DE69228312T2 - Selektives affinitätsmaterial, seine herstellung durch molekulare prägung und seine verwendung - Google Patents

Selektives affinitätsmaterial, seine herstellung durch molekulare prägung und seine verwendung

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Description

  • Die Erfindung bezieht sich auf ein selektives Adsorptionsmaterial, das besonders für die Adsorption von biologischen Makromolekülen geeignet ist, auf ein Verfahren zum Herstellen dieses selektiven Adsorptionsmaterials und auf seine Verwendung für die Reinigung und Analyse, insbesondere von biologischen Makromolekülen.
  • Es ist bekannt, homogene Gele unter Verwendung der sogenannten molekularen Prägemethode herzustellen, indem Abdrücke von Farbstoffen (R. Arshady, K. Mosbach; Makromol. Chemie, 182, (1981) 687) und Aminosäurederivaten (L. Andersson, B. Sellergren, K. Mosbach, Tetrahedron Lett. 25 (1984) 5211) gemacht werden. Es wird lediglich eine nichtkovalente Bindung zwischen einem "Prägemolekül" und Monomeren verwendet. Nach der Polymerisation der Monomere und der Entfernung des Prägemoleküls wird ein selektives Polymer erhalten, das auf Bindungsgruppen beruht, welche räumlich korrekt immobilisiert sind und in Hohlräumen vorhanden sind, welche die Gestalt einer Form des Prägemoleküls aufweisen. Eine Zusammenfassung dieser Methode ist von B. Ekberg, K. Mosbach, in Trends Biotechnol., 7 (1989) 92 angegeben.
  • Es ist bekannt, Abdrücke von Kohlenhydratderivaten herzustellen, die mit kovalenten, aber reversibel gebundenen Vinylphenylborsäuregruppen, sogenannten Boronatestern, substituiert sind, welche nach der Polymerisation eine Hydrolyse und das Binden eines neuen Prägemoleküls ermöglicht haben (G. Wulff, ACS Symp. Series, 308 (1986) 186). Entscheidend für die Selektivität der so hergestellten Polymere sind in die richtige Lage gebrachte bindende Boronatgruppen und ein gut gestalteter Hohlraum. Der Nachteil dieses Systems ist, daß eine komplizierte chemische Synthese erforderlich ist.
  • Vorher angeordnete Boronatgruppen sind auch zum Herstellen von Abdrücken von Glycoprotein (Transferrin, M. Glad, O. Norrlöw, B. Sellergren, N. Siegbahn, K. Mosbach, J. Chromatogr., 347 (1985) 11) und Bis-Nucleotiden (0. Norrlöw, M. O. Månsson, K. Mosbach, J. Chromatogr., 396 (1987) 374) auf Siliciumdioxid verwendet worden. In diesem Zusammenhang wurde ein Gemisch aus nichtkovalent bindenden organischen Silanen und Boronatsilan verwendet, welches dazu gebracht wurde, mit einem Prägemolekül vor der Polymerisation auf der Oberfläche eine Wechselwirkung einzugehen.
  • Der Wiedererkennungseffekt scheint hauptsächlich von der Tatsache abzuhängen, daß die Boronatgruppen einen korrekten Abstand voneinander haben, um erfolgreich mit den Prägemolekülen eine Wechselwirkung eingehen zu können. Transferrin weist insgesamt vier Sialinsäuregruppen auf und Bis-NAD weist vier Ribosen auf, welche Boronatester bilden.
  • Es ist auch bekannt, bei Affinitätschromatographieverfahren ein Adsorptionsmaterial mit spezifischen Liganden zu verwenden, aber diese sind in zufälliger Weise auf dem Sorbens örtlich festgelegt und können deshalb eine schlechte Selektivität ergeben. Außerdem gibt es eine große Zahl von unbenutzten Liganden, was unter industriellen Gesichtspunkten unwirtschaftlich ist.
  • Immobilisierte Phenylborsäure ist verwendet worden, um Kohlenhydratderivate zu trennen (H. L. Weith, J. L. Wiebers, P. T. Gilham, Biochemistry, 91 (1970) 4) und auch um glycosyliertes Hämoglobin und andere Glycoproteine zu trennen (P. D. G. Dean, P. J. Brown, V. Bouriotis, US-Patentbeschreibung 4,269,605 (1981)).
  • Für die Reinigung und Analyse, insbesondere von biologischen Makromolekülen, ist die Selektivität äußerst wichtig. Es ist häufig erforderlich, eine einzelne Komponente in einem Gemisch aus vielleicht mehreren Tausend Komponenten zu unterscheiden. Die bekannten Adsorptionsmaterialien sind in den meisten Fällen nicht ausreichend selektiv und führen zu einer unspezifischen Bindung, welche das Ergebnis einer Analyse völlig zerstören kann.
  • Die moderne biotechnische Produktion und Analyse sowie eine große Zahl von medizinischen Diagnostika beruhen auf einer selektiven Bindung. Die bisher bekannten Verfahren sind auch für diese Zwecke nicht ausreichend selektiv und/oder ausreichend einfach, um im großtechnischen Maßstab wirtschaftlich brauchbar zu sein. Deshalb besteht ein Bedarf an einem Adsorptionsmaterial mit einer sehr hohen Selektivität und niedrigen unspezifischen Bindung, welches in großem Maßstab und zu geringen Kosten hergestellt werden kann.
  • Erfindungsgemäß wird ein selektives Adsorptionsmaterial bereitgestellt, welches besonders für die Adsorption von biologischen Makromolekülen geeignet ist und welches im mobilisierte Liganden umfaßt, welche örtlich festgelegt worden sind, um ein vorgegebenes Molekül selektiv zu adsorbieren, indem sie zuerst an ein Prägemolekül gebunden wurden, welches anschließend nach der Immobilisierung des Liganden entfernt worden ist. Das selektive Adsorptionsmaterial weist die Kennzeichen auf, die in den Ansprüchen 1, 17 oder 21 definiert sind.
  • Die Erfindung umfaßt auch ein Verfahren zum Herstellen eines selektiven Adsorptionsmaterials, das besonders für die Adsorption von biologischen Makromolekülen geeignet ist, wobei ein Prägemolekül mit wenigstens zwei getrennten Bindungsstellen an die entsprechenden wenigstens zwei immobilisierbaren Liganden gebunden wird, die Liganden immobilisiert werden und anschließend das Prägemolekül entfernt wird. Das Verfahren weist die Kennzeichen auf, die in den Ansprüchen 8 oder 26 definiert sind.
  • Schließlich bezieht sich die Erfindung auf die Verwendung des selektiven Adsorptionsmaterials zur Reinigung oder Analyse, insbesondere von biologischen Makromolekülen.
  • Nach dem vorherigen Binden an das Prägemolekül und der anschließenden Immobilisierung werden die Bindungsgruppen (Liganden) vorzugsweise an die Oberfläche einer Matrix gebunden. Die korrekte örtliche Festlegung der Liganden in zwei Dimensionen führt zu einer erhöhten Selektivität durch das Prägemolekül mit wenigstens zwei getrennten Bindungsstellen. Die entsprechenden wenigstens zwei immobilisierten Liganden werden somit einen korrekten Abstand voneinander haben. Dies führt zu einer optimalen Bindung des Zielmoleküls bei der nachfolgenden Adsorption.
  • Wie aus dem oben gesagten hervorgeht, bezieht sich die Erfindung somit auf eine Form einer gerichteten Immobilisierung von Affinitätsliganden oder anderen (chemischen) Liganden. Diese gerichtete Immobilisierung wird mittels eines Verfahrens mit vorheriger Bindung erreicht. Der Vorteil im Vergleich zu zufällig immobilisierten Bindungsgruppen ist der, daß das Prägemolekül wirksamer und mit größerer Selektivität gebunden wird. Gleichzeitig können alle Liganden verwendet werden, wodurch ein Überschuß davon vermieden wird, welcher andernfalls leicht zu einer unspezifischen Bindung führen könnte, welche ihrerseits zu einer geringeren Ausbeute führt.
  • Liganden, die für die Erfindung brauchbar sind, sollten Gruppen tragen, die an ein Prägemolekül gebunden werden können, und Gruppen, welche für die Immobilisierung der Liganden verwendet werden können. Eine Art von geeigneten Liganden sind Monomere, welche durch Polymerisation immobilisiert werden können. Beispiele für Gruppen, die an ein Prägemolekül gebunden werden können, sind in Tabelle 1 angegeben.
    • Tabelle 1
  • an das Prägemolekül bindende Gruppe an dem Ligand/Monomer Bindungsgruppe an dem Prägemolekül
  • Imidazol-Metall Histidin, Tryptophan, Thiol
  • Iminodiessigsäure-Metall " " "
  • Carboxyl Amin
  • Amin Carboxyl
  • Carboxyl Carboxyl, Amid (Wasserstoffbrückenbindung)
  • Boronat Kohlenhydrat, Diol
  • Thiol Thiol
  • Aldehyd Amin
  • Boronat, Thiol und Aldehyd werden kovalent gebunden, wogegen die übrigen Gruppen nichtkovalent an das Prägemolekül gebunden werden.
  • Von den Gruppen, die für die Immobilisierung verwendet werden können, können Silane, welche Silanol- und Hydroxylgruppen binden, und Vinyl, Acryl und Methacryl, welche an einer Matrix polymerisieren, erwähnt werden.
  • Weitere Liganden/Monomere, die verwendet werden können, sind:
  • Acryloylhistamin: H. Morawetz, W. R. Song, JACS, 88 (1966) 571.
  • Boronatsilan: M. Glad, O. Norrlöw, B. Sellergren, N. Siegbahn, K. Mosbach, J. Chromatogr., 347 (1985) 11.
  • IDA-Silan: A. Figueroa, C. Corradini, B. Feibush, B. L. Karger, J. Chromatogr., 371 (1986) 335.
  • Außerdem können verschiedene Arten von Liganden gleichzeitig in einer einzigen Zubereitung verwendet werden. Zum Beispiel kann sowohl die Boronatbindung als auch die Metallwechselwirkung an dem gleichen Prägemolekül verwendet werden, wenn dies z. B. ein Glycoprotein mit an der Oberfläche gebundenen Histidinen ist.
  • Als Prägemolekül (Abdruckmolekül) zur vorherigen Anordnung der Liganden verwendet die Erfindung vorzugsweise biologische Makromoleküle, z. B. Enzyme, Antikörper, Glycoproteine oder andere Proteine, Nucleinsäuren, Polysaccharide. Der molekulare Abdruck erfolgt vorzugsweise in wässrigen Medien, welche die normale Umgebung dieser Moleküle darstellen. Es hat sich auch gezeigt, daß größere oder kleinere Mengen von organischen Lösungsmitteln, welche mit Wasser mischbar sind, wie DMF, DMSO, Formamid (M. Ståhl, M. O. Månsson, K. Mosbach, Biotechn. Lett., 12 (1990) 161; N. Chang, S. J. Hen, A. M. Klibanov, BBRC, 176 (1991) 1462), zugegeben werden können. In einigen Fällen kann auch reines DMSO verwendet werden, in dem Protein und ein Monomergemisch (die Liganden) gelöst werden. Es wird ein polymerisiertes Produkt erhalten, welches eine ausreichende Menge von in die richtige Lage gebrachten Bindungsgruppen aufweist, um eine bestimmte Selektivität zu ergeben.
  • Matrixmaterialien, welche gemäß der Erfindung brauchbar sind, müssen an der Oberfläche gebundene reaktive Gruppen enthalten, welche mit vorher angeordneten Liganden reagieren und kovalent binden können. Die Matrizes können fest oder in Form von Gelen sein und umfassen Teilchen, Schuppen, Elektroden, Gel usw. Geeignete Matrixmaterialien sind Siliciumdioxid (Teilchen, Schuppen, usw.), Glas (Teilchen, Elektroden, usw.), biologische Polymere (Agarose, Dextran, Gelatine, etc.) und synthetische Polymere (Polyvinylalkohol, TRIM (P. Reinholdsson, T. Hargitai, B. Törnell, R. Isaksson, Angew. Macromol. Chem., 1991, im Druck) usw.). Wenn die Matrix aus einer teilchenförmigen festen Phase besteht, liegt die Oberfläche sowohl auf der Außenseite der Teilchen als auch auf der Oberfläche der Poren davon vor. In den meisten Fällen ist die zuletzt genannte Oberfläche um ein Vielfaches größer als die zuerst genannte.
  • Reaktive Gruppen an dem Matrixmaterial können Acrylat, Methacrylat, Vinyl, Hydroxyl oder Silanol sein.
  • Wenn das Matrixmaterial keine geeigneten reaktiven Gruppen enthält, kann es vorher mit geeigneten Gruppen wie Methacrylgruppen derivatisiert werden, bevor die Liganden an der Matrix immobilisiert werden.
  • Der Unterschied zwischen einem Adsorptionsmaterial des Standes der Technik und der Erfindung ist in der beigefügten Abbildung schematisch dargestellt, in der
  • Fig. 1 eine schematische Darstellung eines Sorbens des Standes der Technik mit zufällig angeordneten Bindungsgruppen, z. B. Boronat, immobilisiertes Metall ist; und
  • Fig. 2 ein erfindungsgemäßes Sorbens mit spezifisch örtlich festgelegten Bindungsgruppen zeigt.
  • Die Erfindung wird nun durch das folgende, nicht beschränkende Beispiel ausführlicher beschrieben.
    • BEISPIEL Methacrylat-Siliciumdioxid
  • 3-Methacryloyloxypropyltrimethoxysilan (2,0 g, 8,1 mmol, Fluka) wurde mit 100 ml Wasser vermischt und unter starkem Rühren mittels eines Magnetrührers bei 22ºC 4 Stunden lang aufgelöst. Poröses Siliciumdioxid (5,0 g "Lichrospher Si 300", Merck) wurde in 20 ml Wasser suspendiert und mit Vakuum und Ultraschall behandelt, wodurch Poren erzeugt wurden, die frei von Luft waren. Anschließend wurde die Silanlösung zugegeben und die Silanisierung wurde 4 Stunden lang bei 60ºC in einem Rundkolben erfolgen gelassen, der in ein Wasserbad gestellt und mit einem "Teflon®"-beschichteten Schaufelrührer versehen war. Das derivatisierte Siliciumdioxid wurde auf einem Glasfilter mit Wasser und Methanol gewaschen und anschließend auf dem Filter luftgetrocknet.
  • Die Titration mit Bromwasser (gemäß Glad et al., J. Chromatogr. 347 (1985) 11) ergab 335 umol Methacrylatgruppen pro g des Siliciumdioxidprodukts. Eine Kohlenstoffanalyse ergab 620 umol Silan pro g Siliciumdioxidprodukt, was anzeigt, daß mehr als die Hälfte der Gruppen für die nachfolgende Immobilisierung weiterhin reaktiv sind.
    • Zubereitung
  • Gemische gemäß der nachstehenden Tabelle mit RNase B bzw. STI (Sojabohnentrypsininhibitor) als Prägemolekül.
  • ¹) Siehe C. G. Overberger, N. Vorchheimer, JACS, 85 (1963) 951.
  • Nach dem Vermischen des jeweiligen Prägemoleküls mit allen anderen Bestandteilen in insgesamt 2,5 ml Wasser/DMF wurden die Proben gekühlt und anschließend wurde N&sub2;- Gas durch das Gemisch geleitet. Nach ungefähr 30 s begann sich das Gemisch zu verfestigen. Die Zubereitung wurde eine Stunde lang stehengelassen und anschließend wurden die substituierten Siliciumdioxidteilchen auf einem Glasfilter mit Wasser/DMF gewaschen. Kleine Polymerteilchen wurden durch Sedimentation entfernt und die übri gen Teilchen wurden in Stahlsäulen (5 · 0,5 cm) gepackt. Wenn RNase B auf Zubereitung A injiziert wurde, wurde die Elution im Vergleich zur Zubereitung B verzögert.
  • Als Alternative zu Vinylimidazol kann Vinylbenzyliminodiessigsäure verwendet werden (L. R. Morris, R. A. Mock, C. A. Marshall, J. H. Howe, JACS, 81 (1959) 377). Diese binden Metallionen, z. B. Zn²&spplus;, Cu²&spplus;, welche lange Zeit in der sogenannten immobilisierten Metall-Affinitätschromatographie verwendet worden sind (J. Porath, J. Carlsson, I. Olsson, G. Belfrage, Nature, 258 (1975) 598).

Claims (31)

1. Selektives Adsorptionsmaterial, das für die Adsorption von biologischen Makromolekülen geeignet ist, dadurch gekennzeichnet, daß es wenigstens zwei immobilisierte Liganden umfaßt, welche örtlich festgelegt worden sind, um ein vorgegebenes Molekül selektiv zu adsorbieren, indem sie zuerst an wenigstens zwei getrennte Bindungsstellen an einem Prägemolekül gebunden wurden, welches anschließend nach der Immobilisierung der Liganden entfernt worden ist, wobei die Liganden über eine oder mehrere der Gruppen Imidazol-Metall, Iminodiessigsäure- Metall, Carboxyl, Amin, Boronat, Thiol und Aldehyd an den Liganden an das Prägemolekül gebunden worden sind.
2. Adsorptionsmaterial wie in Anspruch 1 beansprucht, dadurch gekennzeichnet, daß die Liganden über die Gruppen Imidazol-Metall und/oder Iminodiessigsäure- Metall an den Liganden an das Prägemolekül gebunden worden sind.
3. Adsorptionsmaterial wie in Anspruch 1 oder 2 beansprucht, dadurch gekennzeichnet, daß die Liganden polymerisierbare Monomere sind, welche durch Polymerisation immobilisiert worden sind.
4. Adsorptionsmaterial wie in einem der vorangehenden Ansprüche beansprucht, dadurch gekennzeichnet, daß die Liganden durch kovalente Bindung an eine Matrix immobilisiert sind, die an die Oberfläche gebundene Gruppen aufweist, welche mit den Liganden reagieren können.
5. Adsorptionsmaterial wie in Anspruch 1 oder 2 beansprucht, dadurch gekennzeichnet, daß die Liganden in einem Polymernetzwerk immobilisiert sind, welches polymerisiert oder an eine Matrix gebunden ist.
6. Adsorptionsmaterial wie in Anspruch 4 oder 5 beansprucht, dadurch gekennzeichnet, daß die Matrix ausgewählt ist aus Siliciumdioxid, Glas, biologischen Polymeren, synthetischen Polymeren und Gemischen davon.
7. Adsorptionsmaterial wie in einem oder mehreren der vorangehenden Ansprüche beansprucht, dadurch gekennzeichnet, daß die Liganden aus wenigstens zwei verschiedenen Arten von Liganden ausgewählt sind.
8. Verfahren zum Herstellen eines selektiven Adsorptionsmaterials, das besonders für die Adsorption von biologischen Makromolekülen geeignet ist, dadurch gekennzeichnet, daß ein Prägemolekül mit wenigstens zwei getrennten Bindungsstellen an die entsprechenden wenigstens zwei immobilisierbaren Liganden über eine oder mehrere der Gruppen Imidazol-Metall, Iminodiessigsäure-Metall, Carboxyl, Amin, Boronat, Thiol und Aldehyd an den Liganden gebunden wird, woraufhin die Liganden immobilisiert werden und anschließend das Prägemolekül entfernt wird.
9. Verfahren wie in Anspruch 8 beansprucht, dadurch gekennzeichnet, daß die Liganden über die Gruppen Imidazol-Metall und/oder Iminodiessigsäure-Metall an den Liganden an das Prägemolekül gebunden werden.
10. Verfahren wie in Anspruch 8 oder 9 beansprucht, dadurch gekennzeichnet, daß die Liganden polymerisierbare Monomere sind und durch direkte Polymerisation immobilisiert werden.
11. Verfahren wie in Anspruch 8 oder 9 beansprucht, dadurch gekennzeichnet, daß die Immobilisierung der Liganden durch kovalente Bindung an eine Matrix bewirkt wird, die an die Oberfläche gebundene Gruppen aufweist, welche mit den Liganden reagieren können.
12. Verfahren wie in Anspruch 11 beansprucht, dadurch gekennzeichnet, daß die Matrix durch Vorderivatisierung mit Gruppen versehen wird, welche mit den Liganden reagieren können.
13. Verfahren wie in Anspruch 8 oder 9 beansprucht, dadurch gekennzeichnet, daß die Liganden durch Binden in einem Polymernetzwerk immobilisiert werden, welches polymerisiert oder an eine Matrix gebunden ist.
14. Verfahren wie in einem der Ansprüche 11-13 beansprucht, dadurch gekennzeichnet, daß die Matrix ausgewählt ist aus Siliciumdioxid, Glas, biologischen Polymeren, synthetischen Polymeren und Gemischen davon.
15. Verfahren nach einem der Ansprüche 8-14, dadurch gekennzeichnet, daß die Liganden aus wenigstens zwei verschiedenen Arten von Liganden ausgewählt werden.
16. Verwendung des selektiven Adsorptionsmaterials wie in einem oder mehreren der Ansprüche 1-7 beansprucht, zur Reinigung oder Analyse, insbesondere von biologischen Makromolekülen.
17. Selektives Adsorptionsmaterial, welches aus (1) einem Matrixmaterial, das an die Oberfläche gebundene reaktionsfähige Gruppen enthält, (2) wenigstens zwei polymerisierbaren Liganden, welche an ein Prägemolekül und das Matrixmaterial binden können, und (3) dem Prägemolekül hergestellt wird;
wobei die polymerisierbaren Liganden in Gegenwart des Prägemoleküls polymerisiert werden;
wobei das Prägemolekül von dem selektiven Adsorptionsmaterial nach einer Polymerisation der Liganden im wesentlichen entfernt wird;
wobei die polymerisierbaren Liganden nach der Polymerisation in einer ausreichenden Menge mit korrekt angeordneten Bindungsgruppen vorhanden sind, um eine selektive Adsorption des Prägemoleküls nach der Polymerisation und Entfernung zu ergeben;
wobei das Prägemolekül ein biologisches Makromolekül ist, welches über ein Metall und über eine kovalente Bindung an das Adsorptionsmaterial binden kann.
18. Selektives Adsorptionsmaterial wie in Anspruch 17 beansprucht, worin die polymerisierbaren Liganden über die Gruppen Imidazol-Metall und/oder Iminodiessigsäure-Metall an den Liganden an das Prägemolekül gebunden worden sind.
19. Selektives Adsorptionsmaterial wie in Anspruch 17 oder 18 beansprucht, worin das Matrixmaterial ausgewählt ist aus der Gruppe umfassend Siliciumdioxid, Glas, biologische Polymere, synthetische Polymere und Gemische davon.
20. Selektives Adsorptionsmaterial wie in einem oder mehreren der Ansprüche 17 bis 19 beansprucht, worin die Liganden aus wenigstens zwei verschiedenen Arten von Liganden ausgewählt sind.
21. Selektives Adsorptionsmaterial umfassend ein Matrixmaterial, das an ein molekular geprägtes Polymer gebunden ist, wobei das Polymer Metall- und kovalente Bindungsstellen für ein biologisches Prägemakromolekül aufweist, welche eine selektive Adsorption an das Makromolekül ergeben.
22. Selektives Adsorptionsmaterial nach Anspruch 21, worin die Matrix über an die Oberfläche gebundene Gruppen an der Matrix an das molekular geprägte Polymer gebunden ist.
23. Selektives Adsorptionsmaterial nach Anspruch 21 oder 22, worin das biologische Prägemakromolekül wenigstens zwei getrennte Bindungsstellen aufweist.
24. Selektives Adsorptionsmaterial nach Anspruch 21, worin die Metall- und kovalenten Bindungsstellen eine selektive Adsorption über die Gruppen Imidazol-Metall und/oder Iminodiessigsäure-Metall ergeben.
25. Selektives Adsorptionsmaterial nach einem oder mehreren der Ansprüche 21-24, worin die Matrix ausgewählt ist aus der Gruppe umfassend Siliciumdioxid, Glas, biologische Polymere, synthetische Polymere und Gemische davon.
26. Verfahren zur Herstellung eines selektiven Adsorptionsmaterials, dadurch gekennzeichnet, daß
ein Prägemolekül, welches ein biologisches Makromolekül ist, das über ein Metall und über eine kovalente Bindung an das Adsorptionsmaterial binden kann, über ein Metall und über eine kovalente Bindung an wenigstens zwei polymerisierbare Liganden gebunden ist, wobei die Liganden an das Molekül und an ein Matrixmaterial, das an die Oberfläche gebundene reaktionsfähige Gruppen enthält, binden können;
die Liganden in Gegenwart des Prägemoleküls und des Matrixmaterials polymerisiert werden;
woraufhin das Prägemolekül entfernt wird;
wodurch die Liganden nach der Polymerisation in einer ausreichenden Menge mit korrekt angeordneten Bindungsgruppen vorhanden sind, um eine selektive Adsorption des Makromoleküls zu ergeben.
27. Verfahren wie in Anspruch 26 beansprucht, worin die polymerisierbaren Liganden über die Gruppen Imidazol-Metall und/oder Iminodiessigsäure-Metall an den Liganden an das Prägemolekül gebunden werden.
28. Verfahren wie in Anspruch 26 oder 27 beansprucht, worin die Matrix durch Vorderivatisierung mit Gruppen versehen wird, welche mit den Liganden reagieren können.
29. Verfahren wie in einem oder mehreren der Ansprüche 26-28 beansprucht, worin die Matrix ausgewählt wird aus der Gruppe umfassend Siliciumdioxid, Glas, biologische Polymere, synthetische Polymere und Gemische davon.
30. Verfahren wie in einem oder mehreren der Ansprüche 26-29 beansprucht, worin die Liganden aus wenigstens zwei verschiedenen Arten von Liganden ausgewählt werden.
31. Verwendung des selektiven Adsorptionsmaterials wie in einem oder mehreren der Ansprüche 17 bis 25 beansprucht, zur Reinigung oder Analyse, insbesondere von biologischen Makromolekülen.
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