DE60303024T2

DE60303024T2 - Verfahren zur herstellung einer probiotischen präparation

Info

Publication number: DE60303024T2
Application number: DE60303024T
Authority: DE
Inventors: Remco Peter PEKELHARING; Benjamin Abraham VAN LEEUWEN
Original assignee: WINCLOVE BIO IND BV; WINCLOVE BIO INDUSTRIES BV
Current assignee: WINCLOVE BIO IND BV; WINCLOVE BIO INDUSTRIES BV
Priority date: 2002-04-04
Filing date: 2003-04-04
Publication date: 2006-08-17
Anticipated expiration: 2023-04-05
Also published as: DE60303024D1; ATE314458T1; EP1495109B1; WO2003085097A1; WO2003085097B1; AU2003235420A1; DK1495109T3; NL1020301C2; EP1495109A1

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung einer probiotisch aktiven Zubereitung.
Derartige Zubereitungen und Verfahren zu ihrer Herstellung sind allgemein bekannt und umfassen oft das Züchten eines probiotischen Mikroorganismus auf einem Medium, das ein flüssiges Substrat, wie beispielsweise ein Molkereiprodukt, enthält. Die Zubereitungen werden zur Verhinderung oder zur Unterstützung der Genesung von Darmbeschwerden eingenommen. Noch spezifischer offenbart das an Hakalehto E. et al vergebene WO 97/29640 ein Verfahren zum Ansäuern von Milch durch Zusetzen eines Mikroorganismus zu Milch. Es wird offenbart, einen Behälter zu verwenden, der eine Oberfläche aufweist, in die ein pH-Wert eingearbeitet ist, was es einem Verbraucher erlaubt, zu sehen, dass das Produktgereift verzehrbar ist.
Aufgrund der zentralen Herstellung im technischen Maßstab ist der probiotische Mikroorganismus in der Zubereitung nicht ganz wirksam, wenn er vom Verbraucher verzehrt wird.
Es ist die Aufgabe der vorliegenden Erfindung, ein Verfahren bereitzustellen, durch das eine probiotische Zubereitung mit einem wirksamer funktionierenden probiotischen Mikroorganismus hergestellt werden kann.
Zu diesem Zweck ist das Verfahren, das der vorliegenden Erfindung entspricht, dadurch gekennzeichnet, dass eine Zusammensetzung umfassend einen probiotischen Organismus, ein metabolisierbares Substrat und einen Wachstumsindikator mit einer nichtsterilen wässrigen Flüssigkeit in Kontakt gebracht und mindestens fünf Minuten lang und bis der Wachstumsindikator eine Farbänderung anzeigt, inkubiert wird, wobei die Zubereitung für den Verzehr den probiotischen Mikroorganismus in einem nichtdormanten Zustand enthält.
Die Inkubierung des probiotischen Organismus in Gegenwart eines Substrats bewirkt, dass der Mikroorganismus, der gewöhnlich dormant ist, in eine Teilungsphase eintritt. Die Zusammensetzung kann daraufhin von einem Verwender verzehrt werden und die Mikroorganismen können ihre günstige Aktivität im Magen-Darm-Kanal besser ausführen. Die Dauer der Inkubation beträgt geeigneterweise mindestens fünf Minuten, bevorzugt mindestens 20 Minuten und noch bevorzugter mindestens 1,5 Stunden. Anders ausgedrückt findet die Inkubation so lange statt, wie sie für die Aktivierung nach der Dormanz erforderlich ist, und bevorzugt bis eine oder mehrere Teilungen des probiotischen Mikroorganismus stattfinden. Das Verfahren der vorliegenden Erfindung gemäß ermöglicht es auch, Wasser einer biologisch zweifelhaften Qualität zu verwenden. Unterstützt durch das Reduzieren des pH-Werts, das durch das Fermentieren verursacht wird, hemmt, inaktiviert oder tötet die probiotische Zusammensetzung sogar eventuelle krankheitserregende Mikroorganismen, die im Wasser vorliegen. In der Praxis findet die Inkubation unter nichtsterilen Bedingungen, wie beispielsweise in einem nichtsterilen Behälter und in einer nichtsterilen wässrigen, Flüssigkeit statt. Nach der Inkubation ist die Zubereitung verzehrfertig und, im Gegensatz zu bekannten handelsmäßigen Zubereitungen, die nach der Herstellung verpackt werden, wird diese Zubereitung in der Praxis nicht verpackt. „Substrat" soll so verstanden werden, dass es ein Substrat ist, das durch probiotische Mikroorganismen metabolisiert werden kann und umfasst beispielsweise Maltodextrin, Fructooligosaccharide oder dergleichen. Wahlweise können Spuren von Mineralien, wie beispielsweise Kalium, Mangan und Magnesium, ebenfalls vorliegen, um das Wachstum der probiotischen Mikroorganismen zu fördern. Wenn in der vorliegenden Anmeldung auf eine wässrige Flüssigkeit Bezug genommen wird, so ist darunter irgendeine Flüssigkeit zu verstehen, die ausreichend Wasser enthält, um es dem probiotischen Mikroorganismus zu ermöglichen, sich zu teilen. Falls die Zusammensetzung mehrere Bestandteile, unter anderem insbesondere einen oder mehrere probiotische Mikroorganismen und Substrat umfasst, so können diese getrennt in Form eines Kits verpackt werden. Eine erste Packung kann beispielsweise einen oder mehrere probiotische Mikroorganismen zusammen mit einem inerten Träger umfassen und die zweite Packung kann das Substrat umfassen. Beide Packungen werden der wässrigen Flüssigkeit zugegeben. Jedoch umfasst die Zusammensetzung bevorzugt eine Kombination, wie beispielsweise eine Mischung, von Substrat und probiotischem Organismus, welche Kombination aus diesem Grund nur eine einzige Packung erfordert. Bevorzugt ist die Zusammensetzung als „Einheitsdosen" verpackt, wobei die Packung, wie beispielsweise ein Beutel, eine Menge an Zusammensetzung enthält, die mit einer vorbestimmten Menge wässriger Flüssigkeit in Kontakt gebracht werden soll. Auf diese Weise wird eine Dosis der Zubereitung verzehrbar hergestellt. Wie oben schon erwähnt, können das Substrat und der Mikroorganismus für die Zusammensetzung getrennt verpackt werden, das heißt jedes bzw. jeder kann als Einheitsdosis verpackt werden. Die probiotische Zusammensetzung der Erfindung gemäß ist gewöhnlich ein Getränk. Bei Verwendung des Ausdrucks „nichtsteril" bei der vorliegenden Erfindung werden die probiotischen Mikroorganismen dieser Zusammensetzung nicht in Betracht gezogen.
Bevorzugt ist die nichtsterile wässrige Flüssigkeit Wasser, insbesondere Wasser, das als solches keine organische Kohlenstoffquelle als Substrat enthält, wie beispielsweise Mineralwasser, Leitungswasser oder Naturwasser.
Aufgrund des erfindungsgemäßen Verfahrens kann die nichtsterile wässrige Flüssigkeit für den Verzehr geeigneter und sogar unbedenklich gemacht werden. Das kann auch indirekt erfolgen, wenn das Wasser zum Waschen von frischen Gemüsen und Obst verwendet wird, was in manchen Ländern ein erhöhtes Risiko des Verursachens von Darmbeschwerden wie Diarrhö mit sich bringt. Es ist gezeigt worden, dass das erfindungsgemäße Verfahren die Bakterienzahl potentiell gesundheitsschädlicher Mikroorganismen wie E. coli. reduziert. Für diese spezifische Anwendung ist die Inkubationszeit bevorzugt länger als 6, noch spezifischer länger als 10 Stunden. Für diese Anwendung ist es nicht wichtig, ob die Mikroorganismen nach der Inkubation in einem stationären, dormanten Zustand zurückgekehrt sind, obwohl es erfindungsgemäß immer noch vorzuziehen ist, dass sie nicht in einem dormanten Zustand vorliegen.
Einer wichtigen Ausführungsform gemäß umfasst die Zusammensetzung einen Wachstumsindikator und die Inkubation dauert an, bis der Wachstumsindikator eine Farbänderung aufzeigt.
Auf diese Weise können eine Reihe verschiedener Faktoren in Betracht gezogen werden, wie beispielsweise die sich ab und zu verändernden Inkubationsbedingungen, die Lebensfähigkeit der probiotischen Mikroorganismen usw. Ein Wachstumsindikator zeigt zumindest, dass der Mikroorganismus aus der Dormanz heraus und beim Verzehr deshalb in der Lage ist, sofort eine günstige probiotische Wirkung zu erzeugen. Im Falle des Reduzierens der Bakterienzahl möglicher krankheitserregender Mikroorganismen wird es vorgezogen, einen Wachstumsindikator zu verwenden, der eine verzögerte Änderung aufweist.
Der bei einer bevorzugten Ausführungsform verwendete Wachstumsindikator ist ein pH-Indikator.
Auf diese Weise wird eine geeignete Inkubationslänge aufgezeigt. Dies ist unter Bedingungen besonders wichtig, wo die Inkubationstemperatur nicht eingestellt oder reguliert werden kann. Der Indikator zeigt an, wenn die Mikroorganismen sich ausreichend oft geteilt haben oder der pH-Wert des Wassers ausreichend reduziert worden ist, um anwesende krankheitserregende Mikroorganismen möglicherweise zu töten. Einer alternativen Ausführungsform gemäß kann der verwendete Wachstumsindikator ein Substrat sein, das durch Spaltung einen Farbstoff erzeugt, wie auf dem Gebiet der Mikrobiologie allgemein bekannt ist. Ein Beispiel eines derartigen Wachstumsindikators ist ein Indikatorsubstrat für Beta-Galactosidase, wie beispielsweise Orthonitrophenyl-b-D-Galactopyranosid. Obwohl dies gut funktioniert und in gepufferten Lösungen bevorzugt ist, wird vom wirtschaftlichen Standpunkt und bei vielen praktischen Anwendungen die Anwendung eines pH-Indikators in nichtgepufferten oder nur leicht gepufferten Lösungen wie Wasser bevorzugt. Der Ausdruck „gepuffert" bezieht sich in diesem Fall auf im pH-Bereich gepuffert, der in Abwesenheit der Puffersubstanz durch den probiotischen Mikroorganismus vor der Bildung von Säure oder nach der Bildung von Säure erreicht werden kann.
Bevorzugt wird ein pH-Indikator, der einen Änderungspunkt bei pH = 5 oder weniger, noch bevorzugter bei einem pH-Wert zwischen 3,5 und 4,5 aufweist, verwendet.
Bei einem derartigen pH-Wert wird eine wirksame Abtötung oder Inaktivierung möglicherweise vorliegender krankheitserregender Mikroorganismen erreicht. Eine Änderung eines derartigen pH-Werts bietet auch eine gute Anzeige einer ausreichenden Teilung des probiotischen Organismus. Beim Wählen eines Indikators um einen pH-Wert von 4 oder weniger herum, findet die Änderung später statt, was für eine Anwendung wie die Reduzierung der Bakterienzahl möglicherweise krankheitserregender Mikroorganismen günstig ist.
Es wird vorgezogen, mindestens einen probiotischen Mikroorganismus als probiotischen Mikroorganismus zu verwenden, der aus Lactobacillus, Lactococcus, Propionibacterium, Pediococcus, Bifidobacterium, Enterococcus und Streptococcus ausgewählt wird.
Mikroorganismen, wie beispielsweise Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus casei, Lactobacillus salivarius, Lactobacillus plantarum, Lactococcus lactis, Propionibacterium freudenreichli, Pediococcus acidilactici, Bifidobacterium lactis, Enterococcus faecium und Streptococcus lactis ermöglichen es, eine wirksame probiotische Zubereitung herzustellen. Es ist natürlich möglich, eine Mischung von mehr als einem probiotischen Mikroorganismus zu verwenden, indem man sicherstellt, dass jedem probiotischen Mikroorganismus ein Substrat zur Verfügung steht, um es ihm zu ermöglichen, den Mikroorganismus in eine sich teilende (log-) Phase zu bringen.
Einer bevorzugten Ausführungsform gemäß ist die Zusammensetzung eine trockene Zusammensetzung.
Im Gegensatz zu vielen der gewöhnlichen, im Handel erhältlichen probiotischen Zubereitungen, kann eine derartige Zusammensetzung für lange Zeit gelagert werden und braucht wenig Platz. Außerdem ist die Gebrauchsfähigkeitsdauer wesentlich verlängert, ohne die Wirksamkeit zu gefährden. Das ist in Gegenwart eines Wachstumsindikators besonders der Fall. Innerhalb des Umfangs der vorliegenden Erfindung bedeutet „trocken" die Abwesenheit von so viel Wasser, dass der Mikroorganismus dormant gemacht wird. Die Herstellung trockener Zusammensetzungen, die Mikroorganismen umfassen, ist im Stand der Technik allgemein bekannt. Es lässt sich beispielsweise durch Sprühtrocknen oder Lyophilisieren durchführen. Eine derartige Zusammensetzung erfordert keine kühle Lagerung. Das metabolisierbare Substrat kann mit dem Mikroorganismus entweder vor, jedoch bevorzugt nach dem Trocknen des Mikroorganismus gemischt werden. Die Zusammensetzung kann einen Träger wie beispielsweise Maisstärke umfassen.
Die Erfindung betrifft auch eine probiotisch aktive Zusammensetzung, die dadurch gekennzeichnet ist, dass die Zusammensetzung einen probiotischen Organismus, ein metabolisierbares Substrat für den Mikroorganismus und einen Wachstumsindikator und wahlweise einen pharmazeutisch akzeptablen Träger oder ein pharmazeutisch akzeptables Vehikel umfasst.
Bevorzugt ist die Zusammensetzung eine trockene Zusammensetzung.
Im Gegensatz zu bekannten probiotischen Zusammensetzungen, die sich zur Zeit auf dem Markt befinden, besitzt eine derartige Zusammensetzung eine sehr lange Gebrauchsfähigkeitsdauer.
Es wird dem normalen mit dem Stand der Technik vertrauten Fachmann offensichtlich sein, dass die Erfindung auf eine Reihe verschiedener Arten und Weisen angewendet werden kann. Beispielsweise ist es möglich, eine Zubereitung, der Wasser zugegeben worden ist, in einem Behälter, wie beispielsweise einem flachen Kolben, gegen den Körper zu tragen, um eine Umgebung erhöhter Temperatur zu bieten, die es dem probiotischen Mikroorganismus ermöglicht, schneller zu wachsen und die fertige Zubereitung schneller zu verwenden.
Die Erfindung wird nun unter Bezugnahme auf die folgenden Beispiele erläutert.
Beispiel 1
Als Modellkeimerreger wurde E. coli ATCC 25922 verwendet, das in Hirn-Herz-Infusions-(HHI-) Bouillon durch Inkubieren für 18 Stunden bei 37°C gezüchtet wurde. Dieses stellte reife Kulturen bereit, die circa 10⁸ koloniebildende Einheiten (KbE) pro ml umfassten. Aus dieser Lösung wurde eine Verdünnungsreihe in einer sterilen physiologischen Pepton (pfz) Lösung deriviert.
Daraufhin wurden verschiedene Proben (100 ml) von Leitungswasser von Amsterdam mit verschiedenen Konzentrationen von E. coli ATCC 25922 beimpft, nämlich:
Daraufhin wurde eine bekannte Konzentration (4,8 × 10⁷ KbE/ml) der probiotischen Zusammensetzung zugegeben, die aus 1% Lactobacilli (L. plantarum, L. casei, L. acidophilus und L. salivarius in ungefähr gleichen Mengen) bestand, 20% Maltodextrin, 5% Dextrose, 5% Mineralmischung (gleiche Mengen von Kaliumchlorid, Magnesiumsulfat und Mangansulfat), 64% Maisstärke (Träger) und 5% Caranthopulver als Farbindikator bestand.
Im Laufe des Versuchs wurden alle Wasserproben bei 37°C (ohne Schütteln) stehengelassen.
Nach 6 und 24 Stunden wurde die Bakterienzahl von E. coli ATCC 25922 bestimmt. Unter Anwendung steriler pfz wurden dezimale Verdünnungen der Proben hergestellt, die daraufhin auf Medien inkubiert wurden, die für die jeweiligen Mikroorganismen geeignet waren. Ein E. coli Test wurde mit Hilfe von Eosin-Methylenblau-Agar (EMB, Petrischalen) durchgeführt. Nach 24 Stunden langer (aerobischer) Inkubation bei 37°C wurden diese Schalen beurteilt (gezählt). Der Test auf Lactobacilli wurde mit Hilfe von Man-, Rogosa-, Sharp-Agar (MRSA, Petrischalen) durchgeführt. Diese Platten wurden nach 48stündiger (anaerobischer) Inkubation bei 37°C beurteilt.
Außerdem wurde der pH-Wert bei t = 0, t = 6 und t = 24 Stunden gemessen.
Kontrolle (Proben F und G):
Als Kontrollversuch wurden keine probiotischen Bakterien zwei verschiedenen Ausgangskonzentrationen von E. coli (10⁶ und 10⁴, Kontrolle F bzw. G) zugegeben, während die anderen Komponenten der Zusammensetzung, wie Nährstoffe, zugegeben wurden. Um den Einfluss ausschließlich der Säureerzeugung zu bestimmen, wurde der pH-Wert durch Ansäuern (0,1 M HCl) auf den gleichen pH-Wert eingestellt, der in dem Versuch mit der probiotischen Zubereitung gemessen wurde.
An verschiedenen Zeitpunkten wurde eine Probe genommen, um die Bakterienzahl von E. coli zu bestimmen. Bei t = 6 Stunden wurde die Bakterienzahl der probiotischen Bakterien des Versuchs 1 bestimmt.
Ergebnisse
Die Ergebnisse der Studie sind in den unten aufgeführten Tabellen und der grafischen Darstellung gezeigt.
Tabelle 1
Bei den probiotischen Mikroorganismen, die sich auf den Versuch A und 6 Stunden beziehen, wurde eine Erhöhung auf 1,1 × 10⁸ KbE/ml gemessen. Die pH-Werte betrugen 6,3, 4,1 und 3,7 bei t = 0, t = 6 bzw. t = 24. Nach 6 Stunden wurde ein Farbumschlag von purpurrosa auf dunkelrosa beobachtet.
Schlussfolgerung
Die probiotische Zubereitung hemmt das Wachstum von E. coli ATCC 25922 in Wasser. Das Inkubieren einer anfänglichen Konzentration von 3,8·10² KbE/ml E. coli für 24 Stunden mit der probiotischen Zubereitung führte sogar dazu, dass kein E. coli in dem Wasser erfasst wurde. Die beiden Kontrollversuche, bei denen der pH-Wert eingestellt wird, jedoch keine probiotischen Bakterien zugegeben werden, zeigen, dass E. coli ATCC 25922 nicht gehemmt wird und dass sogar ein gewisses Wachstum stattfindet. Das zeigt, dass die Hemmung von E. coli ATCC 25922 nicht oder nicht ausschließlich durch den pH-Abfall, sondern auch durch einen anderen vom probiotischen Mikroorganismus abhängigen Faktor verursacht wird.
Beispiel 2
Bei einem Versuch, der demjenigen von Beispiel 1 ähnlich war, wurde der Einfluss einer probiotischen Zubereitung auf eine Reihe von Krankheitserregern untersucht, die (durch Zugeben) sowohl zu Leitungswasser aus Wageningen (einer Stadt in den Niederlanden) als auch entmineralisiertem Wasser vorlagen. Die probiotische Zusammensetzung war die gleiche wie in Beispiel 1.
Material und Verfahren
Mikroorganismen
Die folgenden drei Krankheitserreger wurden bei der Studie verwendet:

1. Shigella flexneri (Stammsammlung der Universität Wageningen, Niederlande);
2. Salmonella typhimurium (Stammsammlung der Universität Wageningen, Niederlande);
3. Escherichia coli (Stamm H03-50 von RiVM, Leiystad, Niederlande, von Faeces eines an (blutiger) Diarrhö leidenden Patienten isoliert).

Zur Verwendung wurden die Stämme in Hirn-Herz-Infusion- (HHI-) Bouillon durch 18 Stunden langes Inkubieren bei 37°C gezüchtet. Auf diese Weise wurden reife Kulturen von circa 10⁸ koloniebildenden Einheiten (KbE) pro ml erhalten.
Wasser
Zwei Arten von Wasser wurden bei dieser Studie verwendet:

– Leitungswasser (als Trinkwasser geeignetes Leitungswasser)
– entmineralisiertes Wasser (entmin. Wasser)

Messkolben wurden mit Wasser (100 ml Wasser pro Kolben) gefüllt und 15 Minuten lang bei 121°C sterilisiert. So ist das Wasser ausschließlich mit dem Testkrankheitserregern kontaminiert.
Versuchsaufbau
Den verschiedenen Maßen von Wasser, mit Ausnahme der blinden Serie, wurden 6,0 Gramm der probiotischen Zubereitung (Anfangskonzentration 3 × 10⁷ KbE/ml) zugegeben. Diese Proben wurden daraufhin mit den Krankheitserregerbakterien (1 Typ Bakterie pro 100 ml Wasser) in verschiedenen Anfangskonzentrationen (10⁴ KbE/ml und 10⁶ KbE/ml) geimpft. Die 10⁶ KbE/ml Wasser wurden durch Anwendung von 0,1 ml einer reifen Kultur zum aseptischen Beimpfen von 100 ml Wasser in einem Messkolben erhalten. Um eine Anfangskonzentration von 10⁴ KbE/ml Wasser zu erhalten, wurde eine reife Kultur (dezimal) mit einer sterilen physiologischen Pepton- (pfz-) Lösung verdünnt, woraufhin 0,1 ml einer geeigneten Verdünnung zum Beimpfen von 100 ml in einem Messkolben verwendet wurden.
Bei t = o (nach Zugabe von probiotischen Substanzen und Beimpfen mit einem Bakterium), t = 6, t = 11 und t = 24 Stunden wurden Proben entnommen, um sie auf die Anzahl von Krankheitserregern zu untersuchen. Unter Anwendung von steriler pfz wurden dezimale Verdünnungen der Proben hergestellt, die daraufhin (in Duplikat) auf als solche bekannte Weise mit Hilfe eines geeigneten Mediums untersucht wurden. Mit Hilfe von Violettrot-Gallenglukose (VRGG) Agar (Gießplatten) wurde auf Shigella und Salmonella getestet, mit Violettrot-Gallenlactose (VRGL) Agar (Gießplatten) wurde auf E. coli getestet. Die Platten wurden nach 24stündiger Inkubation bei 37°C beurteilt (gezählt). Als Kontrolle wurden 0,1 ml einer geeigneten Verdünnung der Proben auf dem selektiven Medium Xyloselysindextrose- (XLD-) Agar ausgebreitet, um das typische Kolonieauftreten von Salmonella und Shigella zu bestimmen (um eine Kontamination auszuschließen).
Im Laufe des Versuchs wurden alle Wasserproben bei 37°C (ohne Schütteln) beiseitegestellt.
Die Ergebnisse der Studie sind unten in Tabelle 2 aufgeführt. Es wurde wiederum ein Farbumschlag beobachtet, was anzeigt, dass die probiotischen Mikroorganismen aktiv waren.
Tabelle 2
Schlussfolgerung
Es wurde gezeigt, dass die Zugabe der probiotischen Zubereitung sowohl zu Leitungswasser als auch zu entmineralisiertem Wasser, in dem Keimerregerbakterien vorliegen, eine inaktivierende Wirkung auf die Keimerreger ausübt. Nach 24 Stunden sind die Keimerreger in Leitungswasser nicht mehr erfassbar. Zu diesem Zeitpunkt sind geringe Anzahlen der Bakterien Salmonella und E. coli in entmineralisiertem Wasser immer noch erfassbar.

Claims

Verfahren für die Herstellung einer probiotisch aktiven Zubereitung, dadurch gekennzeichnet, dass eine Zusammensetzung umfassend einen probiotischen Mikroorganismus, ein metabolisierbares Substrat und einen Wachstumsindikator mit einer nichtsterilen wässrigen Flüssigkeit in Kontakt gebracht und mindestens fünf Minuten lang und bis der Wachstumsindikator eine Farbänderung anzeigt, inkubiert wird.
Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass die nichtsterile wässrige Flüssigkeit Wasser ist.
Verfahren nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, dass der verwendete Wachstumsindikator ein pH-Indikator ist.
Verfahren nach Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, dass ein pH-Indikator verwendet wird, der einen Umschlagpunkt bei pH = 5 oder weniger, bevorzugt bei einem pH-Wert zwischen 3,5 und 4,5 aufweist.
Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass als probiotischer Mikroorganismus mindestens ein probiotischer Mikroorganismus ausgewählt unter Lactobacillus, Lactococcus, Propionibacterium, Pediococcus, Bifidobacterium, Enterococcus und Streptococcus verwendet wird.
Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass die Zusammensetzung eine trockene Zusammensetzung ist.
Probiotisch aktive Zusammensetzung, dadurch gekennzeichnet, dass die Zusammensetzung einen probiotischen Mikroorganismus, ein metabolisierbares Substrat für den Mikroorganismus und einen Wachstumsindikator und wahlweise einen pharmazeutisch akzeptablen Träger oder ein pharmazeutisch akzeptables Vehikel umfasst.
Zusammensetzung nach Anspruch 7, dadurch gekennzeichnet, dass sie eine trockene Zusammensetzung ist.