DE602004005238T2

DE602004005238T2 - Hydroxyalkylsubstituierte pyrido-7-pyrimidin-7-one

Info

Publication number: DE602004005238T2
Application number: DE602004005238T
Authority: DE
Inventors: David Michael San Jose GOLDSTEIN
Original assignee: F Hoffmann La Roche AG
Current assignee: F Hoffmann La Roche AG
Priority date: 2003-11-13
Filing date: 2004-11-04
Publication date: 2007-11-08
Anticipated expiration: 2024-11-05
Also published as: JP2007510686A; US20080119497A1; DK1685131T3; IL175284A0; EP1685131A1; AR046705A1; ATE356124T1; RU2006120486A; US20050107408A1; CO5690600A2; HK1099021A1; HRP20070132T3; US7348331B2; CN1882585A; PT1685131E; CA2544247A1; KR100816321B1; ES2281843T3; TWI349670B; NZ546634A

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft Pyridopyrimidine und Derivate davon. Insbesondere stellt die vorliegende Erfindung 2,6-disubstituierte 7-Oxopyrido[2,3-d]pyrimidine, ein Verfahren zu ihrer Herstellung, pharmazeutische Zubereitungen, welche diese umfassen, und die Verwendung derselben bereit.
Mitogen-aktivierte Proteinkinasen (MAP) sind eine Familie von Prolin-spezifischen Serin-/Threoninkinasen, welche ihre Substrate durch duale Phosphorylierung aktivieren. Diese Kinasen werden durch eine Vielzahl von Signalen, einschließlich ernährungsbedingtem und osmotischem Stress, UV-Licht, Wachstumsfaktoren, Endotoxin und Entzündungszytokinen, aktiviert. Eine Gruppe der MAP-Kinasen ist die p38-Kinase-Gruppe, die verschiedene Isoformen (z. B. p38α, p39β, p38γ und p38δ) einschließt. Die p38-Kinasen sind für die Phosphorylierung und Aktivierung von Transkriptionsfaktoren ebenso wie von anderen Kinasen verantwortlich und werden durch physikalischen und chemischen Stress, pro-Entzündungs-Zytokine und bakterielle Lipopolysaccharide aktiviert.
Noch wichtiger ist, dass gezeigt wurde, dass die Produkte der p38-Phosphorylierung die Produktion von Entzündungszytokinen, einschließlich TNF und IL-1 und Cyclooxygenase-2, vermitteln. Jedes dieser Zytokine ist mit zahlreichen Erkrankungszuständen und -bedingungen in Zusammenhang gebracht worden. Zum Beispiel ist TNF-α ein Zytokin, das primär von aktivierten Monozyten und Makrophagen produziert wird. Es wurde vermutet, dass seine übermäßige oder unkontrollierte Produktion eine kausale Rolle in der Pathogenese von rheumatoider Arthritis spielt. Kürzlich ist gezeigt worden, dass die Hemmung der TNF-Produktion eine breite Anwendung bei der Behandlung von Entzündung, Reizkolon, Multipler Sklerose und Asthma findet.
TNF wird auch mit viralen Infektionen wie unter anderem HIV, Influenzavirus und Herpesvirus, einschließlich Herpes-simplex-Virus-Typ-1 (HSV-1), Herpes-simplex-Virus-Typ-2 (HSV-2), Zytomegalievirus (CMV), Varicella-Zoster-Virus (VZV), Epstein-Barr-Virus, humanes Herpesvirus-6 (HHV-6), humanes Herpesvirus-7 (HHV-7), humanes Herpesvirus-8 (HHV-8), Pseudorabies und Rhinotracheitis in Zusammenhang gebracht.
Gleichermaßen wird IL-1 durch aktivierte Monozyten und Makrophagen produziert und spielt eine Rolle in vielen pathophysiologischen Reaktionen einschließlich Rheumatoider Arthritis, Fieber und Verringerung der Knochenresorption.
Zudem wird die Beteiligung von p38 mit Schlaganfall, Alzheimer-Krankheit, Osteoarthritis, Lungenverletzung, septischem Schock, Angiogenese, Dermatitis, Psoriasis und atopischer Dermatitis in Zusammenhang gebracht. J. Exp. Opin. Ther. Patents, 2000, 10 (1).
Die Hemmung dieser Zytokine durch Hemmung der p38-Kinase ist bei der Steuerung, Verringerung und Linderung vieler dieser Erkrankungszustände von Nutzen.
Bestimmte 6-Arylpyrido[2,3-d]pyrimidin-7-one, -7-imine und 7-thione sind als Inhibitoren der Proteintyrosinkinase-vermittelten Zellproliferation in WO 96/34867 offenbart. Andere 6-Arylpyrido[2,3-d]pyrimidine und Naphthyridine sind ebenfalls als Inhibitoren der Tyrosinkinase in WO 96/15128 offenbart. 6-Alkylpyrido[2,3-d]pyrimidin-7-one sind als Inhibitoren der cyclinabhängigen Kinasen in WO 98/33798 offenbart. Bestimmte 4-Aminopyridopyrimidine sind als Inhibitoren der Dihydrofolatreduktase in EP 0 278 686 A1 offenbart.
In einer Ausführungsform stellt die vorliegende Erfindung Verbindungen der Formel I bereit,
wobei
X¹ O, C=O oder S(O)_n ist, wobei n 0, 1 oder 2 ist;
Ar¹ Aryl oder Heteroaryl ist;
R¹ Alkoxyalkyl, Alkyl, Cycloalkyl, Cycloalkylalkyl, Heterocyclyl, Hydroxyalkyl oder Hydroxycycloalkyl ist; und
R² Hydroxyalkyl, Oxoalkyl oder Hydroxycycloalkyl ist.
Während bekannt ist, dass bestimmte substituierte Pyrido-7-pyrimidin-7-one in einem enzymatischen in vitro Test gegen p38 wirksam sind (siehe z. B. US-2003-0171584-A1, das hierin unter Bezugnahme in seiner Gesamtheit aufgenommen ist), haben die Erfinder überraschenderweise und unerwartet entdeckt, dass Verbindungen der Formel I eine signifikant höhere Wirksamkeit in einem Test der durch Lipopolysaccharid (LPS) induzierten Produktion von Cystein in humanem Vollblut aufweisen als Verbindungen, die kürzlich offenbart worden sind.
Die Verbindungen der Formel I sind Inhibitoren der Proteinkinasen und zeigen eine wirksame Aktivität gegen p38 in vivo. Sie sind in Bezug auf die cyclinabhängigen Kinasen und Tyrosinkinasen gegenüber der p38-Kinase selektiv. Deshalb können die Verbindungen der vorliegenden Erfindung zur Behandlung von Erkrankungen verwendet werden, die durch die pro-Entzündungs-Zytokine wie TNF und IL-1 vermittelt werden. So stellt die vorliegende Erfindung in einer anderen Ausführungsform eine Verwendung einer Verbindung der Formel I zur Herstellung eines Medikaments zur Behandlung von p38-vermittelten Erkrankungen bereit.
Wenn nicht anders angegeben, weisen die folgenden Begriffe, die in der Beschreibung und den Ansprüchen verwendet werden, die nachstehend gegebenen Bedeutungen auf:
"Alkoxyalkyl" bedeutet eine Einheit der Formel R^a-O-R^b-, wobei R^a Alkyl ist und R^b Allcylen ist, wie hierin definiert. Beispielhafte Alkoxyalkylreste schließen beispielsweise 2-Methoxyethyl, 3-Methoxypropyl, 1-Methyl-2-methoxyethyl, 1-(2-Methoxyethyl)-3-methoxypropyl und 1-(2-Methoxyethyl)-3-methoxypropyl ein.
"Alkyl" bedeutet einen linearen gesättigten einwertigen Kohlenwasserstoffrest von einem bis sechs Kohlenstoffatomen oder einen verzweigten gesättigten einwertigen Kohlenwasserstoffrest von drei bis sechs Kohlenstoffatomen, z. B. Methyl, Ethyl, Propyl, 2-Propyl, n-Butyl, iso-Butyl, tert-Butyl, Pentyl und dergleichen.
"Alkylen" bedeutet einen linearen gesättigten zweiwertigen Kohlenwasserstoffrest von einem bis sechs Kohlenstoffatomen oder einen verzweigten gesättigten zweiwertigen Kohlenwasserstoffrest von drei bis sechs Kohlenstoffatomen, z. B. Methylen, Ethylen, 2,2-Dimethylethylen, Propylen, 2-Methylpropylen, Butylen, Pentylen und dergleichen.
"Aryl" bedeutet einen einwertigen monocyclischen oder bicyclischen aromatischen Kohlenwasserstoffrest, der gegebenenfalls unabhängig mit einem oder mehreren Substituenten, bevorzugt einem, zwei oder drei Substituenten, bevorzugt ausgewählt aus Alkyl, Hydroxy, Alkoxy, Halogenalkyl, Halogenalkoxy, Halogen, Nitro, Cyano, Amino, Monoalkylamino, Dialkylamino, Methylendioxy, Ethylendioxy und Acyl, substituiert ist. Ein besonders bevorzugter Arylsubstituent ist Halogenid. Stärker spezifisch schließt der Begriff Aryl Phenyl, Chlorphenyl, Fluorphenyl, Difluorphenyl (wie 2,4- und 2,6-Difluorphenyl), Methoxyphenyl, 1-Naphthyl, 2-Naphthyl und die Derivate davon ein, ist jedoch nicht auf diese beschränkt.
"Cycloalkyl" bezieht sich auf einen gesättigten einwertigen cyclischen Kohlenwasserstoffrest von drei bis sieben Kohlenstoffringatomen, z. B. Cyclopropyl, Cyclobutyl, Cyclohexyl, 4-Methylcyclohexyl und dergleichen. Cycloalkyl kann gegebenenfalls mit einem oder mehreren Substituenten, bevorzugt einem, zwei oder drei Substituenten, substituiert sein. Bevorzugt ist der Cycloalkylsubstituent ausgewählt aus Alkyl, Hydroxy, Alkoxy, Halogenalkyl, Halogenalkoxy, Halogen, Amino, Monoalkylamino, Dialkylamino und Acyl. Eine besonders bevorzugte Gruppe von Cycloalkylsubstituenten schließt Alkyl, Hydroxy, Alkoxy, Halogenalkyl, Halogenalkoxy und Halogen ein. Eine besonders bevorzugte Gruppe von Cycloalkylsubstituenten schließt Alkyl, Hydroxy, Alkoxy und Halogen ein.
"Cycloalkylalkyl" bezieht sich auf eine Einheit der Formel R^c-R^d-, wobei R^c Cycloalkyl ist und R^d Alkylen ist wie hierin definiert.
"Halogen" und "Halogenid" werden hierin synonym verwendet und beziehen sich auf Fluor, Chlor, Brom oder Iod. Bevorzugte Halogenide sind Fluor und Chlor, wobei Fluor ein besonders bevorzugtes Halogenid ist.
"Halogenalkyl" bedeutet Alkyl, substituiert mit einem oder mehreren gleichen oder verschiedenen Halogenatomen, z. B. -CH₂Cl, -CF₃, -CH₂CF₃, -CH₂CCl₃ und dergleichen.
"Heteroaryl" bedeutet einen einwertigen monocyclischen oder bicyclischen Rest von 5 bis 12 Ringatomen mit mindestens einem aromatischen Ring, der ein, zwei oder drei Heteroringatome enthält, ausgewählt aus N, O oder S (bevorzugt N oder O), wobei die restlichen Ringatome C sind, unter der Voraussetzung, dass der Befestigungspunkt des Heteroarylrests an einem aromatischen Ring liegt. Der Heteroarylring wird gegebenenfalls unabhängig mit einem oder mehreren Substituenten substituiert, bevorzugt einem oder zwei Substituenten, ausgewählt aus Alkyl, Halogenalkyl, Hydroxy, Alkoxy, Halogen, Nitro oder Cyano. Stärker spezifisch schließt der Begriff Heteroaryl Pyridyl, Furanyl, Thienyl, Thiazolyl, Isothiazolyl, Triazolyl, Imidazolyl, Isoxazolyl, Pyrrolyl, Pyrazolyl, Pyrimidinyl, Benzofuranyl, Tetrahydrobenzofuranyl, Isobenzofuranyl, Benzothiazolyl, Benzoisothiazolyl, Benzotriazolyl, Indolyl, Isoindolyl, Benzoxazolyl, Chinolyl, Tetrahydrochinolinyl, Isochinolyl, Benzimidazolyl, Benzisoxazolyl oder Benzothienyl, Imidazo[1,2-a]pyridinyl, Imidazo[2,1-b]thiazolyl und die Derivate davon ein, ist jedoch nicht auf diese beschränkt.
"Heterocyclyl" bedeutet einen gesättigten oder ungesättigten nicht aromatischen cyclischen Rest von 3 bis 8 Ringatomen, in dem ein oder zwei Ringatome Heteroatome sind, ausgewählt aus N, O oder S(O)_n (wobei n eine ganze Zahl von 0 bis 2 ist), bevorzugt N oder O, wobei die restlichen Ringatome C sind, wobei ein oder zwei C-Atome gegebenenfalls durch eine Carbonylgruppe ersetzt sein können. Der Heterocyclylring kann gegebenenfalls unabhängig mit einem, zwei oder drei Substituenten substituiert sein, ausgewählt aus Alkyl, Halogenalkyl, Hydroxyalkyl, Halogen, Nitro, Cyano, Cyanoalkyl, Hydroxy, Alkoxy, Amino, Monoalkylamino, Dialkylamino, Aralkyl, -(X)_n-C(O)R^e (wobei X O oder NR^f ist, n 0 oder 1 ist, R^e Wasserstoff (wobei X NR^f ist), Alkyl, Halogenalkyl, Hydroxy (wenn n 0 ist), Alkoxy, Amino, Monoalkylamino, Dialkylamino oder gegebenenfalls substituiertes Phenyl ist, und R^f H oder Alkyl ist), -Alkylen-C(O)R^g (wobei R^g Alkyl, -OR^h oder NRⁱR^j ist und R^h Wasserstoff, Alkyl oder Halogenalkyl ist, und Rⁱ und R^j unabhängig voneinander Wasserstoff oder Alkyl sind) oder -S(O)_nR^k (wobei n eine ganze Zahl von 0 bis 2 ist), derart, dass, wenn n 0 ist, R^k Wasserstoff, Alkyl, Cycloalkyl oder Cycloalkylalkyl ist, und wenn n 1 oder 2 ist, R^k Alkyl, Cycloalkyl, Cycloalkylalkyl, Amino, Acylamino. Monoalkylamino oder Dialkylamino ist. Eine besonders bevorzugte Gruppe von Heterocyclylsubstituenten schließt Alkyl, Halogenalkyl, Hydroxyalkyl, Halogen, Hydroxy, Alkoxy, Amino, Monoalkylamino, Dialkylamino, Aralkyl und -S(O)_nR^k ein. Insbesondere schließt der Begriff Heterocyclyl Tetrahydrofuranyl, Pyridinyl, Tetrahydropyranyl, Piperidino, N-Methylpiperidin-3-yl, Piperazino, N-Methylpyrrolidin-3-yl, 3-Pyrrolidino, Morpholino, Thiomorpholino, Thiomorpholino-1-oxid, Thiomorpholino-1,1-dioxid, 4-(1,1-Dioxotetrahydro-2H-thiopyranyl), Pyrrolinyl, Imidazolinyl, N-Methansulfonylpiperidin-4-yl und die Derivate davon, von denen jedes gegebenenfalls substituiert sein kann, ein.
"Hydroxyalkyl" bedeutet eine Alkyleinheit wie hierin definiert, die mit einer oder mehreren, bevorzugt einer, zwei oder drei Hydroxygruppen substituiert ist, mit der Maßgabe, dass dasselbe Kohlenstoffatom nicht mehr als eine Hydroxygruppe trägt. Repräsentative Beispiele schließen Hydroxymethyl, 2-Hydroxyethyl, 2-Hydroxypropyl, 3-Hydroxypropyl, 1-(Hydroxymethyl)-2-methylpropyl, 2-Hydroxybutyl, 3-Hydroxybutyl, 4-Hydroxybutyl, 2,3-Dihydroxypropyl, 2-Hydroxy-1-hydroxymethylethyl, 2,3-Dihydroxybutyl, 3,4-Dihydroxybutyl und 2-(Hydroxymethyl)-3-hydroxypropyl ein, sind jedoch nicht auf diese beschränkt.
"Hydroxycycloalkyl" bedeutet eine Cycloalkyleinheit wie hierin definiert, wobei ein, zwei oder drei Wasserstoffatome in dem Cycloalkylrest durch einen Hydroxysubstituenten ersetzt worden sind. Repräsentative Beispiele schließen 2-, 3- oder 4-Hydroxycyclohexyl und dergleichen ein, sind jedoch nicht auf diese beschränkt.
"Abgangsgruppe" weist die Bedeutung auf, die üblicherweise mit ihr in der synthetischen organischen Chemie verbunden wird, d. h. ein Atom oder ein Rest, der fähig ist, durch ein Nukleophil ersetzt zu werden, und schließt Halogen (wie Chlor, Brom und Iod), Alkansulfonyloxy, Arensulfonyloxy, Alkylcarbonyloxy (z. B. Acetoxy), Arylcarbonyloxy, Mesyloxy, Tosyloxy, Trifluormethansulfonyloxy, Aryloxy (z. B. 2,4-Dinitrophenoxy), Methoxy, N,O-Dimethylhydroxylamino und dergleichen ein.
"Gegebenenfalls substituiertes Phenyl" bedeutet einen Phenylring, der gegebenenfalls unabhängig mit einem oder mehreren Substituenten substituiert ist, bevorzugt einem oder zwei Substituenten, ausgewählt aus Alkyl, Hydroxy, Alkoxy, Halogenalkyl, Halogenalkoxy, Halogen, Nitro, Cyano, Amino, Methylendioxy, Ethylendioxy und Acyl.
"Oxoalkyl" bedeutet einen Alkylrest, der mit einer oder mehr Carbonylsauerstoffeinheiten (d.h. =O) substituiert ist, wie eine Einheit der Formel R²-C(=O)-R^y-, wobei R^y Alkylen ist und R^z Alkyl ist. Beispielhafte Oxoalkylreste schließen 2-Propanon-3-yl, 2-Methyl-3-butanon-4-yl und dergleichen ein.
"Pharmazeutisch verträglicher Exzipient" bedeutet einen Exzipienten, der beim Herstellen eines Arzneimittels nützlich ist, im Allgemeinen sicher, nicht toxisch und weder biologisch noch auf andere Weise unerwünscht ist, und schließt einen Exzipienten ein, der sowohl für die veterinäre Anwendung als auch für die humanpharmazeutische Anwendung verträglich ist. Ein "pharmazeutisch verträglicher Exzipient" wie in der Beschreibung und den Ansprüchen verwendet schließt sowohl einen als auch mehr als einen derartigen Exzipienten ein.
"Pharmazeutisch verträgliches Salz" einer Verbindung bedeutet ein Salz, das pharmazeutisch verträglich ist und das die gewünschte pharmakologische Wirksamkeit der Stammverbindung besitzt. Derartige Salze schließen ein: (1) Säureadditionssalze, welche mit anorganischen Säuren wie Salzsäure, Bromwasserstoffsäure, Schwefelsäure, Salpetersäure, Phosphorsäure und dergleichen gebildet werden; oder welche mit organischen Säuren wie Essigsäure, Propionsäure, Hexansäure, Cyclopentanpropionsäure, Glykolsäure, Brenztraubensäure, Milchsäure, Malonsäure, Bernsteinsäure, Äpfelsäure, Maleinsäure, Fumarsäure, Weinsäure, Citronensäure, Benzoesäure, 3-(4-Hydroxybenzoyl)benzoesäure, Zimtsäure, Mandelsäure, Methansulfonsäure, Ethansulfonsäure, 1,2-Ethandisulfonsäure, 2-Hydroxyethansulfonsäure, Benzolsulfonsäure, 4-Chlorbenzolsulfonsäure, 2-Naphthalensulfonsäure, 4-Toluolsulfonsäure, Camphersulfonsäure, 4-Methylbicyclo[2.2.2]oct-2-en-1-carbonsäure, Glucoheptonsäure, 3-Phenylpropionsäure, Trimethylessigsäure, tert.-Butylessigsäure, Laurylschwefelsäure, Gluconsäure, Glutaminsäure, Hydroxynaphtoesäure, Salicylsäure, Stearinsäure, Muconsäure und dergleichen gebildet werden; oder (2) Salze, die gebildet werden, wenn ein in der Stammverbindung vorhandenes saures Proton entweder durch ein Metallion, z. B. ein Alkalimetallion, ein Erdalkalimetallion oder ein Aluminiumion ersetzt wird; oder mit einer organischen Base wie Ethanolamin, Diethanolamin, Triethanolamin, Thromethamin, N-Methylglucamin und dergleichen koordinativ gebunden ist.
Die Begriffe "Pro-Drug" und "Prodrug" werden hierin austauschbar verwendet und beziehen sich auf jede Verbindung, welche eine wirksame Stammverbindung gemäß der Formel I in vivo freisetzt, wenn ein derartiges Prodrug an einen Säuger verabreicht wird. Prodrugs einer Verbindung der Formel I werden durch Modifizieren einer oder mehrerer funktioneller Gruppen, die in der Verbindung der Formel I vorhanden sind, auf eine solche Weise hergestellt, dass die Modifikation(en) in vivo abgespalten werden können, um die Stammverbindung freizusetzen. Prodrugs schließen Verbindungen der Formel I ein, wobei eine Hydroxy-, Amino-, Sulfhydryl-, Carboxy- oder Carbonylgruppe in einer Verbindung der Formel I an eine Gruppe gebunden ist, die in vivo abgespalten werden kann, um die freie Hydroxyl-, Amino- beziehungsweise Sulfhydrylgruppe wieder herzustellen. Beispiele für Prodrugs schließen Ester (z. B. Acetat, Dialkylaminoacetate, Formiate, Phosphate, Sulfate und Benzoatderivate) und Carbamate (z. B. N,N-Dimethylaminocarbonyl) von funktionellen Hydroxygruppen, Estergruppen (z. B. Ethylester, Morpholinoethanolester) von funktionellen Carboxygruppen, N-Acylderivate (z. B. N-Acetyl), N-Mannich-Basen, Schiff-Basen und Enaminone von funktionellen Aminogruppen, Oxime, Acetale, Ketale und Enolester von funktionellen Keton- und Aldehydgruppen in Verbindungen der Formel I und dergleichen ein, sind jedoch nicht auf diese beschränkt, siehe Bundegaard, "Design of Prodrugs", S. 1-92, Elsevier, New York-Oxford (1985).
"Schutzgruppe" bezieht sich auf eine Atomgruppierung, die, wenn sie an eine reaktive Gruppe in einem Molekül gebunden ist, deren Reaktionsfähigkeit maskiert, verringert oder verhindert. Beispiele für Schutzgruppen können in Green und Wuts, Protective Groups in Organic Chemistry, (Wiley, 2. Auflage 1991) und Harrison und Harrison et al., Compendium of Synthetic Organic Methods, Bde. 1-8 (John Wiley and Sons, 1971-1996) gefunden werden. Repräsentative Aminoschutzgruppen schließen Formyl, Acetyl, Trifluoracetyl, Benzyl, Benzyloxycarbonyl (CBZ), tert-Butoxycarbonyl (Boc), Trimethylsilyl (TMS), 2-Trimethylsilylethansulfonyl (SES), Trityl und substituierte Tritylgruppen, Allyloxycarbonyl, 9-Fluorenylmethyloxycarbonyl (FMOC), Nitroveratryloxycarbonyl (NVOC) und dergleichen ein. Repräsentative Hydroxyschutzgruppen schließen solche ein, wobei die Hydroxygruppe entweder acyliert oder alkyliert ist wie Benzyl- und Tritylether ebenso wie Alkylether, Tetrahydropyranylether, Trialkylsilylether und Allylether.
"Behandeln" oder "Behandlung" einer Erkrankung schließen ein: (1) der Erkrankung vorbeugen, d. h. Verursachen, dass sich die klinischen Symptome der Erkrankung bei einem Säuger, der einer Erkrankung ausgesetzt oder für diese prädisponiert sein kann, der jedoch noch keine Symptome der Erkrankung erfährt oder zeigt, nicht entwickeln; (2) Hemmen der Erkrankung, d. h. die Entwicklung der Erkrankung oder ihrer klinischen Symptome anhalten oder verringern; oder (3) Lindern der Erkrankung, d. h. die Regression der Erkrankung oder ihrer klinischen Symptome verursachen.
"Eine therapeutisch wirksame Menge" bedeutet die Menge einer Verbindung, die, wenn sie einem Säuger zur Behandlung einer Erkrankung verabreicht wird, ausreichend ist, um eine derartige Behandlung für die Erkrankung zu bewirken. Die "therapeutisch wirksame Menge" wird von der Verbindung, der Erkrankung und ihrer Schwere und dem Alter, Gewicht etc. des zu behandelnden Säugers abhängen.
Der Begriff "Behandeln", "In-Kontakt-Bringen" oder "Umsetzen" bedeutet, bezogen auf eine chemische Umsetzung, zwei oder mehr Reagenzien unter entsprechenden Bedingungen zuzugeben oder zu mischen, um das angezeigte und/oder gewünschte Produkt herzustellen. Es sollte selbstverständlich sein, dass die Umsetzung, welche das angezeigte und/oder erwünschte Produkt herstellt, nicht notwendigerweise direkt aus der Vereinigung von zwei Reagenzien herrührt, welche anfänglich zugegeben wurden, d. h. es kann ein oder mehrere Zwischenprodukte geben, welche in dem Gemisch erzeugt werden, das schließlich zur Bildung des angezeigten und/oder erwünschten Produkts führt.
Die Verbindungen der vorliegenden Erfindung können in nicht solvatisierten Formen ebenso wie in solvatisierten Formen, einschließlich hydratisierten Formen, vorkommen. Im Allgemeinen sind die solvatisierten Formen einschließlich der hydratisierten Formen den nicht solvatisierten Formen äquivalent und sollen vom Umfang der vorliegenden Erfindung umfasst werden. Zusätzlich zu den vorstehend beschriebenen Verbindungen schließen die Verbindungen der vorliegenden Erfindung alle tautomeren Formen ein. Darüber hinaus schließt die vorliegende Erfindung alle pharmazeutisch verträglichen Salze dieser Verbindungen zusammen mit den Prodrug-Formen der Verbindungen und allen Stereoisomeren ein, entweder in einer reinen chiralen Form oder als racemisches Gemisch oder in einer anderen Form eines Gemischs.
Die Verbindungen der Formel I sind ferner fähig, pharmazeutisch verträgliche Säureadditionssalze zu bilden. Alle diese Formen liegen innerhalb des Umfangs der vorliegenden Erfindung.
Pharmazeutisch verträgliche Säureadditionssalze der Verbindungen der Formel I schließen Salze ein, die von anorganischen Säuren wie Salzsäure, Salpetersäure, Phosphorsäure, Schwefelsäure, Bromwasserstoffsäure, Iodwasserstoffsäure, Phosphorigsäure und dergleichen abgeleitet sind, ebenso wie die Salze, die von organischen Säuren wie aliphatischen Mono- und Dicarbonsäuren, Phenyl-substituierten Alkansäuren, Hydroxyalkansäuren, Alkandisäuren, aromatischen Säuren, aliphatischen und aromatischen Sulfonsäuren etc. abgeleitet sind. Derartige Salze schließen deshalb Sulfat, Pyrosulfat, Bisulfat, Sulfat, Bisulfit, Nitrat, Phosphat, Monohydrogenphosphat, Dihydrogenphosphat, Metaphosphat, Pyrophosphat, Chlorid, Bromid, Iodid, Acetat, Propionat, Caprylat, Isobutyrat, Oxalat, Malonat, Succinat, Suberat, Sebacat, Fumarat, Maleat, Mandelat, Benzoat, Chlorbenzoat, Methylbenzoat, Dinitrobenzoat, Phthalat, Benzolsulfonat, Toluolsulfonat, Phenylacetat, Citrat, Lactat, Maleat, Tartrat, Methansulfonat und dergleichen ein. Ebenfalls in Betracht gezogen werden Salze von Aminosäuren wie Arginat und dergleichen und Gluconat, Galacturonat (siehe z. B. Berge et al., J. of Pharmaceutical Science 66: 1-19 (1977).
Die Säureadditionssalze der basischen Verbindungen können durch In-Kontakt-Bringen der freien Basenform mit einer ausreichenden Menge der gewünschten Säure hergestellt werden, um das Salz auf die übliche Weise herzustellen. Die freie Basenform kann durch In-Kontakt-Bringen des Salzes mit einer Base und Isolieren der freien Base auf übliche Weise wieder hergestellt werden. Die freien Basenformen unterscheiden sich etwas von ihren jeweiligen Salzformen in bestimmten physikalischen Eigenschaften wie Löslichkeit in polaren Lösungsmitteln, andererseits jedoch sind die Salze zu ihrer jeweiligen freien Base für die Zwecke der vorliegenden Erfindung äquivalent.
In einer Ausführungsform ist Ar¹ Aryl. Ein besonders bevorzugtes Ar¹ ist gegebenenfalls substituiertes Phenyl. In bestimmten Ausführungsformen ist Ar¹ Phenyl, gegebenenfalls einmal oder mehrmals substituiert mit Alkyl, Halogen, Halogenalklyl oder Alkoxy. Ein stärker bevorzugtes Ar¹ ist disubstituiertes Phenyl wie 2,4-disubstituiertes Phenyl. Noch stärker bevorzugt ist Ar¹ 2,4-dihalogensubstituiertes Phenyl. Ein besonders bevorzugtes Ar¹ ist 2,4-Difluorphenyl.
In noch einer anderen Ausführungsform ist X¹ O.
In einer anderen Ausführungsform ist R¹ Alkoxyalkyl, Alkyl, Cycloalkyl, Cycloalkylalkyl, Hydroxyalkyl oder Heterocyclyl. Innerhalb dieser Gruppe schließt ein besonders bevorzugtes R¹ gegebenenfalls substituiertes Tetrahydropyranyl, 1-Methyl-2-methoxyethyl, gegebenenfalls substituiertes Cyclopentyl, gegebenenfalls substituiertes Cyclopropyl, Isopropyl, gegebenenfalls substituiertes Cyclohexyl, 1-(2-Hydroxyethyl)-3-hydroxypropyl, 1-Hydroxymethyl-2-hydroxypropyl, 1-Hydroxymethyl-3-hydroxypropyl, 1-Methylpropyl, 2-Hydroxy-1-methylethyl, 1-(2-Methoxyethyl)-3-methoxypropyl, N-Methansulfonylpiperidinyl, Ethyl, Methyl, 2-Hydroxypropyl, Neopentyl, 1,1-Dimethyl-2-hydroxyethyl, 1-(Hydroxymethyl)propyl, 2-Methylpropyl, Cyclopropylmethyl, gegebenenfalls substituiertes Cyclobutyl, 1,2-Dimethyl-2-hydroxypropyl und 1-(Hydroxymethyl)-2-hydroxyethyl ein.
In noch einer anderen Ausführungsform ist ein bevorzugtes R¹ Hydroxylalkyl, wobei 2-Hydroxy-1-methylethyl ein besonders bevorzugtes R¹ ist. Besonders bevorzugt schließt R¹ enantiomer angereichertes 2-Hydroxy-1-methylethyl, d. h. (R)- und (S)-2-Hydroxy-1-methylethyl ein.
In einer bestimmten Ausführungsform ist R² 2-Hydroxyethyl, 3-Hydroxypropyl, 2-Hydroxypropyl, 1-(2-Hydroxyethyl)-3-hydroxypropyl oder 2-Oxopropyl.
In einer anderen Ausführungsform ist R² Hydroxyalkyl. Innerhalb dieser Gruppe ist ein besonders bevorzugtes R² 2-Hydroxyethyl, 3-Hydroxypropyl, 2-Hydroxypropyl und 1-(2-Hydroxyethyl)-3-hydroxypropyl. Ein besonders bevorzugtes R² ist 2-Hydroxypropyl. In einer anderen Ausführungsform ist R² Oxoalkyl.
Ferner bilden Kombinationen der hierin beschriebenen bevorzugten Gruppen andere bevorzugte Ausführungsformen. Zum Beispiel ist R¹ in einer besonders bevorzugten Ausführungsform (R)- oder (S)-2-Hydroxy-1-methylethyl, R² ist (R)- oder (S)-2-Hydroxypropyl oder 2-Oxopropyl, X¹ ist O und Ar¹ ist 2,4-Difluorphenyl.
In einer Ausführungsform stellt die vorliegende Erfindung eine Verbindung der Formel I bereit, wobei Ar¹ Aryl ist und X¹ O ist. In einer anderen Ausführungsform stellt die vorliegende Erfindung eine Verbindung der Formel I bereit, wobei Ar¹ Aryl ist, X¹ O ist und R¹ Alkoxyalkyl, Alkyl, Cycloalkyl, Cycloalkylalkyl, Hydroxyalkyl oder Heterocyclyl ist. In noch einer anderen Ausführungsform stellt die vorliegende Erfindung eine Verbindung der Formel I bereit, wobei Ar¹ Aryl ist, X¹ O ist und R¹ Tetrahydropyranyl, 1-Methyl-2-methoxyethyl, Cyclopentyl, Cyclopropyl, Isopropyl, Cyclohexyl, 1-(2-Hydroxyethyl)-3-hydroxypropyl, 1-Hydroxymethyl-2-hydroxypropyl, 1-Hydroxymethyl-3-hydroxypropyl, 1-Methylpropyl, 2-Hydroxy-1-methylethyl, 1-(2-Methoxyethyl)-3-methoxypropyl, N-Methansulfonylpiperidinyl, Ethyl, Methyl, 2-Hydroxypropyl, Neopentyl, 1,1-Dimethyl-2-hydroxyethyl, 1-(Hydroxymethyl)propyl, 2-Methylpropyl, Cyclopropylmethyl, Cyclobutyl, 1,2-Dimethyl-2-hydroxypropyl oder 1-(Hydroxymethyl)-2-hydroxyethyl ist. In noch einer anderen Ausführungsform stellt die vorliegende Erfindung eine Verbindung der Formel I bereit, wobei Ar¹ Aryl ist, X¹ O ist, R¹ Tetrahydropyranyl, 1-Methyl-2-methoxyethyl, Cyclopentyl, Cyclopropyl, Isopropyl, Cyclohexyl, 1-(2-Hydroxyethyl)-3-hydroxypropyl, 1-Hydroxymethyl-2-hydroxypropyl, 1-Hydroxymethyl-3-hydroxypropyl, 1-Methylpropyl, 2-Hydroxy-1-methylethyl, 1-(2-Methoxyethyl)-3-methoxypropyl, N-Methansulfonylpiperidinyl, Ethyl, Methyl, 2-Hydroxypropyl, Neopentyl, 1,1-Dimethyl-2-hydroxyethyl, 1-(Hydroxymethyl)propyl, 2-Methylpropyl, Cyclopropylmethyl, Cyclobutyl, 1,2-Dimethyl-2-hydroxypropyl oder 1-(Hydroxymethyl)-2-hydroxyethyl ist und R² 2-Hydroxyethyl, 3-Hydroxypropyl, 2-Hydroxypropyl, 1-(2-Hydroxyethyl)-3-hydroxypropyl oder 2-Oxopropyl ist.
In einer Ausführungsform stellt die vorliegende Erfindung eine Verbindung der Formel I bereit, wobei Ar¹ Aryl ist, X¹ O ist, R¹ (R)-2-Hydroxy-1-methylethyl oder (S)-2-Hydroxy-1-methylethyl ist und R² 2-Oxopropyl, (R)-2-Hydroxypropyl oder (S)-2-Hydroxypropyl ist.
In einer Ausführungsform stellt die vorliegende Erfindung eine Verbindung der Formel I bereit, wobei Ar¹ Aryl ist, X¹ O ist und R¹ Hydroxyalkyl ist. In einer anderen Ausführungsform stellt die vorliegende Erfindung eine Verbindung der Formel I bereit, wobei Ar¹ Aryl ist, X¹ O ist, und R¹ Hydroxyalkyl ist. In noch einer anderen Ausführungsform stellt die vorliegende Erfindung eine Verbindung der Formel I bereit, wobei Ar¹ Aryl ist, X¹ O ist, R¹ Hydroxyalkyl ist und R² 2-Hydroxyethyl, 3-Hydroxypropyl, 2-Hydroxypropyl oder 1-(2-Hydroxyethyl)-3-hydroxypropyl ist.
In einer anderen Ausführungsform stellt die vorliegende Erfindung eine Verbindung der Formel I bereit, wobei Ar¹ Aryl ist, X¹ O ist,
R¹ (R)-2-Hydroxy-1-methylethyl ist und R² (R)-2-Hydroxypropyl ist;
R¹ (R)-2-Hydroxy-1-methylethyl ist und R² (S)-2-Hydroxypropyl ist;
R¹ (S)-2-Hydroxy-1-methylethyl ist und R² (R)-2-Hydroxypropyl ist; oder
R¹ (S)-2-Hydroxy-1-methylethyl ist und R² (S)-2-Hydroxypropyl ist.
In einer Ausführungsform stellt die vorliegende Erfindung eine Verbindung der Formel I bereit, wobei R¹ Hydroxyalkyl ist. In einer anderen Ausführungsform stellt die vorliegende Erfindung eine Verbindung der Formel I bereit, wobei R¹ Hydroxyalkyl ist und R² Hydroxyalkyl ist. In noch einer anderen Ausführungsform stellt die vorliegende Erfindung eine Verbindung der Formel I bereit, wobei R¹ Hydroxyalkyl ist, R² Hydroxyalkyl ist und Ar¹ Aryl ist.
In einer Ausführungsform stellt die vorliegende Erfindung eine Verbindung der Formel I bereit, wobei R² Hydroxyalkyl ist.
In bestimmten Ausführungsformen können die Verbindungen der Erfindung eine der Formel
sein, wobei
m von 0 bis 4 ist;
jedes R³ Alkyl, Halogen, Alkoxy oder Halogenalkyl ist; und
R¹ und R² die vorstehende Bedeutung aufweisen.
In bestimmten Ausführungsformen ist m 1 und R³ ist Halogen.
In noch anderen Ausführungsformen ist m 2 und R³ ist Halogen.
In einer Ausführungsform stellt die vorliegende Erfindung eine Verbindung der Formel II bereit, wobei R¹ Alkoxyalkyl, Alkyl, Cycloalkyl, Cycloalkylalkyl, Hydroxyalkyl oder Heterocyclyl ist.
In einer Ausführungsform stellt die vorliegende Erfindung eine Verbindung der Formel II bereit, wobei R¹ Tetrahydropyranyl, 1-Methyl-2-methoxyethyl, Cyclopentyl, Cyclopropyl, Isopropyl, Cyclohexyl, 1-(2-Hydroxyethyl)-3-hydroxypropyl, 1-Hydroxymethyl-2-hydroxypropyl, 1-Hydroxymethyl-3-hydroxypropyl, 1-Methylpropyl, 2-Hydroxy-1-methylethyl, 1-(2-Methoxyethyl)-3-methoxypropyl, N-Methansulfonylpiperidinyl, Ethyl, Methyl, 2-Hydroxypropyl, Neopentyl, 1,1-Dimethyl-2-hydroxyethyl, 1-(Hydroxymethyl)propyl, 2-Methylpropyl, Cyclopropylmethyl, Cyclobutyl, 1,2-Dimethyl-2-hydroxypropyl oder 1-(Hydroxymethyl)-2-hydroxyethyl ist. In einer anderen Ausführungsform stellt die vorliegende Erfindung eine Verbindung der Formel II bereit, wobei R¹ Tetrahydropyranyl, 1-Methyl-2-methoxyethyl, Cyclopentyl, Cyclopropyl, Isopropyl, Cyclohexyl, 1-(2-Hydroxyethyl)-3-hydroxypropyl, 1-Hydroxymethyl-2-hydroxypropyl, 1-Hydroxymethyl-3-hydroxypropyl, 1-Methylpropyl, 2-Hydroxy-1-methylethyl, 1-(2-Methoxyethyl)-3-methoxypropyl, N-Methansulfonylpiperidinyl, Ethyl, Methyl, 2-Hydroxypropyl, Neopentyl, 1,1-Dimethyl-2-hydroxyethyl, 1-(Hydroxymethyl)propyl, 2-Methylpropyl, Cyclopropylmethyl, Cyclobutyl, 1,2-Dimethyl-2-hydroxypropyl oder 1-(Hydroxymethyl)-2-hydroxyethyl ist und R² 2-Hydroxyethyl, 3-Hydroxypropyl, 2-Hydroxypropyl, 1-(2-Hydroxyethyl)-3-hydroxypropyl oder 2-Oxopropyl ist.
In einer Ausführungsform stellt die vorliegende Erfindung eine Verbindung der Formel II bereit, wobei R¹ (R)-2-Hydroxy-1-methylethyl oder (S)-2-Hydroxy-1-methylethyl ist und R² 2-Oxopropyl, (R)-2-Hydroxypropyl oder (S)-2-Hydroxypropyl ist.
In einer Ausführungsform stellt die vorliegende Erfindung eine Verbindung der Formel II bereit, wobei R¹ und R² Hydroxyalkyl sind.
In einer Ausführungsform stellt die vorliegende Erfindung eine Verbindung der Formel II bereit, wobei
R¹ (R)-2-Hydroxy-1-methylethyl ist und R² (R)-2-Hydroxypropyl ist;
R¹ (R)-2-Hydroxy-1-methylethyl ist und R² (S)-2-Hydroxypropyl ist;
R¹ (S)-2-Hydroxy-1-methylethyl ist und R² (R)-2-Hydroxypropyl ist; oder
R¹ (S)-2-Hydroxy-1-methylethyl ist und R² (S)-2-Hydroxypropyl ist.
In einer anderen Ausführungsform stellt die vorliegende Erfindung eine Verbindung der Formel II bereit, wobei R¹ und R² Hydroxyalkyl sind, n 1 ist und R³ Halogen ist.
In einer anderen Ausführungsform stellt die vorliegende Erfindung eine Verbindung der Formel II bereit, wobei R¹ und R² Hydroxyalkyl sind, n 2 ist und R³ Halogen ist.
Repräsentative Verbindungen, die mit der Erfindung übereinstimmen, werden in Tabelle I gezeigt. TABELLE 1
Die Verbindungen der vorliegenden Erfindung können nach einer Vielzahl von Verfahren hergestellt werden, einschließlich der Verfahren, die in der wie üblich übertragenen US-2003-0171584-A1 offenbart wurden, das durch Bezugnahme hierin früher aufgenommen wurde. In einer Ausführungsform der vorliegenden Erfindung wird ein Verfahren zum Herstellen der Verbindungen der Formel I in Schema 1 nachstehend gezeigt. Es sollte selbstverständlich sein, dass, obwohl das Schema häufig exakte Strukturen anzeigt, die Verfahren der vorliegenden Erfindung weitgehend Anwendung für analoge Verbindungen der Formel I finden, wobei dem Schutz der und dem Entfernen von Schutzgruppen von reaktiven funktionellen Gruppen durch Standardverfahren des Fachgebiets der organischen Chemie entsprechende Beachtung gegeben wird. Zum Beispiel müssen Hydroxygruppen während der chemischen Umsetzungen an anderen Stellen des Moleküls manchmal geschützt werden (z. B. zu Ethern oder Estern umgewandelt werden), um ungewollten Nebenreaktionen vorzubeugen. Die Hydroxyschutzgruppe wird dann entfernt, um die freie Hydroxygruppe bereitzustellen. Gleichermaßen können Aminogruppen und Carbonsäuregruppen geschützt werden (z. B. durch Derivatisierung), um sie vor ungewollten Nebenreaktionen zu schützen. Typische Schutzgruppen und Verfahren zum Binden und Abspalten dieser sind in den vorstehend aufgenommenen Literaturhinweisen von Greene und Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3. Ausgabe, John Wiley & Sons, New York, 1999, und Harrison und Harrison et al., Compendium of Synthetic Organic Methods, Bd. 1-8, (John Wiley and Sons, 1971-1996) vollständig beschrieben.
Schema 1
Die Behandlung einer Verbindung der Formel I mit einem Hydroxylalkylamin (R²-NH₂) stellt eine Verbindung der Formel Ib bereit. Diese Umsetzung wird geeigneterweise in einem Lösungsmittel durchgeführt, das unter den Reaktionsbedingungen inert ist, bevorzugt in einem halogenierten aliphatischen Kohlenwasserstoff, insbesondere Dichlormethan, einem gegebenenfalls halogenierten aromatischen Kohlenwasserstoff oder einem offenkettigen oder cyclischen Ether wie Tetrahydrofuran (THF), einem Formamid oder einem niederen Alkanol. Passenderweise wird die Umsetzung bei etwa -20 °C bis etwa 120 °C, typischerweise etwa 0 °C durchgeführt. Häufig wird eine Base wie Trialkylamin, bevorzugt Triethylamin, dem Reaktionsgemisch zugegeben.
Die Reduktion einer Verbindung der Formel Ib stellt einen Alkohol der Formel Ic bereit. Diese Reduktion wird typischerweise unter Verwendung von Lithiumaluminiumhydrid auf eine dem Fachmann bekannte Weise durchgeführt (z. B. in einem Lösungsmittel, das unter den Bedingungen der Reduktion inert ist, bevorzugt in einem offenkettigen oder cyclischen Ether; insbesondere THF, bei etwa -20 °C bis etwa 70 °C, bevorzugt bei etwa 0 °C bis etwa Raumtemperatur (RT)).
Die Oxidation eines Alkohols der Formel Ic stellt ein Carboxaldehyd der Formel Id bereit. Die Oxidation wird typischerweise mit Mangandioxid durchgeführt, obwohl zahlreiche andere Verfahren auch verwendet werden können (siehe z. B. ADVANCED ORGANIC CHEMISTRY, 4. Ausgabe, March, John Wiley & Sons, New York (1992)). In Abhängigkeit von dem verwendeten Oxidationsmittel wird die Umsetzung geeigneterweise in einem Lösungsmittel durchgeführt, das unter den spezifischen Oxidationsbedingungen inert ist, bevorzugt in einem halogenierten aliphatischen Kohlenwasserstoff, insbesondere Dichlormethan, oder einem gegebenenfalls halogenierten aromatischen Kohlenwasserstoff. Passenderweise wird die Oxidation bei etwa 0 °C bis etwa 60 °C durchgeführt.
Die Umsetzung eines Carboxaldehyds der Formel Id mit einem Ester, Ar¹-X¹CH₂-CO₂R' (wobei R' ein Alkylrest ist und Ar¹ und X¹ wie hierin definiert sind) in Gegenwart einer Base stellt eine Verbindung der Formel Ie bereit. Jede relativ nicht nukleophile Base kann verwendet werden, einschließlich Carbonate wie Kaliumcarbonat, Lithiumcarbonat und Natriumcarbonat; Bicarbonate wie Kaliumbicarbonat, Lithiumbicarbonat und Natriumbicarbonat; Amine wie sekundäre und tertiäre Amine; und harzgebundene Amine wie 1,3,4,6,7,8-Hexahydro-2H-pyrimido[1,2-a]pyrimidin. Geeigneterweise wird die Umsetzung in einem Lösungsmittel durchgeführt, das unter den Reaktionsbedingungen relativ polar, jedoch inert ist, bevorzugt in einem Amid wie Dimethylformamid, N-substituiertes Pyrrolidinon, besonders 1-Methyl-2-pyrrolidinon, und bei einer Temperatur von etwa 25 °C bis etwa 150 °C.
Die Oxidation von Ie mit einem Oxidationsmittel, z. B. einer Persäure wie 3-Chlorperbenzoesäure (d. h. MCPBA) oder Oxone^®, stellt ein Sulfon (If) bereit, das in eine Vielzahl von Zielverbindungen umgewandelt werden kann. Typischerweise wird die Oxidation von Ie in einem unter den Bedingungen der Oxidation inerten Lösungsmittel durchgeführt. Zum Beispiel ist das Lösungsmittel, wenn MCPBA als Oxidationsmittel verwendet wird, bevorzugt ein halogenierter aliphatischer Kohlenwasserstoff, insbesondere Chloroform. Wenn Oxone^® als Oxidationsmittel verwendet wird, ist das Lösungsmittel bevorzugt Methanol, wässriges Ethanol oder wässriges THF. Die Umsetzungstemperatur hängt von dem verwendeten Lösungsmittel ab. Für ein organisches Lösungsmittel beträgt die Umsetzungstemperatur im Allgemeinen etwa -20 °C bis etwa 50 °C, bevorzugt etwa 0 °C bis etwa RT. Wenn Wasser als Lösungsmittel verwendet wird, beträgt die Umsetzungstemperatur im Allgemeinen etwa 0 °C bis etwa 50 °C, bevorzugt etwa 0 °C bis etwa RT. In einer anderen Ausführungsform kann die Oxidation unter katalytischen Bedingungen mit Rhenium/Peroxidbasierten Reagenzien durchgeführt werden, siehe (Lahti et al., Inorg. Chem., 2000, 39, 2164-2167; Catal. Today, 2000, 55, 316-363, und Coperet et al., J. Org. Chem., 1998, 63, 1740-1741.
Das Umsetzen der Verbindung If mit einem Amin (R¹-NH₂) stellt die Verbindungen der Formel I bereit. Die Umsetzung kann in Gegenwart oder Abwesenheit eines Lösungsmittels durchgeführt werden. Geeigneterweise wird die Umsetzung bei Temperaturen von etwa 0 °C bis etwa 200 °C durchgeführt, stärker bevorzugt etwa RT bis etwa 150 °C. In einer anderem Ausführungsform kann in einigen Fällen, eher als dass das Sulfon If verwendet wird, das Sulfid Ie oder das entsprechende Sulfoxid direkt mit einem Amin (R¹-NH₂) umgesetzt werden, um die Verbindungen der Formel I bereitzustellen.
Ein Fachmann wird verstehen, dass bestimmte Modifikationen der vorstehenden Schemata vorgesehen sind und im Umfang der vorliegenden Erfindung liegen. Zum Beispiel werden bestimmte Schritte die Verwendung von Schutzgruppen für funktionelle Gruppen, die mit den besonderen Umsetzungsbedingungen nicht kompatibel sind, umfassen.
In einer anderen Ausführungsform können die Verbindungen der Formel I auch durch das im nachstehenden Schema 2 gezeigte Verfahren hergestellt werden. Auch wenn die Umsetzungen des Schemas 2 mittels bestimmter Verbindungen gezeigt sind, wird es dem Fachmann leicht ersichtlich sein, dass das Verfahren von Schema 2 mit allen Verbindungen der Erfindung verwendet werden kann.
Wie in Schema 2 gezeigt, stellt die Behandlung eines Diethylacetals IIa mit einem Thioharnstoff eine Pyrimidinverbindung IIb bereit. Diese Umsetzung wird geeigneterweise in einem alkoholischen Lösungsmittel in Gegenwart einer Base wie Natriummethoxid durchgeführt. Die Methylierung der Thiolgruppe, z. B. mit Methyliodid, stellt dann den Thioether IIc bereit.
Der Thioether IIc kann dann mit einem α-Aryloxyester IId wie (2,4-Difluorphenoxy)essigsäureethylester behandelt werden, um einen Pyridopyrimidonthioether IIe bereitzustellen. Diese Umsetzung kann z. B. durch Erhitzen in Gegenwart von Natriumcarbonat oder einer anderen milden Base in N-Methylpyrrolidinon oder einem anderen polaren, aprotischen Lösungsmittel durchgeführt werden.
Umsetzung des Thioethers IIe mit Propylencarbonat oder einem ähnlichen Carbonat unter polaren aprotischen Lösungsmittelbedingungen, um einen N-Hydroxyalkylpyridopyrimidonthioether IIf zu ergeben. Diese Umsetzung kann durch Erhitzen in Gegenwart von Kaliumcarbonat erleichtert werden.
Der Thioether IIf wird dann oxidiert, um das entsprechende Pyridopyrimidonsulfon IIg bereitzustellen. Diese Oxidation kann unter Verwendung von Wasserstoffperoxid in Gegenwart von Essigsäure in einem polaren Lösungsmittel wie Methylendichlorid durchgeführt werden. Die Oxidation kann in einer anderen Ausführungsform unter Verwendung von Oxone^® oder MCPBA auf die für Schema 1 vorstehend beschriebene Weise durchgeführt werden.
Die Behandlung des Sulfons IIg mit einem Hydroxyamin, wobei die Hydroxylgruppe geeigneterweise geschützt ist, stellt eine Pyridopyrimidonverbindung IIh in Übereinstimmung mit der Erfindung bereit. Diese Umsetzung kann mit Erhitzen wie vorstehend bezüglich Schema 1 beschrieben durchgeführt werden.
Schema 2
Das Pyridopyrimidinon IIf kann auch durch Alkylieren des Pyridopyrimidinons IIe mit einem Epoxid anstelle eines Carbonats wie in Schema 3 nachstehend gezeigt hergestellt werden. Die Umsetzung von Schema 3 kann durch Erhitzen der Verbindung IIe unter Druck in Gegenwart von überschüssigem Propylenoxid in N-Methylpyrrolidinon oder unter anderen polaren aprotischen Lösungsmittelbedingungen durchgeführt werden.
Schema 3
Die Verbindungen der Formel I können als Medikamente verwendet werden, z. B. in Form von pharmazeutischen Zubereitungen. Die pharmazeutischen Zubereitungen können enteral, z. B. oral, in Form von Tabletten, überzogenen Tabletten, Dragees, Hart- und Weichgelatinekapseln, Lösungen, Emulsionen oder Suspensionen, nasal, z. B. in Form von Nasensprays, oder rektal, z. B. in Form von Suppositorien, verabreicht werden. Jedoch können sie auch parenteral, z. B. in Form von Injektionslösungen, verabreicht werden.
Eine andere Ausführungsform der vorliegenden Erfindung stellt eine pharmazeutische Formulierung bereit, umfassend eine Verbindung der Formel I und einen pharmazeutisch verträglichen Träger, ein Verdünnungsmittel oder einen Exzipienten dafür.
Die Verbindungen der Formel I können mit pharmazeutisch inerten organischen oder anorganischen Trägern zur Herstellung von pharmazeutischen Zubereitungen weiterverarbeitet werden. Lactose, Maisstärke oder Derivate davon, Talk, Stearinsäure oder ihre Salze und dergleichen können z. B. als derartige Träger für Tabletten, überzogene Tabletten, Dragees und Hartgelatinekapseln verwendet werden. Geeignete Träger für Weichgelatinekapseln sind z. B. Pflanzenöle, Wachse, Fette, halbfeste und flüssige Polyole und dergleichen; in Abhängigkeit von der Natur des Wirkstoffs sind jedoch im Fall von Weichgelatinekapseln üblicherweise keine Träger erforderlich. Geeignete Träger zur Herstellung von Lösungen und Sirupen sind z. B. Wasser, Polyole, Saccharose, Invertzucker, Glucose und dergleichen. Geeignete Träger für Suppositorien sind z. B. natürliche oder gehärtete Öle, Wachse, Fette, halbflüssige oder flüssige Polyole und dergleichen.
Die pharmazeutischen Zubereitungen können auch Konservierungsstoffe, Lösungsvermittler, Stabilisatoren, Netzmittel, Emulgatoren, Süßstoffe, Farbstoffe, Geschmacksstoffe, Salze zum Variieren des osmotischen Drucks, Puffer, Maskierungsmittel oder Antioxidanzien enthalten. Sie können auch andere therapeutisch nützliche Stoffe als die Verbindungen der Formel I enthalten.
Medikamente, die eine Verbindung der Formel I mit einem kompatiblen pharmazeutischen Trägermaterial enthalten, sind auch ein Gegenstand der vorliegenden Erfindung, ebenso wie ein Verfahren zur Herstellung eines derartigen Medikaments, welches umfasst, eine oder mehrere dieser Verbindungen oder Salze und, falls gewünscht, einen oder mehrere andere therapeutisch nützliche Stoffe in eine galenische Verabreichungsform zu bringen, zusammen mit einem kompatiblen pharmazeutischen Träger.
Wie früher erwähnt, können die Verbindungen der Formel I in Übereinstimmung mit der Erfindung als therapeutisch wirksame Stoffe, insbesondere als entzündungshemmende Mittel oder zur Vorbeugung der Transplantatabstoßung nach einem chirurgischen Transplantationseingriff verwendet werden. Die Dosierung kann innerhalb weiter Grenzen variieren und wird natürlich an die individuellen Anforderungen in jedem besonderen Fall angepasst werden. Im Allgemeinen sollte im Fall der Verabreichung an Erwachsene eine übliche tägliche Dosierung bei etwa 0,1 mg/kg bis etwa 100 mg/kg, bevorzugt etwa 0,5 mg/kg bis etwa 5 mg/kg liegen. Die tägliche Dosierung kann als Einzeldosis oder in geteilten Dosen verabreicht werden und zudem kann die früher genannte obere Dosierungsgrenze überschritten werden, wenn dies angezeigt zu sein scheint.
Schließlich ist auch die Verwendung der Verbindungen der Formel I zur Herstellung von Medikamenten, insbesondere in der Behandlung oder Prophylaxe von entzündlichen, immunologischen, onkologischen, bronchopulmonaren, dermatologischen und kardiovaskulären Störungen, in der Behandlung von Asthma, Störungen des zentralen Nervensystems oder diabetischen Komplikationen oder zur Vorbeugung von Transplantatabstoßung nach einem chirurgischen Transplantationseingriff ebenfalls ein Gegenstand der Erfindung.
Die Verbindungen der Formel I sind nützlich für, jedoch nicht beschränkt auf die Behandlung jeder Störung oder jedes Erkrankungszustandes in einem Menschen oder einem anderen Säuger, der durch übermäßige oder ungesteuerte Produktion von TNF oder p38-Kinase durch einen derartigen Säuger verschlimmert oder ausgelöst wird. Dementsprechend wird ein Verfahren zum Behandeln einer zytokinvermittelten Erkrankung offenbart, welches das Verabreichen einer wirksamen zytokinstörenden Menge einer Verbindung der Formel I oder eines pharmazeutisch verträglichen Salzes oder Tautomers davon umfasst.
Die Verbindungen der Formel I sind zur Behandlung von Entzündung in einer Person und zur Verwendung als Antipyretika zur Behandlung von Fieber nützlich, sind jedoch nicht darauf beschränkt. Die Verbindungen der Erfindung wären nützlich, um Arthritis zu behandeln, einschließlich, jedoch nicht beschränkt auf rheumatoide Arthritis, Spondyloarthropathien, Gichtarthritis, Osteoarthritis, Psoriasisarthritis, Spondylarthritis, systemischen Lupus erythematosus und juvenile Arthritis, Osteoarthritis, Gichtarthritis und andere arthritische Zustände. Derartige Verbindungen würden zur Behandlung von Lungenstörungen oder Lungenentzündung einschließlich Atemnotsyndrom des Erwachsenen, Lungensarkoidose, Asthma, Silikose und chronische Lungenentzündung nützlich sein. Die Verbindungen sind auch nützlich zur Behandlung von viralen und bakteriellen Infektionen, einschließlich Sepsis, septischen Schocks, Gram-negativer Sepsis, Malaria, Meningitis, Kachexie infolge von Infektion oder Malignität, Kachexie infolge des erworbenen Immunschwächesyndroms (AIDS), AIDS, ARC (AIDS related complex), Pneumonie und Herpesvirus. Die Verbindungen sind auch nützlich zur Behandlung von Knochenresorptionserkrankungen wie Osteoporose, endotoxischem Schock, toxischem Schocksyndrom, Reperfusionsverletzung, Autoimmunerkrankung einschließlich Graft-versus-host-Reaktion und allogenes-Transplantat-Abstoßung, kardiovaskulären Erkrankungen einschließlich Atherosklerose, Thrombose, kongestiver Herzinsuffizienz und kardialer Reperfusionsverletzung, renaler Reperfusionsverletzung, Lebererkrankung und Nephritis und Myalgien aufgrund von Infektion.
Die Verbindungen sind auch nützlich zur Behandlung von Alzheimer Krankheit, Influenza, Multipler Sklerose, Krebs, Diabetes, systemischem Lupus erythematosus (SLE), auf die Haut bezogenen Zuständen wie Psoriasis, Ekzem, Verbrennungen, Dermatitis, Keloidbildung und Bildung von Narbengewebe. Zudem sind die Verbindungen der Erfindung nützlich in der Behandlung von gastrointestinalen Zuständen wie entzündlicher Darmerkrankung, Morbus Crohn, Gastritis, Reizdarmsyndrom und Colitis ulcerosa. Die Verbindungen sind auch nützlich in der Behandlung von ophthalmischen Erkrankungen wie Retinitis, Retinopathien, Uveitis, Photophobie des Auges und von akuter Verletzung des Augengewebes. Die Verbindungen können auch verwendet werden in der Behandlung von Angiogenese einschließlich Neoplasie; Metastasen; ophthalmischen Zuständen wie Hornhauttransplantatabstoßung, okulare Gefäßneubildung, Netzhautgefäßneubildung einschließlich Gefäßneubildung nach Verletzung oder Infektion, diabetischer Retinopathie, retrolentaler Fibroplasie und neovaskulärem Glaukom; ulzerativen Erkrankungen wie Magengeschwür; pathologischen, jedoch nicht malignen Zuständen wie Hämangiome einschließlich infantiler Hämangiome, Angiofibrom des Nasenrachenraums und avaskulärer Nekrose des Knochens, diabetischer Nephropathie und Kardiomyopathie; und Störungen des weiblichen Reproduktionssystems wie Endometriose. Die Verbindungen können ferner zur Vorbeugung der Produktion von Cyclooxygenase-2 verwendet werden und weisen analgetische Eigenschaften auf. Deshalb sind die Verbindungen der Formel I zur Behandlung von Schmerz nützlich.
Andere Verwendungen von Verbindungen der Formel I schließen die Behandlung von HCV, schwerem Asthma, Psoriasis, chronisch-obstruktiver Lungenerkrankung (COPD) und anderer Erkrankungen ein, die mit einer Anti-TNF-Verbindung behandelt werden können.
Außer dass diese Verbindungen für die Humanbehandlung nützlich sind, sind sie auch nützlich für die veterinäre Behandlung von Mitlebewesen, exotischen Tieren und Nutztieren, einschließlich Säugern, Nagern und dergleichen. Stärker bevorzugt schließen die Lebewesen Pferde, Bunde und Katzen ein.
Die vorliegenden Verbindungen können auch in Co-Therapien teilweise oder vollständig anstelle von anderen üblichen entzündungshemmenden Mitteln zusammen mit Steroiden, Cyclooxygenase-2-Inhibitoren, NSAIDs, DMARDS, immunosuppressiven Mitteln, 5-Lipoxygenase-Inhibitoren, LTB₄-Antagonisten und LTA₄-Hydrolase-Inhibitoren verwendet werden.
Wie hierin verwendet, bezieht sich der Begriff "TNF-vermittelte Störung" auf jede und alle Störungen und Erkrankungszuständen, in denen TNF eine Rolle spielt, entweder durch Steuerung von TNF selbst, oder indem TNF verursacht, dass andere Monokine wie, jedoch nicht beschränkt auf, IL-1, IL-6 oder IL-8 freigesetzt werden. Ein Erkrankungszustand, in dem zum Beispiel IL-1 eine Hauptkomponente ist und dessen Produktion oder Wirkung als Reaktion auf TNF verschlimmert wird oder das als Reaktion auf TNF sezerniert wird, würde deshalb als eine Störung angesehen werden, die durch TNF vermittelt wird.
Wie hierin verwendet bezieht sich der Begriff "p38-vermittelte Störung" auf jede und alle Störungen und Erkrankungszustände, in denen p38 eine Rolle spielt, entweder durch Steuerung von p38 selbst oder indem p38 verursacht, dass ein anderer Faktor freigesetzt wird, wie, jedoch nicht beschränkt auf, IL-1, IL-6 oder IL-8. Ein Erkrankungsstadium, in dem zum Beispiel IL-1 eine Hauptkomponente ist und dessen Produktion oder Wirkung als Reaktion auf p38 verschlimmert wird oder das als Reaktion von p38 sezerniert wird, würde deshalb als eine Störung angesehen werden, die durch p38 vermittelt wird.
Da TNF-β eine enge strukturelle Homologie mit TNF-α (auch als Cachectin bekannt) aufweist, und da jedes ähnliche biologische Reaktionen auslöst und an den gleichen Zellrezeptor bindet, wird die Synthese sowohl von TNF-α als auch von TNF-β durch die Verbindungen der vorliegenden Erfindung gehemmt und sie werden deshalb hierin kollektiv als "TNF" bezeichnet, wenn nicht auf andere Weise besonders beschrieben.
BEISPIELE
Weitere Gegenstände, Vorteile und neue Merkmale dieser Erfindung werden dem Fachmann während der Betrachtung der folgenden veranschaulichenden Beispiele davon, welche nicht einschränkend sein sollen, offensichtlich werden.
Beispiel 1: Herstellung von 6-(2,4-Difluorphenoxy)-2-((S)-(+)-2-hydroxy-1-methylethylamino)-8-((S)-2-hydroxypropyl)-8H-pyrido[2,3-d]pyrimidin-7-on (Verbindung 16)
Schritt A: Herstellung von 4-((S)-2-Hydroxypropylamino)-2-methylsulfanylpyrimidin-5-carbonsäureethylester
Zu einer Lösung aus 4-Chlor-2-methylthiopyrimidin-5-carbonsäureethylester (Aldrich, 65 g, 280 mmol) in 500 ml THF bei 0 °C wurden Triethytamin (140 ml, 1000 mmol) und (S)-1-Amino-2-propanol (21 g, 280 mmol) zugegeben. Nach dem Rühren für 4 Stunden wurde Wasser (200 ml) zugegeben und die Phasen wurden getrennt. Die wässrige Schicht wurde mit Dichlormethan extrahiert. Die organische Phase wurde eingeengt und der Rückstand wurde mit dem Dichlormethan gelöst und mit Salzlösung gewaschen und über Magnesiumsulfat getrocknet. Es wurde filtriert und das Filtrat wurde unter vermindertem Druck eingedampft, um 77 g des 4-((S)-2-Hydroxypropylamino)-2-methylsulfanylpyrimidin-5-carbonsäureethylesters als einen weißen Feststoff zu ergeben.
Schritt B: Herstellung von 4-((S)-2-Hydroxypropylamino)-2-methylsulfanylpyrimidin-5-methanol
Lithiumaluminiumhydrid (5,7 g, 150 mmol) wurde in trockenes THF (500 ml) bei 5 °C gerührt und tropfenweise mit einer Lösung von 4-((S)-2-Hydroxypropylamino)-2-methylsulfanylpyrimidin-5-carbonsäureethylester (27 g, 100 mmol) in trockenem THF (450 ml) behandelt. Das Reaktionsgemisch wurde für 15 min gerührt und dann wurde Wasser (18 ml) tropfenweise vorsichtig zugegeben. Die Umsetzung wurde für 30 min gerührt und dann wurde eine wässrige Lösung aus Natriumhydroxid (15 %, 8,5 ml) tropfenweise zugegeben, gefolgt von Wasser (25,5 ml). Die so erhaltene Suspension wurde für 17 Stunden bei RT gerührt und dann filtriert. Der Filterrückstand wurde mit Isopropanol (2 ×, 100 ml) gewaschen und das mit den Waschungen vereinigte Filtrat wurde unter vermindertem Druck eingedampft, um 25,8 g 4-((S)-2-Hydroxypropylamino)-2-methylsulfanylpyrimidin-5-methanol zu ergeben.
Schritt C: Herstellung von 4-((S)-2-Hydroxypropylamino)-2-methylsulfanylpyrimidin-5-carbaldehyd
4-((S)-2-Hydroxypropylamino)-2-methylsulfanylpyrimidin-5-methanol (26 g, 100 mmol) und 1 l Dichlormethan wurden unter Rühren vereinigt und mit Mangandioxid (102 g, 1 mol) behandelt. Die so erhaltene Suspension wurde für 24 Stunden gerührt und dann durch Celite filtriert. Der Filterrückstand wurde mit Dichlormethan (100 ml) gewaschen und das mit den Waschungen vereinigte Filtrat wurde unter vermindertem Druck eingedampft, um 16,5 g des 4-((S)-2-Hydroxypropylamino)-2-methylsulfanylpyrimidin-5-carbaldehyds als einen weißen Feststoff zu ergeben.
Sulfon
Schritt A: Herstellung von 6-(2,4-Difluorphenoxy)-8-((S)-2-hydroxypropyl)-2-methylsulfanyl-8H-pyrido[2,3-d]pyrimidin-7-on
Zu einem Gemisch aus 4-((S)-2-Hydroxypropylamino)-2-methylsulfanylpyrimidin-5-carbaldehyd (16,5 g, 73 mmol) und (2,4-Difluorphenoxy)essigsäuremethylester (29,4 g, 145 mmol) in wasserfreiem Dimethylformamid (300 ml) wurde Kaliumcarbonat (30 g, 218 mmol) zugegeben. Das Reaktionsgemisch wurde auf 60 °C erhitzt und nach 18 Stunden wurde das Reaktionsgemisch gekühlt und das Dimethylformamid wurde unter Vakuum abdestilliert. Der rohe Rückstand wurde in Wasser (300 ml) suspendiert und mit Dichlormethan extrahiert, mit Salzlösung gewaschen und über Magnesiumsulfat getrocknet. Es wurde filtriert und unter Vakuum eingeengt, um 41 g rohes Material zu ergeben, das auf einer Kieselgelsäule chromatographiert wurde, wobei mit 1 % Methanol in Dichlormethan eluiert wurde, um 30 g 6-(2,4-Difluorphenoxy)-8-((S)-2-hydroxypropyl)-2-methylsulfanyl-8H-pyrido[2,3-d]pyrimidin-7-on (Massenspektr. M + 1 = 274) zu ergeben.
Schritt B: Herstellung von 6-(2,4-Difluorphenoxy)-8-((S)-2-hydroxypropyl)-2-methansulfonyl-8H-pyrido[2,3-d]pyrimidin-7-on
Zu einer Dichlormethanlösung (500 ml) von 6-(2,4-Difluorphenoxy)-8-((S)-2-hydroxypropyl)-2-methylsulfanyl-8H-pyrido[2,3-d]pyrimidin-7-on (29,7 g, 108 mmol) bei 5 °C wurde portionsweise m-Chlorperbenzoesäure (55 g, 240 mmol) zugegeben und es wurde für 24 Stunden gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde mit wässrigem Natriumsulfat, wässrigem Natriumbicarbonat gewaschen und über Magnesiumsulfat getrocknet. Es wurde filtriert und eingedampft, um 24 g 6-(2,4-Difluorphenoxy)-8-((S)-2-hydroxypropyl)-2-methansulfonyl-8H-pyrido[2,3-d]pyrimidin-7-on (Massenspektr. M + 1 = 412) zu ergeben.
Schritt C: Herstellung von 6-(2,4-Difluorphenoxy)-2-((S)-2-hydroxy-1-methyl-ethylamino)-8-((S)-2-hydroxypropyl)-8H-pyrido[2,3-d]pyrimidin-7-on
Zu einer THF-Lösung (5 ml) von 6-(2,4-Difluorphenoxy)-8-((S)-2-hydroxypropyl)-2-methansulfonyl-8H-pyrido[2,3-d]pyrimidin-7-on (400 mg, 1 mmol) wurde (S)-2-Amino-1-propanol (0,38 ml, 5 mmol) zugegeben und es wurde über Nacht bei RT gerührt. Es wurde unter Vakuum eingeengt und auf Kieselgel chromatographiert, wobei mit 2 % Methanol in Dichlormethan eluiert wurde und man wandelte in das Hydrochloridsalz um, um 320 mg 6-(2,4-Difluorphenoxy)-2-((S)-(+)-2-hydroxy-1-methyl-ethylamino)-8-((S)-2-hydroxypropyl)-8H-pyrido[2,3-d]pyrimidin-7-on zu ergeben (Massenspektr. M + 1 = 407, Smp. = 175,1-179,1 °C).
Beispiel 2: Herstellung von 6-(2,4-Difluorphenoxy)-2-(R)-(-)-2-hydroxy-1-methylethylamino)-8-((S)-2-hydroxypropyl)-8H-pyrido[2,3-d]pyrimidin-7-on (Verbindung 17)
Zu einer THF-Lösung (5 ml) von 6-(2,4-Difluorphenoxy)-8-((S)-2-hydroxypropyl)-2-methansulfonyl-8H-pyrido[2,3-d]pyrimidin-7-on (400 mg, 1 mmol) wurde (R)-2-Amino-1-propanol (0,38 ml, 5 mmol) zugegeben und es wurde über Nacht bei RT gerührt. Es wurde unter Vakuum eingeengt und auf Kieselgel chromatographiert, wobei mit 2 % Methanol in Dichlormethan eluiert wurde, und man wandelte in das Hydrochloridsalz um, um 370 mg 6-(2,4-Difluorphenoxy)-2-((R)-2-hydroxy-1-methylethylamino)-8-((S)-2-hydroxypropyl)-8H-pyrido[2,3-d]pyrimidin-7-on zu ergeben (Massenspektr. M + 1 = 407, Smp. = 174,9-178,1 °C).
Beispiel 3: Herstellung von 6-(2,4-Difluorpphenoxy)-2-(2-hydroxy-1,1-dimethylethylamino)-8-((S)-2-hydroxypropyl)-8H-pyrido[2,3-d]pyrimidin-7-on (Verbindung 36)
Zu einer THF-Lösung (10 ml) von 6-(2,4-Difluorphenoxy)-8-((S)-2-hydroxypropyl)-2-methansulfonyl-8H-pyrido[2,3-d]pyrimidin-7-on (717 mg, 1,74 mmol) wurde 2-Amino-2-methyl-1-propanol (1,55 g, 17,43 mmol) zugegeben und es wurde bei RT über Nacht gerührt, unter Vakuum eingeengt und auf Kieselgel chromatographiert, wobei mit 4 % Methanol in Dichlormethan eluiert wurde, um nach der Umwandlung in das Hydrochloridsalz 291 mg 6-(2,4-Difluorphenoxy)-2-(2-hydroxy-1,1-dimethyl-ethylamino)-8-((S)-2-hydroxypropyl)-8H-pyrido[2,3-d]pyrimidin-7-on als einen weißen Feststoff zu ergeben (Massenspektr. M + 1 = 421, Smp. = 187,4-189,9 °C).
Beispiel 4: Herstellung von 6-(2,4-Difluorphenoxy)-2-((S)-2-hydroxy-1-methyl-ethylamino)-8-((R)-2-hydroxqypropyl)-8H-pyrido[2,3-d]pyrimidin-7-on (Verbindung 41)
Schritt A: Herstellung von 4-((R)-2-Hydroxypropylamino)-2-methylsulfanyl pyrimidin-5-carbonsäureethylester
Zu einer Lösung aus 4-Chlor-2-methylthiopyrimidin-5-carbonsäureethylester (Aldrich, 62,6 g, 269 mmol) in 1 l THF bei 0 °C wurde Triethylamin (135 ml, 1000 mmol) und (R)-1-Amino-2-propanol (30 g, 400 mmol) zugegeben. Nach dem Rühren für 4 Stunden wurde unter vermindertem Druck eingedampft, um 66,6 g des 4-(R)-2-Hydroxypropylamino)-2-methylsulfanyl-pyrimidin-5-carbonsäureethylesters als einen weißen Feststoff zu ergeben.
Schritt B: Herstellung von 4-((R)-2-Hydroxypropylamino)-2-methylsulfanyl-pyrimidin-5-methanol
Lithiumaluminiumhydrid (14 g, 368 mmol) wurde in trockenes THF (500 ml) bei 5 °C gerührt und tropfenweise mit einer Lösung von 4-(R)-2-Hydroxypropylamino)-2-methansulfanylpyrimidin-5-carbonsäureethylester (66,6 g, 246 mmol) in trockenem THF (150 ml) behandelt. Das Reaktionsgemisch wurde für 15 min gerührt und dann wurde Wasser (18 ml) vorsichtig tropfenweise zugegeben. Das Reaktionsgemisch wurde für 30 min gerührt und dann wurde eine wässrige Lösung aus Natriumhydroxid (15 %, 8,5 ml) tropfenweise zugegeben, gefolgt von Wasser (25,5 ml). Die so erhaltene Suspension wurde für 17 Stunden bei RT gerührt und dann filtriert. Der Filterrückstand wurde mit Isopropanol (2 x, 100 ml) gewaschen und das mit den Waschungen vereinigte Filtrat wurde unter vermindertem Druck eingedampft, um 58,6 g 4-(R)-2-Hydroxypropylamino)-2-methylsulfanyl-pyrimidin-5-methanol zu ergeben.
Schritt C: Herstellung von 4-((R)-2-Hydroxypropylamino)-2-methylsulfanyl-pyrimidin-5-carbaldehyd
4-(R)-2-Hydroxypropylamino)-2-methylsulfanyl-pyrimidin-5-methanol (58,6 g, 256 mmol) und 1 l Dichlormethan wurden unter Rühren vereinigt und mit Mangandioxid (222 g, 2560 mol) behandelt. Die so erhaltene Suspension wurde für 24 Stunden gerührt und dann durch Celite filtriert. Der Filterrückstand wurde mit Dichlormethan (100 ml) gewaschen und das mit den Waschungen vereinigte Filtrat wurde unter vermindertem Druck eingedampft, um 34 g des 4-((R)-2-Hydroxypropylamino)-2-methylsulfanyl-pyrimidin-5-carbaldehyds als einen weißen Feststoff zu ergeben.
Sulfon
Schritt A: Herstellung von 6-(2,4-Difluorphenoxy)-8-((R)-2-hydroxypropyl)-2-methylsulfanyl-8H-pyrido[2,3-d]pyrimidin-7-on
Zu einem Gemisch aus 4-((R)-2-Hydroxypropylamino)-2-methylsulfanyl-pyrimidin-5-carbaldehyd (17,7 g, 78 mmol) und (2,4-Difluorphenoxy)essigsäuremethylester (31,6 g, 156 mmol) in wasserfreiem Dimethylformamid (300 ml) wurde Kaliumcarbonat (30 g, 218 mmol) zugegeben. Das Reaktionsgemisch wurde auf 60 °C erhitzt und nach 18 Stunden wurde das Reaktionsgemisch gekühlt und DMF wurde abdestilliert. Der Rückstand wurde in Wasser (300 ml) suspendiert und mit Dichlormethan extrahiert, mit Salzlösung gewaschen und über Magnesiumsulfat getrocknet. Es wurde filtriert und unter Vakuum eingeengt, um 29,5 g rohes Material zu ergeben, das auf einer Kieselgelsäule chromatographiert wurde, wobei mit 1 % Methanol in Dichlormethan eluiert wurde, um 17,5 g 6-(2,4-Difluorphenoxy)-8-((R)-2-hydroxypropyl)-2-methylsulfanyl-8H-pyrido[2,3-d]pyrimidin-7-on zu ergeben (Massenspektr. M + 1 = 274).
Schritt B: Herstellung von 6-(2,4-Difluorphenoxy)-8-((R)-2-hydroxypropyl)-2-methansulfonyl-8H-pyrido[2,3-d]pyrimidin-7-on
Zu einer Dichlormethanlösung (200 ml) von 6-(2,4-Difluorphenoxy)-8-((R)-2-hydroxypropyl)-2-methylsulfanyl-8H-pyrido[2,3-d]pyrimidin-7-on (9,38 g, 24,7 mmol) bei 5 °C wurde portionsweise m-Chlorperbenzoesäure (12,5 g, 54 mmol) zugegeben und es wurde für 24 Stunden gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde mit wässrigem Natriumsulfit, wässrigem Natriumbicarbonat gewaschen und über Magnesiumsulfat getrocknet. Es wurde filtriert und eingedampft, um 10,7 g 6-(2,4-Difluorphenoxy)-8-((R)-2-hydroxypropyl)-2-methansulfonyl-8H-pyrido[2,3-d]pyrimidin-7-on (Massenspektr. M + 1 = 412) zu ergeben.
Schritt C: Herstellung von 6-(2,4-Difluorphenoxy)-2-((S)-2-hydroxy-1-methyl-ethylamino)-8-((R)-2-hydroxypropyl)-8H-pyrido[2,3-d]pyrimidin-7-on
Zu einer THF-Lösung (5 ml) von 6-(2,4-Difluorphenoxy)-8-((R)-2-hydroxypropyl)-2-methansulfonyl-8H-pyrido[2,3-d]pyrimidin-7-on (615 mg, 1,5 mmol) wurde (S)-2-Amino-1- propanol (1,2 ml, 15 mmol) zugegeben und es wurde über Nacht bei RT gerührt. Es wurde unter Vakuum eingeengt und auf Kieselgel chromatographiert, wobei mit 2 % Methanol in Dichlormethan eluiert wurde und man wandelte in das Hydrochloridsalz um, um 295 mg 6-(2,4-Difluorphenoxy)-2-((S)-2-hydroxy-1-methyl-ethylamino)-8-((R)-2-hydroxypropyl)-8H-pyrido[2,3-d]pyrimidin-7-on zu ergeben (Massenspektr. M + 1 = 407, Smp. = 186,0-189,1 °C).
Beispiel 5: Herstellung von 6-(2,4-Difluorphenoxy)-2-(R)-2-hydroxy-1-methyl-ethylamino)-8-((R)-2-hydroxypropyl)-8H-pyrido[2,3-d]pyrimidin-7-on (Verbindung 48)
Zu einer THF-Lösung (5 ml) von 6-(2,4-Difluorphenoxy)-8-((R)-2-hydroxypropyl)-2-methansulfonyl-8H-pyrido[2,3-d]pyrimidin-7-on (400 mg, 1 mmol) wurde (R)-2-Amino-1-propanol (0,38 ml, 5 mmol) zugegeben und es wurde über Nacht bei RT gerührt. Es wurde unter Vakuum eingeengt und auf Kieselgel chromatographiert, wobei mit 2 % Methanol in Dichlormethan eluiert wurde, und man wandelte in das Hydrochloridsalz um, um 350 mg 6-(2,4-Difluorphenoxy)-2-((R)-2-hydroxy-1-methyl-ethylamino)-8-((R)-2-hydroxypropyl)-8H-pyrido[2,3-d]pyrimidin-7-on zu ergeben (Massenspektr. M + 1 = 407, Smp. = 181,5-184,4 °C)
Beispiel 6: Herstellung von 6-(2,4-Difluorphenoxy)-2-(2-hydroxy-1,1-dimethyl-ethylamino)-8-((R)-2-hydroxypropyl)-8H-pyrido[2,3-d]pyrimidin-7-on (Verbindung 31)
Ein Gemisch aus 6-(2,4-Difluorphenoxy)-8-((R)-2-hydroxypropyl)-2-methansulfonyl-8H-pyrido[2,3-d]pyrimidin-7-on (886 mg, 2,15 mmol) und 2-Amino-2-methyl-1-propanol (5,15 g, 58 mmol) wurde bei 60 °C unter Stickstoff für 2 Stunden erhitzt. Es wurde gekühlt und auf Kieselgel chromatographiert, wobei mit 2 % Methanol in Dichlormethan eluiert wurde, um nach dem Umwandeln in das Hydrochloridsalz 385 mg 6-(2,4-Difluorphenoxy)-2-(2-hydroxy-1,1-dimethyl-ethylamino)-8-((R)-2-hydroxypropyl)-8H-pyrido[2,3-d]pyrimidin-7-on zu ergeben (Massenspektr. M + 1 = 421, Smp. = 182,0-183,9 °C).
Beispiel 7: Herstellung von 6-(2,4-Difluorphenoxy)-2-((S)-2-hydroxy-1-me1hyl-ethylamino)-8-(2-oxopropyl)-8H-pyrido[2,3-d]pyrimidin-7-on (Verbindung 45)
Schritt a: Herstellung von 6-(2,4-Difluorphenoxy)-2-methansulfonyl-8-(2-oxopropyl)-8H-pyrido[2,3-d]pyrimidin-7-on
Zu einer Dichlormethanlösung (100 ml) von Oxalylchlorid (1,05 ml, 12 mmol) bei -60 °C wurden Dimethylsulfoxid (1,7 ml, 24 mmol) und 6-(2,4-Difluorphenoxy)-8-(2-hydroxypropyl)-2-methansulfonyl-8H-pyrido[2,3-d]pyrimidin-7-on (4,12 g, 10 mmol) zugegeben. Zu diesem Gemisch wurde Triethylamin (7 ml, 50 mmol) zugegeben und es wurde über Nacht gerührt. Es wurde Wasser (100 ml) zugegeben und mit Dichlormethan extrahiert, mit Salzlösung gewaschen und über Magnesiumsulfat getrocknet. Es wurde filtriert und unter Vakuum eingeengt, auf Kieselgel chromatographiert, wobei mit 2 % Methanol in Dichlormethan eluiert wurde, um 1,0 g 6-(2,4-Fluorphenoxy)-2-methansulfonyl-8-(2-oxopropyl)-8H-pyrido[2,3-d]pyrimidin-7-on zu ergeben (Massenspektr. M + 1 = 410).
Schritt b: Herstellung von 6-(2,4-Difluorphenoxy)-2-((S)-2-hydroxy-1-methyl-ethylamino)-8-(2-oxopropyl)-8H-pyrido[2,3-dJpyrimidin-7-on (Verbindung 45)
Zu einer THF-Suspension von 6-(2,4-Difluorphenoxy)-2-methansulfonyl-8-(2-oxopropyl)-8H-pyrido[2,3-d]pyrimidin-7-on (412 mg, 1 mmol) wurde (S)-2-Amino-1-propano1 (0,39 ml, 5 mmol) bei RT zugegeben und es wurde über Nacht gerührt. Es wurde unter Vakuum eingeengt und auf Kieselgel chromatographiert, wobei mit 2 % Methanol in Dichlormethan eluiert wurde, um nach der Umwandlung in das Hydrochloridsalz 330 mg 6-(2,4-Difluorphenoxy)-2-((S)-2-hydroxy-1-methylethylamino)-8-(2-oxopropyl)-8H-pyrido[2,3-d]pyrimidin-7-on zu ergeben (Massenspektr. M + 1 = 405, Smp. = 207,9-214,6 °C).
Beispiel 8: Herstellung von 6-(2,4-Difluorphenoxy)-2-((R)-2-hydroxy-1-methyl-ethylamino)-8-(2-Oxopropyl)-8H-pyrido[2,3-d]pyrimidin-7-on (Verbindung 49)
Zu einer THF-Suspension (10 ml) von 6-(2,4-Difluorphenoxy)-2-methansulfonyl-8-(2-oxopropyl)-8H-pyrido[2,3-d]pyrimidin-7-on (417 mg, 1 mmol) wurde (R)-(-)-2-Amino-1-propanol (0,40 ml, 5 mmol) bei RT zugegeben und es wurde über Nacht gerührt. Es wurde unter Vakuum eingeengt und auf Kieselgel chromatographiert, wobei mit 2 % Methanol in Dichlormethan eluiert wurde, um nach der Umwandlung in das Hydrochloridsalz 330 mg 6-(2,4-Difluorphenoxy)-2-((R)-2-hydroxy-1-methylethylamino)-8-(2-oxopropyl)-8H-pyrido[2,3-d]pyrimidin-7-on zu ergeben (Massenspektr. M + 1 = 405, Smp. = 207,8-216,4 °C).
Beispiel 9: In-vitro-Test
Die p38-MAP-Kinase-Hemmwirkung der Verbindungen dieser Erfindung in vitro wurde durch Messen des Transfers des γ-Phosphats von γ-³³P-ATP über p-38-Kinase zum Myelin-Basisprotein (MBP) bestimmt, wobei eine geringfügige Modifikation des in Ahn et al., J. Biol. Chem. 266: 4220-4227 (1991) beschriebenen Verfahrens verwendet wurde.
Die phosphorylierte Form der rekombinanten p38-MAP-Kinase wurde mit SEK-1 und MEKK in E. coli koexprimiert (siehe Khokhlatchev et al., J. Biol. Chem. 272: 11057-11062 (1997)) und dann durch Affinitätschromatographie unter Verwendung einer Nickel-Säule gereinigt.
Die phosphorylierte p38-MAP-Kinase wurde in Kinasepuffer (20 mM 3-(N-Morpholino)propansulfonsäure, pH-Wert 7,2, 25 mM β-Glycerinsphosphat, 5 mM Ethylenglycolbis(beta-aminoethylether)-N,N,N',N'-tetraessigsäure, 1 mM Natriumorthovanadat, 1 mM Dithiothreitol, 40 mM Magnesiumchlorid) verdünnt. Die Testverbindungen wurden in DMSO gelöst zugegeben oder es wurde nur DMSO (Kontrolle) zugegeben und die Proben wurden für 10 min bei 30 °C inkubiert. Die Kinasereaktion wurde durch Zugabe eines Substratcocktails, der MBP und γ-³³P-ATP enthielt, gestartet. Nach dem Inkubieren für weitere 20 min bei 30 °C wurde die Umsetzung durch Zugeben von 0,75 % Phosphorsäure beendet. Das phosphorylierte MBP wurde dann von dem restlichen γ-³³P-ATP unter Verwendung einer Phosphocellulose-Membran (Millipore, Bedford, MA) getrennt und unter Verwendung eines Szintillationszählers (Packard, Meriden, CT) quantifiziert.
Es wurde unter Verwendung des vorstehenden Tests gezeigt, dass die Verbindungen der Erfindung Inhibitoren der p38-MAP-Kinase sind. Die Verbindungen der Erfindung zeigten p38-IC₅₀-Werte im Bereich von weniger als 0,001 bis 0,1 μM. Zum Beispiel zeigte 6-(2,4- Difluorphenoxy)-8-(3-hydroxypropyl)-2-(tetrahydropyran-4-ylamino)-8H-pyrido[2,3-d]pyrimidin-7-on unter Verwendung des vorstehenden Tests eine IC₅₀ von 0,0008 μM.
Beispiel 10: In-vitro-Test
Dieses Beispiel veranschaulicht einen humanes-Vollblut-(HWB)-in-vitro-Test (d. h. LPS-induzierte IL-1β-Produktion in unverdünntem humanen Vollblut über Hemmung der p38-MAP-Kinase) zur Bewertung der Verbindungen der vorliegenden Erfindung und der Vergleichsergebnisse der entsprechenden Alkylanaloga.
Die LPS-(Lipopolysaccharid)-Behandlung des humanen Vollbluts löst die IL-1β-(Interleukin-1β)-Produktion aus, die durch einen IL-1β-spezifischen ELISA gemessen werden kann. Humanes Vollblut wurde mit der angezeigten Konzentration einer Verbindung der vorliegenden Erfindung in 0,5 % DMSO (finale Konzentration) für 30 min bei 37 °C vorinkubiert, die Proben wurden mit 0,5 μg/ml Lipopolysaccharid (LPS, von Sigma) (finale Konzentration) für 18 Stunden stimuliert, um die Synthese und Sezernierung von IL-1β auszulösen, welche unter Verwendung eines IL-1β-ELISA gemessen wurde.
Verbindungslösungen
Es wurde eine Stammlösung von 6 mM in DMSO (von Sigma) durch Lösen der Verbindung in DMSO in 449 μl DMSO hergestellt. Von der 6-mM-Stammlösung wurden sechs anschließende halblogarithmische Verdünnungsreihen in DMSO durchgeführt, um die folgenden Konzentrationen zu ergeben. 1,9 mM, 600, 190, 60, 19 und 6 μM. Markierung der Röhrchen mit 1-7. Die 6-mM-Stammlösung in Röhrchen 1. 216 μl DMSO wurden in jedes der Röhrchen 2-7 eingebracht. Aus dem Röhrchen 1 wurden 100 μl in Röhrchen 2 überführt. Röhrchen 2 wurde verwirbelt und 100 μl wurden von Röhrchen 2 zu Röhrchen 3 überführt. Dieser Vorgang wurde bis Röhrchen 7 wiederholt. Unter Verwendung der vorstehend hergestellten Verdünnungsreihen der Verbindung in DMSO wurde eine zusätzliche Verdünnung 1/20 (10 μl in 190 ml RPMI 1640 Medium von Gibco-BRL) durchgeführt, um eine finale Verbindungskonzentrationskurve von 30, 10, 2,9, 1, 0,3, 0,1 und 0,03 μM zu ergeben.
LPS-Lösungen
Wiederherstellung von LPS: In das 10-mg-Fläschchen LPS wurden 10 ml 1XPhosphatgepufferte Salzlösung (d. h. 1XPBS von Gibco-BRL) zugegeben, gut gemischt und in ein 50-ml-Röhrchen überführt. Weitere 10 ml wurden dem LPS-Fläschchen zugegeben, gefolgt von Spülen, und diese Spülung wurde zu dem 50-ml-Röhrchen zugegeben und gut gemischt. Die Lösung wurde filtriert und sterilisiert und in gewünschten Mengen (100-μl-Aliquot war ausreichend für vier Platten) aliquotiert. Dies ergab eine 0,5 mg/ml Stammlösung, die 1/100 zur Verwendung im Protokoll verdünnt wurde. Unmittelbar vor der Anwendung wurde die LPS-Stammlösung 1/100 (100 μl in 10 ml RPMI) verdünnt.
Testverfahren
Der Test wurde in einer U-Boden-Platte mit 96 Vertiefungen (von Costar) durchgeführt. Zwei Kontrollen wurden in jeden Test eingeschlossen, plus und minus LPS in Abwesenheit der Verbindung. Alle Proben und Kontrollen wurden in dreifacher Ausführung durchgeführt.
Humanes Vollblut (von Spendern, die für mindestens 14 Tage keine Arzneigabe erhalten hatten, keinen Alkohol für 48 Stunden) wurde in siliconisierten Vacutainern gesammelt, die Heparin (19 Einheiten/ml) enthielten. Ein 25-μl-Aliquot von 5 % DMSO in RPMI 1640 wurde zu den Kontrollvertiefungen zugegeben (Plus- und Minus-LPS-Kontrollen). 25-μl-Aliquots jeder Verbindungskonzentration, die vorstehend hergestellt wurden, wurden in gekennzeichnete Vertiefungen abgegeben. 200 μl humanes Vollblut wurde zu jeder Vertiefung zugegeben und es wurde bei 37 °C und 5 % CO₂ für 30 min inkubiert. 25 μl verdünntes LPS wurde in alle Vertiefungen abgegeben mit Ausnahme der Minus-LPS-Kontrolle-Vertiefungen. 25 μl RPMI wurden zu den Minus-LPS-Kontrolle-Vertiefungen zugegeben.
Die Platten wurden bei 37 °C und 5 % CO₂ für 18 Stunden inkubiert. Nach der Inkubation wurden die Platten bei 400 × g zu Zellpellets zentrifugiert und das Plasma wurde gesammelt, wobei darauf geachtet wurde, das Pellet nicht zu zerstören. Das Plasma wurde zu einer neuen Polypropylenplatte mit 96 Vertiefungen überführt. ELISA wurde sofort durchgeführt und das restliche Plasma wurde bei -20 °C für den Fall, das es für erneutes Testen benötigt wird, gelagert.
ELISA-Protokoll
Der IL-1β-ELISA verwendete zwei Anti-IL-1β monoklonale Antikörper: ILβ1-H6 (1 mg/ml) und ILβ1-H67 (2,71 mg/ml).
Materialien
Rekombinantes humanes IL-1β (rhuIL-1β, 2,5 μg/ml) wurde von R&D Systems erhalten. Phosphatgepufferte Dulbecco-Salzlösung (1XPBS) wurde von Gibco-BRL erhalten. Phosphatgepufferte Salzlösung (10XPBS) wurde von Gibco-BRL erhalten. Dulbecco-Modifikation ohne Calcium und Magnesium, pH-Wert 7,2. Die ungeöffneten Flaschen wurden bei RT gelagert. ELISA-Inkubationspuffer (EIB): – 0,1 % BSA/PBS; 1 g Rinderserumalbumin (BSA); 100 ml 10XPBS; Zugeben von deionisiertem Wasser auf 1 Liter und Lagern bei 4 °C. ELISA-Waschpuffer (EWB): 0,05 % Tween/PBS; 0,5 ml Tween 20; 100 ml 10 × PBS; Zugeben von deionisiertem Wasser auf 1 Liter und Lagern bei 4 °C. Blockierungspuffer – 3 % fettarme Trockenmilch/PBS: 15 g fettarmes Trockenmilchpulver (Carnation); 50 ml 10XPBS; Zugeben von destilliertem Wasser auf 500 ml und Lagern bei 4 °C. Peroxidase-konjugiertes Streptavidin (von Pharmingen): Verdünnen auf etwa 1:3000 (10 μl/30 ml) in EWB-Puffer. 0,1 M Citratpuffer, pH-Wert 4,5; 9,6 g Citronensäure (MG 192,1, von Sigma); 14,7 g Trinatriumcitrat (MG 294,1, von Sigma); Einstellen auf pH-Wert 4,5 unter Verwendung von NaOH und Zugeben von destilliertem Wasser auf 500 ml. Lagern bei 4 °C. OPD-Substratlösung: 1 mg/ml OPD/0,03 % H₂O₂/Citratpuffer; 1 Tablette o-Phenylendiamin (OPD, von Zymed); 12 μl von 30 % Wasserstoffperoxid; 12 ml 0,1 M Citratpuffer.
Herstellen der Standards (unmittelbar vor dem Ausbringen auf die Platte frisch herstellen)
Es wurde eine Stammlösung von rhuIL-1β (2,5 μg/ml) verwendet, um eine Standardkurve zu konstruieren. Die Konzentrationen für die Kurve sind: 12500, 4167, 1389, 463, 154, 51 und 17 pg/ml. Die Röhrchen wurden mit 1-8 markiert. rhuIL-1β Stammlösung wurde 1/500 verdünnt (3 μl Stammlösung + 597 μl EWB) in Röhrchen 1. 400 μl EWB wurden in die Röhrchen 2-8 abgegeben. Von Röhrchen 1 wurden 200 μl in Röhrchen 2 überführt und verwirbelt. 200 μl wurden von Röhrchen 2 zu Röhrchen 3 überführt. Wiederholen dieses Vorgangs bis zu Röhrchen 7. Röhrchen 8 wurde als ELISA-Test-Leerwert verwendet. Die Plasmaproben wurden 1:4 in EWB (20 μl Plasma + 60 μl EWB) verdünnt.
Herstellung der Antikörperlösungen
Der Antikörper ILβI-H6 wurde 1/100 in 1XPBS verdünnt, um eine 10-μg/ml-Lösung zu erzeugen. Pro Platte wurden 50 μl Antikörper in 5 ml PBS verdünnt. Antikörper ILβ1-H67 wurde 1/100 in EWB verdünnt, um eine 2-μg/ml-Lösung zu erzeugen. Pro Platte wurden 3,69 μl Antikörper in 5 ml EIB verdünnt.
Verfahren
EIA-Platten mit 96 Vertiefungen wurden mit 50 μl pro Vertiefung Antikörper ILβ1-H6 (10 μg/ml) beschichtet, sanft geschüttelt, um jegliche Luftblasen zu beseitigen und mit einem Plattenversiegler versiegelt und in einer befeuchteten Kammer über Nacht bei 4 °C inkubiert. Die Platten wurden geleert und auf einem fusselfreien Papiertuch trockengetupft. Nichtspezifische Bindungsstellen wurden mit 175 μl Blockierungspuffer pro Vertiefung für 1-2 Stunden bei RT blockiert. Die Platten wurden einmal mit EWB gewaschen (d. h. leere Platte mit 150 μl EWB befüllt, geleert und auf einem fusselfreien Papiertuch trockengetupft). 25-μl-Aliquots des Standards in dreifacher Ausführung wurden den entsprechenden Vertiefungen zugegeben. (Jede Platte weist ihre eigene Standardkurve auf.) Ein 25-μl-Aliquot verdünntes Plasma wurde der entsprechenden Vertiefung zugegeben. Allen Vertiefungen wurden 25 μl biotinylierter monoklonaler Antikörper ILβ1-H67 (2 μg/ml) zugegeben. Die Platten wurden mit einem Plattenversiegler versiegelt und für 2 Stunden bei RT (oder über Nacht bei 4 °C), während sanft geschüttelt wurde (Bellco Mini-Orbital Shaker, Einstellung 3,5), inkubiert. Nach der Inkubation wurden die Platten 3 × mit EWB (wie vorstehend beschrieben) gewaschen. Ein 50-μl-Aliquot von Peroxidase-Streptavidin, verdünnt 1:3000 in EIB, wurde jeder Vertiefung zugegeben. Die Platten wurden mit einem Plattenversiegler versiegelt, für 1 Stunde bei RT, während sanft geschüttelt wurde, inkubiert und 3 × wie vorstehend beschrieben gewaschen.
Eine OPD-Tablette wurde in Citratpuffer gelöst (1 Tablette/12 ml Citratpuffer) und 12 μl 30 % H₂O₂ wurde zu dem OPD/Citratpuffer zugegeben. Es wurden 50 μl OPD-Substratlösung an jede Platte abgegeben und die Platten wurden in Dunkelheit für 30 min bei RT zur Farbentwicklung inkubiert. Die Platten wurden bei zweifacher Wellenlänge gelesen: Probenfilter = 450 nm/Referenzfilter = 650 nm. Die Werte der Proben, welche den Standard enthielten, wurden verwendet, um eine Standardkurve (Extinktion vs. Konzentration) graphisch darzustellen, die verwendet wurde, um die Konzentrationen unbekannter Proben zu bestimmen.
Statistisches Verfahren
Wenn die Konzentrations-Hemmungskurve auf jeder Seite keine Punkte von 50 % einschließt, dann wurde die IC₅₀ als > höchste Konzentration oder < niedrigste Konzentration angezeigt. Andererseits, wenn die Konzentrationszahl ≥ 5 ist, wurden die Daten nach dem folgenden 2-Parametermodell angepasst, um eine IC₅₀ zu berechnen:
Dieses Modell geht davon aus, dass die minimale und die maximale Reaktion 0 % beziehungsweise 100 % waren, und berechnet die IC₅₀ und den Anstiegsparameter. Wenn die nichtlineare Regression versagt oder die Anzahl der getesteten Konzentrationen < 5 war, wurde lineare Regression verwendet, um die IC₅₀ unter Verwendung der 2 Punkte zu berechnen, die an 50 % angrenzen. Wenn lineare Regression verwendet wurde, um die IC₅₀ zu berechnen, wurde dies in den Testanmerkungen angegeben und kann auch am Vorhandensein (nonlineare Regression) oder dem Fehlen (lineare Regression) des IC₅₀ Standardfehlers und des Anstiegsparameters gesehen werden.
Es wurde unter Verwendung des vorstehenden Tests gezeigt, dass die Verbindungen der Erfindung die LPS-induzierte IL-1β-Produktion in unverdünntem humanen Vollblut über die Hemmung der p38-MAP-Kinase, welche die IL-1β-Produktion wie vorstehend angemerkt vermittelt, hemmen. Die Verbindungen der Erfindung zeigen IC₅₀-Werte für die LPS-induzierte IL-1β-Produktion in unverdünntem humanen Vollblut im Bereich von < 0,001 μM bis 0,30 μM. Zum Beispiel zeigte 6-(2,4-Difluorphenoxy)-8-((R)-2-hydroxypropyl)-2-(tetrahydropyran-4-ylamino)-8H-pyrido[2,3-d]pyrimidin-7-on eine IC₅₀ von 0,001 μM.
Überraschenderweise ist die Hemmung der LPS-induzierten IL-1β-Produktion unter Verwendung von Verbindungen der Erfindung, wobei R² der Formel (I) Hydroxyalkyl oder Alkoxyalkyl ist, wesentlich größer als die Ergebnisse aus den entsprechenden Verbindungen, wobei R² Methyl oder ein anderes Alkyl ist. Dieser unerwartete Vorteil der Erfindung ist vollständiger in Tabelle 2 veranschaulicht, in der repräsentative Verbindungen der Erfindung, wobei R² (der Formel I) Hydroxyalkyl ist, mit den entsprechenden Analoga verglichen werden, wobei R² Methyl ist). Die Verbindungen in der ersten oder der äußersten linken Spalte von Tabelle 1 werden wie in den Beispielen hierin beschrieben hergestellt und werden auch in Tabelle 1 gezeigt. Die Verbindungen in der zweiten oder mittleren Spalte von Tabelle 2 wurden gemäß den in WO 02/064594 vorgetragenen Verfahren hergestellt. Die Werte in der dritten oder äußersten rechten Spalte entsprechen dem Quotienten:
(IC₅₀-Hemmung der IL-1β-Produktion, wobei R² = Hydroxyalkyl)/(IC₅₀-Hemmung der IL-1β-Produktion, wobei R² = Methyl).
Wie aus Tabelle 2 ersichtlich, stellen die Verbindungen, wobei R² Hydroxyalkyl ist, eine Hemmung der LPS-induzierten IL-1β-Produktion in unverdünntem humanen Vollblut bereit, die in der Größenordnung von 2,7 bis > 100 Mal, d. h. 270 % bis 10.000 %, größer ist als die entsprechender Methylanaloga (R² = Methyl). TABELLE 2
Die voranstehende Erörterung der Erfindung geschah zum Zweck der Veranschaulichung und Beschreibung. Das Voranstehende soll den Umfang der Erfindung auf die hierin offenbarte Form oder Formen nicht einschränken. Obwohl die Beschreibung der Erfindung die Beschreibung von einer oder mehreren Ausführungsformen und bestimmten Variationen und Modifikationen eingeschlossen hat, liegen andere Variationen und Modifikationen innerhalb des Umfangs der Erfindung, wie sie z. B. innerhalb des Könnens und Wissens von Fachleuten liegen können, nachdem die vorliegende Offenbarung verstanden worden ist.

Claims

Verbindung der Formel I
wobei X¹ O, C=O oder S(O)_n ist, wobei n 0, 1 oder 2 ist; Ar¹ Aryl oder Heteroaryl ist; R¹ Alkoxyalkyl, Alkyl, Cycloalkyl, Cycloalkylalkyl, Heterocyclyl, Hydroxyalkyl oder Hydroxycycloalkyl ist; und R² Hydroxyalkyl, Oxoalkyl oder Hydroxycycloalkyl ist.
Verbindung der Formel I nach Anspruch 1 mit der Formel II
wobei m 0 bis 4 ist; jeder Rest R³ Alkyl, Halogen, Alkoxy oder Halogenalkyl ist; und R¹ und R² wie in Anspruch 1 definiert sind.
Verbindung nach Anspruch 1 zur Verwendung als therapeutischer Wirkstoff.
Verfahren zur Herstellung einer Verbindung der Formel I nach Anspruch 1, umfassend das Umsetzen einer Verbindung der Formel If
wobei R C₁-C₆-Alkyl ist und X¹, Ar¹ und R² die in Anspruch 1 definierten Bedeutungen haben, mit einem Amin der Formel R¹-NH₂.
Verbindung der Formel I nach Anspruch 1, hergestellt gemäß dem Verfahren nach Anspruch 4.
Verwendung einer Verbindung der Formel I nach Anspruch 1 zur Herstellung eines Medikaments zur Bekämpfung oder Prävention einer durch p38-Kinase vermittelten Störung.
Zusammensetzung, umfassend einen pharmazeutisch verträglichen Exzipienien und eine Verbindung der Formel I nach Anspruch 1.
Verwendung einer Verbindung der Formel I nach Anspruch 1 zur Herstellung eines Medikaments zur Behandlung einer p38-Kinase-vermittelten Störung.
Verwendung nach Anspruch 8, wobei die p38-Kinase-vermittelte Störung Arthritis, Morbus Crohn, Reizkolon, Schocklunge, chronisch-obstruktive Lungenerkrankung oder Alzheimer-Krankheit ist.