DE60127443T2

DE60127443T2 - Die zusammensetzung einer hochfunktionalen alkalischen mehrzweck-lösung, ihre herstellung und ihre verwendung als unspezifischer immunstimulator

Info

Publication number: DE60127443T2
Application number: DE60127443T
Authority: DE
Inventors: Soo-Il Ansung-City CHOI; Hyun-Suk Ansung-City CHOI; Kyung-Soo Ansung-City JEON; Byung-Woo Songpa-Gu YOO; Yong-Ho Guanak-Gu PARK
Original assignee: Barodon-Sf Corp Ansung; Barodon-SF Corp
Current assignee: Barodon-Sf Corp Ansung; Barodon-SF Corp
Priority date: 2000-11-23
Filing date: 2001-01-03
Publication date: 2007-07-12
Anticipated expiration: 2021-01-04
Also published as: JP4756015B2; KR100331952B1; JP2008001714A; ATE357240T1; US6899900B2; DE60127443D1; CN1356061A; AU2712001A; RU2257903C2; CA2427856C; CN1254199C; CA2427856A1; EP1339415B1; US6447810B1; EP1339415A1; AU2001227120B2; EP1339415A4; US6673375B2; US20020098980A1; MXPA03004455A

Description

1. Gebiet der Erfindung
Die vorliegende Erfindung betrifft die Zusammensetzung einer hoch funktionellen alkalischen Mehrzweck-Lösung, ein Herstellungsverfahren dafür und die Verwendung davon als unspezifischer Immunstimulator. Genauer gesagt betrifft die vorliegende Erfindung die Zusammensetzung einer alkalischen Lösung, die hauptsächlich Natriummetasilikat (Pentahydrat) umfasst und die unspezifisch das Immunsystem stimulierende Wirkungen zeigt, einschließlich der Produktion von Antikörpern und einer Verbesserung des Immunsystems, indem Immunzellen aktiviert werden, wodurch die Wirkung von Impfungen gegen gefährliche Viruserkrankungen maximiert wird, die Herstellung davon und die Verwendung davon als Immunstimulator.
2. Beschreibung des Standes der Technik
Seit Beginn des 20. Jahrhunderts wird der Funktion der alkalischen Masse im Körper großes Interesse beigemessen. Umfassende Forschungsarbeiten haben kürzlich ergeben, dass die alkalische Masse des Körpers die Ionisierungsgeschwindigkeit von Kalium und Natrium erhöht und so die Reinigungsfähigkeit von Blut verbessert, was zu einer Blutreinigung, weniger Ermüdung und einer Verlangsamung des Alterns führt.
Das Koreanische Patent Nr. 128,110, das dem vorliegenden Erfinder erteilt wurde, offenbart die Zusammensetzung einer alkalischen Lösung, die 10-18 Gewichtsteile von Natriumsilikat, 0,1-0,5 Gewichtsteile von Natriumhyperoxid, 5-10 Gewichtsteile von Kaliumkarbonat, 1 Gewichtsteil von Natriumkarbonat, 10-18 Gewichtsteile von raffinertem Zucker und 0,1-3,0 Gewichtsteile von Silberthiosulfat in Wasser umfasst. Diese Zusammensetzung wird derzeit aufgrund ihrer hohen Strahlungsleistung im oberen Infrarotbereich, ihrer antibakteriellen Wirkung und ihrer desodorierenden Wirkung zur Nachbehandlung von Faserprodukten und Fermentierung von Tierfutter und in der Agrarindustrie verwendet. Die Zusammensetzung weist jedoch den Nachteil auf, dass ihre Herstellung kompliziert und ihre Lagerung über einen längeren Zeitraum schwierig ist.
Andererseits nimmt der jährliche Verbrauch an Antibiotika weltweit zu. Je mehr Antibiotika jedoch verwendet werden, desto schwer wiegender die Nebenwirkungen. So sind beispielsweise zur Behandlung von Patienten, die zu viel verschreibungspflichtige Antibiotika eingenommen haben, höhere Antibiotika-Dosen erforderlich, da sie gegenüber Antibiotika resistent geworden sind. Ferner hat Missbrauch und Abusus von Antibiotika zum Auftreten von Superbakterien geführt, die gegenüber vorhandenen Antibiotika vollständig immun sind. Bei den Anstrengungen, die Verwendung von Antibiotika einzuschränken, wurde auch eine allgemeine Verbesserung des körpereigenen Immunsystems in Erwägung gezogen, was zu einer Verbesserung der Impfwirkung führt. Beispielsweise sind unspezifische Immunstimulatoren (nachstehend als "UIS" bezeichnet), die im Körper eine verstärkte Immunantwort auf externe Pathogene induzieren, derzeit für Mediziner von großem Interesse und die Entwicklung von UIS steht weltweit im Brennpunkt umfassender, intensiver Forschungsarbeiten.
Aus Japan wurde berichtet, dass ein Bestandteil, der aus einem Speisepilz (Lentinus edoddes) extrahiert wurde, gegen Krebs wirksam ist. Ferner wurden UIS vor hundert Jahren in Bakterien beobachtet. Neben der Wirkung bei der Bildung von Antikörpern und der Induzierung von Zytokinen wird derzeit die Verstärkung des Immunsystems durch UIS aktiv untersucht. So wird berichtet, dass ein Zellwandextrakt von Norcardia opaca die Aktivierung von Makrophagen induziert, die aus der Bauchfellhöhle von Mäusen stammen (Barot-Ciobaru et al., 1987). Es hat sich erwiesen, dass auch RU41740 von Klebsiella pneumoniae, KP-40 von Propionibacterium avidum und QH-B von Quillaja saponaria nützliche Funktionen in Verbindung mit der Induzierung von Zytokinen und der Stimulierung von Immunzellen zeigen (Bessler et al., 1997; Nimier et al., 1999; Ronnberg et al., 1997; Siwiki et al., 19988; Tewari et al., 1996). Kürzlich wurde bekannt, dass bakterielle von DNA-abgeleitete CPG-Motive, Immunstimulatormotive genannt, wirksam die Expression von IL-6, IL-12, IL-18 und IFN-y in Immunzellen induzieren (Bohle et al., 1999; Klinman et al., 1999; Krieg, 1999).
Diese und andere bisher entwickelte UIS haben den Nachteil, dass sie in komplizierten Verfahren hergestellt werden, ungeeignet für die langfristige Aufbewahrung und teuer sind.
BESCHREIBUNG DER ERFINDUNG
Angesichts der Probleme bekannter Stoffe besteht die Aufgabe der vorliegenden Erfindung in der Bereitstellung einer Zusammensetzung einer alkalischen Lösung, deren Herstellung einfach ist, die eine lange Haltbarkeit hat, die die Vermehrung von Bakterien und Viren hemmt und die als unspezifischer Immunstimulator dienen kann.
Eine weitere Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist die Bereitstellung eines Verfahrens zur Herstellung einer solchen Zusammensetzung einer alkalischen Lösung.
Eine weitere Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist die Bereitstellung von Verwendungen für eine solche Zusammensetzung einer alkalischen Lösung.
Noch eine weitere Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist die Bereitstellung von Verfahren zur Erhöhung der Geschwindigkeit der Gewichtszunahme von Nutztieren und Ernteerträgen.
Noch eine weitere Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist die Bereitstellung eines Verfahrens zum Frischhalten von landwirtschaftlichen Produkten, Fischen oder Fleisch über einen langen Zeitraum.
Noch eine weitere Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist die Bereitstellung eines nicht toxischen unspezifischen Immunstimulators, der gegen Krebs wirksam ist.
KURZE BESCHREIBUNG DER ZEICHNUNGEN
Die vorstehend genannten und anderen Aufgaben, Merkmale und weiteren Vorteile der vorliegenden Erfindung ergeben sich in größerer Deutlichkeit aus der nachfolgenden Beschreibung und unter Bezugnahme auf die beiliegende Zeichnung. Es zeigen:
1 eine Kurve, in der die Veränderung des Anteils an Schweine-CD4⁺-T-Lymphozyten bei mit BARODON^® gefütterten Gruppen und der Kontrollgruppe als Funktion der Zeit dargestellt ist;
2 eine Kurve, in der die Veränderung des Anteils an Schweinezellen mit MHC Klasse II bei mit BARODON^® gefütterten Gruppen und der Kontrollgruppe als Funktion der Zeit dargestellt ist;
3 eine Kurve, in der die Veränderung des Anteils an Schweine-Nicht-T-Nicht-B-Lymphozyten (N-Lymphozyten) als Funktion der Zeit dargestellt ist;
4 eine Kurve, in der die Veränderung des Anteils an Schweine-CD8⁺-T-Lymphozyten bei mit BARODON^® gefütterten Gruppen und der Kontrollgruppe als Funktion der Zeit dargestellt ist;
5 ist ein Säulengramm, in dem die Lymphproliferation von Schweinelymphozyten, die aus dem peripheren Blut von mit BARODON^® gefütterten Gruppen und der Kontrollgruppe isoliert wurden, als Reaktion auf die Stimulierung mit Con A, PHA, PWM und LPS dargestellt ist;
6 ist ein Säulengramm, in dem die Lymphproliferation von Schweinelymphozyten, die aus den Mesenteriallymphknoten von mit BARODON^® gefütterten Gruppen und der Kontrollgruppe isoliert wurden, als Reaktion auf die Stimulierung mit Con A, PHA, PWM und LPS dargestellt ist;
7 eine Kurve der Produktivität von Antischweinepest-Antistoffen bei den mit BARODON^® gefütterten Gruppen und der Kontrollgruppe;
8 eine Kurve, in der die Veränderung der Ca-ATPase-Aktivität im Muskelfleisch von Kabeljau bei mit BARODON^® gefütterten Gruppen und der Kontrollgruppe als Funktion der Aufbewahrungszeit dargestellt ist;
9 ein NMR-Spektrum mit der Absorptionswellenlänge für ¹⁷O von Leitungswasser; und
10 und 11 NMR-Spektra mit der Absorptionswellenlänge für ¹⁷O von Wassermolekülen in einer wässrigen Lösung, die die erfindungsgemäße Zusammensetzung enthält.
GENAUE BESCHREIBUNG DER ERFINDUNG
Die vorliegende Erfindung betrifft einen UIS auf der Grundlage einer Zusammensetzung einer alkalischen Lösung. Diese Zusammensetzung umfasst Natriummetasilikat, Borax, Natriumthiosulfat, Kaliumkarbonat, raffinierten Zucker und Wasser, fakultativ Natriumchlorid, Silberthiosulfat und/oder Natriummolybdat.
Das in der vorliegenden Erfindung nützliche Natriummetasilikat weist fünf Wassermoleküle im Kristall auf und umfasst Siliziumdioxid (SiO₂) in einer Menge von 27,5-29,0% und Natriumoxid (Na₂O) in einer Menge von 28,5-30,0% mit einem Streubereich des Gehalts von weniger als 2%. Diese Verbindung ist im Vergleich zu im Handel erhältlichem flüssigem Natriumsilikat verhältnismäßig stabil. Natriummetasilikat, das in Form eines weißen Pulvers oder weißer Körner vorliegt, lässt sich einfach genau abwiegen und eignet sich für die längere Lagerung und den längeren Transport. Beim Lösen in Wasser zeigt Natriummetasilikat eine hohe Alkalinität. Silizium ist wie die anderen Bestandteile von Natriummetasilikat ein wesentliches Element für das Wachstum von Tieren und Pflanzen.
Borax mit zehn Wassermolekülen im Kristall hat eine spezifische Dichte von 1,715. Bor (B), ein Bestandteil von Borax, ist ein Spurenelement, das bei Tieren und Pflanzen häufig nicht ausreichend vorhanden ist. Obstbäume in Erde ohne einen ausreichenden Borgehalt tragen nicht gut und ihre Früchte, so sie denn produziert werden, zeigen Schäden. Im Allgemeinen wird Borax als Abwehrmittel gegen Bakterien und Insekten, als Blut stillendes Mittel und als Glasurmaterial verwendet. Beim Schmelzen zusammen mit Metallen löst Borax die Metalle. Eine Boraxlösung in Wasser ist alkalisch und weist einen pH-Wert von etwa 9,5 auf. In der erfindungsgemäßen Zusammensetzung ist die Menge an Borax vorzugsweise in einem Bereich von 1-15 Gewichtsteilen bezogen auf 100 Gewichtsteile von Natriummetasilikat eingestellt. Wenn Borax beispielsweise in einer Menge von weniger als 1 Gewichtsteil verwendet wird, zeigt es keine Wirkung. Wenn der Boraxanteil andererseits mehr als 15 Gewichtsteile überschreitet, kann Toxizität auftreten.
Mit fünf Wassermolekülen im Kristall ist Natriumthiosulfat nicht in Alkohol, aber in Wasser löslich und hinterlässt einen charakteristischen salzigen Geschmack. Die wässrige Lösung ist neutral, der pH-Wert liegt im Bereich 6,5-8,0. Aufgrund der chemischen Eigenschaft, Silberhalogenide oder andere Silbersalze zu lösen, wird Natriumthiosulfat im Allgemeinen zum Extrahieren von Silber aus Erzen verwendet. Darüber hinaus findet Natriumthiosulfat Anwendung beim Entfernen von Chlor und Schwermetallen. In der vorliegenden Erfindung wird Natriumthiosulfate in einer Menge von etwa 10^–5-10^–4 Gewichtsteilen bezogen auf 100 Gewichtsteile von Natriummetasilikat verwendet. Beispielsweise kann bei einem Gehalt an Natriumthiosulfat, der unterhalb des unteren Grenzwerts liegt, keine zusätzliche Wirkung erzielt werden. Andererseits kommt es bei einem Gehalt, der den oberen Grenzwert für Natriumthiosulfat überschreitet, zur Ausfällung von Ca im Gewebe, was bei Tieren zu Erregung und flüssigem Stuhl führt.
Kaliumkarbonat löst sich gut in Wasser und seine Lösung hat mit einem pH-Wert von 11,6 eine hohe Alkalinität. Kalium ist wie Natrium ein essenzielles Element des Körpers und spielt eine wichtige Rolle im Stoffwechsel und im Blutkreislauf. Beispielsweise ist ein ausgeglichenes Gleichgewicht von Kalium und Natrium in vivo erforderlich, um Bluthochdruck und Diabetes mellitus zu verhindern. In der erfindungsgemäßen Zusammensetzung liegt eine bevorzugte Menge an Kaliumkarbonat in einem Bereich von 30-150 Gewichtsteilen bezogen auf 100 Gewichtsteile von Natriummetasilikat. Bei der Verwendung bei beispielsweise Tieren und Pflanzen kann eine Menge an Kaliumkarbonat außerhalb dieses Bereichs das Natrium/Kalium-Gleichgewicht in vivo stören.
In der erfindungsgemäßen Zusammensetzung verhindert raffinierter Zucker eine Wiedervereinigung ionisierter anorganischer Materialien, sodass die Zusammensetzung stabilisiert wird. Darüber hinaus wandelt raffinierter Zucker anorganische Materialien in Materialien um, die aufgrund ihrer mit Zucker assoziierten Form organischen Materialien ähneln, und verbessert darüber hinaus die Adhäsion oder Adsorption der Zusammensetzung. Zucker kann diese Aufgaben erfüllen, wenn es in einer Menge im Bereich von 30-200 Gewichtsteilen bezogen auf 100 Gewichtsteile von Natriummetasilikat vorliegt.
Natriumchlorid, ein fakultativer Bestandteil der erfindungsgemäßen Zusammensetzung, wird als Natriumquelle zur Steuerung des Natrium/Kalium-Verhältnisses verwendet. Silberthiosulfat wird häufig zur Unterdrückung der Ethylensynthese in Pflanzen oder zur Verbesserung der Zelldifferenzierung bei Pflanzen verwendet. In einer wässrigen Lösung bildet Silberthiosulfat bei niedriger S₂O₃ ^2–-Konzentration [Ag(S₂O₃ ^2–)₂]^3– und bei hoher S₂O₃ ^2–-Konzentration [Ag2(S₂O₃ ^2–)₆]^10–. In der vorliegenden Erfindung dient Silberthiosulfat, das wie Natriumthiosulfat in einer mehrwertigen anionischen Form vorliegt, zur Verbesserung der Zelldifferenzierung. In der vorliegenden Erfindung dient Natriummolybdat als Quelle von Molybdän, ein Element, das bei Tieren und Pflanzen normalerweise nicht ausreichend vorhanden ist. Die fakultativen Bestandteile werden jeweils in einer Menge von 10^–1 Gewichtsteilen oder weniger bezogen auf 100 Gewichtsteile von Natriummetasilikat verwendet.
Nach vollständiger Lösung der Bestandteile weist die erfindungsgemäße Zusammensetzung eine elfenbeinfarbene Tönung auf. Die Zusammensetzung ist geruchlos und nicht giftig und darüber hinaus mit einer spezifischen Viskosität von 1,43-1,50 sehr stabil, hält den pH-Wert stabil auf 13 und hat einen Viskositätsbereich von 61,0-239,0. Insbesondere unterliegt die erfindungsgemäße Zusammensetzung auch bei Behandlung mit HCl weder einer Verfestigung noch Änderungen des pH-Werts.
Zahlreiche Versuchsergebnisse, die über einen längeren Zeitraum gesammelt wurden, zeigen, dass die erfindungsgemäße Zusammensetzung die Geschwindigkeit der Gewichtszunahme bei Nutzvieh und die Ernteerträge erhöht und sowohl bei Pflanzen als auch bei Tieren als ausgezeichneter UIS dient.
Die erfindungsgemäße Zusammensetzung kann an Nutzvieh zusammen mit anderem Futter verfüttert werden, beispielsweise in einer Mischung mit Futter oder nach der Fermentierung im Futter oder als Verdünnung in Wasser. Nach der Fütterung zeigt die Zusammensetzung hervorragende Verbesserungen des Immunsystems bei Nutzvieh. Die erfindungsgemäße Zusammensetzung dient beispielsweise als wirksame Vorbeugung bei der epidemischen epizootischen Virusdiarrhö und der Schweinepest, die in der industriellen Schweinezucht ernsthafte Probleme verursachen. Die Zusammensetzung hat sich auch bei der Prophylaxe und Behandlung der Pullorumseuche als wirksam erwiesen, bei der eine hohe Sterblichkeit für enorme Verluste in der Geflügelindustrie sorgt. Bei Milchkühen, an die die Zusammensetzung verfüttert wurde, wurde die Körperzellzahl pro Milchvolumen, einem Index zur Bestimmung der Milchqualität, gesenkt. Zu weiteren Wirkungen der erfindungsgemäßen Zusammensetzung bei Nutzvieh gehörten Wachstumsbeschleunigung und verbesserte Fleischqualität. In Ställen zur Unterbringung von Nutzvieh, das mit der erfindungsgemäßen Zusammensetzung gefüttert wurde, entwickelten sich weniger unangenehme Gerüche als in Ställen, die zur Unterbringung von mit normalem Futter gefüttertem Nutzvieh dienten.
Bei Pflanzen zeigte die erfindungsgemäße Zusammensetzung, die mit Düngemitteln vermischt oder mit Wasser verdünnt aufgebracht wurde, nützliche Wirkungen, einschließlich Wachstums- und Keimungsverbesserungen, erhöhter Widerstandskraft gegenüber Krankheiten, höherer Ernteerträge und besserer Qualität von Feldfrüchten usw.
Die vorliegende Erfindung wird anhand der folgenden Beispiele, die der Veranschaulichung dienen und nicht als Beschränkung der vorliegenden Erfindung aufzufassen sind, besser verständlich.
HERSTELLUNGSBEISPIEL 1
Natriummetasilikat (Pentahydrat, 300 kg), Borax (Decarbohydrat, 35 kg), Natriumthiosulfat (0,01 kg), Natriumchlorid (1 kg) und Kaliumkarbonat (150 kg) wurden nacheinander in gereinigtes Wasser (500 kg), das auf 60-80°C gehalten wurde, eingebracht und 3 Stunden lang zum Lösen gerührt. Die homogene Lösung wurde mit raffiniertem Zucker (450 kg) versetzt und weitere 4 Stunden lang gerührt, was eine alkalische Lösung mit pH 13 ergab (nachstehend als "BARODON^®-1" bezeichnet).
HERSTELLUNGSBEISPIEL 2
Das in Herstellungsbeispiel 1 hergestellte BARODON^®-1 (1.436 kg) wurde tropfenweise mit einer Lösung aus Silberthiosulfat (0,02 kg) in Wasser (1 l) versetzt, gerührt und 4 Stunden lang in einem Inkubator auf etwa 50°C gehalten. Die gebildete Lösung wurde als "BARODON^®-2" bezeichnet.
HERSTELLUNGSBEISPIEL 3
Natriummolybdat (Na₂MoO₄·2H₂O, 0,3 kg) wurde unter Rühren in gereinigtes, auf 100°C gehaltenes Wasser (5 l) gegeben, was eine farblose, geruchslose Lösung ergab, die dann trop fenweise zu BARODON^®-1 gegeben, gerührt und 4 Stunden lang in einem Inkubator auf etwa 50°C gehalten wurde. Die gebildete Lösung wurde als "BARODON^®-3" bezeichnet.
HERSTELLUNGSBEISPIEL 4
Unter Verwendung von 6 kg Borax und 300 kg Kaliumkarbonat wurde auf ähnliche Weise wie in Herstellungsbeispiel 1 eine alkalische Lösung erhalten. Diese alkalische Lösung (1.557 kg) wurde tropfenweise mit einer Lösung aus Silberthiosulfat (0,02 kg) in Wasser (1 l) versetzt und anschließend gerührt und 4 Stunden lang in einem Inkubator bei etwa 50 °C stehen gelassen. Die gebildete alkalische Lösung wurde als "BARODON^®-4" bezeichnet.
HERSTELLUNGSBEISPIEL 5
Das Verfahren in Herstellungsbeispiel 4 wurde unter Verwendung von 150 kg raffiniertem Zucker wiederholt, was eine alkalische Lösung mit einer verhältnismäßig niedrigen Viskosität ergab (nachstehend als "BARODON^®-5" bezeichnet).
BEISPIEL 1
Wirkung beim Reisanbau
BARODON^®-1 bis -5 wurden auf Auswirkungen bei der Verbesserung des Immunsystems und der Wachstumsbeschleunigung beim Anbau von Reispflanzen auf Reisfeldern geprüft.
BARODON^®-1 bis -5 wurden jeweils mit 10 Volumenteilen Wasser und dann erneut um das 500-Fache mit Wasser verdünnt. Reissamen wurden nach 24-stündigem Einweichen in der verdünnten Lösung auf Samenbeeten ausgesät. Zwei Tage vor dem Umsetzen der Reispflanzen von den Samenbeeten in die Reisfelder wurden die jungen Reispflanzen auf normale Weise mit den verdünnten Lösungen besprüht. Das Besprühen mit der verdünnten Lösung wurde zwei Wochen vor dem Anschwellen des Fahnenblatts (sichtbare Ähre) wiederholt.
Auf den Samenbeeten wuchsen die mit der erfindungsgemäßen Zusammensetzung behandelten jungen Reispflanzen verglichen mit einer Kontrollgruppe, die nicht mit der Zusammensetzung behandelt wurde, einheitlicher und kräftiger und erlitten keine Schäden aufgrund kalter Witterung. Außerdem wurde festgestellt, dass die mit der Zusammensetzung behandelten jungen Reispflanzen nur drei Tage nach dem Umsetzen vollständig verwurzelt waren. Während des Feldwachstums wurden die behandelten Reispflanzen von keiner Krankheit, einschließlich Auflaufkrankheit, Reisbrand und Blattscheidenweiße, befallen. Ferner zeigten die behandelten Reispflanzen eine höhere Standfestigkeit und nach einem Taifun keiner Entwurzelung, während 25% der Kontrollgruppe entwurzelt wurden.
Die Mengen an erzeugtem Reis wurden gemessen und die Ergebnisse gehen nachstehend aus Tabelle 1 hervor. TABELLE 1
BEISPIEL 2
Wirkung auf eine Birnbaumkultur
BARODON^®-3 wurde mit 9 Volumenteilen Wasser und dann erneut um das 500-Fache mit Wasser verdünnt. Nach dem Ausbringen von Mistdünger und organischen Düngern in einer Birnbaumplantage wurde die Verdünnung aufgesprüht. Danach wurde am Umkreis der Plantage ein Zaun aufgestellt, um Störungen durch Tiere zu verhindern. Etwa zwei Wochen vor der Blüte der Birnbäume wurden BARODON^®-2 auf den Boden gesprüht. Die mit der erfindungsgemäßen Zusammensetzung gedüngten Birnbäume blühten etwa 4-5 Tage früher und produzierten erntefähige Früchte etwa 15 Tage früher als eine Kontrolle, die nicht mit der Zusammensetzung gedüngt wurde. Die von den behandelten Bäumen geernteten Birnen erhielten die höchsten Noten für Aussehen, Größe und Brix-Grad. Bei den Birnen, die von den mit der Zusammensetzung gedüngten Bäumen geerntet wurden, war das Auftreten von Schwärze um 60% geringer als bei den Kontrollen und ihr Aussehen war glatter. In den behandelten Bäumen wurden keine weichen Birnen gefunden. Die mit der erfindungsgemäßen Zusammensetzung behandelten Birnbäume hatten 20% weniger Fallbirnen nach einem Taifun als die Kontrolle. Die Birnen von behandelten Bäumen waren etwa 15% größer als diejenigen der Kontrolle. Der Brix-Grad der Birnen von behandelten Bäumen wurde gemessen und lag im Bereich von 13,0 bis 15,0, was etwa 12% über dem der Kontrolle lag. Auch die Haltbarkeit war länger.
BEISPIEL 3
Auswirkung auf das Pflanzenwachstum
Eine 16-fache Verdünnung von BARODON^®-3 in Wasser wurde weiter mit den Verdünnungen gemäß Tabelle 2 unten verdünnt und dann auf die Blätter von Probepflanzen gesprüht. Es stellte sich heraus, dass die Blätter im Vergleich zu einer Kontrollgruppe, die nicht mit der Lösung behandelt wurde, 15,6% länger und 8,7% breiter waren sowie ein 7-47% höheres Frischgewicht aufwiesen. TABELLE 2
HERSTELLUNGSBEISPIEL 6
Das in Herstellungsbeispiel 2 hergestellte BARODON^®-2 wurde um das 10-Fache verdünnt und 500 g der gebildeten Verdünnung auf 1 Tonne Kombinationsfutter gesprüht, was ein hoch funktionelles Futter ergab (nachstehend als "BARODON^®-6" bezeichnet).
HERSTELLUNGSBEISPIEL 7
Eine 10-fache Verdünnung von in Herstellungsbeispiel 2 hergestelltem BARODON^®-2 in Wasser (10 l) wurde zusammen mit raffiniertem Zucker (3 kg), Natriumchlorid (1 kg) und Wasser (75 l) zu einem Kombinationsfutter (1 Tonne) gegeben und die gebildete Formulierung 24 Stunden unter Rühren fermentiert, was ein hoch funktionelles Futter ergab (nachstehend als "BARODON^®-7" bezeichnet).
BEISPIEL 4
Die Serie BARODON^® wurden hinsichtlich der Auswirkungen auf die Gewichtszunahme und die Verbesserung des Immunsystems bei Tieren wie folgt geprüft.
(1) Gewichtszunahme bei Schweinen
Es wurden 30 Tiere einer Kreuzung (Yorkshire × Landrace × Durroc) Mastschweine mit einem Alter von 15 Wochen (104 ± 4 Tage) ausgewählt. Sie wurden in 3 Schweineställen mit den Abmessungen 4 m × 4,2 m M mit jeweils 10 Tieren pro Stall untergebracht und konnten sich vor der Prüfung eine Woche lang an die neue Umgebung gewöhnen.
Das in Herstellungsbeispiel 6 hergestellte BARODON^®-6 wurde 9 Wochen lang an eine Gruppe mit 10 Schweinen (als "Tx-1-Gruppe" bezeichnet) in einem Stall verfüttert, während ein Futter mit 3% des in Herstellungsbeispiel 7 hergestellten BARODON^®-7 an eine Gruppe mit 10 Schweinen (als "Tx-2-Gruppe" bezeichnet) in einem anderen Stall verfüttert wurde. Dasselbe Futter ohne "BARODON^®" wurde an eine Kontrollgruppe verfüttert. Danach wurden alle Schweine mit normalem Futter gefüttert. Während der Prüfperiode hatten die Schweine freien Zugang zum Futter.
Gewichtszunahme und Futteraufnahme jeder Gruppe wurden über 6 Wochen gemessen und der Futteraufwand (Futteraufnahme/Gewichtszunahme) wurde ermittelt. Die durchschnittliche tägliche Gewichtszunahme wurde mit 842,86 g bei der Kontrollgruppe, 890,48 g bei der Tx-1-Gruppe und 880,95 g bei der Tx-2-Gruppe ermittelt, wobei die Verbesserung bei den beiden letzteren im Vergleich zur Kontrollgruppe 5,65% und 4,52% betrug. Was die durchschnittliche tägliche Futteraufnahme betrifft, betrug diese bei der Kontrollgruppe 2,71 kg Futter, bei der Tx-1-Gruppe 2,77 kg Futter und bei der Tx-2-Gruppe 2,65 kg Futter. Somit zeigte die Kontrollgruppe einen Futteraufwand von 3,22 während bei der Tx-1-Gruppe ein Futteraufwand von 3,11 ermittelt wurde, was einer Verbesserung von 3,54% entspricht, und bei der Tx-2-Gruppe ein Futteraufwand von 3,01 ermittelt wurde, was einer Verbesserung von 6,98% entspricht.
(2) Sensorische Beurteilung des Schweinefleischs
Das Fleisch jeder der Versuchsgruppen wurden von gesunden Männern und Frauen gekostet und diese zu Geschmack und Fleischqualität befragt. TABELLE 3

* Anzahl der Personen, die die Fragen nach der Verkostung beantworteten.

(3) Verteilung von Immunzellen im peripheren Blut von Schweinen
Unter Verwendung von monoklonalen Antikörpern von Schweinen, die für Leukozytenoberflächen spezifisch sind, und der Durchflusszytometrie, wie einem System, das von Dickinson Immunocytometry System, San Jose, Kalifornien, USA, hergestellt und als FACSCalibur bezeichnet wird, wurden die Anteile von den Major-Histokompatibilitäts-Komplex (MHC) exprimierenden Zellen und Lymphozytensubpopulationen im peripheren Blut von Tieren der Tx-1- und der Tx-2-Gruppe sowie der Kontrollgruppe untersucht.
(3-1) Isolierung von Leukozyten aus dem peripheren Blut
Das aus der vorderen Vena cava von Schweinen entnommene Blut wurde gründlich mit Säurezitratdextrose (ACD)-Ethylendiamintetraessigsäure (EDTA) gemischt und über eine Schicht Hypaque Ficoll (Histopaque, Sigma, St. Louis, Mo., USA) geschichtet. Nach 30 min langem Zentrifugieren bei 1.500 Umdr./min wurden die Leukozyten entnommen, dreimal mit phosphatgepufferter Kochsalzlösung (PBS, pH 7,2) gewaschen und in einer RPMI-1640-Nährlösung (GibcoBRL, Grand Island, N.Y., USA) suspendiert. Für die Untersuchung wurde die Leukozytenzellzahl auf 1 × 10⁷ Zellen/ml eingestellt, wobei die lebensfähigen Zellen mittels des Ausschlusses durch Tn-panblau bestimmt wurden.
(3-2) Monoklonale Antikörper für die Untersuchung der Leukozytensubpopulation
Die Wirkung auf die immunologischen Eigenschaften bei Schweinen, wie die Immunzellenpopulationen, wurde unter Verwendung von monoklonalen Antikörpern untersucht, die spezifisch mit Molekülen auf der Zelloberfläche von Schweineleukozyten reagieren, d. h. MHC-Klasse-I-Antigene, MHC-Klasse-II-Antigene, Po (vom Schwein) CD2, PoCD4, PoCD8, Oberflächen-IgM (sIgM), Nicht-T/Nicht-B (yδ TCR) und Granulozyten und Monozyten (G+M), wie nachstehend aus Tabelle 4 hervorgeht. TABELLE 4

*MAk: Monoklonale Antikörper, die spezifisch bei der Leukozyten-Differenzierung reagieren.
**Moleküle: Moleküle der Leukozyten-Differenzierung bei Schweinen.
***Zelltyp: Zellen exprimierenden Moleküle.

(3-3) Durchflusszytometrie
Unter Verwendung des Durchflusszytometrie-Programms CeIIQuest wurden Anteile der Leukozytensubpopulationen gemäß dem Verfahren nach Davis et al. (1990) untersucht. Um die Vorteile der Durchflusszytometrie mit Laserstrahl nutzen zu können, wurden Zellen auf indirekte Weise mit einem oder zwei fluoreszierenden Farbstoffen, wie Fluoresceinisothiocyanat (FITC) und Phy coerythrin (PE) markiert. In jede Vertiefung einer 96-Well-Mikrotiterplatte mit V-Boden wurden 100 μl der aus dem Blut isolierten Leukozyten (Zelldichte 1 × 10⁷ Zellen/ml) zusammen mit 50 μl eines monoklonalen Antikörpers (Konzentration 15 μg/ml) gegeben und 30 min lang bei 4 °C sensibilisiert, anschließend dreimal mit einer ersten Waschpufferlösung [PBS 450 ml, ACD 50 ml, 20% NaN₃ 5 ml, gammaglobulinfreies Pferdeserum (GibcoBRL) 10 ml, 250 mM EDTA 20 ml, 0,5% Phenolrot 1 ml] mittels Zentrifugieren gewaschen. Nach dem Dekantieren des Supernatanten wurde das Zellpellet am Boden unter Verwendung eines Plattenmischers oder eines Wirbelmischers (Scientific Industries, Bohemia, N.Y., USA) suspendiert.
In einem einfachen Färbeversuch wurde ein FITC-konjugierter anti-Maus-IgG+IgM-Antikörper von Ziegen (Caltag Lab, USA), der als zweiter Antikörper diente, um das 200-Fache verdünnt und in einer Menge von 100 μl in jede Vertiefung gegeben, die die suspendierten Leukozyten enthielt. Nach 30 min langer Sensibilisierung bei 4 °C wurde eine dreimalige Waschung mittels Zentrifugieren mit einer zweiten Waschpufferlösung durchgeführt, die mit der ersten Waschpufferlösung identisch war, mit der Ausnahme, dass sie kein Pferdeserum enthielt. Eine 2%ige PBS-Formalin-Lösung (38% Formalin 20 ml, PBS 980 ml) wurde in einer Menge von 200 μl in jede Vertiefung gegeben, um die Zellen zu fixieren.
In einem doppelten Färbeversuch wurde PoCD4 (FITC) mit PoCD8 (PE), PoCD4 (FITC) mit MHC Klasse II (PE) und PoCD8 (FITC) mit MHC Klasse II (PE) zum Färben der Zellen gekoppelt. Genauer gesagt, wurden die Leukozytenzellen in einer Vertiefung mit einem Paar monoklonaler Antikörper gemischt und entsprechend dem Ergebnis des einfachen Färbeversuchs einer ersten Sensibilisierung unterworfen und anschließend dreimal mit der ersten Waschpufferlösung bei 4 °C gewaschen. Danach wurde ein Ziegenantikörper, der für jeden monoklonalen Antikörper-Isotyp spezifisch war, in einer Konzentration von 1,0 μg pro Vertiefung bei FITC-Konjugaten und in einer Konzentration von 0,1 μg pro Vertiefung bei PE-Konjugaten verwendet und anschließend 30 min lang bei 4 °C einer zweiten Sensibilisierung unterworfen. Waschen und Fixieren erfolgten auf die gleiche Weise wie beim einfachen Färbeversuch.
Nach beendetem Färben wurden die Zellen bei 4 °C bis zur Untersuchung dunkel und kühl aufbewahrt. 2.000 oder mehr gefärbte Zellen wurden mittels Durchflusszytometrie analysiert, um Zellen mit positiver Reaktion zu zählen. Für die Messungen und die Datenanalyse wurden FACS-calibur und die Software CeIIQuest (Becton Dickinson) verwendet.
Die Ergebnisse zeigten, dass nach drei Wochen ab Verfütterung des BARODON^® enthaltenden Futters ein Anstieg des Anteils an CD4⁺-T-Lymphozyten im peripheren Blut begann, wie in 1 dargestellt, und dass in der achten Woche nach Fütterungsbeginn in der Tx-1- und der Tx-2-Gruppe wesentlich höhere CD4⁺-T-Lymphozytenspiegel aufrechterhalten wurden als in der Kontrollgruppe (p<0,05). Insbesondere in der Tx-1-Gruppe wurde ein hoher CD4⁺-T-Lymphozytenspiegel über einen Zeitraum von der 8. Woche bis zur 13. Woche nach der Anwendung aufrechterhalten (p<0,05).
Was die CD8⁺-T-Lymphozyten betrifft, wurde in der dritten Woche ab der Fütterung ein hoher Spiegel beobachtet (p<0,01), ab der achten Woche ab Fütterung wurden jedoch keine Unterschiede mehr im Vergleich zur Kontrollgruppe beobachtet (p<0,05), wie in 4 dargestellt.
Ein im Vergleich zur Kontrollgruppe wesentlich höherer Spiegel an Zellen, die MHC-Klasse-II-Antigene exprimieren, in erster Linie Makrophagen, wurde in der elften Woche ab Fütterung in der Tx-1-Gruppe (p<0,05) und in der achten Woche ab Fütterung in der Tx-2-Gruppe gezählt, wie in 2 dargestellt.
Die Zahl der Nicht-T/Nicht-B-Lymphozyten (N-Lymphozyten) in der Tx-2-Gruppe blieb ab der dritten Woche ab Fütterung höher als die in der Kontrollgruppe (p<0,01), wie in 3 dargestellt, was die Möglichkeit aufzeigt, sowohl nicht spezifische als auch spezifische Immunantworten zu verbessern. In einem Zeitraum von der 11. Woche bis zur 13. Woche ab Fütterung war der Spiegel der Nicht-T/Nicht-B-Lymphozyten in der Tx-2-Gruppe im Vergleich zur Kontrollgruppe wesentlich höher (p<0,01).
Im Vergleich der beiden mit BARODON^® gefütterten Gruppen blieb die Tx-2-Gruppe der Tx-1-Gruppe, was den Spiegel der Zellen betrifft, die die MHC-Klasse-II-Antigene exprimieren, von der dritten Woche bis zur achten Woche ab Fütterung eindeutig überlegen (p<0,05), wie in 2 dargestellt. In der dritten Woche ab Fütterung wurden in der Tx-2-Gruppe etwas mehr CD4 und CD8 exprimierende Zellen gezählt als in der Tx-1-Gruppe (p<0,1), wie in 1 und 4 dargestellt. In der 13. Woche ab Fütterung war die Tx-2-Gruppe was die Nicht-T/Nicht-B-Lymphozyten betrifft, der Tx-1-Gruppe deutlich überlegen, wie in 3 dargestellt.
(4) Wirkung auf die Aktivität von Lymphozyten in Blut und Lymphknoten
Zur Untersuchung der Aktivität von Lymphozyten in Blut und Lymphknoten wurde deren Proliferationsreaktion durch Messen der [³H]-Thymidin-Aufnahme in Lymphozyten aus dem peripheren Blut und den Mesenteriallymphknoten von Schweinen mit Concanavalin A (Con A), Phytohämagglutinin (PHA), Pokeweed Mitogen (PWM) und Lipopolysaccharid (LPS) bestimmt.
Es wurde festgestellt, dass die Lymphozyten aus dem peripheren Blut der Tx-2-Gruppe nach acht Wochen Fütterung mit dem BARODON^® enthaltenden Futter eine hohe Proliferationsrate zeigten, was anhand eines signifikant höheren Stimulierungsindexes der Tx-Gruppe im Vergleich zur Kontrollgruppe nachgewiesen werden konnte (p<0,05). In der elften Woche ab Fütterung zeigten die Lymphozyten, die aus dem peripheren Blut sowohl der Tx-1-Gruppe als auch der Tx-2-Gruppe isoliert wurden, höhere Proliferationsantworten auf die Stimulation mit sowohl PHA, PWM als auch LPS als die aus der Kontrollgruppe isolierten, da sie höhere SI-Werte (p<0,01) aufwiesen, wie in 5 dargestellt.
Bei Lymphozyten, die aus den Mesenteriallymphknoten isoliert wurden, wurden als Antwort auf die Stimulierung mit PHA (p<0,05) und PWM (p<0,01) in der achten Woche ab Fütterung signifikant höhere SI-Werte bei sowohl der Tx-1-Gruppe als auch Tx-2-Gruppe beobachtet als bei der Kontrollgruppe. In der elften Woche ab Fütterung zeigte die Tx-1-Gruppe eine höhere Lymphproliferationsantwort auf Stimulation mit Con A und PHA als die Kontrollgruppe (p<0,01), während bei der Tx-2-Gruppe signifikant höhere SI-Werte als Antwort auf die Stimulation mit Con A, PHA und PWM (p<0,05) erfasst wurden, wie in 6 dargestellt.
(5) Wirkung auf den Anteil an CD4⁺CD8⁺-T-Lymphozyten-Subpopulationen in Milz und Lymphknoten
Zur Analyse der Anteil von T-Lymphozyten wurde die Immunhistochemie verwendet. Nach Immunfärbung unter Verwendung des ABC-Verfahrens wurde die Anzahl der CD4⁺-, CD8⁺- und CD4⁺CD8⁺dpp-T-Lymphozytenzellen in Mesenteriallymphknoten und Milz mithilfe eines Bildanalysators (Olympus, USA) bestimmt. Die Ergebnisse der immunhistochemischen Analyse gehen nachstehend aus Tabelle 5 und 6 hervor. Wie aus Tabelle 5 ersichtlich, wurde ein Anstieg des Anteils an CD4⁺-T-Lymphozyten in Milzen nur in der Tx-2-Gruppe festgestellt, wohingegen die Zahl der CD8⁺- und CD4⁺CD8⁺-T-Lymphozyten sowohl in der Tx-1-Gruppe als auch in der Tx-2-Gruppe signifikant anstieg (beide p<0,001). In Mesenteriallymphknoten wiederum wurde ein signifikanter Anstieg des Anteils an CD4⁺-, CD8⁺- und CD4⁺CD8⁺dpp-T-Lymphozyten sowohl in der Tx-1-Gruppe als auch in der Tx-2-Gruppe (p<0,01) festgestellt, wie nachstehend in Tabelle 6 dargestellt. Diese höhere Verteilung von T-Lymphozyten-Subpopulationen war insbesondere in der Tx-2-Gruppe ausgeprägter (p<0,01). TABELLE 5
TABELLE 6
(6) Wirkung auf die Antikörperproduktion nach Impfung mit Schweinepestimpfstoff
Die IFA-Titer für Antikörper auf das Schweinepestvirus wurden nach Impfung mit einem Impfstoff gegen Schweinepest für mit BARODON^® gefütterte Gruppen und eine ohne BARODON^® gefütterte Gruppe bestimmt. Nach drei Wochen Fütterung mit BARODON^® wurden in den mit BA-RODON^® gefütterten Gruppen (Tx-1 und Tx-2) höhere Antikörpertiter bestimmt als in der Kon trollgruppe und diese Titer wurden bis zur elften Woche ab Fütterung aufrechterhalten (p<0,01), wie in 7 dargestellt.
(7) Wirkung bei Geflügel mit Pullorumseuche, die nicht mit Antibiotika behandelt wird
10.000 mit Pullorumseuche infizierte Hühner wurden 10 Wochen lang mit einem Futter gefüttert, das 5 Gew.-% des in Herstellungsbeispiel 7 hergestellten BARODON^®-7 enthielt. Die Mortalität pro Woche wurde ermittelt und die Ergebnisse sind nachstehend in Tabelle 7 dargestellt. Während des Versuchszeitraums wurden die mit Pullorumseuche infizierten Hühner nicht mit Antibiotika behandelt. Wie in Tabelle 7 dargestellt, zeigte die mit BARODON^® gefütterte Gruppe bis zur 15. Woche des Versuchs eine Mortalität, die durchschnittlich bis zu 0,3% betrug, wohingegen ein Großteil der Tiere in einer weiteren Gruppe mit 10.000 mit Pullorumseuche infizierten Hühnern, die nicht mit BARODON^® gefüttert wurde, nach nur 4 Versuchstagen tot war.
(8) Wirkung auf die Körperzellzahl bei Milchkühen mit Mastitis
Zur Untersuchung der Wirkung von BARODON^® auf die Körperzellzahl bei Milchkühen mit Mastitis wurden diese mehrere Monate lang mit einem Futter gefüttert, das 5 Gew.-% des in Herstellungsbeispiel 7 hergestellten BARODON^®-7 enthielt. Dann wurde die Körperzellzahl bestimmt. Die Ergebnisse gehen nachstehend aus Tabelle 8 hervor, in der der Begriff "flüssiges Arzneimittel" bedeutet, dass die Euter der Kühe mit Tüchern gesäubert wurden, die mit einer 100-fachen Verdünnung von BARODON^®-2 getränkt waren, und der Begriff "mit Wasser verdünnt" bedeutet, dass die Kühe eine 200-fache Verdünnung von BARODON^®-2 trinken konnten, und der Buchstabe "q" die Anzahl an Eutern darstellt. TABELLE 8
Außerdem wurden die wichtigsten Mastitis verursachenden Pathogene gezählt und die Ergebnisse sind nachstehend in Tabelle 9 dargestellt. TABELLE 9
BEISPIEL 5
Weiterhin wurde die Verbesserung des menschlichen Immunsystems durch BARODON^® untersucht. Zu diesem Zweck wurden aus Papierblättern, die mit einer 100-fachen Verdünnung von in Herstellungsbeispiel 5 hergestelltem BARODON^®-5 besprüht waren, Texte für Kinder hergestellt und im Japanese Far InfraRed Ray Application Institute, in Osaka, Japan, auf QRS-Wellen untersucht. Die Ergebnisse gehen nachstehend aus Tabelle 10 hervor. Zur Erklärung sei hinzugefügt, dass die Anzahl QRS-Wellen im Bereich von 1.000 bis 2.000 physiologisch nützliche Wirkungen im Körper zeigen. TABELLE 10
BEISPIEL 6
Toxizitätsversuch
Die Toxizität von BARODON^® wurde anhand von Rattenversuchen zur akuten Toxizität am Screening and Toxicology Center des Korea Research Institute of Chemical Technology (Test Nr. S-700) bestimmt. Die Versuche zur akuten Toxizität wurden mit einer 10-fachen Verdünnung von BARODON^®-4 in Übereinstimmung mit der Notifizierung Nr.94-3 des Nationalen Gesundheitsamts, "Toxicity Testing Practice for Medicines" (14. April 1994) und der Verordnung Nr. 87-80 des Ministeriums für Gesundheit und Wohlfahrt "Korean Good Laboratory Practice" (29. Oktober 1987) durchgeführt.
Im Rahmen der Versuche wurden bei männlichen und weiblichen Tieren, die mit dem Versuchsmaterial injiziert wurden, keine toxischen Symptome, wie Tod, Gewichtsverlust und andere Nebeneffekte, beobachtet, der LD₅₀-Wert lag bei sowohl männlichen als auch weiblichen Tieren über 5.000 mg/kg. Das bedeutet, dass die erfindungsgemäße Zusammensetzung für den Menschen nicht toxisch ist.
BEISPIEL 7
Mutationsversuch
Zur Bestimmung, ob BARODON^® als Mutagen wirkt, wurde am Screening and Toxicology Center des Korea Research Institute of Chemical Technology (Test Nr. S-694) ein Rückmutationsversuch in Übereinstimmung mit der Notifizierung Nr. 94-3 des Nationalen Gesundheitsamts, "Toxicity Testing Practice for Medicines" (14. April 1994) und der Verordnung Nr. 87-80 des Ministeriums für Gesundheit und Wohlfahrt "Korean Good Laboratory Practice" (29. Oktober 1987) durchgeführt, wobei vier Salmonella-Stämme (His-lose Mutanten von Salmonella typhimurium TA100/TA1535 (Basenpaarsubstitutionstyp) und TA98/TA1537 (Rasterverschiebungstyp) mit einer 10-fachen Verdünnung von BARODON^®-4 behandelt wurden.
Bei allen vier Bakterienstämmen wurden negative Ergebnisse beobachtet, was anzeigt, dass das Versuchsmaterial keine Rückmutation von His^–-Stämmen zu His⁺-Stämmen verursacht. Dieses Ergebnis bedeutet, dass die erfindungsgemäße Zusammensetzung für den Menschen sicher ist.
BEISPIEL 8
Wirkung auf die Zellproliferation von befruchteten Eizellen
Unreife Eizellen aus Eierstöcken von Kühen wurden einer 24 Stunden langen Reifung in vitro und dann einer 20 Stunden langen Befruchtung in vitro unterworfen. Die gebildeten befruchteten Eizellen wurden 9 Tage in einer Nährlösung, in der eine 10-fache Verdünnung von BARODON^®-4 weiter um die Faktoren 500, 200, 100 bzw. 50 verdünnt wurde, und in einem Kontrollmedium entwickelt. In denselben Medien wurden Samenleiter von Bullen, die von einem lokalen Schlachthof stammten, Epithelzellen von Rindereileitern (BOEC) und Granulosazellen (GC), die beide aus Eierstöcken von Kühen stammten, bis zur dritten Generation gezüchtet. Lebensfähige Zellen wurden mithilfe eines Hämozytometers gezählt.
Nach der Entwicklung teilten sich die extern befruchteten Eizellen mit einer Rate von 60,0% in der Kontrollnährlösung, mit einer Rate von 62,4% in der 500-fach verdünnten Nährlösung, mit einer Rate von 66,3% in der 200-fach verdünnten Nährlösung und mit einer Rate von 73,7% in der 50-fach verdünnten Nährlösung. Die Entwicklungsraten von Embryos mit Blastozyste wurden in der Kontrollnährlösung mit 13,3% bestimmt, mit 20,0% in der 500-fach verdünnten Nährlösung, mit 21,3% in der 200-fach verdünnten Nährlösung, mit 18,4% in der 100-fach verdünnten Nährlösung und mit 11,0% in der 50-fach verdünnten Lösung. Nach dem Züchten betrug die Anzahl an lebensfähigen Zellen in der Kontrollnährlösung 2,0 × 10⁵ Zellen bei BOEC und 3,2 × 10⁵ Zellen bei GC, in der 500-fach verdünnten Nährlösung 2,4 × 10⁵ Zellen bei BOEC und 3,9 × 10⁵ Zellen bei GC, in der 200-fach verdünnten Nährlösung 2,5 × 10⁵ Zellen bei BOEC und 3,7 × 10⁵ Zellen bei GC, in der 100-fach verdünnten Nährlösung 2,6 × 10⁵ Zellen bei und 2,7 × 10⁵ Zellen bei GC und in der 50-fach verdünnten Nährlösung 2,5 × 10⁵ Zellen bei BOEC und 2,8 × 10⁵ Zellen bei GC.
Wie die vorstehenden Daten zeigen, hat die erfindungsgemäße Zusammensetzung einen positiven Einfluss auf sowohl die Zellproliferation von BOEC und GC als auch auf die Proliferation und Entwicklung von befruchteten Eizellen und Embryos mit Blastozyste. Insbesondere bei Embryos mit Blastozyste wurde eine Verbesserung der Proliferationsrate im Vergleich zur Züchtung im Kontrollmedium um 50,4-60,2% festgestellt, wenn diese in 500-fach und 200-fach verdünnter Nährlösung gezüchtet wurden.
BEISPIEL 9
Antikrebsaktivität
Nach Verdünnung mit den Faktoren 600-900 wurde die Hemmwirkung von BARODON^®-4 gegenüber Zellen von vier verschiedenen Humantumoren (Krebs) untersucht.
Humane Leukämiezellen (Jurkat), humane Lungenkrebszellen (NCl-H69), humane Stromazellen (SW579) und humane osteogene Sarkomazellen (U-2 OS) wurden von der American Type Culture Collection, Rockville, Md., USA, erhalten. Jede dieser Zellarten wurde in einer Nährlösung gezüchtet, in der BARODON^®-4 um den Faktor 600, 700, 800 und 900 verdünnt vorlag. Die Zellen wurden untersucht und deren Proliferationraten bei jeder Züchtung ermittelt sowie lebensfähige Zellen unter Verwendung eines Trypanblau-Verfahrens gezählt.
Vor der Untersuchung der Antikrebsaktivität wurden zur Bestimmung einer möglichen Zytotoxizität von BARODON normale Zellen in denselben verdünnten Medien gezüchtet. Die Ergebnisse gehen nachstehend aus Tabelle 11 hervor und zeigen, dass die verdünnte Nährlösungen weder die Wachstumsrate humaner Fibroblastzellen hemmen noch eine Proliferation von Hamsternierenzellen verhindern. TABELLE 11

*gefärbt mit 0,4% Trypanblau und unter dem Mikroskop gezählt

Die Ergebnisse der Kulturen mit vier verschiedenen Krebszellarten gehen nachstehend aus Tabelle 12 hervor. TABELLE 12

*gefärbt mit 0,4% Trypanblau und unter dem Mikroskop gezählt
**100% starben nach D3

Wie aus Tabelle 11 und 12 hervorgeht, zeigen die erfindungsgemäßen Zusammensetzungen Hemmaktivität gegenüber humanen Tumorzellen, ohne normale Zellen zu schädigen. Aus diesem Grund kann die vorliegende Erfindung bei einer wirksamen Behandlung bestimmter humaner Tumore verwendet werden, auch wenn die Wirksamkeit in Abhängigkeit von der Art des Tumors unterschiedlich ist.
BEISPIEL 10
Wirkung auf die Frischeerhaltung
Frischer Kabeljau wurde vor dem Transport zu einem Labor mit Trockeneis schnellgefroren. Nach 10 min langem Eintauchen in eine BARODON^®-freie Lösung oder eine Lösung mit 0,05%, 0,1 oder 0,5% BARODON^®-2 wurden die Fische 7 Tage lang bei 0 °C aufbewahrt und dabei ihre Frische untersucht.
Als Frischeindex für Fische wurde die Ca-ATPase-Aktivität im Muskelfleisch, die mit der Proteindenaturierung verbunden ist, in den Proben gemessen. Die besten Ergebnisse wurden bei Kabeljau beobachtet, der in eine Lösung mit 0;5% BARODON^®-2 eingetaucht war, wobei die ursprüngliche Frische 5 Tage lang bewahrt wurde, wie in 8 dargestellt.
BEISPIEL 11
Wirkung auf die Wasseraktivierung
In wässrigen Lösungen, in denen BARODONO-5 im Verhältnis von 1:2.800 und 1:5.600 mit Leitungswasser verdünnt war, wurde ein ¹⁷O-NMR in H₂O erstellt. Die spektroskopische Untersuchung wurde bei 20 °C mithilfe eines JNMEX-270 Spektrophotometers bei Japanese Water Science Research Meeting, Japan, unter Verwendung von Leitungswasser als Kontrolle durchgeführt. Die ¹⁷O-Absorptionswellenlänge wurde bei der Kontrolle mit 149,6 Hz (volle Breite bei halbem Maximum) ermittelt (9), bei der 2.800-fach verdünnten Lösung mit 53,6 Hz (10) und bei der 5.600-fach verdünnten Lösung mit 54,7 Hz (11).
Die Ergebnisse dieser spektroskopischen Analyse zeigen an, dass Leistungswasser eine heterologe Phase aufweist, die sich aus der Aggregation verschiedener Wassermolekülkombinationen ergibt, die sich untereinander in der Anzahl gebundener Wassermoleküle unterscheiden, wohingegen die BARODON^® enthaltenden Lösungen praktisch kristalline Phasen zeigen, in denen sich die Wassermolekülkombinationen aus einer gleich bleibenden, minimalen Anzahl gebundener Wassermoleküle zusammensetzen. Wenn die Anzahl gebundener Wassermoleküle geringer ist, ist Wasser in einem aktiveren Zustand und zeigt bessere Fließeigenschaften und Biopermeabilität. Da aktiviertes Wasser für das Wachstum von Tieren und Pflanzen nützlich sein kann, kann die erfindungsgemäße Zusammensetzung als Getränkezusatz oder Abwasserbehandlungsmittel verwendet werden.
BEISPIEL 12
Verhalten von BARODON^® bei der Neutralisierung
Das in Herstellungsbeispiel 4 hergestellte BARODON^®-4 hatte eine hohe Alkalinität mit einem pH-Wert von 13,20. Bei der Neutralisierung von BARODON^®-4 mit 0,1 N HCl bildete sich an der Berührungsfläche ein Niederschlag. Ferner zeigte die Zusammensetzung selbst bei Zugabe einer wesentlichen HCl-Menge keine merkbare pH-Änderung. Dieses Verhalten deutet darauf hin, dass die erfindungsgemäße Zusammensetzung aufgrund einer ausreichenden Ionisierung hoch reaktiv ist.
Bei der Neutralisierung einer 1.000-fachen Verdünnung der Zusammensetzung mit 0,1 N HCl wurde unter dem Mikroskop weder eine Koagulierung noch eine Blasenbildung beobachtet. In diesem Fall kam es zu einer pH-Änderung.
Dieses Verhalten von BARODON^® bei der Neutralisierung lässt darauf schließen, dass die erfindungsgemäße Zusammensetzung bei Verwendung einer geeigneten Menge nach Reaktion mit HCl im Magen von Mensch oder Tier kein Koagulat bildet. Ferner wurde im Magen bei Einführung gemäß der vorliegenden Erfindung keine Gasbildung festgestellt, sodass die Zusammensetzung keine mit der Gasbildung verbundenen Probleme zeigt.
Bei der Verwendung bei Tieren und Pflanzen wie vorstehend beschrieben kann die erfindungsgemäße Zusammensetzung eine Verbesserung der Widerstandskraft gegenüber Krankheiten, der Geschwindigkeit der Gewichtszunahme, der Ernteerträge, der Erntezeiten bewirken. Ferner zeigt die erfindungsgemäße Zusammensetzung durch die Aktivierung von Immunzellen unspezifische immunstimulierende Aktivitäten, einschließlich der Produktion von Antikörpern und der Verbesserung des Immunsystems, wodurch die Wirkung einer Impfung gegen durch bösartige Viren verursachte Krankheiten maximiert wird.
Dank einer bemerkenswerten Hemmaktivität gegenüber einigen Arten humaner Tumore kann die erfindungsgemäße Zusammensetzung als Behandlungs- oder Vorbeugemittel verwendet werden.
Darüber hinaus zeigte es sich, dass die Ställe, in denen Nutztiere untergebracht waren, bei Verfütterung der erfindungsgemäßen Zusammensetzung in einer Mischung mit Futter an Nutztiere weniger unangenehm rochen und das Futter weniger mit schädlichen Insekten verseucht war. Ferner ist die erfindungsgemäße Zusammensetzung als Konservierungsmittel zum Frischhalten von Lebensmitteln sehr nützlich.
Die vorliegende Erfindung wurde zu veranschaulichenden Zwecken beschrieben und es ist offensichtlich, dass die hier verwendete Terminologie beschreibender Art ist und keine Beschränkung darstellt. Angesichts der vorstehenden Lehren sind zahlreiche Modifikationen und Abwandlungen der vorliegenden Erfindung möglich. Deswegen ist es offensichtlich, dass die Erfindung innerhalb des Schutzumfangs der anhängenden Ansprüche anders als hier spezifisch beschrieben ausgeübt werden kann.

Claims

Zusammensetzung einer alkalischen Lösung, die eine verbesserte unspezifische, das Immunsystem stimulierende Wirkung hat, umfassend 100 Gewichtsteile von Natriummetasilikat (Na₂SiO₃≅5H₂O), 1-15 Gewichtsteile von Borax (Na₂B₄O₇≅10H₂O), 10^–5-10^–4 Gewichtsteile von Natriumthiosulfat (Na₂S₂O₃≅5H₂O), 30-150 Gewichtsteile von Kaliumkarbonat, 30-200 Gewichtsteile von raffiniertem Zucker (C₁₂H₂₂O₁₁), 100-200 Gewichtsteile von Wasser und 10^–1 oder weniger Gewichtsteile von wenigsten einer Verbindung ausgewählt aus Natriumchlorid, Silberthiosulfat und Natriummolybdat.
Zusammensetzung einer alkalischen Lösung zur Behandlung von Tumoren, umfassend: 100 Gewichtsteile von Natriummetasilikat (Na₂SiO₃≅5H₂O), 1-15 Gewichtsteile von Borax (Na₂B₄O₇≅10H₂O), 10^–5-10^–4 Gewichtsteile von Natriumthiosulfat (Na₂S₂O₃≅5H₂O), 30-150 Gewichtsteile von Kaliumkarbonat, 30-200 Gewichtsteile von raffiniertem Zucker (C₁₂H₂₂O₁₁), 100-200 Gewichtsteile von Wasser und 10^–1 oder weniger Gewichtsteile von wenigsten einer Verbindung ausgewählt aus Natriumchlorid, Silberthiosulfat und Natriummolybdat.
Zusammensetzung einer alkalischen Lösung zur Verbesserung der Immunantwort auf Bakterien, umfassend: 100 Gewichtsteile von Natriummetasilikat (Na₂SiO₃≅5H₂O), 1-15 Gewichtsteile von Borax (Na₂B₄O₇≅10H₂O), 10^–5-10^–4 Gewichtsteile von Natriumthiosulfat (Na₂S₂O₃≅5H₂O), 30-150 Gewichtsteile von Kaliumkarbonat, 30-200 Gewichtsteile von raffiniertem Zucker (C₁₂H₂₂O₁₁); 100-200 Gewichtsteile von Wasser und 10^–1 oder weniger Gewichtsteile von wenigsten einer Verbindung ausgewählt aus Natriumchlorid, Silberthiosulfat und Natriummolybdat.
Zusammensetzung einer alkalischen Lösung zur Verbesserung der Immunantwort auf Viren, umfassend: 100 Gewichtsteile von Natriummetasilikat (Na₂SiO₃≅5H₂O), 1-15 Gewichtsteile von Borax (Na₂B₄O₇≅10H₂O), 10^–5-10^–4 Gewichtsteile von Natriumthiosulfat (Na₂S₂O₃≅5H₂O), 30-150 Gewichtsteile von Kaliumkarbonat, 30-200 Gewichtsteile von raffiniertem Zucker (C₁₂H₂₂O₁₁), 100-200 Gewichtsteile von Wasser und 10^–1 oder weniger Gewichtsteile von wenigsten einer Verbindung ausgewählt aus Natriumchlorid, Silberthiosulfat und Natriummolybdat.
Zusammensetzung einer alkalischen Lösung zum Fördern der Ausdifferenzierung von befruchteten Eizellen, umfassend: 100 Gewichtsteile von Natriummetasilikat (Na₂SiO₃≅5H₂O), 1-15 Gewichtsteile von Borax (Na₂B₄O₇≅10H₂O), 10^–5-10^–4 Gewichtsteile von Natriumthiosulfat (Na₂S₂O₃≅5H₂O), 30-150 Gewichtsteile von Kaliumkarbonat, 30-200 Gewichtsteile von raffiniertem Zucker (C₁₂H₂₂O₁₁), 100-200 Gewichtsteile von Wasser und 10^–1 oder weniger Gewichtsteile von wenigsten einer Verbindung ausgewählt aus Natriumchlorid, Silberthiosulfat und Natriummolybdat,
Unspezifischer Immunstimulator, der die Zusammensetzung gemäß Anspruch 1 als wirksamen Bestandteil umfasst.
Therapeutisches Mittel zur Behandlung von Tumoren, das die Zusammensetzung gemäß Anspruch 2 als wirksamen Bestandteil umfasst.
Ein antibakterielles Mittel, das die Zusammensetzung gemäß Anspruch 3 als wirksamen Bestandteil umfasst.
Antivirusmittel, das die Zusammensetzung gemäß Anspruch 4 als wirksamen Bestandteil umfasst.
Ein Ausdifferenzierungspromotor für befruchtete Eizellen, der die Zusammensetzung gemäß Anspruch 5 als wirksamen Bestandteil umfasst.