DE602004009554T2

DE602004009554T2 - Mehrfachkanal-testvorrichtung, verfahren zur herstellung davon und verwendung davon

Info

Publication number: DE602004009554T2
Application number: DE602004009554T
Authority: DE
Inventors: Aimo Niskanen; Henri Laine; Mika Saramäki
Original assignee: Ani Biotech Oy
Current assignee: Ani Biotech Oy
Priority date: 2003-03-28
Filing date: 2004-03-29
Publication date: 2008-07-24
Anticipated expiration: 2024-03-30
Also published as: JP2006521547A; CA2518587A1; EP1608974A1; ATE376186T1; WO2004086042A1; FI20030921A0; DE602004009554D1; FI118904B; FI20030921A; EP1608974B1; US20070042444A1

Description

TECHNISCHES GEBIET DER ERFINDUNG
Die Erfindung betrifft eine auf Immundiffusion basierende Multikanaltestvorrichtung, die die simultane oder parallele Durchführung etlicher unterschiedlicher Analysen ermöglicht. Die Produktion und Verwendung der Vorrichtung werden in der Erfindung ebenfalls offenbart.
HINTERGRUND DER ERFINDUNG
Verfahren und Testvorrichtungen, die auf Immundiffusion basieren, sind beispielsweise aus den folgenden Patenten und Patentanmeldung bekannt: US 4,757,002 , US 3,990,852 , US 4,562,147 und EP 0 250 137 . Immunchromatographische Verfahren, die auf Immundiffusion basieren, wurden beispielsweise in den folgenden Patenten und Patentanmeldungen offenbart: EP 0 291 194 , EP 0 284 232 ( FI 93150 ) und WO 86/03839 .
Die oben erwähnten Testvorrichtungen, die auf Immundiffusion und Immunchromatographie basieren, werden besonders häufig für die Durchführung einer Analyse-pro-Test-Vorrichtung verwendet. In vielen Fällen kann eine definitive Diagnose und die Auswahl eines geeigneten Behandlungsverfahrens für einen Patienten, der an einer spezifischen Erkrankung oder einem Syndrom leidet, die Durchführung etlicher unterschiedlicher Analysen notwendig machen. Wenn die Erkennung des Grundes der Erkrankung, die zu den Symptomen oder der Krankheit führt oder der Ausschluss bestimmter Erkrankungen die Durchführung etlicher Tests notwendig macht, so würde eine Diagnose so teuer werden, dass in der Regel nur eine oder nur eine sehr begrenzte Anzahl von Analysen durchgeführt werden, wobei diese Analysen zufällig gewählt werden, basierend auf der Bewertung durch den behandelnden Arzt oder unter allgemein verwendeten Tests, in welchem Fall andere Alternativen undefiniert verbleiben können.
Die Verwendung von mehr als einem Testkanal ist aus US B1 6,171,870 und US A1 2003/0040021 bekannt. US B1 6,171,870 betrifft ein Verfahren zur Erzeugung solcher Kanäle durch Aufbringen von wasserabstoßenden Substanzen, wie beispielsweise Wachs auf einen porösen Träger. Die behandelten Bereiche bilden blockierende Segmente zwischen den Kanälen. In dem in US A1 2003/0040021 beschriebenen Verfahren bewegen sich die Proben entlang behandelter Kanäle, während unbehandelte Bereiche zwischen den Kanälen verbleiben.
Die WO 00/22434 offenbart eine Multikanaltestvorrichtung, basierend auf Diffusion, die für die Durchführung von Immunassays geeignet ist, wobei die Kanäle durch Laserätzen erzeugt werden.
Immunologische Testvorrichtungen mit lasergeätzen Markierungen mit Informationen, betreffend den durchgeführten Test, sind aus der US 6340588 bekannt. Die Markierungen werden verwendet, um die individuellen Testvorrichtungen zu identifizieren und die darin gespeicherte Information zu gewinnen.
Die Vorteile der vorliegenden Erfindung gegenüber den Verfahren aus dem Stand der Technik sowie den Testvorrichtungen aus dem Stand der Technik beinhalten eine Verminderung des Reagenz- und Materialverbrauchs, des Probenvolumens und der Beladung wie auch Verbesserungen im Hinblick auf Umwelt, Lagerungszeit und Verbraucherfreundlichkeit. Eine Erhöhung der Umweltfreundlichkeit wird durch eine verminderte Umweltbelastung erreicht, die durch die Testvorrichtungen ausgelöst wird. Aufgrund von Einsparungen im Reagensverbrauch und Laborkosten ermöglicht es das Verfahren gemäß der vorliegenden Erfindung, Testvorrichtungen mit extrem geringen Kosten zu produzieren.
Die mit konventionellen Testvorrichtungen, die auf Immundiffusion und Immonchromatographie basieren, verbundenen Probleme werden durch die vorliegende Erfindung überwunden, deren Eigenschaften in den folgenden Ansprüchen offenbart sind.
ZUSAMMENFASSUNG DER ERFINDUNG
Die auf Immundiffusion basierende Testvorrichtung der vorliegenden Erfindung umfasst ein poröses Trägermaterial und darin ein spezifisches Bindungsreagens (Immunreagens) in Form einer Zone oder eines Blots. Eine nachweisbare Markierung, an die ein zweites spezifisches Bindungsreagens (Immunreagens) gekoppelt ist, wird getrennt zugeführt oder vorher auf den porösen Träger aufgebracht und ist durch die Probe mobilisierbar. Eine Probenaufbringstelle, die optional mit einem Filter versehen ist, ist ebenfalls an der Testvorrichtung angeordnet. Das poröse Trägermaterial der Testvorrichtung besteht vorzugsweise aus Nitrocellulose und umfasst ein Netzwerk von Kanälen und Kennzeichen mit Information betreffend den Test, die in das poröse Trägermaterial mit einer Laserbehandlung geätzt sind. Das Netzwerk aus Kanälen umfasst zwei oder mehr Kanäle (1), getrennt durch einen behandelten Bereich (2), ein oder mehr darauf immobilisierte spezifische Bindungsreagentien (3), eine optionale Markierungsstelle (4), plat ziert in dem Kanal nahe der Probenaufbringstelle (5) oder in der Probenaufbringstelle (5) selbst, die so platziert ist, dass sie eine gleichmäßige Verteilung der Probe in jeden Kanal ermöglicht.
Die Testvorrichtung der vorliegenden Erfindung ermöglicht die Diagnose unterschiedlicher Erkrankungen oder Symptome, basierend auf einer simultan oder parallel durchgeführten Erkennung von etlichen syndromerzeugenden Mitteln oder Analyten. Die Testvorrichtung kann verwendet werden, um simultan etliche allergieerzeugenden Agenzien, Myocardinfarktmarker, Geschlechtskrankheits-erzeugende Mittel, Blutscreening-Analyten, respiratorische Infektions-erzeugende Mittel, Infektionskrankheit-erzeugende Mittel und/oder Krebsmarker zu erkennen.
Beispiele für nützliche spezifische Bindungsreagentien sind Antikörper, Antikörperfragmente, rekombinante Antikörper, rekombinante Antikörperfragmente, Antigene, Lektine, Rezeptoren und/oder Liganden. Nützliche Markierungsreagentien sind beispielsweise Latex, Gold, Metall oder färbende Teilchen oder fluoreszierende Substanzen.
Die Erfindung offenbart ein Verfahren zur Erzeugung der Testvorrichtung, wobei das spezifisch erkennende Immunregens in einem porösen Material immobilisiert ist, das mit einer Substanz inert gemacht wurde und wobei die Probenaufbringstelle optional mit einem Filter versehen und eine nachweisbare Markierung, an die ein spezifisches Bindungsreagens gebunden ist. Ein Kanalnetzwerk der gewünschten Form und Größe und Kennzeichen mit Information betreffend den Test, werden auf dem porösen Material durch Ätzen des porösen Materials mit einem Laser gebildet. Das Netzwerk umfasst zwei oder mehr Kanäle (1) und einen behandelten Bereich (2); und ein oder mehr erkennende spezifische Bindungsreagentien sind in jedem Kanal (1) als Zone oder Blot (3) immobilisiert.
Eine nützliche Substanz, durch die das poröse Material inert gemacht wird, ist eine Mischung, umfassend natürliche oder synthetische Polymere, wie Albumin und Casein oder PEG (Polyethylenglycol) und PVA (Polyvinylalkohol), nicht-ionische Detergentien, wie Hexansulfonsäure und TRITON-X-100, BRIJ und Konservierungsmittel, wie Zucker, beispielsweise Saccharose und Trehalose oder ihre Derivate.
Die Lagerfähigkeit der Testvorrichtung wird durch Trocknen und Erhalt der Testvorrichtung in einer relativen Feuchtigkeit von nicht mehr als 8% und hermetisch verpackt nach Aufbringung der Reagentien deutlich verbessert.
Die Multikanaltestvorrichtung ist zur Durchführung simultaner oder paralleler etlicher Assays nützlich, was Diagnosen einer Zielerkrankung und/oder eines Syndroms ermöglicht, die/das unter Verwendung von nur einem Marker schwierig zu diagnostizieren sein kann. Die Probe wird auf die Aufbringstelle (5) der Testvorrichtung aufgebracht, enthaltend eine durch die analysierbare Probe mobilisierbare Markierung und ein zweites spezifisches Bindungsreagens daran gekoppelt, von welcher Stelle die Probe und die Reagentien gleichmäßig in die Kanäle des Kanalnetzwerkes, das durch die Laserbehandlung gebildet wurde, migrieren, wo sie entweder mit dem spezifischen Bindungsreagenz an seiner Immobilisierungsstelle (3) reagieren oder nicht, von welcher Stelle die positiven oder negativen Ergebnisse direkt ablesbar sind.
Die vorliegende Erfindung betrifft auch eine Testvorrichtung für die simultane oder parallele Durchführung etlicher Assays zur Erkennung der Zielerkrankung und/oder des Syndroms. Die Probe wird auf die Aufbringstelle (6) der Testvorrichtung aufgebracht, von wo sie in einen Kanal migriert, wo sie mit der durch die Probe mobilisieren Markierung vermischt wird und damit reagiert und dem zweiten daran gebundenen spezifischen Bindungsreagens, woraufhin die Probe und die Reagentien gleichmäßig in die Kanäle des Kanalnetzwerkers migrieren, das durch eine Laserbehandlung gebildet wurde, wo sie mit dem spezifischen Bindungsreagens an seinem Immobilisierungspunkt (3) reagieren oder nicht, wovon die positiven oder negativen Ergebnisse direkt ablesbar sind.
Die vorliegende Erfindung betrifft auch die Verwendung der Testvorrichtung für die simultane oder parallele Durchführung etlicher Assays zur Erkennung einer Zielerkrankung und/oder eines Syndroms. Die Probe wird einer getrennten Markierung vermischt, die ein zweites spezifisches Bindungsreagens daran gekoppelt aufweist und die Mischung wird auf einen Aufbringpunkt (5) der Testvorrichtung aufgebracht, von welcher Stelle die Probe und die Reagentien gleichmäßig in die Kanäle des durch eine Laserbehandlung gebildeten Kanalnetzwerks migrieren, wo sie mit dem an seinem Immobilisierungspunkt (3) enthaltenen spezifischen Bindungsreagens reagieren oder nicht, wovon die positiven oder negativen Ergebnisse direkt ablesbar sind.
KURZE BESCHREIBUNG DER ZEICHNUNGEN
1 zeigt ein Netzwerk von 8 Kanälen, wobei es sich um eine der bevorzugten Testvorrichtungen zur Durchführung von bis zu 8 unterschiedlichen Assays handelt. Die Markierungsstelle 4 wirkt simultan als Probenaufbringpunkt 5 und die Kanäle 1, getrennt durch behandelte Bereiche 2, enthalten das spezifische Bindemittel als Zone 3.
1a zeigt eine fortgeschrittene Ausführungsform der Multikanaltestvorrichtung zur Durchführung bis zu acht unterschiedlichen Assays gemäß 1. Der Markierungspunkt 4 dient simultan als Probenaufbringpunkt 5 und die Kanäle 1, getrennt durch den behandelten Bereich 2 enthalten das spezifische Bindemittel als Zone 3. Die Vorrichtung ist mit Informationen, betreffend die Tests und den Hersteller, markiert.
2 zeigt eine Testvorrichtung, die für eine Durchführung für sechs unterschiedlichen Assays und ihrer Kontrollreaktionen verwendet werden kann oder optional bis zwölf unterschiedlichen Assays durch sechs unterschiedliche Markierungen. Eine der Kanäle 1 trennt sich in zwei Kanäle 1a und 1b, die durch einen behandelten Bereich 2 getrennt sind. Der Probenaufbringpunkt ist in der Mitte des Kanalnetzwerkes lokalisiert und jeder Kanal 1 umfasst einen Markierungspunkt 4 und ein oder mehr Bindemittelzonen 3.
3 zeigt eine Testvorrichtung, die zur Durchführung von vier unterschiedlichen Assays und ihren Kontrollreaktionen oder optional bis zu acht unterschiedlichen Assays mit vier unterschiedlichen Markierungen verwendet werden kann.
4 zeigt eine Testvorrichtung, die zur Durchführung von vier unterschiedlichen Assays und ihren Kontrollreaktionen oder optional bis zu acht unterschiedlichen Assays durch vier unterschiedliche Markierungen verwendet werden kann.
5 zeigt eine Testvorrichtung, die für die Durchführung von sechs unterschiedlichen Assays oder optional nur drei Assays und ihren Kontrolleaktionen verwendet werden kann.
6 zeigt eine Testvorrichtung, die zur Durchführung von zwölf unterschiedlichen Assays durch vier unterschiedliche Markierungen verwendet werden kann.
7 zeigt ein Netzwerk von acht Kanälen, wo es sich um eine bevorzugte Testvorrichtung zur Durchführung von bis zu vierundzwanzig unterschiedlichen Assays handelt. Jeder Kanal 1 umfasst drei Bindemittelzonen 3.
8 zeigt eine Testvorrichtung, die zur simultanen Durchführung von sechzehn unterschiedlichen Assays verwendet werden kann.
9 zeigt eine Testvorrichtung, die zur Durchführung von zwanzig unterschiedlichen Assays durch fünf unterschiedliche Markierungen verwendet werden kann.
10 zeigt eine Testvorrichtung, die zur Durchführung von zwei Assays und einer Kontrollreaktion verwendet werden kann. Die Vorrichtung ist mit Informationen, betreffend die Tests und den Hersteller, markiert.
11 zeigt eine Testvorrichtung, die zur Durchführung von zwei Assays und einer Kontrollreaktion verwendet werden kann. Die Vorrichtung ist mit Information, betreffend die Tests und den Hersteller, markiert.
12 zeigt eine Testvorrichtung, erzeugt durch ein Laserätzen, die zur Durchführung von drei parallelen Assays oder optional drei individuellen Assays und ihren Kontrollreaktionen verwendet werden kann. Die Vorrichtung ist mit Informationen betreffend die Tests und den Hersteller markiert.
DETAILLIERTE BESCHREIBUNG DER ERFINDUNG
Die Aufgabe der Erfindung ist eine Multikanaltestvorrichtung, basierend auf einer Immundiffusion, umfassend ein poröses Trägermaterial und in diesem Material ein oder mehr spezifische Bindungsreagentien (Immunreagentien) in Form einer Zone (Zonen) oder eines Blots (mehrerer Blots) und einen Probenaufbringpunkt, der optional mit einem Filter ausgerüstet ist, beispielsweise zur Entfernung von Blutzellen und die optional eine Markierung umfasst, die durch die analysierbare Probe mobilisierbar ist, beschichtet mit einem zweiten spezifischen Bindungsreagens (Immunreagens). Die Markierung befindet sich auf der Testvorrichtung oder wird der Probe zugefügt.
Die erfindungsgemäße Testvorrichtung ist dadurch gekennzeichnet, dass sie ein Kanalnetzwerk und Kennzeichen mit Informationen betreffend den Test umfasst, erzeugt durch Ätzen eines Netzwerks auf ein poröses Trägermaterial, beispielsweise durch einen Laser. Die Kanäle der Testvorrichtung wurden mit einem oder mehr identischen oder unterschiedlichen spezifischen Bindungsreagentien versehen, die aus unterschiedlichen Markergruppen gewählt werden und die zusammen verwendet werden können und benötigt werden, um ein spezifisches Syndrom zu diagnostizieren. Dadurch wird die Diagnose durch die simultane Durchführung etlicher Assays für die Erkennung einer spezifischen Zielerkrankung und/oder eines Syndroms ermöglicht. Die Probenaufbringstelle, die sich in Form eines Punkts oder eines Blots oder einer Linie oder einer Zone befinden kann, ist beispielsweise in der Mitte lokalisiert oder dem anderen Ende des Streifens, auf eine Weise, die eine gleichmäßige Verteilung der Probe in jeden der Kanäle ermöglicht. Wenn dasselbe spezifische Bindungsreagens in unterschiedlichen Konzentrationen in den Kanälen verwendet wird, kann ein semiquantitatives Ergebnis erhalten werden.
Die Testvorrichtung gemäß der Erfindung umfasst etliche Kanäle, die für die simultane oder parallele Bestimmung etlicher Analyten verwendet werden können. In der Testvorrichtung ist es möglich, optional Reagentien zusammen zu gruppieren, die Erkrankungs-erzeugende Mittel erkennen, die mit verschiedenen Syndromen assoziiert sind, beispielsweise Allergene, Myocardinfarktmarker, geeignete Reagentien für die Erkennung von Geschlechtserkrankungen und für das Blutscreening, Marker, die respiratorische Infektions-erzeugende Mittel erkennen, IgG-, IgA- und IgM-Antikörper, Marker, die andere Infektionskrankheits-erzeugende Mittel erkennen, wie auch verschiedene Krebsmarker, für ihre simultane oder parallele Bestimmung.
Eine zusätzliche Aufgabe der Erfindung ist ein Verfahren zur Erzeugung der Testvorrichtung. Das Produktionsverfahren ist dadurch gekennzeichnet, dass ein Multikanalnetzwerk einer gewünschten Form und Größe und mit Kennzeichnung mit Informationen betreffend den Test (siehe 1 bis 12) auf ein poröses Material durch Laserverfahren eingeätzt wird, die eine bestimmte Form auf dem Substrat herstellen. Unterschiedliche erkennende spezifische Bindungsreagentien sind, in der porösen Substanz von jedem der Kanäle permanent angehaftet, d. h., immobilisiert. Die Analyseergebnisse für die Testreaktionen sind von diesen Punkten ablesbar.
Daraufhin wird das poröse Material mit einer Substanz behandelt, die die freien reaktiven Stellen inert macht, d. h., sie reagieren nicht in irgendeiner unerwünschten Weise, beispielsweise durch Verlangsamen oder Verhindern, dass die Analyten oder Markierungen in die permanent immobilisierte Reagenszone oder den Blot migrieren. Die nachweisbare, optional sichtbare Markierung, an die ein zweites spezifisches Bindungsreagens gebunden ist, wird auf den Probenaufbringpunkt oder den Testkanal an einem vorher bestimmten Platz aufgebracht. Die Markierung, an die das Bindungsreagens gebunden ist, kann der Probe auch zugefügt werden, in welchem Fall die Markierung in die Vorrichtung übertragen wird, wenn die Probe dem Probenaufbringpunkt zugefügt wird.
Zusätzlich wird die Verwendung der Testvorrichtung für die simultane oder parallele Durchführung etlicher Assays zur Erkennung einer bestimmten Erkrankung und/oder eines Syndroms in der Erfindung beschrieben. Die verzweigten Kanäle können auch verwendet werden, um das geeignete Funktionieren der Vorrichtung zu kontrollieren, wobei einer der Kanäle als Testkanal und der andere als Funktionalitäts- oder Kontrollkanal verwendet wird. Ein getrennter Kontrollkanal, der die Funktionalität der Vorrichtung und der Reagentien anzeigt, kann ebenfalls der Testvorrichtung zugefügt werden.
Die Multikanaltestvorrichtung gemäß der Erfindung, wie auch ihre Verwendung in diagnostischen Verfahren unterscheiden sich von den Testvorrichtungen aus dem Stand der Technik, die in den oben erwähnten Patenten und Patentanmeldungen offenbart werden darin, dass ein oder mehr unterschiedli che oder identische parallele Tests, vorzugsweise 2 bis 40, noch bevorzugter 4 bis 30 und besonders bevorzugt 8 bis 24 parallele Tests unter Verwendung eines extrem kleinen Objekts, erzeugt aus einem porösen Material, durchgeführt werden können.
Die Verwendung von Laser zur Erzeugung des Kanalnetzwerks und der Kennzeichen mit Information betreffend den Test, ist ein bevorzugtes Verfahren für die Herstellung der Testvorrichtungen gemäß der Erfindung. Die in diesem Produktionsverfahren verwendete Maschine ist preisgünstig und die Betriebskosten bestehen im wesentlichen aus der Menge der verwendeten Elektrizität. Im Vergleich zu der Verwendung von Wasser-abstoßenden Substanzen, wie beispielsweise heißem Wachs, kann durch die Laserherstellung die Verwendung von Chemikalien während des Herstellungsverfahrens vermieden werden. Durch die Verwendung von Laser kann ein präzises Ätzergebnis (Druck) erhalten werden und aufgrund der Genauigkeit des Drucks (Eindrucks) kann die Testvorrichtung, falls gewünscht, in Verbindung mit dem Herstellungsverfahren markiert werden, wodurch das Risiko eines Durcheinanderbringens von Vorrichtungen vermindert wird.
Große Testmengen können hergestellt werden, indem einzelne Kanäle, parallele Kanäle oder Kanalnetzwerke auf einer Rolle geätzt werden und durch Zugabe der benötigten Reagentien und Behandlungen auf derselben Produktionslinie und schließlich Trennen der Tests voneinander auf eine gewünschte Weise in einzelne Tests für einen oder etliche Assays oder in Testkombinationen etlicher Paralleltests.
Zusätzlich kann die Testvorrichtung zur Analyse kleiner Volumina von Patientenproben, wie Urin, Blut, Plasma, Serum, Speichel, Gewebefluids, Fäkalien, Umweltproben, usw., verwendet werden. Das kleine Probenvolumen, das so klein sein kann wie beispielsweise 1,0 bis 50 μl, vorzugsweise 2,0 bis 40 μl, noch bevorzugter 4,0 bis 20 μl oder besonders bevorzugt 5,0 bis 10,0 μl pro Testvorrichtung kann ausreichen und Vorteile werden insbesondere im Hinblick auf die Durchführung von Assays an Proben gewonnen, die von kleinen Kindern oder Fingerspitzenblut genommen wurden.
ERZEUGUNG DER TESTVORRICHTUNG
Die Produktion der Testvorrichtung umfasst sechs Hauptschritte. Die Bildung des Kanalnetzwerks und die Kennzeichnung mit Informationen, betreffend den Test, Aufbringung und die Immobilisierung des spezifischen Reagenzes, den porösen Kanal inert machen, Aufbringen der Markierung, beschichtet mit einem zweiten spezifischen Reagens, Erzeugung des Probenaufbringpunkts und Stabilisierung der Testvorrichtung und Sicherstellung seiner Lagereigenschaften. Zwischen den erwähnten Hauptschritten kann der Teststreifen getrocknet werden. Wenn die Markierung der Probe zugefügt wurde, kann der Schritt des Aufbringens der Markierung auf die Testvorrichtung weggelassen werden.
Bei der Testvorrichtung gemäß der Erfindung können etliche unterschiedliche oder identische Paralleltests (1 bis 12) an einem sehr kompakten Stück eines porösen Materials durch die Kanalbildung der Testvorrichtung durchgeführt werden.
ERZEUGUNG DER KANÄLE
Die Kanalisierung der Reagentien und der Proben kann erreicht werden, indem ein poröses, Wasser-transmittierendes Material, wie beispielsweise Nitrocellulose, Polysulfonat, Nylon oder Papier mit einem Wasser-abstoßenden Mittel oder einer teilweise Wasser-abstoßenden Substanz, wie Wachs, Polyolefinen, Polyacrylamidfarben oder Mischungen davon behandelt wird. Die Aufbringung der Wasser-abstoßenden Materialien auf das poröse Material wird an ihrer Schmelztemperatur durchgeführt, vorzugsweise bei einer Temperatur zwischen 50 und 80°C, vorteilhafterweise unter Verwendung von Druck-, Bürsten- oder Sprühverfahren, wodurch auf dem porösen Material eine Wasser-abstoßende Figur gebildet wird, die sich in der gewünschten Form befindet und die ein Kanalnetzwerk etlicher Kanäle beinhaltet, die voneinander durch den behandelten Bereich getrennt sind, entlang welcher Kanäle die Probe aufgrund der Wirkung der Kapillaraktion und Diffusion migriert. Nach dem Aufbringen wird das Substrat sofort auf Raumtemperatur abgekühlt. Es ist möglich die Reagentien in dem Kanalnetzwerk auf eine Weise aufzubringen, die ihre Reaktivität erhält.
Natürlich können die Kanäle auch durch Ausstanzen eines Stücks von Trägermaterial einer geeigneten Größe zur Bildung eines Kanalnetzwerks einer geeigneten Form und Größe erzeugt werden.
Gemäß der vorliegenden Erfindung wird die Kanalisierung jedoch vorzugsweise durch Behandlung eines porösen und Wasser-übertragenden Materials, wie Nitrocellulose, mit Laser durchgeführt. Unter Verwendung einer geeigneten Laserkraft kann Nitrocellulose von solchen Bereichen des Nitrocellulosesubstrats weggeätzt werden, in denen kein Fluidfluss erwünscht ist, was die behandelten Bereiche nur durch einen Kunststofffilm (Mylar-Film) bedeckt hinterlässt, der unter der Cellulose liegt. Figuren unterschiedlicher Formen (1 bis 12) werden durch die Kanäle, die die Nitrocellulose oder irgendein anderes poröses Material enthalten und die Kanalkanten oder behandelten Bereiche gebildet, die sich entlang des ganzen Weges zu den Substratkanten erstrecken und Laser-geätzt wurden, indem ein geeignetes vorher programmiertes Computerprogramm verwendet wurde, wobei 10 bis 90% der maximalen Output-Kraft der Vorrichtung, vorzugsweise 10 bis 80%, noch bevorzugter 12 bis 60%, besonders bevorzugt 15 bis 40% verwendet wurden, eine Ätzgeschwindigkeit, die vorzugsweise in einem Bereich von 100 bis 1.500 mm/s, noch bevorzugter 400 bis 1.000 mm/s liegt und eine Auflösung, die zwischen 50/1.000 bis 1.000/1.000, vorzugsweise 100/1.000 bis 800/1.000, noch bevorzugter 150/1.000 bis 500/1.000 und besonders bevorzugt 200/1.000 bis 300/1.000 liegt.
Der behandelte Bereich, der die Kanäle trennt, kann sich entlang des gesamten Weges zu den Kanten der Testvorrichtung erstrecken oder optional kann kein unbehandelter Bereich an den Figurenkanten zurückbleiben. Die Testvorrichtung ist mit Informationen betreffend dem Hersteller oder die Tests durch Ätzen markiert, beispielsweise durch Laserbehandlung.
DAS AUFBRINGEN DER REAGENTIEN IN DEN TRÄGER
Es ist möglich, die verschiedenen Reagentien, die für die Durchführung der Tests benötigt werden, in das Kanalnetzwerk aufzubringen und, falls nötig, zu immobilisieren. Die Reagentien können in sehr geringen Volumina verwendet werden. Die benötigten Reagentien umfassen mindestens zwei spezifische Bindungsreagentien, von denen eines immobilisiert ist und das andere an die Markierung gebunden ist, die durch die Probenlösung mobilisierbar ist und mindestens eine nachweisbare Markierung.
SPEZIFISCHE BINDUNGSREAGENTIEN
Geeignete Substanzen beinhalten u. a. verschiedene Bindungsreagenzien, spezifische immunchemische Reagentien, wie Antikörper, Antikörperfragmente, rekombinante Antikörper, rekombinante Antikörperfragmente, Antigene, jedoch auch andere Liganden, wie Rezeptoren, Lektine, Biotin, Avidin, usw. Besonders geeignet sind monoklonale und polyklonale Antikörper, Antigene und Fragmente davon. Im Hinblick auf einen Allergietest beinhalten geeignete Allergene Extrakte, die aus Pollen von Bäumen, Gras oder Unkraut hergestellt wurden, Extrakte, hergestellt aus Sporen von Schimmelpilzen, Milben, Hausstaub, Tierhautepithel, Insekten, Latex, Parasiten, Arzneimitteln oder Nahrungsmittel.
Die Bindungsreagentien können durch bekannte Verfahren auf die Struktur des porösen Trägers an den gewünschten Punkten immobilisiert oder chemisch oder physikalisch angebunden werden und ein Bindungsreagens für eine Kontrollreaktion kann ebenfalls optional an denselben oder einen Zweigkanal immobilisiert oder chemisch oder physikalisch angebunden werden.
INERT MACHEN DER PORÖSEN SUBSTANZ
Nach Erzeugung des Kanalnetzwerkes und Aufbringen des spezifischen Bindungsreagenzes wird die poröse Trägersubstanz inert gemacht, indem ein sogenanntes Blockierungsmittel verwendet wird, wobei die freien reaktiven Stellen der Trägersubstanz und die nicht-spezifischen Bindungsstellen der spezifischen Bindungsreagentien durch eine geeignete Mischung eliminiert werden, die natürliche und/oder synthetische Polymere enthält, wie beispielsweise Albumin oder Casein und/oder PEG (Polyethylenglycol) und PVA (Polyvinylalkohol), nicht-ionische Detergentien, wie Hexansulfonsäure und TRITON-X-100, BRIJ und Konservierungsstoffe, wie Zucker, beispielsweise Saccharose und Trehalose oder ihre Derivate. Darauffolgend wird die Testvorrichtung getrocknet.
Falls gewünscht, kann das Blockierungsmittel erst nach Produktion der Testvorrichtung zugefügt werden, im Zusammenhang mit dem Aufbringen der Probe.
ERZEUGUNG DES MARKIERUNGSPUNKTES
Geeignete Markierungsmittel beinhalten verschiedene Kunststoff- oder metallische Mikroteilchen, die durch den Probenfluss mobilisierbar sind, wie beispielsweise Latex, Gold, Liposomen, Färbemittel, Fluorophoren, Fluorochrome oder andere ähnliche Teilchen einer metallischen Substanz oder eines Färbemittels, die dazu in der Lage sind, die Analyten zu binden und an die spezifischen Bindemittel, wie Antikörper, Rezeptoren, Lektin oder andere Liganden zu binden. Ebenfalls können fluoreszierende Teilchen, fluoreszierende Färbemittel oder superparamagnetische Teilchen als Markierungen wirken.
Die Markierung kann in dem porösen Träger immobilisiert sein, auf dem Probenaufbringpunkt der Testvorrichtung oder einem anderen Punkt, getrennt von den Probenaufbringpunkt. Das Markierungsmittel kann auch der analysierbaren Probe vor deren Aufbringen auf den Teststreifen zugefügt werden.
ERZEUGUNG DES PROBENAUFBRINGPUNKTES
Der Probenaufbringpunkt kann optional mit einem Filter versehen sein, indem ein Filter auf den Probenaufbringpunkt aufgebracht wird, der beispielsweise Blutzellen an einem Eintreten in die Kanäle hindert. Der Probenaufbringpunkt kann mit einer Markierung versehen sein, an die ein zweites spezifisches Bindungsreagens gebunden wurde.
STABILISIERUNG DER TESTVORRICHTUNG UND SICHERSTELLUNG IHRER SPEICHEREIGENSCHAFTEN
Die Testvorrichtung kann durch Behandlung beispielsweise durch Trocknen, um ihr eine relative Feuchtigkeit von unterhalb von 8% zu verleihen, lagerfähig gemacht werden, woraufhin die Testvorrichtung hermetisch verpackt und trocken gelagert wird, um die relative Feuchtigkeit der Testvorrichtung unterhalb von 8% zu erhalten. So erhält sich die Testvorrichtung ihre Funktionalität für so lang wie 24 bis 36 Monate ohne substantiellen Verlust der Funktionalität, einschließlich der Empfindlichkeit oder Spezifität.
Falls nötig, kann die Testvorrichtung innerhalb eines Gehäuses, das aus Karton oder Kunststoff gemacht wurde, platziert werden, das falls nötig mit Instruktionen versehen sein kann, die den Betrieb und die Verwendung der Testvorrichtung beschreiben.
DIE STRUKTUR DER TESTVORRICHTUNG
Die Struktur der Testvorrichtung und ihre möglichen Variationen werden in den 1 bis 12 beschrieben.
Die Testvorrichtung umfasst etliche, vorzugsweise 2 bis 10, noch bevorzugter 3 bis 8 Kanäle 1, die sich an dem Verzweigungspunkt weiter in etliche, vorzugsweise 2 bis 5 (1a, 1b ...), noch bevorzugter 2 bis 3 verzweigte Kanäle verteilen können. Ein behandelter Bereich 2 trennt die Kanäle 1 voneinander und dirigiert die Migration der Probe in der Testvorrichtung.
Die Kanäle 1 oder die verzweigten Kanäle (1a, 1b ...) enthalten ein oder mehr Bindungsreagentien als Bindemittelzone oder Blot 3. Zusätzlich umfasst die Testvorrichtung ein oder mehr Markierungspunkte 4, die optional mit dem Probenaufbringpunkt 5 kombiniert werden können. Der Probenaufbringpunkt 5 kann optional mit einem Filter versehen sein.
1 zeigt eine Testvorrichtung, worin ein Nitrocellulosefilm einer gewünschten Größe, z. B. 25 × 25 mm in acht identische Kanäle 1 aufgeteilt wurde. Die Kanäle wurden durch Druck einer Figur auf einem porösen Material, beispielsweise einem Nitrocellulosefilm, hergestellt und die Übertragung von heißem, geschmolzenem, ungefähr 60°C heißen Polyolefin auf die behandelten wasserabstoßenden Zonen 2 des Nitrocellulosefilms mit einer Stanzvorrichtung. Jeder Kanal enthält ein spezifisches Bindemittel 3. Der Markierungspunkt 4 in der Mitte der Testvorrichtung enthält ein zweites Markierungsreagens, gerichtet gegen den zu bestimmenden Analyten. Der Probenaufbringpunkt 5 wirkt simultan als Markierungspunkt 4 der Testvorrichtung. Die Testvorrichtung gemäß 1 ist dadurch gekennzeichnet, dass jeder der Kanäle ein unterschiedliches spezifisches Bindemittel (z. B. ein Allergen) enthalten kann und das eine Teilchenmarkierung (z. B. ein antimenschliches IgE), das für alle Bindemittel gleich ist, in der Mitte der Kanäle lokalisiert ist.
1a zeigt eine Testvorrichtung, bei der der Nitrocellulosefilm in acht identische Kanäle 1 geteilt wurde. Die Kanäle wurden durch Laserätzen einer Figur auf einem porösen Material erzeugt, so wie beispielsweise einem Nitrocellulosefilm auf eine Weise, dass ein behandelter Bereich 2 zwischen den Kanälen verbleibt, auf welchem Bereich Kennzeichen betreffend die Tests und den Hersteller während der Laserbehandlung zugefügt wurden. Jeder der Kanäle enthält ein spezifisches Bindemittel 3. Lokalisiert in der Mitte der Testvorrichtung enthält der Markierungspunkt 4 ein zweites Markierungsreagens gegen den zu bestimmenden Analyten. Der Probenaufbringpunkt 5 wirkt simultan als Markierungspunkt 4 der Testvorrichtung. Die Testvorrichtung gemäß 1 ist dadurch gekennzeichnet, dass jeder der Kanäle ein unterschiedliches spezifisches Bindemittel (z. B. ein Allergen) enthalten kann und dass eine Teilchenmarkierung (z. B. anti-menschliches IgE), die für jedes der Bindemittel gleich ist, in der Mitte der Kanäle lokalisiert ist. 2 zeigt eine Testvorrichtung, bei der einer der Kanäle 1, verzweigte Kanäle 1a und 1b umfasst, enthaltend das spezifische Bindemittel in der Bindemittelzone 3. Andere Kanäle 1 umfassen zwei Bindemittelzonen 3, wovon der andere eine Kontrollzone sein kann. Alle Kanäle enthalten einen getrennten Markierungspunkt 4. Im Zentrum umfasst die Vorrichtung einen getrennten Probenaufbringpunkt 5.
3 zeigt eine Testvorrichtung, bei der vier identische oder nicht-identische Kanäle 1 die verzweigten Kanäle 1a, 1b umfassen, die spezifische Bindemittel in der Bindemittelzone 3 enthalten und stromabwärts von den Verzweigungspunkten der Kanäle vier getrennte Teilchenmarkierungspunkte 4, die mit spezifischen Bindemitteln beschichtet wurden. Die Vorrichtung umfasst einen getrennten Probenaufbringpunkt 5.
4 zeigt eine Testvorrichtung mit vier identischen oder nichtidentischen Kanälen 1, die sich in Kanäle 1a, 1b verzweigen, die wiederum spezifische Bindemittel in der Bindemittelzone 3 enthalten und stromabwärts von den Verzweigungspunkten der Kanäle vier getrennter Teilchenmarkierungspunkte 4, beschichtet mit spezifischen Bindemitteln. Die Vorrichtung umfasst einen getrennten Probenaufbringpunkt 5.
5 zeigt eine Testvorrichtung, bei der der Probenaufbringpunkt an einem Ende der Testvorrichtung oder des Streifens lokalisiert ist. Die Vorrichtung umfasst drei Kanäle 1 mit zwei Bindemittelzonen 3, die in jedem derselben lokalisiert sind. Der Markierungspunkt 4 ist derselbe wie der Probenaufbringpunkt 5.
6 zeigt eine Testvorrichtung, die bis zu zwölf unterschiedliche Bindemittel in zwölf getrennten Bindemittelzonen 3 in vier unterschiedlichen Kanälen 1 umfasst, die sich weiter in drei Kanäle 1a, 1b und 1c verzweigen. Weiterhin umfasst die Vorrichtung vier getrennte Markierungspunkte 4. Die Testvorrichtung umfasst einen getrennten Probenaufbringpunkt 5.
7 zeigt eine Testvorrichtung, umfassend acht identische Kanäle 1 und zwischen ihnen behandelte Bereiche 2. Jeder Kanal 1 enthält drei spezifische Bindemittel, optional gegen unterschiedliche Analyten, in drei getrennten Bindemittelzonen 3. Der Markierungspunkt 4 in der Mitte der Testvorrichtung enthält ein anderes Markierungsreagens gegen den zu bestimmenden Analyten.
8 zeigt eine Testvorrichtung, umfassend acht Kanäle 1, die sich jeweils in zwei Kanäle 1a und 1b verzweigen und eine Bindemittelzone 3 enthalten. Die Vorrichtung umfasst einen kombinierten Markierungs- und Probenaufbringpunkt 4, 5.
9 zeigt eine Testvorrichtung, umfassend fünf Kanäle 1, wobei jeder Kanal vier Bindemittelzonen 3 umfasst. Die Vorrichtung umfasst vier getrennte Markierungspunkte 4 und einen Probenaufbringpunkt 5.
10 zeigt eine Testvorrichtung zum Nachweis von Virus-Antigenen, worin der Probenaufbringpunkt 5 an einem der Enden der Testvorrichtung oder des Streifens platziert ist. Die Vorrichtung umfasst drei Kanäle 1, die jeweils eine Bindemittelzone und einen getrennten Markierungspunkt 4 enthalten. Die Vorrichtung ist mit Informationen markiert, die den Test und den Hersteller betreffen.
11 zeigt eine Testvorrichtung für einen Nachweis von Myocardinfarkt, worin der Probenaufbringpunkt 5 an einem der Enden der Testvorrichtung oder des Streifens platziert ist. Die Vorrichtung umfasst drei Kanäle 1, die jeweils eine Bindemittelzone 3 und einen getrennten Markierungspunkt 4 enthalten. Die Vorrichtung ist mit Informationen betreffend den Test und den Hersteller markiert.
12 zeigt drei Testvorrichtungen, worin der Probenaufbringpunkt 5 an einem Enden der Testvorrichtung platziert ist. Die Vorrichtungen umfassen einen Markierungspunkt 4 und Bindemittelzonen 3, wovon der andere ein Kontrollpunkt ist.
Die Form und Größe der oben beschriebenen Testvorrichtungen sollen nur als Beispiele für diejenigen betrachtet werden, die durch das Verfahren gemäß der vorliegenden Erfindung erzeugt werden können.
VERWENDUNG DER TESTVORRICHTUNG ZUR DURCHFÜHRUNG SIMULTANER ODER PARALLELER ASSAYS
Die vorliegende Erfindung basiert auf einem Fluidfluss in einem porösen Material, wie Nitrocellulose, der praktisch in jeder Richtung in derselben Geschwindigkeit aufgrund einer Diffusion und Kapillarwirkung, wie bekannt, stattfindet. Dieser radiale oder laterale Fluss ermöglicht die Bewegung der Probe, die die analysierbaren Analyten und Testreagentien ent hält, in etliche Kanäle, die simultan als unterschiedliche Tests dienen, so weit die Kanalisierung des porösen Materials in sicherer Weise durchgeführt wurde. Die auf die Testvorrichtung aufgebrachte Probe reagiert mit der der Probe zugefügten Markierung oder mit einer oder mehr Markierungen, die auf die Vorrichtung aufgebracht wurden und dieser Komplex reagiert wiederum mit den immobilisierten Bindemitteln, die weiter in unterschiedlichen Kanälen der Testvorrichtung platziert sind. Es können auch immunologische Reagentien immobilisiert werden, ohne in ihre Funktionalität einzugreifen. Das Aufbringen der Probe auf die Testvorrichtung wird durchgeführt, indem eine geringe Menge der Probe oder eine Verdünnung davon auf den Probenaufbringpunkt 5 aufgebracht wird, wovon sie sich zu dem Markierungspunkt (den Punkten) 4 bewegt und weiter entlang der Kanäle in die Testzonen 3, wo die Reaktion zwischen dem spezifischen Bindemittel der Markierung, dem Analyten in der Probe und dem anderen spezifischen Bindemittel, gebunden an den festen Träger, stattfindet. Diese Reaktion wird für das nackte Auge sichtbar gemacht, wenn die Markierung ein gefärbtes Teilchen enthält oder kann unter UV-Licht vom nackten Auge als lichtemittierender Punkt, als Blot, Linie oder andere Figuren abgelesen werden oder kann mit einer geeigneten Vorrichtung, einem Fotometer, Fluorometer oder einer Vorrichtung, die die Veränderungen des Magnetfelds misst, abgelesen und interpretiert werden.
Gemäß einer weiteren Ausführungsform ist der Markierungspunkt 4 in dem Probenaufbringpunkt 5 platziert, in welchem Fall der Analyt in der Probe und das spezifische Bindemittel der Markierung einen Komplex bilden, bevor die Probe entlang der Kanäle fließt.
In einer weiteren Ausführungsform wird die Anwendung der Markierung auf die Probe durchgeführt, bevor die Probe der Testvorrichtung zugefügt wird.
Die Testvorrichtung ist insbesondere für einen Allergietest nützlich, wo eine relativ große Menge von Serum gegenwärtig benötigt wird, um die Allergie-spezifischen Antikörper der Klasse IgE zu definieren. Wenn die vorliegende Erfindung angewandt wird, kann eine Sensibilisierung eines Patienten für bis zu 24 oder mehr unterschiedliche Allergene aus einer sehr geringen Menge einer Probe, sogar so wenig wie 10 bis 40 μl Serum, Plasma oder Gesamtblut nachgewiesen werden, und zwar simultan mit derselben Testvorrichtung, indem etliche unterschiedliche Allergene auf jeden Kanal der Testvorrichtung dosiert werden.
Gemäß einer bevorzugten Ausführungsform der vorliegenden Erfindung sind etliche unterschiedliche Markierungen an die Testvorrichtung angehaftet. So mobilisiert eine kleine Probe die Markierungen, die optional von einander unterschiedlich sind und in unterschiedlichen Kanälen platziert sind. Eine Testvorrichtung wie diese ist für Immunglobulin-spezifische Antikörperassays gegen unterschiedliche Erkrankungs-erzeugende Mittel gut geeignet.
BEISPIELE ZUR ANWENDUNG DES TESTS
Die folgenden Ausführungsformen sollen als Beispiele betrachtet werden und es sollte verstanden werden, dass andere mögliche Anwendungen der vorliegenden Erfindung für den Fachmann auf dem Gebiet offensichtlich sind.
BEISPIEL 1: BILDUNG EINES KANALNETZWERKS DURCH EINEN LASER
Die in 1a dargestellte Figur wird auf einem porösen Nitrocelluloseträger durch Ätzen der Nitrocellulose von den Bereichen, auf denen ein Fluidfluss nicht erwünscht ist, unter Verwendung einer Domino DGM-1"High Resolution Laser Marker"-Vorrichtung hergestellt. Ein Netzwerk, das acht Kanäle 1, getrennt durch behandelte Bereiche 2 umfasst, wird auf der Testvorrichtung gebildet. Um das Risiko zu vermeiden, dass die Vorrichtungen durcheinander gebracht werden, werden Kennzeichen betreffend das Produkt und den Hersteller gebildet, indem Nitrocellulose ungeätzt bleibt.
Die gewünschte Figur, die vorher in das Computerprogramm einprogrammiert wurde, wird unter Verwendung einer Markierungsgeschwindigkeit von 700 mm/sec von 10 bis 2.500 mm/sec und 20% der maximalen Output-Kraft des 20 W Lasers (85 bis 132 V/170 bis 260 V, I-Phase-Input und 20 W Output) und einer Auflösung von 250/1.000 geätzt.
Die so erzeugte Testvorrichtungsmatrix mit einem Kanalnetzwerk wird gemäß den Beispielen unten zur Durchführung etlicher simultaner Assays verwendet.
BEISPIEL 2: EINE TESTVORRICHTUNG FÜR ALLERGIETESTS
Spezifisch analysierbare Allergene werden als Lösungen (in einer Konzentration von 1 bis 5 mg/ml) auf die Kanäle 1 des Netzwerks der Testvorrichtung, die gemäß Beispiel 1 erzeugt wurde, dosiert, so dass sie unlösliche Zonen 3 bilden, wenn sie sich an die Nitrocellulose des Probenaufbringpunkts anhaften. Unterschiedliche Allergene werden auf jeden Kanal aufgebracht (Extrakte, hergestellt aus Pollen von Bäumen, Gras oder Unkraut, Extrakte, hergestellt aus Schimmelpilzsporen, Milben, Hausstaub, Tierhautepithel, Insekten, Latex, Parasiten, Arzneimitteln oder Nahrungsmitteln). Daraufhin wird die reaktive Nitrocellulose der Kanäle 1 blockiert, d. h., inert gemacht, indem eine Lösung, die Rinderserumalbumin (ESA) (0,1 bis 5,0%), Hexansulfonsäure und Trehalose (1,0 bis 3,0%) enthält, verwendet wird. Die Lösung (10 bis 100 μl) wird in der Mitte der Testvorrichtung aufgebracht, woraufhin sie in jeden Kanal aufgrund der Diffusion und der Ka pillarwirkung migriert und an die freien reaktiven Punkte der Nitrocellulose bindet, d. h. diese blockiert.
Daraufhin wird die Testvorrichtung bei Raumtemperatur getrocknet, bis ihre relative Feuchtigkeit unterhalb von 8% liegt.
Nach dem Trocknen werden 1,0 bis 10,0 μl einer wässrigen Lösung, enthaltend gefärbte Latexteilchen, beschichtet mit Anti-IgE (0,2 bis 1,0%), wobei die Mischung weiterhin 0,1 bis 1,0% BSA, 0,01 bis 0,05% Tween 20 und 0,5 bis 1,5% Trehalose enthält, manuell in die Mitte der Testvorrichtung aufgebracht. Das Teilchensol wird in der Mitte der Testvorrichtung getrocknet.
Wenn der Test verwendet wird, werden 10 bis 50 μl eines Serums oder seiner Verdünnung von einer Person, die an einer Allergie leidet, in die Mitte der Testvorrichtung auf den Probenaufbringpunkt 5 aufgebracht. Die Probe löst die Markierung in der Mitte. Die Anti-IgE-Antikörper der Markierung reagieren mit den Allergie-spezifischen IgE-Molekülen und diffundieren aufgrund der Kapillarwirkung in die Testkanäle.
Wenn die analysierbare Probe spezifische IgE-Antikörper gegen ein oder mehr Allergene in den Zonen 3 der Testvorrichtung enthält, wird eine gefärbte Zone in dem Reaktionskanal, der den Antikörper des Allergens in Frage enthält, gebildet.
BEISPIEL 3: TESTVORRICHTUNG FÜR ALLERGIETESTS
Unter Verwendung einer geeigneten Stanze wird eine Figur, wie in 1 dargestellt, auf den porösen Nitrocelluloseträger gedruckt, worin ein Kanalnetzwerk gebildet wird, indem gefärbte ungefähr 60°C heiße Polyolefine auf den porösen Träger übertragen werden, so dass die Poren des Trägers in den gewünschten Bereichen blockiert werden und ein Netzwerk, das acht Kanäle 1, getrennt von behandelten Bereichen 2 enthält, auf der Testvorrichtung gebildet wird.
Die spezifischen zu testenden Allergene (in einer Konzentration von 1 bis 5 mg/ml) werden auf die Kanäle dieses Netzwerkes aufgebracht, so dass sie unlösliche Zonen 3 bilden, wobei sie sich an die Nitrocellulose des Probenaufbringpunkts anhaften. Unterschiedliche Allergene werden auf jeden Kanal aufgebracht ((Extrakte, hergestellt aus Pollen von Bäumen, Gras oder Unkraut, Extrakte, hergestellt aus Schimmelpilzsporen, Milben, Hausstaub, Tierhautepithel, Insekten, Latex, Parasiten, Arzneimitteln oder Nahrungsmitteln). Daraufhin wird die reaktive Nitrocellulose der Kanäle 1 blockiert, d. h., inert gemacht, indem eine Lösung, die Rinderserumalbumin (BSA) (0,1 bis 5,0%), Hexansulfonsäure und Trehalose (1,0 bis 3,0%) enthält, verwendet wird. Die Lösung (10 bis 100 μl) wird in der Mitte der Testvorrichtung aufgebracht, woraufhin sie in jeden Kanal aufgrund der Diffusion und der Kapillarwirkung migriert und an die freien reaktiven Punkte der Nitrocellulose bindet, d. h. diese blockiert.
Daraufhin wird die Testvorrichtung bei Raumtemperatur getrocknet, bis ihre relative Feuchtigkeit unterhalb von 8% liegt. Nach dem Trocknen werden 1,0 bis 10,0 μl einer wässrigen Lösung, enthaltend gefärbte Latexteilchen, beschichtet mit Anti-IgE (0,2 bis 1,0%), wobei die Mischung weiterhin 0,1 bis 1,0% BSA, 0,01 bis 0,05% Tween 20 und 0,5 bis 1,5% Trehalose enthält, in die Mitte der Testvorrichtung aufgebracht. Das Teilchensol wird in der Mitte der Testvorrichtung getrocknet.
Wenn der Test verwendet wird, werden 10 bis 50 μl eines Serums oder seiner Verdünnung von einer Person, die an einer Allergie leidet, in die Mitte der Testvorrichtung auf den Probenaufbringpunkt 5 aufgebracht. Die Probe löst die in der Mitte platzierte Markierung. Die Anti-IgE-Antikörper der Markierung reagieren mit den Allergie-spezifischen IgE-Molekülen und diffundieren aufgrund der Kapillarwirkung in die Testkanäle.
Wenn die analysierbare Probe spezifische IgE-Antikörper gegen ein oder mehr Allergene in den Zonen 3 der Testvorrichtung enthält, wird eine gefärbte Zone in dem Reaktionskanal, der den Antikörper des Allergens in Frage enthält, gebildet.
BEISPIEL 4: TESTVORRICHTUNG FÜR TESTS AUF GESCHLECHTSERKRANKUNGEN UND BLUTSCREENING
Beispiel 4 beschreibt die Anwendung der vorliegenden Erfindung auf Tests für Geschlechtskrankheiten, wobei sowohl Antikörper als auch virale und bakterielle Antigene simultan in Patientenproben bestimmt werden.
Die in 2 dargestellte Testvorrichtung, worin ein Multikanalnetzwerk, wie in Beispiel 1 beschrieben, erzeugt wurde, wird weiter hergestellt, so dass der erste Kanal 1, der sich in zwei Teile verzweigt, Testkanäle für HIV1- und HIV2-Antikörpertests bildet. Das Polypeptid oder die rekombinanten Antigene, die für das Virus in Frage typisch sind, werden in diesen Kanälen als Linien (0,1 bis 0,5 μl) in einer Konzentration von 0,5 bis 5,0 mg/ml platziert. Ein gefärbter Markierungspunkt 4, erzeugt durch Beschichtung von beispielsweise Goldteilchen mit einem dritten Polypeptid oder rekombinanten Antigen, das HIV1- und HIV2-Viren erkennt, wird in den Kanal 1 platziert.
Der zweite Kanal 1 derselben Testvorrichtung wird verwendet, um ein HIV-Virus-Antigen nachzuweisen, indem beispielsweise eine Linie oder ein Blot eines monoklonalen Antikörpers (0,5 bis 5,0 mg/ml) erzeugt gegen das p24-Antigen des HIV-Virus in den Kanal und eine sogenannte Kontrollreagens zone, umfassend einen monoklonalen Antikörper gegen denselben Markierungsantikörper in Frage in demselben unverzweigten Kanal 1 platziert wird.
Der dritte Kanal 1 wird verwendet, um Antikörper des Leukämievirus (HTLV-1/2) nachzuweisen, indem eine Testlinie 3 oder eine Kontrolllinie 3 auf die oben beschriebene Weise erzeugt werden, von einem rekombinanten Antigen, das typisch für dieses Virus ist und indem die benötigte Markierung platziert wird, die erzeugt wird durch Beschichtung von Goldteilchen mit einem anderen rekombinanten Antigen, das typisch für das HTLV 1/2-Virus ist, und zwar in Markierungspunkt 4 desselben Kanals.
Auf ähnliche Weise werden die Reagenszonen 3, hergestellt aus spezifischen rekombinanten Antigenen, die für den Nachweis von Treponema pallidum-Bakterium-Antikörpern geeignet sind, in den vierten Kanal 1 platziert.
Im fünften Kanal 1 wird ein Testsystem, das das Oberflächenantigen von Hepatitis B-Virus nachweist, platziert, wobei zwei spezifische Antikörper verwendet werden, die gegen das Oberflächenantigen erzeugt werden, einer in die Testzone 3 und den anderen in den Markierungspunkt 4. Die benötigten Reagentien, um Hepatitis C-Virus nachzuweisen, werden in den sechsten Kanal 1 platziert. Ein rekombinantes Antigen, das typisch für HCV ist, wird in die Testlinie 3 platziert und der Markierungspunkt 4 wird durch Beschichtung von Goldteilchen mit anti-menschlichem IgG hergestellt.
Alle Kanäle 1 der Testvorrichtung werden mit einer sogenannten Blockierungslösung behandelt, enthaltend Albumin (BSA) (0,1 bis 5,0%), TRITON-X-100, BRIJ und Saccharose durch Dosierung einer geeigneten Menge davon auf den Probenaufbringpunkt 5 der Testvorrichtung, wovon diese in jeden Kanal diffundiert und die reaktiven Punkte der Nitrocellulose auffüllt. Das Trocknen der Testvorrichtung wird in einem Vakuumkabinett zum Beschleunigen des Trocknens durchgeführt.
Daraufhin werden die benötigten oben erwähnten Markierungen, die für jeden Test charakteristisch sind, auf die vorher bestimmten Markierungspunkte 4 der Testvorrichtung dosiert, indem eine geeignete automatische Ausgabevorrichtung verwendet wird. Das Trocknen wird, wie für die oben erwähnten Beispielen beschrieben, durchgeführt.
Wenn Patientenproben analysiert werden, werden 10 bis 50 μl Serum, Plasma oder Gesamtblut auf die Mitte der Testvorrichtung aufgebracht und die Ergebnisse können nach einer Reaktionszeit von 1 bis 10 Minuten abgelesen werden. Im Fall eines positiven Ergebnisses erscheint eine gefärbte Linie oder ein Blot in der Testzone und eine zweite gefärbte Zone in der Kontrollzonen derjenigen Kanäle oder verzweigten Kanäle, die solche aufweisen.
BEISPIEL 5: EINE TESTVORRICHTUNG FÜR EINEN TEST AUF GESCHLECHTSKRANKHEITEN UND BLUTSCREENING
Beispiel 5 beschreibt die Anwendung der vorliegenden Erfindung auf den Test auf Geschlechtserkrankungen, wobei sowohl Antikörper als auch Virus und bakterielle Antigene simultan in Patientenproben bestimmt werden.
Um ein HIV-Virus-Antigen nachzuweisen, wird die Testvorrichtung, wie dargestellt in 3, wobei die Kanalisierung wie in Beispiel 1 durchgeführt wurde, durch Platzieren eines Blots erzeugt, hergestellt aus einem polyklonalen Antikörper (0,5 bis 5,0 mg/ml), erzeugt gegen das p24-Antigen des HIV-Virus in den ersten Kanal 1 und einer sogenannten Kontrollreagenszone, d. h., einen polyklonalen Antikörper gegen den fraglichen Markierungsantikörper in demselben unverzweigten Kanal 1.
Auf ähnliche Weise werden die Reagenszonen 3, hergestellt aus den spezifischen rekombinanten Antigenen, die für den Nachweis von Antikörpern von Treponema pallidum-Bakterium geeignet sind, in den zweiten Kanal 1 platziert.
Im dritten Kanal 1 wird ein Testsystem, das das Oberflächenantigen von Hepatitis B-Virus nachweist, platziert, wobei zwei spezifische Antikörper verwendet werden, die gegen das Oberflächenantigen erzeugt werden, einen in die Testzone 3 und den anderen in den Markierungspunkt 4.
Die benötigten Reagentien, um Hepatitis C-Virus nachzuweisen, werden in den vierten Kanal 1 platziert. Ein rekombinantes Antigen, das typisch für HCV ist, wird in die Testlinie 3 platziert und der Markierungspunkt 4 werden durch Beschichtung von Goldteilchen mit anti-menschlichem IgG hergestellt. Alle Kanäle 1 der Testvorrichtung werden mit einer sogenannten Blockierungslösung behandelt, enthaltend Kasein (0,1 bis 5,0%), Hexansulfonsäure und Trehalose (1,0 bis 3,0%) durch Dosierung einer geeigneten Menge davon auf den Probenaufbringpunkt 5, wovon diese in jeden Kanal diffundiert und die reaktiven Zone der Nitrocellulose auffüllt. Das Trocknen der Testvorrichtung wird in einem Vakuumkabinett zum Beschleunigen des Trocknens durchgeführt.
Daraufhin werden die benötigten oben erwähnten Markierungen, die für jeden Test charakteristisch sind, auf die vorher bestimmten Markierungspunkte 4 dosiert. Das Trocknen wird, wie für die bei den oben erwähnten Beispielen beschrieben, durchgeführt.
BEISPIEL 6: TESTVORRICHTUNG FÜR EINEN TEST AUF MYOCARDINFARKT
Ein Beispiel, dass die Anwendungen der vorliegenden Erfindung gut beschreibt, ist eine Testvorrichtung zum Nachweis von Myocardinfarkt aus Gesamtblut, Plasma oder Serumproben eines Patienten.
Die Testvorrichtung gemäß 4 wird für vier unterschiedliche Analyten hergestellt. Die Testvorrichtung, die wie in Beispiel 1 beschrieben erzeugt wurde, umfasst vier identische Kanäle, die sich weiter in zwei getrennte Kanäle verzweigen. Die Testvorrichtung kann so verwendet werden, um simultan aus einer einzelnen Probe die Gegenwart von Troponin I, Myoglobin, Kreatinkinase-M-M-Isoenzym (CKMB) und C-reaktivem Protein (CRP) in einer Patientenprobe zu bestimmen.
Im Hinblick auf die Kanäle 1a und 1b der Testvorrichtung werden 0,1 bis 0,5 μl eines Antikörpers von Troponin I in einer Konzentration von 1,0 bis 5,0 mg/ml in den Kanal 1a aufgebracht und 0,1 bis 0,5 μl eines Anti-Maus-Antikörpers in einer Konzentration von 1,0 bis 5,0 mg/ml in den Kanal 1b. Der Kanal 1a bildet einen sogenannten Testkanal und der Kanal 1b bildet einen sogenannten inneren Funktionalitäts-Kontrollkanal.
Das andere Reaktionspaar wird aus gefärbten Teilchen gebildet, beschichtet mit einem Antikörper, der gegen Troponin I erzeugt wurde und aufgebracht wie in Beispiel 1 beschrieben, und zwar auf den vorher bestimmten Markierungspunkt 4 im Kanal 1.
Zusätzlich zu Troponin I werden spezifische Tests für Myoglobulin, CKMB und C-reaktives Protein (CRP) in der Testvorrichtung auf die oben beschriebene Weise erzeugt.
Alle Kanäle 1 der Testvorrichtung werden mit einer sogenannten Blockierungslösung, enthaltend Polyethylenglycol (PEG), TRITON-X-100 und Trehalose (1,0 bis 3,0%) durch Dosierung einer genügenden Menge davon auf den Probenaufbringpunkt 5 der Testvorrichtung, behandelt, wovon sie in jeden Kanal diffundiert und die reaktiven Zonen der Nitrocellulose auffüllt. Das Trocknen der Testvorrichtung wird in einem Vakuumkabinett durchgeführt, um das Trocknen zu beschleunigen.
Daraufhin werden die für jeden Test charakteristischen Markierungen auf die vorher bestimmten Markierungspunkte 4 der Testvorrichtung aufgebracht. Das Trocknen wird so durchgeführt, wie in den oben erwähnten Beispielen beschrieben.
Die Probe wird in die Mitte der Testvorrichtung aufgebracht, von wo sie radial zu jedem identischen Kanal diffundiert und den Test initiiert und Kontrollreaktionen, falls die Patientenprobe einen Analyten enthält, der zu Myocardinfarktmarkern korrespondiert. Die Analyse wird entweder aus einer Serum-, Plasma- oder Gesamtblutprobe durchgeführt, in welchem Fall ein geeignetes Filtersystem die Erythrozyten und Leukozyten aus der Gesamtblutprobe entfernt.
BEISPIEL 7: TESTVORRICHTUNG FÜR EINEN TEST AUF MYOCARDINFARKT
Eine Testvorrichtung gemäß 11 wird wie in Beispiel 1 beschrieben hergestellt und enthält Kennzeichen mit Informationen betreffend spezifische Tests für Troponin I und Myoglobulin.
Die spezifischen Test für Troponin I und Myoglobulin werden wie in Beispiel 6 beschrieben erzeugt. Die Blockierung der Kanäle und das Dosieren der Markierungen werden ebenfalls durchgeführt wie in Beispiel 6. Einer der Kanäle dient als Kontrollkanal, um sicherzustellen, dass der Test korrekt gelagert wurde und dass die Reagentien wirken.
BEISPIEL 8: TESTVORRICHTUNG FÜR EINEN TEST AUF EINE RESPIRATORISCHE INFEKTION
Das folgende Beispiel beschreibt die Anwendung der vorliegenden Erfindung in Fällen von Atemwegsinfektionen, bei denen es erwünscht ist, klassenspezifische Antikörper gegen ein gesuchtes Bakterium oder ein Virusantigen aus den Serum-, Plasma- oder Gesamtblutproben des Patienten zu messen.
Eine Testvorrichtung gemäß 6 wird wie in Beispiel 1 beschrieben erzeugt. Das Antigen, das von jedem analysierbaren Bakterium oder Virus erzeugt wurde, wird in den Punkten 3 in Testkanälen 1 in einer Konzentration von 0,1 bis 0,5 mg/ml platziert, wobei das Gesamtvolumen von jedem Reagens 0,1 bis 0,5 μl beträgt. Die nicht-reaktiven Zonen der Kanäle 1 werden blockiert und die Testvorrichtungen wie in Beispiel 1 beschrieben getrocknet. Konjugate, hergestellt aus Anti-IgG-, Anti-IgM- oder Anti-IgA-Antikörpern werden im Markierungspunkt 4 des Verzweigungspunktes von jedem jeweiligen Testkanal platziert. Sie werden wie oben beschrieben getrocknet.
Eine Patientenprobe (Serum, Plasma oder Gesamtblut) wird auf den Probenaufbringpunkt 5 in der Mitte der Testvorrichtung aufgebracht, wovon sie diffundiert und zunächst zu den Konjugationspunkten aufgrund der Kapillarwirkung übertragen wird, und in den Markierungspunkten 4 in Frage mit den Teilchenmarkierungen reagiert und darauffolgend weiter zu den Testzonen 3 migriert, wo eine Reaktion stattfindet, wenn die Probe den fraglichen Subklassen-spezifischen Antikörper gegen das analysierbare Bakterium oder Virus enthält. Positive Ergebnisse werden auf ähnliche Weise, wie in den obigen Beispielen offenbart, nachgewiesen.
BEISPIEL 9: TESTVORRICHTUNG FÜR DIE KREBSDIAGNOSE
Beispiel 9 beschreibt die Anwendung der vorliegenden Erfindung auf eine Krebsdiagnose-Testvorrichtung. Die Testvorrichtung gemäß 9 wird, wie in Beispiel 1 beschrieben, erzeugt. Die Testvorrichtung umfasst fünf Kanäle, die praktisch identisch sind. 0,1 bis 0,5 μl monoklonale Antikörper CA 125 (Cancer Antigen 125), PSA (Prostata-spezifisches Antigen), pKAc (Proteinkinase A-katalytische Untereinheit), CEA (karzinomembryotisches Antigen), AFP (Alphafötoprotein), erzeugt gegen Krebsmarker, werden in einer Konzentration von 0,1 bis 5,0 mg/ml für jeden Testpunkt in jedem Kanal (von links nach rechts) dosiert. Nach Anwendung der Antikörper wird ein ausreichendes Trocknen durchgeführt, woraufhin das Blockieren unter Verwendung von Polyvinylalkohol (PVA), Hexansulfonsäure und Saccharose durchgeführt wird. Die Testvorrichtung wird darauffolgend getrocknet, woraufhin sie für das Dosieren der Markierungen fertig ist.
Jeweils eine spezifische Markierung, hergestellt für den korrespondierenden Krebsmarker, worin Markierungsgoldteilchen mit einem sekundären Antikörper beschichtet sind, der gegen den fraglichen Marker erzeugt wurde, wie beschrieben in den früheren Beispielen, wird in die Markierungszone 4 am Beginn von jedem Testkanal dosiert. Nach dem Dosieren wird die Testvorrichtung getrocknet und in einer schützenden Plastikhülle verpackt.
10 μl einer Patientenprobe (Serum, Plasma Gesamtblut, usw.) werden auf den Probenaufbringpunkt 5 aufgebracht, wovon sie in die Kanäle 1 migrieren, korrespondierend zu jedem Krebsmarker und die Markierung von dem Markierungspunkt 4 lösen und weiter in die Testzonen 3. Unter der Voraussetzung, dass der analysierbare Krebsmarker in der Probe vorliegt, ergibt sich ein sichtbares Testergebnis in dem fraglichen Kanal.
BEISPIEL 10: TESTVORRICHTUNG FÜR EINEN NACHWEIS VON VIRUSANTIGEN
Beispiel 10 beschreibt die Anwendung der vorliegenden Erfindung in einer Testvorrichtung zum Nachweis von Virusantigen.
Um Rotavirus nachzuweisen wird die in 10 dargestellte Testvorrichtung, worin die Kanalisierung, wie in Beispiel 1 beschrieben, hergestellt wurde erzeugt, indem in den ersten Kanal 1 ein Blot, hergestellt aus einem spezifischen Antikörper, erzeugt gegen das Virusantigen, in die Testzone 3 platziert wird, wobei es sich um einen Antikörper gegen den verwendeten Markierungsantikörper des Markierungspunkts 4 handelt.
Der dritte Kanal 1 derselben Testvorrichtung wird verwendet, um ein Adenovirusantigen nachzuweisen, indem in diesen Kanal eine Linie oder ein Blot auf die Testzone 3 aufgebracht wird, umfassend einen spezifischen Antikörper gegen den fraglichen Markierungsantikörper, platziert in Markierungszone 4.
Der zweite Kanal der Testvorrichtung wird als Kontrollkanal verwendet, um die Funktionalität der Testvorrichtung zu testen. Ein nicht-spezifisches Konjugat wird dem Markierungspunkt zugefügt und der Anti-Maus-Antikörper wird der Testzone zugefügt.
Die reaktiven Punkte der Kanäle 1 werden blockiert und die Testvorrichtungen werden, wie in Beispiel 1 beschrieben, getrocknet. Für jeden Assay charakteristische Markierungen werden in den Markierungspunkt 4 des Verzweigungspunkts von jedem Testkanal dosiert. Sie werden wie oben beschrieben getrocknet.
Eine Patientenprobe (verdünnte Fäkalienprobe) wird auf den Probenaufbringpunkt 5 der Testvorrichtung aufgebracht, wovon sie zunächst in die Konjugatpunkte aufgrund einer Kapillarwirkung diffundiert und migriert, und mit den Teilchenmarkierungen in den fraglichen Markierungspunkten 4 reagiert und darauffolgend zu den Testzonen 3 weiter migriert, wo eine Reaktion stattfindet, wenn die Probe das analysierbare Virusantigen enthält. Die positiven Ergebnisse werden auf ähnlich Weise wie in den obigen Beispielen offenbart, nachgewiesen.
REFERENZEN, DIE IN DER BESCHREIBUNG ZITIERT WURDEN
Diese Referenzliste, die von der Anmelderin zitiert wurde, dient nur als Hilfe für den Leser. Sie bildet keinen Teil des europäischen Patentdokuments. Obwohl das EPA große Sorgfalt hat walten lassen bei der Zusammenstellung der Referenzen, können Fehler und Auslassungen nicht ausgeschlossen werden und das EPA ist hierfür nicht haftbar zu machen.
IN DER BESCHREIBUNG ZITIERTE PATENTDOKUMENTE

Claims

Eine auf Immundiffusion basierende Testvorrichtung, umfassend ein poröses Trägermaterial, worin ein spezifisches Bindungsreagens (Immunreagens) in Form einer Zone oder eines Blots aufgebracht wird, eine nachweisbare Markierung, woran ein zweites spezifisches Bindungsreagens gekoppelt wird und das getrennt zugeführt wird oder auf dem porösen Träger vorher aufgebracht wird, durch die Probe mobilisierbar ist, und eine Probenaufbringstelle, die optional mit einem Filter versehen ist, dadurch gekennzeichnet, dass sie in dem porösen Trägermaterial ein Netzwerk von Kanälen und Kennzeichen mit Informationen betreffend den Text umfasst, die durch Ätzen des porösen Trägermaterials mit Laserbehandlung gebildet werden, wobei das Netzwerk von Kanälen zwei oder mehr Kanäle (1) umfasst, getrennt durch einen behandelten Bereich (2), ein oder mehr spezifische Bindungsreagentien (3), die darin immobilisiert sind, eine optionale Markierungsstelle (4), platziert in dem Kanal nahe der Probenaufbringstelle (5) oder in der Probenaufbringstelle (5) selbst, die auf eine Weise platziert ist, dass eine gleichmäßige Verteilung der Probe in jeden Kanal ermöglicht wird.
Testvorrichtung gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass eine Diagnose ermöglicht wird, basierend auf einer simultan oder parallel durchgeführten Erkennung von einem oder mehr etliche Syndrome-erzeugenden Mitteln oder Analyten.
Testvorrichtung gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass sie verwendet wird, um simultan mehr als ein Allergie erzeugendes Mittel, Myoacard-Infarktmarker, Geschlechtskrankheiten erzeugende Mittel, Blutscreening-Analyten, respiratorische Infektionen erzeugende Mittel, andere Infektionserkrankungen erzeugende Mittel und/oder Krebsmarker zu erkennen.
Testvorrichtung gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass der poröse Träger Nitrocellulose ist.
Testvorrichtung gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass die spezifischen Bindungsreagentien Antikörper, Antikörperfragmente, rekombinante Antikörper, rekombinante Antikörperfragmente, Antigene, Lectine, Rezeptoren und/oder Liganden sind.
Testvorrichtung gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass die markierten Reagentien Latex, Gold, Metall oder Färbemittelpartikel oder fluoreszierende Substanzen sind.
Verfahren zur Erzeugung einer Testvorrichtung gemäß Anspruch 1, wobei das spezifische erkennende Immunreagens in einem porösen Material immobilisiert ist, wobei das poröse Material mit einer Substanz behandelt wird, die es inert macht, und wobei ein Probenaufbringpunkt optional mit einem Filter und einer nachweisbaren Markierung versehen ist, woran ein spezifisches Bindungsreagens gebunden ist, dadurch gekennzeichnet, dass (a) das poröse Material mit Laser geätzt ist, um simultan auf dem porösen Material (i) ein Kanalnetzwerk mit gewünschter Form und Größe zu bilden, wobei das Netzwerk zwei oder mehr Kanäle (1) und einen behandelten Bereich (2) umfasst, und (ii) Kennzeichen mit Informationen, die den Test betreffen, zu bilden; (b) ein oder mehr erkennende spezifische Bindungsreagentien in jedem Kanal (1) als Zone oder Blot (3) immobilisiert sind.
Verfahren gemäß Anspruch 7, dadurch gekennzeichnet, dass die Substanz, durch die das poröse Material inert gemacht wird, eine Mischung ist, umfassend natürliche oder synthetische Polymere wie z. B. Albumin und Casein oder PEG (Polyethylenglycol) und PVA (Polyvinylalkohol), nicht-ionische Detergentien wie z. B. Hexansulphonsäure und Triton-X-100, BRIJ und Konservierungsmittel wie z. B. Zucker, beispielsweise Saccharose und Trehalose oder ihre Derivate.
Verfahren gemäß Anspruch 7, dadurch gekennzeichnet, dass die Testvorrichtung nach Aufbringen der Reagentien auf eine relative Feuchtigkeit von nicht über 8% getrocknet und hermetisch verpackt wird.
Verwendung einer Testvorrichtung gemäß Anspruch 1 für das simultane oder parallele Durchführen etlicher Assays für eine Diagnose einer gesuchten Erkrankung und/oder eines Syndroms, dadurch gekennzeichnet, dass die Probe auf einen Aufbringpunkt (5) der Testvorrichtung aufgebracht wird, enthaltend eine Markierung, die durch die analysierbare Probe mobilisierbar ist, und ein zweites spezifisches Bindungsreagens daran gekoppelt ist, von welchem Punkt die Probe und die Reagentien gleichmäßig in die Kanäle des Kanalnetzwerks migrieren, das durch eine Laserbehandlung gebildet wird, wodurch sie entweder mit dem spezifischen Bindungsreagens an seinem Immobilisierungspunkt (3) reagieren oder nicht, von wo aus die positiven oder negativen Ergebnisse direkt ablesbar sind.
Verwendung einer Testvorrichtung gemäß Anspruch 1 für das simultane oder parallele Durchführen etlicher Assays zur Erkennung einer gesuchten Erkrankung und/oder eines Syndroms, dadurch gekennzeichnet, dass die Probe auf einen Aufbringpunkt (5) der Testvorrichtung aufgebracht wird, von wo sie in einen Kanal migriert, wo sie mit der Markierung vermischt wird und reagiert, die durch die Probe mobilisierbar ist, und das zweite spezifische Bindungsreagens daran gebunden ist, woraufhin die Probe und die Reagentien gleichmäßig in die Kanäle des Kanalnetzwerks migrieren, das durch eine Laserbehandlung gebildet wird, wo sie mit dem spezifischen Bindungsreagens an seinem Immobilisierungspunkt (3) entweder reagieren oder nicht, von wo aus die positiven oder negativen Ergebnisse direkt ablesbar sind.
Verwendung einer Testvorrichtung gemäß Anspruch 1 für das simultane oder parallele Durchführen etlicher Assays zur Erkennung einer gesuchten Erkrankung und/oder eines Syndroms, dadurch gekennzeichnet, dass die Probe mit einer getrennten Markierung und einem daran gebundenen zweiten spezifischen Bindungsreagens vermischt wird und dass die Mischung auf einen Aufbringpunkt (5) der Testvorrichtung aufgebracht wird, von wo aus die Probe und die Reagentien gleichmäßig in die Kanäle des Kanalnetzwerkes migrieren, das durch eine Laserbehandlung gebildet wird, wo sie mit dem spezifischen Bindungsreagens an seinem Immobilisierungspunkt (3) entweder reagieren oder nicht, von wo aus die positiven oder negativen Ergebnisse direkt ablesbar sind.