JP2001525364A - 糖尿病を治療する方法及び組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 動物の糖尿病を治療する方法及び糖尿病を治療するのに有用な食物組成物が記載される。本発明の１つの側面では、本方法は、９，１１−オクタデカジエン酸及び１０，１２−オクタデカジエン酸、その異性体、そのエステル、その塩又はそれらの混合物を含むＣＬＡの治療有効量で糖尿病の動物を治療することを包含する。本発明のもう１つの側面では、ｃｉｓ，ｃｉｓ−９，１１−オクタデカジエン酸、ｔｒａｎｓ，ｃｉｓ−１０，１２−オクタデカジエン酸又は精製されたｃｉｓ，ｔｒａｎｓ−９，１１−オクタデカジエン酸とｔｒａｎｓ，ｃｉｓ−９，１１−オクタデカジエン酸の混合物を包含する、精製されたＣＬＡ異性体の治療有効量を有する食物製品を含んでなる食物組成物について記載される。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 関連出願への相互参照 本出願は、そのまま参照により本明細書に組込まれている、１９９７年１２月
１２日に出願された、米国暫定特許出願第６０／０６９，５６７号の利益を請求
する。 発明の背景 本発明は、糖尿病を治療する方法に概して関する。特に、本発明は、治療有効
量の複合リノール酸（conjugated linoleic acid：ＣＬＡ）を投与することによ
って動物の糖尿病を治療する方法に関する。本発明は、精製されたｃｉｓ，ｃｉ
ｓ−９，１１−オクタデカジエン酸、精製されたｔｒａｎｓ，ｃｉｓ−１０，１
２−オクタデカジエン酸、又は精製されたｃｉｓ，ｔｒａｎｓ−９，１１−オク
タデカジエン酸とｔｒａｎｓ，ｃｉｓ−９，１１−オクタデカジエン酸の混合物
のような、ＣＬＡの精製された異性体の治療有効量を有する食物製品を包含する
食物組成物にさらに関する。

【０００２】 糖尿病は最も一般的な代謝性疾患の１つであり、全世界で何億人もの人々が罹
患している。糖尿病には、Ｉ型（インスリン依存型）及びＩＩ型（インスリン非
依存型）という２つの形態がある。この疾患は、高血糖症、大脈管障害、小脈管
障害、神経障害、腎障害及び網膜障害を包含する重篤な合併症につながる可能性
がある。糖尿病の治療法には、Ｉ型糖尿病の症例でのインスリン投与及びＩＩ型
糖尿病の症例での様々な血糖低下剤の投与が含まれてきた。既知の血糖低下剤の
多くは所望されない副作用を示し、ある症例では有毒である。従って、糖尿病を
治療する追加の方法及び組成物に対するニーズがある。本発明はこのニーズに対
処する。 発明の要約 ＣＬＡの投与が糖尿病の治療に有利であることが発見された。従って、本発明
の１つの好ましい態様は、治療有効量のＣＬＡを動物へ投与することを包含する
糖尿病の治療法を提供する。

【０００３】 本発明のさらなる側面では、ＣＬＡの精製された異性体が動物の糖尿病の治療
に役立てるために使用され得ることが発見された。従って、本発明は、精製され
たＣＬＡ異性体を単独でか又は前決定された混合物で、及びそのような異性体又
は混合物を含有する食物又は投与可能なユニット剤形（例、錠剤、丸剤など）で
動物へ投与することに関する方法を提供する。特に、ｃｉｓ，ｃｉｓ−９，１１
−オクタデカジエン酸、ｔｒａｎｓ，ｃｉｓ−１０，１２−オクタデカジエン酸
、又は精製されたｃｉｓ，ｔｒａｎｓ−９，１１−オクタデカジエン酸とｔｒａ
ｎｓ，ｃｉｓ−９，１１−オクタデカジエン酸の混合物のような、ＣＬＡの精製
された異性体の治療有効量を有する食物製品を包含する食物組成物が提供される
。

【０００４】 本発明の他の特徴は、本明細書の実施例に示されるように、ある遺伝子、例え
ば脂質代謝酵素の発現を調節すること及び／又は脂肪細胞の分化を調節すること
に関わる遺伝子の発現レベルをモジュレートする（例えば、増加する）新規な方
法を含む。この方法には、遺伝子発現をモジュレートするために有効量のＣＬＡ
を動物へ投与することが含まれる。

【０００５】 ＣＬＡを投与することによって糖尿病の動物を治療する方法を提供することが
本発明の目的である。

【０００６】 糖尿病の治療に有利にも使用され得る食物組成物を提供することが本発明のさ
らなる目的である。

【０００７】 本発明の上記及び他の目的及び効果は、本明細書の記述内容から明らかであろ
う。 好ましい態様の説明 本発明の原理に関する理解を深めるために、以下に好ましい態様について言及
し、特定の用語を用いてそれを説明する。しかしながら、それによって本発明の
特許請求範囲を制限する意図はなく、本発明に示されるような変更及びさらなる
改良、及び本発明の原理のさらなる応用は、本発明に関する当業者ならば通常考
えつくものとみなされるだろう。

【０００８】 本発明は糖尿病を治療する方法及び糖尿病の治療に有用な組成物を提供する。
本発明の１つの側面では、動物に治療有効量のＣＬＡを投与することによって糖
尿病が治療される。ＣＬＡの投与は、有利にも糖尿病動物の糖耐性を正常化し、
並びに血漿インスリン、トリグリセリド及び遊離脂肪酸のレベルを減少させる。
本方法はＩＩ型（インスリン非依存型）糖尿病を治療するのに有利であるが、そ
れはまた、当技術分野で知られている他の治療薬とともにＩ型（インスリン依存
型）糖尿病を治療するためにも使用され得る。本発明のさらにもう１つの側面で
は、精製されたＣＬＡ異性体又は精製されたＣＬＡ異性体の混合物の使用を含む
方法及び組成物が提供される。本発明の組成物には、治療有効量の精製されたｃ
ｉｓ，ｃｉｓ−９，１１−オクタデカジエン酸、精製されたｔｒａｎｓ，ｃｉｓ
−１０，１２−オクタデカジエン酸、精製されたｃｉｓ，ｔｒａｎｓ−９，１１
−オクタデカジエン酸とｔｒａｎｓ，ｃｉｓ−９，１１−オクタデカジエン酸の
混合物、又は他の精製されたＣＬＡの異性体が含まれ、本発明の方法はそれらの
使用を含み得る。

【０００９】 本発明の第一の側面では、ＣＬＡの塩、そのエステル（例えば、モノグリセリ
ド、ジグリセリド及びトリグリセリドを包含する）、その活性異性体及びそれら
の混合物を包含する、ＣＬＡの治療有効量を動物へ投与することを包含する動物
の糖尿病を治療する方法が提供される。ＣＬＡはリノール酸（ｃｉｓ，ｃｉｓ−
９，１２−オクタデカジエン酸）の位置及び幾何異性体の群に言及する。位置異
性体に９位と１１位の炭素原子か１０位と１２位の炭素原子のいずれかに二重結
合を有する異性体が含まれるのに対し、幾何異性体にはｃｉｓ及び／又はｔｒａ
ｎｓ配置を有する異性体が含まれる。従って、ＣＬＡにはいくつかの可能な異性
体が存在し、限定しないが、それにはｃｉｓ，ｃｉｓ−９，１１−オクタデカジ
エン酸；ｃｉｓ，ｔｒａｎｓ−９，１１−オクタデカジエン酸；ｔｒａｎｓ，ｃ
ｉｓ−９，１１−オクタデカジエン酸；ｔｒａｎｓ，ｔｒａｎｓ−９，１１−オ
クタデカジエン酸；ｃｉｓ，ｃｉｓ−１０，１２−オクタデカジエン酸；ｃｉｓ
，ｔｒａｎｓ−１０，１２−オクタデカジエン酸；ｔｒａｎｓ，ｃｉｓ−１０，
１２−オクタデカジエン酸；及びｔｒａｎｓ，ｔｒａｎｓ−１０，１２−オクタ
デカジエン酸が含まれる。ｃｉｓ，ｔｒａｎｓ−９，１１及びｔｒａｎｓ，ｃｉ
ｓ−９，１１異性体はまだ互いから独立に単離されてはいないが、文献では、ｃ
ｉｓ，ｔｒａｎｓ−９，１１−オクタデカジエン酸という用語は、ｃｉｓ，ｔｒ
ａｎｓ−９，１１とｔｒａｎｓ，ｃｉｓ−９，１１異性体の両方に言及するため
に曖昧に使用される。

【００１０】 本発明に利用されるＣＬＡは、当技術分野及び文献で知られている技術を使用
して製造されるか又は市販製品として得られる。ＣＬＡは、例えば、Ｐｈａｒｍ
ａｎｕｔｒｉｅｎｔｓ社、レークブラフ、ＩＬ；ＮｕＣｈｅｋ Ｐｒｅｐ、イリ
ジャン、ＭＮ；及びＰｅａｋ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ、シラキューズ、ＮＥのよう
な企業から購入し得るが、ＮｕＣｈｅｋ Ｐｒｅｐの販売しているＣＬＡが好ま
しい。異性体の相対比は市販のＣＬＡで異なる場合がある。市販の組成物にはま
た、リノール酸のような他の脂肪酸、並びに極性の末端基を有する直鎖の炭化水
素のような他の脂質が含まれ得る。例えば、ＣＬＡ混合物には、当技術分野で知
られている他の飽和又は不飽和脂肪酸、又はＣＬＡの分解産物が含まれ得る。市
販の組成物にはまた、ビタミンＥ、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）又
はブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）のような抗酸化剤も含まれ得る。ＣＬ
Ａはまた当技術分野で知られている方法によって合成され得る。例えば、ＣＬＡ
は、当技術分野で知られていて、そのまま参照により本明細書に組込まれている
、Ｄｏｒｍａｎｄｙ ＴＬ，Ｗｉｃｋｅｎｓ ＤＧ，Ｃｈｅｍ．Ｐｈｙｓ．Ｌｉ
ｐｉｄｓ ４５：３５３−６４（１９８７）に記載されている、ラジカル発生分
子種及びイオウ残基に富むタンパク質を利用するリノール酸の異性化反応から合
成され得る。他の例として、ＣＬＡは、そのまま参照により本明細書に組込まれ
ているＣｏｏｋらへの米国特許第５，６７０，０８２号に記載されているように
、不活性気体の中でリノール酸又はベニバナ油を加熱して次いで酸性化し抽出す
ることによって、リノール酸又はベニバナ油から合成され得る。さらに、ｔｒａ
ｎｓ，ｔｒａｎｓ−９，１１、ｃｉｓ，ｃｉｓ−９，１１異性体、（ｔｒａｎｓ
，ｃｉｓ−９，１１異性体と複合した）ｃｉｓ，ｔｒａｎｓ−９，１１及びｃｉ
ｓ，ｔｒａｎｓ−１０，１２異性体のようなＣＬＡの特定の異性体は、今日では
当技術分野で知られている方法によって純粋な形態で合成され得る。ＣＬＡの塩
は、ナトリウム塩及びカリウム塩を含め、当技術分野で知られているものである
。

【００１１】 ＣＬＡを合成するために使用されるリノール酸、又は混合物に含まれる他の脂
肪酸は、大豆、綿実、コーン、ヒマワリ、ベニバナ、キャノーラ及びヤシ油を包
含する植物の供給源から得られる。特にリノール酸に富むのは、大豆、コーン、
ヒマワリ及びベニバナ油である。リノール酸はまた植物源から単離されたトリグ
リセリドを当技術分野で知られている方法により加水分解して得られる。例えば
、トリグリセリドは植物バイオマスを脂肪族の溶媒を用いて溶媒抽出することに
より植物源から得られる。続く追加の精製は、蒸留、分別晶出、脱ガム、漂白及
び蒸気ストリッピングを含み得る。トリグリセリドは必要に応じて水素添加され
得る。次いでトリグリセリドは、当技術分野で知られている酵素的（例えば、リ
パーゼの使用）又は化学的（例えば、アルカリ加水分解による）な方法のいずれ
かによって加水分解され得る。リノール酸はまた石油化学系の脂肪族アルコール
からも合成され得る。他のやり方では、遊離脂肪酸及びトリグリセリドは、Ｃａ
ｒｇｉｌｌ、Ａｒｃｈｅｒ Ｄａｎｉｅｌ Ｍｉｄｌａｎｄｓ及びＣｅｎｔｒａ
ｌ Ｓｏｙａを包含する市販の供給源から得られる。

【００１２】 ＣＬＡはまた、反芻動物の肉、滅菌した酪農製品及びプロセスチーズにも見出
され得る。さらに、酪農製品中のＣＬＡ量は当技術分野で知られている方法によ
って増やすことができる。例えば、牛乳のＣＬＡ量は、牧草だけの餌か、そのま
ま参照により本明細書に組込まれているＳａｔｔｅｒらへの米国特許第５，７７
０，２４７号に記載されているように、リノール酸又はリノレン酸を含有する植
物油を重量にして約１％〜約５％含有する餌のいずれかを乳牛へ与えることによ
って増加され得る。ＣＬＡはまた、当技術分野で知られているようにリノール酸
の酵素的変換によっても得られる。例えば、ＣＬＡは、酵素Ｗ−ｃｉｓ，Ｗ−ト
ランスイソメラーゼを利用して製造され得る。この酵素は、例えば、Ｂｕｔｙｒ
ｉｖｉｂｒｉｏ ｆｉｂｒｉｓｏｌｖｅｎｓのような反芻胃の細菌から得られる
。ラット及び他の単胃動物の腸管内の無害な微生物も、Ｃｈｉｎ，ＳＦら、ＦＡ
ＳＥＢ Ｊ，６（１９９２）に記載のように、リノール酸をＣＬＡへ変換し得る
。

【００１３】 ＣＬＡは様々な形態で投与され得る。例えば、ＣＬＡは、錠剤、溶液又は乳濁
液、又はカプセルの形態で投与され得る。ＣＬＡはまた製剤的に許容される担体
と混合し得る。錠剤では、固体の担体に、例えばラクトース、デンプン、カルボ
キシメチルセルロース、デキストリン、リン酸カルシウム、炭酸カルシウム、合
成又は天然の珪酸カルシウム、酸化マグネシウム、乾燥水酸化アルミニウム、ス
テアリン酸マグネシウム、重炭酸ナトリウム、乾燥酵母又はそれらの複合物が含
まれ得る。溶液では、担体は油であり得るが、好ましくは非経口投与用の滅菌水
又は滅菌生理食塩水である。ＣＬＡはまた、当技術分野で知られている他の薬物
が投与される形態でも投与され得る。

【００１４】 ＣＬＡは多種多様な方法で投与され得る。例えば、ＣＬＡは、静脈内、直腸内
、並びに腹腔内のように非経口的に投与され得る。

【００１５】 本発明のもう１つの特徴では、あるＣＬＡ異性体がより高い活性を有すること
が発見された。従って、本発明のさらに別の側面では、精製されたＣＬＡ異性体
が動物へその必要時に投与され、食物組成物を形成するために食物製品へ加えら
れ得る。ＣＬＡ異性体は、粉末又はコーン油のような油において、単独でか又は
ココヤシ油のような他の油と一緒にして、食物製品へ加え得る。１つの好ましい
食物組成物には、精製されたｃｉｓ，ｔｒａｎｓ−９，１１−オクタデカジエン
酸及びｔｒａｎｓ，ｃｉｓ−９，１１−オクタデカジエン酸の混合物から主に（
即ち、５０％以上）構成されるＣＬＡが含まれる。もう１つの有用な食物組成物
は、ｃｉｓ，ｃｉｓ−９，１１−オクタデカジエン酸又はｔｒａｎｓ，ｃｉｓ−
１０，１２−オクタデカジエン酸から主に構成される混合物を包含し得る。さら
に好ましい態様では、食物組成物は、精製されたｃｉｓ，ｔｒａｎｓ−９，１１
−オクタデカジエン酸及びｔｒａｎｓ，ｃｉｓ−９，１１−オクタデカジエン酸
の混合物を包含し得る。このことに関し、特定のＣＬＡ異性体又は異性体の混合
物に言及するために本明細書で使用される「精製された」という用語は、特定さ
れる異性体以外のＣＬＡ異性体を約１０重量％以下しか含まないＣＬＡ組成物の
ことを意味する。好ましくは、特定された異性体又は混合物は、他のＣＬＡ異性
体を約５重量％以下、より好ましくは約３重量％以下しか含まない。本発明の他
の側面では、食物組成物は、精製されたｃｉｓ，ｃｉｓ−９，１１−オクタデカ
ジエン酸、又はｔｒａｎｓ，ｃｉｓ−１０，１２−オクタデカジエン酸を含む他
の精製されたＣＬＡ異性体を包含し得る。さらなる態様では、食物組成物は精製
されたＣＬＡの混合物を包含し得る。例えば、ＣＬＡは、ＣＬＡ異性体のすべて
より少数の異性体を包含する精製されたＣＬＡの混合物を製造するために、種々
の程度へ精製され得る。精製されたＣＬＡ異性体は、例えば、シリアル、肉、卵
、チーズ及び他の酪農製品、野菜、パン及び他の小麦粉又はふすまをベースとす
る製品、及び糖菓製品を包む、食物製品に包含され得る。ＣＬＡ異性体はまた消
費飲料に加え得るが、溶かすために様々な乳化剤を必要とし得る。

【００１６】 投与される治療有効量は、糖尿病の動物に有益な効果をもたらす。例えば、治
療有効量とは、糖尿病動物の糖耐性を正常化するのに望ましくは十分である。糖
耐性の正常化は、例えば、当技術分野で知られていて以下の実施例に記載されて
いるような糖負荷試験によって判定され得る。さらに、投与されるＣＬＡの量は
また、好ましくはインスリンの血液レベルを下げる、及び／又は循環の遊離脂肪
酸又はトリグリセリドのレベルを下げるに十分であろう。インスリン、遊離脂肪
酸及びトリグリセリドの血液レベルは、望ましくは少なくとも約５％、より好ま
しくは少なくとも約２０％、及びさらに最も好ましくは少なくとも約５０％減少
される。糖尿病の動物へ投与されるＣＬＡの量は、動物の年齢、動物の全般的な
健康及びその糖尿病態の重症度に応じて変化する。しかしながら、糖尿病を治療
される動物は、通常、少なくとも約１ｍｇ ＣＬＡ／ｋｇ体重／日から動物に有
毒でない最高のレベルまで受けることが期待される。典型的には、動物は、約１
ｍｇ ＣＬＡ／ｋｇ体重／日〜約１０，０００ｍｇ ＣＬＡ／ｋｇ体重／日まで
受けることが可能である。しかしながら、比較的少量のＣＬＡ、例えば、約１ｍ
ｇ ＣＬＡ／ｋｇ体重／日〜約１５０ｍｇ ＣＬＡ／ｋｇ体重／日、及びより望
ましくは約１０ｍｇ ＣＬＡ／ｋｇ体重／日〜約５０ｍｇ ＣＬＡ／ｋｇ体重／
日の範囲で十分であろう。さらに、ＣＬＡが食物製品に含まれるとき、食物製品
の摂取あたり、上記の好ましい量のＣＬＡ／ｋｇ体重／日を提供するＣＬＡの量
を包含することが有利である。

【００１７】 本発明のさらに別の特徴では、ＣＬＡは、例えばＣＬＡのエステル、好ましく
はトリグリセリドの形態で体内でＣＬＡを放出する組成物において動物へ投与さ
れ得る。さらに好ましい態様では、トリグリセリドは、グリセロールとのエステ
ルの形態で少なくとも１つのＣＬＡ残基を包含し、他の不飽和又は飽和脂肪酸残
基、好ましくは不飽和脂肪酸のリノール酸を有し得る。より好ましい側面では、
トリグリセリドはグリセロールとのエステルの形態で３つのＣＬＡ残基を包含す
る。ＣＬＡ残基は、好ましくはｃｉｓ，ｔｒａｎｓ−９，１１及びｔｒａｎｓ，
ｃｉｓ−９，１１異性体又はｃｉｓ，ｃｉｓ−９，１１異性体のような最も活性
なＣＬＡの異性体であるが、他の異性体のいずれをも包含し得る。摂取されると
、ＣＬＡ残基は、例えばリパーゼの作用を介した酵素的加水分解によって動物の
胃の中で放出され得る。トリグリセリドは上記のように植物源から精製し得るか
、市販品から購入し得るか又は当技術分野で知られている方法によってグリセロ
ール及びそれぞれの脂肪酸から合成し得る。投与される治療有効量は、少なくと
も上記に論じた要因に依存する。投与されるトリグリセリドの量は、上記に特定
されたＣＬＡの量を提供するものであり得る。特定の用量に達するのに必要とさ
れるトリグリセリドの量は、トリグリセリドを含んでなるＣＬＡエステル又は残
基の数に依存し、当業者によって容易に算出され得る。トリグリセリドは、ＣＬ
Ａについて記載したものと類似の形態で投与され得る。

【００１８】 ＣＬＡは、哺乳動物のような温血の脊椎動物を包含する、糖尿病をもった動物
へ投与され得る。哺乳動物のリストには、例えば、ヒトが含まれる。

【００１９】 以下に、上記の組成物及び方法を示す特定の実施例について言及する。実施例
は好ましい態様を示すために提供され、それによって本発明の範囲を制限するこ
とを意図しないと理解されるべきである。以下の試験からのデータは、統計分析
システム（ＳＡＳ；キャリー、ＮＣ）又はマッキントッシュ用のＳｔａｒＶｉｅ
ｗ（Ａｂａｃｕｓ Ｃｏｎｃｅｐｔｓ，バークレー、ＣＡ）を使用するＡＮＯＶ
Ａ（一般線形モデル、ＮＣ）によって解析した。

【００２０】

【実施例】

実施例１ ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体（ＰＰＲＡ）のＣＬＡによる活性化 この実施例では、ＣＬＡがいくつかのＰＰＡＲサブタイプの活性化に関わるこ
とが示される。細胞内のタンパク質受容体であるＰＰＡＲは、脂質代謝酵素の発
現を調節している可能性があり、細胞の増殖及び／又は分化に影響を及ぼし得る
ステロイドホルモンスーパーファミリーのメンバーである。ヒトを含め、いくつ
かの種で３種のＰＰＡＲサブタイプ（α、β及びγ）が同定されている。ＰＰＡ
Ｒγは、チアゾリジンジオン及びフィブレート低脂血漿薬として知られている薬
物群の抗糖尿病及びグルコース低下活性に関与していると考えられている。ＰＰ
ＡＲは、ペルオキシソーム増殖因子、チアゾリジンジオン及び脂肪酸によって活
性化され得る。ペルオキシソーム増殖因子の作用機序を図１に示し、ＰＰＡＲサ
ブタイプの活性化剤の効果を表１に示す。

【００２１】

【表１】

【００２２】 ＣＯＳ−１細胞（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅ
ｃｔｉｏｎ）を、８％胎仔血清（Ｇｉｂｃｏ ＢＲＬ）、ストレプトマイシン０
．２ｍｇ／ｍｌ及びペニシリン２００Ｕ／ｍｌを補充したα−最少必須培地（シ
グマ）で維持した。マウスのＰＰＡＲα、β又はγのリガンド結合ドメインを含
有するｐＳＧ５−ＧＡＬ４−ＰＰＡＲキメラ発現構築体、並びに（ＵＡＳ）₅− ｔｋ−ＣＡＴレポーター構築体は、Ｓｔｅｖｅｎ Ａ．Ｋｌｉｅｗｅｒ（グラク
ソ研究所）の厚意により頂戴した。Ｌｅｈｍａｎｎ，Ｊ．Ｍ．ら、Ｊ．Ｂｉｏｌ
．Ｃｈｅｍ．２７０，１２９５３−１２９５６（１９９５）に記載のように、７
５〜９０％の集密状態のＣＯＳ−１細胞をＧＡＬ４−ＰＰＡＲ、（ＵＡＳ）₅− ｔｋ−ＣＡＴ及びｐＳＶ−βＧＡＬ（プロメガ）で当時トランスフェクトした。
トランスフェクションから２４時間後に、指定量のＣＬＡ又は単に１００μＭ量
の４−クロロ−６−（２，３−キシリンジノ）−２−ピリミジンニルチオ）−酢
酸（Ｗｙ１４，６４３；ペルオキシソーム増殖因子として知られている低脂血症
薬）で細胞を処置した。処置から６時間後に細胞を回収し、製造業者の指示書に
よるＥＬＩＳＡ（Ｇｉｂｃｏ ＢＲＬ）によってクロラムフェニコールアセチル
トランスフェラーゼのレベルを評価した。データはβ−ガラクトシダーゼ活性に
比較して表す。この実験に使用したＣＬＡは、ＮｕＣｈｅｋ Ｐｒｅｐ、イリジ
ャン、ＭＮから入手される市販の混合物から得た。この混合物は、ｃｉｓ，ｔｒ
ａｎｓ−９，１１−オクタデカジエン酸及びｔｒａｎｓ，ｃｉｓ−９，１１−オ
クタデカジエン酸を包含する組成物を約４１．２重量％、ｔｒａｎｓ，ｃｉｓ−
１０，１２−オクタデカジエン酸を約４４重量％、ｃｉｓ，ｃｉｓ−１０，１２
−オクタデカジエン酸を約９．４重量％、ｔｒａｎｓ，ｔｒａｎｓ−９，１１−
オクタデカジエン酸及びｔｒａｎｓ，ｔｒａｎｓ−１０，１２−オクタデカジエ
ン酸を包含する組成物を約１．３重量％、ｃｉｓ，ｃｉｓ−９，１１−オクタデ
カジエン酸を約１．１重量％、リノール酸を約０．７重量％及び上記のような他
の脂質を約２％含有した。

【００２３】 図２は、試験したＰＰＡＲの全サブタイプがＣＬＡによって活性化されたこと
を示す。ＰＰＲＡαは、ＰＰＲＡβ又はＰＰＲＡγのいずれよりも大きい程度で
活性化された。しかしながら、ＰＰＲＡβ及びＰＰＲＡγは有意な量（対照の数
値より約２倍）で活性化された。市販の混合物によるＰＰＲＡαの活性化は、実
施例２に論じられるように、ｃｉｓ，ｔｒａｎｓ−９，１１−オクタデカジエン
酸異性体の結果であると考えられる。さらに、ＣＬＡによるＰＰＡＲ活性化の生
物学的効果は、図３に示すように、試験される組織及び主要なＰＰＡＲサブタイ
プに依存する。 実施例２ ＣＬＡ異性体によるＰＰＡＲサブタイプの活性化 この実施例では、あるＰＰＡＲサブタイプがＣＬＡ異性体によって活性化され
ることを示す。実施例１に記載したのと同じ実験方法を実施して、図４に示すデ
ータを得た。しかしながら、ＣＬＡのどの特定の異性体がＰＰＡＲサブタイプの
いずれをも活性化し得るかを判定するために、トランスフェクションアッセイに
も１００μＭ濃度の選択したＣＬＡ異性体を利用した。

【００２４】 図５〜７のデータは、完全長のマウスＰＰＡＲα、ＰＰＡＲβ又はＰＰＡＲγ
及びルシフェラーゼレポーター遺伝子を包含する構築体を利用して得た。使用し
たＣＶ−１細胞系（アフリカミドリザルの腎細胞）はＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐ
ｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（＃ＣＣＬ−７０）より入手した。
１０％胎仔血清（ＧＩＢＣＯ）を含有するイーグル最少必須培地でこの細胞を増
殖させた。ＰＰＡＲαに関する各トランスフェクションには、ｐｓＶ−ＧＬ−２
−ＰＰＲＥ−ルシフェラーゼレポータープラスミド２５０ｎｇ及びｐＳＶ−β−
ガラクトシダーゼ内部対照プラスミド２５０ｎｇとともに、ｐｃＤＮＡ３−ＰＰ
ＡＲα発現ベクター６２５ｎｇを使用した。ＰＰＡＲβ又はＰＰＡＲγに関する
各トランスフェクションには、ｐｓＶ−ＧＬ２−ＰＰＲＥ−ルシフェラーゼレポ
ータープラスミド２５０ｎｇ及びｐＳＶ−β−ガラクトシダーゼ内部対照プラス
ミド２５０ｎｇとともに、ｐＳＧ５−マウス−ＰＰＡＲβ ６２５ｎｇ又はｐＳ
Ｇ５−マウス−ＰＰＡＲγ ６２５ｎｇを使用した。Ｌｉｐｏｆｅｃｔ ＡＭＩ
ＮＥ^TM試薬（ＧＩＢＣＯ）及びフェノールレッドを含まない無血清培地（Ｏｐｔ
ｉＭＥＭ（Ｒ）Ｉ，ＧＩＢＣＯ Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，グラン
ドアイランド、ＮＹ）を使用して細胞をトランスフェクトした。トランスフェク
ションから７時間後に、木炭処理血清（Ｃｏｃａｌｉｃｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａ
ｌｓ社、リームズタウン、ＰＡ）を培地へ加え（最終濃度：１０％）、一晩（１
６時間）インキュベーションした。トランスフェクトされた細胞を様々な用量又
は１００μＭのＣＬＡ、９Ｚ，１１Ｅ（ｃｉｓ，ｔｒａｎｓ−９，１１）異性体
（純度９７％）、９Ｅ，１１Ｅ（ｔｒａｎｓ，ｔｒａｎｓ−９，１１）異性体（
純度９８％）、１０Ｅ，１２Ｚ（ｔｒａｎｓ，ｃｉｓ−１０，１２）異性体又は
他の指定された活性化剤で６時間処置した。ルシフェラーゼ及びβ−ガラクトシ
ダーゼ活性は、製造業者（Ｐｒｏｍｅｇａ，マジソン、ＷＩ）のプロトコールに
従って、細胞溶解液についてアッセイした。ルシフェラーゼ／β−ガラクトシダ
ーゼ活性に関してデータを定量化し、担体処置細胞（０．１％ ＤＭＳＯ）に対
する比率として表した。

【００２５】 図４は、試験した異性体がいずれもすべてのＰＰＡＲサブタイプを活性化した
ことを示す。しかしながら、９Ｚ１１Ｚ（ｃｉｓ，ｃｉｓ−９，１１）及び９Ｚ
１１Ｅ（ｃｉｓ，ｔｒａｎｓ−９，１１）異性体はＣＬＡ混合物よりＰＰＡＲα
及びＰＰＡＲβを活性化し、９Ｅ１１Ｅ（ｔｒａｎｓ，ｔｒａｎｓ−９，１１）
異性体だけがＣＬＡ混合物単独よりＰＰＡＲβを活性化した。ＣＬＡ混合物より
もＰＰＡＲγを活性化した異性体はない。さらに、同様の試験では、ヒトＰＰＡ
ＲγもＣＬＡによって活性化され（データ示さず）、本発明の裏付けとなる分子
的事象がヒトでも起きていることを示している。

【００２６】 図５〜７に示したデータは、ｔｒａｎｓ，ｃｉｓ−１０，１２−オクタデカジ
エン酸異性体を含め、試験したＣＬＡ異性体がいずれもＤＭＳＯ対照に比較して
それぞれのＰＰＡＲサブタイプを活性化することを示す。さらに、図５及び６の
データは、ｔｒａｎｓ，ｃｉｓ−１０，１２のＣＬＡ異性体がＣＬＡ混合物単独
よりも有意にＰＰＡＲα及びＰＰＡＲβを活性化したことを示す。 実施例３ 遺伝子発現に対するＣＬＡの効果 あるＰＰＡＲサブタイプの活性化は、遺伝子誘導のような遺伝子発現の変化を
もたらす。この実施例では、ＰＰＡＲγの活性化を必要とする、マウス３Ｔ３−
Ｌ１前脂肪細胞の脂肪細胞への分化を示す２種の分化マーカーをＣＬＡが誘導す
ることが見出された。試験した２種のマーカーとは、脂肪細胞タンパク質−２（
ｍＡＰ２）のｍＲＮＡとＰＰＡＲγのｍＲＮＡである。 ３Ｔ３−Ｌ１細胞の培養 マウス３Ｔ３−Ｌ１前脂肪細胞（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒ
ｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）を、１０％胎仔血清（Ｇｉｂｃｏ ＢＲＬ）、スト
レプトマイシン０．２ｍｇ／ｍｌ及びペニシリン２００Ｕ／ｍｌを補充したダル
ベッコ改良イーグル培地（ＤＭＥＭ）（「増殖培地」）で維持した。Ｂｒａｎｄ
ｅｓ，Ｒ．，Ａｒａｄ，Ｒ．，ａｎｄ ＢａｒＴａｎａ，Ｊ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ
．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５０，１９４９−１９５１（１９９５）に記載のように
分化を誘導した。簡潔に述べると、１０％ ＦＣＳ及び０．１μＭ デキサメサ
ゾン添加ＤＭＥＭ（「誘導培地」）に様々な濃度のＣＬＡ（最終濃度：２５〜２
５０μＭ）、リノール酸（１００μＭ）、Ｗｙ１４，６４３（１００μＭ）又は
担体（ＤＭＳＯ）を加えた溶液を集密状態の３Ｔ３−Ｌ１前脂肪細胞へ加えるこ
とによって、分化を誘導した。４８時間後、誘導培地を除去し、インスリン４ｍ
Ｕ／ｍｌを含む誘導培地で置換した。この培地は４８時間ごとに換えた。様々な
時点で、細胞を２回ＰＢＳ洗浄し、ＴｒｉＲｅａｇｅｎｔ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ）を使用して全ＲＮＡを抽出した。

【００２７】 ＰＰＡＲγ（γ１及びγ２）及び脂肪細胞タンパク質−２（ｍＡＰ２）を包含
する脂肪細胞特異的なマーカーを試験することによって、マウス３Ｔ３−Ｌ１細
胞の分化をモニターした。ハウスキーピング遺伝子であるβ−アクチンも、Ｖａ
ｎｄｅｎ Ｈｅｕｖｅｌ，Ｊ．Ｐ．ら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５４，６２−６
８（１９９４）に記載のように試験した。それぞれのプライマーセットに特異的
な内部標準を使用し（Ｖａｎｄｅｎ Ｈｅｕｖｅｌ，Ｊ．Ｐ．，Ｔｙｓｏｎ，Ｆ
．ａｎｄ Ｂｅｌｌ，Ｄ．Ａ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １４，３９５−
３９８（１９９３））、定量的逆転写酵素ポリメラーゼ連鎖反応を利用して上記
遺伝子のｍＲＮＡ発現を定量した（Ｖａｎｄｅｎ Ｈｅｕｖｅｌ，Ｊ．Ｐ．，Ｐ
ＣＲ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｏｘｉｃｏｌ
ｏｇｙ，２１８ｐｇｓ．ＣＲＣプレス、ボカレイトン、ＦＬ（１９９７），利用
したプライマー配列については表２を参照のこと）。

【００２８】

【表２】

【００２９】 図８にみられるように、ＣＬＡにはｍＡＰ２とＰＰＡＲγの両方のｍＲＮＡを
誘導する効果がある。また、この３Ｔ３−Ｌ１バイオアッセイにおけるＰＰＡＲ
γ・ｍＲＮＡのリガンドとして、図４に結果が示されているトランス活性化アッ
セイから予測される以上にＣＬＡが強力であることも認められる。図８はまた、
この分化アッセイにおける最も有効なＣＬＡ濃度が５０μＭであったことを示す
。 動物試験 ６週齢の雄ツッカー肥満（ｆａ／ｆａ）ラット及び痩せ同腹子（ｗｔ）をＧｅ
ｎｅｔｉｃｓ Ｍｏｄｅｌｓ社（インディアナポリス、ＩＮ）より入手した。こ
の試験の主要目的が、インスリン作用を改善して糖尿病の発症を防ぐＣＬＡの能
力を判定することであったので、実験処置へ割当てる前に、すべてのラットが正
常血糖であることを確認した（食餌については以下の節で論じる）。ラットを実
験食で１４日間維持した後で、ＣＯ₂及び頚部脱臼によって安楽死させ、組織を 採取し、重量測定し、凍結した。上記のようにＲＴ−ＰＣＲを実施した。

【００３０】 組織及びサブタイプ特異的なＰＰＡＲ活性化のマーカーとして利用した遺伝子
には、アセチル−ＣｏＡオキシダーゼ（ＡＣＯ；肝臓にあってＰＰＡＲαの活性
化によって誘導される）、脂肪細胞特異的タンパク質（ｍＡＰ２；脂肪組織にあ
ってＰＰＡＲγの活性化によって誘導される）及び筋肉内のＡＣＯ（ＰＰＡＲβ
によって誘導される）が含まれた。

【００３１】 図９に示されるように、ＣＬＡもトログリタゾン（５−［［４−（３，４−ジ
ヒドロ−６−ヒドロキシ−２，５−７，８−テトラメチル−２Ｈ−１−ベンゾピ
ラン−２−イル）メトキシ］フェニル］メチル−２，４−チアゾリジンジオン；
ＴＺＤ；Ｒｅｚｕｌｉｎ、Ｐａｒｋｅ−Ｄａｖｉｓ）も、ＰＰＡＲα含有組織（
肝臓）及びＰＰＡＲγが支配的な組織（脂肪組織）におけるＡＣＯのｍＲＮＡ発
現を有意に誘導するが、ＰＰＡＲβが支配的な組織（筋肉）に対しては効果がな
かった。脂肪組織におけるｍＡＰ２の誘導は、３Ｔ３−Ｌ１細胞において観察さ
れたＰＰＡＲγの活性化を裏付ける。 実施例４ ツッカー肥満ｆａ／ｆａラットの糖耐性の正常化に対する食餌ＣＬＡの効果 ツッカーｆａ／ｆａラットは、成人発症性糖尿病の試験に好適な動物モデルで
ある。この実施例では、ｆａ／ｆａラット並びにその痩せた対照動物（野生型、
ｗｔ）の循環インスリン、トリグリセリド及び遊離脂肪酸レベルに対する３種の
食餌（対照、ＣＬＡ、ＴＺＤ）の効果を判定した。さらに、ＣＬＡがＴＺＤのよ
うなＰＰＡＲγ活性化剤としてインスリン感受性を高めるかどうかを判定するた
めに、糖負荷試験を実施した。

【００３２】 食餌成分はＤｙｅｔｓ社（ベツレヘム、ＰＡ）から、ＣＬＡ異性体の混合物（
純度９０％の混合物）は、ＰｈａｒｍａＮｕｔｒｉｅｎｔｓ，シカゴ、ＩＬから
入手した。ＣＬＡ混合物は以下の異性体分布であった：ｃｉｓ，ｔｒａｎｓ−９
，１１及びｔｒａｎｓ，ｃｉｓ−９，１１−オクタデカジエン酸を包含する組成
物 ４２％；ｔｒａｎｓ，ｃｉｓ−１０，１２−オクタデカジエン酸 ４３．５
％；ｃｉｓ，ｃｉｓ−９，１１−オクタデカジエン酸 １％；ｃｉｓ，ｃｉｓ−
１０，１２−オクタデカジエン酸 １％；及びｔｒａｎｓ，ｔｒａｎｓ−９，１
１−オクタデカジエン酸及びｔｒａｎｓ，ｔｒａｎｓ−１０，１２−オクタデカ
ジエン酸を包含する組成物 １．５％（いずれも重量％）。ＣＬＡ混合物には、
重量％で、約０．５％のリノリエート、約５．５％のオレエート及び約５％の他
の上記脂質が含まれていた。上記試験における抗糖尿病活性の陽性対照としては
、チアゾリジンジオン、ＴＺＤ（Ｒｅｚｕｌｉｎ^TM，Ｐａｒｋｅ−Ｄａｖｉｓ，
アンアーバー、ＭＩ）を使用した。６週齢の雄ツッカー肥満（ｆａ／ｆａ）ラッ
ト及び痩せ同腹子（ｗｔ）をＧｅｎｅｔｉｃｓ Ｍｏｄｅｌｓ社（インディアナ
ポリス、ＩＮ）より購入した。この試験の主要目的が、インスリン作用を改善し
て糖尿病の発症を防ぐＣＬＡの能力を判定することであったので、実験処置へ割
当てる前に、すべてのラットが正常血糖であることを確認した。ラットを実験食
で１４日間維持した後で、ＣＯ₂及び頚部脱臼によって安楽死させ、血液を採取 し、摂食後グルコース濃度（以下参照）をすぐに分析するか、又は以下に示すよ
うに血漿分析用ヘパリン加試験管へ入れた。副睾丸脂肪パッド及び肝臓を採取し
、重量を量った。副睾丸脂肪パッドのアリコートを、グルコース輸送分析のため
に緩衝化生理食塩水へ単離し、残りの副睾丸脂肪パッド及び腓腹筋を単離し、す
ぐに液体窒素で凍結し、ｍＲＮＡ及びタンパク質分析を実施するまで−８０℃で
保管した。 実験食 ３種類の等カロリー実験食を、脂肪６．５％（重量）を含有する変更したＡＩ
Ｎ−７６混合物に従って調合した（アメリカ栄養研究所：栄養試験の標準食に関
するアメリカ栄養研究所臨時委員会報告、Ｊ．Ｎｕｔｒ．１０７，１３４０−１
３４８（１９７７）に記載された食餌。５重量％の脂肪の代わりに６．５重量％
の脂肪を含む）。必須脂肪酸であるリノール酸に富むコーン油をすべての食餌に
同量（５％）使用した。実験食は、コーン油５％＋ラード１．５％＋ＣＬＡ０％
（対照食）、コーン油５％＋ＣＬＡ１．５％（ＣＬＡ食）、又はコーン油５％＋
ラード１．５％＋トログリタゾン０．２％（ＴＺＤ食）のいずれかを含有した。
１．５％のＣＬＡ用量が選択されたのは、この用量で肝臓におけるＰＰＡＲ関連
遺伝子の発現がモジュレートされること（Ｂｅｌｕｒｙ，Ｍ．Ａ．ら、Ｎｕｔｒ
．Ｂｉｏｃｈｅｍ．８：５７９−８４（１９９７））及びマウス皮膚における腫
瘍産生が阻害されること（Ｂｅｌｕｒｙ，Ｍ．Ａ．ら、Ｎｕｔｒ．Ｃａｎｃｅｒ
２６：１４９−１５７（１９９６））を示した我々の研究室による以前の研究
結果に基づいている。この試験で使用されたＴＺＤの用量（０．２％）は、ツッ
カー（ｆａ／ｆａ）ラットにおいて、１５日後に糖耐性を正常化し、上昇したグ
ルコース、トリグリセリド、遊離脂肪酸及び尿タンパク質を抑制するのに有効で
あると示されている。食餌は１日おきに与え、ラットは食物及び水を自由に摂取
できた。１週間に２回体重を測定し、新たに供給した食事と２日後にフィーダー
に残っている食事の量の差を測定することによって平均食餌消費量を評価した。
ｆａ／ｆａラットの平均体重及び消費された食餌量を考慮すると、ｆａ／ｆａラ
ットは体重ｇあたり約１．７１ｍｇのＣＬＡを毎日摂取し、これは３７５ｍｇ／
日に相当した。 糖負荷試験 インスリンの作用に対するＣＬＡ及びＴＺＤの効果を比較するために、食事介
入の第１１日目に糖負荷試験を実施した。動物を一晩（１６時間）絶食させた。
意識のあるラットにＤ−グルコース（１ｇ／ｋｇ体重）を腹腔内注射し、尾静脈
より、注射前（０分）、注射後２、５、１０、１５、２０、４０、６０、１２０
及び１８０分の時点で血液サンプルを採取した。 血液代謝物及びホルモン濃度の定量 Ｏｎｅ Ｔｏｕｃｈグルコースメーター（Ｌｉｆｅｓｃａｎ社）を用いて血糖
レベルを定量した。血漿インスリンレベルは市販のラジオイムノアッセイキット
（Ｌｉｎｃｏ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，セントチャールズ、ＭＯ）を使用して定量し
た。血漿の非エステル化脂肪酸は比色測定キット（和光純薬）を使用して定量し
た。血漿トリグリセリド濃度は市販キット（Ｓｉｇｍａ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ
ｓ，セントルイス、ＭＯ）を使用して定量した。

【００３３】 図１０は、糖負荷試験の結果を示す。予測されるように、ｆａ／ｆａラットで
は血液からグルコースを除去する能力の減少が見られる（肥満対照と痩せ対照を
比較すること）。ＣＬＡかＴＺＤのいずれかを受けたｆａ／ｆａラットでは、血
糖値はそれぞれの対照動物に比較してずっと速やかに減少した。糖負荷試験はイ
ンスリン非依存型糖尿病（ＮＩＤＤＭ）の存在を評価するために用いられる汎用
的な試験なので、図１０に示したデータは、糖耐性の改善についてＣＬＡがＴＺ
Ｄと同じくらい有効であることを明瞭に示す。従って、ＣＬＡは、ＮＩＤＤＭを
有する個体への有効な治療薬となる可能性がある。

【００３４】 循環インスリン、血漿トリグリセリド及び循環の遊離脂肪酸の相対レベルを示
す結果を表３に示す。

【００３５】

【表３】

【００３６】 予測されたように、ｆａ／ｆａラットは、ｗｔ動物に比較してより高い血漿イ
ンスリン及びトリグリセリドを示した。しかしながら、ＣＬＡは、血漿インスリ
ン、トリグリセリド及び遊離脂肪酸を５０〜６０％減少させ、糖尿病の症状を有
意に改善した。さらに、ＴＺＤはｆａ／ｆａラットにおいて循環インスリン、ト
リグリセリド及び遊離脂肪酸を顕著に減少させ、ＴＺＤを有効な抗糖尿病薬とし
て裏付けた。ＣＬＡを使用する糖耐性の正常化及び他の生物学的効果に関するさ
らなる情報については、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．
，２４４，６７８−６８２（１９９８）が参考になり得る。

【００３７】 以上の図表及び説明において本発明を詳しく述べたが、それは説明のためであ
って、制限するようなものではないと考慮されなければならない。好ましい態様
だけを記述したのであり、本発明の精神に含まれるあらゆる変更及び改良が保護
されることが望ましいと考えられる。さらに、本明細書に引用された参考文献は
いずれも当技術分野の水準を示し、そのまま参照により本明細書に組込まれてい
る。

【図面の簡単な説明】

【図１】図１は、ペルオキシソーム増殖因子の作用機序を示す。

【図２】図２は、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体（ＰＰＲＡ）のＣ
ＬＡによる活性化の生物学的効果を示す。

【図３】図３は、異なるＰＰＲＡサブタイプについて、異なる濃度のＣＬＡ
及び１００μＭのＷｙ１４，６４３で産生されるクロラムフェニコールアセチル
トランスフェラーゼの量を対照に対する比率として示すグラフである。左パネル
、ＰＰＡＲα；中央パネル、ＰＰＡＲβ；右パネル、ＰＰＡＲγ。

【図４】図４は、様々なＣＬＡ異性体が３種の異なるＰＰＡＲサブタイプを
活性化する程度を示す棒グラフである。すべての化学薬品はジメチルスルホキシ
ド（ＤＭＳＯ）に溶かして１００μＭとして与えた。ＰＰＡＲα（Ｗｙ１４，６
４３）、ＰＰＡＲβ（ベザフィブレート；２−［４−２−［（４−クロロベンゾ
イル）アミノ］−エチル］フェノキシ］−２−メチルプロパン酸］）及びＰＰＡ
Ｒγ（トログリタゾン）の陽性対照を比較のために示す。使用したフランは、Ｃ
ＬＡの酸化生成物である８−（５−ヘキシル−２−フリル）−オクタン酸であっ
た。データは２回の実験の平均を示す。

【図５】図５は、ＣＬＡ及び様々なＣＬＡ異性体が完全長のＰＰＡＲαを活
性化する程度を示す棒グラフである。パネルＡは、完全長のマウスＰＰＡＲαの
ＣＬＡによる活性化を示す。トランスフェクトされた細胞を上昇濃度（０μＭ、
５μＭ、１０μＭ、５０μＭ、１００μＭ、１５０μＭ又は２００μＭ）のＣＬ
Ａ混合物で６時間処理した。星印は、ＤＭＳＯ処理細胞から有意に異なる（ｐ＜
０．０５，ｎ＝３）数値を示す；パネルＢは、ＣＬＡの様々な幾何異性体による
完全長ｍＰＰＡＲαの活性化を示す。トランスフェクトされた細胞を示したそれ
ぞれの活性化剤１００μＭで６時間処理した。異なる文字は有意差（ｐ＜０．０
５，ｎ＝３）を示す。

【図６】図６は、ＣＬＡ及び様々なＣＬＡ異性体が完全長のＰＰＡＲβを活
性化する程度を示す棒グラフである。トランスフェクトされた細胞を示した化合
物１００μＭで処理した。星印は有意差（ｐ＜０．０５，ｎ＝３）を示す。

【図７】図７は、ＣＬＡ及び様々なＣＬＡ異性体が完全長のマウスＰＰＡＲ
γを活性化する程度を示す棒グラフである。トランスフェクトされた細胞を示し
た化合物１００μＭで６時間処理した。星印は有意差（ｐ＜０．０５，ｎ＝３）
を示す。

【図８】図８は、３Ｔ３−Ｌ１前脂肪細胞の分化マーカーに対するＣＬＡの
効果を示す棒グラフである。集密状態のマウス前脂肪細胞を、指定濃度のＣＬＡ
、１００μＭのＷｙ１４，６４３（Ｗｙ）又は担体（ＤＭＳＯ）を含有する誘導
培地で４８時間処理した。次いで、インスリン入りの誘導培地を細胞へ加えた。
定量的ＲＴ−ＰＣＲを、各遺伝子に特異的な内部標準を使用して実施した。デー
タは、β−アクチンの発現で補正した、ＤＭＳＯ処理細胞に対する比率として３
回のサンプルの平均値として表されている。

【図９】図９は、組織特異的な遺伝子発現に対するＣＬＡ及びトログリタゾ
ン（ＴＺＤ）の効果を示す棒グラフである。ＡＣＯ及びｍＡＰ２をＲＴ−ＰＣＲ
により定量した。星印は、対照の食餌を与えたラットからの統計的有意差（ｐ＜
０．０５）を示す。

【図１０】図１０は、糖耐性に対する食餌ＣＬＡの効果を示すグラフである
。ツッカー痩せ（パネルＡ）又はｆａ／ｆａ（肥満、パネルＢ）ラットに実験食
を１４日間与え、糖耐性を測定した。数値は平均グルコース（ｍｇ／ｄｌ）±Ｓ
．Ｄ．（ｎ＝４［痩せラット］又は８［ｆａ／ｆａラット］）を表す。

【手続補正書】

【提出日】平成１３年３月２日（２００１．３．２）

【手続補正１】

【補正対象書類名】図面

【補正対象項目名】全図

【補正方法】変更

【補正内容】

【図１】

【図２】

【図３】

【図４】

【図５】

【図６】

【図７】

【図８】

【図９】

【図１０】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ) ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ， ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，Ｄ Ｋ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ， ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，Ｌ Ｔ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ， ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，Ｕ Ａ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ (71)出願人 Ｏｆｆｉｃｅ ｏｆ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇ ｙ Ｔｒａｎｓｆｅｒ，1063 Ｈｏｖｄｅ Ｈａｌｌ，Ｗｅｓｔ Ｌａｆａｙｅｔｔ ｅ，Ｉｎｄｉａｎａ 47907，Ｕｎｉｔｅ ｄ Ｓｔａｔｅｓ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ (72)発明者 ヴァンデン・ヒューヴェル，ジョン・ピー アメリカ合衆国ペンシルバニア州16807， ポート・マチルダ，ジェームズ・ヒル・ロ ード 101 (72)発明者 ベルリー，マーサ・エイ アメリカ合衆国インディアナ州47906，ウ エスト・ラファイエット，アイヴィー・ヒ ル・ドライブ 181 (72)発明者 ペック，ルイス・ダブリュー アメリカ合衆国インディアナ州47906，ウ エスト・ラファイエット，ウエスト・ 450・ノース 3200 Ｆターム(参考） 4C206 AA01 AA02 DB07 MA01 MA02 MA04 MA55 MA72 NA10 NA14 ZC35

Claims (21)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 治療有効量の複合リノール酸（ＣＬＡ）を動物へ投与するこ
   とを含んでなる、前記動物の糖尿病を治療する方法。
2. 【請求項２】 前記複合リノール酸が経口投与される、請求項１に記載の方
   法。
3. 【請求項３】 前記複合リノール酸がユニット剤形で投与される、請求項２
   に記載の方法。
4. 【請求項４】 前記ユニット剤形が食物製品である、請求項３に記載の方法
   。
5. 【請求項５】 前記複合リノール酸が９，１１−オクタデカジエン酸、その
   エステル、その幾何異性体、その塩及びそれらの混合物からなる群から選択され
   る、請求項１に記載の方法。
6. 【請求項６】 前記幾何異性体がｔｒａｎｓ，ｔｒａｎｓ；ｃｉｓ，ｃｉｓ
   ；ｔｒａｎｓ，ｃｉｓ；及びｃｉｓ，ｔｒａｎｓからなる群から選択される配置
   を有する、請求項５に記載の方法。
7. 【請求項７】 前記複合リノール酸が１０，１２−オクタデカジエン酸、そ
   のエステル、その幾何異性体、その塩及びそれらの混合物からなる群から選択さ
   れる、請求項１に記載の方法。
8. 【請求項８】 前記幾何異性体がｔｒａｎｓ，ｔｒａｎｓ；ｃｉｓ，ｃｉｓ
   ；ｔｒａｎｓ，ｃｉｓ；及びｃｉｓ，ｔｒａｎｓからなる群から選択される配置
   を有する、請求項７に記載の方法。
9. 【請求項９】 前記ＣＬＡがｃｉｓ，ｔｒａｎｓ−９，１１−オクタデカジ
   エン酸及びｔｒａｎｓ，ｃｉｓ−９，１１−オクタデカジエン酸から主に構成さ
   れる、請求項１に記載の方法。
10. 【請求項１０】 前記ＣＬＡがｃｉｓ，ｃｉｓ−９，１１−オクタデカジエ
    ン酸から主に構成される、請求項１に記載の方法。
11. 【請求項１１】 前記複合リノール酸が約１ｍｇの前記複合リノール酸／ｋ
    ｇ体重〜約１０，０００ｍｇの前記複合リノール酸／ｋｇ体重で投与される、請
    求項１に記載の方法。
12. 【請求項１２】 前記動物が哺乳動物である、請求項１に記載の方法。
13. 【請求項１３】 前記哺乳動物がヒトである、請求項１２に記載の方法。
14. 【請求項１４】 前記複合リノール酸が製剤的に許容される担体媒質におい
    て投与される、請求項１に記載の方法。
15. 【請求項１５】 前記製剤的に許容される担体媒質が水を包含する、請求項
    １４に記載の方法。
16. 【請求項１６】 ｃｉｓ，ｔｒａｎｓ−９，１１−オクタデカジエン酸及び
    ｔｒａｎｓ，ｃｉｓ−９，１１−オクタデカジエン酸の混合物から主に構成され
    る、複合リノール酸の治療有効量を有する食物製品を含んでなる、糖尿病を治療
    するのに有用な食物組成物。
17. 【請求項１７】 前記混合物の前記治療有効量が、摂取あたり約１ｍｇの前
    記混合物／ｋｇ体重から摂取あたり約１０，０００ｍｇの前記混合物／ｋｇ体重
    を提供するのに十分である、請求項１６に記載の食物組成物。
18. 【請求項１８】 ｃｉｓ，ｃｉｓ−９，１１−オクタデカジエン酸から主に
    構成される、複合リノール酸の治療有効量を有する食物製品を含んでなる、糖尿
    病を治療するのに有用な食物組成物。
19. 【請求項１９】 前記複合リノール酸が、摂取あたり約１ｍｇの前記ｃｉｓ
    ，ｃｉｓ−９，１１−オクタデカジエン酸／ｋｇ体重〜摂取あたり約１０，００
    ０ｍｇの前記ｃｉｓ，ｃｉｓ−９，１１−オクタデカジエン酸／ｋｇ体重を提供
    するのに十分な量で投与される、請求項１８に記載の食物組成物。
20. 【請求項２０】 ｔｒａｎｓ，ｃｉｓ−１０，１２−オクタデカジエン酸か
    ら主に構成される、複合リノール酸の治療有効量を有する食物製品を含んでなる
    、糖尿病を治療するのに有用な食物組成物。
21. 【請求項２１】 前記複合リノール酸が、摂取あたり約１ｍｇの前記ｔｒａ
    ｎｓ，ｃｉｓ−１０，１２−オクタデカジエン酸／ｋｇ体重〜摂取あたり約１０
    ，０００ｍｇの前記ｔｒａｎｓ，ｃｉｓ−１０，１２−オクタデカジエン酸／ｋ
    ｇ体重を提供するのに十分な量で投与される、請求項２０に記載の食物組成物。