DE60008226T2

DE60008226T2 - Verfahren zur verwendung von emamectin zur behandlung von fisch-parasiten

Info

Publication number: DE60008226T2
Application number: DE60008226T
Authority: DE
Inventors: S. Abu HUQ; J. Zezhi SHAO; J. Kanwal VARMA
Original assignee: Schering Plough Ltd
Current assignee: MSD International Holdings GmbH
Priority date: 1999-04-08
Filing date: 2000-04-06
Publication date: 2004-12-02
Anticipated expiration: 2020-04-07
Also published as: PT1168931E; AR023399A1; PL196419B1; PL350079A1; CA2364510A1; HUP0201027A2; EP1168931A1; NO2011004I1; KR20010109335A; ATE259155T1; MXPA01010107A; CN1356875A; UA70362C2; NZ514197A; CZ20013488A3; IS6094A; CN1263455C; NO20014848L; DK1168931T3; KR100604747B1

Description

HINTERGRUND DER ERFINDUNG
Die Kontrolle von Infestationen durch Meerasseln oder -läuse (Lepeophtheirus salmonis und Caligus elongates) in kommerziellen Lachszuchtanlagen ist nach wie vor stark abhängig von der Verwendung von chemischen Behandlungen (Roth, M., Richards, R. & Somerville, C. (1993) "Current Practices In The Chemotherapeutic Control of Sea Lice Infestations: A Review" Journal of Fish Diseases (16(1): 1–26). Ausbrüche dieser ektoparasitären Kopepoden werden gegenwärtig durch Tauchbad-Behandlungen mit den Organophosphaten Dichlorvos (Aquagard^® Novartis) und Azamethiphos (Salmosan^® Novartis) oder Wasserstoffperoxid (Salartect^® Brenntag, Paramove^® Solvay-Interox) oder den synthetischen Pyrethroiden Cypermethrin (Excis^® Vericore) und Deltamethrin (Alphamix^® Alpharma) behandelt. Badprozeduren sind sehr arbeitsintensiv, kostspielig und verursachen bei den Fischen beträchtliche Belastungen. Darüber hinaus sind solche Behandlungen möglicherweise an exponierten Stellen und während ungünstigen Wetterbedingungen praktisch nicht durchführbar.
Mit der Ausnahme von Cypermethrin (Jakobsen, P. J. & Holm, J. C. (1990) "Promising Test With New Compound Against Salmon Lice" Norsk Fiskeoppdrett., 16.–18. Januar) sind Badbehandlungen nur gegenüber dem Vorerwachsenen- (prä-adulten) und Erwachsenenstadium der Meerasseln oder -läuse wirksam, was es Chalimus-Stadien gestattet, zu überleben und den Befallszyklus fortzusetzen. Behandlungen sind dementsprechend nur angezeigt, wenn Populationen die Vorerwachsenen- (prä-adulten) und Erwachsenenphasen erreichen und müssen für eine effektive Kontrolle folglich häufig wiederholt werden. Bei einigen Populationen von Meerasseln oder -läusen ist eine Resistenz gegen das Organophosphat Dichlorphos festgestellt worden (Jones, J. W., Somerville, C. S. & Wootten, R. (1992) "Reduced Sensitivity of the Salmon Louse, Lepeophtheirus salmonis, to the Organophosphate Dichlorvos", Journal of Fish Diseases 15: 197–202). Wasserstoffperoxid kann die Kiemen schädigen und seine Verwendung ist im Sommer Einschränkungen unterworfen aufgrund von dessen Toxizität bei höheren Wassertemperaturen (Thomassen, J. M. (1993) "Hydrogen peroxide as a Delousing Agent for Atlantic Salmon" In: Pathogens of Wild and Farmed Salmon: Sea Lice (hrsg. von G. Boxhall & D. Defaye) Ellis Horwood Ltd. London).
Eine Behandlung, die gegenüber allen parasitären Stadien von Meerasseln oder -läusen und andere Parasiten wirksam ist, die im Futter verabreicht werden kann, um die mit Bad-Anwendungen verbundenen Nachteile zu vermeiden, wäre für die Lachsindustrie hilfreich. Eine mittels des Futters erfolgende ("in-feed") Behandlung erlaubt eine Medikation während ungünstiger Wetterbedingungen und an exponierten Orten und wird eine gleichzeitige Medikation aller Käfige an einem Ort und aller Stellen in einem Bucht-System oder einer einzelnen Bucht ermöglichen, wodurch jegliche Kreuzinfestationen, die während der Mehrzahl von Tagen, die erforderlich sind, um Badbehandlungen an allen Käfigen an einem Ort auszuführen, auftreten können, verringert werden. Die mittels des Futters erfolgenden Behandlungen, die gegenwärtig zur Verfügung stehen, sind die Insektenwachstumsregulatoren Diflubenzuron (Lepsidon^® Ewos) und Teflubenzuron (Calicide^® Nutreco) (Erdal J. I. (1997) "New Drug Treatment Hits Sea Lice When They are Most Vulnerable". Fish Farming International Band 24, Nr. 2). Ihre Wirkungsweise besteht in der Hemmung der Chitinsynthese (Horst, M. N. & Walker, A. N. (1996) "Biochemical Effects of Diflubenzuron on Chitin Synthesis in the Post-molt blue crab" (Callinectes sapidus) Journal of Crustacean Biology. 15: 401–408) und die Wirksamkeit ist dementsprechend auf die Häutungsstadien der Meerasseln oder -läuse beschränkt.
Die Avermectine, welche durch die Kultivierung von Streptomyces avermilitis produziert werden, haben hochwirksame anthelminthische und Insektizide Eigenschaften. Ein chemisch modifiziertes Derivat, Ivermectin (22,23-Dihydroavermectin B₁) wurde als ein Breitspektrum-Antiparasitikum für Rinder, Schafe, Pferde und Schweine entwickelt (Sutherland, I. H. (1990) "Veterinary Use of Ivermectin" Acta Leidensia 59: 211–216) und ist seit 1981 weltweit vermarktet worden. Ivermectin ist auch bei der Behandlung von mehreren Parasitosen beim Menschen intensiv verwendet worden (Ottesen, E. A. & Campbell, W. C. (1994) "Ivermectin in Human Medicine" Journal of Antimicrobial Chemotherapy 34(2): 195–203). Nach der Entdeckung der Organophosphat-Resistenz bei Meerasseln oder -läusen (Jones M. W., Sommerville, C. S. & Wootten, R. (1992) "Reduced Sensitivity of the Salmon Louse, Lepeophtheirus salmonis, to the Organophosphate Dichlorvos" Journal of Fish Diseases 15: 197–202) wurde Ivermectin als eine alternative Therapie angesehen. Zusätzlich zu dessen neuer Wirkungsweise liegt ein weiterer Vorteil in dessen Anwendung in Form einer mittels des Futters erfolgenden ("in-feed") Medikation. Obwohl Ivermectin für eine Verwendung bei Lachsen keine Zulassung durch die Behörden erhalten hat, kann es im Vereinigten Königreich durch Tierärzte im Rahmen der Kaskadenprozedur verschrieben werden (Anonym (1998) Amelia No. 8 Veterinary Medicines Directorate. Woodham Lane, Newhaw, Addlestone, Surrey KT15 3NB), wenn zugelassene Produkte versagen, eine wirksame Kontrolle von Meerassel- bzw. -lausbefall zu bewirken. Die Verwendung von Ivermectin über mehrere Jahre hinweg hat gezeigt, dass es bei der üblicherweise herangezogenen Dosisrate von 25 μg kg^–1 Biomasse zweimal wöchentlich ein gewisses Ausmaß an Kontrolle ausübt (Rae, G. H. (1996) "Guidelines for the Use of Ivermectin Pre-Mix for Pigs to Treat Farmed Salmon For Sea Lice" Scottish Salmon Growers Association pamphlet). Es ist jedoch festgestellt worden, dass Ivermectin bei Konzentrationen über 25 μg kg^–1 Biomasse zweimal wöchentlich toxisch ist (S. C. Johnson et al., "Toxicity and Pathological Ef fects of Orally Administered Ivermectin in Atlantic, Chinook and Coho Salmon and Steelhead Trout", Diseases of Aquatic Organisms, Band 17: 107–112 (1993).
Emamectin (4''-Desoxy-4''-epimethylaminoavermectin B₁) ist unlängst für die Behandlung von essbaren Feldfrüchten verwendet worden (Leibee, G. L., Jansson, R. K., Nuessly, G. & Taylor, J. L. (1995) "Efficacy of Emamectin Benzoate and Bacillus thuringensis at Controlling Diamondback Moth (Lepidoptera: Plutellidae) Populations On Cabbage in Florida" Florida Entomologist. 78(1): 82–96).
ZUSAMMENFASSUNG DER ERFINDUNG
Diese Erfindung stellt ein Verfahren zur Eliminierung, Reduzierung oder Vorbeugung von Parasiten in einer Fischpopulation zur Verfügung, welches umfasst, Emamectin oder ein Salz davon an die Fischpopulation in einer täglichen Dosierung von 25 μg bis 400 μg/kg Fischbiomasse pro Tag über eine Dauer von 3–14 Tagen zu verfüttern.
Unter einem weiteren Aspekt wird ein Kit zur Herstellung eines medizinischen bzw. Arzneimittel enthaltenden Fischfutters zur Eliminierung von, Reduzierung von oder Vorbeugung gegen Parasiten in einer Fischpopulation bereitgestellt, umfassend einen Vorrat an Emamectin oder eines Salzes davon und gedruckte Anweisungen zur Fütterung des Emamectins oder Emamectinsalzes in einer täglichen Dosierung von 25 μg bis 400 μg/kg Fischbiomasse pro Tag für eine Dauer von 3–14 Tagen.
KURZE BESCHREIBUNG DER ZEICHNUNGEN
1 ist ein Diagramm, welches den mittleren individuellen Chalimus (Stadien I, II, III und IV) pro Fisch für die Kontrollgruppe gegenüber der Gruppe, welche eine Dosis von 50 μg/kg er halten hat, am Tag 7 im Rahmen der Dosistitrationsuntersuchung (Beispiel 1) vergleicht.
2 ist ein Diagramm, welches den gleichen Vergleich wie 1, aber an Tag 14 zeigt.
3 ist ein Diagramm, welches den mittleren individuellen Chalimus (Stadien I, II, III und IV) pro Fisch für die Kontrollgruppe gegenüber der Gruppe, welche eine Dosis von 50 μg/kg erhalten hat, am Tag 7 im Rahmen der Dosisbestätigungsuntersuchung (Beispiel 3) vergleicht.
4 ist ein Diagramm, welches den gleichen Vergleich wie 3, aber am Tag 14 zeigt.
DETAILLIERTE BESCHREIBUNG DER ERFINDUNG
Emamectin (4''-Desoxy-4''-epimethylaminoavermectin B₁), das hergestellt werden kann, wie in dem U.S.-Patent Nr. 5,288,710 oder dem U.S.-Patent Nr. 5,399,717 beschrieben, ist eine Mischung von zwei Homologen, 4''-Desoxy-4''-epimethylaminoavermectin Bla und 4''-Desoxy-4''-epimethylaminoavermectin Blb. Es wird vorzugsweise ein Salz von Emamectin verwendet. Nicht-einschränkende Beispiele von Salzen von Emamectin, die im Rahmen der Erfindung verwendet werden können, umfassen die Salze, die in U.S. 5,288,710 beschrieben sind, z. B. Salze, die von Benzoesäure, substituierter Benzoesäure, Benzolsulfonsäure, Citronensäure, Phosphorsäure, Weinsäure, Maleinsäure u. s. w. abgeleitet sind. Am meisten bevorzugt ist das im Rahmen der Erfindung verwendete Emamectinsalz Emamectinbenzoat.
Es ist überraschenderweise festgestellt worden, dass Emamectin, wenn es in den Dosierungskonzentrationen und im Rahmen des Dosierungsplans gemäß dieser Erfindung verwendet wird, für Fischpopulationen nicht toxisch ist. Dies ist eine besonders überra schende Entdeckung angesichts der Tatsache, dass festgestellt worden ist, dass Ivermectin in relativ niedrigen Konzentrationen toxisch ist. Da Ivermectin aufgrund von Toxizitätsbedenken nicht an aufeinanderfolgenden Tagen verabreicht werden kann, besteht ein substantielles Risiko, dass nicht alle Fische in einer gegebenen Population aufgrund von übermäßig aggressiven Futterverzehrern eine angemessene Dosis erhalten werden. Die Fähigkeit, Emamectin über wenigstens mehrere aufeinanderfolgende Tage hinweg zu verfüttern, ist ein signifikanter Vorteil gegenüber Ivermectin, da eine Fütterung über mehrere Tage hinweg die Wahrscheinlichkeit erhöht, dass mehr Fische in einer gegebenen Population dieses verzehren.
Emamectin und dessen Salze können gemäß der Erfindung verwendet werden, um alle Arten von Fischparasiten, einschließlich Ektoparasiten wie auch Endoparasiten, zu eliminieren oder zu reduzieren. Beispiele von Endoparasiten, die eliminiert oder reduziert werden können, umfassen, sind aber nicht beschränkt auf: jene, die zu dem Phylum Platyhelminthes (Klassen Monogenea, Digenea und Cestoda), dem Phylum Aschelminthes (Klasse Nematoda) und den Protozoen gehören (z. B. Myxozoen-Infektionen (Phylum Myxozoa), Microsporida-Infektionen (Phylum Microspora), Coccidia-Infektionen (Phylum Apicomplexa) und das Phylum Ciliophora). Beispiele von Ektoparasiten, die eliminiert oder reduziert werden können, umfassen, sind aber nicht beschränkt auf: Monogenea; Parasiten aus dem Phylum Arthropoda (Klasse Crustacea, Unterklasse Branchiura und Unterklasse Copepoda (z. B. einschließlich der Ordnungen Cyclopidea, Caligidea und Lernaeopodidea)); und Parasiten aus der Ordnung Argulus und dem Phylum Isopoda.
Die Emamectin-Behandlung der Erfindung hat sich als besonders wirksam als eine Behandlung von Meerasseln oder -läusen, d. h. Parasiten, die zu der Unterklasse Copepoda, Ordnung Caligidea gehören, speziell jene, die zu den Gattungen Lepeophtheirus und Caligus gehören, erwiesen.
Mit Emamectin kann eine jegliche Fischspezies, einschließlich Süßwasser- und Salzwasservarietäten, behandelt werden, um Parasiten zu eliminieren oder zu reduzieren. Beispiele von Fischen, die behandelt werden können, umfassen, sind aber nicht beschränkt auf: Lachs, Forelle, Wels, Zackenbarsch, Thunfisch, Heilbutt, arktischer Saibling, Stör, Steinbutt, Flunder, Seezunge, Karpfen, Tilapia, Streifenbarrel, Aal, Meerbrasse, Gelbschwanz, Amberfisch, Barsch und Milchfisch.
Die Emamectin-Dosis, die zur Reduzierung, Eliminierung oder Vorbeugung von Parasiten wirksam ist, kann durch einen Tierarzt routinemäßig bestimmt werden, obwohl sie abhängig von der behandelten Fischspezies, den jeweiligen beteiligten Parasiten und dem Ausmaß des Befalls variieren kann. Emamectin oder ein Salz davon wird vorzugsweise in einer Dosis von 25 μg bis 400 μg/kg Fischbiomasse pro Tag, mehr bevorzugt 25 μg bis 100 μg/kg Fischbiomasse pro Tag, am meisten bevorzugt 50 μg bis 75 μg/kg Fischbiomasse pro Tag verfüttert.
Die Emamectin-Behandlung wird täglich für eine Dauer von 3 bis 14 Tagen, vorzugsweise für 7–14 Tage, am meisten bevorzugt für 1 Woche verabreicht. Es ist überraschenderweise entdeckt worden, dass Emamectin eine anhaltende Wirksamkeit für bis zu 8 bis 10 Wochen nach der Behandlung zeigt. Folglich kann Emamectin als eine prophylaktische Maßnahme zur Vorbeugung des Auftretens von Parasiten verabreicht werden.
Der erfindungsgemäße Kit kann in einer jeglichen Form, welche für eine Bereitstellung eines Vorrats an Emamectin für wenigstens 7 Tage geeignet ist, zusammen mit schriftlichen Instruktionen zur Verabreichung von diesem gemäß den oben beschriebenen Dosierungskonzentrationen und -plänen, vorliegen. Beispiele umfassen, sind aber nicht beschränkt auf verschiedene Behälter (z. B. Flaschen, Kartonverpackungen, Blisterverpackungen und Ampullen), die entweder von einer Verpackungsbeilage, welche die zyklischen Dosierungsinstruktionen beschreibt, begleitet werden oder wobei die Dosierungsanweisungen auf dem Behälter aufgedruckt oder an diesem befestigt sind. Das Emamectin oder Emamectinsalz in dem Kit kann in Form einer Vormischung ("pre-mix"), welche ein oder mehrere Verdünnungsmittel und 0,01 bis 1 Gew.-% Emamectin oder Emamectinsalz umfasst, vorliegen.
Das medizinische oder Arzneimittel enthaltende Fischfutter kann hergestellt werden, indem eine geeignete Menge Emamectin oder eines Salzes davon in ein kommerziell erhältliches Fischfutterprodukt eingemischt wird, um die gewünschten Dosierungskonzentrationen zu erreichen. Die in das Fischfutter eingemischte Menge von Emamectin wird von der Rate, mit der die Fische gefüttert werden, abhängen. Für Fische, die mit einer Rate von 0,2% bis 4% Biomasse/Tag gefüttert werden, enthält das Arzneimittel enthaltende Futter vorzugsweise 0,5 bis 100 mg Emamectin oder ein Salz davon pro kg Arzneimittel enthaltendes Futter, mehr bevorzugt 1 bis 50 mg pro kg Arzneimittel enthaltendes Futter und am meisten bevorzugt 5 bis 15 mg/kg Arzneimittel enthaltendes Futter.
Obwohl Emamectin in eine Futtermischung vor dem Pelletieren eingemischt werden kann, wird das Arzneimittel enthaltende Futter vorzugsweise hergestellt, indem Futterpellets mit Emamectin überzogen werden. Für das Überziehen von Futterpellets ist es vorzuziehen, eine Vormischung zu verwenden, enthaltend:

(a) 0,01 bis 1 Gew.-% Emamectin oder ein Salz davon;
(b) 0,001 bis 0,2 Gew.-% eines Konservierungsmittels;
(c) 1 bis 4 Gew.-% Propylenglycol oder Polyethylenglycol; und
(d) QS-Verdünnungsmittel.

Das Konservierungsmittel ist vorzugsweise butyliertes Hydroxyanisol (BHA). Es wird vorzugsweise Propylenglycol verwendet. Das Verdünnungsmittel kann ein jegliches der üblicherweise verwendeten Verdünnungsmittel sein, z. B. Lactose, Maltodextrin, Maisstärke, Calciumcarbonat, mikrokristalline Cellulose, Reissamenhülsen oder Maiskolben. Das Verdünnungsmittel ist vorzugsweise Maltodextrin, Maisstärke oder eine Mischung davon. Eine besonders bevorzugte Vormischung enthält 0,2 Gew.-% Emamectinbenzoat, 0,01 Gew.-% butyliertes Hydroxyanisol, 2,5 Gew.-% Propylenglycol, 49,8 Gew.-% Maisstärke und QS-Maltodextrin M-100. Die Vormischung wird vorzugsweise unter Verwendung eines Mischer/Granulators mit hoher Scherung unter Verwendung der folgenden Vorgehensweise hergestellt: BHA in Propylenglycol unter Rühren lösen. Stärke in einen Mischer/Granulator mit hoher Scherung einfüllen. Die BHA-Lösung langsam unter Mischen zu der Stärke hinzugeben. Das Mischen 20–40 min (Ziel: 30 min) fortsetzen, um zu ermöglichen, dass die Stärke die Lösung absorbiert. Die Innenwand der Mischschale abschaben, um jegliches anhaftendes Material zu entfernen. Das Arzneimittel durch ein 20 mesh-Sieb in die Mischerschale einfüllen. 10 Minuten mischen und zerhacken (Zerhacker angestellt). Das Maltodextrin in die Mischerschale geben und weitere 10 min mischen/zerhacken. Für das Verpacken entnehmen.
Alternativ kann das folgende Bandmischer-Verfahren verwendet werden: Das BHA in Propylenglycol unter Rühren lösen. Die Stärke in einen kleineren Bandmischer (Größe ungefähr eine halbe Charge) füllen. Den Bandmischer anstellen und die BHA-Lösung langsam zu der Stärke hinzugeben. Mischen, bis gleichförmig. Den Mischer stoppen und die Mischung ungefähr 30–60 min in dem Mischer belassen. Eine kleine Menge der Mischung (1–5% des Volumens der Charge) in ein kleines Planetenrührwerk entnehmen. Das Arzneimittel zu dem Planetenrührwerk hinzugeben und 5 min mischen. Die Arzneimittelvormischung zurück in den Bandmischer transferieren und 10–30 min mischen. Die Arzneimittelmischung aus dem Bandmischer entnehmen und durch eine Feinzerkleinerungsmühle (Fitzmill) leiten, um Klumpen aufzubrechen. Das gemahlene Material in einen anderen Bandmischer transferieren. Das Maltodextrin zu dem Mischer hinzusetzen und 10–30 min mischen. Für das Verpacken entnehmen.
Die Futterpellets können mit der Vormischung durch entweder ein Trockenüberzugsverfahren oder ein Ölüberzugsverfahren überzogen werden. Bei dem Trockenüberzugsverfahren wird die Vormischung mit den Pellets gemischt, so dass diese gleichförmig auf den Pellets verteilt wird, und es wird erwärmtes Fisch- oder pflanzliches Öl zu der Mischung hinzugesetzt, um die Pellets gründlich zu überziehen. Bei dem Ölüberzugsverfahren wird die Vormischung zuerst mit einem kleinen Volumen erwärmtem Fisch- oder pflanzlichem Öl gemischt, die dann mit den Pellets gemischt wird, um diese gleichförmig auf diesen zu dispergieren, und es wird zusätzliches erwärmtes Fisch- oder pflanzliches Öl zu den überzogenen Pellets hinzugesetzt und gemischt, bis die Pellets gründlich überzogen sind.
Die folgenden Beispiele veranschaulichen die vorangegangene Erfindung, obwohl solche Beispiele nicht so verstanden werden sollten, dass sie den Umfang der Erfindung beschränken.
BEISPIELE
Es wurden im Institute of Aquaculture Marine Environmental Research Laboratory in Machrihanish, Schottland, drei Untersuchungen ausgeführt. Atlantischer Lachs, Salmo salar L., Fische im Stadium nach dem Flussabwärtsziehen im 2. Jahr ("post-smolts"), wurden von einem krankheitsfreien Bestand erworben und bei der Testanlage akklimatisiert.
Die Fische wurden in Wiederholungsversuchsgruppen in Kunststofffaserbehältern, jeweils mit einem Volumen von 0,54 m³, gehalten. Jeder Behälter wurde mit natürlichem Meerwasser bei Umgebungstemperatur (7–14°C) und -salinität (30–35 ppt) mit Flussraten von ungefähr 18 l/min versorgt. Die Behälter waren mit Maschensieben über dem Wasserauslass ausgestattet, um nicht-verzehrte Fischpellets zurückzuhalten. Die Fische wurden täglich hinsichtlich ihres Verhaltens und abträglicher Arzneimittelreaktionen beobachtet. Die Fischmortalität und das Auftreten von bedeutenden Schäden aufgrund von Meerasseln bzw. -läusen wurden ebenfalls aufgezeichnet.
Infestation durch Meerasseln bzw. -läuse
Die Meerasseln bzw. -läuse wurden während des Erntens auf kommerziellen Lachsfarmen an der Westküste von Schottland gesammelt. Von trächtigen weiblichen Asseln bzw. Läusen gesammelte Eierstränge wurden in Meerwasser bei Umgebungstemperatur und in einem Salinitätsbereich von 32–35 ppt inkubiert. Sobald die geschlüpften Larven das Copepodit-Stadium erreicht hatten, wurden 38–170 Copepodite pro Fisch zu jedem der vier Wiederholungsversuchsbehälter mit Fischen hinzugesetzt und die Wasserzufuhr zu jedem Behälter wurde für ungefähr drei Stunden abgeschaltet, um die Anheftung von Copepoditen an den Fischen zu ermöglichen. Dies wurde 4-5-mal in Abständen von 3–5 Tagen wiederholt, bis die Chalimus-Stadien I, II, III und IV vorlagen. Die Chalimus-Zahlen wurden am Tag –1 oder Tag –2 vor der Behandlung an Unterproben von Fischen (N = 6 – 9 Fische pro Behälter) ausgewertet. An diesem Punkt wurden die Fische mit vorerwachsenen (prä-adulten) oder erwachsenen Asseln bzw. Läusen infestiert, indem 5–10 Asseln bzw. Läuse pro Fisch zu jedem Behälter hinzugesetzt wurden. Die Wasserzufuhr zu jedem Behälter wurde ungefähr eine Stunde lang abgeschaltet, bis alle Asseln bzw. Läuse sich an die Fische angeheftet hatten. Die Assel- bzw. Läusezahlen vor der Behandlung basierten auf einer Unterprobe der gesamten Population und sind als die mittlere Anzahl von Chalimus pro Fisch angegeben. Dann wurden die Fische zufallsgesteuert aus den vier ursprünglichen Behältern zu jeweils Kontroll- oder Behandlungsbehältern umverteilt, wie in der Versuchsgestaltung für jede Untersuchung beschrieben, und es wurden während oder nach der Behandlung keine weiteren Infestationen ausgeführt.
Arzneimittel enthaltendes Futter
Die Grundverpflegung bestand aus Fulmar^TM (BOCM Pauls Ltd.)-3,5 oder 5 mm-Lachsfutterpellets. Emamectinbenzoat wurde in Propylenglycol gelöst und mit Fischöl vor dem Überziehen der Futterpellets mit einer Deckschicht gemischt. Kontrollfutter wurde auf die gleiche Weise mit Propylenglycol und Fischöl hergestellt. Die Behandlung wurde in nominalen Dosisraten von 0, 25, 50 und 100 μg/kg Fischbiomasse pro Tag mit einer Fütterungsrate von 0,5% Biomasse für eine Dauer von sieben aufeinanderfolgenden Tagen (Tage 0–6) verabreicht. Der tatsächliche tägliche Futterverzehr wurde in jedem Behälter gemessen, indem die nicht-verzehrten Futterpellets ungefähr dreißig Minuten nach der Verabreichung gesammelt wurden und die Anzahl von Pellets von der täglichen verfütterten Verpflegung abgezogen wurde. Die mittlere verzehrte Dosis wurde für jede Gruppe, wie folgt, berechnet:
Mittlerer Futterverzehr (%) × nominale Dosisrate (μg/kg) = Mittlere verzehrte Dosis (μg/kg)
Auswertung der Meerasseln bzw. -läuse
Die Auswertung der Meerassel- bzw. -läusezahlen wurde an den Tagen 7, 14 und 21 nach dem Beginn der Behandlung ausgeführt. Die Fische wurden in 40 mg/l Ethyl-p-aminobenzoat (Benzocain) anästhesiert und jeder Fisch wurde unter einem leistungsschwachen Mikroskop untersucht. Die Läuse wurden als Chalimus-Stadien I-IV, vorerwachsenes (prä-adultes) Stadium I oder II und Erwachsenenstadium identifiziert. Vorerwachsene (prä-adulte) und erwachsene Asseln bzw. Läuse wurden zusätzlich als Männchen oder Weibchen identifiziert. Die Anzahlen von jeder Entwicklungsstufe wurden aufgezeichnet. Jegliche Asseln bzw. Läuse, die sich in der Anästhesielösung abgelöst hatten, wurden in die Zahlen mit aufgenommen und hefteten sich an den Fisch wieder an, nachdem dieser in frisches Meerwasser transferiert worden war. Die Fische wurden in die Haltebehälter nach der Probennahme zurückgegeben und die gleichen Fische wurden an den Tagen 7, 14 und 21 ausgewertet.
BEISPIEL 1
Dosistitrationsuntersuchung
Die Wassertemperatur betrug 7–10°C und die Salinität betrug 33–34 ppt. Vor der Behandlung betrugen die mittleren Fischgewichte 192 g (±30 g Standardabweichung). Emamectinbenzoat wurde in nominalen täglichen Dosisraten von 0, 25, 50 und 100 μg/kg Fischbiomasse verabreicht. Es gab zwei Wiederholungsversuchsbehälter pro Behandlung mit einer Probengröße von 19 oder 20 Fischen pro Behälter. Die Ergebnisse dieser Untersuchung sind in Tabelle 1 unten angegeben.
Tabelle 1. Dosistitrationsuntersuchung: Wirksamkeit von Emamectinbenzoat gegenüber induzierten Infestationen von Meerasseln bzw. -läusen, Lepeophtheirus salmonis, an atlantischem Lachs, Salmo salar. Die Fische erhielten Arzneimittel enthaltendes Futter mit einer Rate von 0,5% Biomasse pro Tag für 7 aufeinanderfolgende Tage (Tag 0 – Tag 6). Die mittlere Anzahl von Meerasseln bzw. -läusen wurde an den Tagen 7, 14 und 21 bestimmt. Der Mittelwert und die Standardabweichung sind aus den gepoolten Daten von zwei Wiederholungsversuchsbehältern abgeleitet (Probengröße N = 19 oder 20 Fische pro Behälter).
BEISPIEL 2
Dosisbestätigungsuntersuchung I
Die Wassertemperatur betrug 12–14°C und die Salinität betrug 33–35 ppt. Vor der Behandlung betrugen die mittleren Fischgewichte 224 g (±43 g Standardabweichung). Emamectinbenzoat wurde in nominalen täglichen Dosisraten von 0, 25 und 50 μg/kg Biomasse verabreicht. Es gab drei Wiederholungsversuchsbehälter pro Behandlung mit 15 Fischen pro Behälter. Jedoch verringerten in dieser Untersuchung Fischmortalitäten die Anzahl von für eine Parasitenauswertung zur Verfügung stehenden Fischen am Ende der Studie auf 9, 10 & 14 in den 25 μg/kg-Gruppen, 10, 12 & 13 in den 50 μg/kg-Gruppen und nur 2, 5 & 5 in den Kontrollgruppen.
Aus diesem Grund wurde eine zweite Untersuchung, die Dosisbestätigungsuntersuchung II (Beispiel 3 unten), ausgeführt. Die Ergebnisse dieser Untersuchung sind in Tabelle 2 unten angegeben.
Tabelle 2. Dosisbestätigungsuntersuchung I: Wirksamkeit von Emamectinbenzoat gegenüber induzierten Infestationen von Meerasseln bzw. -läusen, Lepeophtheirus salmonis, an atlantischem Lachs, Salmo salar. Die Fische erhielten Arzneimittel enthaltendes Futter mit einer Rate von 0,5% Biomasse pro Tag für 7 aufeinanderfolgende Tage (Tag 0–Tag 6). Die mittlere Anzahl von Meerasseln bzw. -läusen wurde an den Tagen 7, 14 und 21 bestimmt. Der Mittelwert und die Standardabweichung sind aus den gepoolten Daten der drei Wiederholungsversuchsbehälter abgeleitet (Probengröße N = 2 – 15 Fische pro Behälter).
BEISPIEL 3
Dosisbestätigungsuntersuchung II
Die Wassertemperatur betrug 9–12°C und die Salinität betrug 30–34 ppt. Vor der Behandlung betrugen die mittleren Fischgewichte 418,2 g (±49 g Standardabweichung). Emamectinbenzoat wurde in nominalen täglichen Dosisraten von 0 und 50 μg/kg Biomasse verabreicht. Es gab drei Wiederholungsversuchsbehälter pro Behandlung mit einer Probengröße von 15–16 Fischen pro Behälter. Die Ergebnisse dieser Untersuchung sind in Tabelle 3 unten angegeben.
Tabelle 3. Dosisbestätigungsuntersuchung II: Wirksamkeit von Emamectinbenzoat gegenüber induzierten Infestationen von Meerasseln bzw. -läusen, Lepeophtheirus salmonis, an atlantischem Lachs, Salmo salar. Die Fische erhielten Arzneimittel enthaltendes Futter mit einer Rate von 0,5% Biomasse pro Tag für 7 aufeinanderfolgende Tage (Tag 0–Tag 6). Die mittlere Anzahl von Meerasseln bzw. -läusen wurde an den Tagen 7, 14 und 21 bestimmt. Der Mittelwert und die Standardabweichung sind aus den gepoolten Daten der drei Wiederholungsversuchsbehälter abgeleitet (Probengröße N = 15–16 Fische pro Behälter).
Datenhandhabung
Die Ergebnisse wurden als Chalimus (Chalimus-Stadien I-IV), bewegliche Asseln bzw. Läuse (Vorerwachsenen- (prä-adultes) und Erwachsenenstadium) und gesamte Asseln bzw. Läuse (Chalimus- und bewegliche Stadien kombiniert) zusammengefasst. Daten über die Anzahl von Asseln bzw. Läusen pro Fisch wurden F-Tests auf Varianzhomogenität und einem Korrelationstest, um die Verteilungsnormalität zu untersuchen, unterworfen. Die Fischgewichte und die Assel- bzw. Läusezahlen vor der Behandlung wurden durch Ein-Weg-ANOVA getestet. Wenn die Varianzen nicht heterogen oder normal verteilt waren, wurden die Assel- bzw. Läusezahlen nach der Behandlung unter Verwendung des nicht-parametrischen Dunn-Tests (Zar 1984) analysiert.
In allen drei Untersuchungen gab es keine signifikanten Unterschiede (P > 0,05) bei den Chalimus- oder bewegliche Asseln- bzw. Läusezahlen zwischen jedem der Wiederholungsversuchsbehälter bei jeder der Kontroll-, 25, 50 oder 100 g/kg-Gruppen zu einem jeglichen Zeitpunkt. Dies ermöglichte, dass die Mittelwertdaten für jeden Satz von Wiederholungsversuchsbehältern in den Tabellen 1, 2 und 3 gepoolt werden konnten. Die Daten wurden jedoch für jeden Wiederholungsversuchsbehälter auch getrennt analysiert.
Die prozentuale Reduktion bei dem Mittelwert der Meerasseln bzw. -läuse bezogen auf die Kontrollgruppen wurde für jede Dosis, wie folgt, berechnet:
Eine Zusammenfassung der Ergebnisse für jede der drei Untersuchungen ist in Tabelle 4 unten aufgeführt.
Tabelle 4. Zusammengefasste Daten für die Dosistitrationsuntersuchung, Dosisbestätigungsuntersuchung I und Dosisbestätigungsuntersuchung II am Tag 21: Wirksamkeit von Emamectinbenzoat gegenüber induzierten Infestationen von Meerasseln bzw. -läusen, Lepeophtheirus salmonis, an atlantischem Lachs, Salmo salar. Die Fische erhielten Arzneimittel enthaltendes Futter mit einer Rate von 0,5% Biomasse pro Tag für 7 aufeinanderfolgende Tage (Tag 0 –Tag 6).

% Reduktion: ist die Verringerung der Meerassel- bzw. -läusezahlen bezogen auf die Kontrollgruppe berechnet ausgehend von den gepoolten Mittelwerten der Wiederholungsversuche für jede Behandlungsgruppe.

Analyse und Diskussion der Ergebnisse
Der Futterverzehr in den behandelten Gruppen reichte von 81–92%. Die tatsächlichen mittleren verzehrten Dosen wurden für jede Gruppe berechnet und sind in den Tabellen 1, 2 und 3 zusammen mit den nominalen Dosisraten angegeben. Der Futterverzehr reichte von 77–90% in den Kontrollgruppen. Es wurde beobachtet, dass das Fütterungsverhalten und die Aktivität bei einigen der Kontrollgruppen über den Untersuchungszeitraum abnahmen. Dies wurde mit den höheren Assel- bzw. Läusekonzentrationen an Kontrollfischen in Verbindung gebracht und war am bemerkenswertesten, wenn die Meerassel- bzw. -läuseaktivität zunahm, wenn die Chalimus-Stadien zu den destruktiveren beweglichen Stadien heranreiften. Es gab am Ende von jeder Untersuchung keine signifikanten Unterschiede (P > 0,05) bei den mittleren Fischgewichten zwischen jeder der Behandlungs- und Kontrollgruppen.
Der Behandlung mit Emamectinbenzoat wurden bei jeder der untersuchten Dosen keinerlei abträgliche Wirkungen oder Fischmortalität zugeschrieben. Es gab bei der Dosistitrationsuntersuchung oder der Dosisbestätigungsuntersuchung II wenig Fischmortalität, aber aufgrund der hohen Assel- bzw. Läusezahlen trat eine Anzahl von Mortalitäten oder Aussonderungen bei der Dosisbestätigungsuntersuchung I auf (Tabelle 4).
Dosistitrationsuntersuchung
Zu Beginn der Untersuchung betrug die gesamte mittlere Anzahl von Chalimus pro Fisch vor der Behandlung basierend auf einer Unterprobe von zehn Fischen pro Behälter 58,1 (±21,9). Es gab keine signifikanten Unterschiede (F_3,36 = 1,70, P > 0,05) bei den Infestationskonzentrationen zwischen Behältern vor der Umverteilung und der Behandlung. Die mittlere Anzahl von Asseln bzw. Läusen vor der Behandlung einschließlich beweglicher Spezies betrug 63–68 pro Fisch.
Die Ergebnisse der Dosistitrationsuntersuchung sind in Tabelle 1 gezeigt. Bereits am Tag 7 waren die gesamten Anzahl von Asseln bzw. Läusen pro Fisch um 35,4–37,5% in allen Behandlungsgruppen verglichen mit den Kontrollgruppen verringert. Am Tag 21 war die mittlere Anzahl von Asseln bzw. Läusen pro Fisch um 89,8, 95,2 bzw. 95,8% in den 25, 50 und 100 μg/kg-Gruppen verringert. Die Kontrollgruppen wiesen einen Mittelwert von 34,5 Asseln bzw. Läusen pro Fisch auf, während bei einer Dosis von 50 μg/kg der Mittelwert nur 1,7 betrug. Die Anzahlen von Asseln bzw. Läusen bezogen auf die Kontrollgruppen waren sowohl bei der 50 als auch der 100 μg/kg-Dosisrate nach 7, 14 (P < 0,05) und 21 (P < 0,001) Tagen nach dem Beginn der Behandlung signifikant verringert. Es gab jedoch keinen signifikanten Unterschied zwischen den Dosisraten von 50 und 100 μg/kg.
Die Daten wurden auch getrennt für die Chalimus- und beweglichen Stadien analysiert und zeigten, dass von Tag 7 bis Tag 21 die mittlere Anzahl von beweglichen Asseln bzw. Läusen in den Kontrollgruppen von einem Mittelwert von 26,7 auf 34,5 pro Fisch aufgrund der Chalimus-Reifung zunahm (Tabelle 1). Im Gegensatz dazu fielen die mittleren Anzahlen von beweglichen Asseln bzw. Läusen in den behandelten Gruppen auf so wenig wie 0,1–1,1 pro Fisch am Tag 21 ab.
Die mittleren Anzahlen von Chalimus nahmen auch in den Kontrollgruppen ab, da diese reiften, was zu einer Zunahme bei der Anzahl von beweglichen Stadien führte (Tabelle 1). Jedoch nahm bei allen drei behandelten Gruppen die mittlere Anzahl von Chalimus langsamer ab und es gab keine entsprechende Zunahme bei der Anzahl von beweglichen Stadien. An den Tagen 14 und 21 waren die Chalimus-Zahlen bei allen drei behandelten Gruppen höher als in den Kontrollgruppen. Jedoch wiesen viele der auf behandeltem Fisch vorhandenen Chalimus ein abnormales Erscheinungsbild auf und wurden als tot oder nicht-lebensfähig angesehen. Am Tag 7 gab es auf behandeltem Fisch mehr Chalimus I- und II-Stadien als auf Kontrollfisch, der einen höheren Anteil von Chalimus III- und IV-Stadien aufwies, wie in 1 gezeigt. Am Tag 14 ( 2) waren auf behandeltem Fisch nach wie vor Chalimus I- und II-Stadien vorhanden, während Kontrollfisch keinen Chalimus I oder II aufwies und nur einige wenige Chalimus III- und IV-Stadien übrigblieben.
Am Tag 21 wiesen viele der behandelten Fische keine beweglichen Asseln bzw. Läuse mehr auf, während einige Fische vollständig frei von sowohl Chalimus- als auch beweglichen Asseln bzw. Läusen waren. Im Gegensatz dazu war keiner der Kontrollfische vollständig frei von beweglichen Asseln bzw. Läusen (Tabelle 4).
Dosisbestätigungsuntersuchung I
Zu Beginn der Untersuchung betrug die mittlere gesamte Anzahl von Chalimus pro Fisch vor der Behandlung basierend auf einer Unterprobe von neun Fischen pro Behälter 82,3 (±36,6). Es gab keine signifikanten Unterschiede (F_3,36 = 0,55, P > 0,05) bei den Infestationsniveaus zwischen Behältern vor der Umverteilung und der Behandlung. Die mittlere gesamte Anzahl von Asseln bzw. Läusen vor der Behandlung einschließlich beweglicher Spezies betrug 87–92 pro Fisch.
In dieser Untersuchung starb eine Anzahl von Fischen oder wurde ausgesondert als Ergebnis der erreichten hohen Infestationsniveaus. Bei den Kontrollgruppen, wo die Assel- bzw. Läusezahlen hoch blieben, starben 75% der Fische oder wurden ausgesondert, während nur 27% der mit 50 μg/kg behandelten Fische starben oder ausgesondert wurden (Tabelle 4). Eine Untersuchung der toten Fische in den Kontrollgruppen enthüllte sehr hohe Anzahlen von beweglichen Asseln bzw. Läusen und es ist wahrscheinlich, dass die Kontrollfische, die bis Tag 21 überlebten, jene waren, bei denen weniger Asseln bzw. Läuse vorhanden waren. Dementsprechend hätte die mittlere Anzahl von Asseln bzw. Läusen pro Fisch am Tag 21 viel höher sein können, wenn die gesamten Kontrollfische überlebt hätten. Die gesamten Mortalitäten und ausgesonderten Fische wurden Schäden zugeschrieben, die durch Meerassel- bzw. -läuseaktivität beigebracht worden sind. Die Meerassel- bzw. -läuseschädigung sowohl an Kontroll- als auch behandelten Fischen zeigte sich als Flächen von Erosion der Epidermis in der kranialen und dorsalen Region und wurde von verringerter Fütterungsaktivität bei diesen Individuen begleitet. Am Tag 21 war das allgemeine Erscheinungsbild und das Fütterungsverhalten von Fischen in den behandelten Gruppen bedeutend verbessert. Im Gegensatz dazu wiesen die wenigen überlebenden Fische in den Kontrollgruppen Schäden durch Asseln bzw. Läuse auf und zeigten weiterhin eine verringerte Reaktion auf Futter.
Die Ergebnisse der Dosisbestätigungsuntersuchung I sind in Tabelle 2 gezeigt. In den behandelten Gruppen waren die gesamten mittleren Anzahlen von Asseln bzw. Läusen am Tag 7 verglichen mit den Kontrollgruppen bereits um 44–54% verringert und am Ende des Versuchs am Tag 21 waren die mittleren Anzahlen von Asseln bzw. Läusen in den 25 μg/kg-Gruppen um 82% und in den 50 μg/kg-Gruppen um 94% verringert. Bei der höchsten Dosisrate von 50 μg/kg waren die Meerassel- bzw. -läusezahlen verglichen mit zwei der drei Kontrollgruppen an den Tagen 14 und 21 signifikant verringert (P < 0,05). Der dritte Kontroll-Wiederholungsversuch hatte am Ende der Untersuchung eine Probengröße von nur zwei Fischen und wurde denentsprechend in die Analyse nicht mit aufgenommen. Obwohl es keine signifikanten Unterschiede zwischen in dividuellen Wiederholungsversuchen der Kontroll- und 25 μg/kg-Gruppen gab, wenn die Daten gepoolt wurden, um eine größere Probengröße zu erhalten, gab es einen signifikanten Unterschied (P < 0,001) zwischen diesen beiden Behandlungen. Es gab auch keine signifikanten Unterschiede zwischen den 25 μg/kg-Wiederholungsversuchen und zwei der 50 μg/kg-Wiederholungsversuche, aber wieder wiesen die beiden Dosisraten, wenn die Daten für diese Gruppen gepoolt wurden, signifikante Unterschiede auf (P < 0,001). Am Tag 21 betrugen die gepoolten mittleren Anzahlen von Asseln bzw. Läusen in den Kontrollgruppen 27,3 pro Fisch, 4,9 in der 25 μg/kg-Gruppe bzw. 1,6 in der 50 μg/kg-Gruppe.
Obwohl es relativ wenig bewegliche Vorerwachsenen- und Erwachsenen-Stadien zu Beginn der Untersuchung gab, nahmen die Zahlen in allen Gruppen bis zu Tag 7 aufgrund der Chalimus-Reifung zu (Tabelle 2). Die Zunahme bei den Anzahlen von beweglichen Asseln bzw. Läusen an Fischen in den beiden behandelten Gruppen war geringer als jene, die in den Kontrollgruppen festgestellt wurde. Zwischen Tag 7 und 21 fielen die mittleren Anzahlen in den Kontrollgruppen durch natürliche Mortalität und, in dieser Untersuchung, aufgrund des Tods oder der Aussonderung der meisten stark befallenen Fische ab. In den behandelten Gruppen war die Verringerung bei den mittleren Assel- bzw. Läusezahlen über die Zeit sogar noch höher und am Tag 21 waren die gesamten Assel- bzw. Läusezahlen um 82–94% niedriger als in den Kontrollgruppen.
Tabelle 2 zeigt, dass die mittleren Chalimus-Zahlen in der Kontrollgruppe und der 25 μg/kg-Gruppe von dem Beginn der Untersuchung bis zu Tag 14 abfielen. An den Tagen 7 und 14 waren die Chalimus-Zahlen bei der 50 μg/kg-Gruppe geringfügig höher, aber wieder wurde festgestellt, dass die auf behandelten Fischen vorhandenen Chalimus-Formen nicht lebensfähig waren, so dass am Tag 21 es keinen verbleibenden Chalimus auf einem jeglichen der untersuchten Fische mehr gab.
Am Tag 21 waren 28,6% der Fische in den 50 μg/kg-Gruppen vollständig frei von sowohl Chalimus- als auch beweglichen Asseln bzw. Läusen (Tabelle 4). Im Gegensatz dazu waren nur 3% der Fische in der 25 μg/kg-Gruppe und keiner der Kontrollfische vollständig frei von Asseln bzw. Läusen.
Dosisbestätigungsuntersuchung II
Es gab keine signifikanten Unterschiede (F_3,20 = 0,428, P > 0,05) bei den Infestationsniveaus durch Chalimus-Formen zwischen Behältern vor der Umverteilung und der Behandlung. Die Anzahlen von Asseln bzw. Läusen vor der Behandlung betrug einschließlich beweglichen Spezies 79–84 pro Fisch.
Die in Tabelle 3 aufgeführten zusammengefassten Ergebnisse zeigen, dass bereits am Tag 7 die mittleren gesamten Anzahlen von Asseln bzw. Läusen in den 50 μg/kg-Gruppen bezogen auf die Kontrollgruppen um 46% und am Tag 21 um 95% verringert waren. Am Tag 21 wiesen die Kontrollgruppen einen gesamten Mittelwert von 38,1 Asseln bzw. Läusen pro Fisch auf, während die 50 μg/kg-Gruppen einen Mittelwert von nur 2,1 Asseln bzw. Läusen pro Fisch aufwiesen. Die Anzahlen von Asseln bzw. Läusen waren in allen drei mit 50 μg/kg behandelten Gruppen verglichen mit den drei Kontrollgruppen an den Tagen 7, 14 und 21 signifikant niedriger (P < 0,001).
Die mittlere Anzahl von beweglichen Asseln bzw. Läusen in den Kontrollgruppen zeigte eine Abnahme von 52,2 pro Fisch am Tag 7 auf 38,1 pro Fisch am Tag 21 (Tabelle 3). Über denselben Zeitraum fiel die mittlere Anzahl von beweglichen Asseln bzw. Läusen in den 50 μg/kg-Gruppen viel schneller ab und am Tag 21 gab es einen Mittelwert von nur 0,6 Asseln bzw. Läusen pro Fisch. Die mittleren Chalimus-Zahlen nahmen in den Kontrollgruppen mit der Reifung ab, so dass am Tag 14 praktisch kein Chalimus mehr vor handen war (Tabelle 3). Bei jeder Probennahme verblieb auf behandeltem Fisch mehr Chalimus als auf Kontrollfisch und am Tag 14 war dieser Unterschied statistisch signifikant (P < 0,001). Am Tag 21 wurde beobachtet, dass viele der auf behandeltem Fisch persistierenden Chalimus-Formen degenerierte Formen waren, und wurden als in der Entwicklung angehalten und nicht-lebensfähig angesehen. Die 3 und 4 zeigen die Anteile von jedem Chalimus-Stadium in den Kontroll- und behandelten Gruppen an den Tagen 7 und 14. Am Tag 7 gab es einen höheren Anteil von Chalimus I und II auf behandeltem Fisch, während Kontrollfisch mehr Chalimus III und IV aufwies (3). Am Tag 14 wies behandelter Fisch nach wie vor hauptsächlich die Chalimus-Stadien III und IV und einige Stadien I und II auf, während Kontrollfisch einen Mittelwert von nur 0,4 Chalimus IV pro Fisch aufwies ( 4).
Am Ende der Untersuchung wiesen 27% der behandelten Fische keine Chalimus- oder beweglichen Asseln oder Läuse mehr auf und 66% der Fische wiesen keine beweglichen Asseln bzw. Läuse mehr auf. Im Gegensatz dazu war keiner der Kontrollfische vollständig frei von Chalimus- oder beweglichen Läusen in einem jeglichen Stadium (Tabelle 4). Am Tag 21 wiesen 21% der Kontrollfische kraniale Läsionen auf, welche aus Meerassel- bzw. -läuseaktivität resultierten. An Fischen in den 50 μg/kg-Gruppen wurden keine kranialen Läsionen aufgezeichnet und es gab keine Fischmortalitäten bei einer jeden der behandelten Gruppen, wohingegen 4% der Kontrollfische in dieser Untersuchung aufgrund von Schäden durch Meerasseln bzw. -läuse ausgesondert wurden.
Eine orale Behandlung von atlantischem Lachs mit Emamectinbenzoat zeigte eine sehr gute Wirksamkeit gegenüber den beweglichen und Chalimus-Stadien von L. salmonis in allen drei Untersuchungen. Die Reduktionen bei den Parasitenzahlen nahmen über den 21-tägigen Untersuchungszeitraum zu. Es wurde festgestellt, dass eine Dosisrate von 50 μg/kg Emamectinbenzoat bei der Verringerung der Meerassel- bzw. -läusezahlen so wirksam ist wie 100 μg/kg. Trotz der Tatsache, dass die 25 μg/kg-Dosisrate sich in den meisten Fällen als wirksam erwies, wurden mit einer Dosisrate von 50 μg/kg konsistent höhere Verringerungen von 94–95% erzielt. Bei der Dosisbestätigungsuntersuchung I unterschied sich die mittlere gesamte Anzahl von Asseln bzw. Läusen auf mit 25 μg/kg behandeltem Fisch nicht signifikant von jener der Kontrollgruppen, während mit 50 μg/kg behandelter Fisch signifikant weniger Asseln bzw. Läuse aufwies als mit 25 μg/kg behandelter Fisch. In jener Untersuchung erhielten mit 25 μg/kg behandelte Gruppen basierend auf den Futterverzehrraten eine tatsächliche Dosisrate von nur 18,7–22,0 μg/kg. Bei Individuen mit schwerem Befall zu Beginn der Untersuchung bestand die Wahrscheinlichkeit, dass sie eine geringere Futteraufnahme und dementsprechend einen geringeren Arzneimittelverzehr zeigten und nicht in der Lage waren, von der Medikation vollständig zu profitieren. Dies führte zu einer relativ hohen Mortalitäts- und Aussonderungsrate in dieser Gruppe und diese wurden in allen Fällen einer Schädigung durch die Asseln bzw. Läuse zugeschrieben. Obwohl Chalimus-Zahlen auf behandeltem Fisch höher als auf Kontrollfisch blieben, zeigt das Fehlen einer jeglichen entsprechenden Zunahme bei der Anzahl von beweglichen Asseln bzw. Läusen und die verzögerte Entwicklung der verschiedenen Chalimus-Stadien klar, dass eine Behandlung mit Emamectinbenzoat gegenüber den unreifen Chalimus-Stadien hochwirksam ist.
Nach einer Behandlung mit einer Dosisrate von 50 μg/kg Emamectinbenzoat betrug der Prozentsatz von Fischen ohne vorhandene bewegliche Asseln bzw. Läuse sogar 87%. Obwohl der Prozentsatz von Fischen ohne vorhandene Asseln bzw. Läuse in einem jeglichen Stadium nur 20–30% betrug, wiesen die meisten Fische nur Chalimus-Stadien auf. Sogar obwohl viele der Chalimus auf behandelten Fischen ein abnormales Erscheinungsbild zeigten und als tot oder nicht-lebensfähig angesehen wurden, persistierten sie auf dem Fisch, da die Anheftungsstruktur, das frontale Filament, möglicherweise einige Zeit benötigt, um abgebaut zu werden, und damit eine Ablösung auftritt. Obwohl die Wirksamkeit gegenüber Chalimus-Stadien hilfreich ist, deren Entwicklung zu den destruktiveren beweglichen Stadien zu verhindern, ist eine schnelle Verringerung bei den Anzahlen von beweglichen Asseln oder Läusen ebenfalls wichtig, da sie für den Wirtsfisch viel akuter schädigend wirken. Bereits am Tag 7 nach dem Beginn der Medikation waren die Anzahlen von beweglichen Asseln oder Läusen auf mit 50 μg/kg behandeltem Fisch um bis zu 58–80% verringert.
Es wurde gezeigt, dass die Entfernung von Asseln bzw. Läusen nach einer Behandlung mit Emamectinbenzoat zu einer Verringerung der Epidermisläsionen, die durch den Parasiten beigebracht werden, führt. Bei der Dosisbestätigungsuntersuchung I resultierte die Schädigung durch Asseln bzw. Läuse in einer Anzahl von Mortalitäten und Aussonderungen von Fischen, was die Validität der Untersuchung verringerte. Aus diesem Grunde wurde die Untersuchung wiederholt, aber die Ergebnisse zeigen den schützenden Nutzen einer Behandlung mit Emamectin.
Die meisten der lizenzierten Behandlungen, die für eine Kontrolle von Infestationen durch Meerasseln bzw. -läuse zur Verfügung stehen, sind nicht gegen sowohl unreife Chalimus- als auch reife bewegliche Stadien wirksam (Roth, Richards & Sommerville, 1993) und Behandlungen müssen zeitlich sorgfältig abgestimmt werden, um sicherzustellen, dass die Hauptmenge der Asseln bzw. Läuse in einem empfindlichen Stadium im Lebenszyklus behandelt werden. Im Larvenstadium befindliche Asseln bzw. Läuse können nachfolgend die reproduktiven erwachsenen Stadien erreichen, so dass Populationen fortwährend regeneriert werden. Der Vorteil einer Behandlung, die gegenüber allen parasitären Stadien wirksam ist, besteht darin, dass Asseln bzw. Läuse an einem jeglichen Punkt im Lebenszyklus kontrolliert werden können, wodurch eine Reproduktion verhindert wird. Eine mittels des Futters erfolgende ("in-feed") Behandlung ermöglicht eine gleichzeitige Kontrolle in allen Käfigen, so dass Behandlungen von vollständigen Standorten und Gebieten möglich sind, wodurch die Häufigkeit von Behandlungen verringert wird.

Claims

Verwendung von Emamectin zur Herstellung einer Zusammensetzung eines medizinischen Fischfutters zur Eliminierung, Reduzierung oder Vorbeugung von Parasiten in einer Fischpopulation, bei dem man Emamectin oder ein Salz davon an die Fischpopulation in einer täglichen Dosierung von 25 μg bis 400 μg/kg Fischbiomasse pro Tag über eine Dauer von 3–14 Tagen verfüttert.
Verwendung gemäß Anspruch 1, bei der die Parasiten Endoparasiten sind.
Verwendung gemäß Anspruch 2, bei der Emamectinbenzoat verwendet wird.
Verwendung gemäß Anspruch 1, bei der die Parasiten Ectoparasiten sind.
Verwendung gemäß Anspruch 4, bei der Emamectinbenzoat verwendet wird.
Verwendung gemäß Anspruch 5, bei der Emamectinbenzoat in einer Menge von 25 bis 100 μg/kg Fischbiomasse/Tag für mindestens 7 Tage verfüttert wird.
Verwendung gemäß Anspruch 5, bei der Emamectinbenzoat in einer Menge von 50 bis 75 μg/kg Fischbiomasse/Tag für mindestens 7 Tage verfüttert wird.
Verwendung gemäß Anspruch 5, bei der die Parasiten Wasserläuse sind und die tägliche Dosierung über mindestens 7 Tage verabreicht wird.
Verwendung gemäß Anspruch 8, bei der Emamectinbenzoat in einer Menge von 25 bis 100 μg/kg Fischbiomasse/Tag verfüttert wird.
Verwendung gemäß Anspruch 9, bei der Emamectinbenzoat in einer Menge von 50 bis 75 μg/kg Fischbiomasse/Tag verfüttert wird.
Kit zur Herstellung eines medizinischen Fischfutters zur Eliminierung, Reduzierung oder Vorbeugung gegen Parasiten in einer Fischpopulation, umfassend einen Vorrat an Emamectin oder eines Salzes davon und gedruckte Anweisungen zur Fütterung des Emamectin oder Emamectinsalzes in ei ner täglichen Dosierung von 25 μg bis 400 μg/kg Fischbiomasse pro Tag für eine Dauer von 3–14 Tagen.
Kit gemäß Anspruch 11, bei dem das Emamectin Emamectinbenzoat ist und die Anweisungen eine tägliche Dosierung von 25 μg bis 100 μg/kg Fischbiomasse pro Tag für eine Dauer von 7–14 Tagen vorsehen.
Kit gemäß Anspruch 11, bei dem die Anweisungen eine tägliche Dosierung von 50 μg bis 75 μg/kg Fischbiomasse pro Tag für eine Phase von 7–14 Tagen vorsehen.
Kit gemäß Anspruch 11, bei dem die Anweisungen eine tägliche Dosierung von 50 μg/kg Fischbiomasse pro Tag über eine Phase von 1 Woche vorsehen.
Kit gemäß Anspruch 14, bei dem das Emamectinbenzoat eine Vormischung ist, die 0,01 bis 1 Gew.-% Emamectinbenzoat umfasst.
Kit gemäß Anspruch 15, bei dem die Vormischung folgendes umfasst: (a) 0,01 bis 1 Gew.-% Emamectinbenzoat; (b) 0,001 bis 0,2 Gew.-% eines Konservierungsmittels; (c) 1 bis 4 Gew.-% Polypropylenglykol oder Polyethylenglykol; und (d) QS Verdünnungsmittel.
Kit gemäß Anspruch 16, bei dem die vormischung folgendes umfasst: (a) 0, 02 Gew.-% Emamectinbenzoat; (b) 0,01 Gew.-% butyliertes Hydroxyanisol; (c) 2,5 Gew.-% Polypropylenglykol; (d) 49,8 Gew.-% Naisstärke; und (e) QS Maltodextrin M-100.