KR20010044142A

KR20010044142A - 다목적 고기능성 알칼리 용액 조성물 및 그 제조방법과 비특이 면역증강제로서의 용도

Info

Publication number: KR20010044142A
Application number: KR1020000070054A
Authority: KR
Inventors: 최수일; 최현석; 전경수; 유병우; 박용호
Original assignee: 최수일; 바로돈에스에프 주식회사
Priority date: 2000-11-23
Filing date: 2000-11-23
Publication date: 2001-06-05
Also published as: JP4756015B2; US20020098980A1; US20020098205A1; JP4183069B2; DE60127443D1; DE60127443T2; MXPA03004455A; EP1339415B1; JP2008001714A; KR100331952B1; JP2004513967A; US6884440B2; US6447810B1; AU2712001A; US20030185900A1; ATE357240T1; ZA200303337B; CA2427856C; EP1339415A1; US6673375B2

Abstract

본 발명은 다목적 고기능성 알칼리 용액 조성물 및 그 제조방법과 면역증강제로서의 그 용도에 관한 것으로, 본 발명의 조성물은 메타규산나트륨 (Na₂SiO₃·5H₂O) 100중량부에 대하여, 붕사(Na₂B₄O₇·10H₂O) 1-15 중량부, 티오황산나트륨(Na₂S₂O₃·5H₂O) 10^-5-10^-4중량부, 탄산칼륨 30-150중량부, 정제 백당(C₁₂H₂₂O₁₁) 30-200중량부, 물 100-200중량부를 포함하는 것을 특징으로 하며, 인간 또는 동,식물의 비특이 면역증강제로서 효과적으로 사용될 수 있다.

Description

다목적 고기능성 알칼리 용액 조성물 및 그 제조방법과 비특이 면역증강제로서의 용도{The Composition Of Multipurpose High-Functional Alkali Solution, Preparation Thereof, And For The Use Of Non-Peculiar Immune Augmentation Agent}

본 발명은 다목적 고기능성 알칼리 용액 조성물 및 그 제조방법과 면역증강제로서의 그 용도에 관한 것으로, 보다 상세하게는 메타규산나트륨(5수염)을 주성분으로 하는 알칼리 용액 조성물 및 그 제조방법, 그리고 그 용도에 관한 것이다.

알칼리 물질의 기능성에 대하여는 20세기 초부터 연구가 시작되었으며, 많은 연구를 통하여 최근에는 체질이 알칼리성으로 될 경우 칼륨과 나트륨의 이온화율이 상승하여 혈액의 정화능력을 높여주어 피를 맑게 해주며, 피로회복의 속도를 증가시키고, 노화를 지연시킴이 밝혀졌다.

이러한 알칼리 용액 조성물은 본 발명자에 의하여 발명된 한국특허 제128,110호가 공개된 이후 여러 분야의 산업에 적용되고 있다. 상기 특허의 조성물은 규산나트륨, 과산화나트륨, 탄산칼륨, 탄산나트륨, 정제 백당 및 티오황산은을 수용액 중에 함유하되, 그 중량비가 탄산나트륨 1을 기준으로 규산나트륨 10-18, 과산화나트륨 0.1-0.5, 탄산칼륨 5-10, 정제 백당 10-18, 티오황산은 0.1-3.0으로 구성된다. 상기 조성물은 원적외선 방사효율이 높고 항균성과 소취성이 우수하여 섬유제품 후처리용과 사료발효용 및 농업용으로 현재 많이 사용되어지고 있다. 그러나 이 기술은 제조공정이 복잡하고 장기보관이 불편한 문제점과, 항바이러스제 및 범용 비특이 면역증강제로서는 사용될 수 없다는 문제점이 있다.

한편, 최근에는 항생제 오,남용에 따른 여러 종류의 부작용이 밝혀 짐에 따라, 항생제의 사용량을 줄이기 위하여 생체면역을 종합적으로 증강시킴으로써 백신 접종효과의 증진을 가져오거나, 외부에서 침입하는 질병 원인체에 대한 생체방어능 항진을 유도하는 비특이 면역증강제(Nonspecific Immunostimulator; 이하, "NIS"로 칭함)의 개발이 세계적으로 집중되고 있으며, 일본에서는 식용버섯(Lentinus edoddes)에서 추출한 성분이 항암효과가 있다는 연구결과가 발표된 바 있다.

또한, 박테리아에서 유래한 NIS들은 1세기 이상 연구되어 왔으며, 최근에는 항체형성 및 cytokine 유도효과와 더불어 면역기능 항진에 관한 연구가 활발히 진행되고 있다. 예를 들면, Norcardia opaca에서 유래한 cell wall 성분은 마우스에서 유래한 복강 macrophage의 activation을 유발하는 것으로 발표되었으며(Barot-Ciobaru 등, 1987), Klebsiella pneumoniae에서 유래된 RU41740, Propionibacterium avidum에서 유래된 KP-40, Quillaja saponaria에서 유래된 QH-B 등도 cytokines의 유도 및 면역세포의 자극성과 관련하여 연구되고 있다(Bessler 등, 1997; Nimier 등, 1999; Ronnberg 등, 1997; Siwiki 등, 1998; Tewari 등, 1996). 최근에는 immunostimulatory motifs라 불리는 bacterial DNA에서 유래한 CPG motif가 면역세포에서 IL-6, IL-12, IL-18 및 IFN-γ의 발현을 효과적으로 유도하는 것으로 보고된 바 있다(Bohle 등, 1999; Klinman 등, 1999; Krieg, 1999).

그러나 현재까지는 인간은 물론, 동식물에게도 적용시킬 수 있는 생산공정이 간단하고, 장기보관이 용이하며, 저렴한 원가의 NIS가 개발된 바는 없다.

본 발명은 본 발명자에 의하여 개발된 상기 특허를 더욱 개량한 것으로, 생산 및 장기 보관이 용이하고 항균, 항바이러스 작용을 하고, 비특이 면역증강제(NIS)로 사용될 수 있는 알칼리 용액 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다. 본 발명의 다른 목적은 이 조성물의 제조방법과 그 용도를 제공하는 것이다. 본 발명의 다른 목적은 가축의 증체율을 향상시키고, 작물의 수확량을 증가시키는 것을 목적으로 한다. 본 발명의 또 다른 목적은 농산물이나 어류 또는 가축의 육질의 신선도를 장기간 유지시키는 것을 목적으로 한다. 본 발명의 또 다른 목적은 항암효과를 가진 무독성 비특이 면약증강제를 제공하는 것이다.

도1은 시험군 및 대조군 돼지의 CD4⁺T 림프구의 비율변화를 나타낸 도표이고,

도2는 시험군 및 대조군 돼지의 MHC class II 발현세포의 비율변화를 나타낸 도표이고,

도3은 시험군 및 대조군 돼지의 Non T/Non B(N 림프구)의 비율변화를 나타낸 도표이고,

도4는 시험군 및 대조군 돼지의 CD8⁺T 림프구의 비율변화를 나타낸 도표이고,

도5는 시험군 및 대조군 돼지의 혈액으로부터 분리한 림프구의 Con A, PHA, PWM, LPS의 자극에 의한 림프구 증식성을 나타낸 도표이고,

도6은 시험군 및 대조군 돼지의 장간막 림프절 림프구의 Con A, PHA, PWM, LPS의 자극에 의한 림프구 증식성을 나타낸 도표이고,

도7는 시험군 및 대조군 돼지의 돼지 콜레라 항체형성능을 나타낸 도표이고,

도8은 시험군 및 대조군 대구의 Ca-ATPase 활성 변화를 나타낸 도표이고,

도9는 상수도물의¹⁷O 흡수파장대를 나타낸 NMR 측정결과 나타낸 도표이고,

도10 및 11은 본 발명의 조성물이 첨가된 물의¹⁷O 흡수파장대를 나타낸 NMR 측정결과 나타낸 도표이다.

본 발명의 조성물은 메타규산나트륨(Na₂SiO₃·5H₂O) 100중량부에 대하여, 붕사(Na₂B₄O₇·10H₂O) 1-15 중량부, 티오황산나트륨(Na₂S₂O₃·5H₂O) 10^-5-10^-4중량부, 탄산칼륨 30-150중량부, 정제 백당(C₁₂H₂₂O₁₁) 30-200중량부, 물 100-200중량부를 포함하며, 필요에 따라 염화나트륨, 티오황산은, 몰리브덴산나트륨 중 선택된 1종 이상이 첨가될 수 있다. 상기 조성물은 사용시에는 물에 10-10000배 희석되어 사용되어 지는 것이 바람직하다.

본 발명의 제조방법은 메타규산나트륨, 붕사, 티오황산나트륨, 염화나트륨 등 나트륨 화합물과 무수 탄산칼륨을 60-80℃의 물에 순차적으로 투입하여 2-3시간 교반하면서 용해시킨 다음, 정제 백당을 투입하여 2-4시간 교반하는 단계를 포함한다.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.

본 발명에서 사용되는 메타규산나트륨은 5분자의 결정수를 함유하고 있으며, 이산화규소(SiO₂)의 함량이 27.5-29.0%이고, 산화나트륨(Na₂O)의 함량이 28.5-30.0%로 함량 오차범위가 2%미만으로서, 시판되는 액상의 규산나트륨에 비하여 매우 안정적이다. 성상은 백색분말 또는 입상으로 정밀계량이 용이하고, 장기보관 및 운반 등이 편리하다. 물에 용해하였을 때에는 강한 알칼리성을 띠며, 구성원소 중의 규소는 동,식물의 생장에 필수적인 원소이다.

본 발명의 조성물 중 붕사는 10분자의 결정수를 함유하는 비중 1.715의 물질로서, 구성원소 중의 붕소(B)는 동,식물에 결핍되기 쉬운 미량원소이다. 토양에서 붕소성분이 부족할 경우에는 착과가 부실해지며, 장애과실이 많이 발생하게 된다. 붕사는 방균제, 방충제, 지혈 또는 수렴제, 유약원료 등으로 주로 사용되고 있다. 특히 붕사는 금속산화물과 함께 용해될 때 이들을 녹이는 특성이 있다. 물에 용해되었을 때의 pH는 9.5 정도이며, 적절한 사용량은 규산나트륨 100중량부에 대하여 1-15중량부의 범위내에서 용도에 따라서 조절된다. 상기 범위를 초과할 경우에는 독성이 발현될 우려가 있다.

본 발명에 사용되는 티오황산나트륨은 5분자의 결정수를 가지고 있으며, 알콜에는 녹지않고 물에는 녹는 특이한 짠맛이 있는 물질이다. 물에 녹았을 때 pH는 6.5-8.0 정도의 중성이며, 할로겐화은이나 기타 다른 은염을 녹이는 성질을 가졌다. 염소제거제, 중금속제거제 또는 광석으로부터 은을 추출하는 용도로 주로 사용되고 있다. 티오황산나트륨의 적절한 사용량은 규산나트륨 100중량부에 대하여 10^-5-10^-4중량부이며, 이 범위를 초과할 경우에는 동물에 적용시 조직중의 Ca를 침강시켜 동물을 흥분시키며 설사를 유발하게 된다.

본 발명의 조성물 중 탄산칼륨은 물에 잘 녹으며, 수용액은 pH 11.6 정도의 강한 알칼리성이다. 칼륨은 나트륨과 함께 생체에 꼭 필요한 필수원소로서 신진대사 및 혈액순환 촉진에 필요한 원소이다. 또한 생체내에서 칼륨과 나트륨성분이 조화를 이루면 고혈압과 당뇨병을 효과적으로 예방할 수 있다. 그 적절한 사용량은 메타규산나트륨 100중량부에 대하여 30-150중량부이다. 상기 범위를 벗어날 경우에는 동,식물에 적용시 나트륨/칼륨의 균형이 깨어질 우려가 있다.

본 발명의 조성물 중 정제 백당은 용해되어 이온화된 무기물질들이 재결합하는 것을 방지하여 조성물을 안정화시킴과 동시에, 사용된 무기물질들의 성질을 유기물질과 유사한 유기태 물질로 변환시키는 역할과, 최종 조성물의 흡착 또는 부착성능을 향상시키는 역할을 한다. 이 효능이 발휘되는 적절한 사용량은 메타규산나트륨 100중량부에 대하여 30-200중량부이다.

본 발명의 조성물에 선택적으로 첨가되어 질 수 있는 물질 중 염화나트륨은 나트륨/칼륨의 비율을 조절하기 위한 나트륨의 공급원으로서의 역할을 한다. 티오황산은은 식물에서 생성되는 에틸렌의 억제제 또는 식물의 분화촉진제로 주로 사용되고 있으며, 티오황산이온이 함유된 수용액에서 S₂O₃ ^2-의 농도가 낮을 경우는 [Ag(S₂O₃ ^2-)₂]^3-, S₂O₃ ^2-의 농도가 높을 경우는 [Ag₂(S₂O₃ ^2-)₆]^10-의 다가 음이온을 형성시키는 특성이 있다. 본 발명에서는 티오황산나트륨과 같이 사용되어 다가 음이온을 형성시킴과 동시에, 세포의 분화를 촉진시키는 역할을 한다. 몰리브덴산나트륨은 동,식물에 결핍되기 쉬운 미량원소인 몰리브덴을 공급하는 역할을 한다. 이들의 사용량은 미량으로, 모두 메타규산나트륨 100중량부에 대하여 10^-1중량부 이내이다.

상기와 같은 본 발명의 조성물은 완전히 용해된 후, 무취, 무독성의 미황색을 띠는 액체로서, 비중은 1.43-1.50, 점도 61.0-239.0, pH 13 정도의 매우 안정적인 조성물이며, 특이한 점은 염산(HCl)으로 중화시켜도 좀처럼 응고가 되거나 pH의 변화가 일어나지 않는다는 점이다.

본 발명자들은 장기간에 걸친 다양한 실험결과, 상기와 같은 구성의 본 발명의 조성물은 가축에 급여할 경우 증체율이 향상되고, 작물에 시비할 경우 수확량이 증가하며, 특히 동,식물에 적용할 경우 NIS로서의 효능이 탁월함을 밝혀 내게 되었다.

상기 조성물을 직접 사료나 물에 첨가하여 투여하거나 사료에 첨가하여 발효시켜 가축에게 급여함으로써 탁월한 면역증강효과를 얻을 수 있다. 그 예로, 양돈산업에 치명적인 손실을 가져오는 돼지 유행성 설사(porcine epidemic diarrhea; PED)나 돼지 콜레라를 효과적으로 예방할 수 있으며, 높은 폐사율로 인해 양계산업에 막대한 손실을 가져오는 가금티푸스(fowl typhoid)에도 예방 및 치료에 효과가 있음이 확인되었고, 젖소의 경우도 우유의 품질등급을 결정하는 지표 중의 하나인 우유 속의 체세포 수를 감소시킬 수 있다. 또한, 가축의 성장을 촉진시킬 수 있으며, 고기의 품질을 향상시킬 수 있을 뿐만 아니라, 축사내의 악취제거에도 효과적이다.

비료나 물에 첨가하여 식물에 적용할 경우도, 발아 및 성장촉진, 내병성 향상, 생산량 증가, 수확물의 품질향상 등의 뛰어난 효과를 거둘 수 있다.

본 발명의 실시예는 아래와 같다.

(제조실시예 1)

메타규산나트륨(5수염) 300Kg, 붕사(10수염) 35Kg, 티오황산나트륨, 0.01Kg, 염화나트륨 1Kg, 탄산칼륨 150Kg을 60-80℃의 정제수 500Kg에 순차적으로 투입하면서 3시간 동안 교반하여 용해시킨 다음, 정제 백당 450Kg을 투입하여 4시간 동안 연속적으로 교반하여 pH 13정도의 알칼리성 용액(이하 이 용액을 "BARODON^??-1"로 칭함)을 얻었다.

(제조실시예 2)

제조실시예 1 에 의하여 얻어진 용액 "BARODON^?-1" 1436Kg에 0.02Kg의 티오황산은이 물 1ℓ에 용해된 용액을 적가하여 교반한 후, 약 50℃의 온도의 반응기에서 4시간 동안 유지시켜 티오황산은이 첨가된 알칼리성 용액(이하 이 용액을 "BARODON^?-2"로 칭함)을 얻었다.

(제조실시예 3)

100℃의 정제수 5ℓ에 몰리브덴산나트륨(NaMnO₄·2H₂O) 0.3Kg을 교반하면서 투입하여 무색, 무취의 수용액을 얻고, 이 수용액을 "BARODON^?-1"에 적가하여 교반한 후, 약 50℃의 온도의 반응기에서 4시간 동안 유지시켜 몰리브덴산나트륨이 첨가된 알칼리성 용액(이하 이 용액을 "BARODON^?-3"으로 칭함)을 얻었다.

(제조실시예 4)

제조실시예 1 과 동일하게 시행하되, 붕사의 사용량을 6Kg으로, 탄산칼륨을 300Kg으로 변화시켜 얻어진 알칼리성 용액 1557Kg에 0.02Kg의 티오황산은이 물 1ℓ에 용해된 용액을 적가하여 교반한 후, 약 50℃의 온도의 반응기에서 4시간 동안 유지시켜 티오황산은이 첨가된 알칼리성 용액(이하 이 용액을 "BARODON^?-4"로 칭함)을 얻었다.

(제조실시예 5)

제조실시예 4 와 동일하게 시행하되, 정제 백당의 사용량을 150Kg으로 변화시켜 상대적으로 점성이 낮은 알칼리성 용액(이하 이 용액을 "BARODON^?-5"로 칭함)을 얻었다.

(실시예 1)

*벼 재배경작 실험

경기도 안성시 보개면 이전리와 경기도 안성시 대덕면 명당리 소재의 논에서 벼를 대상으로 제조실시예들에 의하여 얻어진 용액 "BARODON^?-1 내지 5"의 면역증진 효과와 생육촉진 효과를 테스트하였다.

테스트 방법은 "BARODON^?-1 내지 5"를 10배수의 물에 희석한 다음, 이를 다시 500배수로 희석한 액에 볍씨를 모판에 넣기 하루 전 24시간 동안 침지한 다음 모판에 넣었으며, 모내기 2일전 상기 희석액을 어린 모에 통상의 농약살포와 같은 방법으로 살포하였다. 그리고 벼의 출수(벼의 이삭패기) 전 2주일전에 다시 한번 희석액을 살포하였다.

실험 결과, 본 발명의 조성물을 처리하지 아니한 대조군에 비하여 실험군은 모판에서 어린 모가 고르고 튼튼하게 성장하였고, 냉해피해 발생이 없었으며, 모내기 후 3일만에 활착이 완료되었다. 또한, 입고병과 도열병, 그리고 문고병의 발생이 전혀 없었으며, 내도복성이 향상되어 태풍 후에도 도복이 거의 없었다. 대조군의 경우는 약 25% 정도가 태풍 후 도복되었다.

단보(300평) 당 벼 생산량은 아래의 표1과 같았다.

표1)

구 분	단보당생산량(추청벼)
대조군	575 kg
BARODON^?-1	655 kg
BARODON^?-2	690 kg
BARODON^?-3	710 kg
BARODON^?-4	680 kg
BARODON^?-5	670 kg

(실시예 2)

*배 재배경작 실험

배나무 경작지에 축분 및 유기질 퇴비를 시비한 후 "BARODON^?-3"을 물로 10배 희석한 후, 다시 500배 희석한 희석액을 분무한 다음, 로타리를 쳤다. 배꽃이 개화하기 약 2주전인 4월 초순 "BARODON^?-2"를 1회 살포하였으며, 이 결과 이 용액을 처리하지 아니 한 대조군에 비하여 약 4-5일 빠른 4월 18일 개화하였고, 수확일은 9월 15일로 대조군에 비하여 약 15일 정도가 빨랐다. 수확된 배는 신고배로서 외관, 크기, 당도 등이 우수하여 최고등급의 판정을 받았다. 즉, 외관에 있어서 신고배의 문제점인 검은 반점이 60% 이상 사라졌고, 울퉁불퉁하던 배 모양이 둥글고 깨끗해졌으며, 바람배는 전혀 발생되지 아니하였고, 태풍에 의한 낙과율은 약20% 정도 감소하였으며, 크기는 대조군에 비하여 약 15%정도 증가하였으며, 당도는 13.0-15.0 BX로 대조군에 비하여 약 12%정도 증가하였다. 저장성 또한 대조군에 비하여 현저히 증가하였다.

(실시예 3)

*생육상태 실험

"BARODON^?-3"를 물로 16배 희석한 액을 아래의 표2와 같은 희석배율로 희석하여, 쓰께나(광도채) 검체 작물의 엽면에 산포 시험한 결과, 키(cm)는 15.6%, 엽폭(cm)은 8.7%, 경엽생체중(g/pot)에서는 7-47%의 증가율을 나타 내었다.

표2)

	pot No.	최 대 엽 폭 cm
	pot No.	200배 희석	300배 희석	400배 희석	무산포
제1회산포후5일째(6월 28일)	12
제1회산포후5일째(6월 28일)	평균
제2회산포후9일째(7월 10일)	12	6.16.0	6.16.3	6.26.2	5.45.9
제2회산포후9일째(7월 10일)	평균	6.1	6.2	6.2	5.7

	pot No.	경엽생체중 g/pot
	pot No.	200배 희석	300배 희석	400배 희석	무산포
제1회산포후5일째(6월 28일)	12
제1회산포후5일째(6월 28일)	평균
제2회산포후9일째(7월 10일)	12	57.856.3	59.260.5	44.642.8	39.941.5
제2회산포후9일째(7월 10일)	평균	57.1(140%)	59.9(147%)	43.7(107%)	40.7(100%)

(제조실시예 6)

제조실시예 2 에 의하여 얻어진 "BARODON^?-2"를 물로 10배 희석시킨 후, 이 용액을 배합사료 1톤당 500g 스프레이 분사하여 고기능성 사료(이하 이 사료를 "BARODON^?-6"로 칭함)를 제조하였다.

(제조실시예 7)

제조실시예 2 에 의하여 얻어진 "BARODON^?-2"를 물로 10배 희석시킨 용액 10ℓ와 정제백당 3Kg, 염화나트륨 1Kg, 물 75ℓ를 배합사료 1톤에 첨가하여 발효기에 넣고 혼합교반하여 24시간동안 발효시켜 고기능성 발효사료(이하 이 사료를 "BARODON^?-7"로 칭함)를 제조하였다.

(실시예 4)

"BARODON^?"의 동물에 대한 증체효과 및 면역증강 효과를 확인하기 위하여 아래와 같은 실험을 실시하였다.

(1) 증체효과 실험(돼지)

건강한 15주령(104±4일)의 3원 교잡종(Yorkshire×Landrace×Durroc)인 거세 비육돈 50두를 시험동물로 선발하였다. 시험군은 3개군으로 구분하여 돈방의 크기가 가로 4M ×세로 4.2M인 5개의 돈방에 10두씩 임의 배치하여 1주간 적응시킨 후 시험을 개시하였다.

대조군은, Tx-1군 및 Tx-2군 각 10두씩 배정하였다. Tx-1군은 제조실시예 6 에 의하여 얻어진 "BARODON^?-6"를, Tx-2군은 제조실시예 7 에 의하여 얻어진 "BARODON^?-7"를 3% 첨가한 사료를, 대조군은 "BARODON^?"이 첨가되지 아니한 동일한 사료를 각 9주간 급여한 후 그 이후에는 세 시험군 공히 일반사료를 급여하였다. 시험기간동안 물과 사료는 자유섭취하게 하였으며, 각 군당 10두씩 6주간의 증체량, 사료섭취량 및 사료효율을 측정한 결과, 일일 증체량은 대조군이 842.86 g인데 비하여, Tx-1군은 890.48 g으로 대조군에 비하여 5.65% 증가하였고, Tx-2군은 880.95 g으로 대조군보다 4.52% 증가하였다.

사료섭취량은 대조군의 경우 2.71 Kg, Tx-1군은 2.77 Kg, Tx-2군은 2.65 Kg을 섭취하였으며, 사료효율(사료섭취량/증체량)은 대조군이 3.22인데 비하여, Tx-1군은 3.11로서 3.54% 개선되었고, Tx-2군은 3.01로 6.98% 개선되었다.

(2) 육질 관능검사

상기 시험군의 육질을 건강한 성인 남,녀에게 시식시킨 후, 관능평가한 결과는 아래의 표3과 같았다.

표3)

처리내용	연 도	맛
처리내용	부드럽다	질기다	좋다	보통이다
대조군	0	8	0	3
Tx-1	6	1	8	2
Tx-2	11	0	10	0

*숫자는 시식회 참석 후 설문에 응한 사람의 숫자임

(3) 돼지 말초혈액의 면역세포 분포검사

대조군과 Tx-1군 및 Tx-2군의 돼지 백혈구 표면 특이 단크론항체와 형광세포유출장치(flow cytometry, FACSCalibur, Becton Dickinson Immunocytometry System, San Jose, CA, USA.)를 이용하여 시기별로 돼지 말초혈액 내 면역세포인 주조직 적합체(major histocompatibility complex; MHC) 발현세포와 림프구 아집단 분포율에 대한 변화를 검사하였다.

(3-1) 말초혈액으로부터 백혈구 분리

돼지 전대정맥에서 채혈한 혈액을 acid citrate dextrose(ACD)-ethylenediamine tetraacetic acid (EDTA)가 첨가된 시험관에 혼합하여 잘 섞은 후 Hypaque Ficoll(Histopaque; Sigma, St. Louis, MO, USA)에 중층하여 1,500 rpm에서 30분간 원심분리한 후 백혈구를 채취하였다. 이를 인산완충 생리식염수(phosphate buffered saline; PBS, pH 7.2)로 3회 세척한 후 RPMI-1640배지(GibcoBRL, Grand Island, NY, USA)에 부유시킨 다음, tryphan blue exclusion technique에 따라 생존세포수를 측정하여 최종 농도가 1×10⁷개/ml가 되도록 조절하여 검사에 이용하였다.

(3-2) 백혈구 아집단 검사용 단크론 항체

돼지의 성장 시기별 면역학적 특성을 검사하기 위하여 백혈구의 세포 표면항원(cell surface molecules)인 MHC class I, MHC class II, Po(porcine)CD2, PoCD4, PoCD8, surface IgM (sIgM), Non T/Non B (TCR) 및 granulocyte와 monocyte (G + M)에 대한 특이적인 백혈구 표면 단크론 항체(monoclonal antibody; MAb) 등 총 9종을 사용하였다(표4).

표4)

(3-3) 형광세포 유출장치 분석

백혈구 아군별 분포율 분석은 Davis 등(1990)의 방법에 준해서 flow cytometry CellQuest프로그램을 이용하여 실시하였다. Lazer 이용 형광세포유출장치를 이용한 검사를 위하여 세포는 1개 또는 2개의 형광색소(fluorescein isothiocyanate; FITC, phycoerythrin; PE)를 이용하여 간접법으로 표식이 된다. V-bottome 96 well microplate의 한 well 당 단크론항체 50㎕ (15㎍/㎖)와 혈액에서 분리한 1×10⁷/㎖의 백혈구 100㎕를 첨가한 후 4℃에서 30분간 감작시킨 다음, 4℃의 first waching buffer [PBS 450 ml, ACD 50 ml, 20% NaN₃5 ml, gamma globulin free horse serum (GibcoBRL) 10 ml, 250 mM, EDTA 20 ml, 0.5% phenol red 1 ml]로 3회 원심(1,700 rpm, 3분), 세척한 후 상층액을 버리고 밑부분에 모인 백혈구의 pellet을 plate mixer또는 vortex mixer(Scientific Industries, Bohemia, NY, USA)를 이용하여 부유시켰다.

단일염색시험에서는 2차 항체로 FITC-conjugated goat anti-mouse IgG+IgM antibody (Caltag Lab, USA)를 200배 희석한 후 부유된 백혈구가 들어있는 각 well에 100㎕씩 첨가하였다. 이를 다시 4℃에서 30분간 감작시킨 다음 first washing buffer 성분에서 horse serum만 제거한 4℃의 second washing buffer로 3회 원심세척하고 다음 2% PBS-formalin (38% formalin 20 ml, PBS 980 ml) 용액을 well당 200㎕되게 가하여 고정시켰다.

이중염색시험에서는 PoCD4 (FITC)와 PoCD8 (PE), PoCD4 (FITC)와 MHC classⅡ(PE), PoCD8 (FITC)와 MHC classⅡ(PE)를 각각 짝지워 염색하였다. 즉 백혈구를 2개의 단크론항체와 섞은 후 단일염색에 준하여 1차 감작시킨 후 4℃의 first washing buffer로 3회 세척하였다. 이후 각각의 단크론항체의 isotype에 특이성 있는 염소유래 항체를 FITC conjugate인 경우에 well당 1.0㎍, PE conjugate인 경우에는 well당 0.1㎍농도로 희석하여 넣어 주고 4℃에서 30분간 반응시켰다. 다음의 washing과 고정 과정은 단일염색과 동일한 방법으로 수행하였다.

염색이 끝난 세포들은 검사 때까지 4℃ 냉암소에 보관하였다. 염색이 완료된 재료는 flow cytometry를 이용하여 총 2,000개 이상의 세포를 검사하여 양성반응 세포수를 측정하였으며 측정과 자료분석은 FACSCalibur 및 CellQuest program (Becton Dickinson)을 이용하여 실시하였다.

검사 결과, Tx-1군 및 Tx-2군의 CD4⁺T 림프구의 비율이 투여 후 3주 경과부터 증가하기 시작하여 투여 후 8주경에 대조군에 비하여 유의적으로 높은 결과를 보였다(p〈0.05). 특히, Tx-1군의 경우 도1에서 보는 바와 같이, 투여 후 8주에서 13주에 걸쳐서 높은 수준을 유지하였다(p〈0.05).

CD8⁺T 림프구의 경우, 투여 후 3주경에 Tx-2군에서 높은 비율을 보였으나(p〈0.01) 투여 후 8주경부터는 유의적인 차이를 보이지 않았다. macrophage가 대부분인 MHC class II 발현세포의 경우, Tx-1군에서는 투여 후 11주에서 유의적으로 높은 결과를 보였고(p〈0.05), Tx-2군에서는 투여 후 8주에서 유의적으로 높은 비율을 나타내었다(도2).

또한 Non T/Non B(N 림프구)의 비율도 대조군에 비하여 Tx-2군에서 투여 3주 경과부터 높은 비율을 나타내어(p〈0.01) 비특이 면역의 방어기전과 특이 면역 방어기전 모두 항진되는 가능성을 보였으며, 투여 후 11주에서 13주까지 다소 높은 수준으로 유지되었다(p〈0.1) (도3).

"BARODON^?" 투여군 간에는 Tx-2군에서 MHC-class II 발현세포의 증가비율이 Tx-1군에 비하여 3주에서 8주까지 뚜렷하였고(p〈0.05) (도2), CD4, CD8 발현세포의 비율 또한 투여 후 3주경에 Tx-2군이 다소 높았으며(p〈0.1) (도1, 도4), Tx-1군과 Tx-2군 간의 Non T/Non B 림프구의 비율은 투여 13주경에서 유의적인 차이를 보였다(p〈0.1) (도3).

(4) 혈액 및 림프절 백혈구 활성력 시험

혈액 및 림프절의 활성력을 측정하기 위하여 Con A, PHA, PWM 및 LPS를 이용하여 자극시킨 후 radioisotope [³H]-thymidine을 첨가한 후 증식성을 확인하였다. 혈액으로부터 분리한 림프구를 대상으로 PWM으로 자극한 경우, "BARODON^?" 첨가 사료 투여 후 8주 경과시 Tx-2군에서 대조군에 비하여 유의적으로 높은 stimulation index(SI)를 나타내었으며(p〈0.05), 11주 경과 후에는 Tx-1군과 Tx-2군 모두 Con A를 비롯한 PHA, PWM, LPS의 자극에 의한 림프구 증식성이 대조군에 비하여 유의성 있게 높은 SI를 나타내었다(p〈0.01).

장간막 림프절 림프구를 이용한 림프구 증식성 분석에서는 투여 후 8주부터 PHA(p〈0.05)와 PWM(p〈0.01)의 자극시 대조군에 비하여 유의성 있게 높은 SI를 나타내었으며, 11주 경과에서는 Tx-1군에서 Con A와 PHA에 의한 림프구 증식이 대조군에 비하여 높은 유의적인 차(p〈0.01)가 인정되었고 Tx-2군의 경우 Con A, PHA 및 PWM의 자극시 대조군에 비하여 유의적으로 높은(p〈0.05) SI 값을 보였다(도5 및 도6).

(5) 면역조직화학법에 의한 림프절 및 비장의 CD4⁺CD8⁺T 림프구 아집단 분포조사

ABC법으로 면역 염색하고 image analyzer (Olympus, USA)로 장간막 림프절과 비장에서의 CD4⁺, CD8⁺및 CD4⁺CD8⁺dpp T 림프구 수를 확인한 결과, 비장에서는 CD4⁺의 경우 Tx-2군에서만, CD8⁺와 CD4⁺CD8⁺dpp T 림프구는 Tx-1, Tx-2군 모두에서 유의적으로 증가하였고(p〈0.01)(표5), 장간막 림프절에서는 Tx-1, Tx-2군 모두 CD4⁺, CD8⁺및 CD4⁺CD8⁺dpp T 림프구의 수가 유의적으로 증가한 것을 확인할 수 있었다(p〈0.01)(표6). 특히 Tx-2군에서 Tx-1군에 비하여 유의성 있는 높은 분포를 나타내었다(p〈0.01).

표5)

표6)

(6) 돼지콜레라 백신접종에 의한 항체형성능 항진효과 시험

돼지콜레라 백신 접종 후 "BARODON^?" 함유사료를 급여한 군(Tx-1, Tx-2)과 대조군 간의 돼지콜레라 항체형성능을 IFA test를 이용하여 시험한 결과, "BARODON^?" 투여 3주 경과후부터 시험군들이 대조군에 비하여 점차 증가하기 시작하여 투여 후 11주경에 시험군들이 대조군에 비하여 높은 항체가를 나타내었으며, 특히 Tx-1군에서 유의성 있는 높은 항체가를 나타내었다(p〈0.01) (도 7).

(7) 가금티프스 상재계군에 대한 비항생제 투여효과 시험

가금티프스에 감염된 가금티프스 상재계군 10000두에 제조실시예 7 에 의하여 얻어진 "BARODON^?-7"을 사료에 5중량% 혼합한 사료를 10주간 급여시킨 결과는 아래의 표7)와 같았다. 이 기간 중에 항생제는 일체 투여하지 아니하였다. 시험군은 시험 개시 15주까지 평균 0.3% 정도의 폐사율을 유지하였으나, 대조군 10000수는 시험개시 후 4주일만에 대부분 폐사하였다.

표7)

(8) 유방염 젖소의 체세포 감소효과 시험

준임상형 유방염 젖소에 대한 체세포 감소효과를 확인하기 위하여 제조실시예 7 에 의하여 얻어진 "BARODON^?-7"을 5중량% 혼합한 사료를 2달간 급여한 결과는 아래의 표8)과 같았다. 아래 표의 "액제"는 "BARODON^?-2"의 100배 희석액으로 소독한 타올로 젖소의 유방액 세척처리한 것을 의미하며, "물에 희석"은 젖소가 마시는 물에 "BARODON^?-2"의 10,000배 희석시켜 마시게 한 것을 의미한다. "q"는 분방수를 나타낸다.

표8)

또한, 유방염의 주요 원인균에 대한 감소효과는 아래의 표9)과 같았다.

표9)

(실시예 5)

제조실시예 5 에 의하여 제조된 "BARODON^?-5"의 인체의 면역증진에 미치는 효과를 확인하기 위하여, "BARODON^?-5"의 원액을 물에 100배 희석한 용액을 종이에 스프레이 분사하여 건조한 후 인쇄를 한 어린이용 교과서를 일본 대판시 소재의 일본 원적외선 응용연구회에 의뢰하여 QRS 파동측정을 한 결과는 아래의 표10)과 같았다. QRS 파동수치는 1000 내지 2000일 때, 인체에 미치는 효과가 가장 좋은 것이다.

표10)

(실시예 6)

*독성시험

"BARODON^?"의 독성을 시험하기 위하여, "BARODON^?-4"를 10배 희석한 액을 한국화학연구소 안전성 연구센터에 의뢰하여 흰쥐를 이용한 급성 독성시험(시험번호 : S-700)을 실시하였다. 시험방법은 국립보건안전연구원 제94-3호의 '의약품 등의 독성시험기준(1994년 4월 14일)'과 보건사회부 고시 제87-80호의 '의약품 안전성시험 관리기준(KGLP. 1987년 10월 29일)'에 준하여 실시하였다.

시험 결과, 암수동물에 있어서 시험물질의 투여에 기인한 사망동물, 일반증상, 체중변화 및 부검소견은 관찰되지 않았으며, 시험물질의 LD₅₀값은 암수 공히 5000mg/kg을 상회할 것으로 보고되었다.

이러한 결과는 본 발명의 조성물을 인체에 적용할 경우에도 독성을 나타내지 아니함을 의미한다.

(실시예 7)

*돌연변이 유발성 시험

"BARODON^?"의 돌연변이 유발성을 시험하기 위하여, "BARODON^?-4"를 10배 희석한 액을 한국화학연구소 안전성 연구센터에 의뢰하여 살모넬라균(Salmonella typhimuruium의 히스티딘 요구성 TA100과 TA1535(염기쌍 치환형) 및 TA98과 TA1537(frame shift형))을 이용한 복귀 돌연변이 시험(시험번호 : S-694)을 실시하였다. 시험방법은 국립보건안전연구원 제94-3호의 '의약품 등의 독성시험기준(1994년 4월 14일)'과 보건사회부 고시 제87-80호의 '의약품 안전성시험 관리기준(KGLP. 1987년 10월 29일)'에 준하여 실시하였다.

시험 결과, 4개 시험균주에서 공히 음성의 결과를 얻었으며, 따라서 시험물질은 시험균주에 대하여 His^-⇒ His⁺로의 복귀 돌연변이를 유발하지 않는 것으로 보고되었다 이러한 결과는 본 발명의 조성물을 인체에 적용할 경우에도 안전함을 의미한다.

(실시예 8)

*수정란의 세포증식 유발효과 시험

소 난소로부터 회수한 미성숙난자를 24시간 체외 성숙시켰고 20시간 체외수정시킨 다음, 제조실시예 4 에 의하여 제조된 "BARODON^?-4"를 10배 희석한 액을 다시 500배, 200배, 100배, 50배로 희석한 배양액에 넣어 대조구와 같이 9일 동안 공배양하였다. 또한, 도축장에서 회수한 소 수란관과 난소로부터 난관상피세포(BOEC), 과립막세포(GC)를 채취하여 상기 배양액에서 3세대까지 체외배양하였다. 세포수는 혈구계산판(hemocytometer)으로 측정하였다.

배양 결과, 체외수정란의 난할율은 각각 60.0%(대조구), 62.4%(500배 희석액), 66.3%(200배 희석액), 73.7%(100배 희석액), 및 74.0%(50배 희석액)이었고, 배반포배의 발생율은 각각 13.3%(대조구), 20.0%(500배 희석액), 21.3%(200배 희석액), 18.4%(100배 희석액), 및 11.0%(50배 희석액)이었다. 난상상피세포의 수는 2.0×10⁵(대조구), 2.4×10⁵(500배 희석액), 2.5×10⁵(200배 희석액), 2.6×10⁵(100배 희석액), 2.5×10⁵(50배 희석액)이었으며, 과립막세포의 수는 각각 3.2×10⁵(대조구), 3.9×10⁵(500배 희석액), 3.7×10⁵(200배 희석액), 2.7×10⁵(100배 희석액), 2.8×10⁵(50배 희석액)이었다.

이상의 결과로부터 난상상피세포, 과립막세포 배양과 수정란의 배양에 있어서 본 발명의 조성물은 세포증식과 수정란의 배반포배의 증식 및 발달에 영향을 미치며, 그 중 500배와 200배로 희석하였을 때 수정란에 대한 배반포배의 증식율이 50.4-60.2%로 크게 증가되었음을 알 수 있었다.

(실시예 9)

*항암효과 시험

"BARODON^?-4"를 600-900배 희석하여 4종류의 사람의 종양(암)세포에 대한 항암효과를 시험하였다.

미국 메리랜드 로크빌에 있는 American Cultutre Collection으로부터 인체 백혈병의 백혈구(Jurkat), 인간 폐의 암세포(NCl-H69), 인체 갑상선 암세포(SW579) 및 사람의 골수육종암세포(osteogen sarcoma(U-2 OS))를 구하였다. "BARODON^?-4"를 각각 1/600, 1/700, 1/800, 1/900의 비율로 희석하여 이 종양세포를 배양하고 이 세포들이 부배양(subculture) 될 때마다 세포를 검사하고 그 증가율을 계산하였다. 각 경과의 생세포를 계산하는데는 트리판블루 염색방법이 사용되었다.

본격적인 실험에 앞서 일반세포를 상기 희석액들에 배양한 결과는 아래의 표11와 같으며, 이에 의하여 상기 희석액들은 섬유 아세포(fibroblast)의 성장률을 억제하지도 성장에 영향을 끼치지 않으며, 햄스터의 신장세포 증식도 막지 않았음을 알 수 있다.

표11)

상기 4종류의 암세포를 상기 희석액들에 배양한 결과는 아래의 표12와 같았다. 이에 의하여 본 발명의 조성물은 인체종양세포를 제거하면서도 정상세포를 해치지 않는다는 것을 알 수 있다. 따라서 본 발명의 조성물은 인체 종양의 몇 종류를 치료하는 데에 유용하게 사용될 수 있으며, 그 효과는 종양의 종류에 따라서 차이가 있다.

표12)

(실시예 10)

*신선도 유지효과 시험

신선도가 양호한 생선(대구)을 드라이 아이스로 급속동결시킨 후, 실험실로 운반하여 "BARODON^?-2"의 0, 0.05, 0.1, 0.2, 0.5% 농도의 용액에 10분간 침지하여 0℃에서 저장하면서 7일 동안 저장된 각 어류의 신선도를 조사하였다.

어류의 선도 지표로서, 단백질의 변성을 나타내는 근육의 Ca-ATPase 활성을 측정하는 방법을 사용하였다. 결과는 0.5% 용액에 침지한 군의 선도유지효과가 가장 우수하였으며, 5일동안 최초상태의 선도가 그대로 유지되었다(도 8).

(실시예 11)

*"BARODON^?"의 물 활성화 효과 시험

제조실시예 5에 의하여 얻어진 "BARODON^?-5"를 물에 1 : 2800 및 1 : 5600의 비율로 희석한 희석액에 대한 H₂O의¹⁷O-NMR 측정시험을 실시하였다. 사용장치는 일본 워터사이언스연구회에서 소장하고 있는 JNM-EX270이었으며, 측정온도는 20℃였다. 대조구인 상수도물(TAP-WATER)의¹⁷O 흡수파장대는 149.6Hz (반치폭;HW)이었으나(도9), 1/2800 희석액에서는 53.6Hz이었고(도10), 1/5600 희석액에서는 54.7Hz였다(도11).

위의 결과는 상수도물은 물 분자간의 결합단위의 크기가 크고 작은 여러 종류의 집합체인 비정질상이며, 본 발명의 조성물이 첨가된 희석액은 물 분자들이 결합단위가 최소의 결합수로 일정하게 결합된 결정상에 가까운 형태임을 나타내는 것이다. 물 분자들의 결합수가 작다는 것은 유동성과 생체침투성이 우수하며, 활성화 되었다는 것을 의미한다. 활성화된 물은 인간과 동,식물의 생육에 효과적으로 적용될 수 있으므로, 본 발명의 조성물은 음용수 첨가제, 폐수처리제로 유용하게 사용될 수 있다.

(실시예 12)

*pH측정 및 중화적정시의 거동 시험

제조실시예 4 에 의하여 얻어진 "BARODON^?-4"의 원액의 pH를 측정한 결과 13.20의 강알칼리성이었다. 이를 0.1N 염산으로 중화적정을 한 결과, 접촉부분에서 응고가 진행되었으며, 상당량의 염산을 첨가하여도 용액의 pH는 변화가 없었다. 이는 본 발명의 조성물은 이온화가 충분히 이루어져 반응성이 매우 높다는 것을 의미하는 것이다.

상기 원액을 1000배 희석하여 0.1N HCl로 중화적정을 하면서 현미경으로 관찰한 결과, 응고물과 기포의 발생이 관찰되지 아니하였다. 그러나 이 경우는 pH가 조절되었다.

위의 결과는 적정량을 사용할 경우, 인간이나 가축이 섭취한 뒤 위 내에서 염산과 반응하여 침전물이 생성되지 않는다는 것과 또한 염산과 반응하여 기포를 발생시키지 아니하므로 과량 섭취시에도 가스의 발생으로 인한 문제발생의 우려가 없다는 것을 의미한다.

이상의 실시예를 통하여 알 수 있는 바와 같이, 본 발명의 조성물은 동,식물에 적용할 경우, 내병성 향상, 증체율 또는 수확량의 증가, 수확물의 품질 향상, 조기 수확 등의 효과를 얻을 수 있으며, 악성 및 난치성 바이러스성 질병의 경우는 백신의 효과를 극대화시켜 주며, 별도의 항생제를 사용하지 않더라도 항체형성 및 면역증강효과가 탁월하여 뛰어난 효과를 거둘 수 있다.

또한, 동물 또는 인간의 체내에서 증식되는 특정 종류의 종양의 제거 또는 증식억제에 현저한 효과가 있으므로 이의 치료제 또는 예방제로서 효과적으로 사용될 수 있다. 이 외에, 본 발명의 조성물을 사료에 첨가하여 가축에게 급여하게 되면 축사의 악취가 없어지며, 해충의 발생이 방지된다. 또한, 본 발명의 조성물은 식품의 보관시 선도를 장기간 유지할 수 있도록 하므로 선도유지제로 효과적으로 사용될 수 있다.

Claims

메타규산나트륨(Na₂SiO₃·5H₂O) 100중량부에 대하여, 붕사(Na₂B₄O₇·10H₂O) 1-15 중량부, 티오황산나트륨(Na₂S₂O₃·5H₂O) 10^-5-10^-4중량부, 탄산칼륨 30-150중량부, 정제 백당(C₁₂H₂₂O₁₁) 30-200중량부, 물 100-200중량부를 포함하는 것을 특징으로 하는 다목적 고기능성 알칼리 용액 조성물.
제1항에 있어서, 염화나트륨, 티오황산은 또는 몰리브덴산나트륨 중 선택된 1종 또는 2종 이상이 규산나트륨 100중량부에 대하여 10^-1중량부 이내 첨가되는 것을 특징으로 하는 다목적 고기능성 알칼리 용액 조성물.
60-80℃ 온도의 물 100-200중량부에 무수 메타-규산나트륨 100중량부, 붕사 1-15중량부, 티오황산나트륨 10^-5-10^-4중량부와 무수 탄산칼륨 30-150중량부를 순차적으로 물에 투입하여 2-3시간 동안 교반하면서 용해시킨 다음, 정제 백당(C₁₂H₂₂O₁₁) 30-200중량부를 투입하여 2-4시간 교반하면서 용해시키는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 다목적 고기능성 알칼리 용액 조성물의 제조방법.
제3항에 있어서, 염화나트륨, 티오황산은 또는 몰리브덴산나트륨 중 선택된 1종 또는 2종 이상이 메타규산나트륨 100중량부에 대하여 10^-1중량부 이내 첨가하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 다목적 고기능성 알칼리 용액 조성물의 제조방법.
제1항 또는 제2항 기재의 조성물 또는 이의 희석액이 가축용 사료에 분무에 의하여 첨가된 것을 특징으로 하는 다목적 고기능성 사료.
제1항 또는 제2항 기재의 조성물 또는 이의 희석액이 가축용 사료에 첨가된 후, 발효된 것을 특징으로 하는 고기능성 사료 또는 사료첨가제.
제1항 또는 제2항 기재의 조성물 또는 이의 희석액이 작물용 비료에 분무에 의하여 첨가된 것을 특징으로 하는 고기능성 비료.
제1항 또는 제2항 기재의 조성물 또는 이의 희석액이 작물용 비료에 첨가된 후, 발효된 것을 특징으로 하는 고기능성 비료 및 비료 첨가제.
제1항 또는 제2항 기재의 조성물 또는 이의 희석액을 음식물, 비료, 사료, 약품 또는 물에 첨가한 후, 급여 또는 시비함으로써 면역력을 증가시키는 것을 특징으로 하는 비특이 면역력 증진방법.
제1항 또는 제2항 기재의 조성물 또는 이의 희석액을 식품에 처리함으로써 식품의 선도를 유지시키는 것을 특징으로 하는 식품의 선도유지방법.
제1항 또는 제2항 기재의 조성물 또는 이의 희석액을 인간 또는 동물에 투여함으로써 인간 또는 동물의 종양세포를 제거 또는 병원성 바이러스를 불활성화시키는 것을 특징으로 하는 인간 또는 동물의 종양치료방법.
제1항 또는 제2항 기재의 조성물 또는 이의 희석액을 인간 또는 동물에 투여함으로써 인간 또는 동물의 수정세포의 분화를 촉진시키는 것을 특징으로 하는 인간 또는 동물의 수정세포 분화 촉진방법.
제1항 또는 제2항 기재의 조성물 또는 이의 희석액을 인간, 동물 또는 식물에 적용함으로써 항균성 및 항바이러스성을 증진시키는 것을 특징으로 하는 생체의 항균성 및 항바이러스성 증진방법.
제1항 또는 제2항 기재의 조성물 또는 이의 희석액을 식물의 씨앗에 처리함으로써 식물의 발아 및 성장을 촉진하는 것을 특징으로 하는 식물의 발아 및 성장촉진방법.
제5항 또는 제6항 기재의 사료를 가축에게 급여함으로써 가축의 증체량을 향상시키는 것을 특징으로 하는 가축의 증체량 향상방법.
제7항 또는 제8항 기재의 비료를 작물에 시비함으로써 작물의 수확량을 증진시키는 것을 특징으로 하는 작물의 수확량 증진방법.
제1항 또는 제2항 기재의 조성물을 물에 희석하여 가축에 급여함으로써 가축의 증체량을 향상시키는 것을 특징으로 하는 가축의 증체량 향상방법.
제1항 또는 제2항 기재의 조성물을 물에 희석하여 작물에 분무함으로써 작물의 수확량을 증진시키는 것을 특징으로 하는 작물의 수확량 증진방법.
제1항 또는 제2항 기재의 조성물을 물에 첨가하여 물 분자의 결합단위를 최소화시킴으로써 물을 활성화시키는 것을 특징으로 하는 물의 활성화 방법.