DE69832520T2

DE69832520T2 - Verwendung von konjugierten linoleinsäure zur behandlung von type ii diabetes

Info

Publication number: DE69832520T2
Application number: DE69832520T
Authority: DE
Inventors: P. John VANDEN HEUVEL; A. Martha BELURY; W. Louise PECK
Original assignee: Penn State Research Foundation; Purdue Research Foundation
Current assignee: Penn State Research Foundation; Purdue Research Foundation
Priority date: 1997-12-12
Filing date: 1998-12-11
Publication date: 2006-08-10
Anticipated expiration: 2018-12-12
Also published as: EP1037624A4; DE69832520D1; US20050282897A1; JP2001525364A; WO1999029317A1; CA2313626A1; EP1037624B1; AU1911999A; EP1037624A1; ES2252874T3; ATE310511T1

Description

HINTERGRUND DER ERFINDUNG
Gegenstand der Erfindung ist die Behandlung von Diabetes mellitus Typ II.
Diabetes stellt eine der am häufigsten vorkommenden metabolischen Erkrankungen dar und betrifft Hunderte von Millionen Menschen weltweit. Es gibt zwei Formen des Diabetes mellitus: Typ 1 (insulinabhängig) und Typ II (nicht-insulinabhängig). Die Erkrankung kann zu ernsthaften Komplikationen, einschließlich Hyperglykämie, Makroangiopathie, Mikroangiopathie, Neuropathie, Nephropathie und Retinopathie führen. Verfahren zur Behandlung von Diabetes schlossen die Verabreichung von Insulin im Fall von Typ-I-Diabetes und Verabreichung verschiedener Hypoglykämika im Fall des Typ-II-Diabetes ein. Viele der bekannten Hypoglykämika weisen unerwünschte Nebenwirkungen auf und sind in bestimmten Fällen toxisch.
ZA-A-9 603 360 betrifft eine große Reihe verschiedener therapeutischer Anwendungen für Mono- oder Diester von 1,3-Propandiol, worin der/die Säurerest(e) 12–30 Kohlenstoffatome aufweist/aufweisen. Die ZA-Beschreibung offenbart (unter vielen anderen Möglichkeiten) die Verwendung von Diestern von 1,3-Propandiol, worin eine der Veresterungssäuren GLA oder DGLA darstellt und die andere GLA, DGLA, SA, EPA, DAJ, CLA oder CA zur Behandlung der „Komplikationen des Diabetes" und der „Verbesserung des Ansprechens auf Insulin bei Diabetes und Prädiabetes" darstellt.
US-A-5 518 751 (entspricht EP-A-0 624 317) offenbart die Herstellung von Milch und Milchpulvern, die eine Fettfraktion, enthaltend ungesättigte freie Fettsäuren (z. B. Ölsäure, Linolsäure (die gegebenenfalls konjugiert sein kann), α-Linolensäure und ungesättigte C₂₀- und C₂₂-Fettsäuren) inkorporiert. Die Fettsäuren sind zum Zweck der Prävention oder Reduktion von kardiovaskulären Erkrankungen, Atrophien, rheumatischen Erkrankungen oder Diabetes eingeschlossen.
US-A-5 208 356 offenbart im Wesentlichen reine, nicht toxische Salze und Ester von konjugierter Linolsäure (CLA), die als Antioxidanzien und als Inhibitoren des Schimmelwachstums nützlich sind. Verfahren zur Herstellung des cis-9-, trans-11-Isomers der Linolsäure sind auch offenbart.
US-A-5 585 400 offenbart die Behandlung von Tieren wegen der unerwünschten Wirkungen der Typ-I- oder I_gE-vermittelten Hypersensitivität im Tier durch Verabreichung von CLA (oder einer Substanz, die im Tier in CLA umgewandelt wird).
Journal of Nutrition, Vol. 124, Nr. 5, 1994, Seiten 694–701, offenbart, dass CLA in üblichen, aber nicht keimfreien Ratten, die mit Linolsäure gefüttert wurden, gebildet wird.
Demzufolge besteht ein Bedarf an zusätzlichen Verwendungszwecken von Zusammensetzungen zur Behandlung von Diabetes mellitus Typ II. Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist das Ansprechen dieses Bedarfs.
Diese und andere erfindungsgemäßen Aufgaben und Vorteile werden in der Beschreibung hierin erkannt werden.
KURZE BESCHREIBUNG DER FIGUREN
1 zeigt den Wirkmechanismus von Peroxisom-Proliferatoren.
2 veranschaulicht grafische Darstellungen von der Menge der als einen prozentualen Anteil der Kontrolle versus der Konzentration von CLA und 100 μM von Wy 14,643 mit verschiedenen PPAR-Subtypen produzierten Chloramphenicol-Acetyltransferase. Linkes Feld, PPARα; mittleres Feld, PPARβ; rechtes Feld, PPARγ.
3 veranschaulicht die biologischen Wirkungen der Peroxisom-Proliferator-aktivierten Rezeptor-Aktivierung (PPAR-Aktivierung) durch CLA.
4 stellt Balkendiagramme dar, die das Ausmaß zeigen, mit dem verschiedene CLA-Isomere die 3 verschiedenen PPAR-Subtypen aktivieren. Alle Chemikalien wurden zu 100 μM in Dimethylsulfoxid (DMSO) gegeben. Positive Kontrollen für PPARα (Wy 14,643), PPARβ (Bezafibrat; 2-[4-(2-[(4-Chlorbenzoyl)amino]-ethyl]phenoxy]-2-methylpropionsäure]) und PPARγ (Troglitazon) werden zum Vergleich gezeigt. Das verwendete Furan stellt 8-(5-Hexyl-2-furyl)-octansäure dar, bei der es sich um ein Oxidationsprodukt von CLA handelt. Die Daten veranschaulichen den Durchschnitt der beiden Experimente.
5 stellt Balkendiagramme dar, die das Ausmaß zeigen, mit dem CLA und verschiedene CLA-Isomere PPARα voller Länge aktivieren. Feld A: zeigt die Aktivierung von Maus-PPARα voller Länge durch CLA. Transfizierte Zellen wurden sechs Stunden mit zunehmenden Konzentrationen eines CLA-Gemischs (0 μM, 5 μM, 10 μM, 50 μM, 100 μM, 150 μM oder 200 μM) behandelt. Asterisken kennzeichnen die Werte, die signifikant von den mit DMSO behandelten Zellen abweichen (p < 0,05, n = 3); Feld B: zeigt die Aktivierung von mPPARα voller Länge durch verschiedene geometrische Isomere von CLA. Transfizierte Zellen wurden sechs Stunden mit 100 μM von jedem der gezeigten Aktivatoren behandelt. Verschiedene Buchstaben kennzeichnen signifikante Unterschiede (p < 0,05, n = 3).
6 stellt ein Balkendiagramm dar, das das Ausmaß zeigt, mit dem CLA und verschiedene CLA-Isomere Maus-PPARβ voller Länge aktivieren. Transfizierte Zellen wurden mit 100 μM der angezeigten Verbindungen behandelt. Asterisken kennzeichnen signifikante Unterschiede (p < 0,01, n = 3).
7 stellt ein Balkendiagramm dar, das das Ausmaß zeigt, mit dem CLA und verschiedene CLA-Isomere Maus-PPARγ voller Länge aktivieren. Transfizierte Zellen wurden sechs Stunden mit 100 μM der angezeigten Verbindungen behandelt. Asterisken kennzeichnen signifikante Unterschiede (p < 0,05, n = 3).
8 veranschaulicht ein Balkendiagramm, das die Wirkungen von CLA auf Marker der Differenzierung in 3T3-L1-Präadipocyten zeigt. Präadipocyten-Zellen von der Maus wurden 48 Stunden bei Konfluenz mit Induktionsmedium behandelt, das die angezeigten CLA-Konzentrationen 100 μM Wy 14,643 (Wy) oder Vehikel (DMSO) enthält. Daran anschließend wurde den Zellen Induktionsmedium mit Insulin zugefügt. Eine quantitative RT-PCR wurde unter Verwendung von für jedes Gen spezifischen internen Standards durchgeführt. Die Daten werden als der Durchschnitt von drei Proben als ein prozentualer Anteil von mit DMSO behandelten Zellen, die für die β-Aktin-Expression bereinigt wurden, ausgedrückt.
9 veranschaulicht ein Balkendiagramm, dass die Wirkungen von CLA und Troglitazon (TZD) auf die Gewebe-spezifische Genexpression zeigt. ACO und mAP2 wurden mittels der RT-PCR quantifiziert. Asterisken kennzeichnen einen statistisch signifikanten Unterschied von mit der Kontrollration gefütterten Ratten (P < 0,05).
10 stellt Diagramme dar, die die Wirkung von CLA in der Ernährung auf die Glucosetoleranz zeigen. Zucker(„lean")-(Feld A) oder Zucker(fa/fa)-Ratten („obese", Feld B) wurden 14 Tage experimentelle Rationen verfüttert und es wurde die Glucosetoleranz gemessen. Die Werte stellen das Mittel der Glucose (mg/dl) ± SD (n = 4 Zucker(„lean")-Ratten oder 8 Zucker(fa/fa)-Ratten) dar.
BESCHREIBUNG DER BEVORZUGTEN AUSFÜHRUNGSFORMEN
Für den Zweck der Förderung des Verständnisses der erfindungsgemäßen Prinzipien wird nun auf die bevorzugten Ausführungsformen verwiesen und eine spezifische Ausdrucksweise wird zur Beschreibung derselben verwendet.
Gegenstand der Erfindung ist die Behandlung von Diabetes mellitus Typ II durch Verabreichung einer therapeutisch wirksamen CLA-Menge. Die Verabreichung von CLA normalisiert vorteilhaft die Glucosetoleranz bei diabetischen Tieren und reduziert auch die Insulin-, Triglycerid- und freien Fettsäurespiegel im Plasma.
Die Erfindung kann gegebenenfalls die Verwendung gereinigter Gemische aus CLA-Isomeren oder gereinigten Gemischen aus CLA-Isomeren, wie z. B. eine therapeutisch wirksame Menge an gereinigter cis,cis-9,11-Octadecadiensäure, gereinigter trans,cis-10,12-Octadecadiensäure, ein Gemisch aus gereinigter cis,trans-9,11-Octadecadiensäure und trans,cis-9,11-Octadecadiensäure oder ein anderes gereinigtes CLA-Isomer betreffen.
Die Erfindung betrifft die Anwendung bei einem Tier zur Behandlung von Diabetes mellitus Typ II einer therapeutisch wirksamen Menge an CLA, einschließlich Salzen davon, Estern davon (einschließlich zum Beispiel Monoglyceriden, Diglyceriden und Triglyceriden), aktiver Isomere davon und Gemischen davon. CLA verweist auf eine Gruppe positioneller und geometrischer Isomere von Linolsäure (cis,cis-9,12-Octadecadiensäure). Die positionellen Isomere schließen Isomere mit Doppelbindungen an entweder Kohlenstoffatomen 9 und 11 oder Kohlenstoffatomen 10 und 12 ein, wohingegen die geometrischen Isomere Isomere mit der cis- und/oder trans-Konfiguration einschließen. Folglich gibt es mehrere mögliche Isomere von CLA, einschließlich, aber nicht beschränkt auf cis,cis-9,11-Octadacadiensäure; cis,trans-9,11-Octadecadiensäure; trans,cis-9,11-Octadecadiensäure; trans,trans-9,11-Octadecadiensäure; cis,cis-10,12-Octadecadiensäure; cis,trans-10,12-Octadecadiensäure; trans,cis-10,12-Octadecadiensäure und trans,trans-10,12-Octadecadiensäure. Die cis,trans-9,11- und trans,cis-9,11-Isomere wurden bisher noch nicht unabhängig voneinander isoliert und die Literatur verwendet den Begriff cis,trans-9,11-Octadecadiensäure ziemlich frei, um auf die cis,trans-9,11- wie auch die trans,cis-9,11-Isomere zu verweisen.
Das erfindungsgemäß genutzte CLA kann unter Verwendung von im Stand der Technik und aus der Literatur bekannten Verfahren hergestellt werden oder kann als ein gewerbliches Produkt bezogen werden. CLA kann gewerblich zum Beispiel von Unternehmen, wie zum Beispiel Pharmanutrients, Inc., Lake Bluff, IL; NuChek Prep, Elysian MN; und Peak Nutrition, Syracuse, NE, bezogen werden. Das von NuCheck Prep angebotene CLA ist jedoch bevorzugt. Die relativen Anteile der Isomere können in gewerblich erhältlichen CLA variieren. Die gewerblich erhältliche Zusammensetzung kann auch andere Fettsäuren, wie zum Beispiel Linolsäure ebenso wie andere Lipide, wie zum Beispiel geradkettige Kohlenwasserstoffe mit polaren Endgruppen einschließen. Das CLA-Gemisch kann zum Beispiel andere im Stand der Technik bekannte Fettsäuren, gesättigte und ungesättigte, oder Abbauprodukte von CLA einschließen. Die gewerblich erhältliche Zusammensetzung kann auch Antioxidanzien, wie zum Beispiel Vitamin E, butyliertes Hydroxyanisol (BHA) oder butyliertes Hydroxytoluen (BHT) einschließen. CLA kann auch mittels im Stand der Technik bekannter Verfahren synthetisiert werden. So kann CLA zum Beispiel aus der Isomerisation von Linolsäure synthetisiert werden, wobei man zum Beispiel eine Radikale bildende Spezies und ein Protein reich an Schwefelresten verwendet, wie im Stand der Technik bekannt und in Dormandy TL, Wickens DG, Chem. Phys. Lipids 45: 353–64 (1987) beschrieben ist. CLA kann als ein anderes Beispiel aus entweder Linolsäure oder Safloröl durch Erhitzen der Linolsäure oder des Safloröls in einer inerten Atmosphäre mit anschließender Ansäuerung und Extraktionen wie in US-Patent Nr. 5670082 an Cook et al. beschrieben, synthetisiert werden. Spezifische Isomere von CLA, wie zum Beispiel das trans,trans-9-11-, das cis,cis-9,11-Isomer, die cis,trans-9,11- (in Kombination mit dem trans,cis-9,11-Isomer) und die cis,trans-10,12-Isomere können derzeit anhand von im Stand der Technik bekannten Verfahren in reiner Form synthetisiert werden. Die Salze von CLA stellen die im Stand der Technik, einschließlich der Natrium- und Kaliumsalze dar.
Zum Synthetisieren von CLA verwendete Linolsäure oder andere in das Gemisch eingeschlossene Fettsäuren können aus pflanzlichen Quellen, einschließlich Sojabohnen-, Baumwollsamen-, Mais-, Sonnenblumen-, Saflor-, Canola- und Palmölen gewonnen werden. Sojabohnen-, Mais-, Sonnenblumen- und Safloröl sind besonders reich an Linolsäure. Linolsäure kann auch mittels Hydrolyse von aus Pflanzenquellen isolierten Triglyceriden anhand von im Stand der Technik bekannten Verfahren isoliert werden. So können Triglyceride zum Beispiel durch Lösungsmittelextraktion der Pflanzenbiomasse unter Verwendung aliphatischer Lösungsmittel aus Pflanzenquellen gewonnen werden. Die sich anschließende zusätzliche Reinigung kann die Destillation, fraktionierte Kristallisation, Entschleimung, das Bleichen und Dampfstripping beinhalten. Die Triglyceride können gegebenenfalls hydriert werden. Danach können die Triglyceride entweder durch im Stand der Technik bekannte enzymatische (z. B. durch Verwendung von Lipase) oder chemische Verfahren (z. B. allcalische Hydrolyse) hydrolysiert werden. Linolsäure kann auch aus petrochemischen Fettalkoholen synthetisiert werden. Als Alternative können freie Fettsäuren und Triglyceride aus gewerblichen Quellen, einschließlich Cargill, Archer Daniel Midlands and Central Soya bezogen werden.
CLA kommt auch im Fleisch von Wiederkäuern, pasteurisierten Milchprodukten und Schmelzkäse vor. Die Menge von CLA in Milchprodukten kann überdies anhand von im Stand der Technik bekannten Verfahren erhöht werden. Die Menge von CLA in Kuhmilch kann zum Beispiel durch Verfütterung an eine laktierende Kuh einer lediglich aus Gras bestehenden Ration oder einer, die ca. 1 Gew.-% bis ca. 5 Gew.-% eines wie im US-Patent Nr. 5770247 an Satter et al. beschriebenen pflanzlichen Öls, enthaltend Linolsäure oder Linolensäure, erhöht werden. Wie im Stand der Technik bekannt ist, kann CLA auch durch enzymatische Umwandlung von Linolsäure erhalten werden. So kann CLA zum Beispiel durch Verwendung des Enzyms W¹¹-cis,W¹¹-trans-Isomerase hergestellt werden. Das Enzym kann zum Beispiel aus Bakterien im Pansen, wie zum Beispiel Butyrivibrio fibrisolvens, gewonnen werden Harmlose Mikroorganismen im Darmtrakt von Ratten und anderen monogastrischen Tieren können, wie in Chin, S. F. et al., FASEB J., 6 (1992) beschrieben, auch Linolsäure in CLA umwandeln.
CLA kann in verschiedenen Formen verabreicht werden. CLA kann zum Beispiel in Tablettenform, in einer Lösung oder Emulsion oder in einer Kapsel, verabreicht werden. CLA kann auch mit einem pharmazeutisch verträglichen Träger vermischt werden. In Tablettenform kann ein fester Träger zum Beispiel Lactose, Stärke, Carboxymethylcellulose, Dextrin, Calciumphosphat, Calciumcarbonat, synthetisches oder natürliches Calciumsilikat, Magnesiumoxid, trockenes Aluminiumhydroxid, Magnesiumstearat, Natriumbicarbonate, Trockenhefe oder eine Kombination davon einschließen. Der Träger kann in Lösung ein Öl darstellen, stellt aber bevorzugt steriles Wasser oder eine sterile Kochsalzlösung zur parenteralen Verabreichung dar. CLA kann auch in Formen verabreicht werden, in denen andere im Stand der Technik bekannte Arzneimittel verabreicht werden.
CLA kann auf viele verschiedene Weisen verabreicht werden. So kann CLA zum Beispiel parenteral, wie zum Beispiel oral, intravenös, rektal ebenso wie intraperitoneal verabreicht werden.
In einem anderen erfindungsgemäßen Merkmal wurde entdeckt, dass bestimmte CLA-Isomere eine höhere Aktivität aufweisen. Demzufolge können gereinigte CLA-Isomere an Tiere verabreicht werden, die einen Bedarf daran haben, und können einem Nahrungsmittelprodukt zur Bildung einer Nahrungsmittelzusammensetzung zugefügt werden. Die CLA-Isomere können einem Nahrungsmittelprodukt in jedweder Form, wie zum Beispiel einem Pulver oder in einem Öl, wie zum Beispiel Maisöl, entweder allein oder mit einem anderen Öl, wie zum Beispiel Kokosnussöl, zugefügt werden. Eine bevorzugte Nahrungsmittelzusammensetzung schließt CLA, überwiegend (d. h. zu mehr als 50%) bestehend aus einem Gemisch aus gereinigter cis,trans-9,11-Octadecadiensäure und trans,cis-9,11-Octadecadiensäure ein. Eine andere vorteilhafte Nahrungsmittelzusammensetzung kann ein Gemisch einschließen, das überwiegend aus cis,cis-9,11-Octadecadiensäure oder trans,cis-10,12-Octadecadiensäure besteht. In einer weiteren bevorzugten Ausführungsform kann die Nahrungsmittelzusammensetzung ein Gemisch aus gereinigter cis,trans-9,11-Octadecadiensäure und trans,cis-9,11-Octadecadiensäure einschließen. In Bezug auf den hierin verwendeten Begriff „gereinigt", der auf ein bestimmtes CLA-Isomer oder ein Gemisch aus Isomeren verweist, versteht man eine CLA-Zusammensetzung, die nicht mehr als 10 Gew.-% CLA-Isomere mit Ausnahme der spezifizierten enthält. Das identifizierte Isomer oder Gemisch enthält bevorzugt nicht mehr als 5 Gew.-% und bevorzugter nicht mehr als 3 Gew.-% der anderen CLA-Isomere. Die Nahrungsmittelzusammensetzung kann gereinigte cis,cis-9,11-Octadecadiensäure oder andere gereinigte CLA-Isomere, einschließlich trans,cis-10,12-Octadecadiensäure enthalten. In weiteren Ausführungsformen kann die Nahrungsmittelzusammensetzung ein gereinigtes Gemisch aus CLA einschließen. So kann CLA zum Beispiel in unterschiedlichen Ausmaßen gereinigt werden, um ein gereinigtes CLA-Gemisch, das nicht alle CLA-Isomere einschließt, herzustellen. Die gereinigten CLA-Isomere können in jedwedes Nahrungsmittelprodukt, einschließlich zum Beispiel Cerealien, Fleisch, Eier, Käse und andere Milchprodukte, Gemüse, Brot und andere Produkte auf Mehl- und Kleiebasis und Konditoreiprodukte eingeschlossen werden. Die CLA-Isomere können auch jedweder genießbaren Flüssigkeit zugefügt werden, könnten gegebenenfalls aber verschiedene Emulgatoren zur Auflösung erforderlich machen.
Die verabreichte therapeutisch wirksame Menge weist eine vorteilhafte Wirkung auf ein Tier mit Diabetes mellitus Typ II auf. So ist zum Beispiel die therapeutisch wirksame Menge gegebenenfalls ausreichend, um die Glucosetoleranz in einem an Diabetes leidenden Tier zu normalisieren. Die Normalisierung der Glucosetoleranz kann zum Beispiel durch einen wie im Stand der Technik bekannten und wie in den nachstehenden Beispielen beschriebenen Glucosetoleranztest bestimmt werden. Die verabreichte CLA-Menge ist überdies bevorzugt auch ausreichend, um den Insulinspiegel im Blut zu senken und/oder den Spiegel der zirkulierenden freien Fettsäuren oder der Triglyceride zu reduzieren. Die Blutspiegel von Insulin, freien Fettsäuren und Triglyceriden werden gegebenenfalls um mindestens ca. 5%, bevorzugter um mindestens ca. 20% und weiter am bevorzugtesten um mindestens ca. 50% reduziert. Die Menge der an Tiere mit Diabetes mellitus Typ II verabreichten CLA variiert in Abhängigkeit vom Alter des Tieres, dem allgemeinen Gesundheitszustand des Tieres und dem Schweregrad seiner diabetischen Erkrankung. Es besteht jedoch die Erwartung, dass ein wegen Diabetes mellitus Typ II behandeltes Tier im Allgemeinen mindestens 1 mg CLA/kg Körpergewicht/Tag bis zur Höchstdosis, die für das Tier nicht toxisch ist, erhält. Ein Tier kann in der Regel 1 mg CLA/kg Körpergewicht/Tag bis zu 10 000 mg CLA/kg Körpergewicht/Tag erhalten. Es wird jedoch erwartet, dass relativ niedrige Dosen des CLA, die beispielsweise in den Bereich von 1 mg CLA/kg Körpergewicht/Tag bis 150 mg CLA/kg Körpergewicht/Tag und gegebenenfalls selbst 10 mg CLA/kg Körpergewicht/Tag bis 50 mg CLA/kg Körpergewicht/Tag fallen, ausreichend sind.
In einem noch anderen erfindungsgemäßen Merkmal kann CLA in einer Zusammensetzung an ein Tier verabreicht werden, die CLA intern, zum Beispiel in der Form eines CLA-Esters, bevorzugt eines Triglycerids, freisetzt. In einer weiteren bevorzugten Ausführungsform schließt das Triglycerid mindestens einen CLA-Rest in der Form eines Esters mit Glycerol ein und kann andere ungesättigte oder gesättigte Fettsäurereste aufweisen, bevorzugt ist aber die ungesättigte Fettsäure Linolsäure. In einem bevorzugteren Aspekt, schließt das Triglycerid drei CLA-Reste in der Form eines Esters mit Glycerol ein. Die CLA-Reste stellen bevorzugt die aktivsten Isomere von CLA, wie zum Beispiel das cis,trans-9,11- und trans,cis-9,11-Isomer oder das cis,cis-9,11-Isomer dar, können aber jedwedes der anderen Isomere einschließen. Nach der Aufnahme können die CLA-Reste im Magen des Tieres durch enzymatische Hydrolyse durch zum Beispiel die Wirkung einer Lipase freigesetzt werden. Die Triglyceride können aus Pflanzenquellen wie vorstehend beschrieben, gereinigt werden, können gewerblich erworben werden oder können aus Glycerol und den entsprechenden Fettsäuren anhand von im Stand der Technik bekannten Verfahren synthetisiert werden. Die zu verabreichende therapeutisch wirksame Menge ist von mindestens den vorstehend besprochenen Faktoren abhängig. Die zu verabreichende Triglyceridmenge kann die sein, welche die vorstehend angegebene CLA-Menge bereitstellt. Die Menge an Triglycerid, die zum Erreichen einer spezifischen Dosis erforderlich ist, hängt von der Anzahl der CLA-Ester oder -Reste umfassend das Triglycerid, ab und kann von einem Fachmann ohne weiteres berechnet werden. Das Triglycerid kann in ähnlichen Formen, wie vorstehend für CLA beschrieben, verabreicht werden.
CLA kann an ein Tier mit Diabetes, einschließlich warmblütiger Vertebraten, wie zum Beispiel Säugern, verabreicht werden. Die Liste der Säuger schließt zum Beispiel Menschen ein.
Nun wird auf spezifische Beispiele verwiesen, welche die vorstehenden Zusammensetzungen und Verwendungen erläutern. Daten von den nachstehenden Studien wurden mittels ANOVA (allgemeines lineares Modell, LSD) unter Verwendung des Statistical Analysis System (SAS; Cary, NC) oder StatView für den Macintosh (Abacus Concepts, Berkeley, CA) analysiert.
BEISPIEL 1
AKTIVIERUNG DES PEROXISOM-PROLIFERATOR-AKTIVIERTEN REZEPTORS (PPAR) DURCH CLA
In diesem Beispiel wird gezeigt, dass CLA an der Aktivierung mehrerer PPAR-Subtypen beteiligt ist. PPAR, ein intrazellulärer Proteinrezeptor, gehört der Superfamilie der Steroidhormone an, die bei der Regulation der Expression der Lipidmetabolismus-Enzyme wichtig sein könnten und eine Wirkung auf das Zellwachstum und/oder die -differenzierung ausüben könnten. In mehreren Spezies, einschließlich Menschen, wurden drei PPAR-Subtypen (α, β und γ) identifiziert. Man nimmt an, dass PPARγ an der antidiabetischen und Glucose-senkenden Aktivität von als Thiazolidindionen bekannten Arzneimittelgruppen und von Hypolipidämika wie Fibraten, beteiligt sind. PPAR kann durch Peroxisom-Proliferatoren, Thiazolidindionen und Fettsäuren aktiviert werden. Der Wirkmechanismus der Peroxisom-Proliferatoren ist in 1 veranschaulicht und die Wirkungen der Aktivatoren von PPAR-Subtypen sind in Tabelle 1 ersichtlich.
Tabelle 1. Aktivatoren von PPAR-Subtypen und ihre Wirkungen
COS-1-Zellen (American Type Culture Collection) wurden in einem α-Minimal Essential Medium (Sigma), ergänzt mit 8% fetalem Kalbserum (Gibco BRL), 0,2 mg/ml Streptomycin und 200 U/ml Penicillin, aufrechterhalten. Die Expressionskonstrukte der pSG5-GAL4-PPAR-Chimären, enthaltend die Ligandenbindungsdomäne von Maus-PPARα, -β oder -γ ebenso wie das (UAS)₅-tk-CAT-Reporterkonstrukt wurden freundlicherweise von Steven A. Kliewer (Glaxo Research Institute) bereitgestellt. Bei 75–90%iger Konfluenz wurden COS-1-Zellen mit GAL4-PPAR, (UAS)₅-tk-CAT und pSV-βGal (Promega) wie in Lehmann, J. M. et al., J. Biol. Chem. 270, 12953–12956 (1995) beschrieben, cotransfiziert. Vierundzwanzig Stunden nach der Transfektion wurden die Zellen mit den angegebenen CLA-Mengen oder 4-Chloro-6-(2,3-xylindino)-2-pyrimidinylthio)-essigsäure (Wy 14,643; einem als ein Peroxisom-Proliferator bekanntes Hypolipidämikum) in einer Einzeldosis (100 μM) behandelt. Nach 6-stüdiger Behandlung wurden die Zellen geerntet und die Chloramphenicol-Acetyltransferasespiegel wurden anhand des ELISAs nach den Anleitungen des Herstellers (Gibco BRL) beurteilt. Die Daten werden bezogen auf die β-Galactosidase-Aktivität ausgedrückt. In diesem Experiment verwendete CLA wurde aus einem gewerblich erhältlichen Gemisch von NuChek Prep, Elysian MN, erhalten. Das Gemisch enthielt 41,2 Gew.-% einer Zusammensetzung, einschließlich cis,trans-9,11-Octadecadiensäure und trans,cis-9,11-Octadecadiensäure, 44 Gew.-% trans,cis-10,12-Octadecadiensäure, 9,4 Gew.-% cis,cis-10,12-Octadecadiensäure, 1,3 Gew.-% einer Zusammensetzung, einschließlich trans,trans-9,11-Octadecadiensäure und trans,trans-10,12-Octadecadiensäure, 1,1 Gew.-% cis,cis-9,11-Octadecadiensäure, 0,7 Gew.-% Linolsäure und 2,2% anderer Lipide wie vorstehend erwähnt.
2 zeigt, dass alle untersuchten PPAR-Subtypen durch CLA aktiviert wurden. PPARα wurde in einem größeren Ausmaß als entweder PPARβ oder PPARγ aktiviert. PPARβ und PPARγ wurden jedoch in einer signifikanten Menge (um das ca. 2fache mehr als der Kontrollwert) aktiviert. Es wird angenommen, dass die Aktivierung von PPARα durch das gewerblich erhältliche Gemisch auf das Isomer der cis,trans-9,11-Octadecadiensäure, wie in Beispiel 2 besprochen, zurückzuführen ist. Die biologischen Wirkungen der PPAR-Aktivierung durch CLA hängt, wie in 3 ersichtlich ist, vom Gewebe und dem zu untersuchenden prädominanten PPAR-Subtyp ab.
BEISPIEL 2
AKTIVIERUNG DER PPAR-SUBTYPEN DURCH CLA-ISOMERE
In diesem Beispiel wird gezeigt, dass bestimmte PPAR-Subtypen durch CLA-Isomere aktiviert werden. Das gleiche experimentelle Verfahren wie in Beispiel 1 beschrieben, wurde zur Erfassung der in 4 ersichtlichen Daten durchgeführt. Eine Konzentration ausgewählter CLA-Isomere von 100 μM wurde jedoch auch im Transfektions-Assay zur Bestimmung verwendet, ob spezifische CLA-Isomere jedwede der PPAR-Subtypen aktivieren könnten.
Die Daten in 5–7 wurden unter Verwendung von Konstrukten, einschließlich PPARα, PPARβ oder PPARγ voller Länge von der Maus und einem Luciferase-Reportergen erfasst. Die verwendete CV-1-Zelllinie (Nierenzellen von der afrikanischen grünen Meerkatze) wurde von der American Type Culture Collection (ATCC-Nr. CCL-70) bezogen. Die Zellen wurden in Eagle Minimal Essential Medium, enthaltend 10% fetales Rinderserum (GIBCO), gezüchtet. Für jede Transfektion, die PPARα beinhaltete, wurden 625 ng pcDNA3-PPARα-Expressionsvektor zusammen mit 250 ng psV-GL-2-PPRE-Luciferase-Reporterplasmid und 250 ng pSV-β-Galactosidase als internes Kontrollplasmid verwendet. Für jede Transfektion, die PPARβ oder PPARγ beinhaltete, wurden entweder 625 ng pSGS-Maus-PPARβ oder 625 ng pSG5-Maus-PPARγ zusammen mit 250 ng des psV-GL2-PPRE-Luciferase-Reporterplasmids und 250 ng pSV-β-Galactosidase als internes Kontrollplasmid verwendet. Die Zellen wurden unter Verwendung von Lipofect AMINE^TM-Reagens (GIBCO) und Phenolrot-freiem, Serum-freiem Medium (OptiMEM^®I, GIBCO Life Technologies, Grand Island, NY) transfiziert. Sieben Stunden nach der Transfektion wurde dem Medium mit Aktivkohle gestripptes Serum (Cocalico Biologicals, Inc. Reamstown, PA) (10% Endkonzentration) für eine Inkubation über Nacht (16 Stunden) zugefügt. Transfizierte Zellen wurden sechs Stunden mit verschiedenen Dosen oder 100 μM CLA, dem 9Z,11E-(cis,trans-9,11)-Isomer (97%ige Reinheit), dem 9E,11E-(trans,trans-9,11)-Isomer (98%ige Reinheit), dem 10E,12Z-(trans,cis-10,12)-Isomer oder den anderen angezeigten Aktivatoren behandelt. Die Luciferase und β-Galactosidase-Aktivitäten wurden an Zelllysaten unter Befolgung der Protokolle des Herstellers (Promega, Madison, WI) bestimmt. Die Daten wurden in Bezug auf die Luciferase/β-Galactosidase-Aktivität, ausgedrückt als ein Verhältnis zu mit Vehikel behandelten Zellen (0,1% DMSO), quantifiziert.
4 zeigt, dass alle untersuchten Isomere alle PPAR-Subtypen aktivierten. Die 9Z,11Z-(cis,cis-9,11)- und 9Z,11E-(cis,trans-9,11)-Isomere aktivierten jedoch PPARα und PPARβ mehr als das CLA-Gemisch und das 9E,11E-(trans,trans-9,11)-Isomer aktivierte nur PPARβ mehr als das CLA-Gemisch allein. Keine der Isomere aktivierten PPARγ mehr als das CLA-Gemisch. In einer ähnlichen Studie wurde überdies humanes PPARγ auch durch CLA (Daten nicht gezeigt) aktiviert, was darauf hindeutet, dass die molekularen Events, welche die vorliegende Erfindung stützen, auch bei Menschen vorkommen.
Die in 5–7 ersichtlichen Daten zeigen, dass alle getesteten CLA-Isomere, einschließlich des Isomers der trans,cis-10,12-Octadecadiensäure die entsprechenden PPAR-Subtypen in Bezug auf die DMSO-Kontrolle aktivieren. Die Daten in 5 und 6 zeigen überdies weiter, dass das trans,cis-10,12-CLA-Isomer PPARα und PPARβ signifikant mehr als das CLA-Gemisch allein aktivierten.
BEISPIEL 3
WIRKUNG VON CLA AUF DIE GENEXPRESSION
Die Aktivierung bestimmter PPAR-Subtypen führt zur veränderten Genexpression, wie zum Beispiel zur Geninduktion. In diesem Beispiel wurde gefunden, dass CLA zwei Differenzierungsmarker der Maus-3T3-L1-Präadipocyten in differenzierte Adipocyten induziert, wozu die PPARγ-Aktivierung erforderlich ist. Bei den beiden untersuchten Markern handelte es sich um Adipocyten-Protein-2-(mAP2)-mRNA und PPARγ-mRNA.
3T3-L1-ZELLKULTUR
Maus-3T3-L1-Präadipocyten (American Type Culture Collection) wurden in Dulbecco's modifiziertem Eagle-Medium (DMEM), ergänzt mit 10% fetalem Kalbserum (Gibco BRL), 0,2 mg/ml Streptomycin und 200 U/ml Penicillin („Wachstumsmedium") aufrechterhalten. Die Differenzierung wurde wie von Brandes, R., Arad, R. und Bar-Tana, J., J. Biochem. Pharmacol. 50, 1949–1951 (1995) beschrieben, induziert. Die Differenzierung wurde, kurz zusammengefasst, durch Zufügen verschiedener Konzentrationen CLA (25–250 μM Endkonzentration), Linolsäure (100 μM), Wy 14,643 (100 μM) oder Vehikel (DMSO) in DMEM mit 10% FCS und 0,1 μM Dexamethason („Induktionsmedium") zum Konfluieren von 3T3-L1-Präadipocyten induziert. Nach 48 Stunden wurde das Induktionsmedium entfernt und durch Induktionsmedium mit 4 mU/ml Insulin ausgewechselt. Dieses Medium wurde alle 48 Stunden ausgewechselt. In verschiedenen Zeitintervallen wurden die Zellen zweimal mit PBS gespült und die Gesamt-RNA unter Verwendung von TriReagent (Molecular Research Center) extrahiert.
Die Differenzierung von Maus-3T3-L1-Zellen wurde durch Untersuchung Adipocyten-spezifischer Marker einschließlich PPARγ (γ1 und γ2) und Adipocyten-Protein-2 (mAP2) überwacht. Das Housekeeping-Gen β-Aktin wurde auch wie in Vanden Heuvel, J. P. et al., Cancer Res. 54, 62–68 (1994) beschrieben, untersucht. Die quantitative reverse Transkriptase-Polymerasekettenreaktion wurde zur Bestimmung der mRNA-Expression für diese Gene (wie in Vanden Heuvel, J. P., PCR Applications in Molecular Toxicology, 218 Seiten, CRC Press, Boca Raton, FL (1997), siehe Tabelle 2 für verwendete Primer-Sequenzen) unter Verwendung interner Standards, die für jeden vorgegebenen Primer-Set (wie in Vanden Heuvel, J. P., Tyson, F. und Bell, D. A., Biocechnigues 14, 395–398 (1993) beschrieben) verwendet.
CLA ist bei der Induktion von sowohl mAP2 als auch PPARγ-mRNA wirksam, wie in 8 ersichtlich ist. Es ist auch zu sehen, dass CLA im 3T3-L1-Bioassay potenter als ein PPARγ-Ligand ist als anhand der Transaktivierungsassays erwartet worden wäre, deren Ergebnisse in 4 veranschaulicht werden. 8. zeigt auch, dass die wirksamste Konzentration von CLA im Differenzierungsassay bei 50 μM lag.
TIERSTUDIEN
Männliche Zucker Fatty-Ratten (fa/fa) und Ratten („lean") aus dem gleichen Wurf (wt) wurden im Alter von sechs Wochen von Genetic Models, Inc. (Indianapolis, IN) erhalten. Da das primäre Ziel der Studie darin bestand, die Fähigkeit von CLA bei der Verbesserung der Insulin-Wirkung zu bestimmen und das Einsetzen von Diabetes zu verhindern, wurden alle Ratten vor der Zuordnung zu den experimentellen Behandlungen als normoglykämisch bestimmt. (Die Rationen werden im nachfolgenden Abschnitt besprochen). Nachdem die Ratten 14 Tage auf den experimentellen Rationen gehalten wurden, wurden die Ratten mit CO₂ und durch cervikale Dislokation euthanisiert und die Gewebe entnommen, gewogen und eingefroren. Die RT-PCR wurde wie vorstehend beschrieben durchgeführt.
Die als Gewebemarker verwendeten Gene und die Subtyp-spezifische PPAR-Aktivierung schlossen Acyl-CoA-Oxidase (ACO; in der Leber gefunden und durch PPARα-Aktivierung induziert), das Adipocyten-spezifische Protein (mAP2; im Fettgewebe gefunden und durch Aktivierung von PPARμ induziert) und ACO im Muskel (durch PPARβ-induziert) ein.
Wie in 9 ersichtlich ist, induzieren sowohl CLA als auch Troglitazon (5-[[4-[3,4-Dihydro-6-hydroxy-2,5,7,8-tetramethyl-2H-1-benzopyran-2-yl)methoxy]phenyl]methyl]-2,4-thiazolidindion; TZD; Rezulin, Parke-Davis) die ACO-mRNA-Expression im PPARα-enthaltenden Gewebe (Leber) und ein Gewebe mit überwiegend PPARγ (Fettgewebe) signifikant, wiesen aber keine Wirkung auf ein Gewebe mit überwiegend PPARβ (Muskel) auf. Die Induktion von mAP2 in Fettgewebe verifiziert die in den 3T3-L1-Zellen beobachtete PPARγ-Aktivierung.
BEISPIEL 4
WIRKUNG VON CLA IN DER RATION AUF DIE NORMALISIERUNG DER GLUCOSETOLERANZ BEI DER ZUCKER FATTY-RATTE (FA/FA)
Die Zucker-Ratten (fa/fa) stellen ein ausgezeichnetes Tiermodell für die Untersuchung des Diabetes mit Beginn im Erwachsenenalter dar. In diesem Beispiel wurde die Wirkung von drei verschiedenen Rationen (Kontrolle, CLA, TZD) auf die Spiegel des zirkulierenden Insulins, der Triglyceride und der freien Fettsäuren in den fa/fa-Ratten ebenso wie bei ihren „lean"-Pendants (Wildtyp, wt) bestimmt. Zur Bestimmung, ob CLA die Insulin-Sensitivität als einen PPARγ-Aktivator, wie zum Beispiel TZD steigert, wurde überdies ein Glucosetoleranztest durchgeführt.
Die Komponenten der Ration wurden von Dyets, Inc. (Bethlehem, PA) und das CLA-Isomergemisch (90% reines Gemisch) von PharmaNutrients, Chicago, IL, bezogen. Das CLA-Gemisch wies die folgende Isomeren-Verteilung auf 42% einer Zusammensetzung, einschließlich cis,trans-9,11- und trans,cis-9,11-Octadecadiensäure; 43,5% trans,cis-10,12-Octadecadiensäure; 1% cis,cis-9,11-Octadecadiensäure; 1% cis,cis-10,12-Octadecadiensäure und 1,5% einer Zusammensetzung, einschließlich trans,trans-9,11-Octadecadiensäure und trans,trans-10,12-Octadecadiensäure, alle auf einer Gewichtsprozentbasis. Das CLA-Gemisch schloss auch, auf einer Gewichtsprozentbasis, 0,5% Linoleat, 5,5% Oleat und 5% andere Lipide, wie vorstehend besprochen ein. Das Thiazolidindion, TZD (Rezulin^TM, Parke-Davis, Ann Arbor, MI), wurde in diesen Studien als eine positive Kontrolle auf die antidiabetische Aktivität verwendet. Männliche Zucker Fatty-Ratten (fa/fa) und Ratten („lean") aus dem gleichen Wurf (wt) wurden im Alter von sechs Wochen von Genetic Models, Inc. (Indianapolis, IN) bezogen. Da das primäre Ziel der Studie aus der Bestimmung der Fähigkeit von CLA bei der Verbesserung der Insulin-Wirkung und der Prävention des Einsetzens von Diabetes bestand, wurden alle Ratten vor der Zuordnung zu den experimentellen Behandlungen als normoglykämisch bestimmt. Nachdem die Ratten 14 Tage auf den experimentellen Rationen gehalten wurden, wurden die Ratten durch CO₂ und cervikale Dislokation euthanisiert, und es wurde Blut entnommen und sofort auf die postprandiale Glucosekonzentrationen (siehe nachstehend) analysiert oder in heparinisierte Teströhrchen für Plasmaanalysen, wie nachstehend beschrieben, gegeben. Die epididymalen Fettpolster und Lebern wurden entnommen und gewogen. Ein Aliquot des epididymalen Fettpolsters wurde in gepufferte Kochsalzlösung für Glucosetransportanalysen isoliert und das übrige epididymale Fettpolster und der Muskel gastrocnemius wurden isoliert, sofort in flüssigem Stickstoff eingefroren und bei –80°C gelagert, bis die mRNA- und Proteinanalysen durchgeführt wurden.
EXPERIMENTELLE RATIONEN
Drei isokalorische experimentelle Rationen wurden gemäß einem modifizierten AIN-76-Gemisch, enthaltend 6,5 Gew.-% Fett formuliert (Beschreibung der Ration in American Institute of Nutrition: Report of the American Institute of Nutrition Ad Hoc Committee on Standards for Nutritional Studies, J. Nutr. 107 1340–1348 (1977), schließt aber 6,5 Gew.-% Fett anstelle von 5 Gew.-% Fett ein). Die gleiche Menge Maisöl (5%) wurde in allen Rationen verwendet, da Maisöl reich an Linolsäure, einer essenziellen Fettsäure, ist. Die Rationen enthielten entweder 5% Maisöl + 1,5% Schmalz + kein CLA (Kontrollration), 5% Maisöl + 1,5% CLA (CLA-Ration) oder 5% Maisöl + 1,5% Schmalz + 0,2% Troglitazon (TZD-Ration). Es wurde eine Dosis von 1,5% CLA auf der Basis früherer Studien in unserem Labor gewählt, die zeigten, dass diese Dosis die PPAR-assoziierte Genexpression in der Leber modulierte (Belury, M. A. et al., Nutr. Biochem. 8: 579–84 (1997)) und die Tumorigenese in der murinen Haut inhibierte (wie in Belury, M. A. et al., Nutr. Cancer 26, 149–157 (1996) gezeigt). Es wurde gezeigt, dass die in dieser Studie verwendete Dosis von TZD (0,2%) bei der Normalisierung der Glucosetoleranz nach 15 Tagen wirksam ist und die erhöhte(n) Glucose, Triglyceride, freie Fettsäuren und erhöhtes urinäres Protein in Zucker (fa/fa)-Ratten supprimierte. Die Rationen wurden an alternierenden Tagen verfüttert und den Ratten wurde freier Zugang zu Nahrung und Wasser gewährt. Die Körpergewichte wurden zweimal wöchentlich gemessen und der durchschnittliche Futterverbrauch wurde durch Messen der Unterschiede des Gewichts der frisch angebotenen Ration und der in den Futterschalen zurückgebliebenen Ration zwei Tage später bestimmt. Unter Berücksichtigung des durchschnittlichen Körpergewichts der fa/fa-Ratten und der Menge des von ihnen verzehrten Futters, erhielten die fa/fa-Ratten eine Tagesdosis von 1,71 mg CLA/kg Körpergewicht, was einer Tagesdosis von 375 mg entsprach.
GLUCOSETOLERANZTESTS
Zum Vergleich der Wirkungen von CLA und TZD auf die Insulin-Wirkung wurde ein Glucosetoleranztest am Tag 11 der diätetischen Intervention durchgeführt. Die Tiere fasteten über Nacht (16 Stunden). Sich bei Bewusstsein befindende Ratten wurden intraperitoneal mit D-Glucose (1 g/kg Körpergewicht) injiziert und Blutproben wurden vor der Injektion (Zeit 0) und 2, 5, 10, 15, 20, 40, 60, 120 und 180 Minuten nach der Injektion aus der Schwanzvene entnommen.
BESTIMMUNG DER KONZENTRATIONEN VON METABOLITEN UND HORMONEN IM BLUT
Die Blutglucosespiegel wurden unter Verwendung eines „One Touch"-Glucosemessgerätes (Lifescan, Inc.) bestimmt. Die Plasma-Insulinspiegel wurden unter Verwendung gewerblich erhältlicher Radioimmunassay-Kits (Linco Research, St. Charles, MO) bestimmt. Die nicht veresterten Fettsäuren im Plasma wurden unter Verwendung eines kolorimetrischen Kits (Wako) quantifiziert. Die Plasma-Triglyceridkonzentrationen wurden unter Verwendung eines gewerblich erhältlichen Kits (Sigma Diagnostics, St. Louis, MO) bestimmt.
10 veranschaulicht die Ergebnisse des Glucosetoleranztests. Wie erwartet wird eine verringerte Fähigkeit zur Entfernung der Glucose aus dem Blut bei den fa/fa-Ratten (Vergleich von „lean"(mager)-Kontrolle versus „obese"(fettleibig)-Kontrolle) gesehen. Bei den entweder mit CLA oder TZD gefütterten fa/fa-Ratten wurde die Blutglucose viel schneller reduziert als bei den entsprechenden Kontrolltieren. Da die Glucosetoleranz den prädominanten Test darstellt, der zur Beurteilung des Vorliegens von nicht-insulinabhängigem Diabetes mellitus (NIDDM) verwendet wird, zeigen die in 10 veranschaulichten Daten überzeugend, dass CLA bei der Verbesserung der Glucosetoleranz genauso wirksam wie TZD ist. Deshalb kann CLA gegebenenfalls eine wirksame Behandlung für Personen mit NIDDM darstellen.
Die Ergebnisse, die die relativen Spiegel des zirkulierenden Insulins, der Plasma-Triglyceride und der zirkulierenden freien Fettsäuren zeigen, sind in Tabelle 3 ersichtlich. Tabelle 3. Wirkung von CLA in der Ration auf die Glucose-, Triglycerid- und freie Fettsäure-Konzentrationen in Zucker-Ratten*
Insulin-, Triglycerid- und freie Fettsäure-Konzentrationen im Plasma wurden in gefütterter Ratten gemessen, nachdem ihnen die experimentellen Rationen für die Dauer von 14 Tagen verfüttert wurden.

^a-d Werte (±SD) mit signifikanten Unterschieden (p < 0,05) in den Spalten sind durch verschiedene hochgestellte Schriftzeichen gekennzeichnet.

Im Vergleich zu wt-Tieren wiesen fa/fa-Ratten wie erwartet höhere(s) Insulin und Triglyceride im Plasma auf. CLA verbesserte jedoch signifikant die Diabetes-Symptome, wobei eine 50–60%ige Abnahme des Insulins, der Triglyceride und freien Fettsäuren im Plasma herbeigeführt wurde. TZD verminderte überdies deutlich das zirkulierende Insulin, die Triglyceride und freien Fettsäuren in den fa/fa-Ratten, wodurch TZD folglich als ein wirksames Antidiabetikum verifiziert wurde. Zusätzliche Informationen über die Normalisierung der Glucosetoleranz und andere biologische Wirkungen unter Verwendung von CLA können in Biochem. Biophys. Res. Comm., 244, 678–682 (1998), eingesehen werden.

Claims

Verwendung von konjugierter Linolsäure zur Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung von Diabetes mellitus Typ II.
Verwendung nach Anspruch 1, worin die konjugierte Linolsäure oral verabreicht werden soll.
Verwendung nach Anspruch 2, worin die konjugierte Linolsäure in einer Einheitsdosierungsform verabreicht werden soll.
Verwendung nach Anspruch 3, worin die Einheitsdosierungsform ein Nahrungsmittelprodukt darstellt.
Verwendung nach einem der Ansprüche 1 bis 4, worin die konjugierte Linolsäure aus der Gruppe ausgewählt ist, bestehend aus 9,11-Octadecadiensäure, Estern davon, geometrischen Isomeren davon, Salzen davon und Gemischen davon.
Verwendung nach Anspruch 5, worin die geometrischen Isomere Konfigurationen aufweisen, die aus der Gruppe ausgewählt sind, bestehend aus trans,trans; cis,cis; trans,cis und cis,trans.
Verwendung nach einem der Ansprüche 1 bis 4, worin die konjugierte Linolsäure aus der Gruppe ausgewählt ist, bestehend aus 10,12-Octadecadiensäure, Estern davon, geometrischen Isomeren davon, Salzen davon und Gemischen davon.
Verwendung nach Anspruch 7, worin die geometrischen Isomere Konfigurationen aufweisen, die aus der Gruppe ausgewählt sind, bestehend aus trans,trans; cis,cis; trans,cis und cis,trans.
Verwendung nach einem der Ansprüche 1 bis 4, worin sich die konjugierte Linolsäure aus cis,trans-9,11-Octadecadiensäure und trans,cis-9,11-Octadecadiensäure zusammensetzt.
Verwendung nach einem der Ansprüche 1 bis 4, worin sich die konjugierte Linolsäure aus cis,cis-9,11-Octadecadiensäure zusammensetzt.
Verwendung nach einem der Ansprüche 1 bis 10, worin die konjugierte Linolsäure in einer Menge von 1 mg der konjugierten Linolsäure/kg Körpergewicht bis 10 000 mg der konjugierten Linolsäure/kg Körpergewicht verabreicht werden soll.
Verwendung nach einem der Ansprüche 1 bis 11, worin das Tier einen Säuger darstellt.
Verwendung nach Anspruch 12, worin der Säuger einen Mensch darstellt.
Verwendung nach einem der Ansprüche 1 bis 3 oder nach einem der Ansprüche 5 bis 13, worin die konjugierte Linolsäure in einem pharmazeutisch verträglichen Trägermedium verabreicht werden soll.
Verwendung nach Anspruch 14, worin das pharmazeutisch verträgliche Trägermedium Wasser einschließt.
Verwendung nach einem der Ansprüche 1 bis 15 zur Herstellung eines Arzneimittels nach Anspruch 1 zur Normalisierung der Glucosetoleranz und Senkung des Plasmainsulins bei einem Tier mit Diabetes mellitus Typ II.
Verwendung nach Anspruch 16 zur Herstellung eines Arzneimittels nach Anspruch 1 zur Behandlung der erhöhten Glucosespiegel bei einem Tier mit Diabetes mellitus Typ II.