JP5226912B2 - Ｐｐａｒ活性化剤 - Google Patents

Description

本発明は、糖尿病や肥満の予防・改善剤として有用なペルオキシソーム増殖剤活性化受容体（Peroxisome Proliferator Activated Receptor、PPARと記載する）活性化剤に関する。

ステロイド、甲状腺ホルモン、レチノイドなどの低分子脂溶性リガンドはリガンド特異的な核内受容体を介して、個体発生における形態形成、細胞の増殖、分化、生体の恒常性の維持など多様な生理機能の調節に関与している。ＰＰＡＲは核内受容体の１種であり、１９９０年に脂肪分解に関与する細胞内小器官であるペルオキシソームを増加させる作用を仲介する蛋白として同定され、ペルオキシソーム増殖剤により活性化を受けるレセプターという意味でPeroxisome Proliferator Activated Receptorα（ペルオキシソーム増殖剤活性化受容体：ＰＰＡＲα）と名付けられた。その後α型と構造上類似したアイソフォーム遺伝子としてβ／δ型及びγ型が同定され、合計３つのサブタイプから成ることが知られている。ヒトとマウスのγ型遺伝子には２つのプロモーターが存在するため、スプライシングの違いによってＮ末端の異なるＰＰＡＲγ１とＰＰＡＲγ２の２種類の蛋白質がある。ＰＰＡＲの各サブタイプはリガンド依存的に活性化され、９−シスレチノイン酸をリガンドとするＲＸＲ（Retinoid X Receptor）とヘテロ２量体を形成することで、プロモーター領域にＰＰＡＲ応答配列（PPAR responsive element；ＰＰＲＥ）を有する種々の遺伝子の発現を制御している。近年ＰＰＡＲは非常に多くの生理、病理現象に関わっていることが明らかになってきた。中でもＰＰＡＲαの機能は脂肪酸の合成・輸送・分泌、脂肪消費臓器におけるＡＴＰ産生、細胞周期の調節等幅広く生体のエネルギー代謝や恒常性の維持に関わるものと考えられている。特に脂肪酸代謝に重要なβ−酸化関連酵素の遺伝子発現はＰＰＡＲの活性化に強く依存していることが明らかになってきている。言い換えれば、ＰＰＡＲ活性化剤は生体の脂質代謝を活性化する作用を有することが明らかになってきている。生体脂質代謝の活性化は高脂血症の改善にもつながる有用な作用である。また、ＰＰＡＲγ、特にＰＰＡＲγ２は脂肪細胞に比較的強い特異性を持って発現しており、脂肪細胞分化の中心的役割を果たしていることが明らかになっている。（細胞：31(6)218-234， 1999、J. Lipid Res. 37, 907-925, 1996、Curr. Opin. Lipidol. 10, 151-159, 1999）

高脂血症治療薬であるフィブラート系化合物がＰＰＡＲαのアゴニストであること、糖尿病治療薬として知られるチアゾリジン誘導体がＰＰＡＲγのアゴニストであることが明らかにされて以来、これらの化合物に続くＰＰＡＲアゴニストの探索が進められ、高脂血症やインスリン抵抗性、糖尿病の改善薬として開発が試みられている。そしてこれまでにＰＰＡＲアゴニストとして、チアゾリジン誘導体、フィブラート系化合物の他、ロイコトリエンＢ４、インドメタシン、イブプロフェン、フェノプロフェン、１５−ｄｅｏｘｙ−Δ−１２， １４−ＰＧＪ２など（Cell. 83, 813-819, 1995、J. Biol. Chem. 272(6)3406-3410, 1997、Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 94, 4321-4317, 1997、J. Biol. Chem. 274(10)6718-6725、1999、Mebio 別冊；Multiple Risk Factor Syndrome 2, 88-96, 1999）が報告されている。

発明が解決しようとする課題

しかしながらこれらの化合物には長期間摂取による副作用などの問題がある。
本発明の目的は長期間摂取しても安全性に優れ、高い効力を有するＰＰＡＲ活性化剤を提供することにある。

課題を解決するための手段

本発明者らは長期間摂取しても安全で、副作用の少ないＰＰＡＲ活性化剤の探索を行い、天然食物中にも存在し、長い食経験を有するモノアシルグリセロール（モノグリセリド）にその作用があることを見出した。

すなわち、本発明はモノアシルグリセロールからなるＰＰＡＲ活性化剤を提供するものである。

モノアシルグリセロールはグリセロールのＯＨ基に脂肪酸が結合したもので、通常油脂中に若干量存在している。また、一般的な植物油あるいは動物油を摂取すると、その主要構成成分であるトリアシルグリセロールは小腸において分解、代謝され、２−モノアシルグリセロールへと変換される。その一部は脂肪酸が１又は３位へ転移し、１−モノアシルグリセロールが生成する。また、食用油中に１〜１０重量％（以下、単に％と記載する）程度含まれる１，２−ジアシルグリセロール及び１，３−ジアシルグリセロールは小腸において代謝され、その過程で１−モノアシルグリセロールが生成する（武藤泰敏著：新版・消化吸収：第一出版）。また、モノアシルグリセロールは安全性に優れていることから、食品分野で乳化剤などとして広く用いられており、マーガリン、乳飲料、アイスクリーム、パンなどに通常０．２〜０．５％程度配合される（岡村一弘著：食品添加物の使用法：食品と科学社、藤井清次：食品添加物ハンドブック：光生館）。

本発明で使用するモノアシルグリセロールのアシル基の位置は、１位が好ましい。

モノアシルグリセロールの構成脂肪酸としては、全構成脂肪酸中の１０％以上、好ましくは３０〜１００％、特に４０〜９５％が炭素数１２〜２４、好ましくは１８〜２２の不飽和脂肪酸であることが好ましい。残余の構成脂肪酸は、炭素数１２〜２４、好ましくは１４〜２２の飽和脂肪酸で構成される。好ましい構成脂肪酸としては、オレイン酸又はリノール酸を１０％以上、特に４０〜９５％含有するもの、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）、α−リノレン酸等のｎ−３系脂肪酸が１０％以上、特に３０〜９０％含有するものが挙げられる。

上記モノアシルグリセロールは、不飽和アシル基を含有するアマニ油、エゴマ油、シソ油、大豆油、ナタネ油等の加水分解反応、これら各種油脂とグリセリンとのエステル交換反応、かかる油脂由来の脂肪酸とグリセリンとのエステル化反応等任意の方法により得ることができる。反応方法は、アルカリ触媒等を用いた化学反応法、リパーゼ等の酵素を用いた生化学反応法のいずれでもよい。得られた反応生成物を分画して所期のモノアシルグリセロールを単離することができる。

モノアシルグリセロールはこのように単離して使用する他に、トリアシルグリセロール、ジアシルグリセロールと混合した油脂組成物として使用してもよい。

本発明のＰＰＡＲ活性化剤は医薬品、食品に用いられる賦形剤及びその他の添加剤とともに製剤化してもよい。

本発明のＰＰＡＲ活性化剤は、経口より摂取することができる。またその量は、年齢、体重、性別、投与方法等の種々の要因によって異なるが、経口投与の場合は通常大人１人当たり０．１〜５０００mg、特に１００〜２０００mgの範囲を１日１回〜数回に分けて投与することが好ましい。

本発明ＰＰＡＲ活性化剤の剤型としては、医薬品又は食品に用いられている例えば錠剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤、トローチ剤、シロップ剤、また、種々の形態の飲料、スナック類、乳製品、調味料、でんぷん加工製品、加工肉製品などが挙げられる。

本発明のＰＰＡＲ活性化剤は、通常製剤中に０．１〜８０％配合される。

実施例１ ＰＰＡＲ活性化試験：
小腸上皮細胞株ＩＥＣ−６または肝細胞株ＨｅｐＧ２を１２well plateにまき、ＤＭＥＭ（５％FCS）中で１日培養する。ＰＰＡＲ応答配列（下線）（AACgTgACCTTTgTCCTggTCAACgTgACCTTTgTCCTggTC AACgTgACCTTTgTCCTggTC）を含むＤＮＡ鎖、ＳＶ４０プロモター遺伝子、蛍ルシフェラーゼ遺伝子を含むＰＰＡＲレポータープラスミド（PPAR-Luc）及び、ウミシイタケルシフェラーゼ遺伝子の上流にチミジンキナーゼプロモーター遺伝子を連結したコントロールプラスミド（TK-Luc：Promega）を同時に各々０．５μｇ／wellとなるようトランスフェクション試薬（Superfect transfection reagent；QIAGEN）を用いて導入した。その後培養液を被験物質を含むＤＭＥＭ（-FCS、＋250μM BSA）培地に交換し、さらに２４時間培養した。ＰＢＳにて洗浄後デュアルルシフェラーゼアッセイシステム（Promega）を用いて細胞を溶解、溶解液にルシフェリンを含む基質溶液を加え、ルミノメーターにて蛍及びウミシイタケルシフェラーゼ活性を各々測定した。本実験系でＰＰＡＲ依存的な遺伝子の転写活性（ルシフェラーゼ活性）を測定することにより、ＰＰＡＲ活性化物質の探索を行った。尚、ＰＰＡＲ依存的な遺伝子の転写活性（ルシフェラーゼ活性）は以下のように定義した。

ＰＰＡＲ依存的な遺伝子の転写活性（ルシフェラーゼ活性）＝（PPAR-Lucによる蛍ルシフェラーゼ活性）／（TK-Lucによるウミシイタケルシフェラーゼ活性）

ＩＥＣ−６及びＨｅｐＧ２細胞における各被験物質によるＰＰＡＲ活性化能を表１に示す。尚、コントロールにおけるＰＰＡＲ依存的転写活性を１００とし、それに対する相対値を示す。陽性対照として、Ｗｙ１４６４３（BIOMOL(Plymouth Meeting DA)より入取したもの）を用いた。

表１より、１−モノアシルグリセロールがＰＰＡＲ活性化に有効であることがわかる。

実施例２
１−モノリノレニルグリセロール１０ｇ、ヒドロキシプロピルセルロース８ｇ、軟質無水ケイ酸２ｇ、乳糖５ｇ、結晶セルロース５ｇ、タルク５ｇ及びジオレオイルグリセロール３ｇを混合し、直径９mm、重量２００mgの錠剤を製造した。

実施例３
１−モノオレオイルグリセロール２０ｇ、１−モノエイコサペンタエノイルグリセロール２０ｇ及びビタミンＣ２ｇを混合した後、ゼラチンカプセルに充填し、１錠２５０mgの軟ゼラチンカプセル剤を製造した。

実施例４
１−モノリノレニルグリセロール２０ｇ、γ−オリザノール１０ｇ、無水カフェイン１０ｇ、ドコサヘキサエン酸１０ｇ、エイコサペンタエン酸１０ｇ、α−リノレン酸１０ｇ及びビタミンＣを混合した後、ゼラチンカプセルに充填し、１錠２５０mgの軟ゼラチンカプセル剤を製造した。

発明の効果

本発明のＰＰＡＲ活性化剤は優れたＰＰＡＲ活性化作用を有し、かつ長期間摂取しても安全性も高いので、糖尿病や肥満の予防・改善剤として有用である。

Claims (2)

1. 構成脂肪酸がオレイン酸又はリノール酸であるモノアシルグリセロールを有効成分とするペルオキシソーム増殖剤活性化受容体活性化剤。
2. 構成脂肪酸がｎ−３系脂肪酸であるモノアシルグリセロール（但し、分子内に共役トリエン構造又は共役テトラエン構造を有する炭素数１０〜２６の共役不飽和脂肪酸のモノグリセリドを除く）を有効成分とするペルオキシソーム増殖剤活性化受容体活性化剤（但し、血糖値低下剤、インスリン抵抗改善剤又は血中インスリン濃度低下剤として使用する場合を除く）。