JP3501775B2 - ヒトバニロイド受容体様タンパク質 - Google Patents

ヒトバニロイド受容体様タンパク質

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Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、ヒトバニロイド受
容体様タンパク質２（ｖａｎｉｌｌｏｉｄ ｒｅｃｅｐ
ｔｏｒ−ｌｉｋｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ２；ＶＲＬ−２）
ポリペプチド、前記ポリペプチドをコードするポリヌク
レオチド、ポリヌクレオチドプローブ又はプライマー、
前記ＤＮＡ分子を含む発現ベクター及び宿主細胞に関す
る。更に、本発明は、前記ポリペプチドの製造方法；前
記ポリペプチドに免疫特異的な抗体；ＶＲＬ−２受容体
に関連する疾病を診断するための診断キット；前記ポリ
ペプチドを調節する調節物質（ｍｏｄｕｌａｔｏｒ）を
同定するためのスクリーニング方法；前記スクリーニン
グ方法によって得ることのできる調節物質；前記ポリペ
プチドの生物学的機能に関連する症状の治療用医薬組成
物；及びバニロイド受容体様遺伝子に関する非ヒトトラ
ンスジェニック動物モデルに関する。
【０００２】
【従来の技術】カプサイシン及びカプサイシノイド（ｃ
ａｐｓａｉｃｉｎｏｉｄ）の鎮痛性作用は、種々の障
害、例えば、痛み、慢性の痛み、神経障害性の痛み、術
後の痛み、慢性関節リウマチの痛み、神経痛、神経障
害、痛覚過敏、神経傷害、虚血、神経変性、発作、失
禁、及び炎症性障害の治療における使用において公知で
ある［例えば、Ｃａｍｐｂｅｌｌら，“Ｃｌｉｎｉｃａ
ｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓｏｆ Ｃａｐｓａｉｃｉ
ｎ ａｎｄ Ｉｔｓ Ａｎａｌｏｇｕｅｓ” ｉｎＣａ
ｐｓａｉｃｉｎ ｉｎ ｔｈｅ Ｓｔｕｄｙ ｏｆ Ｐ
ａｉｎ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，第２５５−２
７２頁（１９９３）］。カプサイシン受容体は、イオン
チャネルファミリーに属するポリペプチドであると考え
られている。これらの受容体は、カプサイシン（バニロ
イド化合物）の作用機構に関連するものと考えられてい
る。カプサイシンは、有害な刺激に関する情報を中枢神
経系に伝える感覚ニューロンを選択的に活性化すること
によって、強烈な痛みの感覚を引き出す［例えば、Ｃａ
ｔｅｒｉｎａ，Ｍ．Ｊ．ら，“Ｔｈｅ Ｃａｐｓａｉｃ
ｉｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ：Ａ Ｈｅａｔ Ａｃｔｉｖａ
ｔｅｄ Ｉｏｎ Ｃｈａｎｎｅｌ Ｉｎ ｔｈｅ Ｐａ
ｉｎ Ｐａｔｈｗａｙ”，Ｎａｔｕｒｅ，３８９，８１
６−８２４（１９９７）；及びＣａｔｅｒｉｎａ，Ｍ．
Ｊ．ら，“Ａ Ｃａｐｓａｉｃｉｎ−Ｒｅｃｅｐｔｏｒ
Ｈｏｍｏｌｏｇｕｅ ｗｉｔｈＡ Ｈｉｇｈ Ｔｈｒ
ｅｓｈｏｌｄ Ｆｏｒ Ｎｏｘｉｏｕｓ Ｈｅａｔ”，
Ｎａｔｕｒｅ，３９８，４３６−４４１（１９９
９）］。前記チャネルは、カチオン透過性であり、二価
カチオン（特にはカルシウムイオン）に関して顕著な選
択性を示す。カルシウムイオン透過性のレベルは、ほと
んどの非選択性カチオンチャネルで観察されるレベルを
上回っており、ＮＭＤＡ型グルタミン酸受容体及びα−
７ニコチン性アセチルコリン受容体で観察される値と同
様である。
【０００３】バニロイド受容体又はバニロイド様受容体
をコードするいくつかのポリヌクレオチドがクローニン
グされ、同定されている［Ｃａｔｅｒｉｎａ，Ｍ．Ｊ．
ら，Ｎａｔｕｒｅ，３８９，８１６−８２４（１９９
７）；及びＣａｔｅｒｉｎａ，Ｍ．Ｊ．ら，Ｎａｔｕｒ
ｅ，３９８，４３６−４４１（１９９９）］。ＰＣＴ出
願国際公開公報ＷＯ９９/３７６７５号は、バニロイド
受容体ポリペプチド及びバニロイド受容体関連ポリペプ
チド（特にはカプサイシン受容体サブタイプＶＲ１及び
ＶＲ２）並びにコードするポリヌクレオチド配列を開示
する。ＰＣＴ出願国際公開公報ＷＯ９９/３７７６５号
は、ＶＡＮＩＬＲＥＰ２ポリペプチド及びポリヌクレオ
チド、組換え体、並びにそれらの製造方法を開示する。
【０００４】カプサイシン受容体の他のサブタイプが見
出され、同定されたとすれば、例えば、カプサイシン受
容体に関する新規リガンドを見出すために前記サブタイ
プを使用することは有用であろう。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題及び課題を解決するため
の手段】本発明は、（ａ）配列番号２又は配列番号４で
表されるアミノ酸配列を含むポリペプチド又はその変異
体；及び（ｂ）配列番号１又は配列番号３で表されるポ
リヌクレオチド配列から翻訳される推定アミノ酸配列を
有するポリペプチド又はその変異体から選択されるポリ
ペプチドを提供する。前記ポリペプチドは、新規のヒト
バニロイド受容体様タンパク質２ポリペプチドとして同
定された。本明細書において、新規ヒトバニロイド受容
体様タンパク質２を「ＶＲＬ−２」又は「ＶＲＬ−２タ
ンパク質」と称する。本明細書において、これらのポリ
ペプチドを「ＶＲＬ−２ポリペプチド」又は「ＶＲＬ−
２受容体ポリペプチド」と称することができる。
【０００６】また、本発明は、 （ａ）配列番号２又は配列番号４で表されるアミノ酸配
列を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチド； （ｂ）配列番号１で表されるヌクレオチド配列における
第８５番〜第２７００番のヌクレオチド配列、若しくは
配列番号３で表されるヌクレオチド配列における第４３
番〜第１８５１番のヌクレオチド配列を有するポリヌク
レオチド、又はその変異体； （ｃ）前記ポリヌクレオチド（ａ）又は（ｂ）と少なく
とも７０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むポ
リヌクレオチド； （ｄ）前記ポリヌクレオチド（ａ）〜（ｃ）のいずれか
１つのポリヌクレオチドに対する相補体； （ｅ）前記ポリヌクレオチド（ａ）〜（ｄ）のいずれか
１つのポリヌクレオチドにハイブリダイズ可能なヌクレ
オチド配列を含むポリヌクレオチド；及び （ｆ）前記ポリヌクレオチド（ａ）〜（ｅ）のいずれか
１つのポリヌクレオチドのポリヌクレオチド断片 から選択される、単離及び／又は精製ポリヌクレオチド
を提供する。
【０００７】また、本発明は、前記ポリヌクレオチドの
少なくとも１５個の隣接するヌクレオチドを含む、ポリ
ヌクレオチドプローブ若しくはプライマー、又はその相
補体を提供する。また、本発明は、発現ベクターが前記
ＤＮＡ分子を含有する、組換え宿主細胞におけるＶＲＬ
−２タンパク質の発現のための発現ベクター、そして、
宿主細胞が前記発現ベクターを含有する、組換えＶＲＬ
−２タンパク質を発現する宿主細胞を提供する。また、
本発明は、前記宿主細胞を、前記ＶＲＬ−２受容体ポリ
ペプチドの製造に充分な条件下で培養すること、及びそ
の培養培地から前記ポリペプチドを回収することを含
む、前記ポリペプチドの製造方法を提供する。
【０００８】ＶＲＬ−２受容体ポリペプチド、前記ＶＲ
Ｌ−２受容体をコードするＤＮＡ、前記発現ベクター、
及び組換えＶＲＬ−２を発現する組換え宿主細胞は、Ｖ
ＲＬ−２受容体の機能を調節する調節物質の同定に有用
である。従って、本発明は、更に、試験化合物又は試料
とＶＲＬ−２受容体ポリペプチドとを接触させること、
及び前記ＶＲＬ−２受容体ポリペプチドの機能を調節す
る前記化合物又は試料の活性を検出することを含む、前
記ＶＲＬ−２受容体ポリペプチドを調節（例えば、結
合）する調節物質を同定するためのスクリーニング方法
を提供する。
【０００９】また、本発明は、前記スクリーニング方法
により得ることのできるＶＲＬ−２受容体調節物質(例
えば、アゴニスト及びアンタゴニスト)を提供する。こ
れらのＶＲＬ−２受容体調節物質は、不適当なＶＲＬ−
２受容体活性、又はＶＲＬ−２受容体の機能に関連する
疾病又は症状の治療に有用である。前記疾病には、痛
み、侵害受容の痛み、慢性の痛み、神経障害性の痛み、
術後の痛み、癌の痛み、慢性関節リウマチの痛み、骨関
節症、糖尿病性神経障害、神経痛、神経障害、痛覚過
敏、神経傷害、筋肉−骨格の痛み、腰痛、神経変性、発
作、炎症性障害、喘息、アレルギー、尿生殖器障害、失
禁、高血圧症、低血圧症、及び血管周囲の疾病（ｐｅｒ
ｉｖａｓｃｕｌａｒ ｄｉｓｅａｓｅ）などが含まれ
る。
【００１０】従って、ＶＲＬ−２受容体調節物質は、前
記疾病の治療に有用である。加えて、ＶＲＬ−２受容体
ポリペプチド及びＶＲＬ−２受容体をコードするポリヌ
クレオチドは、ＶＲＬ−２受容体−関連疾病を検出する
ための診断アッセイに有用である。また、本発明は、前
記ポリヌクレオチド又はＶＲＬ−２受容体ポリペプチド
に対する抗体を含む、ヒトバニロイド受容体様タンパク
質の生物学的機能に関連する疾病又は前記疾病に対する
感受性を診断するための診断キットを提供する。加え
て、本発明は、ＶＲＬ−２受容体ポリペプチドに免疫特
異的な抗体、そして、同種の正常な動物に対して、ＶＲ
Ｌ−２受容体機能に関して変化を有する、ＶＲＬ−２受
容体遺伝子機能に関する非ヒトトランスジェニック動物
モデルを提供する。
【００１１】
【発明の実施の形態】本明細書において、用語「ヌクレ
オチド配列」とは、オリゴヌクレオチド配列又はポリヌ
クレオチド配列、並びに変異体、相同体、断片、及びそ
れらの誘導体（例えば、それらの部分）を意味する。前
記ヌクレオチド配列は、ゲノム又は合成又は組換え起源
のＤＮＡ又はＲＮＡであることができ、更に、二重鎖、
あるいは、センス鎖又はアンチセンス鎖のいずれかに相
当する一重鎖であることができる。好ましくは、前記用
語「ヌクレオチド配列」はＤＮＡを意味する。更に好ま
しくは、前記用語「ヌクレオチド配列」は、組換えＤＮ
Ａ技術の使用により調製したＤＮＡ（すなわち、組換え
ＤＮＡ）を意味する。
【００１２】本明細書において、「アミノ酸配列」と
は、ペプチド若しくはタンパク質配列又はその部分を意
味する。本明細書において、用語「単離された（ｉｓｏ
ｌａｔｅｄ）」及び「精製された（ｐｕｒｉｆｉｅ
ｄ）」とは、天然環境から移され、天然で関連する少な
くとも１つの他の成分から単離又は分離された分子（核
酸又はアミノ酸配列のいずれか）を意味する。
【００１３】本発明の好適ポリペプチドにおけるアミノ
酸配列に関する用語「変異体（ｖａｒｉａｎｔ）」に
は、前記配列における、アミノ酸１又はそれ以上の任意
の置換（ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎ）、変異（ｖａｒｉ
ａｔｉｏｎ）、改変（ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ）、置
換（ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ）、欠失（ｄｅｌｅｔｉｏ
ｎ）、又は付加（ａｄｄｉｔｉｏｎ）が含まれる（但
し、得られたポリペプチドがＶＲＬ−２活性を有す
る）。
【００１４】本発明の好適ポリペプチドをコードするヌ
クレオチド配列に関する用語「変異体（ｖａｒｉａｎ
ｔ）」又は「断片」には、前記配列における、核酸１又
はそれ以上の任意の置換（ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏ
ｎ）、変異（ｖａｒｉａｔｉｏｎ）、改変（ｍｏｄｉｆ
ｉｃａｔｉｏｎ）、置換（ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ）、
欠失（ｄｅｌｅｔｉｏｎ）、又は付加（ａｄｄｉｔｉｏ
ｎ）が含まれる（但し、得られたヌクレオチド配列が、
ＶＲＬ−２活性を有するポリペプチドをコードするか、
あるいは、コードすることができる）。相対的配列相同
性（ｒｅｌａｔｉｖｅｓｅｑｕｅｎｃｅ ｈｏｍｏｌｏ
ｇｙ）［すなわち、配列同一性（ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｉ
ｄｅｎｔｉｔｙ）］は、２又はそれ以上の配列間の「％
相同性」を計算することのできる市販のコンピューター
プログラムによって決定することができる。前記コンピ
ュータープログラムの代表的な例は、「ＣＬＵＳＴＡ
Ｌ」である。用語「変異体」には、ストリンジェント
（ｓｔｒｉｎｇｅｎｔ）な条件下［例えば、６５℃及び
０．１×ＳＳＣ（１×ＳＳＣ＝０．１５Ｍ−ＮａＣｌ，
０．０１５Ｍクエン酸Ｎａ3，ｐＨ７．０）］で、本明
細書に記載のヌクレオチド配列とハイブリダイズ可能な
配列に相捕的な配列が含まれる。
【００１５】用語「発現ベクター」とは、インビボ又は
インビトロ発現が可能な構築物を意味する。本明細書に
おいて、用語「抗体」には、ポリクローナル抗体及びモ
ノクローナル抗体、キメラ抗体、単鎖抗体、並びにヒト
化抗体が含まれる。用語「免疫特異的」とは、抗体が、
他の関連ポリペプチドに対するアフィニティーと比較し
て、発明のポリペプチドに対して、実質的により強いア
フィニティーを有することを意味する。
【００１６】以下、本発明を更に説明する。本発明は、
新規のヒトバニロイド受容体様タンパク質２(ＶＲＬ−
２)ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を
同定したことに基づく。前記ポリヌクレオチドを単離及
び精製し、そのヌクレオチド配列を決定した。
【００１７】《ＶＲＬ−２受容体ポリペプチド》第１の
観点によれば、本発明は、（ａ）配列番号２又は配列番
号４で表されるアミノ酸配列を含むポリペプチド又はそ
の変異体；及び（ｂ）配列番号１又は配列番号３で表さ
れるポリヌクレオチド配列から翻訳される推定アミノ酸
配列を有するポリペプチド又はその変異体から選択され
るポリペプチドを提供する。
【００１８】本発明のＶＲＬ−２受容体ポリペプチド
は、イオンチャネルファミリーのポリペプチドに属する
ものと考えられる。前記チャネルは、カチオン透過性で
あり、二価カチオン（特にはカルシウムイオン）に関し
て顕著な選択性を示す。ＶＲＬ−２受容体のカチオン透
過性及びシグナル伝達活性は、ＶＲＬ−２受容体ポリペ
プチドの機能を調節（例えば、結合、阻害、及び活性
化）するリガンドによって影響される。以下、これらの
性質を「ＶＲＬ−２受容体活性」と称する。
【００１９】好ましくは、前記ポリペプチド又は変異体
は、配列番号２又は配列番号４で表されるアミノ酸配列
と少なくとも７５％(より好ましくは少なくとも８５
％、更に好ましくは少なくとも９５％)の同一性（ｉｄ
ｅｎｔｉｔｙ）を有するアミノ酸配列を含む。前記変異
体は、好ましくは、前記ＶＲＬ−２活性の少なくとも１
つを示す。より具体的には、前記ポリペプチドは、或る
残基を、ＶＲＬ−２活性を有する別の酸基に置換する保
存性アミノ酸置換によって、これまで述べたものから変
化することができる。前記置換は、アラニン、バリン、
ロイシン、及びイソロイシンの間で；セリン及びトレオ
ニンの間で；酸性残基であるアスパラギン酸及びグルタ
ミン酸の間で；アスパラギン及びグルタミンの間で；塩
基性残基であるリシン及びアルギニンの間で；あるい
は、芳香族残基であるフェニルアラニン及びチロシンの
間で；実施することができる。従って、本発明は、配列
番号２又は配列番号４で表されるアミノ酸配列におい
て、アミノ酸１〜１０、好ましくは１〜５、より好まし
くは１〜３、更に好ましくは１〜２、特に好ましくは１
が、置換、欠失、又は付加（任意の組み合わせで）され
たポリペプチドの変異体を含む。
【００２０】本発明のポリペプチドは、「成熟（ｍａｔ
ｕｒｅ）」タンパク質の形であることもできるし、ある
いは、より大きなタンパク質（例えば、前駆体又は融合
タンパク質）の一部であることもできる。付加的なアミ
ノ酸配列、例えば、分泌若しくはリーダー配列、プロ配
列、精製に役立つ配列（例えば、多重ヒスチジン残
基）、又は組換え製造中の安定性のための付加的配列を
含むことが、多くの場合、有利である。
【００２１】本発明のポリペプチドは、任意の適当な方
法により調製することができる。前記ポリペプチドに
は、単離された天然ポリペプチド、組換えにより製造さ
れたポリペプチド、合成により製造されたポリペプチ
ド、あるいは、これらの方法の組み合わせにより製造さ
れたポリペプチドが含まれる。前記ポリペプチドの調製
方法は、当業者には周知である。本発明のＶＲＬ−２受
容体ポリペプチドは、前記ポリペプチドのアミノ酸配列
をコードするＤＮＡ分子を用いて調製することができ
る。
【００２２】《ポリヌクレオチド／ＤＮＡ分子》別の観
点によれば、本発明は、 （ａ）配列番号２又は配列番号４で表されるアミノ酸配
列を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチド； （ｂ）配列番号１で表されるヌクレオチド配列における
第８５番〜第２７００番のヌクレオチド配列、若しくは
配列番号３で表されるヌクレオチド配列における第４３
番〜第１８５１番のヌクレオチド配列を有するポリヌク
レオチド、又はその変異体； （ｃ）前記ポリヌクレオチド（ａ）又は（ｂ）と少なく
とも７０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むポ
リヌクレオチド； （ｄ）前記ポリヌクレオチド（ａ）〜（ｃ）のいずれか
１つのポリヌクレオチドに対する相補体； （ｅ）前記ポリヌクレオチド（ａ）〜（ｄ）のいずれか
１つのポリヌクレオチドにハイブリダイズ可能なヌクレ
オチド配列を含むポリヌクレオチド；及び （ｆ）前記ポリヌクレオチド（ａ）〜（ｅ）のいずれか
１つのポリヌクレオチドのポリヌクレオチド断片 から選択される、単離及び／又は精製ポリヌクレオチド
に関する。好ましくは、前記ポリヌクレオチドは、前記
ポリヌクレオチド（ｂ）のヌクレオチド配列と少なくと
も７５％（より好ましくは少なくとも８５％、更に好ま
しくは少なくとも９５％）の同一性を有するヌクレオチ
ド配列を含む。
【００２３】配列番号１及び配列番号３で表されるヌク
レオチド配列は、ラットバニロイド受容体１（ＶＲ１）
（Ｍ．Ｊ．Ｃａｔｅｒｉｎａら，Ｎａｔｕｒｅ，３８
９，８１６−８２４，１９９７）、ラット／ヒトバニロ
イド受容体様タンパク質１（ＶＲＬ−１）（Ｍ．Ｊ．Ｃ
ａｔｅｒｉｎａら，Ｎａｔｕｒｅ，３９８，４３６−４
４１，１９９９）、ラットストレッチ−活性化（ｓｔｒ
ｅｔｃｈ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ）チャネル（ＳＩＣ）
（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７４，６３３０−６３
３５，１９９９）、及びマウス増殖因子調節（ｇｒｏｗ
ｔｈ−ｆａｃｔｏｒ−ｒｅｇｕｌａｔｅｄ）チャネル
（ＧＲＣ）（Ｎａｔｕｒｅ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．，
１，１６５−１７０）と相同性（ｈｏｍｏｌｏｇｙ）を
示す。配列番号１及び配列番号３で表されるヌクレオチ
ド配列は、それぞれ、ＶＲＬ−２ａ及びＶＲＬ−２ｂポ
リペプチドをコードする全長ｃＤＮＡであることを見出
した。アミノ酸配列に関して、ヒトＶＲＬ−２ａの、ラ
ットＶＲ１、ラットＶＲＬ−１、ヒトＶＲＬ−１、ラッ
トＳＩＣ、及びマウスＧＲＣに対する類似性（ｓｉｍｉ
ｌａｒｉｔｙ）は、それぞれ、５１％、４６％、４７
％、５９％、及び４７％であった。アミノ酸配列に関し
て、ヒトＶＲＬ−２ｂの、ラットＶＲ１、ラットＶＲＬ
−１、ヒトＶＲＬ−１、ラットＳＩＣ、及びマウスＧＲ
Ｃに対する類似性は、それぞれ、５０％、４５％、４６
％、５９％、及び４５％であった。ＶＲ１は、熱、プロ
トン、及びカプサイシン活性化カチオンチャネルであ
る。ラットＶＲＬ−１は、熱活性化カチオンチャネルで
ある。ラットＳＩＣは、機械受容カチオンチャネルであ
る。マウスＧＲＣは、ＩＧＦ−１調節（ＩＧＦ−１−ｒ
ｅｇｕｌａｔｅｄ）カチオンチャネルである。従って、
ヒトＶＲＬ−２ａ及びＶＲＬ−２ｂの両者は、刺激（例
えば、熱、プロトン、化学物質、膜の機械刺激、増殖因
子）により活性化されるカチオンチャネルであると予想
される。
【００２４】本発明のポリヌクレオチド(ＤＮＡ分子)
は、標準的なクローニング及びスクリーニング技術を使
用して、ヒト胎盤、脳、心臓、メラノサイト、肝臓、脾
臓、包皮、肺、上皮小体、扁桃、胚全体、ジャーキット
（Ｊｕｒｋａｔ）Ｔ細胞、Ｂ細胞、及び精巣の細胞中の
ｍＲＮＡに由来するｃＤＮＡライブラリーから取得する
ことができる［例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら，Ｍｏｌｅ
ｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒ
ｙ Ｍａｎｕａｌ，２ｎｄ Ｅｄ．，ＣｏｌｄＳｐｒｉ
ｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓ
ｓ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．
（１９８９）］。また、本発明のＤＮＡ分子は、天然源
（例えば、ゲノムＤＮＡライブラリー）から取得するこ
ともできるし、あるいは、周知及び市販の技術を用いて
合成することもできる。
【００２５】また、他の細胞及びセルラインも、ＶＲＬ
−２ｃＤＮＡを単離するための使用に適していることが
できる。適当な細胞の選択は、細胞表面上のＶＲＬ−２
のスクリーニングにより行なうことができる。ＶＲＬ−
２活性の検出方法は、当業者に周知であり、放射性同位
元素で標識された受容体特異的リガンドの結合を測定す
る。このアッセイにおけるＶＲＬ−２活性を有する細胞
は、ＶＲＬ−２ｃＤＮＡの単離に適していることができ
る。
【００２６】ＶＲＬ−２ｃＤＮＡをクローニングするの
に、任意の種々の手法を用いることができる。これらの
方法には、特に限定されるものではないが、適当な発現
ベクター系におけるＶＲＬ−２含有ｃＤＮＡライブラリ
ー構築後のＶＲＬ−２ｃＤＮＡの直接的機能発現が含ま
れる。別の方法は、ＶＲＬ−２タンパク質のアミノ酸配
列から設計した標識オリゴヌクレオチドプローブを用い
る、バクテリオファージ又はプラスミドシャトルベクタ
ーにおいて構築したＶＲＬ−２含有ｃＤＮＡライブラリ
ーのスクリーニングである。好適な方法には、ＶＲＬ−
２タンパク質をコードする部分ｃＤＮＡを用いる、バク
テリオファージ又はプラスミドシャトルベクターにおい
て構築したＶＲＬ−２含有ｃＤＮＡライブラリーのスク
リーニングが含まれる。この部分ｃＤＮＡは、他のカプ
サイシン受容体において公知のアミノ酸配列由来の縮重
オリゴヌクレオチドプライマーの設計を通して、ＶＲＬ
−２ＤＮＡ断片の特異的ＰＣＲ増幅により得られる。
【００２７】その他のタイプのライブラリー及び他の細
胞又はセルラインから構築したライブラリーが、ＶＲＬ
−２をコードするＤＮＡを単離するのに有用であること
ができることは、当業者にとって容易に明らかである。
他のタイプのライブラリーには、特に限定されるもので
はないが、ゲノムＤＮＡライブラリー、及びヒト赤白血
病細胞（ｅｒｙｔｈｒｏｌｅｕｋｅｍｉａ ｃｅｌｌ）
以外の他の細胞又はセルライン由来のｃＤＮＡライブラ
リーが含まれる。
【００２８】ＶＲＬ−２活性を有する細胞又はセルライ
ンから、適当なｃＤＮＡライブラリーを調製することが
できることは、当業者にとって容易に明らかである。Ｖ
ＲＬ−２を単離するためのｃＤＮＡライブラリー調製に
使用するための細胞又はセルラインの選択は、先に引用
し、本明細書において使用する公知の標識リガンド結合
アッセイを用いて、細胞関連ＶＲＬ−２活性の最初の測
定によって行なうことができる。
【００２９】ｃＤＮＡライブラリーの調製は、当業者に
周知の標準的技術によって行なうことができる。周知の
ｃＤＮＡライブラリー構築技術は、例えば、Ｍａｎｉａ
ｔｉｓ，Ｔ．，Ｆｒｉｔｓｃｈ，Ｅ．Ｆ．，Ｓａｍｂｒ
ｏｏｋ，Ｊ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：
Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（ＣｏｌｄＳ
ｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃ
ｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，１９
８２）に見出すことができる。
【００３０】また、ＶＲＬ−２をコードするＤＮＡが、
適当なゲノムＤＮＡライブラリーからも単離することが
できることは、当業者にとって容易に明らかである。ゲ
ノムＤＮＡライブラリーの構築は、当業者に周知の標準
的技術により行なうことができる。周知のゲノムＤＮＡ
ライブラリー構築技術は、Ｍａｎｉａｔｉｓ，Ｔ．，Ｆ
ｒｉｔｓｃｈ，Ｅ．Ｆ．，Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｊ．，Ｍ
ｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔ
ｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａ
ｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉ
ｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８２）に見出すこ
とができる。
【００３１】好適方法の１つによりＶＲＬ−２遺伝子を
クローニングするために、ＶＲＬ−２又は相同タンパク
質のアミノ酸配列又はＤＮＡ配列が必要である。これを
達成するために、ＶＲＬ−２タンパク質又は相同タンパ
ク質を精製し、自動シークエンサーにより部分アミノ酸
配列を決定することができる。完全なアミノ酸配列を決
定することは必要でないが、部分ＶＲＬ−２ＤＮＡ断片
のＰＣＲ増幅のために、アミノ酸６〜８個の領域２つの
一次配列を決定することができる。
【００３２】一度適当なアミノ酸配列が同定されると、
それらをコードすることのできるＤＮＡ配列を合成す
る。遺伝暗号は縮重であるので、特定アミノ酸をコード
するのに１を越えるコドンを用いることができ、従っ
て、任意の同様のＤＮＡオリゴヌクレオチドセットによ
りアミノ酸配列をコードすることができる。前記セット
の１つだけがＶＲＬ−２配列と同一であろうが、前記セ
ットのその他も、ミスマッチを有するＤＮＡオリゴヌク
レオチドの存在にもかかわらず、ＶＲＬ−２ＤＮＡとハ
イブリダイズ可能であろう。前記ミスマッチＤＮＡオリ
ゴヌクレオチドは、まだ充分に、ＶＲＬ−２ＤＮＡとハ
イブリダイズすることができ、ＶＲＬ−２をコードする
ＤＮＡの同定及び単離を可能にする。
【００３３】好適方法の１つを用いて、ＶＲＬ−２ポリ
ペプチドをコードするｃＤＮＡクローンを、２段階アプ
ローチ［ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）に基づく技術
とｃＤＮＡライブラリースクリーニングとを使用する］
により単離する。第１段階では、精製したＶＲＬ−２又
は相同タンパク質由来のＮＨ2末端及び内部アミノ酸配
列を、ＶＲＬ−２−特定ＤＮＡ断片の増幅用縮重オリゴ
ヌクレオチドプライマーを設計するのに用いる。第２段
階では、これらの断片をクローニングし、ヒト赤白血病
細胞由来のｃＤＮＡライブラリーから全長ｃＤＮＡを単
離するためのプローブとして使用する。
【００３４】本発明のポリヌクレオチドは、本発明のポ
リペプチドをコードする全長ｃＤＮＡ及びゲノムクロー
ンを単離するために、そして、配列番号１又は配列番号
３と高い配列類似性を有する他の遺伝子［ヒト材料（ｓ
ｏｕｒｃｅ）由来のパラローグ（ｐａｒａｌｏｇ）並び
にヒト以外の種由来のオーソローグ（ｏｒｔｈｏｌｏ
ｇ）及びパラローグをコードする遺伝子を含む］のｃＤ
ＮＡ及びゲノムクローンを単離するために、ｃＤＮＡ及
びゲノムＤＮＡ用のハイブリダイゼーションプローブと
して、あるいは、核酸増幅（ＰＣＲ）反応用プライマー
として、用いることができる。
【００３５】本発明のプローブ又はプライマーは、少な
くとも１５ヌクレオチド（好ましくは少なくとも３０ヌ
クレオチド）を一般的に含み、少なくとも５０ヌクレオ
チドを含むことができる。特に好適なプローブは、３０
〜５０ヌクレオチドを有するであろう。特に好適なプラ
イマーは、２０〜２５ヌクレオチドを有するであろう。
【００３６】本発明のポリペプチドをコードするポリヌ
クレオチド（ヒト以外の種由来の相同体を含む）は、ス
トリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で、配
列番号１又は配列番号３で表される配列を有する標識プ
ローブ又はその断片を用いて、適当なライブラリーをス
クリーニングする工程と、前記ポリヌクレオチド配列を
含有する全長ｃＤＮＡ及びゲノムクローンを単離する工
程とを含む方法により、取得することができる。前記ハ
イブリダイゼーション技術は、当業者に周知である。好
ましいストリンジェントなハイブリダイゼーション条件
には、溶液［５０％ホルムアミド，５×ＳＳＣ（１５０
ｍＭ−ＮａＣｌ，１５ｍＭクエン酸三ナトリウム），５
０ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ７．６），５×Ｄｅｎｈ
ａｒｄｔ'ｓ溶液，１０％硫酸デキストラン，及び２０
μｇ／ｍＬ変性及び剪断サケ精子ＤＮＡを含む］中の４
２℃での一晩のインキュベーションの後、約６５℃の
０．１×ＳＳＣ中でのフィルターの洗浄が含まれる。従
って、本発明には、ストリンジェントなハイブリダイゼ
ーション条件下で、配列番号１又は配列番号３で表され
る配列を有する標識プローブ又はその断片を用いて、適
当なライブラリーをスクリーニングすることによって得
ることのできるポリヌクレオチドも含まれる。
【００３７】多くの場合、単離されたｃＤＮＡ配列が不
完全であり、前記ｃＤＮＡの５’端においてポリペプチ
ドをコードする領域が短いことを、当業者は認めるであ
ろう。これは、第１鎖ｃＤＮＡ合成の際に、逆転写酵素
がｍＲＮＡ鋳型のＤＮＡコピーを完全に行なうことがで
きなかったことの結果である。なお、逆転写酵素は、本
来、「ｐｒｏｃｅｓｓｉｖｉｔｙ」（重合反応の際に、
酵素が鋳型に結合し続ける能力の程度）が低い酵素であ
る。
【００３８】全長ｃＤＮＡを取得、あるいは、短いｃＤ
ＮＡを伸張させるために、当業者が利用可能で、且つ周
知ないくつかの方法、例えば、ＲＡＣＥ（Ｒａｐｉｄ
Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｃＤＮＡ ｅｎｄ
ｓ）法に基づく方法が存在する（例えば、Ｆｒｏｈｍａ
ｎら，ＰＮＡＳ ＵＳＡ，８５，８９９８−９００２，
１９８８参照）。前記方法の最近の改法［例えば、Ｍａ
ｒａｔｈｏｎTM ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｃｌｏｎｔｅ
ｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ｉｎｃ．）により例
示される］は、より長いｃＤＮＡに関する研究を充分に
簡易化した。
【００３９】《発現ベクター》本発明の組換えＶＲＬ−
２ポリペプチドは、当業者に周知の方法により、発現ベ
クターを含む遺伝子工学的に作製した宿主細胞から調製
することができる。従って、本発明は、組換え宿主細胞
（発現ベクターが前記ＤＮＡ分子を含有する）における
ヒトバニロイド受容体様タンパク質発現用の発現ベクタ
ーに関する。
【００４０】先述した方法により得られたクローン化Ｖ
ＲＬ−２ｃＤＮＡは、適当なプロモーター及び他の適当
な転写調節要素を含有する発現ベクターに分子クローニ
ングし、原核又は真核宿主細胞中に転移させて組換えＶ
ＲＬ−２ポリペプチドを製造することにより、組換え的
に発現させることができる。前記操作に関する技術は、
先述のＭａｎｉａｔｉｓ，Ｔ，らの文献に見出すことが
でき、当業者に周知である。
【００４１】本明細書において、発現ベクターは、適当
な宿主におけるクローン化ＤＮＡの転写及びそのｍＲＮ
Ａの翻訳に必要とされるＤＮＡ配列として規定される。
前記ベクターは、種々の宿主、例えば、細菌、藍藻、植
物細胞、昆虫細胞、及び動物細胞における真核性ＤＮＡ
の発現に用いることができる。
【００４２】特別に設計されたベクターは、宿主間、例
えば、細菌−酵母間又は細菌−動物細胞間の往復を可能
にする。適当に構築された発現ベクターは、宿主細胞に
おける自立複製用の複製起点、選択マーカー、限定数の
有用な制限酵素部位、高いコピー数の潜在性、及び活性
プロモーターを含有すべきである。プロモーターは、Ｒ
ＮＡポリメラーゼをＤＮＡに結合させ、ＲＮＡ合成を開
始させるＤＮＡ配列として規定される。強力なプロモー
ターは、高頻度でｍＲＮＡを始動させるプロモーターで
ある。発現ベクターには、特に限定されるものではない
が、クローニングベクター、改変クローニングベクタ
ー、特別に設計されたプラスミド又はウイルスが含まれ
る。
【００４３】種々の哺乳動物発現ベクターを、哺乳動物
細胞における組換えＶＲＬ−２の発現に用いることがで
きる。組換えＶＲＬ−２発現に適することができる市販
の哺乳動物発現ベクターには、特に限定されるものでは
ないが、ｐＭＣｌｎｅｏ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）、ｐ
ＸＴ１（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）、ｐＳＧ５（Ｓｔｒａ
ｔａｇｅｎｅ）、ｐｃＤＮＡ１、ｐｃＤＮＡ３．１（Ｉ
ｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、ＥＢＯ−ｐＳＶ２−ｎｅｏ（Ａ
ＴＣＣ ３７５９３）、ｐＢＰＶ−１（８−２）（ＡＴ
ＣＣ ３７１１０）、ｐｄＢＰＶ−ＭＭＴｎｅｏ（３４
２−１２）（ＡＴＣＣ ３７２２４）、ｐＲＳＶｇｐｔ
（ＡＴＣＣ ３７１９９）、ｐＲＳＶｎｅｏ（ＡＴＣＣ
３７１９８）、ｐＳＶ２−ｄｈｆｒ（ＡＴＣＣ ３７
１４６）、ｐＵＣＴａｇ（ＡＴＣＣ ３７４６０）、及
びＩＺＤ３５（ＡＴＣＣ ３７５６５）が含まれる。
【００４４】《発現ベクターを含有する宿主細胞》ま
た、ＶＲＬ−２ポリペプチドをコードするＤＮＡは、宿
主細胞における発現用の発現ベクターにクローニングす
ることができる。宿主細胞は、原核細胞又は真核細胞で
あることができ、特に限定されるものではないが、細
菌、真菌、昆虫、動物（哺乳動物を含む）、及び植物細
胞が含まれる。適当な細菌細胞には、連鎖球菌（Ｓｔｒ
ｅｐｔｏｃｏｃｃｉ）、ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏ
ｃｏｃｃｉ）、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、放線菌（Ｓｔ
ｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）、及び枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕ
ｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）細胞が含まれる。適当な真菌細
胞には、酵母（ｙｅａｓｔ）細胞及びコウジカビ（Ａｓ
ｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）細胞が含まれる。動物細胞には、
ヒト、ウシ、ブタ、サル、及び齧歯動物起源のセルライ
ンが含まれる。適当な昆虫細胞には、ショウジョウバエ
（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ）Ｓ２及びスポドプテラ（Ｓｐ
ｏｄｏｐｔｅｒａ）Ｓｆ９細胞が含まれる。適当な動物
細胞には、ＣＨＯ、ＣＯＳ、ＨｅＬａ、Ｃ１２７、３Ｔ
３、ＢＨＫ、ＨＥＫ２９３、及びボーズメラノーマ（Ｂ
ｏｗｅｓ ｍｅｌａｎｏｍａ）細胞が含まれる。適して
いることができ、且つ市販されている哺乳動物種由来の
セルラインには、ＣＶ−１（ＡＴＣＣ ＣＣＬ ７
０）、ＣＯＳ−１（ＡＴＣＣ ＣＲＬ １６５０）、Ｃ
ＯＳ−７（ＡＴＣＣ ＣＲＬ １６５１）、ＣＨＯ−Ｋ
１（ＡＴＣＣ ＣＣＬ ６１）、３Ｔ３（ＡＴＣＣ Ｃ
ＣＬ ９２）、ＮＩＨ／３Ｔ３（ＡＴＣＣ ＣＲＬ １
６５８）、ＨｅＬａ（ＡＴＣＣ ＣＣＬ ２）、Ｃ１２
７１（ＡＴＣＣ ＣＲＬ １６１６）、ＢＳ−Ｃ−１
（ＡＴＣＣ ＣＣＬ ２６）、及びＭＲＣ−５（ＡＴＣ
Ｃ ＣＣＬ １７１）が含まれる。
【００４５】発現ベクターは、いくつかの技術（特に限
定されるものではないが、トランスフォーメーション、
トランスフェクション、プロトプラスト融合、及びエレ
クトロポレーションが含まれる）のいずれか１つによ
り、宿主細胞に導入することができる。発現ベクターを
含有する細胞は、個別に分析して、ＶＲＬ−２タンパク
質を製造するかどうかを決定する。ＶＲＬ−２発現細胞
の同定は、いくつかの方法（特に限定されるものではな
いが、抗ＶＲＬ−２抗体による免疫学的反応性、及び宿
主細胞関連ＶＲＬ−２活性の存在が含まれる）により行
なうことができる。
【００４６】また、ＶＲＬ−２ＤＮＡの発現は、インビ
トロで製造した合成ｍＲＮＡを用いて行なうことができ
る。合成ｍＲＮＡは、種々のセルフリー（ｃｅｌｌ−ｆ
ｒｅｅ）系（特に限定されるものではないが、コムギ胚
芽抽出物及び網状赤血球抽出物が含まれる）において効
率的に翻訳することができ、また、細胞に基づく系（特
に限定されるものではないが、カエル卵母細胞へのマイ
クロインジェクションが含まれる）において効率的に翻
訳することができる。カエル卵母細胞へのマイクロイン
ジェクションによることが好ましい。
【００４７】至適レベルの受容体活性及び／又はＶＲＬ
−２を得るＶＲＬ−２ｃＤＮＡ配列を決定するために、
ＶＲＬ−２ｃＤＮＡ分子（特に限定されるものではない
が、以下が含まれる）を構築することができる：ＶＲＬ
−２ｃＤＮＡの全長オープンリーディングフレーム、及
び受容体タンパク質の特定ドメインのみ又は前記タンパ
ク質の再配置したドメインをコードするｃＤＮＡの一部
を含有する種々の構築物。全ての構築物は、ＶＲＬ−２
ｃＤＮＡの５’及び／又は３’非翻訳領域の全部又は一
部を含有するように、あるいは、全く含有しないよう
に、設計することができる。ＶＲＬ−２活性及びタンパ
ク質の発現レベルは、適当な宿主細胞へのこれらの構築
物の導入（単独及び組み合わせの両方）の後に、決定す
ることができる。一過性（ｔｒａｎｓｉｅｎｔ）アッセ
イにおいて最適発現をもたらすＶＲＬ−２ｃＤＮＡカセ
ットの決定に続いて、このＶＲＬ−２ｃＤＮＡ構築物
を、種々の発現ベクター（組換えウイルスを含む）（特
に限定されるものではないが、哺乳動物細胞、植物細
胞、昆虫細胞、卵母細胞、大腸菌、及び酵母細胞用のベ
クターを含む）に転移させる。
【００４８】ＶＲＬ−２受容体活性のレベル及びＶＲＬ
−２タンパク質のレベルの両方について、哺乳動物細胞
トランスフェクタント（ｔｒａｎｓｆｅｃｔａｎｔ）を
以下の方法によりアッセイする。ＶＲＬ−２受容体活性
の評価は、細胞に対する標識リガンドの直接導入と、Ｖ
ＲＬ−２発現細胞への前記リガンドの特異的結合量の決
定とを含む。受容体活性に関する結合アッセイは、当業
者に公知である（Ｆｒｅｙら，１９９３，Ｅｕｒ．Ｊ．
Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，２４４，ｐｐ２３９−２５
０）。
【００４９】宿主細胞中のＶＲＬ−２タンパク質レベル
は、種々の技術（特に限定されるものではないが、イム
ノアフィニティー及び／又はリガンドアフィニティー技
術を含む）により定量される。ＶＲＬ−２特異的アフィ
ニティービーズ又はＶＲＬ−２特異的抗体は、35Ｓ−メ
チオニン標識又は非標識ＶＲＬ−２タンパク質を単離す
るのに使用される。標識ＶＲＬ−２タンパク質は、ＳＤ
Ｓ−ＰＡＧＥにより分析される。非標識ＶＲＬ−２タン
パク質は、ＶＲＬ−２特異的抗体を用いるウエスタンブ
ロッティング、ＥＬＩＳＡ、又はＲＩＡアッセイにより
検出される。
【００５０】宿主細胞におけるＶＲＬ−２の発現の後
に、ＶＲＬ−２タンパク質を回収することにより、ＶＲ
Ｌ−２特異的リガンドを結合可能な活性型の形で、ＶＲ
Ｌ−２を得ることができる。いくつかのＶＲＬ−２精製
方法が可能であり、使用に適している。
【００５１】組換えＶＲＬ−２は、細胞溶解物及び抽出
物から、あるいは、馴化（ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｅｄ）培
養培地から、塩分別（ｓａｌｔ ｆｒａｃｔｉｏｎａｔ
ｉｏｎ）、イオン交換クロマトグラフィー、サイズ排除
（ｓｉｚｅ ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ）クロマトグラフィ
ー、ヒドロキシアパタイト吸着クロマトグラフィー、及
び疎水性相互作用（ｈｙｄｒｏｐｈｏｂｉｃ ｉｎｔｅ
ｒａｃｔｉｏｎ）クロマトグラフィーの単独の適用又は
種々の組み合わせにより、精製することができる。
【００５２】従って、本発明は、前記ＤＮＡ分子を含有
する発現ベクターを含む宿主細胞を、ＶＲＬ−２受容体
ポリペプチドの製造に充分な条件下で培養すること、そ
して、前記培養培地から前記ポリペプチドを回収するこ
とを含む、前記ポリペプチドの製造方法も提供する。ポ
リペプチド製造の条件は、当業者により、容易に設計す
ることができる。ポリペプチドが細胞内合成、単離、及
び／又は精製の際に変性した場合には、活性コンフォメ
ーションを再生するために、タンパク質のリフォールデ
ィングに関する周知技術を使用することができる。
【００５３】《抗体》また、本発明は、ＶＲＬ−２受容
体ポリペプチドに免疫特異的な抗体を提供する。前記抗
体は、公知技術に従って、ポリペプチド又はエピトープ
担持断片、類似体、又は細胞を動物（好ましくは非ヒト
動物）に投与することによって得ることができる。モノ
クローナル抗体の調製のために、継代セルライン培養に
より製造される抗体を提供する任意の技術を用いること
ができる。例示には、ハイブリドーマ技術［Ｋｏｈｌｅ
ｒ，Ｇ．及びＭｉｌｓｔｅｉｎ，Ｃ．，Ｎａｔｕｒｅ
（１９７５）２５６：４９５−４９７］、トリオーマ
（ｔｒｉｏｍａ）技術、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術
［Ｋｏｚｂｏｒら，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｔｏｄａｙ
（１９８３）４：７２］、及びＥＢＶ−ハイブリドーマ
技術（Ｃｏｌｅら，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂ
ｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，
７７−９６，Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．，１９
８５）が含まれる。また、単鎖抗体の製造技術（例え
ば、米国特許４，９４６，７７８号明細書に記載の技
術）を、本発明のポリペプチドに対する単鎖抗体を製造
するのに適合させることができる。また、トランスジェ
ニックマウス又は他の生物（他の哺乳動物を含む）を、
ヒト化抗体を発現させるのに使用することができる。こ
れまで述べた抗体は、ポリペプチドを発現するクローン
の単離又は同定するのに、あるいは、アフィニティーク
ロマトグラフィーによりポリペプチドを精製するのに使
用することができる。また、本発明のポリペプチドに対
する抗体は、特に、疾病の治療に用いることができる。
【００５４】《診断ツール》本発明のＤＮＡ分子は、診
断試薬として用いることができる。本発明のポリヌクレ
オチドにより特徴づけられる遺伝子の変異型（機能不全
に関連する）の検出は、疾病（遺伝子の発現不足、過剰
発現、あるいは、空間的又は時間的に変化した発現に起
因する）、又は疾病に対する感受性の診断の一助に、あ
るいは、明らかにすることができる診断ツールを提供す
る。遺伝子変異を担持する個体は、種々の技術によっ
て、ＤＮＡレベルで検出することができる。
【００５５】診断用核酸は、対象の細胞（例えば、血
液、尿、唾液、組織生検、又は解剖材料に由来）から得
ることができる。ゲノムＤＮＡを、検出に直接用いるこ
とができるし、あるいは、分析前にＰＣＲ又は他の増幅
技術により酵素的に増幅させることもできる。また、Ｒ
ＮＡ又はｃＤＮＡを同様にして用いることができる。正
常の遺伝子型と比較して、増幅産物の大きさの変化によ
って、欠失及び挿入を検出することができる。増幅ＤＮ
Ａを標識ＶＲＬ−２ヌクレオチド配列とハイブリダイズ
させることによって、点変異を同定することができる。
ＲＮアーゼ消化により、あるいは、融点の違いにより、
完全にマッチする配列と、ミスマッチの二重鎖とを区別
することができる。また、ゲル中のＤＮＡ断片の電気泳
動移動度における変化（変性剤の存在下又は不在下）に
より、あるいは、直接的なＤＮＡ配列決定により、ＤＮ
Ａ配列の違いを検出することができる［例えば、Ｍｙｅ
ｒｓら，Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９８５）２３０：１２４２
参照］。
【００５６】また、特定位置での配列変化を、ヌクレア
ーゼプロテクションアッセイ（例えば、ＲＮアーゼ及び
Ｓ１プロテクション）又は化学的切断法［Ｃｏｔｔｏｎ
ら，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｉ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ
（１９８５）８５：４３９７−４４０１）参照］によっ
て、明らかにすることができる。別の実施態様では、例
えば、遺伝子変異を効率的にスクリーニングするため
に、ＶＲＬ−２ヌクレオチド配列又はその断片を含むオ
リゴヌクレオチドプローブのアレイ（ａｒｒａｙ）を構
築することができる。アレイ技術方法は、周知であり、
広く一般に適用可能である。また、アレイ技術方法は、
分子遺伝学における種々の問題（遺伝子発現、遺伝的連
鎖、及び遺伝的多様性を含む）に取り組むのに用いるこ
とができる［例えば、Ｍ．Ｃｈｅｅら，Ｓｃｉｅｎｃ
ｅ，Ｖｏｌ．２７４，ｐｐ．６１０−６１３（１９９
６）参照］。
【００５７】診断アッセイは、先述の方法によりＶＲＬ
−２遺伝子中の変異を検出することによって、ＶＲＬ−
２関連疾病に対する感受性を診断又は決定する方法を提
供する。加えて、前記疾病は、ポリペプチド又はｍＲＮ
Ａレベルの異常な減少又は増加を、対象由来の試料から
決定することを含む方法により診断することができる。
発現の減少又は増加は、ポリヌクレオチドの定量に関す
る当業者に周知の任意の方法［例えば、核酸増幅（例え
ば、ＰＣＲ、ＲＴ−ＰＣＲ）、ＲＮアーゼプロテクショ
ン、ノーザンブロッティング、及び他のハイブリダイゼ
ーション法］を用いて、ＲＮＡレベルで測定することが
できる。ホスト（ｈｏｓｔ）由来の試料中のタンパク質
（例えば、本発明のポリペプチド）のレベルを決定する
のに用いることのできるアッセイ技術は、当業者に周知
である。前記アッセイ方法には、ラジオイムノアッセ
イ、競合的結合アッセイ、ウェスタンブロット分析、及
びＥＬＩＳＡアッセイが含まれる。
【００５８】別の観点によれば、本発明は、本発明のＤ
ＮＡ分子又は本発明のポリペプチドに対する抗体を含む
診断キットに関する。所望により、前記診断キットは、
公知の診断キットで用いることのできる他の材料を含む
ことができる。前記キットは、特には、疾病又は疾病に
対する感受性（好ましくは、痛み、慢性の痛み、神経障
害性の痛み、術後の痛み、慢性関節リウマチの痛み、神
経痛、神経障害、痛覚過敏、神経傷害、虚血、神経変
性、発作、失禁、及び炎症性障害）を診断するのに用い
ることができる。
【００５９】《スクリーニング方法》本発明による新規
のＶＲＬ−２受容体は、ＶＲＬ−２受容体活性の機能を
調節する（ｍｏｄｕｌａｔｅ）調節物質を同定するため
のアッセイ方法における使用に適している。従って、ま
た、本発明は、ＶＲＬ−２ポリペプチドの機能を調節す
る調節物質のスクリーニング方法を提供する。本明細書
において、「受容体の機能の調節」又は「受容体活性の
調節」には、受容体の阻害又は活性化が含まれ、更に、
受容体活性の正常な調整（ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ）に直
接的又は間接的に影響を与えることが含まれる。本明細
書において、用語「調節物質」は、受容体活性の調整に
直接的又は間接的に影響を与える化合物、アゴニスト、
アンタゴニスト、リガンド、基質、及び酵素を意味す
る。
【００６０】本発明のＶＲＬ−２受容体は、受容体調節
物質を同定するためのアッセイ方法で使用するための天
然及び組換え材料（ｓｏｕｒｃｅ）の両方から得ること
ができる。一般に、ＶＲＬ−２受容体調節物質を同定す
るためのアッセイ方法は、本発明のＶＲＬ−２ポリペプ
チド(あるいは、前記ポリペプチドを担持する細胞又は
膜）と、ＶＲＬ−２受容体調節物質を含有することが予
想される試験化合物又は試料とを接触させること、そし
て、ＶＲＬ−２受容体の機能(例えば、結合活性)を調節
する活性を検出することを含むことができる。試験化合
物又は試料を、例えば、精製受容体、受容体製造細胞の
細胞画分（ｓｕｂｃｅｌｌｕｌａｒｆｒａｃｔｉｏ
ｎ）、及び／又は受容体発現細胞の全体について、直
接、試験することができる。試験化合物又は試料を、公
知の標識又は非標識受容体リガンドの存在又は不在下
で、受容体に添加することができる。更に、これらのス
クリーニング方法は、ポリペプチドを担持する細胞に適
した検出系を用いることによって、ポリペプチドの活性
化又は阻害により生じるシグナルを候補化合物が引き起
こすか否かを試験することができる。試験化合物又は試
料の調節活性は、例えば、受容体への結合、受容体の活
性化、受容体活性の阻害、受容体への他の化合物の結合
の阻害又は増強、受容体調整の調節、又は細胞内活性の
調節に関する試験化合物又は試料の各能力を分析するこ
とによって決定することができる。
【００６１】本発明においては、他の公知のスクリーニ
ング方法を使用することができる。前記公知方法は、Ｐ
ＣＴ国際公開公報ＷＯ９９/３７７６５号第１３頁第５
行〜第１４頁第３１行に見出すことができる。加えて、
本発明のスクリーニング方法は、ＶＲＬ−２調節活性を
有しない或る化合物を同定するカウンターアッセイをそ
の範囲に含む。前記スクリーニング方法は、本発明のポ
リペプチドに関する調節物質を同定するためのスクリー
ニングキットの使用により、実施することができる。前
記キットは、（ａ）本発明のポリペプチド；（ｂ）本発
明のポリペプチドを発現する組換え細胞；又は（ｃ）本
発明のポリペプチドを発現する細胞膜を含む。スクリー
ニングキットに用いることのできる任意の公知の材料又
は成分を、本発明のスクリーニングキットに加えること
ができる。ＶＲＬ−２受容体活性の調節物質は、これま
で述べたように、ＶＲＬ−２受容体活性に関連する疾病
状態を治療するのに有用である。
【００６２】《医薬組成物》更に、本発明は、治療に有
効な量の前記スクリーニング方法で得られた調節物質
（例えば、アゴニス又はアンタゴニスト）と薬剤学的に
許容することのできる担体とを含む、ヒトバニロイド受
容体様タンパク質の生物学的機能に関連する症状の治療
用医薬組成物を提供する。ＶＲＬ−２受容体の生物学的
機能に関連する症状には、痛み、侵害受容の痛み、慢性
の痛み、神経障害性の痛み、術後の痛み、癌の痛み、慢
性関節リウマチの痛み、骨関節症、糖尿病性神経障害、
神経痛、神経障害、痛覚過敏、神経傷害、筋肉−骨格の
痛み、腰痛、神経変性、発作、炎症性障害、喘息、アレ
ルギー、尿生殖器障害、失禁、高血圧症、低血圧症、及
び血管周囲の疾病などが含まれる。従って、本発明の医
薬組成物は、前記疾病の治療用医薬として有用である。
【００６３】本発明の医薬組成物は、経口、非経口、又
は局所のいずれかの経路で哺乳動物に投与することがで
きる。通常、これらの化合物は、最も望ましくは、１日
当たり０．１ｍｇ〜７５０ｍｇ（好ましくは１日当たり
１０ｍｇ〜５００ｍｇ）の投与範囲でヒトに投与する
が、治療対象の体重及び状態、治療される疾病の状態、
及び選択される特定の投与経路に応じて、必要な変更が
行なわれるであろう。
【００６４】本発明の化合物は、先述の前記経路のいず
れかにより、単独で、あるいは、薬剤学的に許容するこ
とのできる担体又は希釈剤との組み合わせで、投与する
ことができ、前記投与は、単回又は複数回投与で実施す
ることができる。より具体的には、本発明の新規治療剤
は、幅広い種々の剤形で投与することができる。すなわ
ち、錠剤、カプセル剤、ロゼンジ剤、トローチ剤、ハー
ドキャンディー剤、散剤、スプレー剤、クリーム剤、塗
剤、坐剤、ゼリー剤、ゲル剤、ペースト剤、ローション
剤、軟膏剤、水性懸濁液、注射溶液、エリキシル剤、及
びシロップ剤などの形で、種々の薬剤学的に許容される
ことのできる不活性担体と組み合わせることができる。
前記担体には、固体希釈剤若しくは充填剤、滅菌水性媒
体、及び種々の非毒性有機溶媒などが含まれる。更に、
経口医薬組成物には、適当な甘味及び／又は香気を付与
することができる。通常、治療に有効な本発明の化合物
は、前記剤形中に、５重量％〜７０重量％（好ましくは
１０重量％〜５０重量％）の範囲の濃度レベルで存在す
る。
【００６５】経口投与用では、種々の賦形剤（例えば、
微結晶セルロース、クエン酸ナトリウム、炭酸カルシウ
ム、リン酸二カリウム、及びグリシン）を含有する錠剤
を、種々の崩壊剤［例えば、デンプン（好ましくはコー
ン、ポテト、又はタピオカスターチ）、アルギン酸、及
び或るケイ酸複合体］と一緒に、顆粒化結合剤（例え
ば、ポリビニルピロリドン、スクロース、ゼラチン、及
びアラビアゴム）と一緒に用いることができる。加え
て、滑沢剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、ラウ
リル硫酸ナトリウム、及びタルク）が、多くの場合、錠
剤形成用に非常に有用である。また、同型の固体組成物
をゼラチンカプセルにおける充填剤として用いることが
できる。これに関連する好適材料には、ラクトース（乳
糖）及び高分子量ポリエチレングリコールが含まれる。
経口投与用に水性懸濁液及び／又はエリキシル剤が望ま
れる場合には、活性成分を、種々の甘味量若しくは香
料、着色剤、又は色素と組み合わせることができ、所望
により、更に乳化剤及び／又は懸濁剤と、前記希釈剤
（例えば、水、エタノール、プロピレングリコール、グ
リセリン、及びそれらの種々の組み合わせ）と一緒に組
み合わせることができる。
【００６６】非経口投与用では、ゴマ若しくはピーナッ
ツオイル又は水性プロピレングリコールのいずれかにお
ける本発明の化合物の溶液を用いることができる。所望
に応じて、前記水溶液を適当に緩衝化（好ましくはｐＨ
＞８）すべきであり、液体希釈剤を最初に等張性にする
べきである。これらの水溶液は、静脈注射用に適してい
る。油性溶液は、関節内、筋内、及び皮下注射用に適し
ている。滅菌条件下におけるこれらの全ての溶液の調製
は、当業者に周知の標準的薬剤学的技術により、容易に
達成される。加えて、また、皮膚の炎症症状を治療する
場合に、本発明の化合物を局所投与することができる。
この場合、好ましくは、標準的薬剤学的手法に従って、
クリーム剤、ゼリー剤、ゲル剤、ペースト剤、及び軟膏
剤により行なうことができる。
【００６７】《トランスジェニック動物》本発明のポリ
ペプチド及び／又はＤＮＡ分子は、遺伝学的に改変した
非ヒト動物、あるいは、セルラインにおける部位特異的
遺伝子改変を生じさせるのに用いることができる。用語
「トランスジェニック」は、例えば、ＶＲＬ−２受容体
遺伝子活性の欠失又は他のノックアウト、宿主細胞に安
定的に転移された外来性ＶＲＬ−２受容体遺伝子、変化
させたＶＲＬ−２受容体遺伝子発現を有する「ノックイ
ン（ｋｎｏｃｋ−ｉｎ）」、あるいは、レポーター遺伝
子に作動可能に結合させた外来性ＶＲＬ−２受容体ポリ
ペプチドプロモーターを有する、遺伝学的に改変した動
物を含むことを意図する。ＶＲＬ−２受容体ポリペプチ
ド機能のホモ接合性（ｈｏｍｏｚｙｇｏｕｓ）及びヘテ
ロ接合性（ｈｅｔｅｒｏｚｙｇｏｕｓ）のノックアウト
及びノックインが特に好ましい。
【００６８】トランスジェニック動物は、当業者に公知
の方法に従って作製することができる。例えば、トラン
スジェニック動物は、内在性ＶＲＬ−２受容体座を変化
させる相同組換えによって作製することができる。ある
いは、核酸構築物をゲノムにランダムに組み込む。安定
的な組み込み用ベクターには、プラスミド、レトロウイ
ルス及びその他の動物ウイルス、並びにＹＡＣなどが含
まれる。トランスジェニック動物としては、ハツカネズ
ミ属（Ｍｕｓ）（例えば、マウス）、クマネズミ属（Ｒ
ａｔｔｕｓ）（例えば、ラット）、アナウサギ属（Ｏｒ
ｙｃｔｏｌｏｇｕｓ）（例えば、ラビット）、及びゴー
ルデンハムスター属（Ｍｅｓｏｃｒｉｃｅｔｕｓ）（例
えば、ハムスター)からなる群から選んだ属由来の哺乳
動物が好ましい。トランスジェニック動物の調製及び使
用に関する、より具体的な記載は、ＷＯ９９／３７６７
５号公報第３４頁第３６行〜第３７頁第１２行に見出す
ことができる。
【００６９】
【実施例】以下、実施例によって本発明を具体的に説明
するが、これらは本発明の範囲を限定するものではな
い。
【実施例１】《ｈＶＲＬ−２ｃＤＮＡのクローニング》
ラットバニロイド受容体サブタイプ１（以下、「ＶＲ
１」と称する）のポリヌクレオチド及びポリペプチド配
列を用いて、ＬｉｆｅＳｅｑTMデータベース（Ｉｎｃｙ
ｔｅ）に対してＢＬＡＳＴ検索を行なった。ラットＶＲ
１に対して高い相同性を示すヌクレオチド配列を含有す
るｃＤＮＡクローン６個が得られた。クローン６個の
内、５個は、ラットＶＲ１のヒト相同体、すなわち、ヒ
トバニロイド受容体様タンパク質１（以下、ＶＲＬ−１
と称する）であった。しかし、ｃＤＮＡクローン１個
は、ＶＲ１又はＶＲＬ−１のいずれともマッチせず、バ
ニロイド受容体サブタイプに相同な新規のヒト受容体を
コードした。このｃＤＮＡを「ＶＲＬ−２」と命名し
た。このｃＤＮＡクローンは、完全なオープンリーディ
ングフレームを含有していなかった。
【００７０】更に、ヒトＶＲＬ−２の全長ｃＤＮＡのク
ローニングを実施した。ＶＲＬ−２の開始コドンを同定
するために、インサイト社のクローン及びヒト膵臓Ｍａ
ｒａｔｈｏｎ−ＲｅａｄｙTM ｃＤＮＡ（Ｃｌｏｎｔｅ
ｃｈ，Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，Ｃａｌｉｆ．）の配列デー
タから設計したプライマー２個［５’−ＧＣＴ ＧＴＣ
ＧＧＧ ＧＡＡ ＧＡＧ ＧＣＧ ＧＧＣ ＡＣＡ
ＣＴＴ Ｇ−３’（配列番号５）及び５’−ＧＣＡ Ｇ
ＣＡ ＧＴＴ ＣＡＴ ＴＧＡ ＴＧＧ ＧＣＴ ＣＣ
Ａ ＣＡＧ Ｃ−３’（配列番号６）］を使用した。
５’ＲＡＣＥ（ｒａｐｉｄ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏ
ｎ ｏｆ ｃＤＮＡ ｅｎｄｓ）を、以下の条件下（９
４℃で１分間及び６８℃で２分間を、３０サイクル）で
実施した。増幅された１．１ｋｂのＲＡＣＥ産物をクロ
ーニングし、自動ＤＮＡシークエンサーＡＢＩ ＰＲＩ
ＳＭ ３１０（ＰＥ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｆｏｓｔ
ｅｒＣｉｔｙ，Ｃａｌｉｆ．；ＴＯＹＯＢＯ製造）によ
り配列決定した。これらの配列データは、５’ＲＡＣＥ
産物が２種類の５’部分（インフレームの終始コドンの
下流に、潜在的な開始コドンを含む）を含有することを
示した。ＶＲＬ−２は、少なくとも２つのスプライスト
（ｓｐｌｉｃｅｄ）変異体を含有するサブファミリーを
構成した。一方のクローンをＶＲＬ−２ａと命名し、も
う一方をＶＲＬ−２ｂと命名した。
【００７１】ＶＲＬ−２ａ及びＶＲＬ−２ｂの完全なオ
ープンリーディングフレームを単離するために、アドバ
ンテージ−ＨＦ（Ａｄｖａｎｔａｇｅ−ＨＦ）ＰＣＲキ
ット（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ，Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，Ｃａｌ
ｉｆ．）及びヒト腎臓ｃＤＮＡライブラリー（Ｃｌｏｎ
ｔｅｃｈ，Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，Ｃａｌｉｆ．）を用い
てＰＣＲを実施した。５’ＲＡＣＥ産物及びインサイト
社のクローンの配列データからプライマー２セットを設
計した： ＶＲＬ−２ａフォワード：５’−ＡＴＣ ＴＧＣ ＧＣ
Ａ ＴＧＡ ＡＧＴ ＴＣＣ ＡＧ−３’（配列番号
７）； ＶＲＬ−２ｂフォワード：５’−ＧＡＣ ＡＴＣ ＧＣ
Ｇ ＧＡＧ ＣＧＣ ＡＣＣ ＧＧＣ ＡＡＣ ＡＴＧ
−３’（配列番号８）；及び ＶＲＬ−２ａ，ｂリバース：５’−ＧＣＴ ＧＧＡ Ｃ
ＴＡ ＧＡＡ ＡＴＧＡＧＴ ＧＧＧ ＣＡＧ ＡＧＡ
Ａ−３’（配列番号９）。
【００７２】ＰＣＲは、以下の条件下（９４℃で２０秒
間、５８℃で３０秒間、及び７２℃で３０秒間を、２５
サイクル）で実施した。２．６ｋｂのＰＣＲ産物（ＶＲ
Ｌ−２ａ）及び１．９ｋｂのＰＣＲ産物（ＶＲＬ−２
ｂ）をクローニングし、自動ＤＮＡシークエンサーＡＢ
Ｉ ＰＲＩＳＭ ３１０（ＰＥ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍ
ｓ，Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ，Ｃａｌｉｆ．；ＴＯＹＯ
ＢＯ Ｇｅｎｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ製造）により配列決
定した。ＶＲＬ−２ａ及びＶＲＬ−２ｂのアミノ酸配列
を、それぞれ、配列番号２及び配列番号４に示す。
【００７３】
【実施例２】《哺乳動物細胞におけるｈＶＲＬ−２の発
現》ヒトＶＲＬ−２ａをコードするｃＤＮＡを、真核性
発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅ
ｎ）にサブクローニングした。ＣＨＯ−Ｋ１細胞及びＨ
ＥＫ２９３細胞を、ポリ−Ｌ−リシンでコートしたガラ
ス底ディッシュ上に蒔いた後、発現ベクター及びｐＩＲ
ＥＳ２−ＥＧＦＰ（Ｃｌｏｎｅｔｅｃｈ）（合計１．０
μｇ）並びにＦｕＧＥＮＥ６トランスフェクション試薬
（Ｒｏｃｈｅ）３μＬ［３５ｍｍディッシュ当たり、Ｏ
ｐｔｉＭＥＭ培地（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅ
ｓ）９７μＬ中］を用いて、一過性のトランスフェクシ
ョンを行なった。
【００７４】
【実施例３】《ｈＶＲＬ−２の機能解析》カチオンチャ
ネルとしてのＶＲＬ−２の活性は、蛍光色素及び通常の
顕微鏡を用いて容易に検出される。ガラスのカバーグラ
ス上に載せたＶＲＬ−２発現細胞（実施例２で得られた
もの）に、ハンクスバランス塩緩衝液（Ｈａｎｋ'ｓ
ｂａｌａｎｃｅｄ ｓａｌｔ ｂｕｆｆｅｒ）中の膜ポ
テンシャル指示薬ＤｉＢＡＣ４又はカルシウム指示薬
（例えば、ｆｕｒａ−２又はｆｌｕｏ−３）を加える。
蛍光色素を加えたＶＲＬ−２発現細胞に、浸透圧刺激、
機械刺激、又は熱刺激が加わると、蛍光の変化が、倒立
蛍光顕微鏡上に配置した単一細胞画像システム（ｓｉｎ
ｇｌｅ ｃｅｌｌ ｉｍａｇｉｎｇ ｓｙｓｔｅｍ）に
よりモニターされる。
【００７５】本実施例では、Ｃａ2+測定を、トランスフ
ェクションの２４〜４８時間経過後に実施した。単一細
胞におけるＣａ2+測定は、倒立蛍光顕微鏡（ＩＸ７０；
ＯＬＹＭＰＵＳ）上に配置した蛍光画像システムＭＥＲ
ＬＩＮ（ＯＬＹＭＰＵＳ）と一緒に、蛍光Ｃａ2+指示薬
ｆｕｒａ−２を用いて行なった。Ｃａ2+イメージングの
ために、等張（３００ｍｏｓｍｏｌ／Ｌ）測定緩衝液
［８８ｍＭ−ＮａＣｌ，５ｍＭ−ＫＣｌ，１ｍＭ−Ｍｇ
Ｃｌ2，１ｍＭ−ＣａＣｌ2，５．５ｍＭグルコース及び
１０ｍＭ−ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）を含有する］中に
おいて、室温で３０分間、５μＭ−ｆｕｒａ−２アセト
キシメチルエステル（Ｄｏｊｉｎ）を細胞に加えた。浸
透度（ｏｓｍｏｌａｒｉｔｙ）は、適当量のマニトール
の添加によって調整した。一連の蛍光画像（３４０ｎｍ
／３８０ｎｍ励起）を撮ることによって、浸透圧変化の
前及び後における、ＧＦＰの発現を伴うか、あるいは、
伴わない、細胞中のＣａ2+流入応答をモニターした。細
胞は、最初に、等張溶液中に維持した。２００ｍｏｓｍ
ｏｌ／Ｌ測定緩衝液を用いた潅流により、低張刺激を達
成した。マニトール濃度の減少により、より低い浸透度
の溶液が得られた。効果的なアッセイ緩衝液の容量は２
ｍＬであり、潅流は３ｍＬ／分の流速で室温にて実施し
た。潅流溶液の完全な交換は、２分後と仮定した。トラ
ンスフェクションしなかった細胞を対照として使用し
た。別の対照実験を、ｐｃＤＮＡ３．１でトランスフェ
クションした細胞を用いて実施した。
【００７６】実験結果を図１〜図４に見ることができ
る。図１及び図２は、ｈＶＲＬ−２をトランスフェクシ
ョンしたＣＨＯ−Ｋ１細胞において、細胞外浸透度の減
少に対する応答におけるＣａ2+増加を示す。図１におい
て、ライン１及びライン２は、発現ベクターを含まない
細胞［モック（ｍｏｃｋ）トランスフェクション］の応
答曲線を示す。図２において、ライン１は、ＧＦＰネガ
ティブ細胞（非トランスフェクション細胞）の応答曲線
を示し、ライン２は、ＧＦＰポジティブ細胞（ｈＶＲＬ
−２ａトランスフェクション細胞）の応答曲線を示す。
図３及び図４は、ｈＶＲＬ−２をトランスフェクション
したＨＥＫ２９３細胞において、細胞外浸透度の減少に
対する応答におけるＣａ2+増加を示す。図３において、
ライン１及びライン２は、発現ベクターを含まない細胞
［モック（ｍｏｃｋ）トランスフェクション］の応答曲
線を示す。図４において、ライン１は、ＧＦＰネガティ
ブ細胞（非トランスフェクション細胞）の応答曲線を示
し、ライン２は、ＧＦＰポジティブ細胞（ｈＶＲＬ−２
ａトランスフェクション細胞）の応答曲線を示す。これ
らの図に示されているように、細胞外浸透度が減少する
と、細胞内Ｃａ2+は、ｈＶＲＬ−２ａトランスフェクシ
ョン細胞では顕著に増加し、対照細胞では増加しなかっ
た。この応答は可逆的であり、浸透度の増加が細胞内Ｃ
ａ2+の減少を導いた。
【００７７】本明細書で引用した全ての刊行物（特に限
定されるものではないが、特許及び特許出願を含む）の
内容（特に、ＷＯ９９／３７７６５号公報に記載の技術
用語の定義）については、個々の刊行物を参照された
い。
【００７８】
【配列表】 <110> Pfizer Product Inc. <120> Human Vanilloid Receptor-Like Proteins <130> JPC9979A <140> <141> <150> US 60/208,156 <151> 2000-05-31 <160> 9 <170> PatentIn Ver. 2.1 <210> 1 <211> 2749 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (85)..(2700) <400> 1 aaccgcttga ggatttaagc tttgccactt tggctccgga gcaagggcag agggctgagc 60 agtgcagacg ggcctggggc aggc atg gcg gat tcc agc gaa ggc ccc cgc 111 Met Ala Asp Ser Ser Glu Gly Pro Arg 1 5 gcg ggg ccc ggg gag gtg gct gag ctc ccc ggg gat gag agt ggc acc 159 Ala Gly Pro Gly Glu Val Ala Glu Leu Pro Gly Asp Glu Ser Gly Thr 10 15 20 25 cca ggt ggg gag gct ttt cct ctc tcc tcc ctg gcc aat ctg ttt gag 207 Pro Gly Gly Glu Ala Phe Pro Leu Ser Ser Leu Ala Asn Leu Phe Glu 30 35 40 ggg gag gat ggc tcc ctt tcg ccc tca ccg gct gat gcc agt cgc cct 255 Gly Glu Asp Gly Ser Leu Ser Pro Ser Pro Ala Asp Ala Ser Arg Pro 45 50 55 gct ggc cca ggc gat ggg cga cca aat ctg cgc atg aag ttc cag ggc 303 Ala Gly Pro Gly Asp Gly Arg Pro Asn Leu Arg Met Lys Phe Gln Gly 60 65 70 gcc ttc cgc aag ggg gtg ccc aac ccc atc gat ctg ctg gag tcc acc 351 Ala Phe Arg Lys Gly Val Pro Asn Pro Ile Asp Leu Leu Glu Ser Thr 75 80 85 cta tat gag tcc tcg gtg gtg cct ggg ccc aag aaa gca ccc atg gac 399 Leu Tyr Glu Ser Ser Val Val Pro Gly Pro Lys Lys Ala Pro Met Asp 90 95 100 105 tca ctg ttt gac tac ggc acc tat cgt cac cac tcc agt gac aac aag 447 Ser Leu Phe Asp Tyr Gly Thr Tyr Arg His His Ser Ser Asp Asn Lys 110 115 120 agg tgg agg aag aag atc ata gag aag cag ccg cag agc ccc aaa gcc 495 Arg Trp Arg Lys Lys Ile Ile Glu Lys Gln Pro Gln Ser Pro Lys Ala 125 130 135 cct gcc cct cag ccg ccc ccc atc ctc aaa gtc ttc aac cgg cct atc 543 Pro Ala Pro Gln Pro Pro Pro Ile Leu Lys Val Phe Asn Arg Pro Ile 140 145 150 ctc ttt gac atc gtg tcc cgg ggc tcc act gct gac ctg gac ggg ctg 591 Leu Phe Asp Ile Val Ser Arg Gly Ser Thr Ala Asp Leu Asp Gly Leu 155 160 165 ctc cca ttc ttg ctg acc cac aag aaa cgc cta act gat gag gag ttt 639 Leu Pro Phe Leu Leu Thr His Lys Lys Arg Leu Thr Asp Glu Glu Phe 170 175 180 185 cga gag cca tct acg ggg aag acc tgc ctg ccc aag gcc ttg ctg aac 687 Arg Glu Pro Ser Thr Gly Lys Thr Cys Leu Pro Lys Ala Leu Leu Asn 190 195 200 ctg agc aat ggc cgc aac gac acc atc cct gtg ctg ctg gac atc gcg 735 Leu Ser Asn Gly Arg Asn Asp Thr Ile Pro Val Leu Leu Asp Ile Ala 205 210 215 gag cgc acc ggc aac atg cgg gag ttc att aac tcg ccc ttc cgt gac 783 Glu Arg Thr Gly Asn Met Arg Glu Phe Ile Asn Ser Pro Phe Arg Asp 220 225 230 atc tac tat cga ggt cag aca gcc ctg cac atc gcc att gag cgt cgc 831 Ile Tyr Tyr Arg Gly Gln Thr Ala Leu His Ile Ala Ile Glu Arg Arg 235 240 245 tgc aaa cac tac gtg gaa ctt ctc gtg gcc cag gga gct gat gtc cac 879 Cys Lys His Tyr Val Glu Leu Leu Val Ala Gln Gly Ala Asp Val His 250 255 260 265 gcc cag gcc cgt ggg cgc ttc ttc cag ccc aag gat gag ggg ggc tac 927 Ala Gln Ala Arg Gly Arg Phe Phe Gln Pro Lys Asp Glu Gly Gly Tyr 270 275 280 ttc tac ttt ggg gag ctg ccc ctg tcg ctg gct gcc tgc acc aac cag 975 Phe Tyr Phe Gly Glu Leu Pro Leu Ser Leu Ala Ala Cys Thr Asn Gln 285 290 295 ccc cac att gtc aac tac cta acg gag aac ccc cac aag aag gcg gac 1023 Pro His Ile Val Asn Tyr Leu Thr Glu Asn Pro His Lys Lys Ala Asp 300 305 310 atg cgg cgc cag gac tcg cga ggc aac aca gtg ctg cat gcg ctg gtg 1071 Met Arg Arg Gln Asp Ser Arg Gly Asn Thr Val Leu His Ala Leu Val 315 320 325 gcc att gct gac aac acc cgt gag aac acc aag ttt gtt acc aag atg 1119 Ala Ile Ala Asp Asn Thr Arg Glu Asn Thr Lys Phe Val Thr Lys Met 330 335 340 345 tac gac ctg ctg ctg ctc aag tgt gcc cgc ctc ttc ccc gac agc aac 1167 Tyr Asp Leu Leu Leu Leu Lys Cys Ala Arg Leu Phe Pro Asp Ser Asn 350 355 360 ctg gag gcc gtg ctc aac aac gac ggc ctc tcg ccc ctc atg atg gct 1215 Leu Glu Ala Val Leu Asn Asn Asp Gly Leu Ser Pro Leu Met Met Ala 365 370 375 gcc aag acg ggc aag att ggg atc ttt cag cac atc atc cgg cgg gag 1263 Ala Lys Thr Gly Lys Ile Gly Ile Phe Gln His Ile Ile Arg Arg Glu 380 385 390 gtg acg gat gag gac aca cgg cac ctg tcc cgc aag ttc aag gac tgg 1311 Val Thr Asp Glu Asp Thr Arg His Leu Ser Arg Lys Phe Lys Asp Trp 395 400 405 gcc tat ggg cca gtg tat tcc tcg ctt tat gac ctc tcc tcc ctg gac 1359 Ala Tyr Gly Pro Val Tyr Ser Ser Leu Tyr Asp Leu Ser Ser Leu Asp 410 415 420 425 acg tgt ggg gaa gag gcc tcc gtg ctg gag atc ctg gtg tac aac agc 1407 Thr Cys Gly Glu Glu Ala Ser Val Leu Glu Ile Leu Val Tyr Asn Ser 430 435 440 aag att gag aac cgc cac gag atg ctg gct gtg gag ccc atc aat gaa 1455 Lys Ile Glu Asn Arg His Glu Met Leu Ala Val Glu Pro Ile Asn Glu 445 450 455 ctg ctg cgg gac aag tgg cgc aag ttc ggg gcc gtc tcc ttc tac atc 1503 Leu Leu Arg Asp Lys Trp Arg Lys Phe Gly Ala Val Ser Phe Tyr Ile 460 465 470 aac gtg gtc tcc tac ctg tgt gcc atg gtc atc ttc act ctc acc gcc 1551 Asn Val Val Ser Tyr Leu Cys Ala Met Val Ile Phe Thr Leu Thr Ala 475 480 485 tac tac cag ccg ctg gag ggc aca ccg ccg tac cct tac cgc acc acg 1599 Tyr Tyr Gln Pro Leu Glu Gly Thr Pro Pro Tyr Pro Tyr Arg Thr Thr 490 495 500 505 gtg gac tac ctg cgg ctg gct ggc gag gtc att acg ctc ttc act ggg 1647 Val Asp Tyr Leu Arg Leu Ala Gly Glu Val Ile Thr Leu Phe Thr Gly 510 515 520 gtc ctg ttc ttc ttc acc aac atc aaa gac ttg ttc atg aag aaa tgc 1695 Val Leu Phe Phe Phe Thr Asn Ile Lys Asp Leu Phe Met Lys Lys Cys 525 530 535 cct gga gtg aat tct ctc ttc att gat ggc tcc ttc cag ctg ctc tac 1743 Pro Gly Val Asn Ser Leu Phe Ile Asp Gly Ser Phe Gln Leu Leu Tyr 540 545 550 ttc atc tac tct gtc ctg gtg atc gtc tca gca gcc ctc tac ctg gca 1791 Phe Ile Tyr Ser Val Leu Val Ile Val Ser Ala Ala Leu Tyr Leu Ala 555 560 565 ggg atc gag gcc tac ctg gcc gtg atg gtc ttt gcc ctg gtc ctg ggc 1839 Gly Ile Glu Ala Tyr Leu Ala Val Met Val Phe Ala Leu Val Leu Gly 570 575 580 585 tgg atg aat gcc ctt tac ttc acc cgt ggg ctg aag ctg acg ggg acc 1887 Trp Met Asn Ala Leu Tyr Phe Thr Arg Gly Leu Lys Leu Thr Gly Thr 590 595 600 tat agc atc atg atc cag aag att ctc ttc aag gac ctt ttc cga ttc 1935 Tyr Ser Ile Met Ile Gln Lys Ile Leu Phe Lys Asp Leu Phe Arg Phe 605 610 615 ctg ctc gtc tac ttg ctc ttc atg atc ggc tac gct tca 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cct ctg gac agc atg ggg aac ccc cgc tgc gat ggc cac cag 2655 Val Val Pro Leu Asp Ser Met Gly Asn Pro Arg Cys Asp Gly His Gln 845 850 855 cag ggt tac ccc cgc aag tgg agg act gat gac gcc ccg ctc tag 2700 Gln Gly Tyr Pro Arg Lys Trp Arg Thr Asp Asp Ala Pro Leu 860 865 870 ggactgcagc ccagccccag cttctctgcc cactcatttc tagtccagc 2749 <210> 2 <211> 871 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Met Ala Asp Ser Ser Glu Gly Pro Arg Ala Gly Pro Gly Glu Val Ala 1 5 10 15 Glu Leu Pro Gly Asp Glu Ser Gly Thr Pro Gly Gly Glu Ala Phe Pro 20 25 30 Leu Ser Ser Leu Ala Asn Leu Phe Glu Gly Glu Asp Gly Ser Leu Ser 35 40 45 Pro Ser Pro Ala Asp Ala Ser Arg Pro Ala Gly Pro Gly Asp Gly Arg 50 55 60 Pro Asn Leu Arg Met Lys Phe Gln Gly Ala Phe Arg Lys Gly Val Pro 65 70 75 80 Asn Pro Ile Asp Leu Leu Glu Ser Thr Leu Tyr Glu Ser Ser Val Val 85 90 95 Pro Gly Pro Lys Lys Ala Pro Met Asp Ser Leu Phe Asp Tyr Gly Thr 100 105 110 Tyr Arg His His Ser Ser Asp Asn Lys Arg Trp Arg Lys Lys Ile Ile 115 120 125 Glu Lys Gln Pro Gln Ser Pro Lys Ala Pro Ala Pro Gln Pro Pro Pro 130 135 140 Ile Leu Lys Val Phe Asn Arg Pro Ile Leu Phe Asp Ile Val Ser Arg 145 150 155 160 Gly Ser Thr Ala Asp Leu Asp Gly Leu Leu Pro Phe Leu Leu Thr His 165 170 175 Lys Lys Arg Leu Thr Asp Glu Glu Phe Arg Glu Pro Ser Thr Gly Lys 180 185 190 Thr Cys Leu Pro Lys Ala Leu Leu Asn Leu Ser Asn Gly Arg Asn Asp 195 200 205 Thr Ile Pro Val Leu Leu Asp Ile Ala Glu Arg Thr Gly Asn Met Arg 210 215 220 Glu Phe Ile Asn Ser Pro Phe Arg Asp Ile Tyr Tyr Arg Gly Gln Thr 225 230 235 240 Ala Leu His Ile Ala Ile Glu Arg Arg Cys Lys His Tyr Val Glu Leu 245 250 255 Leu Val Ala Gln Gly Ala Asp Val His Ala Gln Ala Arg Gly Arg Phe 260 265 270 Phe Gln Pro Lys Asp Glu Gly Gly Tyr Phe Tyr Phe Gly Glu Leu Pro 275 280 285 Leu Ser Leu Ala Ala Cys Thr Asn Gln Pro His Ile Val Asn Tyr Leu 290 295 300 Thr Glu Asn Pro His Lys Lys Ala Asp Met Arg Arg Gln Asp Ser Arg 305 310 315 320 Gly Asn Thr Val Leu His Ala Leu Val Ala Ile Ala Asp Asn Thr Arg 325 330 335 Glu Asn Thr Lys Phe Val Thr Lys Met Tyr Asp Leu Leu Leu Leu Lys 340 345 350 Cys Ala Arg Leu Phe Pro Asp Ser Asn Leu Glu Ala Val Leu Asn Asn 355 360 365 Asp Gly Leu Ser Pro Leu Met Met Ala Ala Lys Thr Gly Lys Ile Gly 370 375 380 Ile Phe Gln His Ile Ile Arg Arg Glu Val Thr Asp Glu Asp Thr Arg 385 390 395 400 His Leu Ser Arg Lys Phe Lys Asp Trp Ala Tyr Gly Pro Val Tyr Ser 405 410 415 Ser Leu Tyr Asp Leu Ser Ser Leu Asp Thr Cys Gly Glu Glu Ala Ser 420 425 430 Val Leu Glu Ile Leu Val Tyr Asn Ser Lys Ile Glu Asn Arg His Glu 435 440 445 Met Leu Ala Val Glu Pro Ile Asn Glu Leu Leu Arg Asp Lys Trp Arg 450 455 460 Lys Phe Gly Ala Val Ser Phe Tyr Ile Asn Val Val Ser Tyr Leu Cys 465 470 475 480 Ala Met Val Ile Phe Thr Leu Thr Ala Tyr Tyr Gln Pro Leu Glu Gly 485 490 495 Thr Pro Pro Tyr Pro Tyr Arg Thr Thr Val Asp Tyr Leu Arg Leu Ala 500 505 510 Gly Glu Val Ile Thr Leu Phe Thr Gly Val Leu Phe Phe Phe Thr Asn 515 520 525 Ile Lys Asp Leu Phe Met Lys Lys Cys Pro Gly Val Asn Ser Leu Phe 530 535 540 Ile Asp Gly Ser Phe Gln 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agg 1830 Asn Pro Arg Cys Asp Gly His Gln Gln Gly Tyr Pro Arg Lys Trp Arg 585 590 595 act gat gac gcc ccg ctc tag ggactgcagc ccagccccag cttctctgcc 1881 Thr Asp Asp Ala Pro Leu 600 cactcatttc tagtccagc 1900 <210> 4 <211> 602 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 4 Met Arg Glu Phe Ile Asn Ser Pro Phe Arg Asp Ile Tyr Tyr Arg Gly 1 5 10 15 Glu Leu Pro Leu Ser Leu Ala Ala Cys Thr Asn Gln Pro His Ile Val 20 25 30 Asn Tyr Leu Thr Glu Asn Pro His Lys Lys Ala Asp Met Arg Arg Gln 35 40 45 Asp Ser Arg Gly Asn Thr Val Leu His Ala Leu Val Ala Ile Ala Asp 50 55 60 Asn Thr Arg Glu Asn Thr Lys Phe Val Thr Lys Met Tyr Asp Leu Leu 65 70 75 80 Leu Leu Lys Cys Ala Arg Leu Phe Pro Asp Ser Asn Leu Glu Ala Val 85 90 95 Leu Asn Asn Asp Gly Leu Ser Pro Leu Met Met Ala Ala Lys Thr Gly 100 105 110 Lys Ile Gly Ile Phe Gln His Ile Ile Arg Arg Glu Val Thr Asp Glu 115 120 125 Asp Thr Arg His Leu Ser Arg Lys Phe Lys Asp Trp Ala Tyr Gly Pro 130 135 140 Val Tyr Ser Ser Leu Tyr Asp Leu Ser Ser Leu Asp Thr Cys Gly Glu 145 150 155 160 Glu Ala Ser Val Leu Glu Ile Leu Val Tyr Asn Ser Lys Ile Glu Asn 165 170 175 Arg His Glu Met Leu Ala Val Glu Pro Ile Asn Glu Leu Leu Arg Asp 180 185 190 Lys Trp Arg Lys Phe Gly Ala Val Ser Phe Tyr Ile Asn Val Val Ser 195 200 205 Tyr Leu Cys Ala Met Val Ile Phe Thr Leu Thr Ala Tyr Tyr Gln Pro 210 215 220 Leu Glu Gly Thr Pro Pro Tyr Pro Tyr Arg Thr Thr Val Asp Tyr Leu 225 230 235 240 Arg Leu Ala Gly Glu Val Ile Thr Leu Phe Thr Gly Val Leu Phe Phe 245 250 255 Phe Thr Asn Ile Lys Asp Leu Phe Met Lys Lys Cys Pro Gly Val Asn 260 265 270 Ser Leu Phe Ile Asp Gly Ser Phe Gln Leu Leu Tyr Phe Ile Tyr Ser 275 280 285 Val Leu Val Ile Val Ser Ala Ala Leu Tyr Leu Ala Gly Ile Glu Ala 290 295 300 Tyr Leu Ala Val Met Val Phe Ala Leu Val Leu Gly Trp Met Asn Ala 305 310 315 320 Leu Tyr Phe Thr Arg Gly Leu Lys Leu Thr Gly Thr Tyr Ser Ile Met 325 330 335 Ile Gln Lys Ile Leu Phe Lys Asp Leu Phe Arg Phe Leu Leu Val Tyr 340 345 350 Leu Leu Phe Met Ile Gly Tyr Ala Ser Ala Leu Val Ser Leu Leu Asn 355 360 365 Pro Cys Ala Asn Met Lys Val Cys Asn Glu Asp Gln Thr Asn Cys Thr 370 375 380 Val Pro Thr Tyr Pro Ser Cys Arg Asp Ser Glu Thr Phe Ser Thr Phe 385 390 395 400 Leu Leu Asp Leu Phe Lys Leu Thr Ile Gly Met Gly Asp Leu Glu Met 405 410 415 Leu Ser Ser Thr Lys Tyr Pro Val Val Phe Ile Ile Leu Leu Val Thr 420 425 430 Tyr Ile Ile Leu Thr Phe Val Leu Leu Leu Asn Met Leu Ile Ala Leu 435 440 445 Met Gly Glu Thr Val Gly Gln Val Ser Lys Glu Ser Lys His Ile Trp 450 455 460 Lys Leu Gln Trp Ala Thr Thr Ile Leu Asp Ile Glu Arg Ser Phe Pro 465 470 475 480 Val Phe Leu Arg Lys Ala Phe Arg Ser Gly Glu Met Val Thr Val Gly 485 490 495 Lys Ser Ser Asp Gly Thr Pro Asp Arg Arg Trp Cys Phe Arg Val Asp 500 505 510 Glu Val Asn Trp Ser His Trp Asn Gln Asn Leu Gly Ile Ile Asn Glu 515 520 525 Asp Pro Gly Lys Asn Glu Thr Tyr Gln Tyr Tyr Gly Phe Ser His Thr 530 535 540 Val Gly Arg Leu Arg Arg Asp Arg Trp Ser Ser Val Val Pro Arg Val 545 550 555 560 Val Glu Leu Asn Lys Asn Ser Asn Pro Asp Glu Val Val Val Pro Leu 565 570 575 Asp Ser Met Gly Asn Pro Arg Cys Asp Gly His Gln Gln Gly Tyr Pro 580 585 590 Arg Lys Trp Arg Thr Asp Asp Ala Pro Leu 595 600 <210> 5 <211> 28 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 5 gctgtcgggg aagaggcggg cacacttg 28 <210> 6 <211> 28 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 6 gcagcagttc attgatgggc tccacagc 28 <210> 7 <211> 20 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 7 atctgcgcat gaagttccag 20 <210> 8 <211> 27 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 8 gacatcgcgg agcgcaccgg caacatg 27 <210> 9 <211> 28 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 9 gctggactag aaatgagtgg gcagagaa 28
【図面の簡単な説明】
【図１】発現ベクターを含まないＣＨＯ−Ｋ１細胞［モ
ック（ｍｏｃｋ）トランスフェクション］において、細
胞外浸透度の減少に対する応答におけるＣａ2+増加を示
すグラフである。
【図２】ｈＶＲＬ−２をトランスフェクションしたＣＨ
Ｏ−Ｋ１細胞（ｈＶＲＬ−２ａトランスフェクション細
胞／非トランスフェクション細胞）において、細胞外浸
透度の減少に対する応答におけるＣａ2+増加を示すグラ
フである。
【図３】発現ベクターを含まないＨＥＫ２９３細胞［モ
ック（ｍｏｃｋ）トランスフェクション］において、細
胞外浸透度の減少に対する応答におけるＣａ2+増加を示
すグラフである。
【図４】ｈＶＲＬ−２をトランスフェクションしたＨＥ
Ｋ２９３細胞（ｈＶＲＬ−２ａトランスフェクション細
胞／非トランスフェクション細胞）において、細胞外浸
透度の減少に対する応答におけるＣａ2+増加を示すグラ
フである。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ Ａ６１Ｐ 9/02 Ａ６１Ｐ 9/12 9/12 11/06 11/06 13/02 13/02 15/00 15/00 19/02 19/02 21/00 21/00 25/00 25/00 25/02 １０１ 25/02 １０１ 25/04 25/04 29/00 29/00 １０１ １０１ 35/00 35/00 37/08 37/08 41/00 41/00 43/00 １１１ 43/00 １１１ Ｃ０７Ｋ 14/705 Ｃ０７Ｋ 14/705 16/28 16/28 Ｃ１２Ｎ 1/15 Ｃ１２Ｎ 1/15 1/19 1/19 1/21 1/21 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ 5/10 Ｇ０１Ｎ 33/15 Ｚ Ｃ１２Ｐ 21/02 33/50 Ｚ Ｇ０１Ｎ 33/15 33/53 Ｄ 33/50 Ｍ 33/53 33/566 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ 33/566 5/00 Ａ (56)参考文献 特表2003−513669（ＪＰ，Ａ) 特表2002−531085（ＪＰ，Ａ) 国際公開99／037675（ＷＯ，Ａ１) (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) C12N 15/00 - 15/90 A61K 31/00 - 48/00 A61P 1/00 - 43/00 C07K 14/00 - 16/46 C12N 1/00 - 7/08 C12P 21/00 - 21/08 ＪＩＣＳＴファイル（ＪＯＩＳ) ＢＩＯＳＩＳ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＷＰＩＤ Ｓ（ＳＴＮ) ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ／ＰＩＲ／ＧｅｎｅＳ ｅｑ ＧｅｎＢａｎｋ／ＥＭＢＬ／ＤＤＢＪ／Ｇ ｅｎｅＳｅｑ ＥＵＲＯＰＡＴ（ＱＵＥＳＴＥＬ)

Claims (15)

    (57)【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 配列番号４で表されるアミノ酸配列から
    なるポリペプチド。
  2. 【請求項２】 以下の（ａ）又は（ｂ）のポリペプチ
    ド。 （ａ）配列番号４で表されるアミノ酸配列からなるポリ
    ペプチド （ｂ）配列番号４で表されるアミノ酸配列において１若
    しくは数個のアミノ酸が欠質、置換、若しくは付加され
    たアミノ酸配列からなり、ＶＲＬ−２活性を有するポリ
    ペプチド。
  3. 【請求項３】 配列番号３で表される塩基配列における
    第４３番〜第１８５１番の塩基配列からなるポリヌクレ
    オチド。
  4. 【請求項４】 以下の（ｃ）又は（ｄ）のポリヌクレオ
    チド。 （ｃ）配列番号３で表される塩基配列からなるポリヌク
    レオチド （ｄ）配列番号３で表される塩基配列と相補的な塩基配
    列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件
    下でハイブリダイズし、かつ、ＶＲＬ−２活性を有する
    ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド。
  5. 【請求項５】 請求項２に記載の（ａ）又は（ｂ）のポ
    リペプチドをコードするポリヌクレオチド。
  6. 【請求項６】 請求項３に記載のポリヌクレオチドにお
    ける連続する１５以上のヌクレオチドを含むプローブ又
    はプライマーであって、ＶＲＬ−２活性を有するポリペ
    プチドをコードするポリペプチドについてプローブ又は
    プライマーとして機能するプローブ又はプライマー。
  7. 【請求項７】 請求項３乃至請求項５のいずれか１項に
    記載のポリヌクレオチドにおける連続する１５以上のヌ
    クレオチドを含むプローブ又はプライマーであって、Ｖ
    ＲＬ−２活性を有するポリペプチドをコードするポリペ
    プチドについてプローブ又はプライマーとして機能する
    プローブ又はプライマー。
  8. 【請求項８】 請求項３に記載のポリヌクレオチドにお
    ける連続する１５以上のヌクレオチドからなるプローブ
    又はプライマー。
  9. 【請求項９】 請求項３に記載のポリヌクレオチドを含
    む発現ベクターであって、宿主細胞においてＶＲＬ−２
    活性を有するポリペプチドを発現させるための発現ベク
    ター。
  10. 【請求項１０】 請求項３乃至請求項５のいずれか１項
    に記載のポリヌクレオチドを含む発現ベクターであっ
    て、宿主細胞におけるＶＲＬ−２活性を有するポリペプ
    チドの発現のための発現ベクター。
  11. 【請求項１１】 請求項９又は請求項１０に記載の発現
    ベクターを含む宿主細胞。
  12. 【請求項１２】 請求項１又は請求項２に記載のポリペ
    プチドを製造する方法であって、請求項９又は請求項１
    ０に記載の発現ベクターを用いることを特徴とする製造
    方法。
  13. 【請求項１３】 請求項１又は請求項２に記載のポリペ
    プチドに免疫特異的な抗体。
  14. 【請求項１４】 請求項３乃至請求項５のいずれか１項
    に記載のポリヌクレオチド又は請求項１３に記載の抗体
    を含む、ＶＲＬ−２タンパク質の生物学的機能に関連す
    る疾病又は前記疾病に対する感受性を診断するための診
    断キット。
  15. 【請求項１５】 ＶＲＬ−２活性を調節する調節物質を
    同定するためのスクリーニング方法であって、 試験化合物又は試料と請求項１又は請求項２に記載のポ
    リペプチドとを接触させるステップ、及び、 前記試験化合物又は前記試料が当該ポリペプチドに与え
    る影響を検出するステップとを含むことを特徴とするス
    クリーニング方法。
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Families Citing this family (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1999009140A1 (en) 1997-08-20 1999-02-25 The Regents Of The University Of California Nucleic acid sequences encoding capsaicin receptor and capsaicin receptor-related polypeptides and uses thereof
GB9827016D0 (en) 1998-12-08 1999-02-03 Merck Sharp & Dohme Receptor protein
US6455278B1 (en) * 2000-02-08 2002-09-24 Ortho-Mcneil Pharmaceutical, Inc. DNA encoding human vanilloid receptor VR3
WO2004045638A1 (en) * 2002-11-18 2004-06-03 Merck Sharp & Dohme Limited Vanilloid receptor-2 ligands for treating anxiety or depression
US20050266435A1 (en) * 2004-03-09 2005-12-01 David Hackos VR1 receptors and uses thereof
JP2008512475A (ja) * 2004-09-07 2008-04-24 スミスクライン・ビーチャム・コーポレイション アゴニストによるｔｒｐｖ４チャネル受容体の活性化方法
TW200706743A (en) 2005-07-29 2007-02-16 Nichiha Co Ltd Stain-proofing agent and building board using the same
US7897358B2 (en) 2007-03-07 2011-03-01 Janssen Pharmaceutica N.V. Canine transient receptor potential V2 (cTRPV2) and methods of screening for TRPV2 channel modulators
EP2030631A1 (en) * 2007-08-31 2009-03-04 Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Means and methods for treating peripheral and cardiovascular diseases via modulation of arteriogenesis
BR112020016176A2 (pt) 2018-02-09 2022-02-22 Immatics Us Inc Métodos de transdução de uma célula t, célula t transduzida geneticamente, composição farmacêutica, métodos de preparação de uma população de células t e uso da célula t

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB9713484D0 (en) * 1997-06-27 1997-09-03 Smithkline Beecham Plc Neuroprotective vanilloid compounds
DE69910538T2 (de) * 1998-01-22 2004-06-24 The Regents Of The University Of California, Oakland Nukleinsäuresequenzen, welche für capsaicin-rezeptoren kodieren
GB9826359D0 (en) * 1998-12-01 1999-01-27 Glaxo Group Ltd Novel receptors
WO2000050387A1 (en) * 1999-02-22 2000-08-31 Pacific Corporation Vanilloid analogues containing resiniferatoxin pharmacophores as potent vanilloid receptor agonists and analgesics, compositions and uses thereof
EP1144628A3 (en) * 1999-11-12 2002-02-27 Abbott Laboratories Human vanilloid receptor gene
US6455278B1 (en) * 2000-02-08 2002-09-24 Ortho-Mcneil Pharmaceutical, Inc. DNA encoding human vanilloid receptor VR3

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