DE69908173T2

DE69908173T2 - Crf rezeptor-antagonisten und darauf bezogene methoden

Info

Publication number: DE69908173T2
Application number: DE69908173T
Authority: DE
Inventors: Mustapha Haddach; Zhiqiang Guo; R. James MCCARTHY
Original assignee: Neurocrine Biosciences Inc
Current assignee: Neurocrine Biosciences Inc
Priority date: 1998-11-12
Filing date: 1999-11-12
Publication date: 2004-08-19
Anticipated expiration: 2019-11-13
Also published as: ATE240958T1; NZ511267A; HK1038925A1; ES2196898T3; US20040229879A1; NO20012228L; DE69908173D1; BR9915129A; US20020143008A1; US6348466B1; WO2000027850A2; KR20010080402A; HK1038925B; WO2000027850A3; IL143105A0; CN1178941C; EP1129096B1; EP1129096A2; AU1819900A; NO20012228D0

Description

TECHNISCHES GEBIET
Diese Erfindung betrifft allgemein CRF-Rezeptor-Antagonisten und Verfahren zur Behandlung von Erkrankungen durch Verabreichung solcher Antagonisten an ein warmblütiges Tier, das deren bedarf.
HINTERGRUND DER ERFINDUNG
Der erste Corticotropin-freisetzende Faktor (CRF) wurde aus Schafshypothalamus isoliert und als ein 41 Aminosäuren langes Peptid identifiziert (Vale et al., Science 213: 1394–1397, 1981). Anschließend wurden Sequenzen von menschlichem CRF und Ratten-CRF isoliert und es wurde festgestellt, daß sie identisch sind, aber verschieden von Schafs-CRF in 7 der 41 Aminosäurereste (Rivier et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 80: 4851, 1983; Shibahara et al., EMBO J. 2: 775, 1983).
Es ist festgestellt worden, daß CRF tiefgreifende Veränderungen in der Funktion des endokrinen, Nerven- und Immunsystems verursacht. Man glaubt, daß CRF der wichtigste physiologische Regulator der Basal- und Streß-Freisetzung von adrenocorticotropen Hormonen ("ACTH"), β-Endorphin und anderen von Pro-Opiomelanocortin ("POMC") abgeleiteten Peptiden aus dem Hypophysen-Vorderlappen ist (Vale et al., Science 213: 1394– 1397, 1981). Kurz gesagt, glaubt man, daß CRF seine biologischen Wirkungen einleitet, indem es sich an einen Plasmamembranrezeptor bindet, von dem man festgestellt hat, daß er über das Gehirn (DeSouza et al., Science 224: 1449–1451, 1984), die Hirnanhangdrüse (DeSouza et al., Methods Enzymol. 124: 560, 1986; Wynn et al., Biochem. Biophys. Res. Comm. 110: 602–608, 1983), die Nebenniere (Udelsman et al., Nature 319: 147–150, 1986) und die Milz (Webster, E. L., and E. B. DeSouza, Endocrinology 122: 609–617, 1988) verteilt ist. Der CRF-Rezeptor wird an ein GTP-Bindungsprotein gekoppelt (Perrin et al., Endocrinology 118: 1171–1179, 1986), das CRF-stimulierten Anstieg der intrazellulären Produktion von cAMP vermittelt (Bilezikjian, L. M., and W. W. Vale, Endocrinology 113: 657–662, 1983). Der Rezeptor für CRF ist nunmehr aus Rattenhirn (Perrin et al., Endo 133(6): 3058–3061, 1993) und menschlichem Hirn (Chen et al., PNAS 90(19): 8967–8971, 1993; Vita et al., FEBS 335(1): 1–5, 1993) kloniert worden. Dieser Rezeptor ist ein 415 Aminosäuren langes Protein, das sieben membranüberspannende Domänen umfaßt. Ein Identitätsvergleich zwischen Rattensequenzen und menschlichen Sequenzen zeigt einen hohen Grad an Homologie (97%) auf dem Aminosäureniveau.
Man glaubt auch, daß CRF, zusätzlich zu seiner Rolle bei der Stimulation von ACTH und POMC, viele der endokrinen, autonomen und Verhaltensreaktionen auf Streß koordiniert und in der Pathophysiologie affektiver Erkrankungen involviert sein kann. Überdies glaubt man, daß CRF eine Schlüsselzwischenstufe in der Kommunikation zwischen den Immun-, Zentralnerven-, endokrinen und kardiovasculären Systemen ist (Crofford et al., J. Clin. Invest. 90: 2555–2564, 1992; Sapolsky et al., Science 238: 522–524, 1987; Tilders et al., Regul. Peptides 5: 77–84, 1982). Insgesamt scheint CRF einer der zentralen Neurotransmitter des zentralen Nervensystems zu sein und spielt eine entscheidende Rolle bei der Integration der Gesamtreaktion des Körpers auf Streß.
Direkte Verabreichung von CRF an das Gehirn ruft Verhaltens-, physiologische und endokrine Reaktionen aus, die identisch sind mit denjenigen, die für ein Tier beobachtet werden, das einer Streß-Umgebung ausgesetzt ist. Intracerebroventrikulare Injektionen von CRF führt zum Beispiel zu einer Verhaltensaktivierung (Sutton et al., Nature 297: 331, 1982), einer persistenten Aktivierung des Elektroencephalogramms (Ehlers et al., Brain Res. 278: 332, 1983), einer Stimulation des sympathoadrenomedullären Weges (Brown et al., Endocrinology 110: 928, 1982), einem Anstieg der Herzrate und des Blutdrucks (Fisher et al., Endocrinology 110: 2222, 1982), einem Anstieg im Sauerstoffverbrauch (Brown et al., Life Sciences 30: 207, 1982), einer Veränderung der gastrointestinalen Aktivität (Williams et al., Am. J. Physiol, 253: G582, 1987); einer Unterdrückung des Nahrungsverzehrs (Levine et al., Neuropharmacology 22: 337, 1983), einer Modifikation des sexuellen Verhaltens (Sirinathsinghji et al., Nature 305: 232, 1983) und einer Beeinträchtigung der Immunfunktion (Irwin et al., Am. J. Physiol, 255: R744, 1988). Klinische Daten legen überdies nahe, daß CRF bei Depressionen, mit Angstzuständen zusammenhängenden Erkrankungen und Anorexia nervosa im Gehirn hypersekretiert wird (DeSouza, Ann. Reports in Med. Chem. 25: 215–223, 1990). Demgemäß legen klinische Daten nahe, daß CRF-Rezeptor-Antagonisten neuartige Antidepressiva und/oder Anxiolytika darstellen könnten, die bei der Behandlung der neuropsychiatrischen Erkrankungen nützlich sein könnten, die Hypersekretion von CRF manifestieren.
Die ersten CRF-Rezeptor-Antagonisten waren Peptide (siehe z. B. Rivier et at., U.S. Patent No. 4,605,642; Rivier et al., Science 224: 889, 1984). Obgleich diese Peptide etablierten, daß CRF-Rezeptor-Antagonisten die pharmakologischen Reaktionen auf CRF mildern können, leiden Peptid-CRF-Rezeptor-Antagonisten an den üblichen Nachteilen von Peptid-Therapeutika, einschließlich Mangel an Stabilität und begrenzte orale Aktivität. Vor kurzem ist über kleinmolekulare CRF-Rezeptor-Antagonisten berichtet worden. Substituierte 4-Thio-5-oxo-3-pyrazolin-Derivate (Abreu et al., U.S. Patent No. 5,063,245) und substituierte 2-Aminothiazol-Derivate (Courtemanche et al., Australian Patent No. AU-A-41399/93) sind zum Beispiel als CRF-Rezeptor-Antagonisten berichtet worden. Diese besonderen Derivate haben sich als wirksam bei der Hemmung der Bindung von CRF an seinen Rezeptor im 1– 10 μM-Bereich bzw. 0,1–10 μM-Bereich erwiesen.
Vor kurzem sind zahlreiche kleinmolekulare CRF-Rezeptor-Antagonisten vorgeschlagen worden, einschließlich der in den folgenden Patentdokumenten offenbarten Verbindungen: WO 94/13643, WO 94/13644, WO 94/13661, WO 94/13676, WO 94/13677, WO 95/10506, WO 95/33750, WO 96/35689, WO 97/00868, WO 97/35539, WO 97/35580, WO 97/35846, WO 97/44038, WO 98/03510, WO 98/05661, WO 98/08846, WO 98/08847, WO 98/11075, WO 98/15543, WO 98/21200 und WO 98/29413.
Aufgrund der physiologischen Bedeutung von CRF bleibt die Entwicklung von biologisch aktiven kleinen Molekülen, die signifikante CRF-Rezeptor-Bindungsaktivität besitzen und die in der Lage sind, den CRF-Rezeptor zu antagonisieren, ein wünschenswertes Ziel. Solche CRF-Rezeptor-Antagonisten wären nützlich bei der Behandlung von endokrinen, psychiatrischen und neurologischen Zuständen oder Erkrankungen, einschließlich von mit Streß zusammenhängenden Erkrankungen im allgemeinen.
Obgleich signifikante Fortschritte gemacht worden sind, CRF-Regulation durch Verabreichung von CRF-Rezeptor-Antagonisten zu erreichen, bleibt ein Bedürfnis im Stand der Technik nach wirksamen kleinmolekularen CRF-Rezeptor-Antagonisten bestehen. Es besteht auch ein Bedürfnis nach pharmazeutischen Zusammensetzungen, die solche CRF-Rezeptor-Antagonisten enthalten, sowie Verfahren, die mit der Verwendung desselben zusammenhängen, um zum Beispiel mit Streß zusammenhängende Erkrankungen zu behandeln. Die vorliegende Erfindung erfüllt diese Bedürfnisse und stellt weitere verwandte Vorteile bereit.
ZUSAMMENFASSUNG DER ERFINDUNG
Kurz gesagt betrifft diese Erfindung allgemein CRF-Rezeptor-Antagonisten und genauer CRF-Rezeptor-Antagonisten mit der folgenden allgemeinen Struktur (I):
einschließlich Stereoisomeren und pharmezeutisch annehmbaren Salzen derselben, wobei m, n, X, R, R₁, R₂ und Ar sind, wie unten definiert.
Die CRF-Rezeptor-Antagonisten dieser Erfindung sind über einen weiten Bereich von therapeutischen Anwendungen nützlich und können verwendet werden, um eine Vielzahl von Erkrankungen oder Krankheiten zu behandeln, einschließlich mit Streß zusammenhängenden Erkrankungen. Solche Verfahren schließen die Verabreichung einer wirksamen Menge eines CRF-Rezeptor-Antagonisten dieser Erfindung, vorzugsweise in der Form einer pharmazeutischen Zusammensetzung, an ein Tier, das dieser bedarf, ein. Demgemäß sind in einer weiteren Ausführungsform pharmazeutische Zusammensetzungen offenbart, die einen oder mehrere CRF-Rezeptor-Antagonisten dieser Erfindung in Kombination mit einem pharmazeutisch annehmbaren Trägerstoff und/oder Verdünnungsmittel enthalten.
Diese und weitere Aspekte der Erfindung werden bei Bezugnahme auf die folgende detaillierte Beschreibung deutlich werden. Zu diesem Zweck sind verschiedene Entgegenhaltungen angegeben, die bestimmte Verfahren, Verbindungen und/oder Zusammensetzungen detaillierter beschreiben, und sind hierdurch durch Bezugnahme in ihrer Gesamtheit mit einbezogen.
DETAILLIERTE BESCHREIBUNG DER ERFINDUNG
Die vorliegende Erfindung betrifft allgemein Verbindungen, die als Antagonisten des Rezeptors für Corticotropin-freisetzenden Faktor (CRF) nützlich sind.
In einer ersten Ausführungsform haben die CRF-Rezeptor-Antagonisten dieser Erfindung die
einschließlich Stereoisomeren und pharmazeutisch annehmbaren Salzen derselben,
wobei:
n 1 oder 2 ist;
m 0, 1, 2 oder 3 ist;
X N oder CR' ist;
R ein fakultativer Substituent ist, der, bei jedem Auftreten, unabhängig C_1-6-Alkyl, C_3-6 -Alkenyl, C_1-6-Alkylidenyl oder C_1-6-AlkylAr ist;
R' Wasserstoff, Halogen oder C_1-6-Alkyl ist;
R₁ -C(H)_0,1(R₃)(R₄) ist;
R₂ Wasserstoff oder C_1-6-Alkyl ist;
R₃ Wasserstoff, Keto, C_1-6-Alkyl, Mono- oder Di(C_3-6-cycloalkyl)methyl, C_3-6-Cycloalkyl, C_3-6-Alkenyl, Hydroxy-C_1-6-alkyl, C_1-6-Alkylcarbonyloxy-C_1-6-alkyl oder C_1-6-Alkyloxy-C_1-6-alkyl ist und
R₄ Wasserstoff, Ar¹, C_1-6-AlkylAr¹, OAr¹, C_1-8-Alkyl, C_1-6-Alkyloxy, C_3-6-Cycloalkyl, Mono- oder Di(C_3-6-cycloalkyl)methyl, C_3-6-Alkenyl, C_3-6-Alkinyl, C_1-6-Alkyloxy-C_1-6-alkyl, C_1-6-AlkoxyAr¹, Hydroxy-C_1-6-alkyl, Thienyl-C_1-6-alkyl, Furanyl-C_1-6-alkyl, C_1-6 -Alkylthio-C_1-6-alkyl, Morpholinyl, Mono- oder Di(C_1-6-alkyl)amino-C_1-6-alkyl, Amino, (C_1-6-Alkyl)amino, Di(C_1-6-alkyl)amino, (C_1-6-AlkylAr¹)amino, (C_1-6-Alkyl)(Ar¹)amino, C_1-6-Alkylcarbonyl-C_1-6-alkyl, C_1-6-Alkylcarbonyloxy-C_1-6-alkyl, Sulfonyl-(C_1-8-alkyl), C(=O)-C_1-6 -Alkyl, C_1-8-Alkyl, substituiert mit Phthalimid, Ar¹, OAr¹, NHAr¹, C(=O)Ar¹, C(=O)NHAr¹ oder -C(=O)NH₂, oder ein Rest der Formel -(C_1-6-Alkandiyl)-Y-(CO)_0,1-Ar¹ ist, wobei Y O, NH oder eine direkte Bindung ist, oder
R₃ und R₄ zusammengenommen mit dem Kohlenstoffatom, an das sie gebunden sind, ein C_5-8-Cycloalkyl, ein C_5-8-Cycloalkenyl, einen C_3-12-Heterozyklus, Phenyl, Naphthyl oder ein C_5-8-Cycloalkyl, kondensiert an Ar¹, bilden, wobei jedes davon fakultativ mit einem oder mehreren Substituenten substituiert ist, die unabhängig ausgewählt sind aus C_1-6-Alkyl;
Ar Phenyl, Naphthyl oder ein aromatischer C_3-12-Heterozyklus ist, jedes fakultativ mit 1, 2 oder 3 Substituenten substituiert, die unabhängig ausgewählt sind aus Halo, C_1-6-Alkyl, Trifluormethyl, O(Trifluormethyl), Hydroxy, Cyano, C_1-6-Alkyloxy, Phenoxy, Benzoxy, C_1-6-Alkylthio, Nitro, Amino, Mono- oder Di(C_1-6-alkyl)amino, (C_1-6-Alkyl)(C_1-6-alkanoyl)amino oder Piperidinyl, oder wobei zwei Substituenten zusammengenommen ein C_1-6-Alkylidinyl oder ein C_1-6-Alkylidenyl sind, wobei ein, zwei oder drei Kohlenstoffatome durch ein Heteroatom ersetzt sind, das einzeln ausgewählt ist aus Sauerstoff, Stickstoff oder und Schwefel; und
Ar¹ Phenyl, Naphthyl oder ein aromatischer C_3-12-Heterozyklus ist, wobei jedes davon fakultativ mit 1, 2 oder 3 Substituenten substituiert ist, die unabhängig ausgewählt sind aus Halo, C_1-6-Alkyl, C_1-6-Alkyloxy, Di(C_1-6-alkyl)amino, Di(C_1-6-alkyl)amino-C_1-6-alkyl, Trifluormethylsulfonyl-(C_1-6-alkyl) und C_1-6-Alkyl, substituiert mit Morpholinyl.
Im Kontext dieser Erfindung haben die vorstehenden Begriffe die unten angegebenen Bedeutungen.
"Keto" stellt =O dar.
"C_1-6-Alkyl" oder "C_1-8-Alkyl" stellt ein geradkettiges oder verzweigtes Alkyl mit von 1 bis 6 Kohlenstoffatomen bzw. 1 bis 8 Kohlenstoffatomen dar, wie etwa Methyl, Ethyl, n-Propyl, Isopropyl, n-Butyl, tert-Butyl, n-Pentyl und dergleichen.
"C_1-6-Alkyloxy" stellt die Gruppe -O(C_1-6-Alkyl) dar, wie etwa Methoxy, Ethoxy und dergleichen.
"C_1-6-Alkylthio" stellt die Gruppe -S(C_1-6-Alkyl) dar, wie etwa -SCH₃, -SCH₂CH₃ und dergleichen.
"C_3-6-Cycloalkyl" stellt ein zyklisches Alkyl mit von 3 bis 6 Kohlenstoffatomen dar, einschließlich Cyclopropyl, Cyclopentyl, Cyclopentyl und Cyclohexyl.
"C_5-8-Cycloalkyl" stellt ein zyklisches Alkyl mit von 5 bis 8 Kohlenstoffatomen dar, wie etwa Cyclopentyl, Cyclohexyl und dergleichen.
"C_5-8-Cycloalkenyl" stellt ein zyklisches Alkyl mit von 5 bis 8 Kohlenstoffatomen und wenigstens einer Doppelbindung dar.
"C_3-6-Alkenyl" stellt ein ungesättigtes geradkettiges oder verzweigtes Alkyl mit von 3 bis 6 Kohlenstoffatomen und mit wenigstens einer Doppelbindung dar, wie etwa Propylenyl, 1-Butenyl, 2-Butenyl, 2-Methylpropenyl und dergleichen.
"C_3-6-Alkinyl" stellt ein ungesättigtes geradkettiges oder verzweigtes Alkyl mit von 3 bis 6 Kohlenstoffatomen und mit wenigstens einer Dreifachbindung dar, wie etwa Propylinyl, 1-Butinyl, 2-Butinyl, 2-Methylpropinyl und dergleichen.
"Hydroxy-C_1-6-alkyl" stellt ein C_1-6-Alkyl dar, das mit wenigstens einer Hydroxylgruppe substituiert ist, wie etwa -CH₂OH, -CH(OH)CH₃ und dergleichen.
"Mono- oder Di(C_3-6-cycloalkyl)methyl" stellt eine Methylgruppe dar, die mit einer oder zwei C_3-6-Cycloalkylgruppen substituiert ist, wie etwa Cyclopropylmethyl, Dicyclopropylmethyl und dergleichen.
"C_1-6-Alkylcarbonyl-C_1-6-alkyl" stellt ein C_1-6-Alkyl dar, das mit einer -COC_1-6-Alkylgruppe substituiert ist.
"C_1-6-Alkylcarbonyloxy-C_1-6-alkyl" stellt ein C_1-6-Alkyl dar, das mit einer -COOC_1-6-Alkylgruppe substitiuert ist.
"C_1-6-Alkyloxy-C_1-6-alkyl" stellt ein C_1-6-Alkyl dar, das mit einer -OC_1-6-Alkylgruppe substituiert ist.
"C_1-6-Alkylthio-C_1-6-alkyl" stellt ein C_1-6-Alkyl dar, das mit einer -SC_1-6-Alkylgruppe substituiert ist.
"Sulfanyl(C_1-6-alkyl)" bedeutet -SO₂(C_1-6-Alkyl), wie etwa -SO₂-Methyl und dergleichen.
"Mono- oder Di(C_1-6-alkyl)amino" stellt ein Amino dar, das mit einem C_1-6-Alkyl bzw. mit zwei C_1-6-Alkylen substituiert ist.
"(C_1-6-Alkyl)(C_1-6-alkanoyl)amino" stellt ein Amino dar, das substituiert ist mit einem C_1-6-Alkyl und einem C_1-6-Alkanoyl (d. h. C(=O)(C_1-6-Alkyl).
"Mono- oder Di(C_1-6-alkyl)amino-C_1-6-alkyl" stellt ein C_1-6-Alkyl dar, das mit einem Monooder Di(C_1-6-alkyl)amino substituiert ist.
"C_1-6-Alkylidenyl" stellt einen zweiwertigen C_1-6-Alkylrest dar, wie etwa Methylen (-CH₂-), Ethylen (-CH₂CH₂-) und dergleichen.
"C_1-6-Alkylidenyl, bei dem ein, zwei oder drei Kohlenstoffatome durch ein Heteroatom ersetzt sind, das einzeln ausgewählt ist aus Sauerstoff, Stickstoff oder und Schwefel" bedeutet ein C_1-6 -Alkylidenyl, bei dem ein, zwei oder drei Methylenylgruppen (d. h. "CH₂") ersetzt sind durch O, N oder S, wie etwa -OCH₂O-, -OCH₂CH₂O- und dergleichen.
"C_3-12-Heterozyklus" stellt einen Ring dar, der aus mehr als einer Atomsorte besteht und der 3 bis 12 Kohlenstoffatome enthält, wie etwa Pyridinyl, Pyrimidinyl, Furanyl, Thienyl, Imidazolyl, Thiazolyl, Pyrazolyl, Pyridazinyl, Pyrazinyl, Triazinyl (wie etwa 1, 3, 5), Pyrrolyl, Thiopenyl, Oxazolyl, Isoxazolyl, Pyrrolinyl, Pyrrolidinyl, Piperidinyl und dergleichen, sowie an Phenyl kondensierte heterozyklische Ringe, um einen bizyklischen Ring zu bilden, wie etwa Pyrolidinophenyl und dergleichen.
"Halo" bedeutet Fluor, Chlor, Brom oder Iod.
"(S)" bezeichnet die linkshändige chirale Konfiguration der Gruppe, auf die es angewendet ist.
Wie im Kontext dieser Erfindung verwendet, stellt
-CH₂CH- oder -CH=CH- dar, fakultativ substituiert mit 1 oder 2 R-Substituenten, (d. h. wenn n = 1 und m = 0, 1 oder 2) oder -CH₂CH₂CH₂-, fakultativ substituiert mit 1, 2 oder 3 R-Substituenten (d. h. wenn n = 2 und m = 0, 1, 2 oder 3). Demgemäß schließen repräsentative Verbindungen dieser Erfindung Verbindungen mit den folgenden Strukturen (I-1), (I-2), (I-3), (I-4), (I-5) und (I-6) ein sind aber nicht hierauf beschränkt):
Insbesondere und in Abhängigkeit von der Auswahl der X-Einheit schließen repräsentative CRF-Rezeptor-Antagonisten diese Erfindung Verbindungen mit den folgenden Strukturen (Ia) bzw. (Ib) ein:
In einer bevorzugten Ausführungsform haben die CRF-Rezeptor-Antagonisten dieser Erfindung Struktur (Ia). In einer weiteren bevorzugten Ausführungsform haben die CRF-Rezeptor-Antagonisten dieser Erfindung Struktur (Ib), worin R' Wasserstoff ist. Solche Verbindungen werden dargestellt durch die folgenden Strukturen (I-1a), (I-1b), (I-4a) und (I-4b):
Wie oben angegeben, ist R₁ -C(H)_0,1(R₃)(R₄), was -CH(R₃)(R₄) und -C(R₃)(R₄) darstellt. Repräsentative Ausführungsformen in dieser Hinsicht schließen die folgenden R₁-Einheiten ein:
In ähnlicher Weise schließen repräsentative R₁-Einheiten, wenn R₃ Keto ist, das folgende ein:
Repräsentative R₁-Einheiten in dieser Hinsicht schließen -C(=O)R₄, -C(=O)OR₄, -C(=O)NH₂, -C(=O)NH(C_1-6-Alkyl) und -C(=O)N(C_1-6-Alkyl)(C_1-6-Alkyl) ein.
In der Ausführungsform, in der die R₃- und R₄-Gruppen von R₁ zusammengenommen ein C_3-8 -Cycloalkyl bilden, hat die resultierende R₁-Gruppe die Struktur:
Repräsentative C_3-8-Cycloalkyle schließen Cyclopropyl, Cyclopentyl und Cyclohexyl ein. Überdies hat eine repräsentative R₁-Einheit, wenn das C_3-8-Cycloalkyl ein C_5-7-Cycloalkyl ist, fakultativ substituiert mit einer oder mehreren C_1-6-Alkylgruppen, die folgende Struktur:
wobei R₅ und R₆ identisch oder verschieden und unabhängig ausgewählt sind aus einem C_1-6-Alkyl, wie etwa Methyl oder Ethyl.
In ähnlicher Weise hat die resultierende R₁-Gruppe in der Ausführungsform, in der die R₃-und R₄-Gruppen von R₁ zusammengenommen ein an Ar kondensiertes C_5-8-Cycloalkyl bilden, die Struktur:
einschließlich fakultativ substituierten Analogen derselben, wie oben definiert.
In spezifischeren Ausführungsformen dieser Erfindung schließen repräsentative Ar-Gruppen dieser Erfindung 2,4,6-Trimethylphenyl, 2-Chlor-4-methylphenyl, 2-Chlor-4-methoxyphenyl, 2-Brom-4-methylphenyl, 2-Methyl-4-chlorphenyl, 2-Methyl-4-bromphenyl, 2-Brom-4-isopropylphenyl, 2,4-Dichlorphenyl, 2,6-Dimethyl-4-bromphenyl, 4-Chlorphenyl, 2,4-Dimethoxyphenyl, 2,4-Dimethylphenyl, 2-Methoxyphenyl, 3-Methoxyphenyl, 2-Methyl-4-methoxyphenyl, 3,4-Dimethoxyphenyl, 3,5-Dimethoxyphenyl, 4-Trifluormethylphenyl, 4- Methoxyphenyl, 2,4,6-Trifluorphenyl, 2-Methyl-4-N(ethyl)₂-phenyl, 2-Brom-4-(OCF₃)phenyl, 4-Dimethylamino-2-methyl-3-pyridinyl, 4-Dimethylamino-6-methyl-2-pyridinyl, 4-Dimethylamino-3-pyridinyl, 4-N(CH₃)(COCH₃)phenyl, 3,4-Methylendioxyphenyl und 3,4-Ethylendioxyphenyl ein.
Repräsentative fakultative R-Gruppen dieser Erfindung schließen Methyl, Ethyl, n-Propyl, Isopropyl, Isobutyl, =CH₂ und =CHCH₃ ein.
Repräsentative R'-Gruppen sind Wasserstoff, Fluor, Chlor, Brom, Methyl und Ethyl und vorzugsweise Wasserstoff.
Repräsentative R₁-Gruppen schließen Methyl, Ethyl, n-Propyl, Isopropyl, n-Butyl, Isobutyl, tert-Butyl, n-Pentyl, Isopentyl, Neopentyl, -CH(ethyl)₂, -CH(n-propyl)₂, -CH(n-butyl)₂, -CH₂CH₂OCH₃, -CH(methyl)(CH₂OCH₃), -CH(ethyl)(CH₂OCH₃), -CH(n-propyl)(CH₂OCH₃), -CH(n-butyl)(CH₂OCH₃), -CH(tert-butyl)(CH₂OCH₃), -CH(CH₂OCH₃)₂, -CH(benzyl)(CH₂OCH₃), -CH(4-chlorbenzyl)(CH₂OCH₃), -CH(CH₂OCH₃)(CH₂CH₂SCH₃), -CH(ethyl)(CH₂Obenzyl), -CHC≡CH, -CH(methyl)(ethyl), -CH(methyl)(n-propyl), -CH(methyl)(n-butyl), -CH(methyl)(n-pentyl), -CH(methyl)(CH₂CH₂CH₂CH(CH₃)₂), -CH(ethyl)(n-propyl), -CH(ethyl)(n-butyl), -CH(ethyl)(n-peetyl), -CH(n-propyl)(n-butyl), -CH(n-propyl)(n-pentyl), Cyclopropyl, Cyclobutyl, Cyclohexyl, 2-Methylcyclohexyl, 3-Methylcyclohexyl, 1,2,3,4-Tetrahydronaphthyl (1 und 2), Benzyl, 2-Chlorbenzyl, -CH(methyl)(benzyl), CH(ethyl)(benzyl), -CH(n-propyl)(benzyl), -CH(n-butyl)(benzyl), -CH₂(cyclopropyl), -CH₂(cyclobutyl), CH₂CH(methyl)CH₂CH₃, -CH₂CH(ethyl)CH₂CH₃, -CH₂C(methyl)₃, -CH₂C≡CH, -CH₂C(=O)ethyl, -C(=O)cyclopropyl, -C(=O)NHbenzyl, -C(=O)methyl, -C(=O)benzyl, -C(=O)phenyl, -C(=O)ethyl, -C(=O)CH₂C(=O)Oethyl, -C(=O)CH(phenyl)ethyl, -C(=O)pyridyl, -C(=O)(4-N,N-dimethylamino)phenyl, -C(=O)CH₂Omethyl, -C(=O)CH(ethyl)₂, -C(=O)n-butyl, -C(=O)CH₂CH₂(methyl)₂, -C(=O)n-propyl, -C(=O)CH₂CH₂phenyl, -CH₂pyridyl, -CH₂CH₂NHphenyl, -CH₂CH₂C(=O)Oethyl, -CH₂CH₂CH₂phenyl, -CH₂CH₂-N-phthalimid, -CH₂CH₂CH₂C(=O)Oethyl, -CH₂CH₂Oethyl, CH₂CH(methyl)₂, -CH₂C(=O)Oethyl, -CH₂C(=O)pyrrolidinophenyl, -CH₂CH₂Ophenyl, -CH₂CH₂CH₂CH₂-N-phthalimid, -CH₂C(=O)Ot-butyl, -CH₂CH₂CH(methyl)₂, -CH₂C(=O)NH₂, -CH₂-4-(SO₂CH₃)phenyl, -CH₂CH₂pyrolyl und Benzyl ein.
Repräsentative R₂-Gruppen schließen Methyl, Ethyl und Wasserstoff und vorzugsweise Methyl ein.
Die Verbindungen der vorliegenden Erfindung können mit bekannten Techniken der organischen Synthese hergestellt werden, einschließlich der Verfahren, die detaillierter in den Beispielen beschrieben sind, und können im allgemeinen als die freie Base eingesetzt werden. Alternativ können die Verbindungen dieser Erfindung in der Form von Säureadditionssalzen verwendet werden. Säureadditionssalze der Aminoverbindungen der vorliegenden Erfindung als freie Base können mit im Stand der Technik gut bekannten Verfahren hergestellt werden und können von organischen und anorganischen Säuren gebildet werden. Geeignete organische Säuren schließen Maleinsäure, Fumarsäure, Benzoesäure, Ascorbinsäure, Bernsteinsäure, Methansulfonsäure, Essigsäure, Oxasäure, Propionsäure, Weinsäure, Salicylsäure, Zitronensäure, Gluconsäure, Milchsäure, Mandelsäure, Zimtsäure, Asparaginsäure, Stearinsäure, Palmitinsäure, Glycolsäure, Glutaminsäure und Benzolsulfonsäure ein. Geeignete anorganische Säuren schließen Salzsäure, Bromwasserstoffsäure, Schwefelsäure, Phosphorsäure und Salpetersäure ein.
Genauer gesagt können die Verbindungen der Struktur (I) mit den in den Beispielen 1 und 2 dargestellten Verfahren hergestellt werden sowie mit dem folgenden allgemeinen Reaktionsschema:
Reaktionsschema
Die Wirksamkeit einer Verbindung als ein CRF-Rezeptor-Antagonist kann mit verschiedenen Testmethoden bestimmt werden. Geeignete CRF-Antagonisten dieser Erfindung sind in der Lage, die spezifische Bindung von CRF an seinen Rezeptor zu hemmen und mit CRF assoziierte Aktivitäten zu antagonisieren. Bei einer Verbindung von Struktur (I) kann Aktivität als ein CRF-Antagonist mit einem oder mehreren allgemein akzeptierten Tests für den genannten Zweck bestimmt werden, einschließlich (aber nicht hierauf beschränkt) den Tests, die offenbart sind von DeSouza et al. (J. Neuroscience 7: 88, 1987) und Battaglia et al. (Synapse 1: 572, 1987). Wie oben erwähnt, schließen geeignete CRF-Antagonisten Verbindungen ein, die CRF-Rezeptor-Affinität zeigen. CRF-Rezeptor-Affinität kann bestimmt werden durch Bindungsstudien, die die Fähigkeit einer Verbindung messen, die Bindung eines radioaktiv markierten CRFs (z. B. [¹²⁵]Tyrosin-CRF) an seinen Rezeptor (z. B. Rezeptoren, die aus Ratten-Cerebralcortexmembranen präpariert worden sind) zu hemmen. Der Radioliganden-Bindungstest, der von DeSouza et al. (aaO, 1987) beschrieben ist, stellt einen Test zur Bestimmung der Affinität einer Verbindung für den CRF-Rezeptor zur Verfügung. Solche Aktivität wird typischerweise aus der IC₅₀ als die Konzentration einer Verbindung, die notwendig ist, um 50% des radioaktiv markierten Liganden vom Rezeptor zu verdrängen, berechnet und wird als ein "K_i"-Wert angegeben, der mit der folgenden Gleichung berechnet wird:
wobei L = Radioligand und K_D = Affinität des Radioliganden für den Rezeptor (Cheng and Prusoff, Biochem. Pharmacol. 22: 3099, 1973).
Zusätzlich zu Hemmung der CRF-Rezeptor-Bindung kann die CRF-Rezeptor-Antagonistenaktivität einer Verbindung bestimmt werden durch die Fähigkeit der Verbindung, eine mit CRF assoziierte Aktivität zu antagonisieren. Es ist zum Beispiel bekannt, daß CRF verschiedene biochemische Prozesse stimuliert, einschließlich Adenylatcyclase-Aktivität. Daher können Verbindungen als CRF-Antagonisten durch ihre Fähigkeit bewertet werden, CRF-stimulierte Adenylatcyclase-Aktivität zu hemmen, indem zum Beispiel cAMP-Gehalte gemessen werden. Der Test auf CRF-stimulierte Adenylatcyclase-Aktivität von Battaglia et al. (aaO, 1987) stellt einen Test zur Bestimmung der Fähigkeit einer Verbindung, CRF-Aktivität zu antagonisieren, zur Verfügung. Demgemäß kann CRF-Rezeptor-Antagonistenaktivität mit Testtechniken bestimmt werden, die im allgemeinen einen anfänglichen Bindungstest einschließen (wie etwa offenbart von DeSouza (aaO, 1987)), gefolgt von einem cAMP-Screeningprotokoll (wie etwa offenbart von Battaglia (aaO, 1987)).
In Bezug auf CRF-Rezeptor-Bindungsaffinitäten haben CRF-Rezeptor-Antagonisten dieser Erfindung einen K_i von weniger als 10 μM. In einer bevorzugten Ausführungsform dieser Erfindung hat ein CRF-Rezeptor-Antagonist einen K_i von weniger als 1 μM und bevorzugter weniger als 0,25 μM (d. h. 250 nM). Wie unten detaillierter angegeben, wurden repräsentative Verbindungen dieser Erfindung mit dem Verfahren von Beispiel 4 getestet. Bevorzugte Verbindungen mit einem K_i von weniger als 1 μM sind die Verbindungen mit den Nummern (I-1) bis (I-25) und (I-29) bis (I-33). Bevorzugtere Verbindungen mit einem K_i von weniger als 250 nM sind die Verbindungen mit den Nummern (I-1) bis (I-14), (I-16) bis (I-25) und (I-29) bis (I-32).
Die CRF-Rezeptor-Antagonisten der vorliegenden Erfindung zeigen Aktivität an der CRF-Rezeptorstelle und können als Therapeutika für die Behandlung eines breiten Bereiches von Erkrankungen oder Krankheiten verwendet werden, einschließlich endokrinen, psychiatrischen und neurologischen Erkrankungen oder Krankheiten. Genauer gesagt, können die CRF-Rezeptor-Antagonisten der vorliegenden Erfindung nützlich sein bei der Behandlung physiologischer Zustände oder Erkrankungen, die von der Hypersekretion von CRF herrühren. Weil man glaubt, daß CRF ein zentraler Neurotransmitter ist, der die endokrinen, verhaltensmäßigen und automatischen Reaktionen auf Streß aktiviert und koordiniert, können die CRF-Rezeptor-Antagonisten der vorliegenden Erfindung verwendet werden, um neuropsychiatrische Erkrankungen zu behandeln. Neuropsychiatrische Erkrankungen, die mit den CRF-Rezeptor-Antagonisten dieser Erfindung behandelbar sein können, schließen affektive Erkrankungen wie etwa Depression; mit Angstzuständen zusammenhängende Erkrankungen, wie etwa generalisierte Angstzustände, panische Erkrankung, obsessivkompulsive Erkrankung, abnorme Aggression, kardiovaskuläre Abnormitäten wie etwa instabile Angina und reaktiven Bluthochdruck; und Nahrungsaufnahmestörungen wie etwa Anorexia nervosa, Bulimie und Reizkolon ein. CRF-Antagonisten können auch nützlich sein bei der Behandlung von Streß-induzierter Immunsupression, die mit verschiedenen Erkrankungszuständen assoziiert ist, sowie bei Schlaganfall. Weitere Verwendungen der CRF-Antagonisten dieser Erfindung schließen die Behandlung von entzündlichen Zuständen (wie etwa rheumatoider Arthrits, Uveitis, Asthma, entzündlicher Darmerkrankung und G. I.-Motilität), Cushing-Erkrankung, infantilen Spasmen, Epilepsie und anderen Anfällen von sowohl Kindern als auch Erwachsenen und unterschiedlichem Drogenmißbrauch oder -entzug (einschließlich Alkoholismus) ein.
In einer weiteren Ausführungsform der Erfindung sind pharmazeutische Zusammensetzungen offenbart, die einen oder mehrere CRF-Rezeptor-Antagonisten enthalten. Für die Zwecke der Verabreichung können die Verbindungen der vorliegenden Erfindung als pharmazeutische Zusammensetzungen formuliert werden. Pharmazeutische Zusammensetzungen der vorliegenden Erfindung umfassen einen CRF-Rezeptor-Antagonisten der vorliegenden Erfindung (d. h. eine Verbindung von Struktur (I)) und einen pharmazeutisch annehmbaren Trägerstoff und/oder Verdünnungsmittel. Der CRF-Rezeptor-Antagonist liegt in der Zusammensetzung in einer Menge vor, die darin wirksam ist, eine bestimmte Erkrankung zu behandeln – das heißt in einer Menge, die ausreichend ist, um CRF-Rezeptor-Antagonistenaktivität zu erreichen, und vorzugsweise mit annehmbarer Toxizität für den Patienten. Vorzugsweise können die pharmazeutischen Zusammensetzungen der vorliegenden Erfindung einen CRF-Rezeptor-Antagonisten in einer Menge von 0,1 mg bis 250 mg pro Dosierung, in Abhängigkeit vom Verabreichungsweg, bevorzugter von 1 mg bis 60 mg einschließen. Geeignete Konzentrationen und Dosierungen können von einem Fachmann ohne weiteres bestimmt werden.
Pharmazeutisch annehmbare Trägerstoffe und/oder Verdünnungsmittel sind den Fachleuten geläufig. Für Zusammensetzungen, die als flüssige Lösungen formuliert sind, schließen annehmbare Trägerstoffe und/oder Verdünnungsmittel Kochsalzlösung und steriles Wasser ein und können fakultativ Antioxidationsmittel, Puffer, Bakteriostatika und andere übliche Zusatzstoffe einschließen. Die Zusammensetzungen können auch als Pillen, Kapseln, Granülen oder Tabletten formuliert werden, die, zusätzlich zu einem CRF-Rezeptor-Antagonisten, Verdünnungsmittel, Dispergiermittel und oberflächenaktive Mittel, Bindemittel und Gleitmittel enthalten. Ein Fachmann kann weiter den CRF-Rezeptor-Antagonisten in einer geeigneten Art und Weise formulieren und in Übereinstimmung mit akzeptierten Praktiken, wie etwa denjenigen, die in Remington's Pharmaceutical Sciences, Gennaro, Hrg., Mack Publishing Co., Easton, PA 1990, offenbart sind.
In einer weiteren Ausführungsform stellt die vorliegenden Offenbarung ein Verfahren zur Behandlung einer Vielzahl von Erkrankungen oder Krankheiten zur Verfügung, einschließlich endokrinen, psychiatrischen und neurologischen Erkrankungen oder Krankheiten. Solche Verfahren schließen die Verabreichung einer Verbindung der vorliegenden Verbindung an ein warmblütiges Tier in einer Menge ein, die ausreichend ist, um die Erkrankung oder Krankheit zu behandeln. Solche Verfahren schließen systemische Verabreichung eines CRF-Rezeptor-Antagonisten dieser Erfindung ein, vorzugsweise in der Form einer pharmazeutischen Zusammensetzung. Wie hierin verwendet, schließt systemische Verabreichung orale und parenterale Verabreichungsverfahren ein. Für orale Verabreichung schließen geeignete pharmazeutische Zusammensetzungen von CRF-Rezeptor-Antagonisten Pulver, Granülen, Pillen, Tabletten und Kapseln sowie Flüssigkeiten, Sirupe, Suspensionen und Emulsionen ein. Diese Zusammensetzungen können auch Geschmacksstoffe, Konservierungsstoffe, Suspensionsmittel, Verdickungsmittel und Emulgatoren und weitere pharmazeutisch annehmbare Zusatzstoffe einschließen. Für parenterale Verabreichung können die Verbindungen der vorliegenden Erfindung in wäßrigen Injektionslösungen vorgelegt werden, die, zusätzlich zum CRF-Rezeptor-Antagonisten, Puffer, Antioxidationsmittel, Bakteriostatika und weitere in solchen Lösungen üblicherweise eingesetzte Zusatzstoffe enthalten können.
Wie oben erwähnt, kann die Verabreichung einer Verbindung der vorliegenden Erfindung verwendet werden, um eine breite Vielfalt von Erkrankungen oder Krankheiten zu behandeln. Insbesondere können die Verbindungen der vorliegenden Erfindung einem warmblütigen Tier zur Behandlung von Depression, Angstzustand, Panikzustand, obsessiv-kompulsiver Erkrankung, abnomer Aggression, instabiler Angina, reaktivem Bluthochdruck, Anorexia nervosa, Bulimie, Reizkolon, entzündlicher Darmerkrankung, Stress-Induzierter Immunsuppression, Entzündung, Cushing-Erkrankung, Drogenmißbrauch oder -entzug, infantile Spasmen oder Epilepsie verabreicht werden.
Die folgenden Beispiele werden zu Zwecken der Veranschaulichung, nicht Beschränkung vorgelegt.
BEISPIELE
Die CRF-Rezeptor-Antagonisten dieser Erfindung können mit den in den Beispielen 1–2 offenbarten Verfahren hergestellt werden. Beispiel 3 offenbart repräsentative Verbindungen dieser Erfindung. Beispiel 4 präsentiert ein Verfahren zur Bestimmung der Rezeptor-Bindungsaktivität (K_i) und Beispiel 5 offenbart einen Test zum Screenen von Verbindungen dieser Erfindung auf CRF-stimulierte Adenylatcyclase-Aktivität.
BEISPIEL 1 SYNTHESE REPRÄSENTATIVER VERBINDUNGEN VON STRUKTUR (IA)
Verbindung (4)
Eine Lösung von 4,6-Dichlor-2-methyl-5-nitropyrimidin (3; J. Chem. Soc. 1954, 3836)(2,23 g, 11 mmol) in EtOH (30 ml) bei –30°C wurde mit 1-Ethylpropylamin (870 mg, 10 mmol) in EtOH (8 ml) behandelt und die Reaktionsmischung wurde bei –30°C für eine Stunde gerührt und anschließend auf Raumtemperatur erwärmt. Flüchtige Substanzen wurden abgedampft und der Rückstand wurde zwischen Wasser und EtOAc aufgeteilt. Die organische Phase wurde getrocknet (Natriumsulfat), eingedampft, durch Flashchromatographic (Silica) gereinigt, um Verbindung (4) zu ergeben.
Verbindung (5)
Eine Lösung von Verbindung (4)(2,07 g, 8 mmol) in Acetonitril (15 ml) wurde mit 2,4,6-Trimethylanilin (1,35 g, 10 mmol) bei Umgebungstemperatur behandelt, anschließend wurde Triethylamin (1,52 g, 15 mmol) eingebracht. Die Reaktionsmischung wurde bei Umgebungstemperatur für zwei Stunden gerührt. Flüchtige Substanzen wurden abgedampft und der Rückstand wurde zwischen Salzlösung und EtOAc aufgeteilt. Die organische Phase wurde getrocknet (Natriumsulfat), eingedampft, durch Flashchromatographie (Silica) gereinigt, um Verbindung (5) zu ergeben.
Verbindung (6)
Verbindung (5)(2,14 g, 6 mmol) wurde in 1 : 1 Dioxan/Wasser (20 ml) gelöst und mit konzentriertem wäßrigen Ammoniumhydroxid (5 ml) behandelt. Natriumhydrosulfit (3,12 g, 18 mmol) wurde über eine Stunde in kleinen Chargen zugegeben und die Lösung wurde bei Umgebungstemperatur für 8 Stunden gerührt. Die Reaktionsmischung wurde zwischen Salzlösung und EtOAc aufgeteilt. Die organische Phase wurde getrocknet (Natriumsulfat), eingedampft, durch Flashchromatographie (Silica) gereinigt, um Verbindung (6) zu ergeben.
Verbindung (7)
Eine Mischung von Verbindung (6)(654 mg, 2 mmol) und Triethylamin (500 mg) in trockenem THF (10 ml) wurde mit Triphosgen (217 mg, 0,73 mmol) behandelt und die Reaktionsmischung wurde bei Umgebungstemperatur für eine Stunde gerührt. Niederschläge wurden abfiltriert und das Filtrat wurde eingedampft und der Rückstand wurde zwischen Salzlösung und EtOAc aufgeteilt. Die organische Phase wurde getrocknet (Natriumsulfat), eingedampft, durch Flashchromatographie (Silica) gereinigt, um Verbindung (7) zu ergeben.
Verbindung (8)
Verbindung (7)(353 mg, 1 mmol) in trockenem DMF (5 ml) wurde mit NaH (120 mg, 3 mmol, 60% in Öl) bei Umgebungstemperatur behandelt. Anschließend wurde 1,2-Dibromethan (654 mg, 3 mmol) zur Reaktionsmischung zugegeben und für 10 Stunden gerührt. Die Reaktionsmischung wurde zwischen Wasser und EtOAc aufgeteilt. Die organische Phase wurde getrocknet (Natriumsulfat), eingedampft, durch Flashchromatographie (Silika) gereinigt, um Verbindung (8) zu ergeben. LC-MS 380 (MH+).
Verbindung (9)
Eine Lösung von Verbindung (8)(38 mg, 0,1 mmol) in Toluol (2 ml) wurde mit aktiviertem Mangandioxid-Katalysator (100 mg) bei Rückfluß für 16 Stunden behandelt. Der Katalysator wurde durch Filtration durch ein Celite-Kissen entfernt und das Filtrat wurde bis zur Trockne eingedampft und durch präparative TLC (Silicagel) mit Ethylacetat-Hexan (1 : 1) gereinigt, um Verbindung (9) zu liefern.
BEISPIEL 2
SYNTHESE VON REPRÄSENTATIVEN VERBINDUNGEN VON STRUKTUR (IB)
Verbindungen von Struktur (IB) können mit demselben Syntheseweg, wie oben in Beispiel 1 offenbart, hergestellt werden, aber unter Verwendung des entsprechenden Pyridins für Verbindung (1) statt des Pyrimidins. Repräsentative Verbindungen dieser Erfindung können zum Beispiel mit dem folgenden Reaktionsschema hergestellt werden:
BEISPIEL 3
SYNTHESE VON REPRÄSENTATIVEN VERBINDUNGEN
Weitere repräsentative Verbindungen dieser Erfindung wurden mit dem allgemeinen Reaktionsschema hergestellt, das oben offenbart ist, und/oder mit den Verfahren von Beispiel 1 und 2, und in der folgenden Tabelle dargestellt.
Tabelle Repräsentative Verbindungen
BEISPIEL 4
CRF-REZEPTOR-BINDUNGSAKTIVITÄT
Die Verbindungen dieser Erfindung können mit einem standardmäßigen Radioliganden-Bindungstest, wie allgemein beschrieben von DeSouza et al. (J. Neurosci. 7: 88–100, 1987), auf Bindungsaffinität an den CRF-Rezeptor bewertet werden. Durch Verwendung verschiedener radioaktiv markierter CRF-Liganden kann der Test verwendet werden; um die Bindungsaktivität der Verbindungen der vorliegenden Erfindung mit jedem CRF-Rezeptor-Untertyp zu bewerten. Kurz gesagt, umfaßt der Bindungstest die Verdrängung eines radioaktiv markierten CRF-Liganden vom CRF-Rezeptor.
Genauer gesagt, wird der Bindungstest durchgeführt in einem 1,5 ml-Eppendorfröhrchen unter Verwendung von ungefähr 1 × 10⁶ Zellen pro Röhrchen, die mit menschlichen CRF- Rezeptoren stabil transfiziert sind. Jedes Röhrchen erhält etwa 0,1 ml Testpuffer (z. B. Dulbecco's Phosphatgepufferte Kochsalzlösung, 10 mM Magnesiumchlorid, 20 μM Bacitracin) mit oder ohne nicht-markiertes Sauvagin, Urotensin I oder CRF (Endkonzentration, 1 μM), um nicht-spezifische Bindung zu bestimmen, 0,1 ml [¹²⁵I]-Tyrosin-Schafs-CRF (Endkonzentration ~ 200 pM oder ungefähr der Kp, wie bestimmt mit der Scatchard-Analyse) und 0,1 ml einer Membransuspension von Zellen, die den CRF-Rezeptor enthalten. Die Mischung wird für 2 Stunden bei 22°C inkubiert, gefolgt von der Trennung des gebundenen und freien Radioliganden durch Zentrifugation. Im Anschluß an zwei Waschungen der Pellets werden die Röhrchen unmittelbar oberhalb des Pellets abgeschnitten und in einem Gammazähler auf Radioaktivität bei ungefähr 80% Leistung überwacht. Alle Radioliganden-Bindungsdaten können unter Verwendung des nicht-linearen Kurvenanpassungsprogramms nach der Methode der kleinsten Quadrate LIGAND von Munson und Rodbard (Anal. Biochem. 107: 220, 1990) analysiert werden.
BEISPIEL 5
CRF-STIMULIERTE ADENYLATCYCLASE-AKTIVITÄT
Die Verbindungen der vorliegenden Erfindung können auch durch verschiedene funktionelle Tests bewertet werden. Die Verbindungen der vorliegenden Erfindung können zum Beispiel auf CRF-stimulierte Adenylatcyclase-Aktivität gescreent werden. Ein Test zur Bestimmung von CRF-stimulierter Adenylatcyclase-Aktivität kann durchgeführt werden, wie allgemein beschrieben von Battaglia et al. (Synapse 1: 572, 1987), mit Modifikationen, um den Test an Vollzellpräparate anzupassen.
Genauer gesagt, kann die standardmäßige Testmischung folgendes in einem Endvolumen von 0,5 ml enthalten: 2 mM L-Glutamin, 20 mM HEPES und 1 mM IMBX in DMEM-Puffer. In Stimulierungsstudien werden Vollzellen mit den transfizierten CRF-Rezeptoren in Platten mit 24 Vertiefungen plattiert und für 1 h bei 37°C mit verschiedenen Konzentrationen von mit CRF zusammenhängenden und nicht-zusammenhängenden Peptiden inkubiert, um das pharmakologische Rangfolgeprofil des bestimmten Rezeptor-Untertyps zu etablieren. Im Anschluß an die Inkubation wird das Medium abgesaugt, die Vertiefungen einmal vorsichtig mit frischem Medium gespült und das Medium abgesaugt. Um die Menge an intrazellulärem cAMP zu bestimmen, werden 300 μl einer Lösung von 95%-Ethanol und 20 mM wäßriger Salzsäure zu jeder Vertiefung zugegeben und die resultierenden Suspensionen werden bei –20°C für 16 bis 18 Stunden inkubiert. Die Lösung wird in 1,5 ml-Eppendorfröhrchen überführt und die Vertiefungen mit zusätzlichen 200 μl Ethanol/wäßrige Salzsäure gewaschen und mit der ersten Fraktion gepoolt. Die Proben werden lyophiliziert und anschließend mit 500 μl Natriumacetat-Puffer erneut suspendiert. Die Messung von cAMP in den Proben wird durchgeführt unter Verwendung eines Einzelantikörperkits von Biomedical Technologies Inc. (Stoughton, MA). Für die funktionelle Bewertung der Verbindungen wird eine einzelne Konzentration von CRF oder damit zusammenhängenden Peptiden, die 80% Stimulation der cAMP-Produktion bewirkt, zusammen mit verschiedenen Konzentrationen von konkurrierenden Verbindungen inkubiert (10^–12 bis 10^–6 M).

Claims

Verbindung mit der folgenden Struktur:
und Stereoisomere und pharmazeutisch annehmbare Salze derselben, wobei: n 1 oder 2 ist; m 0, 1, 2 oder 3 ist; X N oder CR' ist; R ein fakultativer Substituent ist, der, bei jedem Auftreten, unabhängig C_1-6-Alkyl, C_3-6-Alkenyl, C_1-6-Alkylidenyl oder C_1-6-AlkylAr ist; R' Wasserstoff, Halogen oder C_1-6-Alkyl ist; R₁ -C(H)_0,1(R₃)(R₄), -CH₂C=CH oder -CH₁C(=O)NH₂ ist; R₂ Wasserstoff oder C_1-6-Alkyl ist; R₃ Wasserstoff, Keto, C_1-6-Alkyl, Mono- oder Di(C_3-6-cycloalkyl)methyl, C_3-6-Cycloalkyl, C_3-6-Alkenyl, Hydroxy-C_1-6-alkyl, C_1-6-Alkylcarbonyloxy-C_1-6-alkyl oder C_1-6-Alkyloxy-C_1-6-alkyl ist und R₄ Wasserstoff, Ar¹, C_1-6-AlkylAr¹, OAr¹, C_1-6-Alkyl, C_1-6-Alkyloxy, C_3-6-Cycloalkyl, Mono- oder Di(C_3-6-cycloalkyl)methyl, C_3-6-Alkenyl, C_3-6-Alkinyl, C_1-6-Alkyloxy-C_1-6-alkyl, C_1-6-AlkoxyAr¹, Hydroxy-C_1-6-alkyl, Thienyl-C_1-6-alkyl, Furanyl-C_1-6-alkyl, C-_1-6-Alkylthio-C_1-6-alkyl, Morpholinyl, Mono- oder Di(C_1-6-alkyl)amino-C_1-6-alkyl, Amino, (C_1-6-Alkyl)amino, Di(C_1-6-alkyl)amino, (C_1-6-AlkylAr¹)amino, (C_1-6-Alkyl)(Ar¹)amino, C_1-6-Alkylcarbonyl-C_1-6-alkyl, C_1-6-Alkylcarbonyloxy-C_1-6-alkyl, Sulfonyl-(C_1-8-alkyl), C(=O)-C_1-6-Alkyl, C_1-8-Alkyl, substituiert mit Phthalimid, Ar¹, OAr¹, NHAr¹, C(=O)Ar¹, C(=O)NHAr¹ oder -C(=O)NH₂, oder ein Rest der Formel -(C_1-6-Alkandiyl)-Y-(CO)_0,1-Ar¹ ist, wobei Y O, NH oder eine direkte Bindung ist, oder R₃ und R₄ zusammengenommen mit dem Kohlenstoffatom, an das sie gebunden sind, ein C_5-8-Cycloalkyl, ein C_5-8-Cycloalkenyl, einen C_3-12-Heterozyklus, Phenyl, Naphthyl oder ein C_5-8-Cycloalkyl, kondensiert an Ar¹, bilden, wobei jedes davon fakultativ mit einem oder mehreren Substituenten substituiert ist, die unabhängig ausgewählt sind aus C_1-6-Alkyl; Ar Phenyl, Naphthyl oder ein aromatischer C_3-12-Heterozyklus ist, jedes fakultativ mit 1, 2 oder 3 Substituenten substituiert, die unabhängig ausgewählt sind aus Halo, C_1-6-Alkyl, Trifluormethyl, O(Trifluormethyl), Hydroxy, Cyano, C_1-6-Alkyloxy, Phenoxy, Benzoxy, C_1-6-Alkylthio, Nitro, Amino, Mono- oder Di(C_1-6-alkyl)amino, (C_1-6-Alkyl)(C_1-6-alkanoyl)amino oder Piperidinyl, oder wobei zwei Substituenten zusammengenommen ein C_1-6-Alkylidinyl oder ein C_1-6-Alkylidenyl sind, wobei ein, zwei oder drei Kohlenstoffatome durch ein Heteroatom ersetzt sind, das einzeln ausgewählt ist aus Sauerstoff, Stickstoff oder und Schwefel; und Ar¹ Phenyl, Naphthyl oder ein aromatischer C_3-12-Heterozyklus ist, wobei jedes davon fakultativ mit 1, 2 oder 3 Substituenten substituiert ist, die unabhängig ausgewählt sind aus Halo, C_1-6-Alkyl, C_1-6-Alkyloxy, Di(C_1-6-alkyl)amino, Di(C_1-6-alkyl)amino-C_1-6-alkyl, Trifluormethylsulfonyl-(C_1-6-alkyl) und C_1-6-Alkyl, substituiert mit Morpholinyl.
Verbindung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß n 1 ist.
Verbindung nach Anspruch 2, mit der Struktur
Verbindung nach Anspruch 2, mit der Struktur
Verbindung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß n 2 ist.
Verbindung nach Anspruch 5, mit der Struktur
Verbindung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß m 0 ist.
Verbindung nach Anspruch 7, mit der Struktur:
Verbindung nach Anspruch 7, mit der Struktur:
Verbindung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß m 1 ist.
Verbindung nach Anspruch 10, mit der Struktur:
Verbindung nach Anspruch 10, mit der Struktur:
Verbindung nach Anspruch 10, mit der Struktur:
Verbindung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß X CR' ist und R' Wasserstoff ist.
Verbindung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß X N ist.
Verbindung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß R C_1-6-Alkyl ist.
Verbindung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß R Methyl oder Ethyl ist.
Verbindung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß R Ethyl ist.
Verbindung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß Ar 2,4,6-Trimethylphenyl, 2-Chlor-4-methylphenyl, 2-Chlor-4-methoxyphenyl, 2-Brom-4-methylphenyl, 2-Methyl-4-chlorphenyl, 2-Methyl-4-bromphenyl, 2-Brom-4-isopropylphenyl, 2,4-Dichlorphenyl, 2,6-Dimethyl-4-bromphenyl, 4-Chlorphenyl, 2,4-Dimethoxyphenyl, 2,4-Dimethylphenyl, 2-Methoxyphenyl, 3-Methoxyphenyl, 4-Methoxyphenyl, 2-Methyl-4-methoxyphenyl, 3,4-Dimethoxyphenyl, 3,5-Dimethoxyphenyl, 4-Trifluormethylphenyl, 2,4,6-Trifluorphenyl, 2-Methyl-4-N(ethyl)₂-phenyl, 2-Brom-4-(OCF₃)phenyl, 4-Dimethylamino-2-methylpyrdin-3-yl, 4-Dimethylamino-6-methylpyridin-3-yl, 4-Dimethylamino-pyridin-3-yl, 4-N(CH₃)(Ac)phenyl, 5-Methylisoxazol-3-yl, 3,4-Methylendioxyphenyl oder 3,4-Ethylendioxyphenyl ist.
Verbindung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß Ar 2,4,6-Trimethylphenyl, 2-Methyl-4-chlorphenyl, 2-Chlor-4-methylphenyl, 2,4-Dichlorphenyl, 2,6-Dimethyl-4-bromphenyl, 2-Brom-4-methylphenyl, 4-Methoxyphenyl oder 4-Chlorphenyl ist.
Verbindung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß R₁ Methyl, Ethyl, n-Propyl, Isopropyl, n-Butyl, Isobutyl, tert.-Butyl, n-Pentyl, Isopentyl, Neopentyl, -CH(ethyl)₂, -CH(n-propyl)₂, -CH(n-butyl)₂, -CH₂CH₂OCH₃, -CH(methyl)(CH₂OCH₃), -CH(ethyl)(CH₂OCH₃), -CH(n-propyl)(CH₂OCH₃), -CH(n-butyl)(CH₂OCH₃), -CH(tert-butyl)(CH₂OCH₃), -CH(CH₂OCH₃)₂, -CH(benzyl)(CH₂OCH₃), -CH(4-chlorbenzyl)(CH₂OCH₃), -CH(CH₂OCH₃)(CH₂CH₂SCH₃), -CH(ethyl)(CH₂-Obenzyl), -CH(methyl)(ethyl), -CH(methyl)(n-propyl), -CH(methyl)(n-butyl), -CH(methyl)(n-pentyl), -CH(methyl)(CH₂CH₂CH₂CH(CH₃)₂), -CH(ethyl)(n-propyl), -CH(ethyl)(n-butyl), -CH(ethyl)(n-pentyl), -CH(n-propyl)(n-butyl), -CH(n-propyl)(n-pentyl), Cyclopropyl, Cyclobutyl, Cyclohexyl, 2-Methylcyclohexyl, 3-Methylcyclohexyl, 1,2,3,4- Tetrahydronaphthyl (1 und 2), Benzyl, 2-Chlorbenzyl, -CH(methyl)(benzyl), -CH(ethyl)(benzyl), -CH(n-propyl)(benzyl), -CH(n-butyl)(benzyl), -CH₂(cyclopropyl), -CH₂(cyclobutyl), CH₂CH(methyl)CH₂CH₃, -CH₂-CH(ethyl)CH₂CH₃, -CH₂C(methyl)₃, -CH₂C(=O)ethyl, -C(=O)cyclopropyl, -C(=O)NHbenzyl, -C(=O)methyl, -C(=O)benzyl, -C(=O)phenyl, -C(=O)ethyl, -C(=O)CH₂C(=O)Oethyl, -C(=O)CH(phenyl)ethyl, C(=O)pyridyl, -C(=O)(4-N,N-dimethylamino)phenyl, -C(=O)CH₂Omethyl, -C(=O)CH(ethyl)₂, -C(=O)n-butyl, -C(=O)CH₂CH₂(methyl)₂, -C(=O)n-propyl, -C(=O)CH₂CH₂phenyl, -CH₂pyridyl, -CH₂CH₂NHphenyl, -CH₂CH₂C(=O)Oethyl, -CH₂CH₂CH₂phenyl, -CH₂CH₂-N-phthalimid, -CH₂CH₂CH₂C(=O)Oethyl, -CH₂CH₂Oethyl, CH₂CH(methyl)₂, -CH₂C(=O)Oethyl, -CH₂C(=O)pyrrolidinophenyl, -CH₂CH₂Ophenyl, -CH₂CH₂CH₂CH₂-N-phthalimid, -CH₂C(=O)Ot-butyl, -CH₂CH₂CH(methyl)₂, -CH₂-4-(SO₂CH₃)phenyl, -CH₂CH₂pyrolyl und Benzyl ist.
Verbindung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß R₁ -CH(ethyl)₂, -CH(n-propyl)₂, -CH(ethyl)(n-butyl) oder -CH(ethyl)(n-pentyl) ist.
Pharmazeutische Zusammensetzung, die eine Verbindung nach Anspruch 1 und einen pharmazeutisch annehmbaren Trägerstoff umfaßt.
Pharmazeutische Zusammensetzung nach Anspruch 23, zur Verwendung in einem Verfahren zur Behandlung einer Erkrankung, die sich durch Hypersekretion von CRF manifestiert, in einem warmblütigen Tier, das dieser bedarf, durch Verabreichung einer wirksamen Menge der Zusammensetzung an das Tier.
Zusammensetzung nach Anspruch 24, dadurch gekennzeichnet, daß die Erkrankung Schlaganfall ist.
Zusammensetzung nach Anspruch 24, dadurch gekennzeichnet, daß die Erkrankung Depression, Angstzustände, Panikzustände, obsessiv-kompulsive Erkrankung, abnorme Aggression, instabile Angina, reaktiver Bluthochdruck, Anorexia nervosa, Bulimie, Reizkolon, entzündliche Darmerkrankung, stressinduzierte Immunsuppression, Entzündung, Cushing-Erkrankung, Drogenmißbrauch oder – entzug, infantile Spasmen oder Epilepsie ist.
Verbindung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die Verbindung eine der folgenden Strukturen besitzt: