DE60128932T2

DE60128932T2 - Photosensibilisatoren

Info

Publication number: DE60128932T2
Application number: DE60128932T
Authority: DE
Inventors: Stanley Beames Brown; Andrea Lucille Bell; John Griffiths; Jack Schofield
Original assignee: Photopharmica Ltd
Current assignee: Photopharmica Ltd
Priority date: 2000-09-23
Filing date: 2001-09-21
Publication date: 2008-02-21
Anticipated expiration: 2021-09-22
Also published as: WO2002024226A2; AU8791501A; AU2001287915B2; CA2423252A1; WO2002024226A9; NO20031310L; NO20031310D0; US20030180224A1; ES2287154T3; DE60128932D1; JP2004509151A; CA2423252C; DK1320383T3; ATE364397T1; NZ525420A; US7276494B2; CY1107735T1; EP1320383B1; GB0023367D0; WO2002024226A3

Description

GEBIET DER ERFINDUNG
Diese Erfindung betrifft chemische Verbindungen, die als Photosensibilisatoren wirken und bei einem Typ ärztlicher Behandlung, die als photodynamische Therapie (PDT) bekannt ist, sowie für die Diagnose und Erfassung von Krankheitszuständen und damit verbundene Anwendungen bei der photochemischen Internalisierung, bei der Herstellung von Krebsimpfstoffen und bei der Behandlung von Bakterieninfektionen, einschließlich Photodesinfektionen angewendet werden können.
ALLGEMEINER STAND DER TECHNIK
Die photodynamische Therapie wird bei der Behandlung von Krebs oder anderen Krankheiten angewendet. Bei dieser Behandlung wird eine lichtabsorbierende Verbindung (der Photosensibilisator) auf einen Tumor oder eine andere Läsion aufgebracht. Daraufhin wird Laserlicht zum Aktivieren des Photosensibilisators angewendet und das Tumorgewebe wird bei einem Vorgang zerstört, der als photodynamische Wirkung bekannt ist.
Wenn der Photosensibilisator Licht absorbiert, kann er eine kurzlebige, jedoch hochaktive Spezies, die als Singulettsauerstoff bekannt ist, erzeugen. Vom aktivierten Photosensibilisator wird auch ein Superoxidion, O₂ ^–, erzeugt. Singulettsauerstoff wird als das Hauptagens betrachtet, das gegen den Tumor wirksam ist, obwohl das Superoxidion ebenfalls daran teilnehmen kann.
Man glaubt, dass der Photosensibilisator die Blutzufuhr zu den bösartigen Zellen des Tumors zerstört, wodurch schließlich der Tumor des Sauerstoffs und der Nährstoffe beraubt wird. Alternativ kann der Photosensibilisator die direkte Zerstörung von Tumorzellen verursachen.
Ein zur Zeit bei der PDT angewandter Photosensibilisator besteht aus einer komplexen Mischung von Porphyrinen (cyclischen Tetrapyrrolen), die als Hämatoporphyrinderivate (HpD) bekannt sind. Eine handelsübliche Version von HpD ist als Photofrin^® bekannt. Obwohl in verschiedenen Ländern für die Behandlung verschiedener Tumortypen zugelassen, ist Photofrin von verschiedenen Einschränkungen, einschließlich des Anhäufens des Materials in der Haut über längere Zeit, behaftet, wodurch unter normalem Tageslicht eine unerwünschte Lichtempfindlichkeit induziert wird.
Es sind schon verschiedene andere Photosensibilisatoren zur Verwendung bei der PDT vorgeschlagen worden. Diese umfassen spezifische Porphyrine, Phthalocyanine, Naphthalocyanine und Chlorine. Es ist berichtet worden, dass sulfonierte Phthalocyanine besonders wirksam sind (Rosenthal, I., Photochem. Photobiol, 1991, 53, 859–70).
Photosensibilisatoren können auch bei der Diagnose und Erfassung von Krankheitszuänden angewendet werden. Bei diesen Anwendungen wird der Photosensibilisator dem Patienten entweder intern oder topisch verabreicht. Anormale Zellen nehmen den Photosensibilisator in stärkerem Maße auf als normale Zellen und dementsprechend weist, wenn Licht auf den zu untersuchenden Bereich aufgebracht wird, ein Bereich der anormale Zellen enthält, eine stärkere Fluoreszenz auf als ein Bereich, der nur normale Zellen enthält.
Tetrasulfonylaminoglycinzink(II)phthalocyanin (TGly) ist in J. Photochem. Photobiol B: Biology, 45 (1998) 28–35 als potentielles Agens für die PDT beschrieben worden. Die Leistungsfähigkeit von TGly als Photosensibilisator in nichtbiologischen Situationen ergibt günstigere Ergebnisse als zwei klinisch verwendete Photosensibilisatoren und zwei andere, die geprüft werden. Jedoch wies TGly eine relativ schlechte Fähigkeit auf, die Hämolyse von roten Blutzellen zu bewirken, und würde daher nicht als potentielles Agens zur Verwendung bei der PDT, bei der Diagnose oder bei der Erfassung, die im menschlichen oder tierischen Körper angewendet werden, in Betracht gezogen werden.
Im Allgemeinen gibt es verschiedene Erfordernisse sowohl chemischer als auch biologischer Art für einen nützlichen und klinisch wirksamen Photosensibilisator. Die chemischen Eigenschaften umfassen Reinheit, eine hohe Quantenausbeute an Singulettsauerstoff auf die Aktivierung hin, die Fähigkeit, durch Wellenlängen von Licht im roten bis infraroten Bereich aktiviert zu werden (da eine derartige Strahlung tief in das Gewebe eindringt) und Löslichkeit in Wasser. Jedoch besitzen Sensibilisatoren, die diese chemischen Kriterien erfüllen, nicht unbedingt vorteilhafte biologische Eigenschaften zur Anwendung bei der klinischen PDT. Diese Eigenschaften, die die Lokalisierung in Zielgeweben (z.B. Tumoren), einen Mangel an Hautlichtempfindlichkeit, ein schnelles Verschwinden aus dem Körper und eine geeignete subzelluläre Position umfassen, lassen sich aus der chemischen Struktur mit dem heutigen Wissen nicht vorherbestimmen.
ERFINDUNGSANGABEN
Der vorliegenden Erfindung gemäß wird eine Verbindung bereitgestellt zur Verwendung als Photosensibilisator bei der PDT, zur photochemischen Internalisierung bei der Herstellung von Krebsimpfstoffen oder der Diagnose oder Erfassung von Krankheitszuständen, wobei die Verbindung die Formel I
aufweist, wobei Phot ein photosensibilisierendes chromophores System, das heißt ein Radikal, das ein photosensibilisierendes chromophores System darstellt, derart, dass die molekulare Spezies [Phot]Hn in der Lage ist, Photooxidationen vom Typ I and Typ II zu sensibilisieren, X ein lineares oder verzweigtes Alkyl mit 0 bis 5 Kohlenstoffatomen ist, die wahlweise durch eine oder mehrere hydrophile Gruppen wie Hydroxy, Methoxy, Ethoxy oder Carboxy substituiert sein können, Y Wasserstoff oder ein lineares oder verzweigtes Alkyl mit 1 bis 5 Kohlenstoffatomen ist, die wahlweise durch eine oder mehrere Hydroxygruppen substituiert sein können, und n eine ganze Zahl von 1 bis 4 ist, bevorzugt ein pharmazeutisch akzeptables Salz derselben ist.
Bevorzugt ist Phot ein Rest eines Metallphthalocyanins, eines Benzoporphyrins, eines Purpurins, eines Chlorins oder eines Bacteriochlorins.
Eine bevorzugte Verbindung der vorliegenden Erfindung gemäß ist ein Phthalocyanin-(Pc-) Derivat, das die Formel II
aufweist, wobei R -NH-X-Co₂H ist, wobei bevorzugte Beispiele von X -CH₂- (oben als TGly und unten als TSZnPc-Glycin bezeichnet), -CH₂CH₂- (TSZnPc-β-Alanin), CH(CH₃)- (TSZnPc-α-Alanin), -(CH₂)₃- (TSZnPc-Aminobuttersäure), -(CH₂)₄ (TSBuPc-Aminovaleriansäure und -(CH₂)₅ (TSZnPc-Aminocaptonsäure) sind.
Beispiele anderer Verbindungen, die innerhalb des Umfangs der vorliegenden Erfindung fallen, sind wie folgt:

a) mono-, di- und trisubstituierte Analoge der oben gezeigten tetrasubstituierten Phthalocyaninstrukturen, das heißt Verbindungen der zuerst erwähnten allgemeinen Formel II, wobei n 1, 2 oder 3 beträgt;
b) Chloraluminium- und Hydroxyaluminiumanaloge der mono-, di-, tri- und tetrasubstituierten Zinkphthalocyanine;
c) Porphyrine, die eine oder mehrere der Sulfonylaminosäureseitenketten tragen;
d) Benzoporphyrine, die eine oder mehrere der Sulfonylaminosäureseitenketten tragen;
e) Chlorine, die eine oder mehrere der Sulfonylaminosäureseitenketten tragen, wie beispielsweise eine Verbindung, die durch die folgende Formel III
dargestellt ist, wobei R -NH-X-CO₂H ist und X eine lineare oder verzweigte Alkylkette mit 0–5 Kohlenstoffatomen ist;
und f) Bacteriochlorine, die eine oder mehrere der Sulfonylaminosäureseitenketten tragen, wie beispielsweise eine Verbindung der Formel III, in der eine Doppelbindung in einem der 5-gliedrigen Ringe fehlt.

Überraschenderweise sind erfindungsgemäße Verbindungen nicht nur als Photosensibilisierungsmittel äußerst wirksam, wenn sie in vivo verwendet werden, sondern verschwinden auch schnell aus dem Körper, weisen eine geringe oder keine Hautlichtempfindlichkeit auf und verursachen im Gegensatz zu anderen Sensibilisatoren keine unannehmbare Hautverfärbung.
Beispiele von Anwendungen der erfindungsgemäßen Verbindungen sind photosensibilisierende Arzneimittel für die PDT zum Behandeln von präkarzinomatösen Zuständen (z.B. Barrett-Ösophagus- und zervikaler Plattenepitheldysplasie), Krebs (z.B. Blasenkrebs und Colonkrebs), ophthalmologische Erkrankungen, wie Makuladegeneration, vaskuläre Probleme, wie Herz-Kreislauf-Erkrankungen, Arteriosklerose und Restenose und Autoimmunerkrankungen wie rheumatoide Arthritis, Hauterkrankungen wie Schuppenflechte, Akne und Hautekzem und andere gutartige Krankheitszustände wie Endometriose und Menorrhagie. Die Verbindungen können auch als antimikrobielle Behandlungen für Haut- und Wundinfektionen, andere örtliche Infektionen sowie bei der Behandlung von Zahnbakterienerkrankungen verwendet werden. Die Verbindungen können auch auf Grund ihrer photosensibilisierenden Eigenschaften bei der photochemischen Internalisierung und Herstellung von Krebsimpfstoffen und auf Grund ihrer fluoreszierenden Eigenschaften bei nichttherapeutischen Anwendungen wie beispielsweise bei der Photoerfassung und Photodiagnose verwendet werden. Erfindungsgemäße Verbindungen können bei der Behandlung, Diagnose und/oder Erfassung von Krankheitszuständen in verschiedenen Teilen des Körpers, einschließlich der Haut, den Lungen, des Hirns, der Augen, des Colon, der Blase, der Zervix und der Speiseröhre nützlich sein.
Es hat sich gezeigt, dass die Kombination des nichtionischen polaren Sulfonamidrests und der schwach sauren Carbonsäuregruppe zu der erfindungsgemäßen Verbindung führt, die eine gute Wasserlöslichkeit aufweist, was das einfache Formulieren geeigneter Zusammensetzungen zur Verwendung bei der ärztlichen Behandlung erlaubt.
Die vorliegende Erfindung bietet auch eine pharmazeutische Zusammensetzung umfassend eine Verbindung der Formel I zusammen mit einem oder mehreren Verdünnungsmitteln, Vehikeln oder Hilfsmitteln.
Die vorliegende Erfindung bietet auch eine Verbindung der Formel I, ausschließlich der Verbindung Tetrasulfonylaminoglycinzink(II)phthalocyanin. Die vorliegende Erfindung bietet zusätzlich die Verwendung einer Verbindung der Formel I bei der Herstellung eines Medikaments zur Behandlung eines Krankheitszustands durch photodynamische Therapie oder zur photochemischen Internalisierung bei der Herstellung eines Krebsimpfstoffes oder bei der Herstellung eines Mittels zur Verwendung als Photosensibilisator bei der Diagnose oder Erfassung eines Krankheitszustands.
GENAUE BESCHREIBUNG DER ERFINDUNG
Die Erfindung wird nun ausschließlich durch Beispiele unter Bezugnahme auf Photosensibilisatoren der Formel II veranschaulicht.
(A) Synthese von Sensibilisatoren
(I) TSZnPc-β-alanin
Synthese von Zinkphthalocyanintetrasulfonylchlorid
Verfahren 1
Das Natriumsalz von Zinkphthalocyanintetrasulfonsäure (5,0 g) wurde unter Rühren Chlorsulfonsäure (58 ml) bei Raumtemperatur hinzugegeben, dann 2 Stunden lang auf 55°C erhitzt. Thionylchlorid (7,5 ml) wurde dann langsam hinzugegeben und das Rühren weitere 4 Stunden bei 50–55°C fortgesetzt. Man ließ die Mischung abkühlen und sie wurde dann über Nacht bei Raumtemperatur gerührt, und dann wurde Eis unter kräftigem Rühren hinzugegeben, was ein Endvolumen von 500 ml ergab. Der blaue Feststoff wurde abfiltriert, gut mit Eiswasser gewaschen und soweit wie möglich in der Vakuumpumpe getrocknet. Der Filterkuchen wurde dann sofort für darauffolgende Reaktionen mit Aminen verwendet.
Verfahren 2
Einer gerührten Mischung von Zinkphthalocyanintetrasulfonsäure (4 g), Dimethylacetamid (10 ml) und Acetonitril (40 ml) wurde Phosphoroxychlorid (15 ml) im Laufe von 15 Minuten tropfenweise hinzugegeben. Die Mischung wurde dann auf 60°C erwärmt, 1 Stunde bei dieser Temperatur gehalten, auf Raumtemperatur abgekühlt, und dann wurde Eis/Wasser unter kräftigem Rühren hinzugegeben. Das ausgefällte Tetrasulfonylchlorid wurde abfiltriert, gut mit Eis/Wasser gewaschen, soweit wie möglich in der Filterpumpe getrocknet und der Filterkuchen wurde sofort für die Herstellung von Derivaten verwendet.
Umwandlung zu TSZnPc-β-alanin
Der Tetrasulfonylchloridfilterkuchen, der aus 5,0 Gramm Zinkphthalocyanintetrasulfonsäure hergestellt worden war, wurde einer Lösung von β-Alanin (12 g) in einer Mischung von Dimethylformamid (45 ml) und Dimethylacetamid (5 ml) hinzugegeben, wobei gleichzeitig verdünnte Natriumhydroxidlösung tropfenweise hinzugegeben wurde, um eine leichte Alkalinität sicherzustellen. Die Lösung wurde dann 12 Stunden lang bei Raumtemperatur gerührt, mit Wasser (100 ml) verdünnt und 1 Woche lang unter häufigem Wechseln des Wassers dialysiert. Die dialysierte Lösung wurde dann bis zur Trockne verdampft und im Ofen unter Bildung von TsZnPc-β-alanin (1,4 g) getrocknet.
Gefunden: C, 35,3; H, 3,3; N, 10,8 %
C₄₄H₃₂N₁₂O₁₆S₄ZnNa₄·12H₂O erfordert: C, 35,5; H, 3,8; N, 11,3 %
Molarer Absorptionskoeffizient = 124.260 l Mol^–1cm^–1 in DMF bei λ_max 672 nm
(2) TsZnPc-α-alanin
Das in Beispiel 1 beschriebene Verfahren wurde unter Anwendung von 5 Gramm Zinkphthalocyanintetrasulfonylchlorid und 12 Gramm α-Alanin wiederholt. Die dabei gebildete Lösung wurde 1 Woche lang unter häufigem Wechseln des Wassers dialysiert und dann bis zur Trockne verdampft und der Rückstand wurde in einem Ofen unter Erzielung von TsZnPc-α-Alanin (1,27 g) getrocknet.
Gefunden: C, 36,45; H, 3,55; N, 11,7 %
C₄₄H₃₂N₁₂O₁₆S₄ZnNa₄·10H₂O erfordert: C, 36,44; H, 3,59; N, 11,6 %
Massenspektrum (Elektrospray): Gefunden M 1180; C₄₄H₃₆N₁₂O₁₆S₄Zn erfordert M = 1180
Molarer Absorptionskoeffizient: 141,400 l Mol^–1cm^–1 in DMF bei λ_max 672 nm
(3) TsZnPc-Aminobuttersäure
Zinkphthalocyanintetrasulfonsäure (4,0 g) wurde zu Tetrasulfonylchlorid umgewandelt und der Filterkuchen wurde einer Lösung von 4-Aminobuttersäure (6,5 g) in Dimethylformamid (45 ml) und Dimethylacetamid (5 ml) hinzugegeben, während gleichzeitig eine verdünnte Natriumhydroxidlösung tropfenweise hinzugegeben wurde, um eine leichte Alkalinität beizubehalten. Die Lösung wurde 12 Stunden lang bei Raumtemperatur gerührt, mit Wasser (50 ml) verdünnt und 1 Woche lang unter häufigem Wechseln des Wassers dialysiert. Die dialysierte Lösung wurde dann bis zur Trockne verdampft und der Rückstand in einem Ofen unter Bildung von TsZnPc-Aminobuttersäure (1,11 g) getrocknet.
Gefunden: C, 39,4; H, 3,5; N, 12,5 %
C₄₈H₄₀N₁₂O₁₆S₄ZnNa₄·6H₂O erfordert: C, 40,2; H, 3,6; N, 11,7 %
Molarer Absorptionskoeffizient = 103.000 l Mol^–1cm^–1 in DMF bei λ_max 672 nm
(4) TsZnPc-Aminovaleriansäure
Zinkphthalocyanintetrasulfonsäure (5,0 g) wurde zu Tetrasulfonylchlorid umgewandelt und der Filterkuchen wurde einer Lösung von 5-Aminovaleriansäure (5 g) in Dimethylformamid (45 ml) und Dimethylacetamid (5 ml) hinzugegeben, während gleichzeitig verdünntes Natriumhydroxid tropfenweise hinzugegeben wurde, um eine leichte Alkalinität beizubehalten. Die Lösung wurde 12 Stunden lang bei Raumtemperatur gerührt, mit Wasser (50 ml) verdünnt und 48 Stunden lang unter häufigem Wechseln des Wassers dialysiert. Die dialysierte Lösung wurde dann bis zur Trockne verdampft und der blaue Rückstand in einem Ofen unter Bildung von TaZnPc-Aminovaleriansäure (1.40 g) getrocknet.
Gefunden: C = 40,0; H, 3,8; N, 11,75 %
C₁₂H₄₈N₁₂O₁₆S₄ZnNa₄·10H₂O erfordert: C, 40,0; H, 4,4; N, 10,8 %
Molarer Absorptionskoeffizient = 72.000 l Mol^–1cm^–1 in DMF bei λ_max 672 nm
(5) TsZnPC-Aminocapronsäure
Zinkphthalocyanintetrasulfonsäure (5,0 g) wurde zu Tetrasulfonylchlorid umgewandelt und der Filterkuchen wurde einer Lösung von 6-Aminocapronsäure (7,0 g) in Dimethylformamid (45 ml) und Dimethylacetamid (5 ml) hinzugegeben, während gleichzeitig eine verdünnte Natriumhydroxidlösung tropfenweise hinzugegeben wurde, um eine leichte Alkalinität beizubehalten. Die Lösung wurde 12 Stunden lang bei Raumtemperatur gerührt, mit Wasser (50 ml) verdünnt und 48 Stunden lang unter häufigem Wechseln von Wasser dialysiert. Die dialysierte Lösung wurde dann bis zur Trockne verdampft und der Rückstand in einem Ofen unter Bildung von TsZnPc-Aminocapronsäure (1,16 g) getrocknet.
Gefunden: C = 39,7 %; H = 3,8 %; N = 11,1 %
C₅₆H₅₆N₁₂O₁₆S₄ZnNa₄·10H₂O erfordert: C = 41,5 %; H = 4,7 %; N = 10,4 %
Molarer Absorptionskoeffizient = 106,000 l Mol^–1cm^–1 in DMF bei λ_max 672 nm
(b) Phototoxizität verschiedener Verbindungen für Zellen in der Kultur

Die folgende Tabelle (Tabelle 1) zeigt die photozytotoxische Aktivität verschiedener Verbindungen der vorliegenden Erfindung gemäß bezüglich des Abtötens von RIF-1 (muriner Fibrosarcom-) Zellen in der Kultur. Tabelle 1

Photosensibilisator	X	2 h LD₅₀ (μm) (Durchschnitt ± SD, n 3)
TSZnPc-glycin	-CH₂-	142 ± 37
TSZnPc-β-alanin	-(CH₂)₂-	109 ± 31
TSZnPc-α-alanin	-CH(CH₃)-	109 ± 39
TSZnPc-Aminobuttersäure	-(CH₂)₃-	90 ± 30
TSZnPc-Aminovaleriansäure	-(CH₂)₄-	125 ± 13
TSZnPc-Aminocapronsäure	-(CH₂)₅-	104 ± 14

[Phot] = Zinkphthalocyanin; n = 4; LD₅₀ ist die Konzentration an Arzneimittel, die notwendig ist, um einen 50 %-igen Zelltod in zwei Stunden Beleuchtung zu verursachen.
(C) Photoaktivität verschiedener Verbindungen Tumoren gegenüber
Es werden Daten in zwei Tiermodellen, der Ratte und der Maus, gezeigt. Vergleichende Daten sind auch für PHP (Photofrinanalog) aufgeführt. Die Wachstumsverzögerung ist ein Maß der zusätzlichen Zeit, die vergeht, während ein behandelter Tumor bis zu einer vorgegebenen Größe im Vergleich mit einem unbehandelten Tumor wächst. Eine Wachstumsverzögerung von Null bedeutet keine Wirkung und Wachstumsverzögerungen von 5 Tagen oder länger bedeutet eine wesentliche PDT-Aktivität. In beiden Modellen ist klar ersichtlich, dass gewisse erfindungsgemäße Verbindungen eine mindestens gleiche und in einigen Fällen wesentlich höhere Photoaktivität aufweisen als PEP (Photofrin).
(I) Durch PDT induzierte LSBD₁-Tumorwachstumsverzögerung in BDIX-Ratten
Subkutane Tumore wurden interstitiell mit Licht aus einem Cu-Dampffarbstofflaser (400 J, 100 mW bei 680 nm für Phthalocyanine und 630 nm für PEP) behandelt.
Die Tumorwachstumverzögerung wird als die Anzahl von Tagen berechnet, die vergehen, bis der behandelte Tumor einen durchschnittlichen Durchmesser von 15 mm erreicht hat, abzüglich der Anzahl von Tagen, die vergehen, bis ein Kontrolltumor einen Durchschnittsdurchmesser von 15 mm erreicht. Die Daten für verschiedene Verbindungen sind in Tabelle 2 gezeigt, in der auch die Zeiten (Arzneimittel-Lichtintervall) aufgeführt sind, bis zu denen die Auswirkungen erfolgt.

Die Figuren 1a) und 1c) zeigen die Tumorwachstumsverzögerung bei verschiedenen Arzneimittel-Lichtintervallen für die geprüften Verbindungen. Wo Fehlerbalken gezeigt sind, sind die angegebenen Daten die Durchschnittswerte von mindestens 3 Ratten ± s.e. 2 zeigt die beste Reaktion, die für jede geprüfte Verbindung erhalten wurde. 3 zeigt Lichtdosisreaktionskurven für PHP und das β-Alanin-pc-Derivat. Die Datenpunkte sind die Durchschnitte von 6 Ratten ± s.e. Tabelle 2 Wachstumsverzögerungen für verschiedene Verbindungen in Tagen

Arzneimittel	Arzneimittel-dosis (mg/kg)	Arzneimittel-Lichtintervall (h)
Arzneimittel	Arzneimittel-dosis (mg/kg)	2	4	6	24	48
TSZnPc-β-alanin	10	6 ± 0,62	10 ± 2,62	5,25 ± 1,59	2 (5 mg/kg)	2 (5 mg/kg)
TSZnPc-Glycin	5		8,5 ± 3,5		4,7 ± 0,75	4,5
TSZnPc-α-alanin	10		4,33 ± 0,83		6,67 ± 1,09	3,33 ± 0,73
TSZnPCy-γ-Aminobuttersäure	10		4,3 ± 1,44		7,83 ± 3,33	1,67 ± 1,53
PHP	10		7 ± 1,87		5,17 ± 0,17	2,5

(2) Bereich durch PDT induzierter Nekrose in CaNT-Tumoren (in CBA/Gy-Mäusen)
Subkutane Tumore wurden an der Oberfläche mit Licht aus einer Paterson-Xenon-Bogenlampe (60 J/cm², 50 mW/cm/²) behandelt. Für PHP wurde ein wurde ein Filter von 630 ± 15 nm angewendet, für das β-Alaninderivat wurde ein Filter von 685 ± 15 nm angewendet. 72 h nach der PDT wurden die Mäuse getötet und der Nekrosebereich in einem mittleren Abschnitt des Tumors bestimmt.
4 zeigt eine Dosis-Reaktionskurve für das β-Alaninderivat. In 5 werden PHP und das β-Alaninderivat in äquimolaren Mengen bei verschiedenen Arzneimittel-Lichtintervallen verglichen.
(D) Messungen der Hautlichtempfindlichkeit.
Die Lichtempfindlichkeit der Haut ist ein starkes Problem bei einigen der zur Zeit verwendeten Photosensibilisatoren. Patienten müssen manchmal nach dem Verabreichen von Arzneimitteln mehrere Wochen lang das Licht vermeiden. Die folgenden Daten zeigen die Einstufungen der Lichtempfindlichkeit der Haut gegen verschiedene erfindungsgemäße Verbindungen im Vergleich mit PHP (Photofrin) sowohl in Ratten- als auch Mäusemodellen. Es bestehen klare Vorteile darin, dass einige erfindungsgemäße Verbindungen eine sehr niedrige Hautlichtempfindlichkeit oder überhaupt keine aufweisen.
(1) Visuelles Beurteilen der Lichtempfindlichkeit der Haut an Nagetierhautstellen

Die Haut von Wistar-Ratten wurde enthaart und die Ratten wurden mit Sensibilisator (i.v.) in einer Menge von 0,5, 2,5 oder 10 mg/kg gespritzt. Nach 24 h wurde die Hautstelle einer breiten Bande von Weißlicht aus einer Xenon-Bogenlampe (91,8 J cm^–2) ausgesetzt. Die Lichtexposition wurde auf unbehandelter Haut 2 Wochen nach der Arzneimitteleinspritzung wiederholt. Die Hautreaktionen wurden Tabelle 3 gemäß eingestuft. Die Daten sind in Tabelle 4 und in 6 aufgeführt. Tabelle 3

Hautreaktion	Einstufung
Keine sichtbare Änderung	0
Zweifelhafte Änderungen, möglicherweise etwas vorübergehendes Erythem oder Ödem	1
Definitives Ödem oder Erythem, das innerhalb weniger Tage heilt	2
Starkes Ödem oder Erythem, das zur trockenen Abschuppung, Abschälung oder Krustenbildung führt	3
Gewebeverhärtungen mit gewisser Rötung oder trockener Abschuppung auf dem Behandlungsbereich (Ödem des umgebenden Bereichs)	4
Gewebeverhärtungen mit Erröten, die zur Schorfbildung auf einem Teil des behandelten Bereichs (Ödem des umgebenden Bereichs) führen	5
Gewebeverhärtungen mit Erröten, die zur Schorfbildung auf dem gesamten behandelten Bereich (Ödem des umgebenden Bereichs) führen	6
Keine definierten Behandlungsbereiche, Ödeme und ausgedehnte Nekrose auch im unbehandelten Bereich	7

Tabelle 4

Arzneimittel	Beurteilung der Haut (bei 10 mg/kg)
Arzneimittel	24 h Arzneimittel-Licht	2 Wochen Arzneimittel-Licht
PHG (N = 4)	4,75 ± 0,34	4,5 ± 0,35
TSZnPc-Glycin (n = 1)	3	1
TSZnPc-β-Alanin-Pc (n = 1)	2	0
TSZnPc-α-Alanin-Pc (n = 1)	2	2
TSZnPc-γ-Aminobuttersäure-Pc (n = 1)	2	2

(2) Reaktion in Form von Hautlichtempfindlichkeit/murine Ohrenanschwellung
CBA/Gy-Mäuse wurden mit Sensibilisator in einer Menge von 16,7 μMol/kg gespritzt. 24 h nach der Arzneimitteleinspritzung wurden die Ohren einer breiten Bande von Weißlicht aus einer Xenon-Bogenlampe (25 J/cm², 30 mW/cm²) ausgesetzt. Die Änderung der Ohrendicke wurde wie folgt gemessen: Als Ohrendicke 24 h nach der Beleuchtung abzüglich der Ohrendicke vor der Beleuchtung. Die Lichtexposition und Ohrenmessungen wurden 2 Wochen nach der Arzneimitteleinspritzung an dem bisher unbehandelten Ohr wiederholt. Die Ergebnisse sind in 7 gezeigt. Bei verstärkter Ohrendicke wird eine verstärkte Hautlichtempfindlichkeit gemessen.
(E) Hautverfärbung
Gewisse Photosensibilisatorarzneimittel können eine vorübergehende Hautverfärbung direkt auf die Verabreichung des Arzneimittels hin verursachen. Während dies eventuell kein körperliches Gesundheitsproblem darstellt, kann es psychologische Schwierigkeiten hervorrufen und die Behandlung kosmetisch unannehmbar machen. Die Verbindungen der vorliegenden Erfindung sind daher auf Hautverfärbung bis zu einer akzeptablen Grenze hin beurteilt worden. Die Daten sowohl bei Ratten- als auch Mausmodellen sind unten gezeigt.
(1) Hautverfärbung – Wistar-Ratten
Die Haut an den Ohren von Wistar-Ratten wurde enthaart und die Ratten wurden mit Sensibilisator in Mengen von 0,5, 2,5 oder 10 mg/kg gespritzt. Die Hautverfärbung wurde täglich mit Hilfe eines Kugel-Spektrophotometers gemessen und mit der Haut einer Kontrollratte (ohne Arzneimittel) verglichen. Die Ergebnisse sind in 8 für 10 mg/kg gezeigt.
(2) Hautverfärbung – CBA/Gy-Mäuse
Die Haut von CBA/Gy-Mäusen wurde enthaart und die Hautverfärbung mit Hilfe eines Kugel-Spektrophotometers gemessen. Die Mäuse wurden mit Sensibilisator in einer Menge von 16,7 μMol/kg gespritzt. Die Hautverfärbung wurde nach 10 min, 3 h, 24 h und daraufhin täglich 14 Tage lang oder noch innerhalb der Kontrollniveaus gemessen. Die Ergebnisse sind in 9 gezeigt.

Claims

Verbindung zur Verwendung als Photosensibilisator bei der PDT zur photochemischen Internalisierung bei der Herstellung von Krebsimpfstoffen oder der Diagnose oder Erfassung von Krankheitszuständen, wobei die Verbindung die Formel I
aufweist, wobei Phot ein photosensibilisierendes chromophores System ist, X ein lineares oder verzweigtes Alkyl mit 0 bis 5 Kohlenstoffatomen ist, die wahlweise durch eine oder mehrere hydrophile Gruppen substituiert sein können, Y Wasserstoff oder ein lineares oder verzweigtes Alkyl mit 1 bis 5 Kohlenstoffatomen ist, die wahlweise durch eine oder mehrere Hydroxygruppen substituiert sein können, und n eine ganze Zahl von 1 bis 4 ist, oder ein Salz derselben.
Verbindung nach Anspruch 1, wobei Phot ein Rest eines Metallphthalocyanins, eines Benzoporphyrins, eines Purpurins, eines Chlorins oder eines Bacteriochlorins ist.
Verbindung nach Anspruch 1, die die Formel II
aufweist, wobei R -NH-X-Co₂H ist, wobei X die in Anspruch 1 angegebene Definition besitzt.
Verbindung nach Anspruch 1, wobei X -CH₂-, -CH₂CH₂-, CH(CH₃)-(CH₂)₃- oder -(CH₂)₄- ist.
Pharmazeutische Zusammensetzung umfassend eine Verbindung nach einem der vorhergehenden Ansprüche zusammen mit einem oder mehreren Verdünnungsmitteln, Vehikeln oder Hilfsmitteln.
Verbindung der Formel I wie in Anspruch 1 definiert oder pharmazeutisch akzeptables Salz derselben ausschließlich der Verbindung Tetrasulfonylaminoglycinzink(II)phthalocyanin.
Verwendung einer Verbindung der Formel I wie in Anspruch 1 definiert bei der Herstellung eines Medikaments zur Behandlung eines Gesundheitszustands durch photodynamische Therapie oder zur photochemischen Internalisierung bei der Herstellung eines Krebsimpfstoffes oder bei der Herstellung eines Mittels zur Verwendung als Photosensibilisator bei der Diagnose oder Erfassung eines Krankheitszustands.