DE60013751T2

DE60013751T2 - Optisch aktive 3-((2-piperazinyl-phenyl)methyl)-1-(4-(trifluoromethyl)-phenyl)-2-pyrrolidinone als selektive 5-HT1D Rezeptor Antagonisten

Info

Publication number: DE60013751T2
Application number: DE60013751T
Authority: DE
Inventors: Mavis Diane Groton Adam; Stephane Groton Caron; Jr. Harry Ralph Groton Howard
Original assignee: Pfizer Products Inc
Current assignee: Pfizer Products Inc
Priority date: 1999-12-29
Filing date: 2000-12-13
Publication date: 2005-09-29
Anticipated expiration: 2020-12-14
Also published as: EP1113015B1; US20010039280A1; PT1113015E; EP1113015A4; DK1113015T3; JP3495708B2; CA2329576A1; ATE276249T1; DE60013751D1; US20030083337A1; ES2225031T3; EP1113015A1; JP2001187781A

Description

Die vorliegende Erfindung bezieht sich auf optisch aktive 3-[2-(piperazinylphenyl)methyl]-1-[4-(trifluoromethyl)phenyl]-2-pyrrolidone und deren pharmazeutisch akzeptable Salze, auf die Verfahren ihrer Herstellung, auf deren isotopenmarkierten Analogen, auf die sie umfassenden pharmazeutischen Zubereitungen und auf ihre medizinische Anwendung. Insbesondere ist die Verbindung (-)-3-[[2-(4-methyl-1-piperazinyl)phenyl]methyl]-1-[4-(trifluoromethyl)phenyl]-2-pyrrolidon ein selektiver Antagonist des 5-HT_1D Rezeptors. Die Verbindungen der Erfindung sind nützlich bei der Behandlung von Depression, Zwangsneurose sowie Erkrankungen, Störungen und Zustände für die ein 5-HT_1D rezeptorselektiver Antagonist therapeutisch angezeigt ist.
Die am 26. Juni 1991 veröffentlichte europäische Patentschrift 434,561 bezieht sich auf die 7-alkyl-, alkoxy- und hydroxy-substituierten Varianten von: Substituent-1-(4-Substituent-1-piperazinyl)naphthalinen. Die Verbindungen werden als 5-HT₁ Agonisten und Antagonisten bezeichnet, die für die Behandlung von Migräne, Depression, Angstzustände, Schizophrenie, Stress und Schmerz verwendbar sind. Die am 23.November 1989 veröffentlichte europäische Patentschrift 343,050 bezieht sich auf 7-unsubstituierte-, halogenierte- und methoxy-substituierten Varianten von: Substituent-1-(4-Substituent-1-piperazinyl)naphthalinen als nützliche 5-HT_1ALigand-Therapeutika.
Glennon et al. In „5-HT_1D Serotonin Receptors", Drug Dev.Res., 22: 25–36 (1991) bezieht sich auf 7-methoxy-1-(11-piperazinyl)-naphthalin als einen nützlichen 5-HT₁ Liganden. Ein anderer Glennon-Artikel „Serotonin Receptors: Clinical Implications", Neuroscience and Behavioral Reviews, 14: 35–47 (1990) bezieht sich auf die mit dem Serotoninrezeptor verbundenen pharmazeutischen Wirkungen einschließlich Appetitzügelung, Thermoregulation, kardidovaskuläre/blutdrucksenkende Effekte, Schlaf, Psychose, Angst, Depression, Übelkeit, Erbrechen, Alzheimerkrankheit, Parkinsonkrankheit und Chorea Huntington.
Liganden mit hoher Affinität für 5-HT₁ Rezeptoren sind dafür wohlbekannt, dass sie einen therapeutischen Wert für die Behandlung von durch gestörte Serotoningleichgewichte verursachten Zuständen beim Menschen haben. Die am 30. November 1995 veröffentlichte Welt-Patentschrift WO 95/31988 bezieht sich auf die Anwendung des 5-HT_1D Antagonisten in Kombination mit einem 5-HT_1A Antagonisten zur Behandlung von ZNS Erkrankungen, Störungen oder Zuständen wie Depression, generellen Angststörungen, Platzangst, soziale Phobien, Zwangspsychose, posttraumatisches Stresssyndrom, Gedächtnisstörungen, Magersucht, Bulimie, Parkinsonkrankheit, tardive Dyskinesie, endokrine Störungen wie Hyperprolactinaemie, Vasospasmen (speziell in der zerebralen Vasculatur) und Bluthochdruck, Störungen des Magen-Darm-Traktes, in Verbindung mit Veränderungen in der Beweglichkeit und der Sekretion sowie sexuelle Dysfunktion.
Die am 7. Oktober 1997 veröffentlichte WO 97/36867 zitiert Benzyl(iden)laktamderivate und ihre Anwendung als selektive (ant)Agonisten von 5-HT_1A und/oder 5-HT_1D Rezeptoren und zitiert speziell racemisches 3-[[2-(4-methyl-1-piperazinyl)phenyl]methyl]-1-[4-(trifluoromethyl)phenyl]-2-pyrrolidon. Nichtsdestoweniger trotz weisen die optisch aktiven Verbindungen der vorliegenden Erfindung ein sehr hohes Maß an Wirksamkeit als Antagonisten des 5-HT_1D Rezeptors auf.
Zusammenfassung der Erfindung
Die vorliegende Erfindung bezieht sich auf eine Verbindung der Formel II:
worin R eine CH₃-Gruppe ist und pharmazeutisch akzeptable Salze hiervon. In der Verbindung von Formel II ist die absolute Stereochemie an 3-Position (S).
Zusätzlich bezieht sich die vorliegende Erfindung auf Mischungen der Verbindung von Formel II, zum Beispiel (-)-3(S)-[[2-(4-methyl-1-piperazinyl)phenyl]methyl]-1-[4-(trifluoromethyl)phenyl]-2-pyrrolidon mit dessen (+)-(R) optischen Antipoden, worin das Verhältnis von (-)-(S)- zu (+)-(R)-Enantiomeren im Überschuß von 2:1 vorliegt. Mehr vorzuziehen ist eine Mischung worin das Verhältnis von (-)-(S)- zu (+)-(R)-Enantiomeren im Überschuß von 5:1 vorliegt. Am meisten vorzuziehen ist eine Mischung worin das Verhältnis von (-)-(S)- zu (+)-(R)-Enantiomeren 99:1 oder größer ist.
Ferner bezieht sich die vorliegende Erfindung auf ein Verfahren für die Herstellung einer Verbindung der Formel II, folgende Schritte umfassend:

(i) Lösen einer racemischen Verbindung der Formel I:
worin R eine CH₃-Gruppe ist, in einem geeigneten Lösungsmittel in Gegenwart von (+)-di-p-toluoyl-D-Weinsäure;
(ii) Aufsammeln des festen Niederschlages umfassend das Salz von Formel III:
worin R eine CH₃-Gruppe ist, und
(iii) Behandlung besagten Niederschlages mit einer Base.

Eine andere bevorzugte Methode der Erfindung besteht darin, dass das Lösungsmittel in Schritt (i), 2-Butanon, Aceton, 3-Pentanon, Methanol, Ethanol, Isopropanol und Ethylacetat ist, wobei 2-Butanon am meisten zu bevorzugen ist. Eine andere bevorzugte Methode besteht darin, dass die Base in Schritt (iii) eine in wässriger Lösung vorliegende anorganische Base ist, die aus einer Gruppe ausgewählt wird, die aus Natriumhydroxid, Natriumcarbonat, Natriumbikarbonat, Kaliumhydroxid, Kaliumcarbonat, Kaliumbikarbonat, Lithiumhydroxid und Ammoniumhydroxid besteht. Ein Fachmann kennt geeignete Basen, um diesen speziellen Schritt durchzuführen. Besonders bevorzugt sind hier Natrium- und Kaliumhydroxid. Die vorliegende Erfindung bezieht sich auch auf die sauren Salzadditionen der Verbindungen von Formel III, die in der oben beschriebenen Methode als Zwischenverbindungen auftreten.
Die vorliegende Erfindung bezieht sich auch auf pharmazeutisch akzeptable saure Salzadditionen des (-)-Enantiomeren einer Verbindung der Formel I. Die Säuren, die zur pharmazeutisch akzeptablen sauren Salzaddition vorgenannter basischer Verbindungen verwendet werden, sind solche, die nicht-toxische sauren Salzadditionen bilden, das heißt Salze, die pharmakologische akzeptable Anionen enthalten wie die Hydrochlorid-, Hydrobromid-, Hydrojodid-, Nitrat-, Sulfat-, Bisulfat-, Phosphat-, saures Phosphat-, Acetat-, Laktat-, Citrat-, Tartrat-, Bitartrat-, Succinat-, Benzoat-, Methansulfonat-, Ethansulfonat-, Benzolsufonat, p-Toluolsulfonat- und Pamoat- (d.h. 1,1-Methylen-bis-(2-hydroxy-3-naphthoat) Salze.
Diese Erfindung richtet sich auch auf isotopenmarkierte Verbindungen, identisch zu jenen in Formel II zitierten Verbindungen sowie auf pharmazeutisch akzeptable Salze hiervon, jedoch auf die Tatsache, dass ein oder mehrere Atome durch eine Atom mit einer anderen Atommasse oder Atommassenzahl ersetzt sind, die nicht üblicherweise in der Natur vorkommen. Beispiele von Isotopen, die in Verbindungen dieser Erfindung eingebaut werden können, schließen Isotope des Wasserstoffes, Kohlenstoffes, Stickstoffes, Sauerstoffes, Phosphors, Fluors und Chlors ein, wie entsprechend ²H, ³H, ¹¹C, ¹³C, ¹⁴C, ¹⁵N, ¹⁸O, ¹⁷O und ¹⁸F. Verbindungen der vorliegenden Erfindung, Prodrugs hiervon und pharmazeutisch akzeptable Salze besagter Verbindungen oder besagter Prodrugs, die die vorangenannten Isotope oder die Isotope anderer Elemente enthalten, fallen in den Geltungsbereich dieser Erfindung.
Gewisse isotopenmarkierte Verbindungen der vorliegenden Erfindung, zum Beispiel jene zu denen die radioaktiven Isotope wie ³H, ¹¹C und ¹⁸F gehören, sind nützlich, zum Beispiel in Medikamenten und/oder der Bestimmung deren Verteilung in Gewebeproben, insbesondere als Diagnostikum zur Identifizierung und Lokalisierung von Serotoninrezeptoren des 5-HT_1DRezeptors. Tritiummarkierte (d.h. ³H), Kohlenstoff-11 (d.h. ¹¹C) und ¹⁸F Isotope werden wegen ihrer guten Herstellbarkeit und Detektierbarkeit besonders bevorzugt. In dieser Hinsicht können solche Verbindungen für die Bestimmung der Dichte besagter Rezeptoren in verschiedenen Regionen des zentralen Nervensystems hilfreich sein und ebenso bei der Bestimmung des prozentualen Gehaltes der Rezeptorbelegung, die bei einer gegebenen Konzentration der Verbindungen erreicht wurden. Solche Informationen sind bei der Festlegung der Dosis oder des Dosisbereiches dieser Verbindungen hilfreich. Des Weiteren können diese isotopenmarkierte Verbindungen in dieser Hinsicht zur Charakterisierung vormals nicht diagnostizierter Krankheiten verwendet werden.
Ferner kann die Substitution mit schwereren Isotopen wie Deuterium, d.h. ²H, gewisse therapeutische Vorteile leisten, die sich aus der größeren Stabilität des Metaboliten ableitet, zum Beispiel in der in-vivo Halbwertszeit, oder in niedrigeren erforderlichen Dosen und werden daher folglich unter bestimmten Umständen bevorzugt. Isotopenmarkierte Verbindungen der Formel II dieser Erfindung und Prodrugs hiervon können im allgemeinen durch die hier dargestellten Verfahren hergestellt werden und zwar durch Substitution einer nicht isotopenmarkierten Verbindung gegen eine leicht verfügbare isotopenmarkierte Verbindung.
Eine besonders bevorzugte isotopenmarkierte Verbindung der vorliegenden Erfindung ist die Verbindung der Formel II:
worin R eine C³H₃-Gruppe ist. Eine andere bevorzugte isotopenmarkierte Verbindung der Erfindung ist ein solche, in welcher zumindest eines der Fluoratome ein ¹⁸F ist.
Die vorliegende Erfindung umfasst außerdem eine Methode zur Bestimmung der Verteilung der Verbindung der Formel II in einer Gewebeprobe umfassend den Schritt der Bebrütung einer Verbindung der Formel II worin ein oder mehrere Wasserstoffatome ³H oder ein oder mehrere Fluoratome ¹⁸F oder ein oder mehrere Kohlenstoffatome ¹¹C oder jede Kombination hiervon sind.
Die vorliegende Erfindung bezieht sich auch auf pharmazeutische Mischungen umfassend eine Verbindung der Formel II oder eines pharmazeutisch akzeptablen Salzes hiervon. Die vorliegende Erfindung bezieht sich auch auf pharmazeutische Mischungen umfassend eine Verbindung der Formel II oder eines pharmazeutisch akzeptablen Salzes hiervon und eines pharmazeutisch akzeptablen Trägerstoffes.
Die vorliegende Erfindung bezieht sich auf eine Verbindung der Formel II oder eines pharmazeutisch akzeptablen Salzes oder hydratisierten Salzes hiervon, zum Gebrauch als Arzneimittel, vorzugsweise, der Anwendung besagter Verbindung in der Herstellung eines Arzneimittels für die Behandlung einer Erkrankung ausgewählt aus der Gruppe, die aus Depression, Zwangspsychose und einer Erkrankung, Störung oder Zustandes des zentralen Nervensystems besteht.
Das am meisten zu bevorzugende Verfahren der vorliegenden Erfindung bezieht sich auf die Anwendung einer Verbindung der Formel II oder eines pharmazeutisch akzeptablen Salzes hiervon bei der Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung einer Erkrankung Störung oder Zustandes ausgewählt aus Depression, generellen Angststörungen, Phobien (Platzangst, soziale Phobien, simple Phobien), posttraumatisches Stresssyndrom, Verhaltensstörungen, vorzeitige Ejakulation, Essstörungen (Magersucht, Bulimie), Fettsucht, Chemikalienabhängigkeit (z.B. Abhängigkeit von Alkohol, Kokain, Heroin, Phenobarbital, Nikotin und Benzodiazepinen), Alzheimerkrankheit, Zwangspsychose, Panikattacken, Gedächtnisstörungen (z.B. Demenz, Amnesie und altersbedingte Minderungen), Parkinsonkrankheit (z.B. Demenz bei Parkinsonkrankheit, neuroleptisch induzierte Parkinsonkrankheit und tardive Dyskinesie) und Störungen des Magen-Darm-Traktes, in Verbindung mit Veränderungen in der Beweglichkeit und der Sekretion beim Säugetier.
Die vorliegende Erfindung bezieht sich auf die Anwendung einer Verbindung der Formel II oder eines pharmazeutisch akzeptablen Salzes hiervon bei der Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung einer Erkrankung Störung oder Zustandes, welche durch Steigerung der serotoninogenen Neurotransmission beim Säugetier, vorzugsweise beim Menschen behandelt werden können.
Die vorliegende Erfindung bezieht sich zusätzlich auf eine pharmazeutische Mischung zur Behandlung einer Erkrankung, einer Funktionsstörung oder eines Zustandes zur Verbesserung der serotoninogenen Erregungsübertragung zwischen den Nervenzellen bei Säugern, vorzugsweise beim Menschen, umfassend:

a) einen pharmazeutisch sinnvollen Träger
b) eine Verbindung von Formel II oder ein pharmazeutisch akzeptables Salz hiervon und
c) ein 5-HT Wiederaufnahmehemmer, vorzugsweise Sertralin oder ein pharmazeutisch akzeptables Salz hiervon, wobei der Anteil an Wirkstoffen (d.h. die Verbindung der Formel II und der 5-HT Wiederaufnahmehemmer) dergestalt ist, dass die Kombination hiervon bei der Behandlung einer Erkrankung Störung oder Zustandes wirksam ist.

Die vorliegende Erfindung bezieht sich auch auf die Anwendung einer Verbindung der Formel II, wie oben definiert, oder auf ein pharmazeutisch akzeptablen Salzes hiervon und einen 5-HT Wiederaufnahmehemmer, vorzugsweise Sertralin oder auf ein pharmazeutisch akzeptablen Salzes hiervon, bei der Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung einer Erkrankung Störung oder Zustandes zur Verbesserung der serotoninogenen Erregungsübertragung zwischen den Nervenzellen bei Säugern, vorzugsweise beim Menschen, wobei die Anteile der wirksamen Bestandteile (d.h., das (-)-Enantiomer der Verbindung von Formel I und der 5-HT Wiederaufnahmehemmer) dergestalt sind, dass die Kombination hiervon bei der Behandlung einer Erkrankung Störung oder Zustandes wirksam ist.
Die vorliegende Erfindung bezieht sich auch auf die Anwendung eines 5-HT_1A Antagonisten oder ein pharmazeutisch akzeptables Salz hiervon und einer Verbindung der Formel II, wie oben definiert, oder einem pharmazeutische akzeptablen Salz hiervon bei der Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung einer Erkrankung Störung oder Zustandes zur Verbesserung der serotoninogenen Erregungsübertragung zwischen den Nervenzellen bei Säugern, vorzugsweise beim Menschen, wobei die Anteile der wirksamen Bestandteile (d.h. der 5-HT_1A Antagonist und die Verbindung von Formel II) dergestalt sind, dass die Kombination hiervon bei der Behandlung einer Erkrankung Störung oder Zustandes wirksam ist.
Der Ausdruck „pharmazeutisch akzeptables Salz", der hier in Gebrauch ist, verweist auf ein pharmazeutisch akzeptables saures Additionssalz oder auf ein Hydrat hiervon.
Der Ausdruck „Behandlung" verweist auf und umschließt die Umkehr, Linderung, Hemmung des Verlaufes oder Verhinderung einer Erkrankung, Störung oder Zustandes oder eines oder mehrerer Symptome hiervon; und „Behandlung" und „therapeutisch" verweisen auf die Handlung, wie oben definiert.
Der Ausdruck „verbesserte Erregungsübertragung zwischen den Nervenzellen", wie hier benutzt, verweist auf die Steigerung oder Verbesserung des neuronalen Prozesses, wobei nach Anregung einer präsynaptischen Zelle Serotonin freigesetzt wird und durch Treffen der Synapse die postsynaptische Zelle stimuliert oder inhibiert.
Der Ausdruck „chemische Abhängigkeit", wie hier benutzt, bedeutet ein heftiges Verlangen oder Wunsch oder Sucht nach einer Droge. Solcherlei Drogen werden im Allgemeinen dem betroffenen Individuum in Form irgendeines der mannigfaltigen Darreichungsformen einschließlich der oralen, parenteralen, nasalen Gabe oder durch Inhalation verabreicht. Beispiele chemischer Abhängigkeiten, die durch die Verfahren der vorliegenden Erfindung behandelbar sind, sind Abhängigkeiten von Alkohol, Nikotin, Kokain, Heroin, Phenobarbital und Benzodiazepinen (z.B. Valium^TM). „Behandlung einer chemischen Abhängigkeit", wie hier benutzt, bedeutet eine solche Abhängigkeit reduzieren oder lindern.
Sertralin, (1S)-cis-4-(3,4-dichlorphenyl)-1,2,3,4-tetrahydro-N-methyl-1-naphthalinamin, wie hier benutzt, besitzt die chemische Formel C₁₇H₁₇NCl₂ und die Strukturformel IV:
Die Synthese von Sertralin ist in United States Patent 4,536,518 beschrieben. Sertralin ist verwendbar als Antidepressivum und als Appetitzügler ebenso wie in der Behandlung chemischer Abhängigkeiten, Angstzuständen, Zwangspsychose, Depression, Phobien, Panikattacken, posttraumatisches Syndrom, vorzeitige Ejakulation.
Beschreibung der Erfindung
Die Verbindungen der Erfindung können im Einklang mit den unten angeführten Reaktionsschemata und Erörterungen hergestellt werden. Falls nicht anders angezeigt, gilt für den Substituenten R die oben angeführte Definition. Die (-)-Enantiomeren der Verbindungen der Formel I (d.h. die Verbindungen der Formel II) haben (S)-Stereochemie in 3-Position des Pyrrolidinringes und können durch Enantiomerentrennung in der unten beschriebenen Weise hergestellt werden.
Das Racemat von Formel I, worin R eine CH₃-Gruppe ist, kann in Übereinstimmung mit dem Ablauf von Schema 1 hergestellt werden.
Schema 1
Im ersten Schritt von Schema 1 wird eine Verbindung der Formel VII mittels einer Aldolkondensation hergestellt, umfassend eine Reaktion eines Benzaldehyds der Formel V mit einer Verbindung der Formel VI, unter jeden Bedingungen, die eine Aldolkondensation begünstigen. Diese spezielle Kondensationsreaktion kann zum Beispiel unter Verwendung einer jeder aus einer Vielzahl von Basen durchgeführt werden, die Na₂CO₃, K₂CO₃, NaH, Natriumbis(trimethylsilyl)amid, Kaliumbis(trimethylsilyl)amid, Lithiumbis(trimethylsilyl)amid, Pyrrolidin oder Piperidin, vorzugsweise NaH umfassen, jedoch nicht auf diese beschränkt sind sowie unter Verwendung einer Vielzahl von Lösungsmitteln einschließlich, jedoch nicht hierauf beschränkt: Dimethylsulfoxid (DMSO), N,N-Dimethylformamid (DMF), Tetrahydrofuran (THF), Methanol oder Ethanol, vorzugsweise DMF. Die Kondensationsreaktion kann in einem Temperaturbereich von etwa –25°C bis ungefähr 80°C durchgeführt werden, vorzugsweise von 20°C bis 45°C.
Das Ausgangsmaterial von Formel V, das im ersten Schritt dieses Verfahrens benutzt wird, kann entsprechend den Methoden von W. Nijhuis et al., Synthesis, pp. 641–645 (1987) oder J. Watthey et al., Journal of Medicinal Chemistry, 26, 1116–1122 (1983) hergestellt werden. Das Ausgangsmaterial von Formel VI ist kommerziell erhältlich oder kann entsprechend den Methoden von W.C. Shakespeare, Tetrahedron Letters, 1999, 40, pp. 2035– 2038 oder entsprechend jenen von T. Yamamoto und Y. Kurata, Chemistry and Industry, 1982, pp. 737–738 hergestellt werden.
Im Verlauf der Reaktion der Verbindungen der Formeln V und VI zu VII wird eine Zwischenverbindung der Formel IX gebildet und kann mittels einer oder mehrer analytischer Techniken einschließlich Dünnschichtchromatographie (DC) und Massenspektrometrie (MS) identifiziert werden:
In einigen Fällen ist es wünschenswert, die Zwischenverbindung der Formel IX zu isolieren. Dieser intermediäre Alkohol der Formel IX kann dann Bedingungen unterworfen werden, unter denen sich ein Molekül Wasser abspaltet, wobei sich eine Verbindung der Formel VII bildet. Die Dehydratation einer Verbindung der Formel IX kann zum Beispiel durch Lösen der Verbindung der Formel IX in einem geeigneten inerten Lösungsmittel, wie Benzol, Xylol, etc. und Erhitzen der Lösung auf Rückflusstemperatur in Gegenwart katalytischer Mengen Benzol- oder Toluolsulfonsäure sowie unter Berücksichtigung des physikalischen oder chemischen Entfernens des entstandenen Wassers durchgeführt werden. Solcherlei Wasserentfernungstechniken können zum Beispiel den Einsatz von Molekularsieben oder eine Dean-Stark Falle einschließen, um das als Wasser-Lösungsmittelgemisch azeotrop angefallene Wasser zu isolieren. Eine ausführliche Beschreibung des Reaktionsweges der Aldolkondensation findet sich bei Herbert O. House, Modern Synthetic Reactions, 2nd Edition, pp. 629–682 (W.A. Benjamin, Menlo Park, CA, 1972).
Die Überführung der Verbindung der Formel VII in die Verbindung der Formel VIII beinhaltet die Reduktion der α-Benzyliden-Kohlenstoff-Kohlenstoff-Doppelbindung, die vermittels einer von mehreren dem Fachmann bekannten Methoden ausgeführt werden kann.
Zum Beispiel kann die Reduktion der Kohlenstoff-Kohlenstoff-Doppelbindung von VII mittels Hydrierungsreaktion bewirkt werden, wobei Wasserstoffgas (H2) in Gegenwart von Katalysatoren benutzt wird, wie zum Beispiel PD/C, PdBa₂SO₄, Pt/C, Tris(triphenylphosphin)rhodiumchlorid (Wilkinson-Katalysator), in Lösungsmittelen wie zum Beispiel, Methanol, Ethanol, THF, Dioxan oder Ethylacetat bei Drucken von 1–5 Atmosphären und bei Temperaturen von etwa 10°C bis 60°C. Hydrierungstechniken wie sie dem Fachmann bekannt sind, sind beschrieben in Paul Rylander, Catalytic Hydrogenation in Organic Synthesis, pp. 31–63 (Academic Press Inc. San Diego, 1979). Bevorzugte Bedingungen für diese Hydrierung sind Pd auf Kohlenstoff in Methanol bei 25°C und 50psi H₂-Druck. Diese Methode liefert das Mittel für die Einführung von Wasserstoffisotopen (Deuterium und Tritium), wobei bei diesem Verfahren ¹H₂ von ²H₂ oder ³H₂ ersetzt wird.
Um eine Verbindung der Formel VIII zu generieren, kann Alternativ hierzu die Reduktion der Kohlenstoff-Kohlenstoff-Doppelbindung der Verbindung von Formel VII via eines alternativen Verfahrens durchgeführt werden, welches Reagenzien wie Ammoniumformiat und Pd/C in Methanol bei Rückflusstemperatur unter Inertgasatmosphäre (zum Beispiel Stickstoff oder Argon) benutzt. Ein andere Methode die Doppelbindung zu reduzieren, beinhaltet die Reaktion einer Verbindung der Formel VII mit Samariumjodid (SmI₂) in Methanol oder Ethanol bei Raumtemperatur wie bei R. Yanada et al., Synlett, 1995, 443–444, beschrieben.
Die Verbindung der Formel VII kann in einer von zwei geometrisch isomeren Formen hergestellt werden, E-(entgegen) oder Z-(zusammen), abhängig von den bei der Aldolkondensation gewählten Bedingungen und als solches kann die Verbindung der Formel VII als einzelnes Isomeres oder als Mischung der beiden Formen isoliert werden. Trotzdem, die nachfolgende Reduktion der Kohlenstoff-Kohlenstoff-Doppelbindung einer jeden Form oder einer Mischung hieraus, ergibt eine Verbindung der Formel VIII. Die Verbindung der Formel VIII, die einen chiralen Kohlenstoff enthält, kann entweder in der (R)- oder (S)-enantiomeren Form oder als racemische Mischung der beiden Formen vorkommen. Diese Enantiomeren sind mittels dem Fachmann bekannter Techniken separierbar. Diese schließen zum Beispiel ein: die chromatographische Trennung der racemischen Bestandteile mittels einer chiralen stationären Phase (zum Beispiel eine der im Handel erhältlichen Cyclodextrine), der Derivatisierung mit Hilfe eines chiralen Reagenz, das eine kovalente Bindung mit den Enantiomeren bildet, gefolgt von der Diastereomerentrennung, so hergestellt und vom derivatisierten Anteil abgetrennt, zur Gewinnung des/der einzelnen Enantiomer/e sowie der chemischen Trennung mittels eines reinen enantiomeren Trennmittels zur Bildung eines diastereomeren Salzpaares, das aufgrund unterschiedlicher physikalischer Eigenschaften getrennt werden kann (zum Beispiel durch selektive Rekristallisation), gefolgt von der Isolierung des Enantiomeren aus dem Salz.
Im Verfahren der vorliegenden Erfindung wird die Verbindung der Formel VIII oder 3-[[2-(4-methyl-1-piperazinyl)phenyl]methyl]-1-[4-(trifluoromethyl)phenyl)-2-pyrrolidon via selektiver Kristallisation mit Hilfe von entweder (+)-di-p-toluoyl-D-Weinsäure oder (-)-di-p-toluoyl-L-Weinsäure getrennt. Die Verbindung der Formel VIII wird mit di-p-toluoyl-Weinsäure in einem geeigneten Lösungsmittel reagieren lassen, wie einschließlich aber nicht beschränkt auf 2-Butanon, Aceton, 3-Pentanon, Methanol, Ethanol, Isopropanol und Ethylacetat, vorzugsweise jedoch 2-Butanon. Abhängig davon, welche Weinsäure verwendet wird, fällt nur eines der diastereomeren di-p-toluoyl-Weinsäuresalze aus, das heißt, falls das (+)-di-p-toluoyl-D-Weinsäuresalz des Racemates gebildet wird, verbleibt das 3-(R)-Enatiomer-Tartrat in Lösung und das Salz des 3-(S)-Enantiomeren fällt aus, das heißt, die Verbindung der Formel III, und falls das (-)-di-p-toluoyl-L-Weinsäuresalz gebildet wird, verbleibt das 3-(S)-Enantiomere Tartrat in Lösung und das Tratratsalz des 3-(R)-Enatiomers fällt aus. Falls das Tartratsalz des gewünschten Enantiomeren in Lösung bleibt, kann es durch Verdampfung des Lösungsmittels gewonnen werden.
Im bevorzugten Ausführungsbeispiel des Verfahrens der Erfindung wird 3-[[2-(4-methyl-1-piperazinyl)phenyl]methyl]-1-[4-(trifluoromethyl)phenyl]-2-pyrrolidon mit (+)-di-p-toluoyl-D-Weinsäure getrennt, welches ein Salz mit einem enantiomeren Überschuß des (-)-Enantiomers an 3-[[2-(4-methyl-1-piperazinyl)phenyl]methyl]-1-[4-(trifluoromethyl)phenyl]-2-pyrrolidon von mindestens 80% ergibt, wobei nach der Behandlung mit Base eine optische Reinheit des Enantiomeren von mindestens 96% resultiert. Der enantiomere Überschuß wird mit den dem Fachmann bekannten Methoden bestimmt, zum Beispiel, den Methoden, offenbart in J. Jacques, et al., Enantiomers, Racemates and Resolutions (John Wiley & Sons, New York, 1981). Die Trennung des 3-[[2-(4-methyl-1-piperazinyl)phenyl]methyl]-1-[4-(trifluoromethyl)phenyl]-2-pyrrolidons zum Erhalt des (-)-Enantiomers wird in Schema 2 dargestellt.
Schema 2
Schritt 1 in Schema 2 ist die Trennung der racemischen Verbindung von Formel VIII. Das Racemat der Formel VIII wird in einem Lösungsmittel wie 2-Butanon, Aceton, 3-Pentanon, Methanol, Ethanol, Isopropanol und Ethylacetat, vorzugsweise jedoch 2-Butanon bei einer Temperatur zwischen Raumtemperatur und 80°C, vorzugsweise bei etwa 50°C, gelöst, mit 0,5 bis 1,25 Äquivalenten (+)-di-p-toluoyl-D-Weinsäure, vorzugsweise mit etwa ein Äquivalent behandelt, auf Raumtemperatur abgekühlt und für eine Dauer von 5 bis 48 Stunden , vorzugsweise etwa 15 Stunden, gerührt, um ein gefälltes Salz der Formel XI zu ergeben, das vom Lösungsmittel durch Filtration gewonnen wird. Das Salz der Formel X verbleibt in der Mutterlauge. Schritt 2 in Schema 2 ist die Konversion des Salzes der Formel XI in die freie Base. Das Salz der Formel XI wird mit einer wässrigen anorganischen Base behandelt, wobei der pH-Wert größer als 8 ist und wobei die Base zum Beispiel Natriumhydroxid, Natriumcarbonat, Natriumbikarbonat, Kaliumhydroxid, Kaliumcarbonat, Kaliumbikarbonat, Lithiumhydroxid, Ammoniumhydroxid, vorzugsweise Natrium- oder Kaliumhydroxid ist, in einem Lösungsmittel wie Dichlormethan, Toluol, Diisopropyläther, Methyl-, tert-Butyläther, vorzugsweise Dichlormethan. Die organische Phase wird eingeengt, um die Verbindung der Formel XII zu erhalten.
Schema 3
Schritt 3 in Schema 3 ist die Erzeugung der freien Base, XIV, aus dem Salz der Formel XIII und ist allgemein auf Salze, die mittels der Methoden der Erfindung erhalten werden, anwendbar, zum Beispiel auf das Salz der Formel X, das nach der Reaktion von (+)-di-p-toluoyl-D-Weinsäure mit dem Racemat der Formel VIII in der Lösung verblieb. Das Salz der Formel XIII wird mit einer wässrigen anorganischen Base bei einem pH-Wert größer als 8 in einem Lösungsmittel wie Dichlormethan, Toluol, Diisopropyläther, Methyl-, tert-Butyläther, vorzugsweise Dichlormethan, behandelt. Die organische Phase wird eingeengt, um das (+)-Enantiomer der Formel XIV zu erhalten.
Schritt 4 in Schema 3 ist die Racemisierung des (+)-Enantiomers von Formel XIV. Eine Verbindung von Formel XIV wird mit einer Base behandelt wie Kalium-t-butoxid, Natriummethoxid, Kaliummethoxid, Kaliumethoxid, Natriumethoxid, Natriumisopropoxid, Kaliumisopropoxid in entweder katalytischer Menge oder größer, vorzugsweise 0,2 Äquivalent bei einer Temperatur von über 50°C, vorzugsweise bei ungefähr 65°C für die Dauer zwischen 3 und 24 Stunden, vorzugsweise 12 Stunden, um eine Verbindung der Formel 8 hervorzubringen, die das Racemat darstellt.
Sofern nicht anderweitig angezeigt, ist der Druck unter welchem diese Reaktionen durchgeführt werden nicht kritisch. Im Allgemeinen werden die Reaktionen bei einem Druck von etwa einem bis etwa drei Atmosphären, vorzugsweise bei Umgebungsdruck (etwa eine Atmosphäre) durchgeführt.
Die Verbindungen der Erfindung haben basischen Charakter und sind in der Lage eine breite Vielfalt verschiedener salze mit zahlreichen anorganischen und organischen Säuren zu bilden. Obgleich solcherlei Salze für die Verabreichung am Tier pharmazeutisch akzeptabel sein müssen, ist es in der Praxis häufig wünschenswert, die Verbindung der Formel II als pharmazeutisch inakzeptables Salz aus der Reaktionsmischung zu isolieren, um hernach das Letztere durch Behandlung mit einem alkalischen Reagenz in die freie Base zurückzuverwandeln. Die sauren Addionssalze der basischen Verbindungen dieser Erfindung sind leicht herzustellen, indem die basische Verbindung mit der substanziell äquivalenten Menge der gewählten Mineralsäure oder der organischen Säure in einem wässrigen Medium oder in einem geeigneten organischen Lösungsmittel wie Methanol oder Ethanol behandelt wird. Mittels sorgfältiger Verdampfung des Lösungsmittels wird das feste Salz erhalten.
Die Säuren zur Herstellung pharmazeutisch akzeptabler Additionssalze der basischen Verbindungen dieser Erfindung sind solche, die nicht-toxische saure Additionssalze bilden, das heißt, Salze, die pharmakologisch akzeptable Anionen enthalten, wie Hydrochlorid, Hydrobromid-, Hydrojodid-, Nitrat-, Sulfat-, Bisulfat-, Phosphat- oder saures Phosphat-, Acetat-, Laktat-, Citrat- oder saures Citrat, Tartrat- oder Bitartrat-, Succinat-, Maleat-, Fumarat-, Glukonat-, Saccharat-, Benzoat-, Methansulfonat- und Pamoat- (d.h. 1,1-Methylen-bis-(2-hydroxy-3-naphthoat)) Salze. Die (-)-Enantiomeren der Verbindungen der Formel I und ihre pharmazeutisch akzeptablen Salze (nachstehend kollektiv als „die aktiven Verbindungen" bezeichnet) sind nützliche Psychotherapeutika und sind potente Antagonisten des Serotonin 1D (5-HT_1D) Rezeptors. Die aktiven Verbindungen sind nützlich bei der Behandlung von Depression, generellen Angststörungen, Phobien (Platzangst, soziale Phobien, simple Phobien), posttraumatisches Stresssyndrom, Verhaltensstörung, sexuelle Dysfunktion (zum Beispiel vorzeitige Ejakulation), Essstörungen (Magersucht, Bulimie), Fettsucht, Chemikalienabhängigkeit (z.B. Abhängigkeit von Alkohol, Kokain, Heroin, Phenobarbital, Nikotin und Benzodiazepinen), Alzheimerkrankheit, Zwangspsychose, Panikattacken, Gedächtnisstörungen (zum Beispiel Demenz, Amnesie und altersbedingte Minderungen der Gedächtnisleistung), Parkinsonkrankheit (z.B. Demenz bei Parkinsonkrankheit, neuroleptisch induzierte Parkinsonkrankheit und tardive Dyskinesie), endokrine Störungen (zum Beispiel Hyperprolactinaemie) und Störungen des Magen-Darm-Traktes, in Verbindung mit Veränderungen in der Beweglichkeit und der Sekretion. Diese Verbindungen sind auch als Vasodilatoren brauchbar.
Ferner wurde beobachtet, dass die Verbindung der Formel XII zu einer anderen Verbindung, Formel XV, dieser Erfindung metabolisiert:
Diese Verbindung besitzt auch potente antagonistisch wirkende, selektive 5-HT_1D Rezeptor Aktivität und kann im Einklang mit den oben beschriebnen Methoden hergestellt werden.
Die Affinität der Verbindungen dieser Erfindung für die zahlreichen Serotonin-1 Rezeptoren kann wie in der Literatur beschrieben mittels Standard Radioligandenbindungsassay bestimmt werden. Die 5-HT_1A Affinität kann gemessen werden, indem die Methode von Hoyer et al. (Brain Res. 376, p.85 (1986)) verwendet wird. Die 5-HT_1D Affinität kann gemessen werden, indem die Methode von Heuring und Peroutka (J. Neurosci., 7, 894 (1987)) angewandt wird.
Die In-vitro-Aktivität der Verbindungen der vorliegenden Erfindung am 5-HT_1D-Bindungsort kann durch das folgende Verfahren bestimmt werden. Rinderschwanzgewebe wird homogenisiert und in 20 Volumenteilen Puffer suspendiert, der 50 mM TRIS-Hydrochlorid(tris(hydroxymethyl)aminomethanhydrochlorid) bei einem pH von 7,7 enthält. Die zu homogenisierende Masse wird dann während 10 Minuten bei 45 000 G zentrifugiert. Die überstehende Lösung wird verworfen und das resultierende Pellet erneut in ungefähr 20 Volumenteilen aus 50 mM TRIS-Hydrochlorid (HCl) puffer bei pH 7,7 suspendiert. Die Suspension wird dann während 15 Minuten bei 37°C vorinkubiert und danach wird erneut während 10 Minuten bei 45 000 G zentrifugiert und die überstehende Lösung verworfen. Das erhaltene Pellet (ungefähr 1 Gramm) wird in 150 ml eines 15 mM TRIS-Hydrochlorid (HCl) Puffers mit einem endgültigen pH von 7,7 suspendiert, der 0,01 Prozent Ascorbinsäure und auch 10 μM Pargyline und 4 mM Kalziumchlorid (CaCl₂) enthält. Die Suspension muß vor Gebrauch mindestes 30 Minuten lang eisgekühlt werden.
Der Inhibitor, das Kontrollreagenz oder das Trägerreagenz wird danach gemäß dem folgenden Verfahren inkubiert. Zu 50 μl einer aus 20 % Dimethylsulfoxid (DMSO) und 80 % destilliertem Wasser bestehende Lösung werden 200 μl tritiummarkiertes 5-Hydroxytrypt amin (2 nM) in einem Puffer bestehend aus 50 mM TRIS-Hydrochlorid, der 0,01 Prozent Ascorbinsäure enthält bei einem pH-Wert von 7,7 hinzugefügt. Die Pufferlösung enthält ferner 10 μM Pargyline und 4 μM Calciumchlorid plus 100 nM 8-Hydroxy-DPAT (Dipropylamino-tetralin) und 100 nM Mesulergine. Zu dieser Mischung wird 760 μl Rinderschwanzgewebe hinzugefügt und die resultierende Suspension wird heftig verwirbelt, um eine homogene Suspension sicherzustellen. Die Suspension wird nun in einem Schüttelwasserbad bei 25°C während 30 Minuten inkubiert. Nach abgeschlossener Inkubation wird die Suspension über Fiberglasfilter abfiltriert (zum Beispiel Whatman GF/B-Filter^TM). Das Pellet wird in ein Szintillationsfläschchen zusammen mit 5 ml Szintillationsflüssigkeit (Aquasol 2^TM) eingebracht und über Nacht absitzen lassen. Der prozentuale Anteil der Inhibition kann für jede Dosis der Verbindung gemessen werden. Ein IC₅₀-Wert kann nun aus jedem der prozentualen Anteile der Inhibition berechnet werden.
Die Aktivität der Verbindungen der vorliegenden Erfindung für deren 5-HT_1A Bindungsfähigkeit kann entsprechend dem folgenden Verfahren bestimmt werden. Eine Rattenhirnrindegewebeprobe wird homogenisiert und in 1 Gramm-Anteile aufgeteilt und mit 10 Volumina von 0:32 M Sucroselösung verdünnt. Danach wird die Suspension mit 900 G während 10 Minuten zentrifugiert, die überstehende Lösung abgetrennt und bei 70 000 G für 15 Minuten erneut zentrifugiert. Die überstehende Lösung wird verworfen und das Pellet in 10 Volumenteilen 15 mM TRIS-Hydrochlorid bei pH 7,5 resuspendiert. Man lässt die Suspension während 15 Minuten bei 37°C inkubieren. Nach Beenden der Vorinkubationsphase wird die Suspension bei 70 000 G während 15 Minuten zentrifugiert und die überstehende Lösung verworfen. Das resultierende Gewebepellet wird in einem Puffer 50 mM TRIS-Hydrochlorid bei pH 7,7 suspendiert, der 4 mM Calciumchlorid und 0,01 Prozent Ascorbinsäure enthält. Die Gewebeprobe wird bei –70°C gelagert, bis sie für ein Experiment benötigt wird. Die Gewebeprobe kann unmittelbar vor Gebrauch aufgetaut, mit 10 μM Pargyline versetzt und eisgekühlt werden.
Die Gewebeprobe wird nun entsprechend der folgenden Methode inkubiert. 50 μl der Kontrollsubstanz, des Inhibitors oder der Trägersubstanz (1 Prozent DMSO der Endkonzentration) wird für die verschiedenen Dosisstärken vorbereitet. Zu dieser Lösung werden 200 μl tritiummarkiertes 8-Hydroxy-2-DPAT (Dipropylamino-tetralin) in einer Konzentration von 1,5 nM in einem Puffer von 50 mM TRIS-Hydrochlorid bei pH 7,7 hinzugefügt, der 4 mM Calciumchlorid, 0,01 Prozent Ascorbinsäure und Pargyline enthält. Zu dieser Mischung wird 750 μl der Gewebeprobe hinzugefügt und die resultierende Suspension wird heftig verwirbelt, um eine homogene Suspension sicherzustellen. Die Suspension wird nun in einem Schüttelwasserbad bei 37°C während 30 Minuten inkubiert. Danach wird die Lösung filtriert und zweimal mit 4 ml 10 nM TRIS-Hydrochloridlösung bei pH 7,5 gewaschen, die 154 nM Natriumchlorid enthält. Die prozentuale Inhibition wird für jede Dosisstärke der Verbindung, der Kontrollsubstanz oder der Trägersubstanz berechnet. Die IC₅₀-Werte werden aus den Prozent-Inhibitionswerten berechnet.
Die 5-HT_1D und 5-HT_1A Affinitäten der Verbindungen der vorliegenden Erfindung wurden mittels der vorangenannten Verfahren untersucht. Insbesondere die Verbindung der Formel XII zeigte, innerhalb der experimentellen Schwankungen, einen IC₅₀-Wert von weniger als 10,0 nM für die 5-HT_1D Affinität und einen IC₅₀-Wert von weniger als 400 nM für die 5-HT_1A Affinität. Die Agonist- und Antagonistaktivitäten der Verbindungen der vorliegenden Erfindung an den 5-HT_1D und 5-HT_1A Rezeptoren können bei einer einzelnen Sättigungskonzentration entsprechend dem nachfolgenden Verfahren bestimmt werden. Männliche Hartley Meerschweinchen werden dekapitiert und die 5-HT_1A Rezeptoren werden aus dem Hippocampus seziert, während die 5-HT_1D Rezeptoren dadurch erhalten werden, indem man das Präparat bei 350 mM mit einem McIlwain Tissue Chopper in Scheibchen aufteilt und aus den geeigneten Scheibchen die Substantia Nigra seziert. Die einzelnen Gewebeproben werden in 5 mM HEPES Puffer, der 1 mM EGTA (pH 7,5) enthält, mit einem tragbaren Glas-Teflon ^® Homogenisator homogenisiert und bei 35 000 G während 10 Minuten bei 4°C zentrifugiert. Die Pellets werden erneut in 100 mM HEPES Butter suspendiert, die 1 mM EGTA (pH 7,5) enthält, um eine Endkonzentration von 20 mg (Hippocampus) oder 5 mg (Substantia Nigra) an Protein pro Röhrchen zu erreichen. Die folgenden Reagenzien werden hinzugefügt, so dass die Reaktionsmischungen in jedem Röhrchen enthielten: 2,0 mM MgCl₂, 0,5 mM ATP, 1,0 mM cAMP, 0,5 mM IBMX, 10 mM Phosphokreatinin, 0,31 mg/ml Kreatininphosphokinase, 100 μM GTP und 0,5–1 Mikrocurie a[³²P]-ATP (30 Ci/mmol: NEG-003 - New England Nuclear). Die Inkubation wird initiiert durch Zugabe der Gewebeproben zu den silikonisierten Mikrofugenröhrchen (dreifach) bei 30°C während 15 Minuten. Jedes Röhrchen erhält 20 μl Gewebeprobe, 10 μl Wirkstoff oder Puffer (bei 10-facher Endkonzentration), 10μl 32 nM Agonist oder Puffer (bei 10-facher Endkonzentration), 20 μl Forskolin (3 μM Endkonzen-tration) und 40 μl der vorhergehenden Reaktionsmischung. Die Inkubation wird beendet durch Hinzufügen von 100 μl 2% SDS, 1,3 mM cAMP, 45 mM ATP Lösung versetzt mit 40.000 dpm [³H]-cAMP (30 Ci/mmol: NET 275 - New England Nuclear), um die Rückgewinnung des cAMPs von den Säulen zu überwachen. Die Trennung von [³²P]-ATP und [³²P]-cAMP wird entsprechend dem Verfahren von Salomon et al., Analytical Biochemistry, 58, pp. 541–548 (1974) ausgeführt. Die Radioaktivität wird mittels Flüssigszintillationsmessung durchgeführt. Die maximale Inhibition ist definiert durch 10 μM (R)-8-OH-DPAT für 5-HT_1A Rezeptoren und 320 nM 5-HT_1D für 5-HT_1D Rezeptoren. Die prozentualen Inhibitionen der Testverbindungen werden dann in Relation zum inhibitorischen Effekt des (R)-8-OH-DPAT für 5-HT_1A Rezeptoren oder 5-HT für 5-HT_1D Rezeptoren berechnet. Die Umkehrung der vom Agonisten induzierten Inhibition der von Forskolin stimulierten Adenylatcyclaseaktivität wird im Verhältnis zu dem 32 mM Agonist-Effekt berechnet.
Die Verbindungen der Erfindung können auf die In-Vivo-Aktivität bezüglich des Antagonismus der 5-HT_1D agonist-induzierten Hypothermie bei Meerschweinchen gemäß der nachfolgenden Methode getestet werden.
Als Versuchstiere dienten männliche Hartley Meerschweinchen von Charles River mit einem Gewicht von 250 – 275 Gramm bei Ankunft und 300 – 600 Gramm bei den Tests. Die Meerschweinchen wurden unter Standardlaborbedingungen mit Beleuchtung von 7 Uhr morgens bis 19 Uhr abends über einen Zeitraum von mindestens sieben Tage vor der Experimentierphase gehalten. Futter und Wasser waren während der gesamten Testphase frei verfügbar.
Die Verbindungen der Erfindung können als Lösungen in Volumina zu 1 ml/kg verabreicht werden. Die verwendete Gabe wurde in Abhängigkeit von der Löslichkeit der Verbindung variiert. Die Testverbindungen wurde üblicherweise entweder oral (p.o.) 60 Minuten oder 0 Minuten subkutan (s.c.) vor dem 5-HT_1D Agonisten [3-(1-methylpyrrolidin-2-ylmethyl)-1H-indol-5-yl-]-(3-nitropyridin-2-yl)-amin verabreicht, welches mit einer Dosisstärke von 5,6 mg/kg, s.c. gegeben wurde. Noch bevor die erste Temperaturmessung erfolgt ist, wurde jedes Meerschweinchen in einen durchsichtigen Plastikschuhbehälter verbracht, der Holzschnipsel und einen Metallgitterboden enthielt, wobei ihnen erlaubt wurde, sich ca. 30 Minuten an die Umgebung zu gewöhnen. Die Tiere wurden nach den Temperaturmessungen in den gleichen Schuhbehälter zurückgebracht. Vor jeder Temperaturmessung wurde jedes Tier für eine Zeit von 30 Sekunden mit der Hand festgehalten. Für die Temperaturmessungen wurde ein Digitalthermometer mit einem kleinen Tierfühler verwendet. Der Fühler besteht aus halbflexiblem Nylon mit einem Epoxydstäbchen. Der Temperaturfühler wurde 6 cm weit in das Rektum eingeführt und dort für 30 Sekunden belassen bis eine stabile Messung erzielt wurde. Danach wurden die Temperaturen aufgezeichnet.
In p.o. Screening-Experimenten wurde eine „Pre-Drug" Basislinie des Temperaturverlaufes bei 90 Minuten aufgenommen, die Testverbindung wurde bei 60 Minuten verabreicht und zusätzlich wurde ein 30 Minutenwert ermittelt. Der 5-HT_1D Agonist wurde dann bei 0 Minuten verabreicht und die Temperaturen bei 30, 60, 120 240 Minuten später gemessen.
Bei den subkutanen Screening-Experimenten wurde die „Pre-Drug" Basislinie des Temperaturverlaufes bei 30 Minuten aufgenommen. Die Testverbindung und der 5-HT_1D Agonist wurden gleichzeitig verabreicht und die Temperaturen bei 30, 60, 120 240 Minuten später gemessen. Die Daten wurden mittels der Zweiwegevarianzanalyse mit Wiederholungsmessungen gemäß dem Newman-Keul post hoc Analysis Test ausgewertet.
Wie bereits kürzlich erwähnt, sind die radioaktiv markierten Verbindungen der vorliegenden Erfindung, insbesondere dann, wenn die Moleküle Radioisotope wie ¹¹C, ¹⁴C, ³H oder ¹⁸F enthalten, nützliche diagnostische Reagenzien, um Serotoninrezeptoren des 5-HT_1D Rezeptorsubtyps zu identifizieren und zu lokalisieren. Die radioaktiv markierten Verbindungen der vorliegenden Erfindung können auch für die Bestimmung der Dichte besagten Rezeptors innerhalb vielfältiger Regionen des zentralen Nervensystems hilfreich sein ebenso wie für die Bestimmung der prozentualen Rezeptorbelegung bei gegebener Konzentration dieser Verbindungen. Die diagnostische Anwendung dieser radioaktiv markierten Verbindungen bei Techniken, wie der Positronenemissionstomographie (PET) können, neben anderen, analog zu jenen ausgeführt werden, die in Ginovart et al., Synapse, 35, 192–200 (2000); Shiue et al., Synapse, 25, 147–154 (1997); Drevets et al., Biol. Psychatry, 46, 1375–1387 (1999); Hall et al., Brain Research, 745: 96–108 (1997); Pike et al., Eur. J. Pharm., 301: R5–R7 (1996); und Koepp et al., Nature, 393: 266–268 dargestellt sind.
Eine Bestimmung der Bindung von 5-HT_1D Rezeptoren in Membranen von Rindern in Verbindung mit den radioaktiv markierten Verbindungen kann folgendermaßen ausgeführt werden: Corpus Striata wird aus Rinderhirn seziert und mittels einem Kinematica Tissue Homogenizer (Firma Kinematica Inc., Cincinnati, OH) homogenisiert, wobei 40 Volumenteile aus 50 mM TRIS HCl [tris(hydroxymethyl)aminomethanhydrochlorid] pro Gramm Gewebeanteil bei pH 7,7 benutzt werden. Das Homogenisat wird bei 40.000 G während 10 Minuten zentrifugiert, das resultierende Pellet wird in frischer Pufferlösung erneut suspendiert und für 20 Minuten bei 37°C inkubiert. Das Homogenisat wird wiederholt bei 40.000 G zentrifugiert.
Das endgültige Pellet (1 Gramm) wird in 10 ml TRIS HCl suspendiert, das 1 mg/ml Ascorbinsäure, 4 mM CaCl₂ und 10μM Pargyline bei pH 7,7 enthält. Die Bindungsstärke wird in 96, 0,75 ml, Well Plates ermittelt, wobei jedes Well Plate 50 μl der Testkomponente oder Lösungsmittel enthält sowie 400 μl der [³H]-markierten Verbindung von Beispiel 9 (2 nM Endkonzentration) und 50 μl der Membranen. Die unspezifische Bindungsstärke wird in Gegenwart von 10 μM 5-HT bestimmt. Die Röhrchen werden 30 Minuten lang bei 37°C inkubiert, über GF/B Filter mittels eines Brandel Cell Harvesters filtriert (Brandel, 8561 Atlas Drive, Gaithersburg, MD 20877) und mit 3× 0,5ml einer 50 mM TRIS HCl bei pH 7,7 gewaschen. Die Filter werden mittels eines Wallac Betaplate ^® Liquid Scintillation Counters (Perkin Elmer Life Science, Wallac Inc., 9238 Gaither Rd., Gaithersburg, Maryland 20877) gezählt. Die prozentuale Inhibierung der gesamten spezifischen Bindungsstärke wird für jede Inhibitorkonzentration berechnet und geplottet und der IC50 wird anhand von diesen Daten berechnet.
Die Verbindungen der Erfindung können vorteilhaft in Verbindung mit einem oder mehreren therapeutischen Wirkstoffen benutzt werden, zum Beispiel, mit verschiedenen Antidepressiva wie tricyclische Antidepressiva (zum Beispiel Amitriptylin, Dothiepin, Doxepin, Trimipramin, Butripylin, Clomipramine, Desipramine, Imipramine, Iprindole, Lofepramin, Nortriptylin, oder Protriptylin), Monoaminoxidasehemmer (zum Beispiel Isocarboxazid, Phenelzine oder Tranylcyclopramin) oder 5-HT Wiederaufnahmehemmer (zum Beispiel Fluvoxamine, Sertralin, Fluoxetin oder Paroxetin) und/oder Antiparkinson-Wirkstoffe, solcherart wie dopaminogene AntiparkinsonWirkstoffe (zum Beispiel Levadopa, vorzugsweise in Kombination mit einem peripheren Decarboxylasehemmer, zum Beispiel Benserazide oder Carbidoba oder mit einem Dopaminantagonisten, zum Beispiel Bromocriptine, Lysuride oder Pergolide). Es versteht sich, dass die vorliegende Erfindung die Anwendung einer Verbindung der Formel II oder eines physiologisch akzeptablen Salzes hiervon oder Solvates hiervon in Kombination mit einem oder mehreren anderen therapeutischen Wirkstoffen abdeckt.
Die Verbindung der Formel II oder eines akzeptablen Salzes hiervon in Kombination mit einem 5-HT Wiederaufnahmehemmer (zum Beispiel Fluvoxamine, Sertralin, Fluoxetin oder Paroxetin), vorzugsweise Sertralin oder eines pharmazeutisch akzeptables Salzes hiervon oder eines Polymorphs hiervon, (die Kombination der Verbindung der Formel mit einem 5-HT Wiederaufnahmehemmer wird hier als „die aktive Kombination" bezeichnet) sind nützliche Therapeutika und können für die Behandlung von Erkrankungen, Störungen oder Zuständen verwendet werden, bei denen eine verbesserte serotoninogene Neurotransmission erleichtert werden soll (zum Beispiel Depression, generellen Angststörungen, posttraumatisches Stresssyndrom, Verhaltensstörung, sexuelle Dysfunktion, Essstörungen, Fettsucht, Chemikalienabhängigkeit, Alzheimerkrankheit, Zwangspsychose, Panikattacken, Gedächtnisstörungen (zum Beispiel Demenz, Amnesie und altersbedingte Minderungen der Gedächtnisleistung), Parkinsonkrankheit (z.B. Demenz bei Parkinsonkrankheit, neuroleptisch induzierte Parkinsonkrankheit und tardive Dyskinesie), endokrine Störungen (zum Beispiel Hyperprolactinaemie) und Störungen des Magen-Darm-Traktes, in Verbindung mit Veränderungen in der Beweglichkeit und der Sekretion.
Serotonin (5-HT) Wiederaufnahmehemmer, vorzugsweise Sertralin, zeigen, dank ihrer teilweisen Fähigkeit die Serotoninaufnahme der Synapsen zu blockieren, positive Wirksamkeit gegen Depression, Chemikalienabhängigkeiten, Platzangst, einfache Phobien, soziale Phobien und das posttraumatische Stresssyndrom; der Zwangspsychose, Verhaltensstörungen und vorzeitige Ejakulation bei Säugetieren einschließlich dem Menschen.
Das United States Patent 4,536,518 beschreibt die Synthese, die pharmazeutische Zubereitung und die Anwendung von Sertralin für die Depression und ist hiermit durch Zitat in Gänze inkorporiert.
Die Aktivität der aktiven Kombination als Antidepressiva und von verwandten pharmakologischen Eigenschaften kann durch untenstehende Methoden ermittelt werden, die in Koe, B. et al., J. Pharmacol. Exper. Ther. 266 (3), pp. 686–700 (1983) beschrieben sind. Insbesondere kann ihre Wirksamkeit bestimmt werden durch: (1) das Studium der Beeinflussung der Fähigkeit von Mäusen, aus einem Schwimmtank zu entkommen (Porsolt Maus Test „behavior despair"), (2) ihre Fähigkeit, 5-Hydroxytryptophan induzierte Verhaltensweisen von Mäusen in vivo zu potenzieren, (3) ihre Fähigkeit, auf die Verminderung der Serotoninaktivität durch p-Chloramphetaminhydrochlorid im Rattenhirn in vivo antagonistisch zu wirken und (4) ihre Fähigkeit, die Aufnahme von Serotonin, Norephedrin und Dopamin bei Rattenhirn Calls in vivo zu blockieren. Die Fähigkeit der aktiven Kombination reserpinbedingte Hypothermie bei Mäusen in vivo entgegenzuwirken, kann entsprechend den Methoden wie in U.S. Pat. No. 4,029,731 beschrieben, bestimmt werden.
Die Arzneimittel der vorliegenden Erfindung können in konventioneller An und Weise mittels eines oder mehrerer pharmazeutisch akzeptabler Trägerstoffe formuliert werden. Folglich können die aktiven Verbindungen der Erfindung für die orale, bukkale, intranasale, parenterale (zum Beispiel intravenös, intramuskulär oder subkutan) oder rektale Gabe formuliert werden oder in einer für die Anwendung zur Inhalation oder Insufflation geeigneten Form.
Für die orale Applikation können die pharmazeutischen Zubereitungen zum Beispiel in Form von Tabletten oder Kapseln eingenommen werden, die mit konventionellen Mitteln mit pharmazeutisch akzeptablen Hilfsstoffen hergestellt werden, wie Bindemittel (zum Beispiel Maisquellstärke, Polyvinylpyrrolidon oder Hydroxypropylcellulose), Füllstoffen (zum Beispiel Laktose, mikrokristalline Cellulose oder Calciumphosphat), Gleitmittel (zum Beispiel Magnesiumstearat, Talkum oder Siliziumdioxid), Sprengmittel (zum Beispiel Kartoffelstärke oder Stärkeglykolat) oder Netzmittel (zum Beispiel Natriumlaurylsulfat). Die Tabletten können unter Verwendung der dem Fachmann bekannten Methoden gecoated werden. Flüssige Zubereitungen zur oralen Applikation können beispielsweise in Form von Lösungen, Sirups oder Suspensionen eingenommen werden oder sie werden vor der Einnahme als Trockenpulver zur Aufbereitung mit Wasser oder in einer anderen Zubereitungsform angeboten. Solche flüssigen Zubereitungen können mit konventionellen Mitteln mit pharmazeutisch akzeptablen Additiven hergestellt werden wie Suspendiermittel (zum Beispiel Sorbitol Sirup, Methylcellulose oder hydrogenierte Speisefette), Emulgatoren (zum Beispiel Lezithin oder Gummi Arabikum), nichtwässrige Hilfsstoffe (zum Beispiel Mandelöl, ölige Ester oder Ethylalkohol) und Konservierungsstoffe (zum Beispiel Methyl- oder Propyl- P-hydroxybenzoat oder Sorbinsäure).
Für die bukkale Applikation kann das Medikament in Form von Tabletten oder Lutschtabletten eingenommen werden, die in konventioneller Weise hergestellt werden. Zur parenteralen Applikation können die aktiven Verbindungen als Injektionslösung formuliert werden, einschließlich der Anwendung konventioneller Kathedertechniken oder die Infusion. Die Formulierungen zur Injektion können als Einzeldosiszubereitungen angeboten werden, zum Beispiel als Ampullen oder in Form eines Mehrfachdosisbehälters mit beigefügtem Konservierungsstoff. Die Medikamente können in Form von Suspensionen, Lösungen oder Emulsionen in öligen oder wässrigen Trägerstoffen eingenommen werden und können zur Formulierung nötige Stoffe wie Suspendiermittel, Stabilisatoren und/oder Dispergiermittel enthalten. Alternativ hierzu kann vor dem Gebrauch der Wirkstoff als Pulver zum Auflösen mittels eines geeigneten Trägers, zum Beispiel pyrogenfreies Wasser, vorliegen.
Die aktiven Verbindungen der Erfindung können auch für die rektale Anwendung formuliert werden wie Zäpfchen, welche zum Beispiel konventionelle Suppositoriengrundmassen wie Kakaobutter oder andere Glyzeride enthalten, oder als Klistier.
Zur intranasalen Applikation oder als Inhalationsanwendung werden die aktiven Verbindungen der Erfindung üblicherweise in Form einer Lösung oder Suspension bereitgestellt und zwar aus einem Pump-Zerstäuberbehälter, der vom Patienten zusammengedrückt oder gepumpt wird oder sie werden in Form eines Aerosolsprays angeboten, und zwar aus einem Druckbehälter oder einer Sprühdose unter Verwendung eines geeigneten Treibgases, zum Beispiel Dichlorodifluormethan, Trichlorofluormethan, Dichlorotertafluoro-ethan, Kohlendioxid oder einem anderen geeigneten Gas. Im Falle eines unter Druck stehenden Aerosols wird die Dosiseinheit dadurch festgelegt, dass ein Ventil die abgemessene Menge freigibt. Der Druckbehälter oder die Spraydose kann eine Lösung oder eine Suspension der aktiven Verbindung enthalten. Kapseln und Patronen (zum Beispiel hergestellt aus Gelatine) zum Gebrauch in einem Inhalator oder einem Insufflator werden unter Verwendung einer Pulvermischung einer Verbindung der Erfindung und eines geeigneten Basispulvers wie Laktose oder Stärke hergestellt.
Eine vorgeschlagene Dosis der aktiven Verbindungen der Erfindung für die orale, parenterale oder bukkale Gabe am durchschnittlichen erwachsenen Menschen für die Behandlung der oben erwähnten Zustände (zum Beispiel Depression) ist 0,1 bis 200 mg der Wirksubstanz pro Dosiseinheit, die zum Beispiel ein- bis viermal täglich verabreicht werden kann.
Aerosolformulierungen zur Behandlung der oben erwähnten Zustände (zum Beispiel Depression) am durchschnittlichen erwachsenen Menschen sollten vorzugsweise so beschaffen sein, dass ein jeder einzelbemessene Pumpstoß des Aerosols 20 μg bis 1000 μg der Verbindung der Erfindung enthält. Die gesamte Tagesdosis eines Aerosols liegt in einem Bereich von 100 μg bis 10 mg. Die Verabreichung kann mehrfach pro Tag erfolgen, zum Beispiel 2,3,4 der 8 Mal, wobei jedes Mal zum Beispiel 1,2 oder 3 Dosiseinheiten gegeben werden können.
Im Zusammenhang mit der Verwendung der aktiven Verbindung dieser Erfindung mit einem 5-HT Wiederaufnahmehemmer, vorzugsweise Sertralin, zur Behandlung von Themen, die jede der obigen Zustände betreffen, können diese Verbindungen entweder alleine oder in Kombination mit pharmazeutische akzeptablen Trägerstoffen verabreicht werden und zwar in Form einer jeden der zuvor angezeigten Applikationsformen und so, dass die Verordnung in beiden Arten, als Einzel- oder Mehrfachdosis erfolgt. Noch spezieller: die aktive Kombination kann mit einer großen Zahl verschiedener Zubereitungsformen verabreicht werden, das heißt, sie können mit zahlreichen inerten, pharmazeutisch akzeptablen Trägerstoffen kombiniert werden und zwar in Form von Tabletten, Lutschtabletten, Pastillen, Bonbons, Pulver, Sprays, wässrige Suspensionen, Injektionslösungen, Elixiere, Sirups und Ähnlichem. Solche Trägerstoffe schließen Streckmittel oder Füllstoffe, sterile wässrige Medien und zahlreiche nicht-toxische organische Lösungsmittel, etc. ein. Mehr noch, solche oralen pharmazeutischen Formulierungen können in geeigneter Weise gesüßt und/oder parfümiert werden und zwar mittels zahlreicher Stoffe, die typischer Weise für solche Zwecke verwendet werden. Im Allgemeinen sind die aktiven Verbindungen der Erfindung in solchen Dosisformen in Konzentrationsbereichen von etwa 0,5% bis etwa 90% (Gewichts-%) der gesamten Arzneiform gegenwärtig, das heiß, die gewünschte Dosisform und einen 5-HT Wiederaufnahmehemmer, vorzugsweise Sertralin, in ausreichenden Anteilen über den Konzentrationsbereich von etwa 0,5% bis 90% Gewichtsprozent der Gesamtkomposition bereitzustellen, das heißt, in Anteilen, die ausreichen, die gewünschte Dosiseinheit zu liefern.
Eine vorgeschlagene Dosis der aktiven Verbindung der Erfindung in der Kombinationsformulierung (eine Formulierung, die eine aktive Verbindung dieser Erfindung und einen ein 5-HT Wiederaufnahmehemmer enthält) für die orale, parenterale oder bukkale Gabe am durchschnittlichen erwachsenen Menschen für die Behandlung der oben erwähnten Zustände ist von etwa 0,01 bis etwa 2000 mg, vorzugsweise von etwa 0,1 mg bis etwa 200 mg der aktiven Verbindung der Erfindung pro Dosiseinheit, die zum Beispiel ein- bis viermal täglich verabreicht werden kann.
Ein bevorzugtes Dosisverhältnis von Sertralin zu einer aktiven Verbindung dieser Erfindung in der Kombinationsformulierung für die orale, parenterale oder bukkale Gabe am durchschnittlichen erwachsenen Menschen für die Behandlung der oben erwähnten Zustände ist von etwa 0,00005 bis etwa 20.000, vorzugsweise von etwa 0,25 bis etwa 2.000.
Aerosolkombinationsformulierungen zur Behandlung der oben erwähnten Zustände bei einem durchschnittlichen erwachsenen Menschen sind vorzugsweise derart beschaffen, dass jede Aerosol-Dosiseinheit oder Aerosolausstoß die aktive Verbindung dieser Erfindung von etwa 0,01 μg bis etwa 1000 μg enthält, vorzugsweise jedoch etwa 1 μg bis etwa 10 mg einer solchen Verbindung. Die Verabreichung kann mehrfach pro Tag erfolgen, zum Beispiel 2,3,4 der 8 Mal, wobei jedes Mal zum Beispiel 1,2 oder 3 Dosiseinheiten gegeben werden.
Aerosolformulierungen zur Behandlung der oben erwähnten Zustände bei einem durchschnittlichen erwachsenen Menschen sind vorzugsweise derart beschaffen, dass jede Aerosol-Dosiseinheit oder Aerosolausstoß den 5-HT Wiederaufnahmehemmer, vorzugsweise Sertralin, in einem Bereich von etwa 0,01 mg bis etwa 2000 mg enthält, vorzugsweise jedoch etwa 1 mg bis etwa 200 mg Sertralin. Die Verabreichung kann mehrfach pro Tag erfolgen, zum Beispiel 2,3,4 der 8 Mal, wobei jedes Mal zum Beispiel 1,2 oder 3 Dosiseinheiten gegeben werden.
Wie zuvor aufgezeigt, ist ein 5-HT Wiederaufnahmehemmer, vorzugsweise Sertralin, in Kombination mit einer Verbindung der Formel II leichterdings als Antidepressivum geeignet. Im Allgemeinen werden diese antidepressiv wirkenden Medikamente, die einen 5-HT Wiederaufnahmehemmer, vorzugsweise Sertralin, und eine Verbindung der Formel II enthalten in Dosisbereichen von etwa 0,01 mg bis etwa 100 mg pro Kg Körpergewicht pro Tag des 5-HT Wiederaufnahmehemmers, vorzugsweise Sertralin, vorzugsweise von etwa 0,1 mg bis etwa 10 mg pro Kg Körpergewicht pro Tag des Sertralins verabreicht, und zwar mit von etwa 0,001 mg bis etwa 100 mg pro Kg Körpergewicht pro Tag des (-)-Enatiomers der Verbindung der Formel II, vorzugsweise von etwa 0,01 mg bis etwa 10 mg pro Kg Körpergewicht pro Tag des besagten (-)-Enantiomers, obgleich notwendigerweise Abweichungen hiervon auftreten werden, in Abhängigkeit von den Umständen des behandelten Subjektes und der speziell gewählten Art der Verabreichung.
Die folgenden Beispiele erklären die Zubereitung der Verbindungen der vorliegenden Erfindung. Die Schmelzpunkte wurden nicht korrigiert. Die NMR-Daten werden in Teile pro Million (δ) angegeben und werden auf das Deuteriumbezugssignal des Lösemittels der Probe bezogen (Deuterochloroform, sofern nicht anderweitig spezifiziert). Die spezifischen Drehungen wurden bei Raumtemperatur mit Hilfe der Natrium D-Linie (589 nm) gemessen. Es wurden handelsübliche Reagenzien ohne weitere Aufreinigung verwendet. THF steht für Tetrahydrofuran. DMF steht für N,N-Dimethylformamid. Die Raum- oder Umgebungstemperatur bezieht sich auf 20–25°. Alle Reaktionen in nichtwässrigem Milieu wurden der Einfachheit und aus Gründen der Ausbeuteoptimierung unter Stickstoffatmosphäre ausgeführt. Aufkonzentration unter reduziertem Druck bedeutet, dass ein Rotationsverdampfer verwendet wurde.
BEISPIELE
Beispiel 1
2-(4-Methyl-1-piperazinyl)-benzaldehyd
Diese Verbindung wird entsprechend den Methoden von W. Nijhuis et al., Synthesis, 1987, 641–645 oder denjenigen von J. Watthey et al., J. Med. Chem., 26, pp. 1116–1122 (1983) hergestellt.
Beispiel 2
1-[4-(trifluoromethyl)phenyl]-2-pyrrolidon
Diese Verbindung wird entsprechend den Methode von W.C. Shakespeare, Tetrahedron Letters, 40, 2035–2038 (1999) oder jener von T. Yamamoto und Y. Kurata, Chemistry and Industry, 1981, pp. 737–738 hergestellt.
Beispiel 3
3-[[2-(4-methyl-1-piperazinyl)phenyl]methylene]-1-[4-(trifluoromethyl)phenyl]-2-pyrrolidone
In einem durch Ausflammung getrockneten Rundglaskolben, ausgestattet mit einem Magnetrührer und einem Rückflusskühler wurden unter Stickstoffatmosphäre 2,8 g Natriumhydrid (70 mmol einer 60%-igen Dispersion in Mineralöl) dreifach mit Hexan gewaschen, um das Mineralöl zu entfernen. Es wurde wasserfreies THF (50 ml) hinzugefügt, der Rührer wurde eingeschaltet und eine Mischung aus 2-(4-Methyl-1-piperazinyl)benzaldehyd (9,6 g, 47 mmol) und 1-[4-(trifluoromethyi)phenyl]-2-pyrrolidon (11,85 g, 51,7 mmol, Acros Organics, Pittsburgh, PA, catalog no. 27136–0010) in 200 ml THF wurde tropfenweise über einen Zeitraum von 10 Minuten hinzugefügt. Die Mischung wurde während 1,5 Stunden am Rückfluss erhitzt und über Nacht unter Rühren auf Raumtemperatur abgekühlt. Wasser (25 ml) wurde hinzugefügt und die Lösungsmittel unter Vakuum abgetrennt, worauf sich eine gummiartige Festsubstanz bildete, die in Dichlormethan und gesättigter, wässriger NH₄Cl- und gesättigter NaHCO₃-Lösung partitioniert wurde. Die wässrige Phase wurde weiterhin mit Dichlormethan extrahiert, die organischen Phasen wurden vereinigt und über Na₂SO₄ getrocknet, filtriert und im Vakuum zum Feststoff eingeengt. Der Feststoff wurde in wenig Dichlormethan aufgenommen und über Silica flashchromatographiert, wobei als Elutionsmittel Ethylacetat (100%) und danach 98:1:1 Ethylacetat:Methanol:Diethylamin diente. Die das Produkt enthaltenden Fraktionen, was mit Dünnschichtchromatographie bestimmt wurde, wurden vereinigt und aufkonzentriert, wobei 16,1 g blassgelber Feststoff erhalten wurde. Umkristallisation ergab das reine im Titel erwähnte Produkt. Schmelzpunkt 186–189 °C. Massenspektrum: 416 (M⁺¹). ¹H-NMR (CDCl₃, 400 MHz) δ 7,92 (2H,d), 7,84 (1H, m), 7,64 (1H, d), 7,33 (1H, m), 7,07 (2H, m), 3,96 (2H, t), 3,20 (2H, m) 2,99 (4H, m), 2,62 (4H,bs), 2,34 (3H, s). Elementaranalyse: berechnet für C₂₃H₂₄F₃N₃O: C 66,49, H 5,82, N 10,11; gefunden C 66,50, H 5,93, N 10,20.
Beispiel 4
3-[[2-(4-methyl-1-piperazinyl)phenyl]methyl]-1-[4-(trifluoromethyl)phenyl]-2-pyrrolidone
Methode A:
Eine Mischung aus 3-[[2-(4-methyl-1-piperazinyl)phenyl]methylene]-1-[4-(trifluoromethyl)phenyl]-2-pyrrolidone (200 mg, 0,482 mmol), Ammoniumformiat (600 mg, 9,6 mmol) und 10% Palladium auf Aktivkohle (60 mg) in 17 ml wasserfreiem Methanol und 10 ml Ethylacetat wurde während 16 Stunden unter Stickstoffatmosphäre am Rückfluss erhitzt. Nach dem Abkühlen wurde der Katalysator durch Filtration über Kieselgur (d.e. = diatomeceous earth) abgetrennt, das Lösungsmittel wurde unter Vakuum entfernt und der Rückstand wurde mit gesättigter Natriumbikarbonatlösung und Dichlormethan behandelt. Die organische Phase wurde entfernt, einer zweiten Extraktion mit gesättigter Natriumbikarbonatlösung und Dichlormethan unterzogen, mit gesättigter wässriger Kochsalzlösung gewaschen und getrocknet. Das Lösungsmittel wurde abermals unter Vakuum entfernt, wobei sich ein weißes, festes Rohprodukt bildete (135 mg). Dieser Feststoff wurde in heißem Ethylacetat gelöst und durch Zugabe weniger Tropfen Hexan umkristallisiert. Das im Titel erwähnte Produkt, 71 mg, hat einen Schmelzpunkt von 110–111 °C. Massenspektrum: 418 (M⁺¹). Die obige freie Base behandelt mit 1,0 M HCl in Diethylether und danach mit Hexan, ergab 67 mg weißer Hydrochloridsalzkristalle. Schmelzpunkt 181-183 °C. ¹H-NMR (DMSO-d₆, 400 MHz, HCl-Salz) δ 10,61 (1H, br s), 7,91 (2H, d), 7,72 (2H, m), 7,30–7,18 (2H, m), 7,18–7,03 (2H, m), 3,73 (2H, t), 3,50–3,33 (2H, m), 3,22–2,94 (8H, m) 2,78 (3H, s), 2,70 (1H, dd), 2,03 (1H, m), 1,74 (1H, m). Elementaranalyse: berechnet für Ca₃H₂₆F₃N₃O·HCl·5H₂O: C 59,67, H 6,10, N 9,08; gefunden C 59,84, H 6,06, N 8,96.
Methode B:
Eine Lösung von 3-[[2-(4-methyl-1-piperazinyl)phenyl]methylene]-1-[4-(trifluoromethyl)phenyl]-2-pyrrolidone (400 mg, 0,96 mmol) in 25 ml Methanol und 25 ml Tetrahydrofuran wurde mit 170 mg 10% Palladium auf Aktivkohle vereinigt und mittels eines Parr Schüttelgerätes (Parr Instrument Co., Moline, IL) bei 50 psi über insgesamt 24 Stunden hinweg hydriert. Der Katalysator wurde danach durch Filtration über Kieselgur abgetrennt und das Lösungs-mittel wurde unter Vakuum entfernt, wobei sich 473 mg eines gelben, gummiartigen Rückstandes bildeten. Die mit 5% Methanol:95% Ethylacetat eluierte Chromatographie (Silicagel) ergab 310 mg eines reinen Produktes in Form von gelben Kristallen. Die Dünnschichtchromatographie (tlc = thin-layer chromatography) auf Silicagelplatten, eluiert mit 85:10:5 Ethylacetat:Methanol:Triethylamin, ergab den identischen R_f-Wert wie derjenige für das gemäß Methode A hergestellten Produkt. Massenspektrum: 418 (M⁺¹).
Methode C:
Zu einer Aufschlämmung von 300 mg (0,723 mmol) von 3-[[2-(4-methyl-1-piperazinyl)phenyl]methylene]-1-[4-(trifluoromethyl)phenyl]-2-pyrrolidone in 25 ml wasserfreiem Methanol wurde unter Stickstoffatmosphäre bei Raumtemperatur 165 ml (1,8 mmol) Samarium(II)jodid (0,1 M SmI₂ in THF, Aldrich Chemical Co., Milwaukee, WI) hinzugefügt. Nach 0,5 Stunden wurden weitere 15 ml SmI₂ in THF und nach weiteren 0,5 Stunden wurden weitere 5 ml SmI₂ in THF hinzugefügt. Nach Rühren über Nacht zeigte ein Massenspektrum eines Aliquots die vollständige Umwandlung zum reduzierten, im Titel erwähnten Produkt an. Das Lösungsmittel wurde im Vakuum entfernt, der Rückstand in Wasser und Dichlormethan partitioniert und über Kieselgur abfiltriert. Die organischen Phasen wurden über Na₂SO₄ getrocknet, abfiltriert und im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wurde über Silicagel flash-chromatographiert, wobei als Elutionsmittel 98:1:1 Ethylacetat Methanol:Diethylamin diente und sich 1,78 g eines braunen Feststoffes bildete. Schmelzpunkt 94–105 °C. Massenspektrum: 418 (M⁺¹). Das ¹H-NMR der freien Base war im Einklang mit der Verbindung, die man bei Methode A erhielt.
Beispiel 5
Chromatographische Trennung von (+)- und (-)-3-[[2-(4-methyl-1-piperazinyl)phenyl]methyl]-1-[4-(trifluoromethyl)phenyl]-2-pyrrolidone
Das rohe racemische Gemisch (6,67 g), das gemäß des vorigen Beispiels (Methode B) hergestellt worden war, wurde entsprechend der nachfolgenden Hochdruckflüssigkeitschromatographie (HPLC) getrennt. Der Feststoff wurde in 12 ml 1:1 Methanol : Dichlormethan gelöst und in drei gleichen Portionen auf eine Chiracel OJ Säule (10 cm × 50 cm, 20μ packing, von Chiral Technologies Inc., Exton, PA) injiziert. Die in einem Waters Prep LC2000 eingebaute Säule, der mit System Controller und einem Waters 486 Tunable Absorbance Detector (Waters Corp., Milford, MA), eingestellt auf UV max 250 nm, ausgerüstet war, wurde mit einer Mobilen Phase bestehend aus 85:15:0,025 Hexan : Isopropanol : Diethylamin mit einer Flussrate von 250 ml/min eluiert. Das nach ungefähr 30 Minuten eluierte Enantiomer 1 wurde aufkonzentriert und ergab 3,05 g eines weißen Feststoffes. Das nach ungefähr 45 Minuten eluierte Enantiomer 2 wurde aufkonzentriert und ergab 2,98 g eines weißen Feststoffes.
Enantiomer 1 wurde in 50 ml Ethylacetat gelöst und mit 7,2 ml 1N HCl in Diethylether (Aldrich Chemical Co.) versetzt und schwach bei Raumtemperatur über Nacht gerührt, wobei sich 2,37 g eines weißen Feststoffes bildetet. Schmelzpunkt 160–165 °C, [α]²⁰ _D= +43,6 ° (c=13, Methanol). Elementaranalyse: berechnet für C₂₃H₂₆F₃N₃O·HCl·H₂O: C 58,53, H 6,19, N 8,90; gefunden C 58,20, H 6,21, N 8,87.
Enantiomer 2 wurde in 50 ml Ethylacetat gelöst und mit 7,0 ml 1N HCl in Diethylether (Aldrich Chemical Co.) versetzt und schwach bei Raumtemperatur über Nacht gerührt, wobei sich 2,43 g eines weißen Feststoffes bildetet. Schmelzpunkt 165–169 °C, [α]²⁰ _D= –43,9 ° (c=11, Methanol). Elementaranalyse: berechnet für C₂₃H₂₆F₃N₃O·HCl·1,5H₂O: C 57,44, H 6,29, N 8,74; gefunden C 57,57, H 6,31, N 8,76.
Beispiel 6
3(S)-[[2-(4-methyl-1-piperazinyl)phenyl]methyl]-1-[4-(trifluoromethyl)phenyi]-2-pyrrolidone
Zu einer Lösung von 3-[[2-(4-methyl-1-piperazinyl)phenyl]methyl]-1-[4-(trifluoromethyl)phenyl]-2-pyrrolidone (3,82 g, 9,20 mmol) in 2-Butanon (40 ml) bei 50°C wurde di-p-toluoyl-D-Weinsäure (3,55 g, 9,20 mmol) hinzugefügt. Die Lösung ließ man auf Raumtemperatur abkühlen und rührte über Nacht. Der weiße Feststoff wurde abfiltriert und ergab mittels chiraler HPLC ein Enatiomerenverhältnis von 92:8 an 3(S)-[[2-(4-methyl-1-piperazinyl)phenyl]methyl]-1-[4-(trifluoromethyl)phenyl]-2-pyrrolidone-di-p-toluoyl-D-tartrat (3,31 g, 45% Ausbeute, 90% der Theorie). Schmelzpunkt 142–144 °C, [α]²⁰ _D= +43,2 ° (c=1,0 Methanol). IR: 1722, 1612, 1323, 1122, 752 cm^–1. ¹H-NMR (CD₃OD 400 MHz) δ 1,82–1,92 (m, 1), 2,11–2,18 (m, 1), 2,39 (s, 6), 2,70 (dd, 1, J=13,7, 10,0), 2,85 (s, 3), 2,99–3,14 (m, 6), 3,37 (dd, 4 J=13,7, 4,1), 3,73–3,83 (m, 2), 5,89 (s, 2), 7,13 (t, 2, J= 7,9), 7,20–7,30 (m,6), 7,68 (d, 2, J=8,7), 7,88 (d, 2, J=8,7), 8,00 (d, 4, J=8,3). ¹³C-NMR (125 MHz, CD₃OD): δ 21,82, 25,67, 33,75, 43,69, 46,15, 48,14, 51,27, 55,31, 121,02, 122,40, 126,78, 127,10, 127,36, 128,49, 129,12, 130,33, 131,22, 132,05, 136,52, 144,24, 145,65, 151,45, 167,51, 178,61. Elementaranalyse: berechnet für C₄₃H₄₄F₃N₃O₉: C 64,25, H 5,52, N 5,23; gefunden: C 63,85, H 5,43, N 5,26.
Das oben erwähnte Salz wurde in CH₂Cl₂ (20 ml) gelöst und die Lösung mit 1N wässriger Natronlauge (2-fach mit 15 ml), Wasser (10 ml) und Salzlauge(engl.: brine; 10 ml) gewaschen. Die organische Phase wurde aufkonzentriert und ergab die im Titel erwähnte Substanz als Feststoff.
Beispiel 7
Racemisierung von 3(R)-[[2-(4-methyl-1-piperazinyl)phenyl]methyl]-1-[4-(trifluoromethyl)phenyl]-2-pyrrolidone
Eine mit 3(R)-[[2-(4-methyl-1-piperazinyl)phenyl]methyl]-1-[4-(trifluoromethyl)phenyl]-2-pyrrolidone-di-p-toluoyl-D-tartrat angereicherte (2,40 g in 15 ml, 3,00 mmol) Dichlormethanlösung wurde mit 1N wässriger Natronlauge (2-fach mit 15 ml), Wasser (10 ml) und Salzlauge (10 ml) gewaschen. Die organische Phase wurde aufkonzentriert und ergab die Verbindung der Formel XIV als Feststoff (1,25 g).
Der oben beschriebene feste Rohstoff wurde in THF (20 ml) gelöst und Kalium-t-butoxid wurde hinzugefügt (71 mg, 063 mmol). Die Lösung wurde während 12 Stunden auf 65°C erhitzt. Die Reaktionsmischung wurde abgekühlt und zwischen Wasser (10ml) und CH₂Cl₂ (15 ml) verteilt. Die organische Phase wurde mit gesättigter NaHCO₃ (10 ml) und Salzlauge (10 ml) gewaschen und aufkonzentriert, wobei sich die Verbindung der Formel VIII als racemische Mischung bildete, wie mittels chiraler HPLC nachgewiesen wurde.
Beispiel 8
Herstellung von 3(S)-(-)-[[2-(1-piperazinyl)phenyl]methyl]-1-(trifluoromethyl)phenyl]-2-pyrrolidone
Eine Mischung aus 3(S)-(-)-[[2-(4-methyl-1-piperazinyl)phenyl]methyl]-1-[4-(trifluoromethyl)phenyl]-2-pyrrolidone (0,22 g, 0,53 mmol, Enantiomer 2, hergestellt wie in Beispiel 5 beschrieben) und 1-Chloroethylchloroformiat (0,068 ml, 0,63 mmol) in 6 ml 1,2-Dichlorethan wurde für insgesamt 32 Stunden am Rückfluss erhitzt. Eine DC (CHCl₃:CH₃OH:TEA, 90:10:2) zeigte zu diesem Zeitpunkt einen neuen, weniger polaren Fleck als derjenige des Ausgangsmaterials. Das Lösungsmittel wurde im Vakuum entfernt und der Rückstand wurde in 10 ml Methanol gelöst und während 1 Stunde am Rückfluss erhitzt. Das Lösungsmittel wurde im Vakuum entfernt und der Rückstand wurde einer Flash Chromatographie über Silicagel unterzogen, wobei Ethylacetat:Methanol:TEA, 96:2:2 für die Elution der fraktionierten Stoffe verwendet wurde. Die Entfernung des Lösungsmittels hinterließ 73 mg eines farblosen Öles, das erneut in 3 ml Ethylacetat gelöst und mit 0,2 ml 1 N HCl in Diethylether behandelt wurde. Nach Rühren bei Raumtemperatur wurden die ausgefallenen festen Bestandteile abfiltriert und im Vakuum getrocknet, wobei sich 47 mg eines weißen Feststoffes bildeten. Schmelzpunkt 269–271 °C. Elementaranalyse: berechnet für C₂₂H₂₄F₃N₃O·HCl·0,75H₂O: C 58,28, H 5,89, N 9,27; gefunden C 58,28, H 5,88, N 9,23.
Beispiel 9
3(S)-(-)-[[2-(4-³H₃-Methyl)-1-piperazinyl)phenyl]methyl]-1-(trifluoromethyl)phenyl]-2-pyrrolidone
3(S)-(-)-[[2-(1-piperazinyl)phenyl]methyl]-1-(trifluoromethyl)phenyl]-2-pyrrolidone (9 mg, 0,02 mmol) wurde in 0,3 ml wasserfreiem N,N-Dimethylformamid gelöst, das 40 mg wasserfreies Kaliumcarbonat enthielt. Es wurde trägerfreies ³H-Jodmethan (C³H₃I, 0,02 mmol) hinzugefügt und die Reaktionsmischung bei Raumtemperatur während einer Stunde gerührt. Das unbeständige Tritium wurde mittels dreier Portionen Methanol verdampft, wobei ein Rohmaterial zurückblieb, das 1660 mCi aufwies. Reverse Phase DC diesen Materials (CH₃CN:1%TEAA, 1:1, pH 4) zeigte nur eine einzige radioaktive Komponente, die mit nicht tritiummarkiertem Produkt co-migrierte. Das Material wurde unter Verwendung einer Zorbax Rx-C18 Säule fraktioniert, wobei mit CH₃CN:1%TEAA, 1:1, pH 4, bei einer Flussrate von 1 ml/Minute und UV-Detektion bei 280 nm eluiert wurde. Durch Zugabe von HCl (1 Äquivalent) zu den reinen Fraktionen wurde die Verbindung in das HCl-Salz überführt. ³H-NMR (CD3OD): 85% bei 3,20 ppm, 15% bei 2,75 ppm. MS (FAB): 83,0 Ci/mol.

Claims

Eine Verbindung der Formel II:
Formel II und deren pharmazeutisch akzeptable Salze, wobei (S) die absolute sterische Konfiguration in der 3-Stellung ist und R eine CH₃-Gruppe darstellt.
Eine enantiomere Mischung der Verbindung gemäß Anspruch 1 und (+)-3(R)[[2-(4-methyl-1-piperazinyl)phenyl]methyl]-1-[4-(trifluoromethyl)phenyl]-2-pyrrolidon oder pharmazeutischer akzeptabler Salze hiervon, wobei das Verhältnis der Verbindung gemäß Anspruch 1 zu dem (R)-Enantiomeren im Überschuss von 2:1 vorliegt.
Eine Mischung entsprechend Anspruch 2 wobei das Verhältnis im Überschuss von 5:1 vorliegt.
Eine Mischung entsprechend Anspruch 2 wobei das Verhältnis 99:1 oder größer ist.
Ein folgende Schritte umfassendes Verfahren zur Herstellung der Verbindung gemäß Anspruch 1: (i) Lösen einer Verbindung der Formel I:
Formel I wobei R eine CH₃-Gruppe ist in einem geeigneten Lösungsmittel in Gegenwart von (+)-di-p-toluoyl-D-Weinsäure; (ii) aufsammeln des festen Niederschlages, der das Salz gemäß Formel III umfaßt:
Formel III x(+)-di-p-toluoyl-D-Weinsäure wobei R eine CH₃-Gruppe ist und (iii) behandeln des besagten Niederschlages mit einer Base.
Ein Verfahren gemäß Anspruch 5 wobei das geeignete Lösungsmittel in Stufe (i) aus der aus 2-Butanon, Aceton, 3-Pentanon, Methanol, Ethanol, Isopropanol und Ethylacetat bestehenden Gruppe ausgewählt ist.
Ein Verfahren gemäß Anspruch 5 wobei die Base aus der aus Natriumhydroxid, Natriumcarbonat, Natriumbicarbonat, Kaliumhydroxid, Kaliumcarbonat, Kaliumbicarbonat, Lithiumhydroxid und Ammoniumhydroxid bestehenden Gruppe ausgewählt ist.
Eine pharmazeutische Zubereitung umfassend eine Verbindung entsprechend Anspruch 1 und einen pharmazeutisch sinnvollen Träger.
Die Verwendung einer Verbindung entsprechend Anspruch 1 bei der Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung einer Erkrankung, Funktionsstörung oder Zustandes beim Säuger, ausgewählt aus Depression, generelle Angststörungen, Phobien, posttraumatisches Stress-Syndrom, psychotische Persönlichkeitsstörung, vorzeitige Ejakulation, Essstörungen, Fettsucht, hemikalienabhängigkeiten, Alzheimererkrankung, Zwangsneurose, Panikattacken, Gedächtnisstörungen, Parkinsonerkrankungen, endokrine Störungen und Störungen des Magen-Darm-Traktes, wobei Veränderungen in der Beweglichkeit und der Sekretion beteiligt sind.
Die Verwendung einer Verbindung entsprechend Anspruch 1 zur Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung einer Erkrankung, Funktionsstörung oder Zustandes eines Säugers, um die serotoninogene Erregungsübertragung zwischen den Nervenzellen zu verbessern.
Die Anwendung gemäß Anspruch 9 oder Anspruch 10 wobei die Menge der Verbindung gemäß Anspruch 1 eine zum Serotoninrezeptor antagonistisch wirksame Menge ist.
Eine pharmazeutische Zubereitung zur Behandlung einer Erkrankung, einer Funktionsstörung oder eines Zustandes zur Verbesserung der serotoninogenen Erregungsübertragung zwischen den Nervenzellen bei Säugern, umfassend: a) einen pharmazeutisch akzeptablen Träger b) eine Verbindung gemäß Anspruch 1; und c) einen 5-HT Wiederaufnahmehemmer oder ein pharmazeutisch akzeptables Salz hiervon; wobei die Menge der wirksamen Bestandteile dergestalt ist, dass bei der Behandlung einer derartigen Erkrankung, Funktionsstörung oder Zustandes die Kombination wirksam ist.
Die Verwendung einer Verbindung gemäß Anspruch 1 und eines 5-HT-Wiederaufnahmehemmers oder eines pharmazeutisch akzeptablen Salzes hiervon bei der Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung einer Erkrankung, Funktionsstörung oder Zustandes bei Säugern in der Weise, indem die serotoninogene Erregungsübertragung zwischen den Nervenzellen verbessert wird, wobei die Menge der wirksamen Bestandteile dergestalt sind, dass deren Kombination bei der Behandlung einer solchen Erkrankung, Funktionsstörung oder Zustand wirksam ist.
Die Verwendung eines 5-HT_1A -Antagonisten oder ein pharmazeutisch akzeptables Salz hiervon und eine Verbindung gemäß Anspruch 1 oder ein pharmazeutisch akzeptables Salz hiervon bei der Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung einer Erkrankung, Funktionsstörung oder Zustandes bei Säugern in der Weise, indem die serotoninogene Erregungsübertragung zwischen den Nervenzellen verbessert wird, wobei die Menge der wirksamen Bestandteile dergestalt sind, dass deren Kombination bei der Behandlung einer solchen Erkrankung, Funktionsstörung oder Zustandes wirksam ist.
Eine pharmazeutische Zubereitung gemäß Anspruch 12, worin der 5-HT-Wiederaufnahmehemmer Sertralin oder ein pharmazeutisch akzeptables Salz hiervon ist.
Eine pharmazeutische Zubereitung gemäß Anspruch 13, worin der 5-HT-Wiederaufnahmehemmer Sertralin oder ein pharmazeutisch akzeptables Salz hiervon ist.
Die Verwendung einer Verbindung gemäß Anspruch 1 und ein 5-HT-Wiederaufnahmehemmer oder ein pharmazeutisch akzeptables Salz hiervon bei der Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung einer Erkrankung, Funktionsstörung oder Zustandes beim Säuger, ausgewählt aus Depression, generellen Angststörungen, Phobien, posttraumatischem Stress-Syndrom, psychopatischer Persönlichkeitsstörung, sexueller Funktionsstörung, Essstörungen, Fettsucht, Chemikalienabhängigkeiten, Alzheimererkrankung, Zwangsneurose, Panikattacken, Gedächtnisstörungen, Parkinsonerkrankungen, endokrine Störungen und Störungen des Magen-Darm-Traktes, in Verbindung mit Veränderungen in der Beweglichkeit und der Sekretion, wobei die Menge der wirksamen Bestandteile dergestalt sind, dass deren Kombination bei der Behandlung solcherlei Erkrankung, Funktionsstörung oder Zustandes wirksam ist.
Die Verwendung eines 5-HT_1A -Antagonisten oder eines pharmazeutisch akzeptablen Salzes hiervon und einer Verbindung gemäß Anspruch 1 oder ein pharmazeutisch akzeptablen Salz hiervon bei der Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung einer Erkrankung oder Zustandes beim Säuger, ausgewählt aus Depression, generellen Angststörungen, Phobien, posttraumatischem Stress-Syndrom, psychopatischer Persönlichkeitsstörung, sexueller Funktionsstörung, Essstörungen, Fettsucht, Chemikalienabhängigkeiten, Alzheimererkrankung, Zwangsneurose, Panikattacken, Gedächtnisstörungen, Parkinsonerkrankungen, endokrine Störungen und Störungen des Magen-Darm-Traktes, in Verbindung mit Veränderungen in der Beweglichkeit und der Sekretion, wobei die Menge der wirksamen Bestandteile dergestalt sind, dass deren Kombination bei der Behandlung solcherlei Erkrankung, Funktionsstörung oder Zustandes wirksam ist.
Eine Verbindung gemäß Anspruch 1 zur Verwendung als Arzneimittel.
Eine Verbindung gemäß Anspruch 1, die einen IC₅₀ für 5-HT_1D von weniger als 10,0 nM aufweist.
Eine Verbindung gemäß Anspruch 1, die einen IC₅₀ für 5-HT_1A von weniger als 400 nM aufweist.
Ein Verfahren gemäß Anspruch 5 worin in Formel I jedes der Kohlenstoffatome aus ¹¹C, jedes der Wasserstoffatome aus ³H oder jedes Fluoratom aus ¹⁸F besteht.
Eine Verbindung der Formel V
Formel III x (+)-di-p-toluoyl-D-Weinsäure wobei R eine CH₃-Gruppe ist.
Eine Verbindung gemäß Anspruch 1, wobei ein oder mehrere Wasserstoffatome ³H sein können.
Eine Verbindung gemäß Anspruch 1, wobei R eine -C³H₃ Gruppe ist.
Eine Verbindung gemäß Anspruch 1, wobei ein oder mehrere Fluoratome ¹⁸F sein können.
Eine Verbindung gemäß Anspruch 1, wobei ein oder mehrere Kohlenstoffatome ¹¹C oder ¹²C sein können.
Eine Verbindung gemäß Anspruch 1, wobei ein oder mehrere Wasserstoffatome ³H sind, ein oder mehrere Kohlenstoffatome ¹¹C oder ¹⁴C und ein oder mehrere Fluoratome ¹⁸F oder jegliche Kombination hiervon sein können.
Eine Methode zur Bestimmung der Verteilung einer Verbindung gemäß Anspruch 1 in einer Gewebeprobe, umfassend das Inkubieren einer Verbindung gemäß Anspruch 28 mit besagter Gewebeprobe.