eingeführtes pharmazeutisches Verfahren granuliert und in Hartkapselhüllen gefüllt. Wenn nötig kann das Granulat vor dem Einfüllen mit einer herkömmlichen magensaftresistenten Beschichtung (z. B. Hydroxypropylmethylcellulosephthalat), einer Zuckerbeschichtung oder einem Film (z. B. Ethylcellulose) beschichtet werden. Beispiel 3 Parenterale Suspension

Verbindung 1 750 mg

Natriumcarboxymethylcellulose 500 mg

Wasser zur Injektion zum Auffüllen auf 100 ml
Unter Verwenden der vorstehenden Materialkomponenten wurde eine parenterale Suspension durch ein eingeführtes, steriles, pharmazeutisches Verfahren hergestellt.
Testbeispiel 1 (zu Veranschauungszwecken, nicht Teil der Erfindung)
Wirkung auf eine ischämische Störung des Gehirns
Verfahren:
Die paarigen, gemeinsamen Halsarterien von Rennmäusen (männlich, Körpergewicht 60–80 g) wurden unter Betäubung freigelegt. Anschließend wurden die Halsarterien mit Aneurysmaklammern im wachen Zustand verschlossen, um den Blutstrom 10 Minuten anzuhalten. Die Ischämie wurde durch Überprüfen des Stillstands des Retinablutstroms mit einem Blutströmungsmeßgerät (Advance-Laserströmungsmeßgerät (ALF21N), Advance Co. Ltd.) und Überwachen der ischämischen Symptome wie etwa Anfall, Kreiseln und Ptose bestätigt. Nach dem Entfernen der Klammern wurde die Reperfusion mit dem Blutströmungsmeßgerät bestätigt. Fünf Tage nach der Reperfusion wurde das Tier mit Ether betäubt und mit Kochsalzlösung über die linke Ventrikel zum Entfernen von Blut und weiter mit 4%igem Formaldehyd zur Fixierung des Hirngewebes perfundiert. Das Gewebe wurde in Paraffin eingebettet und es wurden dünne Schnitte hergestellt und auf routinemäßige Weise mit Hämatoxylin-Eosin angefärbt. Die Nervenzellen in der Hippocampus-CA1-Region wurden unter einem Lichtmikroskop betrachtet und die in einem Bereich von 1,0 mm der Hippocampus-CA1-Region verbliebenen normalen Nervenzellen wurden gezählt. Getrennt wurde mittels des Wako-Kits „Apoptosis in situ Detection" (Wako Pure Chemical Ind., Ltd.) die Apoptose in der in Paraffin eingebetteten Hirngewebeprobe nachgewiesen und unter Verwenden des Lichtmikroskops wurden die apoptotischen Nervenzellen im Bereich von 1,0 mm der Hippocampus-CA1-Region gezählt.
Bei der normalen Gruppe wurden die gemeinsamen Halsarterien freigelegt, aber es wurde keine Ischämie eingeführt. Als Testwirkstoff wurde eine wie in Beispiel 3 hergestellte parenterale Suspension in einer Dosis von 100 mg Verbindung 1 je kg Körpergewicht 15 Minuten vor der Ischämie intraperitoneal unmittelbar nach der Reperfusion und danach einmal täglich (Gruppe der Verabfolgung der Verbindung 1) verabfolgt. Bei der Kontrollgruppe und normalen Gruppe wurde das in Beispiel 3 verwendete Konstituens ähnlich verabfolgt. Als positive Kontrolle wurde Cbz-Val-Phe-H [MDL; S. C. Hong et al., Stroke, 25 (3), 663–669 (1994)], 100 mg/kg Körpergewicht, ähnlich verabfolgt (Gruppe der Verabfolgung von MDL).
Ergebnis:
Die Ergebnisse werden in 1 und 2 dargestellt.
Die Ischämie verursachte eine bedeutende Abnahme der Zahl der normalen Nervenzellen in der Hippocampus-CA1-Region und eine bedeutende Zunahme der Zahl der apoptotischen Nervenzellen verglichen mit der normalen Gruppe. Bei der Gruppe der Verabfolgung der Verbindung 1 wurde die durch Ischämie verursachte Abnahme der Zahl normaler Nervenzellen in der Hippocampus-CA1-Region bedeutend gehemmt und die Zunahme der Zahl apoptotischer Nervenzellen wurde ebenfalls bedeutend gehemmt. Bei der Gruppe der Verabfolgung von MDL wurde eine geringe Hemmwirkung auf die Abnahme normaler Nervenzellen oder die Zunahme apoptotischer Nervenzellen in der Hippocampus-CA1-Region gefunden.
Die vorstehenden Ergebnisse zeigen, daß verglichen mit MDL, die aktive Verbindung 1 der vorliegenden Erfindung die Blut-Hirn-Schranke wirkungsvoller überwindet und zum Schutz von Hirngewebe gegen eine Schädigung brauchbar ist.
Testbeispiel 2
Toxizitätsuntersuchung
Verfahren:
Fünf Wochen alte Wister-Ratten (männlich, Körpergewicht 80–105 g) wurde eine 3,3 gew./vol.-%ige Suspension der Verbindung 1 in 0,5 gew./vol.-%iger Carboxymethylcellulose in einer Dosis von 1000 mg als Verbindung 1 je kg Körpergewicht gegeben. Die Ratten wurden auf den allgemeinen Zustand und das Verhalten unmittelbar nach dem Dosieren, 1/₄, 1/₂, 1, 2, 3 und 5 Stunden nach dem Dosieren und danach einmal täglich 14 Tage beobachtet. Das Körpergewicht wurde vor dem Dosieren und 14 Tage lang nach dem Dosieren einmal täglich aufgezeichnet. Nach dem Töten durch Ausbluten unter Etherbetäubung nach 14 Tagen wurde eine Autopsie ausgeführt und die Organe wurden oberflächlich untersucht. Die Kontrollgruppe erhielt 0,5 gew./vol.-%ige Carboxymethylcellulose.
Ergebnisse:
(1) Allgemeiner Zustand und Verhalten
Sowohl die Kontrollgruppe als auch die Gruppe der Verabfolgung der Verbindung 1 zeigte beim allgemeinen Zustand oder Verhalten keine Änderung.
(2) Körpergewicht
Zwischen der Kontrollgruppe und der Gruppe der Verabfolgung der Verbindung 1 wurde bei der Körpergewichtszunahme kein Unterschied gefunden.
(3) Autopsiebefunde
Zwischen der Kontrollgruppe und der Gruppe der Verabreichung der Verbindung 1 wurde bei den Autopsiebefunden kein Unterschied gefunden.
Industrielle Anwendbarkeit
Die Verwendung des prophylaktischen und therapeutischen Wirkstoffs gemäß der vorliegenden Erfindung ist zur Prophylaxe und Behandlung von aus einer Hirngewebeschädigung entstehenden Erkrankungen wie etwa Bluthochdruck-Enzephalopathie und so weiter brauchbar. Weiterhin kann der Wirkstoff sicher bei der Prophylaxe und Therapie einer sekundären Hirngewebeschädigung verwendet werden, die aus einer mit Hirntrauma, Hirnödem und Hirntumor verbundenen Enzephalothlipsie entsteht.

Claims

Verwendung einer Verbindung der folgenden Formel (I)
worin R¹ eine Alkylgruppe mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen oder eine Arylgruppe mit 6 bis 10 Kohlenstoffatomen darstellt, die gegebenenfalls substituiert ist; R² und R³ gleich oder verschieden sein können und jeweils Wasserstoff oder eine Alkylgruppe mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen darstellen oder R² und R³ gemeinsam einen Ring mit 3 bis 7 Kohlenstoffatomen bilden können, und R⁴ eine Niederalkylgruppe mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen darstellt, die gegebenenfalls durch Aryl, Cycloalkyl oder einen aromatischen, heterocyclischen Rest substituiert ist, oder eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes davon zur Herstellung eines pharmazeutischen Mittels zur Prophylaxe oder Behandlung einer Hirngewebeschädigung, die aus der aus Bluthochdruck-Enzephalopathie und mit Gehirntrauma, Hirnödem oder Hirntumor verbundener Enzephalothlipsis ausgewählt ist.
Verwendung wie in Anspruch 1 beansprucht, wobei R¹ in der Formel (I) Phenyl oder Naphthyl ist, das durch Fluor, Chlor oder Methyl substituiert sein kann.
Verwendung wie in Anspruch 1 beansprucht, wobei R¹ in der Formel (I) eine Gruppe ist, die aus der aus Methyl, 4-Fluorphenyl, 4-Chlorphenyl, p-Tolyl und 2-Naphthyl bestehenden Gruppe ausgewählt ist.
Verwendung wie in Anspruch 1beansprucht wobei R² in der Formel(I) Propyl, Isopropyl oder tert-Butyl ist und R³ Wasserstoff ist. (I)
Verwendung wie in Anspruch 1 beansprucht, wobei R² in der Formel (I) Isopropyl ist und R³ Wasserstoff ist.
Verwendung wie in Anspruch 1 beansprucht, wobei R² und R³ in der Formel (I) zusammen Cyclopentyliden oder Cyclohexyliden bilden.
Verwendung wie in Anspruch 1 beansprucht, wobei R⁴ in der Formel (I) eine Gruppe ist, die aus der Isobutyl, Benzyl, Cyclohexylmethyl und Indol-3-ylmethyl bestehenden Gruppe ausgewählt ist.
Verwendung wie in Anspruch 1 beansprucht, wobei der aktive Bestandteil N-(4-Fluorphenylsulfonyl)-L-valyl-L-leucinal oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon ist.