DE60024785T2

DE60024785T2 - Vanilloid-analoge die resiniferatoxin-pharmacophore enthalten als wirksame vanilloid rezeptor agonisten und analgetika, zusammensetzungen und ihre verwendung

Info

Publication number: DE60024785T2
Application number: DE60024785T
Authority: DE
Inventors: Jeewoo Kangnamku LEE; Uhtaek Oh; Young-Ho Park; Young-Ger Suh; Hyeung-Geun Park; Hee-Doo Yongsan-ku KIM
Original assignee: Amorepacific Corp; Digital Biotech Co Ltd
Current assignee: Amorepacific Corp; Digital Biotech Co Ltd
Priority date: 1999-02-22
Filing date: 2000-02-21
Publication date: 2006-09-14
Anticipated expiration: 2020-02-22
Also published as: CA2363531C; ES2253208T3; MXPA01008403A; CA2363531A1; AU763824B2; HK1042472A1; DE60024785D1; EP1154989B1; ATE312812T1; JP2002537373A; JP3727851B2; EP1154989A1; CN1210254C; WO2000050387A1; US6476076B1; HK1042472B; CN1342138A; AU2697600A

Description

HINTERGRUND DER ERFINDUNG
1. Technischer Bereich der Erfindung
Die vorliegende Erfindung betrifft Vanilloid-Analogons, die Resiniferatoxin-Pharmacophore enthalten, pharmazeutische Zusammensetzungen, welche solche Analogons enthalten und Verfahren zur Verwendung solcher Analogons als Vanilloid-Rezeptor-Agonisten und wirksame Analgetika.
2. Zugehöriger Stand der Technik der Erfindung
Capsaicin (CAP), welches die nachfolgend dargestellte Struktur aufweist, stimuliert sensorisch afferente C-Fasern und macht sie dann unempfindlich. Die induzierte Desensibilisierung kann bei Arthrose, Asthma, allergische Reaktionen, einschließlich Ozaena bzw. Rhinitis, Fieber, Schmerzen, Blasenüberempfindlichkeit und ähnliches eine Anwendung haben.
Außerdem ist der Vanilloid-Rezeptor (VR) (oder Capsaicin-Rezeptor) eine spezifische neuronale Membran-Erkennungsregion für CAP und damit verbundene Reizmittelzusammensetzungen. Er wird annähernd ausschließlich durch primäre sensorische Neuronen ausgedrückt, welche in Nozizeption und neurogenischen Entzündungen involviert sind. Der Rezeptor wirkt als ein für Kationen selektiver Ionenkanal mit einer Präferenz für Kalzium und sein funktioneller Subtyp, VR1, welcher sowohl von CAP als auch von schädlicher Wärme aktiviert wird, ist vor kurzem geklont worden. Seine durch spezifische Liganden bewirkte Desensibilisierung ist als ein vielversprechender therapeutischer Ansatz erkannt worden, um nervliche Schmerzen und andere pathologische Zustände zu lindern, in welchen von primären, sensorischen Neuronen freigegebene Neuropeptide eine entscheidende Rolle spielen.
Die meisten exogenen VR-Agonisten, welche als Analgetika entwickelt oder verwendet werden, sind strukturell mit CAP (d. h. Zostrix^TM, Olvanil^TM, SDZ-249482^TM und DA-5018^TM) und Resiniferatorxin verwandt. Ihre Strukturen weisen einen gemeinsamen Vanilloidring auf, welcher hinsichtlich der Aktivität bezüglich Agonisten wichtig zu sein scheint. In einem neueren Report wurde jedoch dargestellt, dass Zusammensetzungen, die keinen Vanilloid-Anteil aufweisen, wie zum Beispiel Sesquiterpenoid ungesättigte Dialdehyde oder Triprenylphenol, den Rezeptor auch aktivieren können. Obwohl Rezeptor-Antagonisten von geringerer Anzahl sind, wurde von einigen Zusammensetzungen, wie zum Beispiel Capsazepin, was an der CAP-Bindungsstelle konkurrenzfähig wirkt, dem Kanalblocker Ruthenium Red und Capsazocain berichtet.
Resiniferatoxin (RTX), ein trizyklisches Diterpen, welche aus Euphorbia resinifera isoliert wurde, ist als ein sehr wirksames CAP-Analogon angesehen worden. Tatsächlich wurde die spezielle Bindung von RTX mit der CAP-Bindungsstelle in dorsalen Wurzelganglien mit gekennzeichnetem [³H]RTX demonstriert. RTX wird als ein sehr wirksames sensorisches, Neuronen desensibilisierendes Mittel für die Behandlung von Harndranginkontinenz und dem mit diabetischer Neuropathie verbundenen Schmerz entwickelt. In jüngster Zeit wurde von einer vollständig von Enantio gesteuerten Synthese und einer konformativen Analyse von RTX berichtet. Die Pharmacophori-Gruppen von RTX sind bislang jedoch noch nicht klar definiert, obwohl Studien hinsichtlich der strukturellen Aktivität darauf hinweisen, dass der C₂₀-homovanillische Anteil, die C₃-Ketogruppe und die Orthoesterphenylgruppe auf dem Ring C entscheidende strukturelle Elemente sind, die für die extrem hohe Wirksamkeit von RTX verantwortlich sind. Die geringere Wirksamkeit von CAP im Vergleich mit RTX kann durch die Abwesenheit von einigen dieser kritischen Pharmacophori-Gruppen, insbesondere der C₃-Ketogruppe, andererseits rationalisiert werden.
Chemical Abstracts, Vol. 132, Nr. 7, 2000, Abstract Nr. 78346f & Bioorg. Med. Chem. Lett., Vol. 9, Nr. 20, 1999, Seiten 2909–2914 beschreiben 2,2-Dimethyl-Propionsäure 2-{2-[84-Hydroxy-3-Methoxy-Phenyl)Acetylamino]Methyl}-3-Phenyl-Propylester zur Verwendung als ein Vanilloid-Rezeptoragonist.
Die US 4,939,149 beschreibt ein Verfahren zum Desensibilisieren eines betroffenen Tiers durch Verabreichen einer therapeutisch effektiven, desensibilisierenden Menge von RTX zum Desensibilisieren des Tiers bezüglich einer neurogenen Entzündung bezüglich chemisch und thermisch induzierten Schmerzen und bezüglich Reaktionen, die sensorisch affarente Bahnen involvieren, die auf CAP reagieren.
Obwohl von einer Vielzahl von auf den Strukturen von CAP und RTX basierenden Vallinoid-Agonisten als potenzielle Analgetika berichtet wurde (z. B. beschreibt die US 5,021,450 Homovanillylditerpenderviate, wie zum Beispiel 12-Deoxyphorbol 13-Phenylacetat 20-Homonvanillat und Mezerein 20-Homovanillat als Imitatoren von RTX) sind diese CAP-artigen Analogons durch ihre denselben innewohnende, geringere Wirksamkeit und den schmalen therapeutischen Index beschränkt. Andererseits ist RTX bezüglich der natürlichen Quellen von beschränkter Verfügbarkeit und ist aufgrund seiner strukturellen Komplexität synthetisch schwer zu erhalten.
Die vorliegenden Erfinder haben ausführliche Recherchen durchgeführt, um neue analgetische Mittel zu entdecken, die auf Vanilloid-Rezeptoren basieren, welche eine einfachere Struktur als RTX oder bekannte RTX- oder CAP-artige Analogons aufweisen. Als ein Ergebnis davon haben wir herausgefunden, dass die neuen Zusammensetzungen, welche Modifikationen an dem C₂₀-homovanillischen Anteil, dem C₃-Carbonyl und dem Or thoesterphenylanteil als essentielle Gruppen für die Erkennung und Bindung eine wirksame Vanilloid-Agonistenaktivität bezüglich der Prüfung der Rezeptorbindung und der Prüfung des CAP-aktivierten Einzelkanals zeigten.
ZUSAMMENFASSUNG DER ERFINDUNG
Aus diesem Grund stellt die Erfindung eine Verbindung der Formel (I) oder ein pharmazeutisch akzeptables Salz davon zur Verfügung:
wobei
X Sauerstoff oder Schwefel ist;
A -NHCH₂- oder -CH₂- ist;
R₁ C_1-4 Alkylaryl oder R₄CO- ist, wobei R₄ C_1-18 Alkyl, C_2-18 Alkenyl oder C_6-10 Aryl ist;
R₂ C_1-6 Alkyl, C_1-6 Alkoxy, C_1-6 Haloylkyl oder Halogen ist;
R₃ Wasserstoff, C_1-4 Alkyl, Aminoalkyl, Disäure-Monoester oder α-Alkylsäure ist; und
die Sternmarkierung * ein chirales Kohlenstoffatom kennzeichnet.
Die vorliegende Erfindung stellt auch pharmazeutische Zusammensetzungen zur Verfügung, welche die Verbindung (I) als aktiven Bestandteil in einer effizienten Menge enthält, um Schmerzen zu lindern, zusammen mit einem pharmazeutisch akzeptablen Träger.
Die vorliegende Erfindung stellt auch eine Verwendung der Verbindungen als einen aktiven Bestandteil in Medikamenten zum Behandeln von Schmerzen oder Harninkontinenz zur Verfügung.
DETAILLIERTE BESCHREIBUNG DER ERFINDUNG
Die Verbindung der vorliegenden Erfindung wird durch die folgende Formel (I) repräsentiert:
wobei
X Sauerstoff oder Schwefel ist;
A -NHCH₂- oder -CH₂- ist;
R₁ C_1-4 Alkylaryl oder R₄CO- ist, wobei R₄ C_1-18 Alkyl, C_2-18 Alkenyl oder C_6-10 Aryl ist;
R₂ C_1-6 Alkyl, C_1-6 Alkoxy, C_1-6 Haloylkyl oder Halogen ist;
R₃ Wasserstoff, C_1-4 Alkyl, Aminoalkyl, Disäure-Monoester oder α-Alkylsäure ist; und
die Sternmarkierung * ein chirales Kohlenstoffatom kennzeichnet.
wobei
X Sauerstoff oder Schwefel ist;
A -NHCH₂- oder -CH₂- ist;
R₁ C_1-4 Alkylaryl oder R₄CO- ist, wobei R₄ C_1-18 Alkyl, C_2-18 Alkenyl oder C_6-10 Aryl ist;
R₃ Wasserstoff, C_1-4 Alkyl, Aminoalkyl, Disäure-Monoester oder α-Alkylsäure ist; und
die Sternmarkierung * ein chirales Kohlenstoffatom kennzeichnet.
Die bevorzugten Verbindungen können durch die folgenden Formeln (I-a) und (I-b) repräsentiert werden:
wobei R₁, R₂ und R₃ dieselben Bedeutungen wie oben festgelegt haben.
In einer bevorzugten Ausführungsform weisen die Verbindungen die allgemeine Formel (I-a) oder (I-b) auf, wobei R₁ die Gruppe der Formel R₄CO- ist, wobei R₄ eine Alkylgruppe mit 1 bis 18 Kohlenstoffatomen ist; R₂ eine Alkylgruppe mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen ist; und R₃ -(CH₂)-_nNH₂, CO(-CH₂)_nCOOH oder -(CH₂)_nCOOH ist, wobei n eine ganze Zahl von 1 bis 4 ist. Wenn R₁ oder R₄ eine substituierte Arylgruppe ist, können die Substituenten eine oder mehrere niedrige Alkyle mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen oder Halogenatomen sein.
In einer bevorzugteren Ausführungsform haben die Verbindungen die allgemeine Formel (I-a) oder (I-b), wobei R₁ die Gruppe der Formel R₄CO- ist, wobei R₄ eine Alkylgruppe mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen ist; R₂ eine Alkylgruppe mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen ist; und R₃ -CH₂CH₂NH₂, -COCH₂CH₂COOH oder -CH₂COOH ist.
In sämtlichen Fällen kann die Verbindung (I) in razemischer Mischung oder in R oder S Stereoisomer sein. Des weiteren schließt die vorliegende Erfindung die Verbindung (I) in der Form ihrer pharmazeutisch akzeptablen Salze ein.
Die Verbindungen der Erfindung können durch die in den nachfolgenden Reaktionsschemata, welche lediglich beispielhaft sind und in keiner Weise die Erfindung beschränken, beschriebenen Verfahren chemisch synthetisiert werden. Die Reaktionsschemata zeigen die Schritte zum Herstellen der repräsentativen Verbindungen der vorliegenden Erfindung und es können auch andere Verbindungen durch die nachfolgenden Schritte hergestellt werden, und zwar mit geeigneten Modifikationen von Reagenzien und Anfangsmaterialien, welche durch den Fachmann ins Auge gefasst werden.
ALLGEMEINE SYNTHETISCHE VORGEHENSWEISEN
Die Synthesen von 3-Acyloxy-2-Benzylpropyl-Thioharnstoff-Derivativen (7a–d) sind in den Schemata 1 und 2 kurz dargestellt. Die Monoalkylation von Diethylmalonat mit verschiedenen Benzylhalogeniden, gefolgt von einer LiAlH₄-Reduktion, erzeugte die entsprechenden Diole (2a–d). Die Monoacetylation von 2, Umwandlung der verbleibenden Alkoholfunktionsgruppe in ein Azid und die Entschützung bzw. Entfernung der Schutzgruppe der Acetylgruppe erzeugten die Zwischenverbindung 3-Azido-2-Benzyl-1-Propanole (5a–d). Die Azylierung von 5a–d mit verschiedenen Azylhalogeniden erzeugte die entsprechenden Ester 6a–d, welche nach der Reduktion der Azidgruppe mit 4-Methoxymethyloxy-3-Methoxybenzylisothiocyanat kondensiert und zu den gewünschten Endprodukten 7a–d hydrolisiert wurden. Die alternativen Etheranalogons, repräsentiert durch die 3-Benzyloxy-2-Benzylpropyl-thioharnstoff-Derivative, 9a, c wurden, wie in Schema 2 dargestellt, aus 5a, c synthetisch hergestellt. Zwei chirale Analogons 7a-I wurden aus (R)-3-Acetoxy-2-Benzyl-1-Propanol ((R)-3a) synthetisch hergestellt, welches aus der enantioselektiven enzymatischen Acetylierung von razemischem 2-Benzyl-1,3-Propanediol (Schema 3) gefolgt von derselben Vorgehensweise für die Synthese von 7a-I erhalten wurde.
Die Synthese von O-Essigsäure-Analogons (19a, b) der oben genannten Thioharnstoff-Derivative ist in Schema 4 dargestellt. 4-Hydroxy-3-Methoxy-Benzonitril (11) wurde durch eine MOM (Methlymethylether)-Gruppe geschützt, um 12 zu ergeben, dessen Cyano-Gruppe mittels LiAlH₄ zu Amin reduziert und dann durch eine CBZ (Chlorobenzyl)-Gruppe zu 13 reduziert wurde. Die MOM-Gruppe von 13 wurde dann entschützt und dann wurde die entsprechende Hydroxy-Gruppe durch Methylbromoacetat alkyliert, um 15 zu ergeben. Methylester von 15 wurde hydrolisiert und dann wurde die CBZ-Gruppe entschützt, um 17 zu ergeben. Das Amin von 17 wurde mit Isothiocyanat 18a, b kondensiert, um jeweils die gewünschten Endprodukte 19a, b zu ergeben.
Die Synthese von O-Sukzinesteranalogons (23a, b) der oben genannten Thioharnstoff-Derivate ist in Schema 5 dargestellt. Das Monobenzylester von Sukzinsäure 20 wurde mit Vanilloid 14 azyliert, um 21 zu ergeben, dessen Benzylgruppen durch Hydrogenation entschützt werden, um 22 zu ergeben. Das Amin von 22 wurde mit Isothiocyanat 18a, b kondensiert, um die jeweiligen gewünschten Endprodukte 23a, b zu ergeben.
Die Synthese von O-Aminoethyl-Analogons (28a, b) von Amidderivativen ist in Schema 6 dargestellt. Die Azidogruppe von 24 wurde zu Amin reduziert, welches vor Ort in situ mit homovanillischem Pentafluorester kondensiert wurde, um 25 zu ergeben. Die Hydroxylgruppe von 25 wurde mit Dibromoethan alkyliert, um 26 zu ergeben, dessen Bromo-Grupppe dann durch die Azidogruppe zu 27 substituiert wurde. Die Reduktion von 27a, b erzeugte die jeweiligen gewünschten Endprodukte 28a, b.
Die Synthese von O-Aminoethylanalogons (36a, b) der oben genannten Thioharnstoffderivative ist in Schema 7 dargestellt. Das Amin von 4-Hydroxy-3-Methoxybenzlymin 29 wurde durch eine Boc-Gruppe geschützt und dann wurde Hydroxy durch Dibromoethan alkyliert, um 31 zu ergeben. Die Bromo-Gruppe von 31 wurde durch die Azid- Gruppe substituiert und dann wurde N-Boc entschützt, um 33 zu ergeben. Das Amin von 33 wurde in das entsprechende Isothiocyanat umgewandelt, welches mit Azid 6 kondensiert wurde, um Thioharnstoff 25 zu ergeben. Die Azido-Gruppe von 35a, b wurde reduziert, um die jeweiligen gewünschten Endprodukte 36a, b zu erzeugen.
Schema 1
Schema 2
Schema 3
Schema 4
Schema 5
Schema 6
Schema 7
Struktur von Capsaicin (CAP)
Struktur von RTX
Die Verbindungen der vorliegenden Erfindung können durch die Kombination mit geeigneten medizinischen Trägern oder Verdünnungsmitteln in pharmazeutische Zusammensetzungen umgewandelt werden. Zum Beispiel können die Verbindungen der vorliegenden Erfindung in Ölen, Propylenglykol oder anderen Lösungsmitteln aufgelöst werden, die üblicherweise verwendet werden, um injizierbare Lösungen zu erzeugen. Geeignete Träger beinhalten, sind jedoch nicht beschränkt auf physiologische Saline, Polyethylenglycol, Ethanol, pflanzliche Öle und Isopropylmyristat. Für die topische Anwendung können die Verbindungen der Erfindung als eine Salbe oder eine Creme formuliert sein.
Die pharmazeutischen Zusammensetzungen, welche die Verbindung der vorliegenden Erfindung beinhalten, können für die folgenden Zwecke angewendet werden:

• um durch postherpetisch Neuralgie, diabetische Neuropathie erzeugte Schmerzen, Postmastektomie-Schmerzsyndrom, stumpfer Schmerz, Reflex sympathische Dystrophie, Trigeminus-Neuralgie, oraler neuropathischer Schmerz, Osteoarthritis, rheumatoide Arthritis, Fibromyalgie, Guillain-Barre-Syndrom, Meralgia paraestetica, Mundbrenn-Syndrom
• um Schmerzen, wie zum Beispiel hartnäckige Schmerzen aufgrund einer zweiseitigen peripheren Neuropathie, zu bessern
• um Jucken aufgrund von Schuppenflechte, Hämodialyse, aquagenischer Pruritus, Vulvar vestibulitis, Notalgia paraesthetica, brachioradialer Pruritus, simplex chronicus-Flechte
• um Cluster-Kopfschmerzen, vasomotische Rhinitis oder pereniale allergische Rhinitis in der Form von intranasalen Tropfen zu behandeln
• um Blasenhypersensibilität oder spinale Detrusor Hyperreflexie in der Form einer endovesicalen Lösung zu behandeln.

Die Verbindung der vorliegenden Erfindung hat eine wirksame analgetische und entzündungshemmende Aktivität und die pharmazeutische Zusammensetzung der vorliegenden Erfindung kann daher eingesetzt werden, um akute, chronische oder entzündliche Schmerzen zu verringern oder zu lindern, Entzündungen zu unterdrücken oder Drang-Inkontinenz zu behandeln.
Die folgenden Formulierungsverfahren und Arzneiträger sind lediglich beispielhaft und beschränken in keiner Weise die Erfindung.
Die Verbindungen der vorliegenden Erfindung können in pharmazeutischen Dosierungsformen in der Form ihrer pharmazeutisch akzeptablen Salze verwendet werden und können alleine oder in geeigneter Verbindung sowie in Kombination mit anderen pharmazeutisch aktiven Verbindungen verwendet werden.
Die Verbindungen der vorliegenden Erfindung können in Präparationen bzw. Zubereitungen für Injektionen durch Auflösen, Suspendieren oder Emulsifieren derselben in wässrigen Lösungen, wie zum Beispiel normaler Saline, Dextrose 5 %, oder nicht-wässrigen Lösungen, wie zum Beispiel pflanzliches Öl, synthetische, aliphatische Säureglyceride, Esther von höheren aliphatischen Säuren oder Propylenglykol, formuliert werden. Die Formulierung kann konventionelle Additive, wie zum Beispiel Lösungsbeschleuniger, isotonische Mittel, suspendierende Mittel, emulsifierende Mittel, Stabilisatoren und Konservierungsstoffe beinhalten.
Die gewünschte Dosis der Verbindungen der vorliegenden Erfindung variiert von dem Zustand und dem Gewicht des Subjekts, der Strenge, der Arzneiform, dem Weg und der Zeitdauer der Verabereichung, und kann durch den Fachmann ausgewählt werden. Um jedoch wünschenswerte Wirkungen zu erhalten, wird im allgemeinen empfohlen, 0,0001–100 mg/kg, vorzugsweise 0,001–100 mg/kg pro Gewicht/Tag der Verbindungen der vorliegenden Erfindung zu verabreichen. Die Dosis kann auf einmal oder verteilt auf mehrere pro Tag verabreicht werden. Bezüglich der Zusammensetzung sollten die Verbindungen zwischen 0,0001 bis 10 Gewichts-%, vorzugsweise 0,0001–1 Gewichts-%, basierend auf dem Gesamtgewicht der Zusammensetzung vorhanden sein.
Die pharmazeutische Zusammensetzung der vorliegenden Erfindung kann einem betreffenden Tier, wie zum Beispiel Säugetieren (Ratte, Maus, Haustiere oder Mensch) über verschiedene Wege verabreicht werden. Alle Arten der Verabreichung werden in Erwägung gezogen, zum Beispiel kann die Verarbereichung oral, rectal oder durch intravenöse, intramuskuläre, subkutane, intrathekale, epidurale oder intracerebroventriculare Injektion erfolgen.
BEISPIELE
Allgemeine Vorgehensweise für die Synthese von 1a–d
Eine gekühlte Lösung von Diethylmalonat (6,5 g, 40 mMol) in DMF (20 mL) bei 0 °C wurde mit Natriumhydrid (60 %, 1,92 g, 48 mMol) portionsweise behandelt und für 40 Min. bei Raumtemperatur umgerührt. Die Reaktionsmischung wurde mit entsprechend substituierten Benzylchloriden (48 mMol) behandelt und über Nacht bei Raumtemperatur umgerührt. Die Mischung wurde mit H₂O verdünnt und mit EtOAc mehrere Male extrahiert. Die kombinierte organische Schicht wurde mit H₂O und Salzlösung gewaschen, über MgSO₄ getrocknet und im Vakuum konzentriert. Der Rest bzw. Rückstand wurde mittels Flash-Säulenchromatographie auf Kieselsäuregel bzw. Silikagel mit EtOAc/Hexan (1:10) als ein Eluent gereinigt, um 1 zu ergeben.
Beispiel 1: Diethyl 3,4-Dimethylbenzylmalonat (1b)

70 % Ertrag, farbloses Öl; ¹H NMR (CDCl₃) δ 6,9–7,05 (m, 3 H), 4,14 (m, 4 H, 2 × CO₂CH₂), 3,61 (t, 1 H, CH), 3,25 (d, 1 H, CH₂Ar), 3,14 (d, 1 H, CH₂Ar), 2,2–2,25 (m, 6 H, 2 × CH₃), 1,21 (m, 6 H, 2 × CO₂CH₂CH ₃)

Beispiel 2: Diethyl 4-Chlorobenzylmalonat (1c)

74 % Ertrag, farbloses Öl; ¹H NMR (CDCl₃) δ 7,25 (d, 2 H), 7,16 (d, 2 H), 4,14 (m, 4 H, 2 × CO₂CH₂), 3,60 (t, 1 H, CH), 3,18 (d, 2 H, CH₂Ar), 1,21 (t, 6 H, 2 × CO₂CH₂CH ₃)

Beispiel 3: Diethyl 4-t-Butylbenzylmalonat (1d)

74 % Ertrag, farbloses Öl; ¹H NMR (CDCl₃) δ 7,29 (d, 2 H), 7,13 (d, 2 H), 4,16 (q, 4 H, 2 × CO₂CH₂), 3,63 (t, 1 H, CH), 3,18 (d, 2 H, CH₂Ar), 1,30 (s, 9 H, C(CH₃)₃), 1,20 (t, 6 H, 2 × CO₂CH₂CH ₃)

Allgemeine Vorgehensweise für die Synthese von 2a–d
Eine gekühlte Lösung von Lithiumaluminiumhydrid (3,64 g, 96 mMol) in Diethylether (80 mL) bei 0 °C wurde tropfenweise mit einer Lösung von 1 (24 mMol) in Diethylether (20 mL) behandelt. Nach dem Umrühren für 3 h bei Raumtemperatur wurde die Reaktionsmischung über einem Eisbad gekühlt und sukzessive durch die tropfenweise Hinzufügung von 3,5 mL H₂O, 7 ml 15 %-ige NaOH-Lösung und 10,5 mL H₂O behandelt. Die Mischung wurde durch Waschen derselben mit EtOAc gefiltert und das Filtrat wurde im Vakuum konzentriert. Der Rückstand wurde durch Flash-Säulenchromatographie über Silikagel mit EtOAc/Hexan (3:1) als ein Eluent gereinigt, um 2 zu ergeben.
Beispiel 4: 2-Benzyl-1,3-Propandiol (2a)

98 % Ertrag, weißer Feststoff, Schmelzpunkt = 67 °C; ¹H NMR (CDCl₃) δ 7,15–7,30 (m, 5 H, Phenyl), 3,74 (dd, 2 H, CH₂OH), 3,62 (dd, 2 H, CH₂OH), 2,9–3,0 (bs, 2 H, OH), 2,58 (d, 2 H, CH₂Ph), 2,03 (m, 1 H, CH)

Beispiel 5: 2-(3,4-Dimethylbenzyl)-1,3-Propandiol (2b)

92 % Ertrag, weißer Feststoff; ¹H NMR (CDCl₃) δ 6,88–7.06 (m, 3 H, Phenyl), 3,6–3,8(m, 4 H, 2 × CH (dd, 2 H, 2 × CH₂OH), 2,5–2,7 (bs, 2 H, OH), 2,60 (d, 1 H, CH₂Ph), 2,52 (d, 1 H, CH₂Ph), 2,2–2,28 (m, 6 H, 2 × CH₃), 2,02 (m, 1 H, CH)

Beispiel 6: 2-(4-Chlorobenzyl)-1,3-Propandiol (2c)

75 % Ertrag, weißer Feststoff, Schmelzpunkt = 64 °C; ¹H NMR (CDCl₃) δ 7,24 (d, 2 H), 7,10 (d, 2H), 3,75 (dd, 2 H, CH₂OH), 3,61 (dd, 2 H, CH₂OH), 2,85 (bs, 2 H, OH), 2,58 (d, 2 H, CH₂Ph), 1,97 (m, 1 H, CH)

Beispiel 7: 2-(4-t-Butylbenzyl)-1,3-Propandiol (2d)

80 % Ertrag, weißer Feststoff, Schmelzpunkt = 67 °C; ¹H NMR (CDCl₃) δ 7,31 (d, 2 H), 7,11 (d, 2 H), 3,81 (dd, 2 H, CH₂OH), 3,68 (dd, 2 H, CH₂OH), 2,58 (d, 2 H, CH₂Ph), 2,23 (bs, 2 H, OH), 2,05 (m, 1 H, CH), 1,30 (s, 9 H, C(CH₃)₃).

Allgemeine Vorgehensweise für die Synthese von 3a–d
Eine Mischung aus 2 (20 mMol), Trimethylorthoacetat (3,6 g, 30 mMol) und eine kathalytische Menge an P-Toluolsulfonsäure in CH₂Cl₂ (40 mL) wurde für 2 h bei Raumtemperatur umgerührt und dann mit H₂O (0,54 g, 30 mMol) behandelt. Nach Umrühren über Nacht bei Raumtemperatur wurde die Reaktionsmischung im Vakuum konzentriert. Der Rückstand wurde mittels Flash-Säulenchromatographie über Silikagel mit EtOAc/Hexan (1:2) als ein Eluent gereinigt, um 3 zu ergeben.
Beispiel 8: 2-Benzyl-3-Hydroxypropylacetat (3a)

97 % Ertrag, farbloses Öl; ¹H NMR (CDCl₃) δ 7,1–72,5 (m, 5 H, Phenyl), 4,06 (dd von AB, 2 H, CH₂Oac), 3,4 8 (m, 2 H, CH₂OH), 2,58 (ddd von AB, 2 H, CH₂Ph), 2,10 (m, 1 H, CH), 2,01 (s, 3 H, COCH₃)

Beispiel 9: (R)-2-Benzyl-1,3-Propandiol ((R)-3a)
Diese Verbindung wurde aus 2a durch eine in der Literatur veröffentlichte Vorgehensweise (Tetrahedron Letters 30, 6189–6192 (1989)) erhalten.
Beispiel 10: 2-(3,4-Dimethylbenzyl)-3-Hydroxypropylacetat (3b)

90 % Ertrag, farbloses Öl; ¹H NMR (CDCl₃) δ 6,88–7,06 (m, 5 H, Phenyl), 4,13 (m, 2 H, CH₂Oac), 3,54 (m, 2 H, CH₂OH), 2,62 (m, 2 H, CH₂Ph), 2,2–2,3 (m, 6 H, 2 × CH₃), 2,10 (m, 1 H, CH), 2,07 (s, 3 H, COCH₃)

Beispiel 11: 2-(4-Chlorobenzyl)-3-Hydroxypropylacetat (3c)

86 % Ertrag, farbloses Öl; ¹H NMR (CDCl₃) δ 7,25 (d, 2 H), 4,12 (ddd von AB, 2 H, CH₂Oac), 3,53 (ddd von AB, 2 H, CH₂OH), 2,63 (ddd von AB, 2 H, CH₂Ph), 2,10 (m, 1 H, CH), 2,06 (s, 3 H, COCH₃).

Beispiel 12: 2-(4-t-Butylbenzyl)-3-Hydroxypropylacetat (3d)

84 % Ertrag, farbloses Öl; ¹H NMR (CDCl₃) δ 7,30 (d, 2 H), 7,11 (d, 2 H), 4,13 (ddd von AB, 2 H, CH₂Oac), 3,56 (ddd von AB, 2 H, CH₂OH), 2,62 (ddd von AB, 2 H, CH₂Ph), 2,28 (s, 1 H, OH), 2,10 (m, 1 H, CH), 2,01 (s, 3 H, COCH₃), 1,30 (s, 9 H, C(CH₃)₃).

Allgemeine Vorgehensweise für die Synthese von 4a–d
Eine gekühlte Lösung von 3 (12 mMol) und Triethylamin (3,64 g, 36 mMol) in CH₂Cl₂ (20 mL) bei 0 °C wurde tropfenweise mit Methansulfonylchlorid (2,06 g, 18 mMol) behandelt. Nach dem Umrühren für 6 h bei Raumtemperatur wurde die Mischung mit CH₂Cl₂ verdünnt. Die organische Schicht wurde mit 1 N HCl, H₂O und Salzlösung gewaschen, über MgSO₄ getrocknet und im Vakuum konzentriert. Der Rückstand wurde mittels Flash-Säulenchromatographie auf Silikagel mit EtOAc/Hexan (1:3) als ein Eluent gereinigt, um das entsprechende Mesylat als ein Öl zu ergeben. Das Mesylat wurde in DMF (10 mL) aufgelöst und mit Natriumazid (2,2 g, 34 mMol) behandelt. Nach 8 h Umrühren bei 80 °C wurde die Reaktionsmischung mit H₂O verdünnt und mit EtOAc mehrere Male extrahiert. Die kombinierte organische Schicht wurde mit H₂O gewaschen, über MgSO₄ getrocknet und im Vakuum konzentriert. Der Rückstand wurde mittels Flash-Säulenchromatographie auf Silikagel mit EtOAc/Hexan (1:15) als ein Eluent gereinigt, um 4 zu ergeben.
Beispiel 13: 3-Azido-2-Benzylpropylacetat (4a)

92 % Ertrag, farbloses Öl; ¹H NMR (CDCl₃) δ 7,15–7,35 (m, 5 H, Phenyl), 4,05 (ddd von AB, 2 H, CH₂Oac), 3,34 (m, 2 H, CH₂N₃), 2,68 (d, 2 H, CH₂Ph), 2,22 (m, 1 H, CH), 2,08 (s, 3 H, COCH₃)

Beispiel 14: 3-Azido-2-(3,4-Dimethylbenzylpropylacetat (4b)

85 % Ertrag, farbloses Öl; ¹H NMR (CDCl₃) δ 6,87–7,07 (m, 3 H), 4,04 (m, 2 H, CH₂Oac), 3,33 (m, 2 H, CH₂N₃), 2,69 (d, 1 H, CH₂Ph), 2,60 (d, 1 H, CH₂Ph), 2,1–2,3 (m, 7 H, 2 × CH₃ und CH), 2,07 (s, 3 H, COCH₃).

Beispiel 15: 3-Azido-2-(4-Chlorobenzyl)Propylacetat (4c)

88 % Ertrag, farbloses Öl; ¹H NMR (CDCl₃) δ 7,26 (d, 2 H), 7,12 (d, 2 H), 4,03 (ddd von AB, 2 H, CH₂Oac), 3,34 (m, 2 H, CH₂N₃), 2,65 (d, 2 H, CH₂Ph), 2,17 (m, 1 H, CH), 2,07 (s, 3 H, COCH₃).

Beispiel 16: 3-Azido-2-(4-t-Butylbenzyl)Propylacetat (4d)

92 % Ertrag, farbloses Öl; ¹H NMR (CDCl₃) δ 7,32 (d, 2 H), 7,08 (d, 2 H), 4,05 (ddd von AB, 2 H, CH₂Oac), 3,35 (ddd von AB, 2 H, CH₂N₃), 2,64 (d, 2 H, CH₂Ph), 2,20 (m, 1 H, CH), 2,07 (s, 3 H, COCH₃), 1,30 (s, 9 H, C(CH₃)₃)

Allgemeine Vorgehensweise für die Synthese von 5a–d
Eine Lösung von 4 (8 mMol) und eine katalytische Menge von K₂CO₃ in MeOH (10 mL) wurde mit einigen Tropfen H₂O behandelt. Nach dem Umrühren für 2 h bei Raumtemperatur wurde die Reaktionsmischung mit mehreren Tropfen Essigsäure gequentscht und im Vakuum konzentriert. Der Rückstand wurde mittels Flash-Säulenchromatographie auf Silikagel mit EtOAc/Hexan (1:3) als ein Eluent gereinigt, um 5 zu ergeben.
Beispiel 17: 3-Azido-2-Benzyl-1-Propanol (5a)

98 % Ertrag, farbloses Öl; ¹H NMR (CDCl₃) δ 7,15–7,35 (m, 5 H, Phenyl), 3,65 (m, 2 H, CH₂OH), 3,40 (ddd von AB, 2 H, CH₂N₃), 2,67 (ddd von AB, 2 H, CH₂Ph), 2,04 (m, 1 H, CH).

Beispiel 18: 3-Azido-2-(3,4-Dimethylbenzyl)-1-Propanol (5b)

92 % Ertrag, farbloses Öl; ¹H NMR (CDCl₃) δ 6,88–7,08 (m, 5 H, Phenyl), 3,65 (m, 2 H, CH₂OH), 3,42 (m, 2 H, CH₂N₃), 2,68 (dd, 1 H, CH₂Ph), 2,60 (dd, 1 H, CH₂Ph), 2,2–2,3 (m, 6 H, 2 × CH₃), 2,03 (m, 1 H, CH).

Beispiel 19: 3-Azido-2-(4-Chlorobenzyl)-1-Propanol (5c)

88 % Ertrag, farbloses Öl; ¹H NMR (CDCl₃) δ 7,25 (d, 2 H), 7,10 (d, 2 H), 3,58 (m, 2 H, CH₂OH), 3,36 (m, 2 H, CH₂N₃), 2,63 (dd, 2 H, CH₂Ph), 2,1 (bs, 1 H, OH), 1,98 (m, 1 H, CH).

Beispiel 20: 3-Azido-2-(4-t-Butylbenzyl)-1-Propanol (5d)

98 % Ertrag, farbloses Öl; ¹H NMR (CDCl₃) δ 7,32 (d, 2 H), 7,10 (d, 2 H), 3,63 (ddd von AB, 2 H, CH₂OH), 3,39 (ddd von AB, 2 H, CH₂N₃), 2,62 (m, 2 H, CH₂Ph), 2,02 (m, 1 H, CH), 1,78 (bs, 1 H, OH), 1,30 (s, 9 H, C(CH₃)₃)

Allgemeine Vorgehensweise für die Synthese von 6a–d
Eine gekühlte Lösung von 5 (1 mMol), Triethylamin (4 mMol) und eine katalytische Menge von 4-Dimethylaminopyridin in CH₂Cl₂ (5 mL) bei 0 °C wurde mit dem entsprechenden Azylchlorid (2 mMol) behandelt. Nach 2–12 h Umrühren bei Raumtemperatur wurde die Mischung mit CH₂Cl₂ verdünnt. Die organische Schicht wurde mit 1 N CHl, H₂O und Salzlösung gewaschen, über MgSO₄ getrocknet und im Vakuum konzentriert. Der Rückstand wurde mittels Flash-Säulenchromatographie über Silikagel mit EtOAc/Hexan (1:10–20) als ein Eluent gereinigt, um 6 zu ergeben.
Beispiel 21: 3-Azido-2-Benzylpropylpivalat (6a-I)

92 % Ertrag, farbloses Öl; ¹H NMR (CDCl₃) δ 7,15–7,35 (m, 5 H, Phenyl), 4,04 (ddd von AB, 2 H, CH₂OCO), 3,34 (ddd von AB, 2 H, CH₂N₃), 2,68 (d, 2 H, CH₂Ph), 2,21 (m, 1 H, CH), 1,23 (s, 9 H, C(CH₃)₃).

Beispiel 22: 3-Azido-2-Benzylpropyl 2-Methylpropanoat (6a-II)

93 % Ertrag, farbloses Öl; ¹H NMR (CDCl₃) δ 7,15–7,34 (m, 5 H, Phenyl), 4,05 (ddd von AB, 2 H, CH₂OCO), 3,34 (m, 2 H, CH₂N₃), 2,68 (d, 2 H, CH₂Ph), 2,58 (m, 1 H, CHMe₂), 2,21 (m, 1 H, CH), 1,18 (dd, 6 H, 2 × CH₃).

Beispiel 23: 3-Azido-2-Benzylpropylhexanoat (6a-III)

90 % Ertrag, farbloses Öl; ¹H NMR (CDCl₃) δ 7,14–7,35 (m, 5 H, Phenyl), 4,05 (ddd von AB, 2 H, CH₂OCO), 3,34 (m, 2 H, CH₂N₃), 2,68 (d, 2 H, CH₂Ph), 2,32 (t, 2 H, OOCCH₂), 2,20 (m, 1 H, CH), 1,64 (m, 2 H), 1,2–1,4 (m, 4 H), 0,88 (deformiertes t, 3 H)

Beispiel 24: 3-Azido-2-Benzylpropylstearat (6a-IV)

78 % Ertrag, farbloses Öl; ¹H NMR (CDCl₃) δ 7,14–7,35 (m, 5 H, Phenyl), 4,05 (ddd von AB, 2 H, CH₂OCO), 3,33 (m, 2 H, CH₂N₃), 2,68 (d, 2 H, CH₂Ph), 2,32 (t, 2 H, OOCCH₂), 2,20 (m, 1 H, CH), 1,2–1,7 (m, 30 H), 0,88 (deformiertes 3 H).

Beispiel 25: 3-Azido-2-Benzylpropylbenzoat (6a-V)

90 % Ertrag, farbloses Öl; ¹H NMR (CDCl₃) δ 8,04 (m, 2 H), 7,15–7,60 (m, 8 H), 4,35 (dd, 1 H, J = 5,1 und 11,2 Hz, BzOCH₂), 4,26 (dd, 1 H, BzOCH₂), 3,43 (ddd von AB, 2 H, J = 5,61, 5,85 und 12,42 Hz, CH₂N₃), 2,78 (m, 2 H, CH₂Ph), 2,35 (m, 1 H, CH).

Beispiel 26: 3-Azido-2-(3,4-Dimethylbenzyl)Propylpivalat (6b-I)

94 % Ertrag, farbloses Öl; ¹H NMR (CDCl₃) δ 6,86–7,07 (m, 3 H), 4,04 (m, 2 H, CH₂OCO), 3,36 (m, 2 H, CH₂N₃), 2,70 (d, 1 H, CH₂Ph), 2,61 (d, 1 H, CH₂Ph), 2,1–2,3 (m, 7 H, 2 × CH₃ und CH), 1,23 (s, 9 H, C(CH₃)₃).

Beispiel 27: 3-Azido-2-(3,4-Dimethylbenzyl)Propylbenzoat (6b-V)

95 % Ertrag, farbloses Öl; ¹H NMR (CDCl₃) δ 8,02 (m, 2 H), 7,57 (m, 1 H), 7,46 (m, 2 H), 6,8–7,07 (m, 3 H), 4,32 (m, 2 H, CH₂OCO), 3,45 (m, 2 H, CH₂N₃), 2,80 (d, 1 H, CH₂Ph), 2,71 (d, 1 H, CH₂Ph), 2,2–2,4 (m, 7 H, 2 × CH₃ und CH).

Beispiel 28: 3-Azido-2(3,4-Dimethylbenzyl)Propyl 3,4-Diemthylbenzoat (6b-VI)

84 % Ertrag, farbloses Öl; ¹H NMR (CDCl₃) δ 7,77 (m, 2 H), 7,21 (m, 1 H), 6,9–7,07 (m, 3 H), 4,30 (m, 2 H, CH₂OCO), 3,44 (m, 2 H, CH₂N₃), 2,79 (d, 1 H, CH₂Ph), 2,70 (d, 1 H, CH₂Ph), 2,2–2,4 (m, 13 H, 4 × CH₃ und CH).

Beispiel 29: 3-Azido-2-(4-Chlorobenzyl)Propylpivalat (6c-I)

86 % Ertrag, farbloses Öl; ¹H NMR (CDCl₃) δ 7,27 (d, 2 H), 7,09 (d, 2 H), 4,02 (ddd von AB, 2 H, CH₂OCO), 3,33 (m, 2 H, CH₂N₃), 2,66 (d, 2 H, CH₂Ph), 2,18 (m, 1 H, CH), 1,23 (s, 9 H, C(CH₃)₃).

Beispiel 30: 3-Azido-2-(4-Chlorobenzyl)Propylbenzoat (6c-V)

92 % Ertrag, farbloses Öl; ¹H NMR (CDCl₃) δ 8,01 (m, 2 H), 7,58 (m, 1 H), 7,46 (m, 2 H), 7,28 (d, 2 H), 7,13 (d, 2 H), 4,29 (ddd von AB, 2 H, CH₂OCO), 3,43 (m, 2 H, CH₂N₃), 2,75 (d, 2 H, CH₂Ph), 2,33 (m, 1 H, CH).

Beispiel 31: 3-Azido-2-(4-t-Butylbenzyl)Propylpivalat (6d-I)

99 % Ertrag, farbloses Öl; ¹H NMR (CDCl₃) δ 7,31 (d, 2H), 7,08 (d, 2 H), 4,04 (ddd von AB, 2 H, CH₂OCO), 3,35 (m, 2 H, CH₂N₃), 2,65 (d, 2 H, CH₂Ph), 2,20 (m, 1 H, CH), 1,30 (s, 9 H, C(CH₃)₃), 1,23 (s, 9 H, C(CH₃)₃).

Beispiel 32: 3-Azido-2-(4-t-Butylbenzyl)Propylbenzoat (6d-V)

88 % Ertrag, farbloses Öl; ¹H NMR (CDCl₃) δ 8,04 (m, 2 H), 7,57 (m, 1 H), 7,45 (m, 2 H), 7,32 (d, 2H), 7,12 (d, 2H), 4,31 (ddd von AB, 2 H, CH₂OCO), 3,44 (m, 2 H, CH₂N₃), 2,75 (d, 2 H, CH₂Ph), 2,35 (m, 1 H, CH), 1,30 (s, 9 H, C(CH₃)₃).

Allgemeine Vorgehensweise für die Synthese von 7a–d Eine Lösung von 6 (0,5 mMol) und Lindlers Katalysator (50 mg) in EtOH (5 mL) wurde unter einem Wasserstoffballon für 2 h hydriert. Die Reaktionsmischung wurde gefiltert und das Filtrat wurde im Vakuum konzentriert. Der Rückstand wurde in CH₂Cl₂ (5 mL) aufgelöst und mit 4-[(Methoxylmethyl)oxy)]-3-Methoxybenzylisothiocyanat (0,5 mMol) behandelt. Nach dem Umrühren über Nacht bei Raumtemperatur wurde die Reaktionsmischung konzentriert und der Rückstand wurde mittels Flash-Säulenchromatographie auf Silikagel mit EtOAc/Hexan (1:1) als ein Eluent gereinigt, um den entsprechenden Thioharnstoff zu ergeben. Der Thioharnstoff wurde in CH₂Cl₂ (2 mL) aufgelöst und mit Trifluor-Essigsäure (1 mL) behandelt. Nach 1 h Umrühren bei Raumtemperatur wurde die Mischung mit festem NaHCO₃ gequentscht, gefiltert und das Filtrat wurde konzentriert. Der Rückstand wurde mit EtOAc verdünnt, mit NaHCO₃, H₂O und Salzlösung gewaschen und im Vakuum konzentriert. Der Rückstand wurde mittels Flash-Säulenchromatographie auf Silikagel mit EtOAc/Hexan (1:1) als ein Eluent gereinigt, um 7 zu ergeben.
Beispiel 33: 2-Benzyl-3-{[(4-Hydroxy-3-Methoxybenzyl)Thioreido]}Propylpivalat (7a-I)

40 % Ertrag, farbloses Öl; ¹H NMR (CDCl₃) δ 7,1–7,32 (m, 5 H, Phenyl), 6,75–6,9 (m, 3 H, Ar), 6,27 (bt, 1 H, NH) 6,05 (bs, 1 H, NH), 5,63 (s, 1 H, OH), 4,40 (bd, 2 H, J = 4,38 Hz, NHCH₂Ar), 4,17 (dd, 1 H, J = 3,9 und 11,46 Hz, CH₂OCO), 3,87 (s, 3 H, OCH₃), 3,7–3,85 (m, 2 H, 1 H von CH₂OCO) und CHCH₂NHC=S), 3,24 (ddd, 1 H, J = 5,37, 8,07 und 13,89 Hz, CHCH₂NHC=S), 2,61 (ddd von AB, 2 H, CH₂Ph), 2,33 (m, 1 H, CH), 1,23 (s, 9 H, C/CH₃)₃); IR (neat): 3362, 1715, 1278, 1157; MS m/e 445 (M⁺ + 1). Anal. (C₂₄H₃₂N₂O₄S) C, H, N, S.

Beispiel 34: (R)-2-Benzyl-3-{[(4-Hydroxy-3-Methoxybenzyl]Thionreido}Propylpivalat ((R)-7a-I)
(R)-Enantiomer von 7a-I; diese Verbindung wurde aus (R)-3a durch Folgen derselben allgemeinen Vorgehensweise wie für 7a-I erhalten; [α]_D = –714 (c, 0,22, CHCl₃)
Beispiel 35: (S)-2-Benzyl-3-{[(4-Hydroxy-3-Methoxybenzyl]Thionreido}Propylpivalat ((S)-7a-I)
(S)-Enantiomer von 7a-I; diese Verbindung wurde aus (R)-3a durch Folgen derselben allgemeinen Vorgehensweise wie für 7a-I erhalten; [α]_D = +695 (c, 0,08, CHCl₃)
Beispiel 36: 2-Benzyl-3-{[(4-Hydroxy-3-Methoxybenzyl]Thionreido}Methylpropanoat (7a-II)

35 % Ertrag, farbloses Öl; ¹H NMR (CDCl₃) δ 7,13–7,30 (m, 5 H, Phenyl), 6,75–6,78 (m, 3 H, Ar), 6,34 (bt, 1 H, NH), 6,30 (bs, 1 H, NH), 5,75 (s, 1 H, OH), 4,40 (bs, 2 H, NHCH₂Ar), 4,17 (dd, 1 H, J = 3,9 und 10,95 Hz, CH₂OCO), 3,84 (s, 3 H, OCH₃), 3,65–3,85 (m, 2 H, CH₂OCO und CHCH₂NHC=S), 3,28 (m, 1 H, CHCH₂NHC=S), 2,60 (m, 3 H, CH₂Ph und CHMe₂), 2,30 (m, 1 H, CHCH₂Ph), 1,18 (dd, 6 H, 2 × CH₃); IR (rein): 3361, 1715, 1273, 1157; MS m/e 430 (M⁺). Anal. (C₂₃H₃₀N₂O₄S) C, H, N, S.

Beispiel 37: 2-Benzyl-3-{[(4-Hydroxy-3-Methoxybenzyl]Thionreido}Propylhexanoat (7a-III)

34 % Ertrag, farbloses Öl; ¹H NMR (CDCl₃) δ 7,1–7,3 (m, 5 H, Phenyl), 6,75–6,9 (m, 3 H, Ar), 6,23 (bt, 1 H, NH), 6,11 (bs, 1 H, NH), 5,66 (s, 1 H, OH), 4,40 (bs, 2 H, NHCH₂Ar), 4,15 (dd, 1 H, J = 3,9 und 11,43 Hz, CH₂OCO), 3,86 (s, 3 H, OCH₃), 3,65–3,85 (m, 2 H, CH₂OCO und CHCH₂NHC=S), 3,29 (m, 1 H, CHCH₂NHC=S), 2,61 (m, 2 H, CH₂Ph), 2,30 (m, 3 H, CH₂COO und CH), 1,65 (m, 2 H), 1,2–1,4 (m, 4 H), 0,88 (deformiertes t, 3 H); IR (rein): 3360, 1715, 1274, 1122; MS m/e 458 (M⁺). Anal. (C₂₅H₃₄N₂O₄S) C, H, N, S.

Beispiel 38: 2-Benzyl-3-{[(4-Hydroxy-3-Methoxybenzyl]Thionreido}Propylstearat (7a-IV)

30 % Ertrag, farbloses Öl; ¹H NMR (CDCl₃) δ 7,1–7,3 (m, 5 H, Phenyl), 6,75–6,9 (m, 3 H, Ar), 6,28 (bt, 1 H, NH), 6,17 (bs, 1 H, NH), 5,69 (s, 1 H, OH), 4,39 (bs, 2 H, NHCH₂Ar), 4,14 (dd, 1 H, J = 3,9 und 11,67 Hz, CH₂OCO), 3,87 (s, 3 H, OCH₃), 3,65–3,85 (m, 2 H, CH₂OCO und CHCH₂NHC=S), 3,30 (m, 1 H, CHCH₂NHC=S), 2,60 (m, 2 H, CH₂Ph), 2,30 (m, 3 H, CH₂COO und CH), 1,2–1,7 (m, 30 H), 0,88 (deformiertes t, 3 H); IR (rein): 3363, 1731, 1274, 1031; MS m/e 626 (M⁺). Anal. (C₃₇H₅₈N₂O₄S)

Beispiel 39: 2-Benzyl-3-{[(4-Hydroxy-3-Methoxybenzyl]Thionreido}Propylbenzoat (7a-V)

50 % Ertrag, weißer Feststoff, Schmelzpunkt 90 °C; ¹H NMR (CDCl₃) δ 7,98–8,02 (m, 2 H), 7,58 (m, 1 H), 7,4–7,5 (m, 2 H), 7,1–7,32 (m, 5 H, Phenyl), 6,72–6,85 (m, 3 H, Ar), 6,42 (bt, 1 H, NH), 6,31 (bs, 1 H, NH), 5,73 (s, 1 H, OH), 4,34–4,42 (m, 3 H, NHCH₂Ar und CH₂OCO), 4,05 (dd, 1 H, CH₂OCO), 3,7–3,85 (m, 4 H, OCH₃ und CHCH₂NHC=S), 3,38 (m, 1 H, CHCH₂NHC=S), 2,6–2,78 (m, 2 H, CH₂Ph), 2,46 (m, 1 H, CH); IR (rein): 3360, 1714, 1274, 1121; MS m/e 464 (M⁺). Anal. (C₂₆H₂₈N₂O₄S) C, H, N, S.

Beispiel 40: 2-(3,4-Dimethylbenzyl)-3-{[(4-Hydroxy-3-Methoxybenzyl]Thionreido}Propylpivalat (7b-I)

40 % Ertrag, weißer Feststoff, Schmelzpunkt = 47 °C; ¹H NMR (CDCl₃) δ 6,93–7,05 (m, 3 H), 6,77–6,9 (m, 3 H, Ar), 6,22 (m, 1 H, NH), 5,98 (bs, 1 H, NH), 5,61 (s, 1 H, OH), 4,37 (bs, 2 H, NHCH₂Ar), 4,17 (ddd von AB, 1 H, CH₂OCO), 3,87 (s, 3 H, OCH₃), 3,7–3,85 (m, 2 H, CH₂OCO und CHCH₂NHC=S), 3,27 (m, 1 H, CHCH₂NHC=S), 2,60 (m, 2 H, CH₂Ph), 2,2–2,32 (m, 7 H, 2 × CH₃ und CH), 1,22 (s, 9 H, C(CH₃)₃); IR (rein): 3360, 1714, 1279, 1159; MS m/e 474 (M⁺ + 2). Anal. (C₂₆H₃₆N₂O₄S) C, H, N, S.

Beispiel 41: 2-(3,4-Dimethylbenzyl)-3-{[(4-Hydroxy-3-Methoxybenzyl]Thionreido}Propylbenzoat (7b-V)

45 % Ertrag, weißer Feststoff, Schmelzpunkt = 44 °C; ¹H NMR (CDCl₃) δ 8,02 (m, 2 H), 7,59 (m, 1 H), 7,46 (m, 2 H), 6,9–7,06 (m, 3 H), 6,72–6,85 (m, 3 H, Ar), 6,33 (m, 1 H, NH), 6,13 (bs, 1 H, NH), 5,65 (s, 1 H, OH), 4,35–4,44 (m, 3 H, NHCH₂Ar) und CH₂OCO), 4,05 (m, 1 H, CH₂OCO), 3,7–3,85 (m, 4 H, OCH₃ und CHCH₂NHC=S), 3,40 (m, 1 H, CHCH₂NHC=S), 2,6,–2,78 (m, 2 H, CH₂Ph), 2,44 (m, 1 H, CH), 2,2–2,3 (m, 6 H, 2 × CH₃); IR (rein): 3360, 1713, 1274, 1121; MS m/e 492 (M⁺). Anal. (C₂₅H₃₂N₂O₄S) C, H, N, S.

Beispiel 42: 2-(3,4-Dimethylbenzyl)-3-{[(4-Hydroxy-3-Methoxybenzyl]Thionreido}Propyl 3,4-Dimethylbenzoat (7b-VI)

55 % Ertrag, weißer Feststoff, Schmelzpunkt = 58 °C; ¹H NMR (CDCl₃) δ 7,75 (m, 2 H), 7,20 (m, 1 H), 6,9–7,06 (m, 3 H), 6,74–6,85 (m, 3 H, Ar), 6,39 (m, 1 H, NH), 6,07 (bs, 1 H, NH), 5,63 (s, 1 H, OH), 4,35–4,43 (m, 3 H, NHCH₂Ar) und CH₂OCO), 4,05 (m, 1 H, CH₂OCO), 3,7–3,85 (m, 4 H, OCH₃ und CHCH₂NHC=S), 2,6–2,74 (m, 2 H, CH₂Ph), 2,41 (m, 1 H, CH), 2,2–2,35 (m, 12 H, 4 × CH₃); IR (rein): 3373, 1711, 1266, 1124; MS m/e 520 (M⁺). Anal (C₃₀H₃₆N₂O₄S) C, H, N, S.

Beispiel 43: 2-(4-Chlorobenzyl)-3-{[(4-Hydroxy-3-Methoxybenzyl]Thionreido}Propylpivalat (7c-I)

40 % Ertrag, weißer Feststoff, Schmelzpunkt = 62 °C; ¹H NMR (CDCl₃) δ 7,25 (d, 2 H), 7,10 (d, 2 H), 6,77–6,90 (m, 3 H, Ar), 6,38 (t, 1 H, NH), 6,25 (bs, 1 H, NH), 5,72 (s, 1 H, OH), 4,42 (bs, 2 H, NHCH₂Ar), 4,16 (dd von AB, 1 H, CH₂OCO), 3,86 (s, 3 H, OCH₃), 3,7–3,85 (m, 2 H, CH₂OCO und CHCH₂NHC=S), 3,19 (m, 1 H, CHCH₂NHC=S), 2,59 (dd von AB, 2 H, CH₂Ph), 2,32 (m, 1 H, CH), 1,22 (s, 9 H, C(CH₃)₃); IR (rein): 3360, 1714, 1279, 1159; MS m/e 479 (M⁺). Anal. (C₂₄H₃₁ClN₂O₄S) C, H, N, S.

Beispiel 44: 2-(4-Chlorobenzyl)-3-{[(4-Hydroxy-3-Methoxybenzyl]Thionreido}Propylbenzoat (7c-V)

55 % Ertrag, weißer Feststoff, Schmelzpunkt = 57 °C; ¹H NMR (CDCl₃) δ 8,00 (m, 2 H), 7,60 (m, 1 H), 7,47 (m, 2 H), 7,27 (d, 2 H), 7,15 (d, 2 H), 6,76–6,90 (m, 3 H, Ar), 6,36 (t, 1 H, NH), 6,15 (bs, 1 H, NH), 5,61 (s, 1 H, OH), 4,40 (m, 3 H, NHCH₂Ar) und CH₂OCO), 4,00 (dd von AB, 1 H, CH₂OCO), 3,86 (s, 3 H, OCH₃), 3,85 (m, 1 H, CHCH₂NHC=S), 3,31 (m, 1 H, CHCH₂NHC=S), 2,67 (dd von AB, 2 H, CH₂Ph), 2,46 (m, 1 H, CH); IR (rein): 3373, 11711, 1266, 1124; MS m/e 499 (M⁺). Anal. (C₂₆H₂₇ClN₂O₄S) C, H, N, S.

Beispiel 45: 2-(4-t-Butylbenzyl)-3-{[(4-Hydroxy-3-Methoxybenzyl]Thionreido}Propylpivalat (7d-I)

40 % Ertrag, weißer Feststoff, Schmelzpunkt = 52 °C; ¹H NMR (CDCl₃) δ 7,30 (d, 2 H), 7,09 (d, 2 H), 6,75–6,90 (m, 3 H, Ar), 6,27 (t, 1 H, NH), 6,10 (bs, 1 H, NH), 5, 66 (s, 1 H, OH), 4,40 (bs, 2 H, NHCH₂Ar), 4,15 (dd von AB, 1 H, CH₂OCO), 3,86 (s, 3 H, OCH₃), 3,7–3,85 (m, 2 H, CH₂OCO und CHCH₂NHC=S), 3,27 (m, 1 H, CHCH₂NHC=S), 2,58 (ddd von AB, 2 H, CH₂Ph), 2,30 (m, 1 H, CH), 1,29 (s, 9 H, C(CH₃)₃), 1,22 (s, 9 H, C(CH₃)₃); IR (rein): 3360, 1714, 1277, 1158; MS m/e 500 (M⁺). Anal. (C₂₈H₄₀N₂O₄S) C, H, N, S.

Beispiel 46: 2-(4-t-Butylbenzyl)-3-{[(4-Hydroxy-3-Methoxybenzyl]Thionreido}Propylbenzoat (7d-V)

50 % Ertrag, weißer Feststoff, Schmelzpunkt = 54 °C; ¹H NMR (CDCl₃) δ 8,02 (m, 2 H), 7,60 (m, 1 H), 7,46 (m, 2 H), 7,32 (d, 2 H), 7,14 (d, 2 H), 6,75–6,90 (m, 3 H, Ar), 6,28 (t, 1 H, NH), 6,06 (bs, 1 H, NH), 5,61 (s, 1 H, OH), 4,40 (m, 3 H, NHCH₂Ar) und CH₂OCO), 4,08 (dd von AB, 1 H, CH₂OCO), 3,86 (s, 3 H, OCH₃), 3,80 (m, 1 H, CHCH₂NHC=S), 3,40 (m, 1 H, CHCH₂NHC=S), 2,68 (m, 2 H, CH₂Ph), 2,46 (m, 1 H, CH), 1,29 (s, 9 H, C(CH₃)₃); IR (rein): 3360, 1714, 1272, 1124; MS m/e 520 (M⁺). Anal. (C₃₀H₃₆N₂O₄S) C, H, N, S.

Beispiel 47: N-[2-Benzyl-3-(Bezyloxy)Propyl]-N'-(4-Hydroxy-3-Methoxyebenzyl)Thioharnstoff (9a)

60 % Ertrag, farbloses Öl; ¹H NMR (CDCl₃) δ 7,10–7,30 (m, 10 H, 2 × Ph), 6,81 (d, 1 H, Ar), 6,60 (bs, 1 H, Ar), 6,56 (d, 1 H, Ar), 6,54 (bs, 1 H, NH), 5,64 (s, 1 H, OH), 4,35 (m, 4 H, NHCH₂Ar) und PhCH₂O), 3,82 (s, 3 H, OCH₃), 3,50 (m, 2 H, BnOCH₂), 3,37 (bt, 2 H, CHCH₂NHC=S), 2,64 (m, 2 H, CH₂Ph), 2,20 (m, 1 H, CH); IR (rein): 3288, 1274, 1123; MS m/e 450 (M⁺). Anal. (C₂₆H₃₀N₂O₃S) C, H, N, S.

Beispiel 48: N-[2-Benzyloxy-2-(4-Chlorobenzyl)Propyl]-N'-(4-Hydroxy-3-Methoxyebenzyl)Thioharnstoff (9c)

Weißer Feststoff, Schmelzpunkt = 37,5 °C; ¹H NMR (CDCl₃) δ 7,0–7,3 (m, 9 H), 6,5–6,84 (m, 3 H, Ar), 6,54 (bs, 1 H, NH), 6,30 (bs, 1 H, NH), 5,68 (s, 1 H, OH), 4,32 (m, 4 H, NHCH₂Ar und PhCH₂O), 3,82 (s, 3 H, OCH₃), 3,48 (m, 2 H, BHOCH₂), 3,34 (m, 2 H, CHCH₂NHC=S), 2,58 (m, 2 H, CH₂Ph), 2,16 (m, 1 H, CH); IR (rein): 3340, 1273, 1153; MS m/e 484 (M⁺). Anal. (C₂₆H₂₉ClN₂O₃S) C, H, N, S.

Beispiel 49: 3-Methoxy-4-Methxymethoxy-Benzonitril (12)
Eine Lösung von 4-Hydroxy-3-Methoxy-Benzonitril (11, 1,5 g, 10 mMol) und Diisopropylethylamin (2,7 mL, 15 mMol) in CH₂Cl₂ (50 mL) wurde mit Chloromethylmethylether (0,92 mL, 12 mMol) behandelt und für 3 h umgerührt. Nach der Verdünnung mit CH₂Cl₂ wurde die Mischung mit H₂O gewaschen, über MgSO₄ getrocknet und im Vakuum konzentriert. Der Rest wurde mittels Flash- Säulenchromatographie über Silikagel unter Verwendung von EtOAc:Hex (1:2) als ein Eluent gereinigt, um 12 als einen weißen Feststoff zu ergeben (1,54 g, 80 %).
¹H NMR (CDCl₃) δ 7,27 (s, 1 H, Ar), 7,24 (s, 1 H, Ar), 7,11 (s, 1 H, Ar), 5,29 (s, 2 H, ArOCH₂), 3,99 (s, 3 H, ArOCH₃), 3,51 (s, 3 H, Ch₂OCH₃)
Beispiel 50: (3-Methoxy-4-Methoxymethoxybenzyl)Karbamidsäurebenzylester (13)
Eine Lösung von 12 (1,54 g, 8 mMol) in THF (20 mL) wurde tropfenweise zu einer umgerührten Suspension von Lithiumaluminiumhydrid (1,2 g, 32 mMol) in THF (30 mL) hinzugefügt. Nach einer Erwärmung im Rückfluss für 4 h wurde die Reaktionsmischung auf 0 °C abgekühlt und mit 5 N NaOH gequentscht, um überschüssiges LiAlH₄ zu zerstören. Ausgefällte Aluminiumsalze wurden mittels Filtration entfernt und das THF wurde verdampft. Der Rest wurde mit Ether und H₂O abgeteilt. Die Etherschicht wurde mit Salzlösung gewaschen, über K₂CO₃ getrocknet, gefiltert und im Vakuum konzentriert, um Amin zu ergeben. Das Amin wurde in CH₂Cl₂ (15 mL) aufgelöst und die Lösung wurde mit NEt₃ (1,16 mL, 8,3 mMol) und Benzlychlorformat (1,18 mL, 8,3 mMol) behandelt. Nach dem Umrühren für 2 h bei Raumtemperatur wurde die Reaktionsmischung mit CH₂Cl₂ verdünnt. Die organische Schicht wurde mit H₂O und Salzlösung gewaschen, über MgSO₄ getrocknet und im Vakuum konzentriert. Der Rest wurde mittels Flash-Säulenchromatographie über Silikagel unter Verwendung von EtOAc:Hex (1:2) als ein Eluent gereinigt, um 13 als einen weißen Feststoff zu ergeben (0,795 g, 30 %).
¹H NMR (CDCl₃) δ 7,34 (m, 5 H, Phenyl), 7,08 (d, 1 H, Ar), 6,81 (m, 2 H, Ar), 5,21 (s, 2 H, ArOCH₂), 5,14 (s, 2 H, OCH₂Ph), 4,32 (d, 2 H, NH₂COO), 3,85 (s, 3 H, ArOCH₃), 3,50 (s, 3 H, ArOCH₂OCH₃)
Beispiel 51: (4-Hydroxy-3-Methoxybenzyl)Karbamidsäurebenzylester (14)
Eine Lösung von 13 (0,795 g, 2,4 mMol) in CH₂Cl₂ (5 mL) wurde mit Trifluoressigsäure (2,5 mL) langsam behandelt und für 5 Min. bei Raumtemperatur umgerührt. Nach dem Abkühlen auf 0 °C wurde die Reaktionsmischung mit gesättigter NaHCO₃-Lösung neutralisiert, mit H₂O verdünnt und mit CH₂Cl₂ mehrere Male extrahiert. Die kombinierte organische Schicht wurde mit H₂O und Salzlösung gewaschen, über MgSO₄ getrocknet und im Vakuum konzentriert. Der Rest wurde mittels Flash-Säulenchromatographie über Silikagel unter Verwendung von EtOAc:Hex (2:1) als ein Eluent gereinigt, um 14 als einen weißen Feststoff zu ergeben (680 mg, 99 %).
¹H NMR (CDCl₃) δ 7,34 (m, 5 H, Phenyl), 6,83 (m, 3 H, Ar), 5,14 (s, 2 H, OCH₂Ph), 4,30 (d, 2 H, NH₂COO), 3,86 (s, 3 H, ArOCH₃)
Beispiel 52: [4-(Benzyloxykarbonylaminmethyl)-2-Methoxy-Phenoxy]-Essigsäuremethylester (15)
Eine Lösung von 14 (0,287 g, 1 mMol) in Azeton (20 mL) wurde mit K₂CO₃ (0,552 g, 4 mMol) und Methylbromoazetat (0,14 mL, 1,5 mMol) behandelt und für 3 h im Rückfluss erhitzt. Nach dem Abkühlen wurde die Reaktionsmischung gefiltert und das Filtrat wurde im Vakuum konzentriert. Der Rest wurde mittels Flash- Säulenchromatographie über Silikagel unter Verwendung von EtOAc:Hex (3:2) als ein Eluent gereinigt, um 15 als einen weißen Feststoff zu ergeben (0,323 g, 90 %).
¹H NMR (CDCl₃) δ 7,28–7,33 (m, 5 H, Phenyl), 6,78 (m, 3 H, Ar), 5,11 (s, 2 H, COCH₂Ph), 4,76 (s, 2 H, CH₂Ph), 4,28 (d, 2 H, CH₂NHCO), 3,81 (s, 3 H, ArOCH₃), 3,76 (s, 3 H, COOCH₃)
Beispiel 53: [4-(Benzlyoxykarbonylamino-methyl)-2-Methoxy-Phenoxy]-Essigsäure (16)
Eine Lösung von 5 (0,323 g, 0,9 mMol) in THF (1 mL) wurde mit 15 %-iger NaOH-Lösung (1 mL) behandelt und für 30 Min. bei Raumtemperatur umgerührt. Die Reaktionsmischung wurde mit Essigsäure neutralisiert, mit H₂O verdünnt und mit CH₂Cl₂ mehrere Male extrahiert. Die kombinierte organische Schicht wurde mit H₂O gewaschen, über MgSO₄ getrocknet und im Vakuum konzentriert, um 16 als einen weißen Feststoff zu ergeben (0,276 g, 89 %).
¹H NMR (DMSO) δ 7,72 (s, 1 H, COOH), 7,17–7,33 (m, 5 H, Phenyl), 6,81 (s, 1 H, Ar), 6,67 (s, 2 H, Ar), 5,02 (s, 2 H, COCH₂Ph), 4,16 (s, 2 H, CH₂Ph), 4,09 (d, 2 H, CH₂NHCO), 3,70 (s, 3 H, ArOCH₃)
Beispiel 54: (4-Aminomethyl-2-Methoxy-Phenoxy)-Essigsäure (17)
Eine Lösung von 16 (0,276 g, 0,8 mMol) in MeOH (5 mL) wurde mit 10 % Palladium auf Kohlenstoff (30 mg) behandelt und unter einem Ballon aus Wasserstoff 30 Min. hydriert. Die Reaktionsmischung wurde filtriert und das Filtrat wurde konzentriert, um 17 als einen weißen Feststoff (0,093 g, 55 %) zu ergeben, welcher für den nächsten Schritt ohne weitere Reinigung verwendet wurde.
Allgemeine Vorgehensweise für die Synthese von 19
Eine Lösung von 17 (0,5 mMol) in DMF (1 mL) wurde mit NEt₃ (1,0 mMol) behandelt, für 30 Min. umgerührt und mit einer Lösung aus Isothiocyanat 18 (0,5 mMol) in DMF behandelt. Nach dem Umrühren für 24 h bei Raumtemperatur wurde die Reaktionsmischung mit H₂O verdünnt und mit EtOAc mehrere Male extrahiert. Die kombinierte organische Schicht wurde mit H₂O und Salzlösung gewaschen, über MgSO₄ getrocknet und im Vakuum konzentriert. Der Rest wurde mittels Flash-Säulenchromatographie über Silikagel unter Verwendnung von CH₂Cl₂:MeOH:AcOH (100:10:0,5) als ein Eluent gereinigt, um 19 zu ergeben.
Beispiel 55: 2,2-Mimethyl-Propionicsäure 2-[3-(4-Carboxymethxy-3-Methoxy-Benzyl)-Thioureidomethyl]-3-(3,4-Dimethyl-Phenyl)-Propylester (19a)

Ertrag 27 %, weißer Feststoff
¹H NMR (CDCl₃) δ 7,15–7,26 (m, 4 H, Ar), 6,76 (m, 3 H, Ar), 6,54 (m, 1 H, NH), 4,53 (s, 2 H, CH₂COOH), 4,45 (bs, 2 H, NHCH₂Ar), 4,15 (ddd von AB, 1 H, CH₂OC=O), 3,82 (s, 3 H, OCH₃), 3,6–3,85 (m, 2 H, CH₂OC=O und CHCH₂NHC=S), 3,26 (m, 1 H, CHCH₂NHC=S), 2,60 (m, 2 H, CH₂Ph), 2,20–2,28 (m, 7 H, 2 × CH₃ & CHCH₂Ph), 1,23 (s, 9 H, CO(CH₃)₃)

Beispiel 56: 2,2-Dimethyl-Propionsäure-3-(4-t-Butyl-Phenyl)-2-[3-(4-Carboxy Methoxy-3-Methoxy-Benzyl)-Thiourediomethyl]-Propylester (19b)

Ertrag 52 %, weißer Feststoff
¹H NMR (CDCl₃) δ 7,09–7,28 (m, 4 H, Ar), 6,85 (m, 3 H, Ar), 6,54 (m, 1 H, NH), 4,58 (s, 2 H, CH₂COOH), 4,46 (bs, 2 H, NHCH₂Ar), 4,12 (ddd von AB, 1 H, CH₂OC=O), 3,78 (s, 3 H, OCH3), 3,7–3,85 (m, 2 H, CH₂OC=O und CHCH₂NHC=S), 3,26 (m, 1 H, CHCH ₂NHC=S), 2,58 (m, 2 H, CH₂Ph), 1,28 (s, 9 H, ArC(CH₃)₃), 1,22 (s, 9 H, CO(CH₃)₃)

Beispiel 57: Sukzinsäuremonobenzylester (20)
Eine Lösung von Benzylalkohol (0,52 mL, 5 mMol) in THF (20 mL) wurde mit NaH (60 %, 0,2 g, 5 mMol) und Sukzinanhydrid (0,502 g, 5 mMol) behandelt und für 4 h im Rückfluss erhitzt. Nach dem Abkühlen auf Raumtemperatur wurde die Reaktionsmischung mit H₂O verdünnt und mit EtOAc mehrere Male extrahiert. Die kombinierte organische Schicht wurde mit H₂O und Salzlösung gewaschen, über MgSO₄ getrocknet und im Vakuum konzentriert. Der Rest wurde mittels Flash-Säulenchromatographie über Silikagel unter Verwendung von EtOAc:Hex (1:1) als ein Eluent gereinigt, um 20 als einen weißen Feststoff (0,866 g, 57 %) zu ergeben.
¹H NMR (CDCl₃) δ 7,38 (s, 5 H, Phenyl), 5,15 (s, 2 H, PhCH₂), 2,71 (m, 4 H, COCH₂CH₂CO)
Beispiel 58: Sukzinsäurebenzylester 4-(Benzyloxycarbonylamino-Methyl)-2-Methoxy-Phenylester (21)
Eine Lösung von 10 (0, 8 66 g, 2, 85 mMol) in CH₂Cl₂ (10 mL) wurde mit 14 (2,85 mMol), Dicyclohexylcarbodiimid (4,2 mMol) und 4-Dimethylaminpyridin (0,42 mMol) aufeinanderfolgend behandelt und für 24 h bei Raumtemperatur umgerührt. Die Reaktionsmischung wurde mit Diethylether verdünnt, die ausgefällten Feststoffe wurden gefiltert und das Filtrat wurde im Vakuum konzentriert. Der Rest wurde mittels Flash-Säulenchromatographie über Silikagel unter Verwendung von EtOAc:Hex (2:1) als ein Eluent gereinigt, um 21 als einen weißen Feststoff (1,15 g, 85 %) zu ergeben.
¹H NMR (CDCl₃) δ 7,30–7,36 (m, 10 H, 2 × Phenyl), 6,86 (m, 3 H, Ar), 5,14 (d, 4 H, PhCH₂), 4,34 (d, 2 H, CH₂NH), 3,75 (s, 3 H, ArOCH₃), 2,93 (t, 2 H, COCH₂CH₂CO), 2,79 (t, 2 H, COCH₂CH₂CO)
Beispiel 59: Sukzinsäuremono-(4-Aminomethyl-2-Methoxy-Phenyl)Ester (22)
Diese Verbindung wurde aus 11 durch Folgen der Vorgehensweise für die Synthese von 17 hergestellt.
Ertrag 99 %, gelber Feststoff.
¹H NMR (DMSO) δ 8,24 (t, 1 H, COOH), 6,75 (m, 3 H, Ar), 4,17 (d, 2 H, CH₂NH), 3,73 (s, 3 H, ArOCH₃), 2,44 (t, 2 H, COCH₂CH₂CO), 2,34 (t, 2 H, COCH₂CH₂CO)
Allgemeine Synthese bzw. Vorgehensweise für die Synthese von 23
Diese Verbindungen wurden aus 18 und 22 durch Folgen der Vorgehensweise für die Synthese von 19 hergestellt.
Beispiel 60: Sukzinsäuremono-(4-{3-[3-(3,4-Dimethylphenyl)-2-(2,2-Dimethylpropionyloxymethyl)-Propyl]-Thioureidomethyl}-2-Methoxy-Phenyl)Ester (23a)

Ertrag 17 %, weißer Feststoff
¹H NMR (CDCl₃) δ 6,9–7,2 (m, 4 H, Ar), 6,8 (m, 3 H, Ar), 6,34 (m, 1 H, NH), 4,56 (d, 2 H, NHCH₂Ar), 4,04 (m, 1 H, CH₂OC=O), 3,84 (s, 3 H, OCH₃), 3,6–3,85 (m, 2 H, CH₂OC=O und CHCH ₂NHC=S), 3,27 (m, 1 H, CHCH ₂NHC=S), 2,65 (m, 2 H, CH₂Ph) 2,50 (s, 4 H, COCH₂CH₂CO), 2,18–2,29 (m, 7 H, 2 × CH₃ und CHCH₂Ph), 1,24 (s , 9 H, CO(CH₃)₃)

Beispiel 61: Sukzinsäuremono-(4-{3-[3-(4-t-Butylphenyl)-2-(2,2-Dimethylpropionyloxymethyl)-Propyl]-Thioureidomethyl}-2-Methoxy-Phenyl)Ester (23b)

Ertrag 9 %, weißer Feststoff
¹H NMR (CDCl₃) δ 7,07–7,32 (m, 4 H, Ar), 6,82 (m, 3 H, Ar), 6,59 (m, 1 H, NH), 4,89 (m, 3 H, NHCH₂Ar) und CH ₂OC=O), 4,12 (ddd von AB, 1 H, CH₂OC=O), 3,85 (s, 3H, OCH₃), 3,7–3,89 (m, 2 H, CH₂OC=O und CHCH ₂NHC=S), 3,41 (m, 1 H, CHCH₂NHC=S), 2,58 (m, 2 H, CH₂Ph), 2,39 (t, 4 H, COCH₂CH₂CO), 2,32 (m, 1 H, CHCH ₂Ph), 12,8 (s, 9H, ArC(CH₃)₃), 1,21 (s, 9 H, CO(CH₃)₃)

Allgemeine Vorgehensweise für die Synthese von 25
Eine Mischung von 24 (1,15 mMol) und homovanillischem Pentofluorphenylester (0,4 g, 1,15 mMol) in EtOAc (5 mL) wurde mit einem Lindlar Katalysator behandelt und unter einem Ballon aus Wasserstoff für 7 h hydriert. Die Reaktionsmischung wurde gefiltert und das Filtrat wurde im Vakuum konzentriert. Der Rest wurde mittels Flash-Säulenchromatographie über Silikagel unter Ver wendung von EtOAc:Hex (1:2) als ein Eluent gereinigt, um 25 zu ergeben.
Beispiel 62: 2,2-Dimethyl-Propionsäure 3-(3,4-Dimethylphenyl)-2-{[2-(4-Hydroxy-3-Methoxy-Phenyl)-Acetylamin]-Methyl}-Propylester (25a)

Ertrag 37 %, Öl
¹H NMR (CDCl₃) δ 6,68–7,02 (m, 6 H), 5,96 (bs, 1 H, NH), 4,00 (m, 1 H, CH₂OCO), 3,87 (s, 3H, OCH₃), 3,80 (m, 1 H, CH₂OCO), 3,46 (s, 2 H, COCH₂Ar), 3,32 (m, 1 H, CH₂NH), 3,13 (m, 1 H, CH₂NH), 2,50 (d, 2 H, CH₂Ph), 2,20 (m, 7 H, 2 × CH₃ und CH), 1,20 (s, 9 H, CO(CH₃)₃)

Beispiel 63: 2,2-Dimethyl-Propionsäure 3-(4-t-Butylphenyl)-2-{[2-(4-Hydroxy-3-Methoxy-Phenyl)-Acetylamin]-Methyl}-Propylester (25b)

Ertrag 70 %, Öl
¹H NMR (CDCl₃) δ 7,28–7,31 (d, 2 H), 7,03–7,05 (d, 2 H), 6,89 (d, 1 H, Ar), 6,80 (d, 1 H, Ar), 6,72 (d, 1 H, Ar), 5,8 (bs, 1 H, NH), 4,02 (m, 1 H, CH₂OCO), 3,89 (s, 3H, OCH₃), 3,83 (m, 1 H, CH₂OCO), 3,49 (s, 2 H, COCH₂Ar), 3,34 (m, 1 H, CH₂NH), 3,12 (m, 1 H, CH₂NH), 2,56 (d, 2 H, CH₂Ph), 2,13 (m, 1 H, CH), 1,31 (s, 9 H, C(CH₃)₃), 1,22 (s, 9 H, CO(CH₃)₃)

Allgemeine Vorgehensweise für die Synthese von 26
Eine Mischung von 25 (0,33 mMol), 40 % KOH (0,24 mL), 40 % Tetrabutylammoniumhydroxid (0,02 mL, 0,03 mMol) und 1,2-Dibromoethan (0,96 mL) wurde bei 50 °C für 12 h erwärmt. Die Reaktionsmischung wurde mit CH₂Cl₂ verdünnt, mit H₂O und Salzlösung gewaschen, über MgSO₄ getrocknet und im Vakuum konzentriert. Der Rest wurde mittels Flash-Säulenchromatographie über Silikagel unter Verwendung von EtOAc:Hex (1:2) als eine Eluent gereinigt, um 26 zu ergeben.
Beispiel 64: 2,2-Dimethyl-Propionsäure 2-({2-[4-(2-Bromoethoxy)-3-Methoxy-Phenyl]Acetylamin}Methyl-Propylester (26a)

Ertrag 68
¹H NMR (CDCl₃) δ 6,74–7,03 (m, 6 H), 5,75 (bs, 1 H, NH), 4,32 (t, 2 H, OCH₂), 4,01 (m, 1 H, CH₂OCO), 3,86 (s, 3 H, OCH₃), 3,82 (m, 1 H, CH₂OCO), 3,64 (t, 2 H, CH₂Br), 3,47 (s, 2 H, COCH₂Ar), 3,31 (m, 1 H, CH₂NH), 3,10 (m, 1 H, CH₂NH), 2,50 (d, 2 H, CH₂Ph), 2,20 (m, 7 H, 2 × CH₃ und CH), 1,21 (s, 9 H, CO(CH₃)₃)

Beispiel 65: 2,2-Dimethyl-Propionsäure 2-({2-[4-(2-Bromoethoxy)-3-Methoxyphenyl]Acetylamin}Methyl)-3-(4-t-Butylphenyl)-Propylester (26b)

Ertrag 92
¹H NMR (CDCl₃) δ 7,26–7,30 (d, 2 H), 7,01–7,04 (d, 2 H), 6,74–6,89 (m, 3 H, Ar), 5,8 (bs, 1 H, NH), 3,4 (t, 2 H, OCH₂), 4,01 (m, 1 H, CH₂OCO), 3,86 (s, 3 H, OCH₃), 3,82 (m, 1 H, CH₂OCO), 3,64 (t, 2 H, CH₂Br), 3,47 (s, 2 H, COCH₂Ar), 3,31 (m, 1 H, CH₂NH), 3,10 (m, 1 H, CH₂NH), 2,5 (d, 2 H, CH₂Ph), 2,12 (m, 1 H, CH), 1,30 (s, 9 H, C(CH₃)₃), 1,22 (s, 9 H, CO(CH₃)₃)

Allgemeine Vorgehensweise für die Synthese von 27
Eine Lösung von 26 (0,22 mMol) in DMF (2 mL) wurde mit Natriumazid (0,044 g, 0,67 mMol) behandelt und bei 100 °C für 8 h erwärmt. Die Reaktionsmischung wurde mit H₂O verdünnt und mit EtOAc extrahiert. Die kombinierte organische Schicht wurde mit H₂O und Salzlösung gewaschen, über MgSO₄ getrocknet und im Vakuum konzentriert. Der Rest wurde mittels Flash-Säulenchromatographie über Silikagel unter Verwendung von EtOAc:Hex (1:1) als ein Eluent gereinigt, um 27 zu ergeben.
Beispiel 66: 2,2-Dimethyl-Propionsäure 2-({2-[4-(2-Azidoethoxy)-3-Methoxy-Phenyl]Acetylamin}Methyl)-3-(3,4-Dimethylphenyl)-Propylester (27a)

Ertrag 98
¹H NMR (CDCl₃) δ 6,74–7,03 (m, 6 H), 5,74 (bs, 1 H, NH), 4,19 (t, 2 H, OCH₂), 4,01 (m, 1 H, CH₂OCO), 3,85 (s, 3 H, OCH₃), 3,82 (m, 1 H, CH₂OCO), 3,62 (t, 2 H, CH₂N₃), 3,48 (s, 2 H, COCH₂Ar), 3,29 (m, 1 H, CH₂NH), 3,10 (m, 1 H, CH₂NH), 2,50 (d, 2 H, CH₂Ph), 2,04–2,26 (m, 7 H, 2 × CH₃ und CH), 1,21 (s, 9 H, CO(CH₃)₃)

Beispiel 67: 2,2-Dimethyl-Propionsäure 2-({2-[4-(2-Azidoethoxy)-3-Methoxy-Phenyl]Acetylamin}Methyl)-3-(4-t-Butylphenyl)-Propylester (27b)

Ertrag 81
¹H NMR (CDCl₃) δ 7,26–7,30 (d, 2 H), 7,01–7,04 (d, 2 H), 6,75–6,91 (m, 3 H, Ar), 5,76 (bs, 1 H, NH), 4,17 (t, 2 H, OCH₂), 4,00 (m, 1 H, CH₂OCO), 3,85 (s, 3 H, OCH₃), 3,82 (m, 1 H, CH₂OCO), 3,63 (t, 2 H, CH₂N₃), 3,48 (s, 2 H, COCH₂Ar), 3,31 (m, 1 H, CH₂NH), 3,06 (m, 1 H, CH₂NH), 2,54 (d, 2 H, CH₂Ph), 2,12 (m, 1 H, CH), 1,29 (s, 9 H, C(CH₃)₃), 1,20 (S, 9 H, CO(CH₃)₃)

Allgemeine Vorgehensweise für die Synthese von 28
Eine Lösung von 27 (0,05 mMol) in MeOH (5 mL) wurde mit 10 % Palladium auf Kohlenstoff (0,02 g) behandelt und unter einem Ballon aus Wasserstoff für 3 h hydriert. Die Reaktionsmischung wurde filtriert und das Filtrat wurde im Vakuum konzentriert. Der Rest wurde mittels Flash-Säulenchromatographie über Silikagel unter Verwendung von CHCl₃:MeOH:NH₄OH (9:1:0,1) als ein Eluent gereinigt, um 28 zu ergeben.
Beispiel 68: 2,2-Dimethylpropionsäure 2-({2-[4-(2-Aminethoxy)-3-Methoxyphenyl]Acetylamin}Methyl)-3-(3,4-Dimethylphenyl)Propylester (28a)

Ertrag 83 %, weißer Feststoff
¹H NMR (CDCl₃) δ 6,73–7,23 (m, 6 H), 5,73 (bs, 1 H, NH), 4,13 (m, 3 H, OCH₂ und CH₂OCO), 3,85 (s, 3 H, OCH₃), 3,82 (m, 1 H, CH₂OCO), 3,5 (m, 2 H, COCH₂Ar), 3,23 (m, 2 H, CH₂NH und CH₂NH₂), 3,09 (m, 2 H, CH₂NH und Ch₂NH₂), 2,50 (d, 2 H, CH₂Ph), 2,04–2,26 (m, 7 H, 2 × CH₃ und CH), 1,20 (s, 9 H, CO(CH₃)₃)

Beispiel 69 : 2, 2-Dimethylpropionsäure 2-({2-[4-(2-Aminethoxy)-3-Methoxyphenyl]Acetylamin}Methyl)-3-(4-t-Butylphenyl)Propylester (28b)

Ertrag 99 %, weißer Feststoff
¹H NMR (CDCl₃) δ 7,26–7,29 (m, 2 H), 7,01–7,04 (d, 2 H), 6,76–6,89 (m, 3 H, Ar), 5,84 (bs, 1 H, NH), 4,05 (m, 1 H, CH₂OCO), 3,85 (m, 3 H, OCH₃), 3,72 (m, 3 H, CH₂OCO und OCH₂), 3,47 (s, 2 H, COCH₂Ar), 3,30 (m, 1 H, CH₂NH), 3,10 (m, 1 H, CH₂NH), 2,75 (bs, 2 H, CH₂NH₂), 2,52 (d, 2 H, CH₂Ph), 2,12 (m, 1 H, CH), 1,29 (s, 9 H, C(CH₃)₃), 1,20 (s, 9 H, CO(CH₃)₃)

Beispiel 70: (4-Hydroxy-3-Methoxybenzyl)Karbamidsäure t-Butylester (30)
Eine Mischung aus 4-Hydroxy-3-Methoxy-Benzylamin (29, 0, 5 g, 2, 64 mMol) und NEt₃ (0, 054 g, 5, 29 mMol) in H₂O (10 mL) wurde tropfenweise mit einer Lösung von Di-t-Butyl-Di-Carbonat (1,15 g, 5,29 mMol) in Dioxan (1,5 mL) für 20 Min. behandelt. Nach dem Umrühren für 24 h bei Raumtemperatur wurde die Reaktionsmischung mehrere Male mit CH₂Cl₂ extrahiert. Die kombinierte organische Schicht wurde über MgSO₄ getrocknet und im Vakuum konzentriert. Der Rest wurde mittels Flash-Säulenchromatographie über Silikagel unter Verwendung von EtOAc:Hex (1:1) als ein Eluent gereinigt, um 30 als ein Öl (0,663 g, 99 %) zu ergeben.
¹H NMR (CDCl₃) δ 6,74–7,00 (m, 3 H, Ar), 5,65 (s, 1 H, OH), 4,79 (bs, 1 H, NH), 4,23 (d, 2 H, NHCH₂), 3,87 (s, 3 H, OCH₃), 1,43 (s, 9 H, O(CH₃)₃)
Beispiel 71: [4-(2-Bromoethoxy)-3-Methoxybenzyl]-Karbamidsäure t-Butylester (31)
Diese Verbindung wurde aus 30 durch Folgen der selben Vorgehensweise wie für die Synthese von 26 hergestellt. (EtOAc:Hex = 1:3), Ertrag 84
¹H NMR (CDCl₃) δ 6,78–6,89 (m, 3 H, Ar), 4,81 (bs, 1 H, NH), 4,29–4,33 (t, 2 H, OCH₂), 4,24 (d, 2 H, NHCH₂), 3,90 (s, 3 H, OCH₃), 3,65 (t, 2 H, CH₂Br), 1,46 (s, 9 H, O(CH₃)₃)
Beispiel 72: (4-(2-Azidethoxy)-3-Methoxy-Benzyl)-Karbamidsäure t-Butylester (32)
Diese Verbindung wurde aus 21 durch Folgen der selben Vorgehensweise wie für die Synthese von 27 hergestellt. (EtOAc:Hex = 1:3), Ertrag 98 %, gelber Feststoff
¹H NMR (CDCl₃) δ 6,78–6,87 (m, 3 H, Ar), 4,82 (bs, 1 H, NH), 4,24 (d, 2 H, OCH₂), 4,15 (t, 2 H, NHCH₂), 3,80 (s, 3H, OCH₃), 3,62 (t, 2 H, CH₂N₃), 1,46 (s, 9 H, (CH₃)₃)
Beispiel 73: (4-(2-Azidoethoxy)-3-Methoxy-Benzlyamintrifluoressig (33)
Eine Lösung von 32 (0,103 g, 0,32 mMol) in CH₂Cl₂ (1 mL) wurde mit Trifluoressigsäure behandelt und bei 100 °C für 1 h erwärmt. Die Reaktionsmischung wurde im Vakuum konzentriert. Der Rest wurde mit Toluol verdünnt und im Vakuum mehrere Male konzentriert, um 33 als einen braunen Feststoff (0,115 g, 100 %) zu ergeben.
¹H NMR (CDCl₃) δ 6,99–7,10 (m, 3 H, Ar), 4,12 (t, 2 H, OCH₂), 3,76 (s, 3 H, OCH₃), 3,62 (m, 2 H, CH₂N₃)
Beispiel 74: 1-(2-Azidoexthoxy)-4-Isothiocyanathomethyl-2-Methoxy-Benzen (34)
Eine Lösung von 33 (0,115 g, 0,33 mMol) in DMF (1,5 mL) wurde mit NEt₃ (0,037 g, 0,36 mMol) behandelt und für 1 h umgerührt. Die Mischung wurde mit 1,1-Thiocarbonyl-Di-2(1H)-Pyridon (0,084 g, 0,33 mMol) behandelt und für 2,5 h bei Raumtemperatur umgerührt. Die Mischung wurde mit H₂O verdünnt und mit Diethylether mehrere Male extrahiert. Die kombinierte organische Schicht wurde mit H₂O und Salzlösung gewaschen, über MgSO₄ getrocknet und im Vakuum konzentriert. Der Rest wurde mittels Flash-Säulenchromatographie über Silikagel unter Verwendung von EtOAc:Hex (1:2) als ein Eluent gereinigt, um 34 als ein Öl (0,065 g, 74 %) zu ergeben.
¹H NMR (CDCl₃) δ 6,75–6,91 (m, 3 H, Ar), 4,65 (s, 2 H, CH₂N=C=S), 4,20 (t, 2 H, OCH₂), 3,90 (s, 3 H, OCH₃), 3,62 (t, 2 H, CH₂N₃)
Allgemeine Vorgehensweise für die Synthese von 35
Eine Lösung von 6 (0,27 mMol) in EtOH (5 mL) wurde mit einem Lindler-Katalysator (0,042 mg) behandelt und unter einem Ballon aus Wasserstoff für 2 h hydriert. Die Reaktionsmischung wurde gefiltert und das Filtrat wurde konzentriert. Der Rest wurde in CH₂Cl₂ (5 mL) aufgelöst und mit 34 (0,27 mMol) behandelt. Nach dem Umrühren für 15 h bei Raumtemperatur wurde die Reaktionsmischung im Vakuum konzentriert. Der Rest wurde mittels Flash-Säulenchromatorgraphie über Silikagel unter Verwendung von EtOAc:Hex (1:10) als ein Eluent gereinigt, um 35 zu ergeben.
Beispiel 75: 2,2-Dimethyl-Propionsäure 2-{3-[4-(2-Azidoethoxy)-3-Methoxybenzyl]Thioureidomethyl}-3-(3,4-Dimethylphenyl)Propylester (35a)

Ertrag 39
¹H NMR (CDCl₃) δ 6,81–7,04 (m, 6 H), 6,25 (m, 1 H, NH), 6,02 (bs, 1 H, NH), 4,41 (bs, 2 H, NHCH₂Ar), 4,14–4,17 (m, 3 H, CH₂OCO und OCH₂), 3,85 (s, 3 H, OCH₃), 3,76–3,85 (m, 2 H, CH₂OCO und CHCH₂NHC=S), 3,60–3,63 (t, 2 H, CH₂N₃), 3,21–3,28 (m, 1 H, CHCH₂NC=S), 2,47–2,66 (m, 2 H, CH₂Ph), 2,20–2,26 (m, 7 H, 2 × CH₃ und CH), 1,22 (s, 9 H, CO(CH₃)₃)

Beispiel 76: 2,2-Dimethyl-Propionsäure 2-{3-[4-(2-Azidoethoxy)-3-Methoxybenzyl]Thioureidomethyl}-3-(4-t-Butylphenyl)Propylester (35b)

Ertrag 60
¹H NMR (CDCl₃) δ 7,3 (d, 2 H), 7,08 (d, 2 H), 6,9 (m, 3 H, Ar), 6,28 (m, 1 H, NH), 6,10 (bs, 1 H, NH), 4,43 (bs, 2 H, NHCH₂Ar), 4,2 (m, 3 H, CH₂OCO und OCH₂), 3,85 (s, 3 H, OCH₃), 3,74–3,95 (m, 2 H, CH₂OCO und CHCH₂NHC=S), 3,60–3,63 (t, 2 H, CH₂N₃), 3,26 (m, 1 H, CHCH₂NHC=S), 2,6 (m, 2 H, CH₂Ph), 2,30 (m, 1 H, CH), 1,29 (s, 9 H, CO(CH₃)₃)

Allgemeine Synthese bzw. Vorgehensweise für die Synthese von 36
Eine Lösung von 35 (0, 068 g, 0, 13 mMol) in THF (2 mL) wurde mit Triphenylphosphin (0,067 g, 0,25 mMol) und H₂O (4,5 mg, 0,25 mMol) behandelt und für 24 h bei Raumtemperatur umgerührt. Die Reaktionsmischung wurde im Vakuum konzentriert und der Rest wurde mittels Flash-Säulenchromatographie über Silikagel unter Verwendung von CHCl₃:MeOH:NH₄OH (9:1:0,1) als ein Eluent gereinigt, um 36 zu ergeben.
Beispiel 77: 2,2-Dimethyl-Propionsäure 2-{3-[4-(2-Aminethoxy)-3-Methoxybenzyl]Thioureidomethyl}-3-(3,4-Dimethylphenyl)Propylester (36a)

Ertrag 49
¹H NMR (CDCl₃) δ 6,77–7,04 (m, 6 H), 6,47 (bs, 2 H, NH), 4,43 (bs, 2 H, NHCH₂Ar), 4,18 (ddd von AB, 1 H, CH₂OCO), 3,98 (t, 2 H, OCH₂), 3,81 (s, 3 H, OCH₃), 3,71–3,77 (m, 2 H, CH₂OCO und CHCH₂NHC=S), 3,06 (6, 2 H, CH₂NH₂), 2,48–2,68 (m, 2 H, CH₂Ph), 2,20 (m, 7 H, 2 × CH₃ und CH), 1,23 (s, 9 H, CO(CH₃)₃)

Beispiel 78: 2,2-Dimethyl-Propionsäure 2-{3-[4-(2-Aminethoxy)-3-Methoxybenzyl]Thioureidomethyl}-3-(4-t-Butylphenyl)Propylester (36b)

Ertrag 99
¹H NMR (CDCl₃) δ 7,28–7,47 (m, 2 H), 7,2 (d, 2 H), 6,8–7,0 (m, 3 H, Ar), 6,4 (bs, 1 H, NH), 4,44 (bs, 2 H, NHCH₂Ar), 4,18 (m, 1 H, CH₂OCO), 3,82 (t, 2 H, OCH₂), 3,78 (s, 3 H, OCH₃), 3,66–3,82 (m, 2 H, CH₂OCO und CHCH₂NHC=S), 3,09 (t, 2 H, CH₂NH₂), 2,48–2,68 (m, 2 H, CH₂Ph), 2,20 (m, 1 H, CH), 1,28 (s, 9 H, C(CH₃)₃), 1,22 (s, 9 H, CO(CH₃)₃)

Experimentelles Beispiel 1: Rezeptorbindungsaffinität und CAP-aktivierte Kanaluntersuchung
Die CAP-artige Aktivität der Zielverbindungen wurde mittels einer in vitro-Rezeptorbindungsuntersuchung und einer CAP-aktivierten Einzelkanalaktivierungsuntersuchung gemessen. In der Rezeptorbindungsuntersuchung wurden die Verbindungen bezüglich ihres Vermögens, gebundene [³H]RTX von dem Rezeptor zu ersetzen, ausgewertet. Die Ergebnisse sind in Form von K_i-Werten (± SEM, 3 Experimente) ausgedrückt, welche die Konzentration des nicht radioaktiven Liganden repräsentieren, der die Hälfte der gebundenen, gekennzeichne ten RTX ersetzt. In der CAP-aktivierten Einzelkanalaktivierungsuntersuchung wurde die Zunahme des von dem nichtselektiven Kationenzustroms resultierenden inneren Stroms nach der extrazellulären Anwendung der Verbindungen auf die dorsalen Wurzelganglionen (DRG)-Neuronen von gezüchteten, neugeborenen Ratten gemessen. Die Aktivitäten der Verbindungen sind in Form der relativen Differenz der Ionenleitfähigkeit verglichen mit CAP als eine Kontrolle ausgedrückt.
Verfahren
1. [³H]Resiniferatoxinbindungsuntersuchung
[³H]RTX (37Ci/mMol) wurde vom Chemical Synthesis and Analysis Laboratory, NCI-FCRDC synthetisch hergestellt. Nicht radioaktives RTX und Capsazepin wurden von LC Laboratories (Woburn, MA) gekauft.
Die Hemmung der [³H]RTX-Bindung in der Gegenwart von konkurrierenden Liganden wurde auf Membranzubereitungen aus dem Rückenmark von Ratten ermittelt. Die Membranzubereitungen wurden wie beschrieben hergestellt (Methods in Neurosciences Vol. 48, Seiten 368–380). Kurz gesagt wurden die Tiere unter einer allgemeinen Betäubung eingeschläfert und das gesamte Rückenmark wurde aseptisch entfernt. Proben wurden mit der Hilfe eines Omni 2000-Gewebehomogenisiergerätes in eiskaltem 10 mM HEPES, pH 7,4 getrennt, welches 5 mM KCl, 5,8 mM NaCl, 2 mM MgCl₂, 0,75 mM CaCl₂, 12 mM D-Glukose und 137 mM Sucrose ("Pufferlösung A") enthielt. Homogenate wurden bei 1.000 × g für 10 Min. bei 4 °C zentrifugiert; Pellets wurden in Pufferlösung A resuspendiert und bei 35.000 × g für 40 Min. bei 4 °C nochmals zentrifugiert. Die Pellets von der zweiten Zentrifugation wurden in derselben Pufferlösung bei einer ungefähren Proteinkonzentration von 2 mg/ml resuspendiert, auf Trockeneis als kleine Aliquots schnellgefroren und bei –70 °C bis zur Untersuchung gelagert.
Experimente wurden entwickelt, um die Hemmung von spezifischen [³H]RTX-Bindungen mit Membranen durch nicht radioaktive Verbindungen zu bewerten. [³H]RTX (100 pM) wurde in der Gegenwart von konkurrierenden Liganden in einem Gesamtvolumen von 300:1 mit 100 g Membranprotein für 60 Min. bei 37 °C in Pufferlösung A inkubiert, welche mit 0,25 mg/ml Bovinserum Albumin (Typ V, Sigma) ergänzt war. Das Bovinserum Albumin wurde hinzugefügt, um die nicht spezifische Adsorption von RTX an Oberflächen zu reduzieren. Am Ende der Inkubation wurden Schläuche auf Eis gekühlt und 100 μg von "α₁-Säureglycoprotein (Sigma) in einem 50 : 1 Volumen zu jedem Schlauch mit einer verringerten nicht spezifischen Bindung hinzugefügt. Gebundene und freie [³H]RTX wurden dann durch Pelletieren der Membrane durch Zentrifugation bei 10.000 × g für 15 Min. bei 4 °C getrennt. Die Spitzen der die Pellets beinhaltenden Schläuche wurden abgeschnitten und die gebundene Radioaktivität wurde durch Szintillationszählen ermittelt. Nicht spezifische Bindung wurde in der Gegenwart von 1 mM nicht radioaktivem RTX ermittelt. Maßnahmen zur Bindung wurden bei jedem Experiment dreifach durchgeführt und jedes Experiment wurde mindestens zwei Mal wiederholt. In jedem Experiment wurden Ver gleichskurven ermittelt, welche üblicherweise 5–6 Konzentrationen von konkurrierenden Liganden verwendeten.
Die Bindung wurde als fmol/mg-Protein ausgedrückt. Die Proteinkonzentration wurde unter Verwendung der Bio-Rad-Proteinuntersuchung gemäß dem Protokoll des Herstellers (Bio-Rad Laboratories, CA) gemessen. Die Proben wurden in Szintillationsflüssigkeit für 10 Stunden ins Gleichgewicht gebracht, bevor das Szintillationszählen begann und jede Probe wurde für 5 Min. gezählt. Die Bindungsdaten wurden analysiert durch das Einsetzen in nachfolgende Gleichung: B = ((LH + LC·Kd/KI)(n–1)/(Kd n + (LH + LC·Kd/KI)n))/(LH n–1/(Kd n + LH n))wobei L_C eine Konzentration von nicht radioaktivem Ligand und K_I die Konzentration des freien nicht radioaktiven Ligand
2. Capsaicin-aktivierte Einzelkanaluntersuchung
Zellenvorbereitung. Gezüchtete DRG-Neuronen wurden, wie oben beschrieben, vorbereitet (J. Neuroscience 16, 1659–1667, (1996)). Kurz gesagt werden die DRGs von allen Niveaus des unteren Hals-, Brust- und Lenden-Rückenmarks von 1 oder 2 Tage alten, neugeborenen Ratten analysiert. Die DRGs wurden in kaltem Zuchtmedium (4 °C) gesammelt, welches DMEM/F-12-Mischung (Gibco, Grand Island, NY), fötales Bovinserum (10 %, Gibco), 1 mM Natriumpyruvat, 25 ng/ml Nervenwachstumsfaktor (Sigma, St. Louis, MO) und 100 Einheiten/ml Penicillin/Streptomycin (Sigma) enthielt. Die Ganglien wurden 3 Mal mit DMEM/F-12-Medium gewaschen und für 30 Minuten in dem DMEM/F-12-Medium inkubiert, welches 1 mg/ml Collagenase (Type II, Worthington Biomedical, Freehold, NJ) enthielt. Die Ganglien wurden dann 3 Mal mit Mg²⁺- und Ca²⁺-freier Hanks-Lösung gewaschen und unter sanftem Schütteln in der warmen (37 °C) Hanks-Lösung, welche 2,5 mg/ml Trypsin (Gibco) enthielt, inkubiert. Die Lösung wurde bei 1.000 l/min für 10 Min zentrifugiert und das Pellet wurde 2 oder 3 Mal mit dem Zuchtmedium gewaschen, um das Enzym zu hemmen. Das Pellet wurde in dem Zuchtmedium suspendiert und sanft mit einer Pasteuer-Pipette zerrieben. Die Suspension wurde ausplattiert auf runden, aus Glas bestehenden Deckgläsern (Fisher, Pittsburgh, PA), welche in kleinen Petrischalen platziert waren. Die Glas-Deckgläser wurden über Nacht mit Poly-L-Lysin (Sigma) behandelt und vor der Verwendung getrocknet. Die Zellen wurden bei 37 °C in einer Gasmischung aus 95 % Luft/5 % CO₂ inkubiert. Die Zellen wurden 2–4 Tage nach dem Ausplattieren verwendet.
(Stromaufzeichnung). Borosilikatglaspipetten (Narishige Scientific Instrument Lab., Tokyo) wurden gezogen und mit Sylgard (Dow Corning Co., Midland, MI) beschichtet. Die Spitzenwiderstände betrugen jeweils ungefähr 2 bzw. 5 Mohm für die Ganzzellen- und Einzelkanal-Stromaufzeichnungen. Nachdem mit den Glaspipetten Gigaseals gebildet wurden, wurden an Zellen angebrachte und umgekehrte Patch-Konfigurationen verwendet, um die Einzelkanalströme zu untersuchen, wie durch Hamill et al. beschrieben. Eine Ionenbindung (1 % Agar in 300 mM KCl), eingetaucht im Bad und eine Ag/AgCl-Referenzelektrode in einer Pipettenlösung wurden verwendet, um Veränderungen der Grenzflächenpotenziale zu minimieren. Die Grenzflächenpotenziale wurden aufgehoben, bevor die Gigaseals gebildet wurden. Für die Ganzzellenaufnahme wurde die Zellmembran unter eine Glaspipette mittels eines sanften Saugens zerrissen. Nach dem Bilden einer Ganzzelle wurde der kapazitive Übergang aufgehoben. Einzelkanalströme wurden unter Verwendung eines Steckerklemmen-Verstärkers (Axopatch 200A, Axon Instruments, Foster City, CA) aufgezeichnet und bei 5 kHz mit einem 8-poligen, Tiefpass-Bessel-Filter gefiltert. Die Daten wurden bei 37 kHz mit einem digitalen Datenaufzeichnungsgerät (VR-10B, Instrutech, Great Neck, NY) digitalisiert und für eine spätere Analyse auf Videobändern gespeichert. Zur Diagrammaufzeichnung wurde die Ausgabe bzw. der Ausgang des Verstärkers bei 500 Hz gefiltert (Frequency Device, Havenhill, MA) und in ein thermisches Untersuchungsdiagrammaufzeichnungsgerät (TA-240, Gould Instrument System, Valley View, OH) eingespeist. Die auf den Videobändern gespeicherten digitalisierten Daten wurden in einen Personalcomputer (IBM Pentiumkompatibel) zur Computeranalyse der Einzelkanalströme importiert.
Die kanaloffen Wahrscheinlichkeit (P_O), die Amplitude und die mittlere Offenhaltezeit der Einzelkanalströme wurde unter Verwendung der pCLAMP-Software (Version 6.02, Axon Instruments) erhalten. Die P_O der Einzelkanäle wurde von dem Verhältnis der Flächen unter den Kurven erhalten, welche offene Ereignisse darstellen, geteilt durch die Summe der Flächen unter den Kurven, welche offene und geschlossene Ereignisse darstellen. Der Halbamplitudenalgorithmus in FETCHAN (Axon Instruments) wurde als die Grenzwertamplitude zum Ermitteln offener Ereignisse verwendet. Die Kanalaktivität (NP_O) wurde als ein Produkt der Anzahl von Kanälen (N) in dem Patch und P_O berechnet. NP_O oder P_O wurde nur von den Patches gesammelt, welche weniger als 5 funktionelle CAP-aktivierte Kanäle enthielten.
Lösungen. Die Lösungen in Bad und Pipette für Einzelkanalaufzeichnungen enthielten (in mM) 140 Na⁺, 2 Mg²⁺, 144 Cl^–, 5 EGTA und 10 HEPES bei pH 7,2. Für die ganze Zelle enthielt die Pipettenlösung (in mM) 140 K⁺, 2 Mg²⁺, 144 Cl^–, 5 EGTA, 10 HEPES und 4 ATP bei pH 7,2. Die Kontrollperfusionslösung für die Ganzzellenaufzeichnung enthielt (in mM) 140 Na⁺, 5 K⁺, 2Mg⁺, 1 Ca⁺, 151 Cl^– und 10 HEPES. Die synthetisierten Verbindungen wurden in 100 % Ethanol aufgelöst und aufbewahrt, um 10 mM Lagerlösungen herzustellen. Alle anderen bei der Zellenkultur oder in elektrophysiologischen Experimenten verwendeten Reagenzen wurden von Sigma gekauft. Alle Werte sind als Durchschnitt ± S.E. ausgedrückt.
Ergebnisse
Die Ergebnisse sind in Tabelle 1 dargestellt und können wie folgt zusammengefasst werden: (1) alle getesteten Verbindungen, außer 7b-Ia, zeigten eine stärkere Agonistenaktivität und Rezeptorbindungsaffinität als CAP; (2) die Thioharnstoff-Analogons 7a-I (K_I = 65,6 nM) zeigten eine wirksamere Agonistenaktivität als die CAP-verwandten Amidanalogons (K_I = 404 nM), von denen in unserer früheren Studie berichtet wurde; (3) die Estergruppe in R₁, welche dafür vorgesehen war, die C₃-Carbonyl von RTX nachzuahmen, scheint wichtig für die wirksame Agonistenaktivität bezüglich der Benzylether-Analogons in R₁ zu sein [vergleiche 7a-V (K_I = 31, 2 nM) und 7c-V (K_i = 148,7 nM) mit 9a (K_i = 148 nM) und 9c (K_i = 659 nM)], was eine wichtige Rolle für den Carbonylrest beim Wasserstoffbinden mit dem Rezeptor nahe legt; (4) die Pivaloyl-Gruppe bei R₁ und die 4-t-Butylbenzyl-Gruppe bei R₂ erwiesen sich als effektive hydrophobische Gruppen, was zu einer optimalen Agonistenaktivität für die Verbindungen 7b-I und 7d-I (K_i = 19 nM bzw. 10,8 nM) führt, welche ca. 280 bis 490 Mal wirksamer als CAP sind; und (5) die Bindung von Thioharnstoff an dem Rezeptor scheint sehr stereospezifisch zu sein, nachdem die zwei optisch aktiven Enantiomere von 7a-I substantielle Unterschiede in der Rezeptorbindungsaffinität relativ zu dem Racemat zeigten [vergleiche 7a-I (K_i = 65,6 nM) mit (R)-7a-I (K_i = 18,43 nM) und (S)-7a-I (K_i = 74 nM)].
Tabelle 1. Bindungsaffinitäten und Kanalaktivierungen

^a + = CAP, ++ = 10 CAP, +++ = 100 CAP

Experimentelles Beispiel 2: Analgetische und entzündungshemmende Aktivität
Die analgetische Aktivität von einigen der wirksamsten Capsaicin-Agonisten, welche von den Rezeptorbindungs- und Einzelkanaluntersuchungen ausgewählt wurden, wurde in der PBQ-induzierten Krümmungs-Untersuchung ermittelt und die Ergebnisse sind in Tabelle 2 dargestellt. Wie erwartet zeigten zwei der wirksamsten, auf der in vitro-Untersuchung basierenden Verbindungen, 7d-I und 7b-I, exzellente analgetische Wirkungen mit ED₅₀ von 0,5 bzw. 1 μg/kg. Solche Werte machen diese Verbindungen 300 bis 600 Mal wirksamer als CAP. Beide Verbindungen waren außerdem wirksamer als Olvanil oder DA-5018, welche entweder derzeit auf dem Markt erhältlich sind oder klinischen Versuchen als topische Analgetika unterzogen werden.
In der TPA-induzierten Ohrödem-Untersuchung zeigten sogar die wirksamsten Agonisten der erfindungsgemäßen Verbindungen eine schwache entzündungshemmende Wirkung, verglichen mit dem der starken Anti-Ödem-Aktivität von CAP (Tabelle 2). Es wurde ursprünglich spekuliert, dass die Thioharnstoffanalogons mit ihrer höheren intrinsischen Potenz das TPA-induzierte Ohrödem dramatisch reduzieren könnten. In dieser Hinsicht gleicht ihre Aktivität diejenige von Olvanil oder DA-5018, welche beide eine schwache topische Aktivität in der TPA-Ohrödem-Untersuchung zeigen. Eine schlechte biologische Verfügbarkeit durch die transkutane Durchdringung kann teilweise die schwachen topischen, ent zündungshemmenden Eigenschaften erklären, die bei diesen Verbindungen beobachtet wurden.
Die in vitro und analgetischen Aktivitäten der Verbindungen der Erfindung wurden durch eine Kalzium-Influx-Untersuchung bzw. einen essigsäureinduzierten Krümmungs-Test ermittelt.
Wie in Tabelle 3 dargestellt, zeigten sie alle Rezeptoragonistenaktivitäten, die mit Capsaicin vergleichbar waren. Unter diesen zeigten Aminoethylanalogons relative analgetische Wirkungen. Insbesondere die Verbindung 28a zeigte sich als die wirksamste und wirksamer als DA-5018, welche in Korea klinischen Tests als ein Analgetikum unterzogen wird.
Verfahren
1. Maus-PBC-induzierte Krümmungs-Antinozizeptiv-Untersuchung
Männliche ICR-Mäuse (Gewicht 25 g) wurden in einem kontrollierten Beleuchtungsumfeld (12 h an/12 h aus) gehalten. Die Tiere erhielten eine intraperitonale Injektion von 0,3 mL des chemisch reizenden Phenyl-P-Quinon (4,5 mg/kg in 5 % Ethanol enthaltender Salzsäure aufgelöst) und 6 Minuten später wurde die Anzahl von abdominalen Einschnürungen in der nachfolgenden sechs Minuten-Periode gezählt. Die Tiere (10 Tiere/Gruppe) erhielten die synthetisch hergestellten Verbindungen in einem 0,2 mL-Träger von Ethanol/Tween-80/Salzlösung (10/10/80), und zwar intraperitonal 30 Min. vor der Injektion von Phenyl-P-Quinon. Eine Ver ringerung der Anzahl der Krümmungen als Reaktion auf Phenyl-P-Quinon relativ zu der Anzahl, die bei der Salzlösungskontrollgruppe reagierten, wurde als ein Anzeichen für einen antinozizeptiven Effekt betrachtet. Die Daten werden als ED₅₀-Wert ausgedrückt, um eine 50 %-ige Verringerung der Anzahl von Krümmungen zu kennzeichnen.
2. Essigsäureinduzierter Krümmungstest
ICR-Mäuse (Gewicht 20 g) wurden in einem kontrollierten Beleuchtungsumfeld (12 h an/12 h aus) gehalten und vor dem Test über Nacht gefastet. Die Tiere erhielten eine intraperitonale Injektion von 0,2 ml einer Essigsäurelösung (1,2 %) und 6 Min. später wurde die Anzahl der abdominalen Einschnürungen für eine sechs Minuten-Periode gezählt. Die Mäuse (10 Tiere/Gruppe) wurden mit einem Arzneimittel oder Träger (10 ml/kg, i.p.) 1 h vor der Injektion von Essigsäure vorbehandelt. Die Testverbindungen wurden in Ethanol-Tween-80/Salzlösung (10/10/80) aufgelöst. Die antinozizeptive Aktivität wurde als die Reduzierung der Anzahl von abdominalen Einschnürungen ausgedrückt, d. h. als der Unterschied zwischen Kontrolltieren (trägervorbehandelte Mäuse) und mit den Testverbindungen vorbehandelte Tiere.
3. TPA-induzierte Mausohrenödemuntersuchung
Männliche ICR-Mäuse (25–30 g), 10 Tiere/Gruppe, wurden topisch an dem rechten Ohr mit 25 μL Azeton oder synthetisch hergestellter Verbindung in Azeton behandelt. Ungefähr 17 Stunden später wurde eine identische Behandlung durchgeführt. Eine Stunde später wurden 25 μL 0,5 nmol TPA in Azeton an demselben Ohr angewendet. Fünf (5) Stunden nach der Anwendung von TPA wurden die Tiere getötet und Ohrenstempel (6 mm Durchmesser) wurden auf die nächste 0,1 mg auf einer Elektrowaage gewogen. Das zusätzliche Gewicht des Ohrstempels ist ein Maß der Entzündung (Ohrödem). Entzündungshemmende Wirkungen wurden als Prozent der Hemmung der Schwellung in den mit der Verbindung Behandelten gegenüber der Kontrollgruppe ausgedrückt. Die prozentuale Hemmung wird durch die folgende Gleichung definiert. % Hemmung = (C – T)/C × 100wobei C und T die Zunahme des Ohrgewichts bei TPA-behandelten bzw. TPA + arzneimittelbehandelten Gruppen betrifft.
4. ⁴⁵Ca-Aufnahme-Experimente
1) Züchtung von DRG-Neuronen
DRG-Neuronen wuren aus neugeborenen Sprague-Dawley-Ratten mittels des oben beschriebenen Verfahrens (Wood et al., 1988) mit Modifikationen präpariert. In Kürze wurden sämtliche Wirbelsäulenniveaus askeptisch freigelegt und gesammelt. Ganglien wurden für 30 Min. bei 37 °C in 200 U/ml Kollagenase und 2,5 mg/ml Trypsin sequentiell inkubiert. Die Verdauung wurde mittels Hinzufügen einer gleichen Menge an DME/F12-Medium, welches mit 10 % Pferdeserum ergänzt war, unterbrochen. Die Ganglien wurden dann durch eine feuerpolierte Pasteuerpipette zerrieben, durch eine Nylonmembran gefiltert und herunterzentrifugiert. Abgesonderte Zellen wurden auf Terasaki-Platten, die zuvor mit 10 μg/ml Poly-D-Ornithin mit einer Dichte von 1500–1700 Neuronen/Well beschichtet wurden, plattiert. Die Zellen wurden dann für 3–4 Tage in DME/F12-Medium, welches 1,2 g/l Natriumbikarbonat, 14 mM HEPES, 50 mg/l Gentamycin und 10 % Pferdeserum, 1:1 mit identischem Medium, welches durch C6 Glioma-Zellen (2 Tage auf einer konfluenten Monoschicht) verdünnt war, in einer befeuchteten Atmosphäre bei 37 °C, welche 5 % CO₂ enthielt, gezüchtet. Das Medium wurde mit 200 ng/ml Nervenwachstumsfaktor ergänzt. Cytosinarabinosid (100 μM) wurde für die ersten 2 Tage hinzugefügt, um abtrennende nicht neurale Zellen abzutöten.
2) Aufnahmeexperiment
Terasaki-Platten, welche DRG-Neuronen, die für 3–4 Tage wuchsen, enthielten, wurden mit 4 Waschungen HEPES (10 mM, pH 7,4)-gepufferter kalzium- und magnesiumfreier Hank's ausgeglichener Salzlösung equikalibriert. Die Lösung in jedem Well wurde von den einzelnen Well entfernt. Ein Medium (10 μl), welches die Testkonzentration der Verbindung plus 10 μCi/ml ⁴⁵Ca²⁺ enthielt, wurde zu jedem Well hinzugefügt. Die Neuronen wurden bei Raumtemperatur für 10 Min. inkubiert, dann wurden die Terasaki-Platten sechs Mal in HEPES (10 mM, pH 7,4)-gepufferter kalzium- und magnesiumfreier Hank's ausgeglichener Salzlösung gewaschen und in einem Ofen getrocknet. 0,3 % Natrium-Dodecylsulfat (10 μl) wurde dann hinzugefügt, um die Zellen aufzulösen und das ⁴⁵Ca²⁺ zu extrahieren. Der Inhalt von jedem Well wurde zu Szintillationsfläschchen gebracht und in 3 ml Aquasol-2-Szintillant gezählt. Die agonistischen Aktivitäten der Testverbindungen wurden als Prozent der maximalen Reaktion von Capsaicin bei einer Konzentration von 3 μM berechnet und die Ergebnisse sind als EC₅₀ ± SEM angegeben.
Ergebnisse Tabelle 2. PBQ-induzierter Krümmungstest und Ohrödemuntersuchung

* D-5018

2-[4-(2-Aminoethxy)-3-Methoxyphenyl]-N-[3(3,4-Dimethylphenyl)Propyl]Azetamid
Tabelle 3. Kalziumzuführuntersuchung und essigsäureinduzierte Krümmungsuntersuchung
Experimentelles Beispiel 3: Schärfe und Tachyphylaxie
Der Fokus der medizinischen Chemie beim Entwickeln von von Vanilloiden abgeleiteten Therapeutika war die Verbesserung der biologischen Verfügbarkeit und die Verringerung der reizenden Eigenschaften. Im Zusammenhang mit diesen Zielen wurde der Augenwischtest für Ratten als ein in vivo Schärfetest eingesetzt, um die schmerzerzeugenden Wirkungen der Verbindungen zu untersuchen. Wie in Tabelle 4 dargestellt, folgten die Schärfeprofile der ausgewählten wirksamen Agonisten, 7a-V, 7b-I und 7d-I, nicht dem Trend der intrinsischen agonistischen Aktivität, welche durch zwei in vitro Untersuchungen gemessen wurde. In dieser Untersuchung war RTX, ein äußerst wirksames Capsaicin-Analogon, nur drei Mal wirksamer als CAP und die ausgewählten Verbindungen von unserer Serie waren sehr viel weniger wirksam beim Hervorrufen akuter Schmerzen. Eine mögliche Erklärung für die verringerten reizenden Eigenschaften dieser synthetischen Verbindungen (7b-I und 7d-I) könnte in ihrer Rate der Anregung des sensorischen Neurons liegen.
Um die Entwicklung von Tachyphylaxis oder Kreuztachyphylaxie zu prüfen, wurde eine Gruppe von Ratten, die mit den ausgewählten synthetischen Verbindungen behandelt worden war, 6 h einer Nachbehandlung mit 0,001 % CAP ausgesetzt. CAP, RTX und die synthetischen Analogons zeigten eine abgemilderte Augenwischreaktion in der Testherausforderung äquivalent zu 0,001 % CAP, ein Ergebnis, das auf Kreuztachyphylaxie zwischen die sen Klassen von Verbindungen hinweist. Es sollte jedoch festgehalten werden, dass für CAP-Analogons eine vorherige Augenwischreaktion eine Voraussetzung für die Entwicklung einer nachfolgenden Desensibilisierung ist. Mit anderen Worten waren nicht reizende Dosen von CAP-Analogons ohne Wirkung, um die Augenwischbewegung bei einer Testbehandlung mit 0,001 % CAP zu schützen.
Verfahren
Schärfe und Tachyphylaxie in dem Augenwischtest für Ratten
Die schmerzerzeugende Wirksamkeit der Verbindungen wurde in der oben beschriebenen Augenwischuntersuchung festgestellt und wie folgt quantitativ ausgedrückt. Lösungen in zehnfach zunehmenden Konzentrationen in physiologischer Salzlösung, welche mindestens 5 Ethanol enthielt, wurden in die Augen von Ratten, welche 150–180 g wogen, getropft und die Anzahl der Schutzbewegung (Augenwischen mit dem Vorderbein) wurde gezählt. Jede Konzentration wurde an 6 Ratten angewendet und die Dosenreaktionskurven wurden aus den Durchschnittswerten ermittelt. Von den Dosenreaktionskurven wurden die Konzentrationen mit einer moderaten schmerzerzeugenden Wirksamkeit (MPP), d. h. eine gleichmäßige Reaktion von 10 Kratzer induzierend, für jede Verbindung berechnet. Auf der Basis dieser Konzentrationen wurde die relative schmerzerzeugende Wirksamkeit (RPP) im Vergleich zu derjenigen von Capsaicin, welche als 100 genommen wurde, ermittelt.
Um die Entwicklung von Tachyphylaxie oder Kreuztachyphylaxie zu prüfen, wurde 6 Stunden nach der Aufbringung der Testverbindung eine 0,001 % Testprobe von Capsaicin an demselben Auge angewendet. Die Verringerung der Reaktion in % auf eine Konzentration von 0,001 % Capsaicin bei behandelten Ratten mit den Testverbindungen verglichen mit den mit einem Trägerstoff behandelten Ratten wurde als der Index der Desensibilisierung eingeschätzt.
Ergebnisse Tabelle 4. Augenwischtest

a: MPP: moderate schmerzerzeugende Wirksamkeit
b: RPP: relative schmerzerzeugende Wirksamkeit
c: WP : schwach stechend (weniger stechend als 0,001

Capsaicin bei einer Konzentration von 0,01 %) Nachdem die Erfindung somit beschrieben wurde, ist klar, dass dieselbe auf viele verschiedene Arten variiert werden kann. Solche Variationen werden nicht als eine Abweichung von dem Geist und dem Schutzbereich der vorliegenden Erfindung angesehen und alle solchen Modifikationen, die dem Fachmann offensichtlich wären, sind als innerhalb des Schutzbereichs der nachfolgenden Ansprüche beinhaltet angesehen.

Claims

Verbindung der Formel (I) oder ein pharmazeutisch akzeptables Salz davon:
wobei X Sauerstoff oder Schwefel ist; A -NHCH₂- oder -CH₂- ist; R1 C_1-4 Alkylaryl oder R₄CO- ist, wobei R₄ C_1-18 Alkyl, C_2-18 Alkenyl oder C_6-10 Aryl ist; R2 C_1-6 Alkyl, C_1-6 Alkoxy, C_1-6 Haloylkyl oder Halogen ist; R₃ Wasserstoff, C_1-4 Alkyl, Aminoalkyl, Disäure-Monoester oder α-Alkylsäure ist; und die Sternmarkierung * ein chirales Kohlenstoffatom kennzeichnet.
Verbindung nach Anspruch 1, wobei R₁ eine Benzylgruppe oder die Gruppe der Formel: R₄CO- ist, wobei R₄ eine Alkylgruppe mit 1 bis 18 Kohlenstoffatomen oder eine Phenylgruppe ist, R₂ eine Alkylgruppe mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen, eine Alcoxygruppe mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen, eine Haloalkylgruppe mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen oder ein Halogenatom ist; und R₃ ein Wasserstoffatom, eine Alkylgruppe mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen, -(CH₂)_nNH₂-, -CO(CH₂)_nCO₂H oder -(CH₂)_nCO₂H (wobei n 1 oder 2 ist) ist.
Verbindung nach Anspruch 1, wobei X ein Sauerstoffatom und A -CH₂- ist.
Verbindung nach Anspruch 1, wobei X ein Schwefelatom und A -NHCH₂- ist.
Verbindung nach Anspruch 1, wobei R₃ ein Wasserstoffatom, -CH₂CH₂NH₂, -COCH₂CH₂CO₂H oder -CH₂CO₂H ist.
Verbindung nach Anspruch 1, wobei R₂ aus der Gruppe ausgewählt ist, die aus T-Butyl und einem Chloratom besteht.
Verbindung nach Anspruch 1, wobei R₄ aus der Gruppe ausgewählt ist, die aus t-Butyl, i-Propyl, Pentyl, Heptadecyl, Phenyl besteht.
Verbindung nach Anspruch 1, welche aus der Gruppe ausgewählt ist, die aus 2,2-Dimethylpropionsäure 2-({2-[4-(2-Aminoetoxy)-3-Methoxyphenyl]acetylamino}methyl)-3-(4-Tert-Butylphenyl)propylester; 2,2-Dimethylpropionsäure 2-(4-Tert-Butylbenzyl)-3-[3-(4-Hydroxy-3-Methoxybenzyl)Thioureido]propylester besteht.
Pharmazeutische Zusammensetzung, welche die Verbindung (I) als aktiven Bestandteil zusammen mit einem pharmazeutisch akzeptablen Träger aufweist.
Pharmazeutische Zusammensetzung nach Anspruch 9, welche die Verbindung (I) als aktiven Bestandteil in einer effizienten Menge enthält, um zusammen mit einem pharmazeutisch akzeptablen Träger akute, chronische, entzündliche oder neuropathische Schmerzen zu lindern oder zu erleichtern, oder Entzündungen zu unterdrücken oder Drang-Inkontinenz zu behandeln.
Verwendung der Verbindung (I) zur Herstellung von Medikamenten, welche zur Linderung oder Erleichterung von akuten, chronischen, entzündlichen oder neuropathischen Schmerzen, Entzündungs hemmung oder Behandlung von Drang-Inkontinenz verwendet werden.