DE4432338C2 - Impfstoff zur Verhinderung des reproduktiven und respiratorischen Syndroms bei Schweinen - Google Patents
Impfstoff zur Verhinderung des reproduktiven und respiratorischen Syndroms bei SchweinenInfo
- Publication number
- DE4432338C2 DE4432338C2 DE19944432338 DE4432338A DE4432338C2 DE 4432338 C2 DE4432338 C2 DE 4432338C2 DE 19944432338 DE19944432338 DE 19944432338 DE 4432338 A DE4432338 A DE 4432338A DE 4432338 C2 DE4432338 C2 DE 4432338C2
- Authority
- DE
- Germany
- Prior art keywords
- virus
- prrs
- vaccine
- adjuvant
- vaccine according
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
- 241000282887 Suidae Species 0.000 title claims description 115
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims description 107
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 title claims description 20
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 title claims description 14
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 title claims description 7
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 152
- 208000005342 Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Diseases 0.000 claims description 85
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 claims description 74
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 55
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 claims description 46
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 43
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 41
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 40
- 210000001132 alveolar macrophage Anatomy 0.000 claims description 23
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims description 23
- 244000052769 pathogen Species 0.000 claims description 19
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 18
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 18
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 18
- 239000012071 phase Substances 0.000 claims description 17
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 16
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 16
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 claims description 14
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 14
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 13
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 13
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 12
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 claims description 11
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 claims description 9
- 208000009305 pseudorabies Diseases 0.000 claims description 9
- 208000005577 Gastroenteritis Diseases 0.000 claims description 8
- 230000007969 cellular immunity Effects 0.000 claims description 8
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 7
- 230000004044 response Effects 0.000 claims description 7
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 claims description 6
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 claims description 6
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 claims description 6
- -1 IL- 4 Proteins 0.000 claims description 5
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 claims description 5
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 claims description 5
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 claims description 4
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 4
- 229940031348 multivalent vaccine Drugs 0.000 claims description 4
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 claims description 4
- 241000606748 Actinobacillus pleuropneumoniae Species 0.000 claims description 2
- 241000588779 Bordetella bronchiseptica Species 0.000 claims description 2
- 241000711573 Coronaviridae Species 0.000 claims description 2
- 241000186810 Erysipelothrix rhusiopathiae Species 0.000 claims description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims description 2
- 241000606807 Glaesserella parasuis Species 0.000 claims description 2
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 claims description 2
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 claims description 2
- 108010002616 Interleukin-5 Proteins 0.000 claims description 2
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 claims description 2
- 241000589902 Leptospira Species 0.000 claims description 2
- 241000606856 Pasteurella multocida Species 0.000 claims description 2
- 241000702619 Porcine parvovirus Species 0.000 claims description 2
- 241000702670 Rotavirus Species 0.000 claims description 2
- 239000002502 liposome Substances 0.000 claims description 2
- 102000006240 membrane receptors Human genes 0.000 claims description 2
- 108020004084 membrane receptors Proteins 0.000 claims description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 2
- 229940051027 pasteurella multocida Drugs 0.000 claims description 2
- 235000015277 pork Nutrition 0.000 claims description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims 2
- 230000036647 reaction Effects 0.000 claims 2
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 claims 1
- 241001135989 Porcine reproductive and respiratory syndrome virus Species 0.000 claims 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 claims 1
- 210000004754 hybrid cell Anatomy 0.000 claims 1
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 claims 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims 1
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 claims 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 claims 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 claims 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 28
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 26
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 23
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 21
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 18
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 17
- 239000000047 product Substances 0.000 description 16
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 14
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 14
- 208000029523 Interstitial Lung disease Diseases 0.000 description 13
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 13
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 12
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 12
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 11
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 10
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 10
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 10
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 10
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 10
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 10
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 9
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 description 9
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 9
- 101000787132 Acidithiobacillus ferridurans Uncharacterized 8.2 kDa protein in mobL 3'region Proteins 0.000 description 8
- 101000827262 Acidithiobacillus ferrooxidans Uncharacterized 18.9 kDa protein in mobE 3'region Proteins 0.000 description 8
- 101000811747 Antithamnion sp. UPF0051 protein in atpA 3'region Proteins 0.000 description 8
- 101000827607 Bacillus phage SPP1 Uncharacterized 8.5 kDa protein in GP2-GP6 intergenic region Proteins 0.000 description 8
- 101000961975 Bacillus thuringiensis Uncharacterized 13.4 kDa protein Proteins 0.000 description 8
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 8
- 101000964407 Caldicellulosiruptor saccharolyticus Uncharacterized 10.7 kDa protein in xynB 3'region Proteins 0.000 description 8
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 101000768777 Haloferax lucentense (strain DSM 14919 / JCM 9276 / NCIMB 13854 / Aa 2.2) Uncharacterized 50.6 kDa protein in the 5'region of gyrA and gyrB Proteins 0.000 description 8
- 101710126256 Hydrolase in agr operon Proteins 0.000 description 8
- 101000607404 Infectious laryngotracheitis virus (strain Thorne V882) Protein UL24 homolog Proteins 0.000 description 8
- 101000735632 Klebsiella pneumoniae Uncharacterized 8.8 kDa protein in aacA4 3'region Proteins 0.000 description 8
- 101000818100 Spirochaeta aurantia Uncharacterized 12.7 kDa protein in trpE 5'region Proteins 0.000 description 8
- 101001037658 Streptomyces coelicolor (strain ATCC BAA-471 / A3(2) / M145) Glucokinase Proteins 0.000 description 8
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 8
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 8
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 8
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 8
- 201000010740 swine influenza Diseases 0.000 description 8
- 101000787133 Acidithiobacillus ferridurans Uncharacterized 12.3 kDa protein in mobL 3'region Proteins 0.000 description 7
- 101000827603 Bacillus phage SPP1 Uncharacterized 10.2 kDa protein in GP2-GP6 intergenic region Proteins 0.000 description 7
- 206010069767 H1N1 influenza Diseases 0.000 description 7
- 206010024769 Local reaction Diseases 0.000 description 7
- 101000977786 Lymantria dispar multicapsid nuclear polyhedrosis virus Uncharacterized 9.7 kDa protein in PE 3'region Proteins 0.000 description 7
- 208000009620 Orthomyxoviridae Infections Diseases 0.000 description 7
- 241000255969 Pieris brassicae Species 0.000 description 7
- 241000125945 Protoparvovirus Species 0.000 description 7
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 7
- 101001113905 Rice tungro bacilliform virus (isolate Philippines) Protein P4 Proteins 0.000 description 7
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 7
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 7
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 7
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 7
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 7
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 7
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 6
- 208000007212 Foot-and-Mouth Disease Diseases 0.000 description 6
- 241000710198 Foot-and-mouth disease virus Species 0.000 description 6
- 206010020843 Hyperthermia Diseases 0.000 description 6
- 101001120268 Streptomyces griseus Protein Y Proteins 0.000 description 6
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 6
- 244000144980 herd Species 0.000 description 6
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 6
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 6
- 210000004243 sweat Anatomy 0.000 description 6
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 5
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 5
- 210000003754 fetus Anatomy 0.000 description 5
- 230000036031 hyperthermia Effects 0.000 description 5
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 5
- 230000036285 pathological change Effects 0.000 description 5
- 231100000915 pathological change Toxicity 0.000 description 5
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 5
- 101000977065 Acidithiobacillus ferridurans Uncharacterized 11.6 kDa protein in mobS 3'region Proteins 0.000 description 4
- 101000765604 Bacillus subtilis (strain 168) FlaA locus 22.9 kDa protein Proteins 0.000 description 4
- 101000964402 Caldicellulosiruptor saccharolyticus Uncharacterized protein in xynC 3'region Proteins 0.000 description 4
- 101000861180 Cupriavidus necator (strain ATCC 17699 / DSM 428 / KCTC 22496 / NCIMB 10442 / H16 / Stanier 337) Uncharacterized protein H16_B0147 Proteins 0.000 description 4
- 101000977779 Lymantria dispar multicapsid nuclear polyhedrosis virus Uncharacterized 33.9 kDa protein in PE 3'region Proteins 0.000 description 4
- 101000827630 Narcissus mosaic virus Uncharacterized 10 kDa protein Proteins 0.000 description 4
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 4
- 108020000999 Viral RNA Proteins 0.000 description 4
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 4
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 description 4
- 235000021050 feed intake Nutrition 0.000 description 4
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 4
- 210000004779 membrane envelope Anatomy 0.000 description 4
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 4
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 3
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 206010000210 abortion Diseases 0.000 description 3
- 231100000176 abortion Toxicity 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 description 3
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 3
- 238000007596 consolidation process Methods 0.000 description 3
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 description 3
- 230000035931 haemagglutination Effects 0.000 description 3
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 3
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 3
- 235000021266 loss of appetite Nutrition 0.000 description 3
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 3
- 229960000380 propiolactone Drugs 0.000 description 3
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 3
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 3
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical group [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 3
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 3
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 3
- JMNQYAXOMXHZAP-ZETCQYMHSA-N (2s)-5-(diaminomethylideneamino)-2-(propylamino)pentanoic acid Chemical compound CCCN[C@H](C(O)=O)CCCNC(N)=N JMNQYAXOMXHZAP-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 2
- 206010000234 Abortion spontaneous Diseases 0.000 description 2
- 108010042708 Acetylmuramyl-Alanyl-Isoglutamine Proteins 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 2
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 2
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 2
- BAQCROVBDNBEEB-UBYUBLNFSA-N Metrizamide Chemical compound CC(=O)N(C)C1=C(I)C(NC(C)=O)=C(I)C(C(=O)N[C@@H]2[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)OC2O)O)=C1I BAQCROVBDNBEEB-UBYUBLNFSA-N 0.000 description 2
- 241000204031 Mycoplasma Species 0.000 description 2
- 101001114132 Naja sputatrix Neutral phospholipase A2 B Proteins 0.000 description 2
- 101001114133 Naja sputatrix Neutral phospholipase A2 muscarinic inhibitor Proteins 0.000 description 2
- 238000011887 Necropsy Methods 0.000 description 2
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 2
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 2
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 2
- GLUUGHFHXGJENI-UHFFFAOYSA-N Piperazine Chemical compound C1CNCCN1 GLUUGHFHXGJENI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091034057 RNA (poly(A)) Proteins 0.000 description 2
- 108091027544 Subgenomic mRNA Proteins 0.000 description 2
- 108020005038 Terminator Codon Proteins 0.000 description 2
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 2
- UZQJVUCHXGYFLQ-AYDHOLPZSA-N [(2s,3r,4s,5r,6r)-4-[(2s,3r,4s,5r,6r)-4-[(2r,3r,4s,5r,6r)-4-[(2s,3r,4s,5r,6r)-3,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)-4-[(2s,3r,4s,5s,6r)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxyoxan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxy-6-(hy Chemical compound O([C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]([C@@H]1O)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]([C@@H]1O)O[C@H]1CC[C@]2(C)[C@H]3CC=C4[C@@]([C@@]3(CC[C@H]2[C@@]1(C=O)C)C)(C)CC(O)[C@]1(CCC(CC14)(C)C)C(=O)O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O[C@H]4[C@@H]([C@@H](O[C@H]5[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O5)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O4)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O UZQJVUCHXGYFLQ-AYDHOLPZSA-N 0.000 description 2
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 2
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 2
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- VEZXCJBBBCKRPI-UHFFFAOYSA-N beta-propiolactone Chemical compound O=C1CCO1 VEZXCJBBBCKRPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940031416 bivalent vaccine Drugs 0.000 description 2
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 2
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 2
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 2
- 210000005069 ears Anatomy 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 210000002409 epiglottis Anatomy 0.000 description 2
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 2
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011999 immunoperoxidase monolayer assay Methods 0.000 description 2
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 2
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 2
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 2
- 230000013011 mating Effects 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 230000003340 mental effect Effects 0.000 description 2
- 229960000554 metrizamide Drugs 0.000 description 2
- 208000015994 miscarriage Diseases 0.000 description 2
- BSOQXXWZTUDTEL-ZUYCGGNHSA-N muramyl dipeptide Chemical compound OC(=O)CC[C@H](C(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](C)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H](O)[C@@H]1NC(C)=O BSOQXXWZTUDTEL-ZUYCGGNHSA-N 0.000 description 2
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 2
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 2
- 229960002511 phenobarbital sodium Drugs 0.000 description 2
- WRLGYAWRGXKSKG-UHFFFAOYSA-M phenobarbital sodium Chemical compound [Na+].C=1C=CC=CC=1C1(CC)C(=O)NC([O-])=NC1=O WRLGYAWRGXKSKG-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 2
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 description 2
- 208000000995 spontaneous abortion Diseases 0.000 description 2
- 208000002254 stillbirth Diseases 0.000 description 2
- 231100000537 stillbirth Toxicity 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 description 2
- 229940033663 thimerosal Drugs 0.000 description 2
- 210000003437 trachea Anatomy 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 1
- 208000007407 African swine fever Diseases 0.000 description 1
- 241001292006 Arteriviridae Species 0.000 description 1
- 206010003591 Ataxia Diseases 0.000 description 1
- NOWKCMXCCJGMRR-UHFFFAOYSA-N Aziridine Chemical compound C1CN1 NOWKCMXCCJGMRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010006500 Brucellosis Diseases 0.000 description 1
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 1
- 241000581444 Clinidae Species 0.000 description 1
- 208000003322 Coinfection Diseases 0.000 description 1
- 208000034656 Contusions Diseases 0.000 description 1
- 206010010947 Coordination abnormal Diseases 0.000 description 1
- XZMCDFZZKTWFGF-UHFFFAOYSA-N Cyanamide Chemical compound NC#N XZMCDFZZKTWFGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 241000710188 Encephalomyocarditis virus Species 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 1
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 1
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 1
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 1
- 241000710788 Lelystad virus Species 0.000 description 1
- 206010024238 Leptospirosis Diseases 0.000 description 1
- 208000035752 Live birth Diseases 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 231100000678 Mycotoxin Toxicity 0.000 description 1
- 108090001074 Nucleocapsid Proteins Proteins 0.000 description 1
- 208000007542 Paresis Diseases 0.000 description 1
- 235000014676 Phragmites communis Nutrition 0.000 description 1
- 108091036407 Polyadenylation Proteins 0.000 description 1
- 208000005107 Premature Birth Diseases 0.000 description 1
- 241000220324 Pyrus Species 0.000 description 1
- 206010037688 Q fever Diseases 0.000 description 1
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 241000220317 Rosa Species 0.000 description 1
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 description 1
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 1
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 1
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 1
- 235000019789 appetite Nutrition 0.000 description 1
- 230000036528 appetite Effects 0.000 description 1
- 230000004596 appetite loss Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 201000000902 chlamydia Diseases 0.000 description 1
- 208000012538 chlamydia trachomatis infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 235000019788 craving Nutrition 0.000 description 1
- 230000000093 cytochemical effect Effects 0.000 description 1
- SUYVUBYJARFZHO-RRKCRQDMSA-N dATP Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O1 SUYVUBYJARFZHO-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 1
- SUYVUBYJARFZHO-UHFFFAOYSA-N dATP Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1CC(O)C(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O1 SUYVUBYJARFZHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RGWHQCVHVJXOKC-SHYZEUOFSA-J dCTP(4-) Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@@H]1O[C@H](COP([O-])(=O)OP([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O)[C@@H](O)C1 RGWHQCVHVJXOKC-SHYZEUOFSA-J 0.000 description 1
- HAAZLUGHYHWQIW-KVQBGUIXSA-N dGTP Chemical compound C1=NC=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O1 HAAZLUGHYHWQIW-KVQBGUIXSA-N 0.000 description 1
- NHVNXKFIZYSCEB-XLPZGREQSA-N dTTP Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)[C@@H](O)C1 NHVNXKFIZYSCEB-XLPZGREQSA-N 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 238000000151 deposition Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 229940044627 gamma-interferon Drugs 0.000 description 1
- 230000036449 good health Effects 0.000 description 1
- 244000144993 groups of animals Species 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 1
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000001894 hemadsorption Effects 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M hydroxide Chemical compound [OH-] XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 239000003547 immunosorbent Substances 0.000 description 1
- 229960001438 immunostimulant agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003022 immunostimulating agent Substances 0.000 description 1
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 229940031551 inactivated vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 1
- 208000016290 incoordination Diseases 0.000 description 1
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 1
- 208000000509 infertility Diseases 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000009533 lab test Methods 0.000 description 1
- 230000006651 lactation Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 1
- 208000019017 loss of appetite Diseases 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 210000004373 mandible Anatomy 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 230000008774 maternal effect Effects 0.000 description 1
- WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N methanone Chemical compound O=[14CH2] WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000036651 mood Effects 0.000 description 1
- 230000001459 mortal effect Effects 0.000 description 1
- 239000002636 mycotoxin Substances 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000000474 nursing effect Effects 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 238000000399 optical microscopy Methods 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 230000016087 ovulation Effects 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 235000021017 pears Nutrition 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 210000004910 pleural fluid Anatomy 0.000 description 1
- 238000012809 post-inoculation Methods 0.000 description 1
- 230000002028 premature Effects 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- DBABZHXKTCFAPX-UHFFFAOYSA-N probenecid Chemical compound CCCN(CCC)S(=O)(=O)C1=CC=C(C(O)=O)C=C1 DBABZHXKTCFAPX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000012770 revaccination Methods 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000115 thoracic cavity Anatomy 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 210000002993 trophoblast Anatomy 0.000 description 1
- 210000003934 vacuole Anatomy 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
- A61K2039/5252—Virus inactivated (killed)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/55—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/55—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
- A61K2039/552—Veterinary vaccine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55566—Emulsions, e.g. Freund's adjuvant, MF59
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55577—Saponins; Quil A; QS21; ISCOMS
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
- C12N2770/00011—Details
- C12N2770/10011—Arteriviridae
- C12N2770/10022—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
- C12N2770/00011—Details
- C12N2770/10011—Arteriviridae
- C12N2770/10034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
- C12N2770/00011—Details
- C12N2770/10011—Arteriviridae
- C12N2770/10051—Methods of production or purification of viral material
- C12N2770/10052—Methods of production or purification of viral material relating to complementing cells and packaging systems for producing virus or viral particles
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
Diese Erfindung bezieht sich auf einen Impfstoff, der
geeignet ist, das reproduktive und respiratorische
Syndrom bei Schweinen zu verhindern, insbesondere auf
einen inaktivierten Impfstoff, der das kausative Virus
der genannten Krankheit in inaktivierter Form enthält.
Die als reproduktives und respiratorisches Syndrom bei
Schweinen (PRRS) bekannte Krankheit beeinträchtigt
trächtige Mutterschweine, bei welchen sie Appetitlosig
keit, Fehl-, Früh- bzw. Mißgeburten, Totgeburten,
mumifizierte Föten, schwächliche Ferkel, die nach weni
gen Stunden oder Tagen eingehen, respiratorische Nach
ferkelungsprobleme und Züchtungsprobleme (Loula, T.,
"Clinical Presentation of Mystery Pig Disease in the
breeding herd and suckling picklets", Proceedings of
the Mystery Swine Disease Committee Meeting, 06.
Oktober 1990, Denver, Colorado, Livestock Conservation
Institute, Madison, WI, USA). Einige Fälle sind be
schrieben worden, bei denen infizierte Mutterschweine
blaue Flecken an den Ohren aufweisen; aus diesem Grund
wurde die Krankheit auch als "Blue abortion" ("Blaue
Abortion") oder "Blue-eared pig disease" ("Blauohr-
Schweinekrankheit") bekannt, (Veterinary Record, Vol.
130, No. 3, 18. Januar 1992). Andere Namen, die der
Krankheit gegeben wurden, sind: "Mystery Pig Disease"
(MPD), "Mystery Swine Disease" (MSD), "Mysterious
Reproductive Syndrome" (MRS), "Swine Infertility and
Respiratory Syndrome" (SIARS), oder "Porcine Epidemic
Abortion and Respiratory Syndrome" (PEARS).
Das erste epizootische Ausbrechen dieser Krankheit trat
1987 in den Vereinigten Staaten von Amerika und in
Kanada auf. In Europa wurde der erste Ausbruch 1990 in
Deutschland festgestellt, von wo sie sich Ende 1990 und
Anfang 1991 nach den Niederlanden und Belgien ausbrei
tete. In Spanien wurden die ersten Fälle der Krankheit
Mitte Januar 1991 festgestellt, als wesentliche respi
ratorische Veränderungen bei einer aus Deutschland im
portierten Partie von 300 Ferkeln festgestellt wurden,
(Plana et al., Med. Vet., Vol. 8, No. 11, 1991). Kurz
danach trat bei zwei Zuchtherden, die sich 500 Meter
von der Herde befanden, wo das anfängliche Problem auf
getreten war, eine Krankheit auf, die durch eine abnor
mal hohe Zahl von Abortionen in der letzten Phase der
Trächtigkeit sowie 70% Sterblichkeit bei den Ferkeln
gekennzeichnet war. Wenn man die beobachteten klini
schen Anzeichen analysiert und berücksichtigt, daß (i)
diese Herden einem intensiven Impfungsprogramm gegen
Schweine-Parvovirose, Aujeszkysche Krankheit und
Schweine-Influenza unterzogen wurden, und daß (ii)
Laborversuche das Vorhandensein anderer abortiver
Krankheiten ausgeschlossen hatten, wurde das klinische
Vorhandensein von PRRS vermutet. In Proben von diesen
Farmen her wurde der Erreger der Krankheit isoliert,
wie nachfolgend im einzelnen beschrieben wird.
Eine Anzahl Erreger wurde mit diesem infektiösen Prozeß
in Korrelation gebracht, und zwar sind darunter: das
Encephalomyocarditis-Virus, Schweine-Influenza, klassi
sches Schweinefieber, afrikanisches Schweinefieber, Mu
kosalkrankheit, Aujeszkysche-Krankheit, Brucellose,
Leptospirose, Q-Fieber, Parvovirose und chlamydiale
Krankheit, obwohl einige Autoren sie auch mit Myco
toxinen in Verbindung gebracht haben, (Loula, T. ,
"Clinical Presentation of Mystery Pig Disease in the
breeding herd and suckling piglets", Proceedings of the
Mystery Swine Disease Committee Meeting) supra,
Mengeling, W. L. und Lager, K. M., "Mystery Pig
Disease: Evidence and considerations for its etiology",
in Proceedings of the Mystery Swine Disease Committee
Meeting, Bupra; Dea et al., "Virus isolation from farms
in Quebec experiencing severe outbreaks of respiratory
and reproductive problems", Proceedings of the Mystery
Swine Disease Committee Meeting, supra; Van Alstine,
W., "Past diagnostic approaches and findings and
potential useful diagnostic strategies", in Proceedings
of the Mystery Swine Disease Committee Meeting, supra;
Loula, T., Agri-Practice, 12(1): 23-33, 1991; Woolen,
N. et al., J. Am. Vet. Assoc. 197 : 600-601, 1990).
Die PCT-Patentanmeldung, unter der Veröffentlichungs
nummer WO 92/21375 veröffentlicht, im Namen des
Stitching Centraal Diergeneeskundig Instituut (CDI),
beschreibt die Isolierung eines Virus, mit "Lelystad
Agent" (LA) oder "Lelystad Virus" (LV) bezeichnet, das
durch sie als der Erreger der Krankheit, zu jener Zeit
als MSD bezeichnet, identifiziert wird. Das LV, iso
liert, bringt, wenn es intranasal in trächtige Mutter
schweine eingeimpft wird, Appetitlosigkeit und sogar
Verweigerung der Nahrungsaufnahme während der Tage 4
bis 10-12 nach Impfung, reproduktive Störungen und eine
blaue Färbung an den Ohren einiger der infizierten
Mutterschweine in den Tagen 9-10 nach der Impfung mit
sich. Jedoch ist auch beobachtet worden, daß bei 2 der
8 experimentell infizierten Mutterschweine sich die
Krankheit nicht reproduziert, (siehe Tabelle 6 der ge
nannten PCT-Anmeldung), zumal bei einem der Mutter
schweine die Zahl der Ferkel, die lebend geboren wurden
und die erste Woche überlebten, groß ist) (6 von 9,
Mutterschwein 1305), und ein anderes Mutterschwein zwei
totgeborene Ferkel hatte, während die anderen 9 die
erste Woche überlebten (Mutterschwein 1065). Das durch
CDI isolierte LV-Virus gehört zu dem Arteriviridae-
Genus, hat ein Genom, das aus einem polyadenylierten
RNA-Molekül besteht) 14,5 bis 15,5 kb lang, (in neu
tralem Agarose-Gel ermittelt), das mittels eines Satzes
subgenomischer RNAs an Ende 3′ repliziert. Die oben
aufgeführte PCT-Anmeldung zeigt die LV-Genom-Nukleo
tid-Sequenz, die 8 möglichen "Open Reading Frames"
(ORF) (Offene Ableserahmen), die Aminosäuresequenz, von
den identifizierten ORFs abgeleitet, und die mutmaßli
chen Stellen von N-Glykosilation. Später sind andere
Viren, Erreger von PRRS, auf deutschen, französischen
und spanischen landwirtschaftlichen Betrieben isoliert
worden. Das Virus, das in Tübingen, Deutschland,
isoliert wurde, (TV), [(Virology, 193, 329-339,
(1993)], stellt 99,3% Homologie mit LV auf der
Neuklotid-Ebene (Nukleotid-Ebene ) dar, in ORFs 2 bis 7
enthalten, (es sind 24 verschiedene Basispaare (bp) aus
einer Gesamtheit von 3316 bp vorhanden, in jener Region
eingeschlossen). Die abgeleitete TV-Aminosäuresequenz
stellt 99,2% Homologie mit LV dar, (es gibt nur 10
verschiedene Aminosäuren in den abgeleiteten Amino
säuresequenzen, codiert durch die ORFs 2 bis 5, zumal
keine Unterschiede bei den von den ORFs 6 und 7 abge
leiteten Sequenzen vorhanden sind).
Andererseits ist die zwischen LV und TV festgestellte
Homologie gegenüber dem in unserem Labor isolierten Vi
rus (Spanish strain/Spanische Abstammung oder SV) ge
ringer. Bislang sind nur die Nukleotid- und Amino
säuresequenzen entsprechend den ORFs 3 bis 7 verglichen
worden, mit den folgenden Resultaten:
- 1. Es gibt 95,5% Homologie auf Nukleotid-Ebene von SV vor LV oder TV, (aus einer Gesamtheit von 2599 bp sind 144 vorhanden, die verschieden sind); und
- 2. Es gibt 94,9% Homologie auf Aminosäure-Ebene von SV vor LV oder TV, (aus einer Gesamtheit von 955 Aminosäuren wurde eine Gesamtheit von 47 Amino säuren als unterschiedlich festgestellt).
Diese Aminosäurevariationen können in Relation gesetzt
werden zu der höheren Pathogenizität einer Abstammung
im Vergleich miteinander, aus dem Grund, daß der in
unseren Labors isolierte Virus (Spanische Abstammung)
pathogener ist als andere bekannte PRRS-Viren. Zum Bei
spiel, bei dem in Frankreich isolierten Virus (French
strain/Französische Abstammung), wie in Beispiel 8
dieser Beschreibung dargestellt, kann bewiesen werden,
daß der Prozentsatz von Ferkeln, die von einem Mutter
schwein lebend geboren wurden, das mit der Französi
schen Abstammung infiziert wurde, bei 75% liegt, wäh
rend der Prozentsatz bei 9,5% liegt, wenn Mutter
schweine mit der Spanischen Abstammung infiziert wer
den, (Tabellen 12 und 14). Der Prozentsatz beträgt
61%, wenn die Mutterschweine mit LV infiziert werden,
(Tabelle 6 der PCT-Anmeldung No. WO 92/21375), da 58
Ferkel lebend geboren wurden, aus einer Gesamtheit von
95 Ferkeln.
Die Krankheit verursacht hohe Verluste bei der Schwei
nezucht, da sie bei akuten Ausbrüchen eine Sterblich
keit von 70% der Ferkel bei einem Wurf mit sich brin
gen kann. Ein Mittel, das Problem, das auftritt, zu
lösen, wäre, ein geeignetes Impfungsprogramm durchzu
führen, das die Prävention des Auftretens der Krankheit
ermöglichen würde. Zu diesem Zweck würden Impfstoffe
benötigt, die geeignet sind, eine effektive Prävention
von PRRS zustande zu bringen.
Die unter der No. WO 93/06211 veröffentlichte PCT-Pa
tentanmeldung, im Namen von J. E. Collins und D. A.
Benfield, bezieht sich auf einen Impfstoff gegen MSD,
der ein infektiöses Agens enthält, das aus den Lungen
von mit MSD infizierten Schweinen isoliert wurde.
Jedoch beschreibt die genannte PCT-Anmeldung nicht die
Charakterisierung oder Identifikation des infektiösen
Agens noch wurde es bei irgendeiner autorisierten De
ponierungsinstitution deponiert. Durch all dies
schließt die Realisierung der aus jener PCT-Anmeldung
abgeleiteten Kenntnisse schwerwiegende Reproduzierbar
keitsprobleme in sich, weil das in der PCT-Anmeldung
beschriebene Produkt nicht verifiziert werden kann und
die erhaltenen Ergebnisse auch nicht mit jenen vergli
chen werden können, welche durch die Antragsteller der
PCT erreicht wurden. Auch sind in dieser PCT-Anmeldung
weder das Antigen noch das Adjuvans, das bei der For
mulierung des Impfstoffes verwendet wurde, deutlich zum
Ausdruck gebracht, die wie später verifiziert wird,
eine sehr wesentliche Rolle spielen, noch sind Beispie
le beschrieben, welche die Wirksamkeit und Effizienz
der genannten Impfstoffe demonstrieren.
Die PCT-Anmeldung, unter No. WO 93/07898 veröffent
licht, bezieht sich unter anderem auf die Identifizie
rung des Agens, das für PRRS ursächlich ist, und auf
von diesem abgeleitete Impfstoffe. Das isolierte Virus
hat Charakteristiken ähnlich dem LV, ist aber, im Ge
gensatz zu dem in unserem Labor isolierten Virus, nicht
fähig, auf ST-Zellen (Schweinetestikelzellen) auf fest
stellbares Niveau zu wachsen. Anscheinend war der Impf
stoff wirksam, aber das Ausmaß des Schutzes war nur bei
etwa 52% der geimpften Tiere effektiv, was als ein
relativ geringes Ausmaß an Schutz angesehen werden
kann, insbesondere, wenn man den hohen viralen Titer
berücksichtigt, der bei der Impfdosis verwendet wird.
Außerdem liefert diese PCT-Anmeldung keinerlei Infor
mation über die Organisation des Virusgenoms noch über
die Proteine, codiert; aus diesem Grund kann der
Vergleich zwischen diesem Virus und dem in unseren
Labors erhaltenen Viren nicht durchgeführt werden und
könnte nur durchgeführt werden mit unverhältnismäßig
hohen Forschungsanstrengungen.
Daher dauert der Bedarf an Impfstoffen, die geeignet
sind, PRRS zu verhindern, an. Um dieses Problem zu lö
sen, sieht diese Erfindung einen Impfstoff vor, der ge
eignet ist, Mutterschweine gegen die infektiöse Krank
heit wirkungsvoll zu schützen. Die antigenische Phase
dieses Impfstoffes setzt sich aus einem inaktivierten
spanischen Isolat zusammen. Die Erfindung sieht auch
Kombinationen des isolierten PRRS-Viralantigens (Spa
nische Abstammung) vor, zusammen mit verschiedenen
Schweinepathogenen, mit dem Zweck, bi- oder multivalen
te Impfstoffe vorzusehen.
Die Fig. 1 bis 5 zeigen die cDNA-Sequenzen entspre
chend den ORFs 3 bis 7 des PRRS-Virus (Spanische
Abstammung) sowie die von Aminosäuren, codiert, durch
jedes ORF abgeleitete Sequenz.
Die Fig. 6 bis 10 zeigen die Homologie und vorhan
dene Unterschiede zwischen dem LV und dem in unseren
Labors isolierten Virus, auf der Ebene der Aminosäure
sequenzen, von den ORFs 3 bis 7 abgeleitet. Die Amino
säuren sind gemäß einem Ein-Buchstaben-Code zum Aus
druck gebracht. Die obere Zeile, alle 2 Zeilen,
entspricht der LV-Aminosäuresequenz, während die untere
Zeile dem in unseren Labors isolierten Virus (Spanische
Abstammung) entspricht. Die homologen Aminosäuren sind
durch zwei vertikale Linien dargestellt, während wenn
sie als Substitutionen einiger Aminosäuren durch andere
vorhanden sind, sie durch zwei vertikale Striche im
Falle von konservativen Substitutionen dargestellt
sind, das heißt, die Substitution einer Aminosäure
durch eine andere, die funktional äquivalent ist. Das
Nichtvorhandensein vertikaler Linien und Striche zwi
schen zwei Aminosäuren stellt das Vorhandensein nicht
konservativer Substitutionen dar.
Die Erfindung betrifft demgemäß einen Virus, welcher der Erreger
von PRRS (PRRS = Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome),
Spanische Abstammung, ist, dessen Charakteristika im wesentli
chen jenen des Virus mit der Bezeichnung PRRS-CY-218JPD-P5-6-91
entsprechen, das bei ECACC mit der Zugangsnummer V93070108 depo
niert wurde. Die Erfindung betrifft ebenfalls die DNA-Sequenz
dieses Virus, welche im wesentlichen die in den Fig. 1 bis 4
angegebenen DNA-Sequenzen aufweist.
Gemäß einer weiteren Ausführungsform betrifft die Erfindung
Vakzine gegen PRRS, die eine geeignete Menge des Virus in in
aktivierter Form, sowie ein geeignetes Adjuvans enthalten. Al
ternativ dazu kann die Vakzine eine geeignete Menge eines Anti
gens sowie ein geeignetes Adjuvans enthalten, wobei das Antigen
mittels einer DNA-Sequenz erhalten wurde, welche im wesentlichen
die in den Fig. 1 bis 4 angegebenen DNA-Sequenzen aufweist.
Die Erfindung umfaßt auch Verfahren zur Herstellung einer Vakzi
ne, die geeignet ist, das reproduktive und respiratorische Syn
drom bei Schweinen (PRRS) zu verhindern, bei dem man:
- 1) das verursachende Virus von PRRS in einem geeigneten Zellsystem kultiviert,
- 2) den Virus aus dem genannten Zellsystem sammelt, wenn ein Mindesttiter von 105.5 TCID₅₀/ml erreicht wurde,
- 3) den Virus durch physikalische oder chemische Methoden inaktiviert, und
- 4) den inaktivierten Virus mit dem Adjuvans mischt.
Schließlich betrifft die Erfindung auch bi- oder multivalente
Vakzine gegen PRRS und andere Infektionen bei Schweinen, die
eine geeignete Menge des inaktivierten PRRS-Viral-Antigens oder
-Virus plus ein oder mehrere Schweine-Pathogene enthalten.
Mumifizierte Föten, totgeborene Ferkel und lebende,
aber schwächliche Ferkel mit einem Alter von 1 bis 10
Tagen, die Nachkommenschaft von Feld-Mutterschweinen
mit klinischen Problemen infolge PRRS, wurden aus
gewählt.
Lungen-, Milz-, Leber-, Nieren-, Hirn- und Herzproben
von den Ferkeln wurden durch Nekropsie entnommen. In
einem besonderen Fall wurden Proben präpariert aus der
Lunge eines totgeborenen Ferkels, durch ein Mutter
schwein geboren, das vermutlich durch PRRS beeinträch
tigt war. Mit dieser Lunge wurde ein Homogenat präpa
riert mit DMEM (GIBCO), (10 g Lunge in 90 ml DMEM),
durch eine Lösung Antibiotika (PEG) ergänzt, in der Zu
sammensetzung 1000 IU/ml Penicillin, 1 mg/ml Strepto
myzin und 0,5 mg/ml Gentamicin. Die resultierende Sus
pension wurde 1 Stunde bei 4°C stehen gelassen, gefro
ren und zweimal aufgetaut, zentrifugiert, und der er
haltene Überstand wurde bei -70°C gelagert, um bei der
Infektion alveolärer Makrophagen der Lunge eines
Schweins verwendet zu werden. In einem anderen Fall
wurden Lungenproben von einem lebend geborenen Ferkel,
das aber wenige Stunden nach der Geburt einging, durch
einen ähnlichen Prozeß präpariert.
Darüber hinaus wurde den Tieren Blut entnommen durch
Punktieren der Vena Cava, um (i) Blutplasma, das bei
-70°C gelagert wurde und zur Virusisolation verwendet
wurde, und (ii) Serum, das verwendet wurde, um Antikör
pertitrierung durchzuführen, zu erhalten.
Schweine, die seronegativ waren gegenüber der Aujeszky
schen Krankheit, Schweine-Parvovirose. Maul- und Klau
enseuche, klassisches Schweinefieber, Schweine-In
fluenza (Typen H1N1 und H3N2) und ansteckender Ga
stroenteritis wurden verwendet. Das Alter der Schweine,
die verwendet wurden, war zwischen 7 und 8 Wochen. Die
Tiere wurden mit Phenobarbitalnatrium anästhesiert, vor
der Extraktion der Lungen, was dadurch vorgenommen
wurde, daß zuerst die Trachea unterhalb der Epiglottis
abgebunden wurde und durch Inzidieren oberhalb der Ab
bindungsschnur. Sobald die Lunge extrahiert war, wurde
sie mit physiologischer Salzlösung extern gewaschen,
und dann wurde PBS- und PEG-Lösung aus Antibiotika mit
tels sukzessiver Wäschen eingebracht. Die aus diesen
Wäschen erhaltenen Zellen wurden 10 Minuten lang mit
300 g einer Zentrifugierung unterworfen und in DMEMs-
Medium [(DMEM-Medium, mit nichtessentiellen Aminosäuren
(GIBCO) ergänzt. 1% Natriumpyruvat 1 mG und 1%
Glutamin 2 mM)]. 10% fötales Kalbsserum (FCS) und
PEG-Lösung aus Antibiotika bei 1‰ resuspendiert.
Die Zellenzählung wurde in Newbauer-Kammern durch
geführt.
Es wurde mittels geeigneter Tests verifiziert, daß die
alveolären Makrophagen der Schweinelunge frei sind von
Verseuchung durch Bakterien, Fungi und andere Viren.
Ebenso wurde der gute Allgemeinzustand der Zellen
verifiziert durch optische Mikroskopie.
Das Nichtvorhandensein einer Verseuchung durch Myko
plasmen wurde ebenfalls verifiziert durch zytochemische
Feststellung mit DAPI (4.6-Diamidin-2-phenyl-indol),
das selektiv an DNA bindet und DNA-DAPI-Komplexe hoher
Fluoreszenz und hoher Spezifizität bildet.
Ein Nährboden aus alveolären Makrophagen der Schweine
lunge, zuvor präpariert in DMEMs-Medium und FCS bei
10%. wurde mit einem Homogenat einer Probe infiziert,
die vermutlich den Erreger von PRRS enthielt. Die Probe
setzte sich zusammen, in dem einen Fall, aus einem Lun
genisolat von einem totgeborenen Ferkel her, das von
einem Mutterschwein geboren wurde, das klinische Anzei
chen von PRRS aufwies, während in anderen Fällen ein
Lungenisolat aus einem Ferkel verwendet wurde, das le
bend geboren wurde, das aber nach wenigen Stunden ein
gegangen war, Nachkommenschaft eines Mutterschweins mit
PRRS-Symptomen, sowie ein Isolat aus Blutplasma. Das
Homogenat wurde 1 Stunde lang bei 37°C mit dem Makro
phagenährboden in Kontakt gehalten. Danach wurde das
Inoculum entfernt, und frische DMEMs mit 2% FCS und
1‰ PEG-Lösung wurden zugegeben, wobei der Nährboden
mit CO₂ gepuffert wurde und man ihn einige Tage lang
bei 37°C inkubieren ließ, in denen die zytopathische
Wirkung (CPE), die durch das Virus an den Makrophagen
hervorgerufen wurde, unter dem Mikroskop beobachtet
wurde: an 3-4 Tagen nach Infektion (dpi) war CPE
70-80%, (Riesenzellen und deformierte Zellen traten
auf). Die Kulturen wurden bei -80°C eingefroren.
Gleichzeitig wurde ein alveolärer Makrophagenährboden
einer Schweinelunge, frei von PRRS, präpariert, um als
negative Kontrolle verwendet zu werden.
Tochterkulturen wurden präpariert mit dem isolierten
Virus, und es wurde festgestellt, daß 100% CPE von dem
zweiten dpi her vorhanden war. Das Virus wurde bei
-80°C eingefroren, für seine spätere Identifizierung
und Charakterisierung.
Ähnlich wurde das Virus aus Blutplasma und anderen Pro
ben aus totgeborenen Ferkeln oder lebenden, aber
schwächlichen Ferkeln, die von experimentell infizier
ten Mutterschweinen geboren wurden, isoliert.
Eines der isolierten Viren, insbesondere das mit
PRRS-CY-218-JPD-P5-6-91 bezeichnete Virus, wurde aus
der Lunge eines totgeborenen Ferkels isoliert. Es ist
fähig, die Krankheit experimentell zu reproduzieren,
hat die in Abschnitt 4 erwähnten Charakteristiken und
wurde in der European Collection of Animal Cell
Cultures (ECACC), Salisbury, (United Kingdom /Vereinig
tes Königreich/), am 29. Juni 1993 mit der Zugangs-No.
V93070108 deponiert.
Infektionen mit dem isolierten Virus (Spanische Abstam
mung) sind in alveolärer Makrophage von Schweinelungen
und ST-Zell- (Schweinetestikel kontinuierliche Zell-Li
nie) ATCC CRL 1745 STI-Kokulturen durchgeführt worden
als erster Schritt für das Adaptieren des Virus an
ST-Zellen. Nach verschiedenen serienmäßigen Durchgängen
(5-6) auf den ST-Zell- und Makrophage-Kokulturen und
Kulturen von ST allein waren die virusinfektiösen Titer
in der Größenordnung 10 TCID₅₀/ml, wenn Makrophage-ST-
Zell-Kokulturen infiziert wurden, und in der Größenord
nung 104.5 TCID₅₀/ml für das Virus, in ST-Zellen allein
erhalten. [TCID₅₀, Gewebekultur infektiöse Dosis 50%].
Darüber hinaus können alveoläre Makrophagen der Schwei
nelunge auch dadurch immortalisiert werden, daß sie mit
ST-Zellen mittels Hybridisierung verschmolzen werden.
Alternativ können alveoläre Makrophagen der Schwei
nelunge dadurch immortalisiert werden, daß sie mit der
L-14-Zell-Linie (periphere Blut-B-Zellen von Schweinen)
ECACC No. 91012317, oder mit der Zell-Linie Jag-1
(Trophoblast-Zell-Linie von Schweinen), durch Dr. Jag
Ramsoondar geliefert, verschmolzen werden [ ].
Die Verschmelzungsprozeduren werden gemäß herkömmlichen
Techniken, die auf diesem Gebiet üblich sind, durch
geführt.
Alternativ kann man Viren auf ST-Zellen oder auf
irgendeiner anderen Zell-Linie von Schweinen wachsen
lassen, in welche die Gene eingeführt worden sind, die
für alveoläre Makrophagen-Membranrezeptoren der Schwei
nelunge für das PRRS-Virus codiert sind.
Die mit diesen Zellsystemen produzierten Viren sind
suszeptibel, bei der Formulierung lebender wie auch in
aktivierter Vakzinen verwendet zu werden.
Das aus der Lunge eines totgeborenen Ferkels isolierte
Virus, mit der Bezeichnung PRRS-CY-218-JPD-P5-6-91,
wurde am 29. Juni 1993 mit der Zugangs-No. V93070108
bei der European Collection of Animal Cell Cultures
(ECACC), Salisbury, (United Kingdom/Vereinigtes König
reich/), deponiert. In der vorliegenden Beschreibung
wird das Virus gelegentlich ohne genaue Bezeichnung als
"Spanish virus" (SV) oder "Spanish strain" (übersetzt
etwa: Spanisches Virus (SV) oder Spanische Abstammung)
beschrieben.
Dieses Virus (PRRS-CY-218-JPD-P5-6-91) weist die fol
genden Charakteristiken auf:
- a) die Entstehung einer leichten CPE auf einer kon tinuierlichen ST-Zell-Linie (ATCC CRL 1746 ST) (fötale Schweinetestikel) mit einem durchschnitt lichen Titer von 104.5 TCID₅₀/ml und auf alveolären Makrophagen der Schweinelunge mit durchschnitt lichen Titern von 105.5 TCID₅₀/ml;
- b) wenn es alveoläre Makrophagen der Schweinelunge und ST-Zellen-Kokulturen infiziert, erhält man durch schnittliche Titer von 106.3 TCID₅₀/ml. [diese Titer repräsentieren eine Logarithmuseinheit (1 log₁₀) höher als wenn nur alveoläre Makrophagen der Schweinelunge infiziert werden];
- c) zytoplasmische Replikation;
- d) Entstehung zytoplasmischer Vakuolenbildung;
- e) Lipidhülle;
- f) 40-50 nm Größe
- g) keine Hämadsorption oder Hämagglutination beobach tet bei Hühnchen/Hähnchen, Meerschweinchen, bei Schwein oder Mensch, rote Blutkörperchen, Gruppe 0;
- h) Verlust der Infektivität bei Säure pH (pH 5);
- i) Entstehung mikroskopischer (interstitielle Pneu monie) und makroskopischer krankhafter Veränderun gen bei 2 Monate alten Ferkeln;
- j) Entstehung nachteiliger reproduktiver Wirkungen bei trächtigen Mutterschweinen mit Totgeburten, mumifi zierten Föten und lebenden, aber schwächlichen Ferkeln;
- k) Wechselreaktion mit Lelystad-Bezugsserum (IPMA = Immuno peroxidase monolayer assay) (übersetzt etwa: Immunoperoxidasemonomolekularschichtananlyse);
- l) Wechselreaktion mit Sera von Tieren mit klinischen Feldinfektionen (IPMA);
- m) Serum von Mutterschweinen mit diesem Virus infi ziert, wechselreagiert mit LV;
- n) RNA polyadeniliertes Genom von ungefähr 15 000 bp Länge (neutrales Agarose-Gel);
- o) Replikation mittels eines subgenomischen RNA- Satzes, an Ende 3′ vorhanden;
- p) Nukleotidsequenz mit 8 ORFs;
- q) in gereinigter Suspension, einer Elektrophorese in Polyacrilamid-Gel unterworfen und späterer Übertra gung durch Immunoblot, wurden festgestellt, mit tels eines spezifischen Serums, präpariert in Mut terschweinen aus unserem eigenen Labor, und welches mit dem Lelystad-PRRS-Virus wechselreagiert, 4 Majoritätsbänder, entsprechend Protein mit schein baren Molekulargewichten von 15 000, 23 000, 54 000 und 66 000 Dalton, welche nicht festgestellt wurden bei negativen Kontrollen (nichtinfizierte Makro phagen);
- r) wenn die ORFs 3 bis 7 dieses Virus mit jenen des LV und/oder TV verglichen werden, wird auf Nukleo tid-Ebene 95,5% Homologie, (es sind 114 verschie dene bp aus einer Gesamtheit von 2599 bp vorhan den), und auf Aminosäure-Ebene 94,9% Homologie, (51 verschiedene Aminosäuren aus einer Gesamtheit von 955), festgestellt, und
- s) das Virus gehört zu dem Arterivirus-Genus.
Mutterschweine, Kreuzung Deutsche Landrasse x "Large
White" (groß weiß), wurden verwendet, die aus
landwirtschaftlichen Betrieben stammten, mit systemati
scher serologischer Kontrolle in bezug auf Viren der
Aujeszkyschen Krankheit, der Maul- und Klauenseuche,
der Schweine-Parvovirose, dem klassischen Schweinefie
ber, der Schweine-Influenza (Typen H1N1 und H3N2) und
der ansteckenden Gastroenteritis. Darüber hinaus wurde
der Antikörpertitrationstest gegen das verursachende
Virus von PRRS durchgeführt. Zwischen den Tagen 77 und
90 der Trächtigkeit wurden die Tiere infiziert, mit ei
nem Isolat, das an alveolären Makrophagen der Schweine
lunge erzielt wurde, in einem Fall, intravenös (IV) und
intranasal (IN), dagegen in einem anderen Fall nur über
den intranasalen Weg (Beispiel 2.1.). Während des ge
samten Experiments wurden die Futteraufnahme, die
rektale Temperatur und der klinische Zustand der Tiere
überwacht. Mit der Absicht, die oben aufgeführten Erre
ger auszuschließen, wurden Blutproben von allen Mutter
schweinen entnommen, vor der Infektion. Sie erwiesen
sich als seronegativ gegenüber all den Erregern. Nach
der experimentellen Infektion waren all die Mutter
schweine ebenfalls noch seronegativ gegenüber all den
genannten Viren und seropositiv gegenüber PRRS, (mit
dem Bezugvirus LV verifiziert). Die Ergebnisse, die
erzielt wurden, sind in Tabelle 1 angegeben.
AD = Aujeszky′s disease
FMD = Foot-and-mouth disease
PP = Porcine parvovirosis
CSF = Classic swine fever
SF = Swine influenza (H1N1, H2N3)
TG = Transmissible gastroenteritis
PRRS = Porcine reproductive and respiratory syndrome
HAI = Hemagglutination Peroxidase-linked Assay
NPLA = Neutralizing Peroxidase-linked Assay
ELISA = Enzyme-linked Immunosorbent Assay
SN = Seroneutralization
IPMA = Immuno peroxidase monolayer assay
(1) = Vannier et al., Rec. M´d. Vet. 155 (2), 151-158 (1979)
(2) = Charley B., Thesis Doctoral, Alfort (1976)
(3) = Trepsta et al., Vet. Microb. 9, 113-120 (1984)
(4) = Elliot M., J. Rech. Porc., 20, 141-146
(5) = Lucam F., "Diagnostic sero-immunologique des viroses humains et animals", F. Bricout; L. Joubert; J.M. Huraux (1977)
(6) = Jim´nez et al., J. Virol., 60, 131-139 (1986)
(7) = Wensvoort et al., Vet. QUARTERLY, Vol. 13, no. 3 (July 1991)
(-) = Negative
(+) = Positive
ND = Not done.
FMD = Foot-and-mouth disease
PP = Porcine parvovirosis
CSF = Classic swine fever
SF = Swine influenza (H1N1, H2N3)
TG = Transmissible gastroenteritis
PRRS = Porcine reproductive and respiratory syndrome
HAI = Hemagglutination Peroxidase-linked Assay
NPLA = Neutralizing Peroxidase-linked Assay
ELISA = Enzyme-linked Immunosorbent Assay
SN = Seroneutralization
IPMA = Immuno peroxidase monolayer assay
(1) = Vannier et al., Rec. M´d. Vet. 155 (2), 151-158 (1979)
(2) = Charley B., Thesis Doctoral, Alfort (1976)
(3) = Trepsta et al., Vet. Microb. 9, 113-120 (1984)
(4) = Elliot M., J. Rech. Porc., 20, 141-146
(5) = Lucam F., "Diagnostic sero-immunologique des viroses humains et animals", F. Bricout; L. Joubert; J.M. Huraux (1977)
(6) = Jim´nez et al., J. Virol., 60, 131-139 (1986)
(7) = Wensvoort et al., Vet. QUARTERLY, Vol. 13, no. 3 (July 1991)
(-) = Negative
(+) = Positive
ND = Not done.
AD = Aujeszkysche Krankheit
FMD = Maul- und Klauenseuche
PP = Schweine-Parvovirose
CSF = Klassisches Schweinefieber
SF = Schweine-Infiuenza (H1N1, H2N3)
TG = Ansteckende Gastroenteritis
PRRS = Reproduktives und respiratorisches Syndrom bei Schweinen
HAI = Hämagglutination peroxidaseverkettete Analy se
NPLA = Neutralisierende peroxidaseverkettete Analy se
ELISA = Enzymverkettete Immunosorbentanalyse
SN = Seroneutralisation
IPMA = Immunoperoxidasemonomolekularschichtanalyse
(1) = Vannier et al., Rec. Med. Vet. 155 (2), 151-158 (1979)
(2) = Charley B., Thesis Doctoral, Alfort (1976)
(3) = Trepsta et al., Vet. Microb. 9, 113-120 (1984)
(4) = Elliot M., J. Rech. Porc., 20, 141-146
(5) = Lucam F., "Diagnostic sero-immunologique des viroses humains et animals", F. Bricout; L. Joubert; J. M. Huraux (1977)
(6) = Jim´nez et al., J. Virol., 60, 131-139 (1986)
(7) = Wensvoort et al., Vet. QUARTERLY. Vol 13, No. 3, (Juli 1991)
(-) = Negativ
(+) = Positiv
ND = Not done.
FMD = Maul- und Klauenseuche
PP = Schweine-Parvovirose
CSF = Klassisches Schweinefieber
SF = Schweine-Infiuenza (H1N1, H2N3)
TG = Ansteckende Gastroenteritis
PRRS = Reproduktives und respiratorisches Syndrom bei Schweinen
HAI = Hämagglutination peroxidaseverkettete Analy se
NPLA = Neutralisierende peroxidaseverkettete Analy se
ELISA = Enzymverkettete Immunosorbentanalyse
SN = Seroneutralisation
IPMA = Immunoperoxidasemonomolekularschichtanalyse
(1) = Vannier et al., Rec. Med. Vet. 155 (2), 151-158 (1979)
(2) = Charley B., Thesis Doctoral, Alfort (1976)
(3) = Trepsta et al., Vet. Microb. 9, 113-120 (1984)
(4) = Elliot M., J. Rech. Porc., 20, 141-146
(5) = Lucam F., "Diagnostic sero-immunologique des viroses humains et animals", F. Bricout; L. Joubert; J. M. Huraux (1977)
(6) = Jim´nez et al., J. Virol., 60, 131-139 (1986)
(7) = Wensvoort et al., Vet. QUARTERLY. Vol 13, No. 3, (Juli 1991)
(-) = Negativ
(+) = Positiv
ND = Not done.
Das Ziel dieses Experiments bestand darin, zu verifi
zieren, ob das Erregervirus von reproduktiven Ver
änderungen bei Mutterschweinen fähig war, bei 2 Monate
alten Ferkeln respiratorische Symptome und makroskopi
sche und mikroskopische krankhafte Veränderungen auf
Lungenebene hervorzurufen. Zu diesem Zweck wurden eine
Anzahl Ferkel mit dem Virus (Spanische Abstammung) "en
route" infiziert, die dann an verschiedenen Postinfek
tionstagen schmerzlos getötet wurden (Beispiel 2.2.).
Die meisten relevanten resultierenden Daten zeigen, daß
dieses Virus auf makroskopischer Ebene vielfache Kon
solidierungsherde sowie interstitielle Pneumonie auf
mikroskopischer Ebene hervorruft (Tabelle 4). Vom ge
sundheitlichen Standpunkt aus wurden keine relevanten
klinischen Anzeichen beobachtet.
Dieser Versuch wurde durchgeführt, um festzustellen, ob
das isolierte Virus eine Lipidhülle aufwies. Zu diesem
Zweck wurde die Methode H. Feldman und S. Wang ange
wendet, die in "A manual of basic virological techni
ques", Prentice-Hall Inc. New Jersey, 146-148 (1978).
beschrieben ist. Die Ergebnisse, die erreicht wurden,
zeigen, daß das unbehandelte Virus einen Titer von
105.6 TCID₅₀/ml aufweist, während nach Behandlung mit
Chloroform der Titer kleiner ist als 101.3 TCID₅₀/ml;
auf dieser Basis kann davon ausgegangen werden, daß das
isolierte Virus eine Lipidhülle aufweist.
Fünf Phasen wurden durchgeführt:
- i) Purifikation des Virus
- ii) Purifikation des viralen RNA
- iii) cDNA-Synthese
- iv) Klonen und Charakterisierung der cDNA-Klone
- v) Sequenzierung und Vergleich der Sequenzen mit jenen des LV
Das auf alveolären Makrophagen der Schweinelunge repli
zierte Virus wurde klarifiziert und unter Verwendung
von MILLIPORE-Filtern durch Filtration konzentriert.
Danach wurde das Virus einer Zentrifugierung in 10%igem
bis 50%igem Metrizamidgradient (SIGMA) unterworfen. So
bald die Zentrifugierung durchgeführt war, wurde ein
Band erzielt, das durch Zentrifugierung konzentriert
wurde. Mit dem purifizierten Virus wurde eine Elektro
phorese in Polyacrilamid-Gel (Polyacrylamid-Gel?) vor
genommen, und ein Immunoblot wurde mit einem spezi
fischen Serum entwickelt, das Proteine erkennen ließ,
deren scheinbare Molekulargewichte 15, 23, 54 und 66 K
Dalton betrugen.
Ein technisches Verfahren wurde angewendet für die
Selektion und Purifikation des RNA, auf der Tatsache
beruhend, daß das RNA eine Poly-(A)-Sequenz an Ende 3
enthält. Zu diesem Zweck wurde ein kommerzieller Koffer
(Pharmacia) verwendet, der das Anbinden der RNA-Poly-
(A)-Kette an eine Cellulose-Oligo-(dT)-Matrix und ihre
spätere Elution exklusiv ermöglichte.
Ein kommerzieller Koffer wurde verwendet (Boehringer,
Mannheim), wobei den Anweisungen des Herstellers ge
folgt wurde. Zusammengefaßt, das virale genomische RNA
wurde inkubiert bei Vorhandensein einer Oligo (dT),
dATP, dCTP, dGTP, dTTP und Umkehr-Transkriptase.
Das cDNA wurde in einem Vektor geklont, abgeleitet von
pUC18, und eine Serie von Klonen wurde erzielt, welche
die komplette Sequenz von Nukleotiden enthielt, ent
sprechend den ORFs 3 bis 7.
Die Region, die den ORFs 3-7 des Virus entspricht, in
unseren Labors isoliert, ist komplett sequenziert wor
den. Die Fig. 1 bis 5 zeigen die Sequenzen von cDNA,
die erzielt wurden, sowie die Sequenzen, die von Amino
säuren abgeleitet wurden, codiert durch jedes ORF. Die
gesamte sequenzierte Regionlänge weist ungefähr 2599
Nukleotide (nt) auf.
Wie ersichtlich ist, hat ORF 3 eine Länge von etwa 798
nt und Codes für ein Protein von 266 Aminosäurerück
ständen.
ORF 4 hat eine Länge von ungefähr 552 nt und Codes für
ein Protein von 183 Aminosäurerückständen. Der Anfang
dieses ORF 4 befindet sich in dem ATG-Codon (Codon = drei aufeinanderfolgende Basen einer Nukleinsäure, die den Schlüssel für eine Aminosäure im Protein darstellen), das sich
bei etwa 540 bp von dem anfänglichen ORF-3-ATG-Codon
befindet. ORF 3 und ORF 4 teilen sich eine Sequenz von
etwa 246 nt.
ORF 5 hat eine Länge von etwa 606 nt und codiert für ein
Protein von 200 Aminosäurerückständen. Das anfängliche
Codon dieses ORF 5 überlappt praktisch das ORF-4-
End-Codon, (sie teilen sich die TG-Nukleotide, das
ATG-Codon am Anfang von ORF 5 und das ORF 4 TGA-End-
Codon). Das ORF-5-ATG-Anfangs-Codon befindet sich etwa
1092 nt von dem ORF-3-Anfangs-ATG-Codon.
ORF 6 hat eine Länge von etwa 522 nt und codiert für ein
Protein von 173 Aminosäurerückständen. Dieses ORF-6-
Anfangs-ATG-Codon befindet sich 8 nt stromaufwärts von
dem Anfang des ORF-5-Terminations-TAG-Codon, (bei etwa
1682 nt ungefähr von dem Anfangs-ORF-3-ATG-Codon).
ORF 7 hat eine Länge von etwa 387 nt und codiert für ein
Protein von 129 Aminosäurerückständen. Dieses ORF-7-
Anfangs-ATG-Codon befindet sich 5 nt stromaufwärts von
dem Anfang des ORF-6-Terminations-TAA-Codon, (bei etwa
2193 nt ungefähr von dem ORF-3-Anfangs-ATG-Codon).
Die Proteine, durch die ORFs 3 bis 6 codiert, sind Mem
branproteine, während das Protein, durch ORF 7 codiert,
ein Nukleocapsidprotein ist.
Wenn man die cDNA-Sequenzen der ORFs 3-7 des LV mit
jenen des Virus, das in unseren Labors isoliert wurde,
vergleicht, ist festzustellen, daß:
- i) auf Nukleotid-Ebene aus den 2599 Nukleotiden, die verglichen wurden, 114 verschieden sind, was ungefähr 95,5% Homologie darstellt,
- ii) auf Aminosäure-Ebene aus den 955 Aminosäuren, die verglichen wurden, 47 verschiedene Amino säuren vorhanden sind, was ungefähr 94,9% Homologie darstellt,
- iii) von den 47 verschiedenen Aminosäuren 35 als
nichtkonservative Substitutionen angesehen wer
den, von denen vorhanden sind:
- - 12 in dem Produkt des ORF-3-Gens (Fig. 6);
- - 9 in dem Produkt des ORF-4-Gens (Fig. 7);
- - 10 in dem Produkt des ORF-5-Gens (Fig. 8), obwohl es angebracht ist, hervorzuheben, daß das Produkt des LV-ORF-5-Gens eine Aminosäure mehr enthält als das Produkt des Spanischen Virus ORF 5; spezifisch, die Aminosäure 35 (Asn) des LV-ORF-5-Produktes ist in dem durch das Spanische Virus ausgedrückten Produkt nicht vorhanden;
- - 4 in dem Produkt des ORF-6-Gens (Fig. 9), während
- - das Produkt des ORF-7-Gens keine nichtkonser vative Substitution enthält (Fig. 10),
- iv) eine teilweise Homologie jedes Produktes der Produkte, durch die verschiedenen ORFs des Spanischen Virus und LV ausgedrückt von 93,6% für die ORF-3- und ORF-5-Produkte, 94,0% für das ORF-4-Produkt, 96,6% für das ORF-6-Produkt und 99,2% für das ORF-7-Produkt vorhanden ist.
Wie oben erwähnt, können die Änderungen bei den Amino
säuren in Verbindung gebracht werden mit der höheren
Pathogenizität einer Abstammung im Vergleich mit einer
anderen Abstammung, da das in unseren Labors isolierte
Virus (Spanische Abstammung) pathogenischer ist als
andere bekannte PRRS-Viren, wie - zum Beispiel - das in
Frankreich isolierte Virus (Beispiel 8) und das LV
(Tabelle 6 der PCT-Anmeldung No. WO 92/21375).
Die Erfindung sieht eine Vakzine vor, die fähig ist,
das reproduktive und respiratorische Syndrom bei
Schweinen (PRRS) zu verhindern. Die Vakzine hat bewie
sen, daß sie wirksam ist beim Verhindern reproduktiver
Veränderungen bei Mutterschweinen, wie beispielsweise
totgeborene Ferkel, mumifizierte Ferkel oder lebende,
aber schwächliche Ferkel, Rückkehr zur Pflege (return
to service?) und ähnliche Probleme, die durch das Virus
hervorgerufen werden, das für PRRS ursächlich ist.
Gleichfalls ist verifiziert worden, daß die Vakzine
zellulare Immunität bei geimpften Tieren bewirkt.
Die Vakzine enthält einen geeigneten Betrag von PRRS-
Viral-Antigen, Spanische Abstammung, inaktiviert, sowie
ein Adjuvans und ein Vorbeugungsmittel.
Versuche, die mit diesen Vakzinen durchgeführt wurden,
haben die Wirksamkeit der Vakzine bewiesen, wie durch
die Beispiele 7 und 8 deutlich zum Ausdruck gebracht
ist.
Darüber hinaus hat die Vakzine bewiesen, daß sie wirk
sam ist, eine Rückkehr zur Pflege zu vermeiden, die bei
infizierten Mutterschweinen auftrat. Tatsächlich
paarten sich die Mutterschweine, die mit den Vakzinen,
die aus dieser Erfindung resultieren, geimpft wurden
und mit dem Erregervirus von PRRS infiziert wurden und
wurden nach der ersten Post-Partum-Ovulation trächtig
und entwöhnten die Ferkel.
Als aktive Komponente enthält die Vakzine inaktiviertes
PRRS-Viralantigen, Spanische Abstammung, mit einer Kon
zentration höher als oder gleich 105.5 TCID₅₀ pro vak
zinale Dosis. Die Inaktivierung kann durchgeführt wer
den durch chemische Mittel, welche eine Behandlung mit
β-Propiolacton oder mit anderen herkömmlichen Inak
tivierungsagenzien, wie beispielsweise Äthylenimin bzw.
Piperazin oder Formaldehyd, einschließen, oder durch
physikalische Mittel.
Obwohl es möglich ist, Adjuvanzien des Aluminiumhy
droxidtyps, Quil A oder deren Mischungen wie auch ölige
Adjuvanzien, für die Formulation der Vakzine zu verwen
den, ist es möglich gewesen, zu verifizieren, daß die
besten Ergebnisse erzielt werden, wenn ein öliges Adju
vans verwendet wird (Beispiel 4). Insbesondere ist ve
rifiziert worden, daß ein öliges Adjuvans, das aus
einer Mischung aus Marcol 52, Simulsol 5100 und
Montanide 888 besteht, sehr gute Ergebnisse mit sich
bringt.
Marcol 52 ist ein Mineralöl geringer Dichte, durch ESSO
ESPANOLA. S. A. hergestellt; Simulsol 5100 ist ein Po
lyäthoxyloleatäther, durch SEPIC auf den Markt ge
bracht, und Montanide 888 ist ein anhydrisches Mannit
ätheroctadecenoat hoher Reinheit, durch SEPIC auf den
Markt gebracht.
Es ist möglich gewesen, zu verifizieren, daß das Adju
vans eine wesentliche Rolle spielt bei der Wirksamkeit
der Vakzine. Daher wurde ein "Challenge-Test" (Beispiel
6) durchgeführt, unter Verwendung von Mutterschweinen,
die mit zwei verschiedenen Vakzinen geimpft wurden, das
eine Mutterschwein mit dem öligen Adjuvans, das oben
angegeben wurde (Ref. 1), und das andere Mutterschwein,
unter Verwendung des Adjuvans Munokynin® (Ref. 2). Ob
wohl beide Vakzinen Serokonversion hervorbringen, wurde
in einem experimentellen Infektionstest verifiziert,
daß die Mutterschweine, die mit der Vakzine Ref. 1
geimpft wurden, gegen eine experimentelle Infektion mit
dem PRRS-Virus geschützt waren, während die anderen
Mutterschweine, jene, die mit der Vakzine Ref. 2 ge
impft wurden, nicht geschützt waren, trotz der Tat
sache, daß zu dem Zeitpunkt der Herausforderung
(Challenge), sie Antikörper gegen das Virus hatten.
Dies begründet, daß ein geeignetes Adjuvans eine sehr
wichtige Rolle spielen kann in Zusammenhang mit der
Modulation und Stimulation der immunen Reaktion,
hauptsächlich auf zellularer Immunitätsebene. Darüber
hinaus ist dieser Aspekt durch den Challenge-Test, der
durchgeführt wurde, unter Verwendung der Spanischen Ab
stammung des PRRS-Virus, bestätigt worden, da die
Mutterschweine, die mit der Vakzine Ref. 1 geimpft und
nachgeimpft wurden, keine serologische Reaktion zum
Zeitpunkt der Infektion zeigten, aber dennoch geschützt
waren (Beispiel 7, Tabelle 8).
Es könnte jedoch auch möglich sein, daß die Vakzine
Ref. 2 (mit Munokynin®) zellulare Immunität bewirken
könnte. Zu diesem Zweck würde es notwendig sein,
Substanzen beizugeben, welche die Zellreaktion (CRP)
verstärken, das heißt, Substanzen, die Helfer-T-Zell-
Subpopulationen (Th₁ und Th₂) verstärken, wie bei
spielsweise IL-1 (Interleukine-1), IL-2, IL-4, IL-5,
IL-6, IL-12 g-IFN (Gamma-Interferon), zellularer Necro
sefaktor und ähnliche Substanzen. Offensichtlich wäre
es auch möglich, diese PRC-Substanzen Vakzinen mit
öligem Adjuvans beizugeben; in diesem Fall würde deren
Zellimmunwirkung verstärkt werden.
Andere Arten von Adjuvans können ebenfalls verwendet
werden, die eine Zellreaktion modulieren und immuno
stimulieren, wie beispielsweise MDP (Muramyldipeptid),
ISCOM (Immuno Stimulant Complex) oder Liposome
(Fetttröpfchen in Zellen).
Alle Vorbeugungsmittel, die gewöhnlich bei der Formu
lation von Vakzinen verwendet werden, können verwendet
werden. Eines davon ist Thimerosal [Natriumsalz von
(2-Carboxyphenylthio)-Äthylquecksilber] (ALDRICH).
Die aus dieser Erfindung resultierenden Vakzine können
erlangt werden durch Mischen einer antigenischen Phase,
die ein intaktiviertes virales Antigen enthält, und
einer anderen Phase, als Adjuvans. das ölig sein kann
oder nicht, abhängig von dem gewählten Adjuvans. Optio
nal könnten CRP-Substanzen beigegeben werden zu irgend
einer (jeder?) der beiden Phasen. Wenn das Adjuvans
ölig ist, bildet sich eine Emulsion, die in einem be
sonderen bevorzugten Fall, (wenn es sich bei dem Adju
vans um eine Mischung aus Marcol 52, Simulsol 5100 und
Montanide 888 handelt), eine doppelte Emulsion "w/o/w"
(water/oil/water) (Wasser/Öl/Wasser) ist.
Zusätzlich zu den herkömmlichen Tests muß die Vakzine
vor ihrer Verabreichung Kontrollen durchlaufen hin
sichtlich: (i) Reinheit (gegenüber Bakterien, Fungi,
Mykoplasmen und Fremdviren), (ii) Identifizierung,
(iii) Sicherheit, (iv) Wirksamkeit und (v) physiko
chemische Kontrollen; eine Anzahl Feldversuche (Bei
spiel 5.b) ist durchgeführt worden in bezug auf die
Sicherheit und Wirksamkeit der Vakzine bei einer Ge
samtheit von 5 landwirtschaftlichen Betrieben, wobei
508 Mutterschweine mit einer der aus dieser Erfindung
resultierenden Vakzinen geimpft und nachgeimpft wurden,
während die übrigen 472 Mutterschweine nicht geimpft
wurden und als Kontroll-Mutterschweine gehalten wurden,
wodurch es möglich wurde, festzustellen, daß die Vak
zine sicher und gleichzeitig wirksam ist, denn in eini
gen der landwirtschaftlichen Betriebe wurde die natür
liche Krankheit PRRS bei nicht geimpften Tieren fest
gestellt, nach dem Impfungsprozeß.
Es war möglich, zu verifizieren, daß eine (einzige)
Dosis von 2 ml ölige Vakzine mit einer Konzentration
von inaktiviertem viralen Antigen gleich oder höher als
105.5 TCID₅₀, über den tiefen intramuskulären Weg ver
abreicht, fähig ist, einen sehr hohen Prozentsatz ge
impfter Tiere gegen PRRS zu schützen.
Das folgende Impfungsprogramm wird empfohlen:
* Erste Impfung: alle Zuchtschweine (Mutterschweine
und Eber) impfen und nach 21 Tagen nachimpfen. Da
nach eine Dosis während jeder Säugezeit (Mutter
schweine) und alle 6 Monate (Eber) verabreichen.
* Spätere Impfungen
- - für die Züchtung vorgesehene Tiere: Die erste Impfung sollte im Alter von 6 Monaten durchgeführt werden, Nachimpfung nach 21 Tagen.
- - Mutterschweine: Es wird empfohlen, während der Säugeperiode zu impfen, falls möglich, 15 Tage vor der Paarung.
- - Eber: Zweimal pro Jahr (alle 6 Monate) impfen.
Alternativ, wenn keine CRP-Substanz in die Vakzine ein
geschlossen worden ist, können diese Substanzen an
einer anderen Stelle als der Stelle der Inokulation,
aber gleichzeitig, injiziert werden.
Durch ein zusätzliches Ziel, das durch diese Erfindung
erreicht wird, werden Kombinationen der verschiedenen
Pathogene bei Schweinen vorgesehen, die zusätzlich zu
dem inaktivierten viralen PRRS-Antigen (Spanische Ab
stammung) ein oder mehrere der nachfolgend aufgeführten
Pathogene enthalten, um die Herstellung bi- oder multi
valenter Vakzinen zu ermöglichen.
Auf diese Weise können bi- oder multivalente Vakzinen
hergestellt werden, die ein inaktiviertes virales PRRS-
Antigen und ein oder mehrere der folgenden Pathogene
enthalten: Actinobacillus pleuropneumoniae, Haemophilus
parasuis Porcine Parvovirus, Leptospira, Escherichia
coli, Erysipelothrix rhusiopathiae, Pasteurella
multocida, Bordetella bronchiseptica, Porcine
respiratory (respiratorisches) Coronavirus, Rotavirus,
oder gegen die Pathogene, welche die Aujeszkysche
Krankheit, Schweine-Influenza oder die ansteckende
Gastroenteritis hervorrufen.
Aus der Lunge eines totgeborenen Ferkels, Nachkommen
schaft eines Mutterschweins mit den klassischen PRRS-
Symptomen, [das Mutterschwein war frei von Antikörpern
gegen die Aujeszkysche Krankheit, Schweine-Parvovirose,
Maul- und Klauenseuche, klassisches Schweinefieber,
Schweine-Influenza (Typen H1N1 und H3N2) und anstecken
de Gastroenteritis], wurde eine 10%ige Suspension in
einem DMEM-Nährbodenmedium hergestellt, mit einer Lö
sung aus Antibiotika (PEG) ergänzt, die aus 1000 IU/ml
Penicillin, 1 mg/ml Streptomycin und 0,5 mg/ml Genta
micin bestand, mit einem Verhältnis Lunge : DMEM-Lösung
von 1 : 10 (W/V). Die Suspension, die hergestellt wur
de, wurde homogenisiert und 1 Stunde lang bei Raumtem
peratur (20-22°C) stehen gelassen. Das Homogenat wurde
eingefroren und zweimal aufgetaut, zentrifugiert und
der Überstand, der erreicht wurde, bei -70°C gelagert,
um bei der Infektion alveolärer Makrophagen der Schwei
nelunge verwendet zu werden.
Ähnlich wurden Proben präpariert aus der Lunge eines
Ferkels, das lebend geboren wurde, aber innerhalb
weniger Stunden einging. Darüber hinaus wurde Blut ent
nommen und mit und ohne Antikoagulans gemischt und zur
Virusisolation (aus Blutplasma) verwendet und um ent
sprechend Serum zu erhalten.
Alveoläre Makrophagen wurden aus den Lungen von Schwei
nen entnommen, die seronegativ waren gegen die Aujesz
kysche Krankheit, Schweine-Parvovirose, Maul- und Klau
enseuche, klassisches Schweinefieber, Schweine-In
fluenza (Typen H1N1 und H3N2) und ansteckende Gastro
enteritis. Das Alter der Schweine, die verwendet wur
den, war zwischen 7 und 8 Wochen. Vor der Extraktion
der Lungen wurden die Tiere mit Phenobarbitalnatrium
anästhesiert und schmerzlos getötet. Sofort wurden die
Lungen zusammen mit der Trachea entnommen, nachdem sie
unterhalb der Epiglottis abgebunden wurde. Die extra
hierte Lunge wurde mit physiologischer Salzlösung ex
tern gewaschen, und bei sukzessiven Wäschen wurden 50
ml PBS, mit 2%o PEG-Lösung aus Antibiotika ergänzt,
eingebracht, bis eine Gesamtheit von 500 ml PBS ein
gebracht worden war. Die aus diesen Wäschen gewonnenen
Zellen wurden 10 Minuten lang mit 300 g zentrifugiert
Dieser Waschungsschritt durch Zentrifugierung wurde
zwei weitere Male wiederholt. Die erhaltenen Zellen
wurden mit PBS- und PEG-Lösung aus Antibiotika gewa
schen und in DMEMs-Medium [DMEM, mit nichtessentiellen
Aminosäuren (GIBCO), 1% Natriumpyruvat 1 mM und 1%
Glutamin 2 mM ergänzt], 10% fötales Kalbsserum (FCS)
und PEG-Lösung von Antibiotika bei 1‰ resuspen
diert. Die Zellzählung wurde in Newbauer-Kammern durch
geführt, und zu diesem Zweck wurde 1/10 Verdünnung der
Makrophagen-Suspension dadurch hergestellt, daß 0,4 ml
DMEMs und 0,5 ml einer Trypanblaulösung auf 0,1 ml
Makrophagen-Suspension beigegeben wurden. Eine Anzahl
Zellen, die zwischen 1 und 1,2 × 10⁹ rangierten, wurde
erzielt.
Ein Kulturkolben (eine Nährbodenschale ) mit 25 cm²
Oberfläche, der eine zuvor präparierte Kultur aus al
veolären Makrophagen der Schweinelunge enthielt.
(3 × 10⁶ Zellen/mg), in DMEMs-Medium und 10% FCS wurde
mit 1 ml des Homogenats einer Probe, die aus der Lunge
eines totgeborenen Ferkels stammte, infiziert. (Bei
spiel 1.A). Das Homogenat wurde 1 Stunde lang bei 37°C
in Kontakt gelassen mit der Makrophagenkultur, mit CO₂
bei pH 7,0-7,4 gepuffert und einige Tage bei 37°C in
kubiert; während dieser Tage wurde die CPE, die durch
das Virus an den Makrophagen hervorgerufen wurde, be
obachtet. An 3-4 dpi wurde beobachtet, daß die CPE
70-80% war; aus diesem Grund wurden die Kulturen bei
-80°C eingefroren.
Gleichzeitig wurde ein Nährboden mit nichtinfizierten
alveolären Makrophagen der Schweinelunge präpariert,
und zwar als negative Kontrolle verwendet.
Tochterkulturen mit dem isolierten Virus wurden vorge
sehen, bei welchen beobachtet wurde, daß die CPE, die
von dem zweiten dpi an begann, 100% war. Das Virus
wurde bei -80°C eingefroren, zu seiner späteren Iden
tifizierung und Charakterisierung. Nach dem vierten
Durchgang in Makrophagen wurden die entsprechenden
Titrationen in Probenträgern mit 96er Raster durchge
führt, wobei ein durchschnittlicher Titer von 105.6
TCID₅₀/ml nach der Methode von Reed & Muench [Am. J.
Hyg., 27: 493-497 (1938)] erzielt wurde.
Eine Probe des isolierten Virus (Spanische Abstammung),
mit der Bezeichnung PRRS-CY-218-JPD-P5-6-91, aus der
Lunge eines totgeborenen Ferkels isoliert, ist fähig),
die Krankheit experimentell zu reproduzieren und wurde
am 29. Juni 1993 bei der ECACC deponiert, unter der
entsprechenden Zugangs-No. V93070108.
In ähnlicher Weise wurde das Virus in lebenden und tot
geborenen Ferkeln isoliert, Nachkommenschaft von expe
rimentell infizierten Mutterschweinen.
Zwölf Mutterschweine, eine Kreuzung aus Deutsche Land
rasse X "Large White", wurden verwendet, die von land
wirtschaftlichen Betrieben mit systematischer serolo
gischer Kontrolle gegen die Viren der Aujeszkyschen
Krankheit, Maul- und Klauenseuche, Schweine-Parvovi
rose, klassisches Schweinefieber, Schweine-Influenza
(Typen H1N1 und H3N2) und ansteckende Gastroenteritis
stammten. Darüber hinaus wurde der Antikörperauswer
tungstest gegen das verursachende Virus von PRRS durch
geführt.
Die Mutterschweine wurden eine Woche vor Infektion in
die Sicherheitsställe des Forschungszentrums gebracht
und in separaten Ställen untergebracht. Zwischen den
Tagen 77 und 90 der Trächtigkeit wurden die Mutter
schweine, durch die Nummern 53, 76, 8, 62, 91, 93 und
19 identifiziert, mit 5 ml, intravenöser Weg (IV) und
5 ml, intranasaler Weg (IN), des PRRS-Virus, Spani
sche Abstammung, an alveolären Makrophagen der Schwei
nelunge isoliert, als PRRS-CY-218-JPD-PS-6-91 identifi
ziert, infiziert, von einem vierten Durchgang auf Ma
krophagen an durch ein 200-nm-Filter hindurch gefil
tert und mit einem Titer von 105.6 TCID₅₀/ml. Die 5
verbleibenden Mutterschweine (No. 14, 40, 13, 30 und
85) wurden zwischen den Tagen 65 und 85 der Träch
tigkeit mit 5 ml (nur) via IN des Virus inokuliert.
Während des Experiments wurden die Futteraufnahme, die
rektale Temperatur und der klinische Zustand der Tiere
wie auch reproduktive Veränderungen (Frühgeburten, ver
zögerte Geburten, lebende, aber schwächliche Ferkel,
totgeborene Ferkel, mumifizierte Ferkel und gesunde
Ferkel) täglich überwacht.
Um mit dem Ausschluß der oben erwähnten Pathogene fort
zuschreiten, wurden von den Mutterschweinen Blutproben
entnommen, vor und nach Infektion., mit dem Ergebnis,
daß die Tiere seronegativ waren, gegenüber den Patho
genen vor und nach Infektion, und seropositiv gegen
PRRS nach Infektion (siehe Tabelle 1 Abschnitt
4.3.1.).
Die reproduktiven Ergebnisse erscheinen in den Tabellen
2 und 3. Wie in Tabelle 2 dargestellt, waren von den 93
Ferkeln, die geworfen wurden, 15 mumifiziert, 35 totge
boren, 22 wurden lebend geboren, gingen aber am dritten
Tag ein, und 21 überlebten 7 Tage.
Einige Mutterschweine zeigten 2-4 Tage lang Freßunlust,
an den Tagen 6 und 8 nach Infektion, während andere
Mutterschweine an dem zweiten Tag nach Infektion Freß
unlust zeigten. Hyperthermie wurde in keinem Fall fest
gestellt. Bei 4 Mutterschweinen (No. 8, 62, 92 und 93)
war der Wurf jeweils 1 bis 6 Tage zu früh, während sich
bei den anderen 3 Mutterschweinen das Werfen um 1 oder
2 Tage verzögerte.
Bei den Ferkeln, die lebend geboren wurden, zeigten 1
oder 2 Ferkel pro Wurf Ödem in den Augen. Die schwäch
lichen Ferkel zeigten Inkoordination, Parese des Hin
terviertels, sich sträubende Borsten und Myoclonia. Bei
der Nekropsie, die bei einigen der totgeborenen und
schwächlichen Ferkel bewirkt wurde, wurde das Vorhan
densein von abundanter klarer Flüssigkeit in der
Thoraxhöhle festgestellt. Gesunde Ferkel, die durch in
fizierte Mütter geboren wurden und nach 8-12 Lebens
tagen schmerzlos getötet wurden, zeigten graue Foci
einer Konsolidation. Unter dem Mikroskop war die signi
fikanteste Veränderung eine leichte, Multifoci
aufweisende interstitielle Pneumonie mit Vergrößerung
alveolärer Septi wegen der Infiltration mononuklearer
Zellen. Diese krankhaften Veränderungen zeigten sich
bei allen Tieren, die bei dem Experiment analysiert
wurden.
Wie aus Tabelle 3 ersichtlich ist, waren von 65 Fer
keln, die geworfen wurden, 36 totgeboren, 26 wurden le
bend geboren, aber schwächlich, und gingen am zweiten
Lebenstag ein, und 3 überlebten die erste Lebenswoche.
Ein Mutterschwein ferkelte 12 Tage zu früh (No. 40),
während die anderen Mutterschweine 1 oder 2 Tage zu
spät warfen. Die klinischen Anzeichen der Ferkel, die
schwächlich geboren wurden, sind jenen ähnlich, die via
IN + IV erreicht wurden. Interstitielle Pneumonie wurde
ebenfalls beobachtet. Die infizierten Mutterschweine
zeigten keine Freßunlust und keine Hyperthermie.
Der relevanteste Unterschied zwischen den beiden Infek
tionssystemen besteht darin, daß via IN + IV mumifi
zierte Ferkel beobachtet wurden und daß 1 bis 2 der
Ferkel, die bei jedem Wurf lebend geboren wurden, Ödem
um die Augen herum erkennen ließen.
Im Hinblick auf die Ergebnisse, die erzielt wurden,
kann geschlossen und angegeben werden, daß das Modell
für eine experimentelle Infektion bei Mutterschweinen,
an etwa 80 Tagen der Trächtigkeit, via beide Infek
tionswege (IN und IV) mit dem Virus, das von Tieren,
die natürlich infiziert wurden, isoliert wurde, (Spani
sche Abstammung), die Krankheit PRRS bei trächtigen
Mutterschweinen reproduziert und einen hohen Anteil
mumifizierter Föten. totgeborener Ferkel und lebender,
aber schwächlicher Ferkel hervorruft, sehr ähnlich dem
Anteil, der bei akuten natürlichen Infektionsausbrüchen
beobachtet wurde. Es ist zu empfehlen, über den IN-Weg
künstlich zu infizieren, aus dem Grund, daß dies der
natürliche Weg einer Infektion auf dem Feld ist und
daher der geeignetste Weg ist, die Wirksamkeit der Vak
zinen zu bewerten.
Durch dieses Experiment ist es auch möglich geworden,
ein Modell für die experimentelle Infektion bei träch
tigen Mutterschweinen zu etablieren, das die Verifi
kation der Wirksamkeit der Vakzinen ermöglicht.
A: Mutterschwein
B: Zeitpunkt der Infektion (Tage der Trächtigkeit)
C: Ferkeln (Tage der Trächtigkeit)
D: Gesamtzahl der Ferkel
E: Mumifizierte Ferkel
F: Schwächliche Ferkel, nach 48 h tot
G: Totgeborene Ferkel
H: Ferkel, anscheinend bei guter Gesundheit
B: Zeitpunkt der Infektion (Tage der Trächtigkeit)
C: Ferkeln (Tage der Trächtigkeit)
D: Gesamtzahl der Ferkel
E: Mumifizierte Ferkel
F: Schwächliche Ferkel, nach 48 h tot
G: Totgeborene Ferkel
H: Ferkel, anscheinend bei guter Gesundheit
- h1: Tot zwischen den Tagen 2 und 7
- h2: Lebend nach einer Woche
I: Interstitielle Pneumonie.
NT: Not tested/Nicht getestet
NT: Not tested/Nicht getestet
Dieses Experiment wurde vorgesehen mit dem Zweck, zu
verifizieren, daß das isolierte Virus (Spanische Ab
stammung), das reproduktive Veränderungen bei Mutter
schweinen hervorruft, fähig ist, klinische Anzeichen
wie auch makroskopische und mikroskopische krankhafte
Veränderungen in den Lungen von 2 Monate alten Ferkeln
hervorzurufen. Zu diesem Zweck wurden 10 Ferkel über
den IN-Weg mit 5 ml des Virus, Spanische Abstammung,
mit einem Titer von 105.6 TCID₅₀/ml infiziert, und 6
andere Ferkel wurden als Kontrollen gelassen, (alle
diese Ferkel stammten aus 2 Würfen). Die Tiere wurden
an den Tagen 3,7, 8, 9 und 11 nach Infektion schmerz
los getötet. Die Resultate, die erzielt wurden, sind in
Tabelle 4 angegeben.
No.: Pig number
I/C: Infected (I) or Control (C)
DPI: Days Post infection
I.P.: Interstitial pneumonia
V.I.: Virus isolation
2+: Slight interstitial pneumonia
3+: Intermediate interstitial pneumonia
4+: Serious interstitial pneumonia
NT: Not tested
NL: No lesions
I/C: Infected (I) or Control (C)
DPI: Days Post infection
I.P.: Interstitial pneumonia
V.I.: Virus isolation
2+: Slight interstitial pneumonia
3+: Intermediate interstitial pneumonia
4+: Serious interstitial pneumonia
NT: Not tested
NL: No lesions
No.: Nummer des Schweins
I/C: Infiziert (I) oder Kontrolle (C)
DPI: Tage nach Infektion
I.P.: Interstitielle Pneumonie
V.I.: Virusisolation
2+: Leichte interstitielle Pneumonie
3+: Mittlere interstitielle Pneumonie
4+: Schwere interstitielle Pneumonie
NT: Not tested/Nicht getestet
NL: No lesions/Keine krankhaften Veränderungen.
I/C: Infiziert (I) oder Kontrolle (C)
DPI: Tage nach Infektion
I.P.: Interstitielle Pneumonie
V.I.: Virusisolation
2+: Leichte interstitielle Pneumonie
3+: Mittlere interstitielle Pneumonie
4+: Schwere interstitielle Pneumonie
NT: Not tested/Nicht getestet
NL: No lesions/Keine krankhaften Veränderungen.
Während der 11 Tage des Experiments wurden keine klini
schen respiratorischen Anzeichen und keine Hyper
thermie beobachtet, obwohl Gewichtsverlust bei den in
fizierten Tieren im Vergleich mit nichtinfizierten Tie
ren auftrat. Unter mikroskopischer Beobachtung war der
relevanteste Aspekt das Vorhandensein von Mehrfachher
den einer Konsolidation in den Lungen, mit Blut über
füllte Lymphknoten in der Mandibel und einige Darmblu
tungen. Auf mikroskopischer Ebene wurde interstitielle
Pneumonie beobachtet.
Das Virus wurde aus Lösungen isoliert, die aus den
Wäschen infizierter Tierlungen an einer frischen Makro
phagenkulter erlangt wurden, aber das Virus wurde nicht
isoliert von den Kontrolltieren her, bei welchen keine
Serokonversion und auch keine makroskopischen oder
mikroskopischen krankhaften Veränderungen auf Lungen
ebene beobachtet wurden.
Wenn Zellzählungen aus den Wäschen infizierter Tier
lungen vorgenommen wurden, wurden 30% tote Zellen (Ma
krophagen) beobachtet, was einen Faktor von besonderer
Bedeutung bei sekundären Infektionen bilden kann, wegen
der Destruktion eines einen Schlüssel bildenden immuno
logischen Abwehrelements (Makrophagen).
Das Nichtvorhandensein respiratorischer Anzeichen könn
te auf die Tatsache zurückzuführen sein, daß experi
mentelle Infektionen in Ställen mit kontinuierlichen
Desinfektionsbehandlungen durchgeführt wurden und daher
eine bakterielle Konzentration viel kleiner war, ver
glichen mit jener, die in Herden unter Feldbedingungen
vorhanden ist.
Die Methode H. Feldman und S. Wang (Abschnitt 4.3.3)
wurde angewendet, die in dem Wissen resultierte, daß
das isolierte Virus eine Lipidhülle besitzt, da ein
Abfall im Titer von 4 log₁₀ von den Kontrollkulturen zu
jenen, die mit Chloroform behandelt wurden, vorhanden
ist.
Das Virus, an alveolären Makrophagen der Schweinelunge
repliziert, wurde durch Filtrierung und Zentrifugierung
in einem 10%igen bis 50%igen Metrizamidgradienten
(SIGMA) purifiziert, was ein Band zur Folge hatte, das
nochmals zentrifugiert wurde, wie in Abschnitt 4.3.4
erwähnt. Mit dem purifizierten Virus wurde eine
Elektrophorese in Polyacrylamid-Gel durchgeführt und
ein Immunoblot entwickelt mit einem spezifischen Serum,
das Proteine mit scheinbaren Molekulargewichten von 15,
23, 54 und 66 K Dalton erkennen ließ.
Die virale RNA wurde purifiziert, unter Verwendung
eines kommerziellen Koffers (PHARMACIA), der das Binden
des RNA-Poly-(A)-Schwanzes an eine Zellulose-Oligo-
(dT)-Matrix ermöglicht und ihre spätere Elution.
Ein kommerzieller Koffer wurde verwendet (BOEHRINGER,
MANNHEIM) (Abschnitt 4.3.4 iii).
Das cDNA wurde in einem Vektor geklont, der aus pUC18
abgeleitet war, und eine Serie von Klonen wurde er
zielt, welche die komplette Nukleotid-Sequenz enthielt,
die den ORFs 3 bis 7 entsprach.
Die Resultate des Sequenzierens der cDNA des in unseren
Labors isolierten Virus (ORFs 3-7) sowie der Vergleich
zwischen jener Sequenz und der LV-Sequenz sind in
Abschnitt 4.3.4 v) erwähnt, in dem ersichtlich ist, daß
auf Aminosäure-Ebene ein Homologiegrad von ungefähr
94,9% und eine Gesamtheit von 47 verschiedenen Amino
säuren vorhanden ist, von denen 35 nichtkonservativen
Substitutionen entsprechen. Diese Unterschiede auf Ami
nosäure-Ebene können für die verschiedenen Pathoge
nizitäten, die zwischen den verschiedenen PRRS-Virusab
stammungen, die isoliert wurden, vorhanden sind, ver
antwortlich sein.
Eine Vakzine, die fähig ist, vor PRRS zu schützen, wird
in Emulsionsform präpariert, gemäß der nachfolgend be
schriebenen Prozedur.
Eine alveoläre Makrophagenkultur der Schweinelunge wird
mit MOI (multiplicity order infection/übersetzt etwa:
Mehrfach-Reihenfolge-Infektion) von 0,001 infiziert und
24 Stunden lang bei 37°C inkubiert; am Ende davon wird
das Nährbodenmedium durch ein Infektionsmedium (DMEM,
mit 2% FCS ergänzt) substituiert. Der Nährboden wird 4
Tage lang bei 37°C inkubiert, bis 70-80% CPE beobach
tet wird. Sobald diese Periode vervollständigt ist,
wird ein IPMA-Test durchgeführt, um die Identifizierung
zu bestätigen. Das Virus wird durch Vakuumaspiration
gesammelt und bei -80°C eingefroren.
Die virale Suspension, die für die Formulation einer
Vakzine prädestiniert ist, sollte einen Mindesttiter
von 105.5 TCID₅₀/ml (vor ihrer Inaktivierung) aufweisen
und sollte nicht verseucht sein durch Bakterien, Fungi,
Mykoplasmen oder andere Viren. In dem Fall, daß der
Titer niedriger ist, sollte er durch Konzentrieren des
Antigens eingeregelt werden.
Für die Inaktivierung der viralen Suspension wird
2%o β-Propiolactonlösung beigegeben und eine Nacht
lang bei 4°C verrührt, wobei der pH-Wert bei 7,4 durch
Beigeben von 0,5 N NaOH aufrechterhalten wird. Sobald
die Inaktivierungsperiode vervollständigt ist, wird die
virale Suspension 1 Stunde lang bei 37°C aufrechter
halten.
Dann wird folgendes präpariert:
- a) eine antigenische Phase des viralen Antigens, inaktiviert mit einer Mindestkonzentration von 105.5 TCID₅₀/Dosis, und des Aufrechterhalters (preserver), und
- b) eine ölige Phase, aus Marcol 52, Simulsol 1500 und Montanide 888 zusammengesetzt.
Die wäßrige Phase, durch Umrühren aufrechterhalten,
wird dem Reaktor, welcher die ölige Phase enthält, die
ebenfalls durch Umrühren aufrechterhalten wird, langsam
beigegeben. Sobald die wäßrige Phase vollständig bei
gegeben worden ist, wird das Umrühren 10 Minuten lang
fortgesetzt.
In einem besonderen bevorzugten Fall sind Vakzinen prä
pariert worden, die fähig sind, PRRS zu verhindern, pro
Dosis von 2 ml aufweisend:
- a) 53% einer antigenischen Phase, enthaltend:
- i) PRRS virales Antigen in DMEM-Nährbodenme dium, Spanische Abstammung, inaktiviert mit β-Propiolacton, mit einer Mindestkonzentra tion von 105.5 TCID₅₀, und
- ii) Thimerosal 0,01%, und
- b) 47% einer öligen Phase, enthaltend:
- i) Marcol 52 790,0 mg
- ii) Simulsol 5100 70,0 mg
- iii) Montanide 888 80,0 mg.
Das Verhältnis ölige Phase/wäßrige Phase ist ein Ver
haltnis Gewicht/Volumen (W/V). Diese Vakzine ist mit
MSD Ref. 1 bezeichnet worden. Die erhaltene Vakzine
wird den entsprechenden Kontrollversuchen unterworfen,
vor Anwendung.
Eine andere Vakzine wurde ähnlich bereitet, unter
Verwendung von Munokynin® (Aluminiumhydroxid und Quil
A durch AMERICAN CYANAMID geliefert) als Adjuvans,
wobei der gleiche Betrag von inaktiviertem Virus beibe
halten wird. Diese Vakzine ist mit MSD Ref. 2 be
zeichnet worden.
Ein Feldversuch wurde durchgeführt mit einer Gesamtheit
von 128 Mutterschweinen, von denen 49 mit einer Dosis
der mit MSD Ref. 1 bezeichneten Vakzine vakziniert
wurden, 50 Mutterschweine mit einer Dosis der mit MSD
Ref. 2 (Munokynin®) bezeichneten Vakzine vakziniert
wurden und die verbleibenden 29 nicht vakziniert wurden
und als Kontrollen gehalten wurden. Nach 22 Tagen wur
den die Mutterschweine mit einer Dosis der entspre
chenden Vakzine nachgeimpft.
Die folgenden Parameter wurden bewertet:
T₀: Vakzinierung und Aderlaß
T₂₂: Nachvakzinierung und Aderlaß
T₅₁: Aderlaß 50 Tage nach Vakzinierung.
T₂₂: Nachvakzinierung und Aderlaß
T₅₁: Aderlaß 50 Tage nach Vakzinierung.
Die Resultate, die erzielt wurden, sind in den Tabellen
5 und 6 angegeben, die den Prozentsatz von Mutter
schweinen mit positiver serologischer Reaktion (Tabelle
5) und das arithmetische Mittel der serologischen
Titer, die erreicht wurden, (Tabelle 6), wiedergeben.
Signifikante lokale Reaktionen oder Reaktionen allge
meiner Art wurden nicht beobachtet.
Von den Resultaten, die erzielt wurden, ausgehend, kann
bestätigt werden, daß eine positive Serokonversion mit
beiden Vakzinen hervorgerufen wird, wenn auch etwas
höher, wenn die Vakzine MSD Ref. 1 (öliges Adjuvans)
verwendet wird. Bei Nachvakzinierung wurde ein höherer
Serokonversions-Prozentsatz beobachtet, und das arith
metische Mittel der Titer, die erzielt wurden, ist bei
Tieren, die mit MSD Ref. 1 vakziniert wurden, höher.
Achtzehn erstmalig werfende Mutterschweine (Kreuzung
Deutsche Landrasse x Large White) wurden aus einem
Schweinezuchtbetrieb ausgewählt und wurden in zwei
Ställe verteilt, mit der Rate von 9 Mutterschweinen pro
Stall, so daß Mutterschweine, die mit der gleichen Vak
zine (MSD Ref. 1 oder MSD Ref. 2) vakziniert wurden, in
Beispiel 3, oben, erhalten, in dem gleichen Stall
untergebracht waren.
Neun Mutterschweine wurden über den tiefen IM-Weg vak
ziniert, mit einer Dosis von 2 ml Vakzine MSD Ref. 1,
enthaltend 105.5 TCID₅₀/Dosis inaktivierter Virustiter,
und wurden mit einer anderen Dosis des gleichen Titers
20 Tage später nachvakziniert. Die anderen 9 Mutter
schweine wurden an den gleichen Tagen mit der Vakzine
MSD Ref. 2 (2 ml Dosen, 105.5 TCID₅₀/Dosis inaktivier
ter Virustiter) vakziniert und nachvakziniert.
Während der ersten 5 Tage nach Inokulation wurden die
folgenden Beobachtungen gemacht:
Bestehend aus makroskopischer Beobachtung der Stelle
der Inokulation und Abtastung, wobei das Ausmaß einer
Entzündung im Vergleich mit Objekten bekannter Größe
notiert wurde.
Bestehend aus makrospkopischer Beobachtung der Tiere
und Verifikation ihres Verlangens nach Futter. Im nega
tiven Fall wird alle 12 Stunden die rektale Temperatur
geprüft, bis Hyperthermie oder irgendwelche anderen un
günstigen Anzeichen verschwunden sind.
Die erzielten Resultate lassen erkennen, daß eine
leichte entzündliche Reaktion bei einigen Mutterschwei
nen vorhanden war, an der Stelle der Inokulation deut
lich sichtbar, die in jedem Fall innerhalb weniger Tage
verschwand; eitrige Formationen wurden nicht beobach
tet. Nur eines der Mutterschweine weigerte sich, die
Gesamtheit der Fütterung bei der ersten Postinokula
tions-Fütterung aufzunehmen, aber die Futteraufnahme
war bei der folgenden Fütterung normal, so daß es nicht
notwendig war, die rektale Temperatur zu messen. Keine
wesentlichen Unterschiede bei der Reaktion auf die ver
schiedenen getesteten Vakzinen wurden festgestellt; auf
dieser Grundlage kann bestätigt werden, daß beide
Vakzinen sicher sind.
Sieben trächtige Mutterschweine (Kreuzung Deutsche
Landrasse x Large White) aus einem Schweinezuchtbetrieb
wurden willkürlich ausgewählt: 6 erstmalig werfende
Mutterschweine, etwa 9 Monate alt, und 1 mehrwerfendes
Mutterschwein, 3 Jahre und 7 Monate alt.
Die mit MSD Ref. 1 bezeichnete Vakzine wurde aus
schließlich verwendet.
Die Mutterschweine wurden über den tiefen IM-Weg mit
einer Dosis von 2 ml der Vakzine, die einen inakti
vierten Virustiter von 105.5 TCID₅₀/ml enthielt, vakzi
niert, und 15 Tage später wurden sie mit einer Dosis
des gleichen Titers nachvakziniert.
Während der ersten 5 Tage nach der Inokulation wurden
die folgenden Beobachtungen gemacht:
Bestehend aus makroskopischen Beobachtungen der Inoku
lationsstelle und Abtastung, wobei das Ausmaß der Ent
zündung im Vergleich mit Objekten wohlbekannter Größe
notiert wurde.
Bestehend aus makroskopischer Beobachtung der Tiere und
Prüfung hinsichtlich Verlust des Verlangens nach
Futter.
Messen der rektalen Temperatur 24 Stunden nach Vakzi
nierung und 24 Stunden nach Revakzinierung.
Die Resultate, die erzielt wurden, lassen erkennen, daß
eine leichte lokale Reaktion bei zweien der Tiere vor
handen war, die wegen ihrer geringen Größe nicht ernst
war und nach wenigen Tagen verschwand. Freßunlust oder
Hyperthermie wurden in keinem Fall beobachtet. Auf
dieser Grundlage kann bestätigt werden, daß die Vakzine
sicher ist.
Dieses Experiment wurde auf den nachfolgend aufgeführ
ten 5 Farmen durchgeführt. Eine variable Anzahl von
Mutterschweinen von jeder Farm wurde über den tiefen
IM-Weg mit einer Dosis von 2 ml der Vakzine MSD Ref. 1,
die einen Titer von 105.5 TCID₅₀/Dosis des inakti
vierten Virus enthielt, vakziniert und 21 Tage später
mit einer anderen Dosis des gleichen Titers nachvak
ziniert, während die anderen Mutterschweine nicht
vakziniert wurden und als Kontrollen verwendet wurden:
Es ist möglich gewesen, zu verifizieren, daß die Vak
zine sicher ist, nach der Beobachtung allgemeiner und
lokaler Reaktionen. Lokale Reaktionen wurden nur bei
1% der Tiere beobachtet. In Zusammenhang mit den pro
duktiven Parametern, die auf den oben aufgeführten Far
men beobachtet wurden, wurden keine Variationen beob
achtet, verglichen mit ihren klinischen Historien.
Bezüglich einer serologischen Reaktion haben einige
Farmen eine Serokonversion in bezug auf die Vakzine,
während bei anderen Farmen die Reaktion negativ ist.
Dies ist nicht indikativ für eine geringe Höhe an
Schutz, da bei den experimentellen Infektionsversuchen
in dem Labor seronegative Tiere einer experimentellen
Infektion widerstehen (Beispiele 7 und 8).
In Zusammenhang mit der Übertragung mütterlicher Immu
nität von vakzinierten Tieren her auf ihre Nachkommen
schaft ist ein großer Abfall bei den Antikörpertitern
im Alter von einem Monat vorhanden.
Bei vakzinierten und nachvakzinierten Mutterschweinen,
die serologisch positiv sind, ist ein großer Abfall bei
den Antikörpertitern 2 Monate von der Nachvakzinierung
an vorhanden.
Fünf trächtige Mutterschweine (Kreuzung Deutsche Land
rasse x Large White) von einem Schweinezuchtbetrieb
wurden verwendet. Die Tiere wurden zu den Sicherheits
ställen des Forschungszentrums gebracht.
Zwei Mutterschweine wurden willkürlich ausgewählt und
wurden mit der Vakzine, mit der Bezeichnung MSD Ref. 1,
vakziniert. Ein anderes Mutterschwein wurde mit der
Vakzine, mit der Bezeichnung MSD Ref. 2, vakziniert.
Die 2 verbleibenden Mutterschweine wurden nicht vakzi
niert.
Die Mutterschweine wurden über den tiefen IM-Weg mit
einer Dosis von 2 ml der Vakzine MSD Ref. 1 oder der
Vakzine MSD Ref. 2, die einen inaktivierten Virustiter
105.5 TCID₅₀ enthielten, vakziniert, und 20 Tage später
wurden die Mutterschweine mit einer anderen Dosis des
gleichen Titers vakziniert.
Danach wurden, zwischen den Tagen 77 und 90 der Träch
tigkeit, alle Mutterschweine über den IN-Weg mit 5 ml
des Virus PRRS-CY-218-JPD-P5-6-91, mit einem Titer von
105.8 TCID₅₀/ml, infiziert. Zum Zeitpunkt der Infektion
wurde verifiziert, daß alle vakzinierten Mutterschweine
Antikörper gegen das verursachende Virus der PRRS auf
wiesen (positive Serologie). Die Tabelle 7 zeigt die
reproduktiven Resultate, die erzielt wurden, als
Ganzes:
Die Resultate, die erzielt wurden, zeigen, daß die Mut
terschweine, die mit der Vakzine MSD Ref. 1 (öliges
Adjuvans) einer Infektion besser widerstanden als die
Mutterschweine, die mit der Vakzine MSD Ref. 2 (wäßri
ges Adjuvans) vakziniert wurden; dies könnte bedeuten,
daß das Adjuvans eine wichtige Rolle spielt bei dem
Aufbau der Zellimmunität.
Elf trächtige Zuchtmutterschweine (Kreuzung Deutsche
Landrasse x Large White) aus einem Schweinezuchtbetrieb
wurden verwendet. Die Tiere wurden zu den Sicherheits
ställen des Forschungszentrums gebracht.
Drei Mutterschweine wurden willkürlich ausgewählt (die
Mutterschweine No. 57, 63 und 74) und wurden mit der
Vakzine, mit der Bezeichnung MSD Ref. 1, vakziniert.
Drei Mutterschweine (No. 15, 18 und 23) wurden mit der
Vakzine, mit der Bezeichnung MSD Ref. 2, vakziniert,
und die verbleibenden 5 Mutterschweine (No. 14, 40, 13,
30 und 85) wurden nicht vakziniert.
Die Mutterschweine wurden über den tiefen IM-Weg mit
einer Dosis von 2 ml der Vakzine mit der Bezeichnung
MSD Ref. 1 oder der Vakzine MSD Ref. 2. die einen
inaktivierten Virustiter von 105.5 TCTD₅₀/Dosis ent
hielt, vakziniert und mit einer anderen Dosis des glei
chen Titers 20 Tage später nachvakziniert. Lokale und
allgemeine Reaktionen wurden beobachtet.
Die serologische Reaktion bei den Tieren wurde verifi
ziert durch den IPMA-Test gemäß dem folgenden Programm:
T₀: Aderlaß und Vakzinierung
T₂₀: Aderlaß und Nachvakzinierung
T₄₂: Aderlaß
T₇₈: Aderlaß und experimentelle Infektion
T₈: Aderlaß nach experimenteller Infektion
T₂₅: Aderlaß nach experimenteller Infektion
T₅₀: Aderlaß nach experimenteller Infektion
T₂₀: Aderlaß und Nachvakzinierung
T₄₂: Aderlaß
T₇₈: Aderlaß und experimentelle Infektion
T₈: Aderlaß nach experimenteller Infektion
T₂₅: Aderlaß nach experimenteller Infektion
T₅₀: Aderlaß nach experimenteller Infektion
Eine experimentelle Infektion wurde in den Sicherheits
ställen des Forschungszentrums durchgeführt. Alle Tiere
wurden mit der Rate von 5 ml des virulenten Virus
PRRS-CY-218-JPD-PS-6-91 mit einem Titer von
105.8 TCID₅₀/ml über den IN-Weg infiziert. Die serolo
gische Reaktion wurde notiert wie auch die Anzahl der
Ferkel, die durch jedes Mutterschwein lebend geboren
und tot geboren wurden. Prä- und Post-Kolostrum-Blut
entnahmen wurden bei den Ferkeln vorgenommen, und Lun
gen- und Hirnproben wurden den totgeborenen Ferkeln und
den Ferkeln, die an verschiedenen Tagen schmerzlos ge
tötet wurden, entnommen, zur Isolation des Virus und
histologische Schnitte.
Die Resultate, die erzielt wurden, sind in den
nachfolgenden Tabellen 8-10 aufgeführt:
a: Diese Mutterschweine gingen ein wegen über
mäßig hoher Umgebungstemperatur. Kaiser
schnitt wurde durchgeführt nach 112 Tagen
Trächtigkeit.
1: Nummer, die jedem Tier zugeordnet wurde.
2: Ferkel, (die Nummer, die jedem Ferkel zuge ordnet wurde, entspricht der Reihenfolge der Geburt).
3: Prä-Kolostrum-Serologie
4: Post-Kolostrum-Serologie
5: Isolierung des Virus
NT: Not tested/Nicht getestet
-: Negativ
+: Positiv
H: Hours/Stunden
NP: Not pregnant/Nicht trächtig.
1: Nummer, die jedem Tier zugeordnet wurde.
2: Ferkel, (die Nummer, die jedem Ferkel zuge ordnet wurde, entspricht der Reihenfolge der Geburt).
3: Prä-Kolostrum-Serologie
4: Post-Kolostrum-Serologie
5: Isolierung des Virus
NT: Not tested/Nicht getestet
-: Negativ
+: Positiv
H: Hours/Stunden
NP: Not pregnant/Nicht trächtig.
Aus den Resultaten, die erzielt wurden, ist ersicht
lich, daß eine positive Serokonversion gegen das ver
ursachende Virus der PRRS vorhanden ist. Darüber hinaus
ist ein zufriedenstellendes Verhalten gegen experimen
telle Infektion vorhanden, im Vergleich mit den Kon
trolltieren, bei denen Tod bei der Mehrzahl der Föten
hervorgerufen wurde.
Folglich kann bestätigt werden, daß es sich bei dieser
Vakzinierung um eine wirkungsvolle Maßnahme zur Verhin
derung der PRRS handelt.
Dieses Experiment wurde für die Verifizierung der Wirk
samkeit der Vakzine, als MSD Ref. 1 identifiziert, bei
einem experimentellen Infektionstest vorgesehen, unter
Verwendung von 2 pathogenischen Stämmen des Erreger
virus der PRRS.
Die pathogenischen PRRS-Abstammungen, die verwendet
wurden, waren:
- i) Spanische Abstammung, PRRS-CY-218-JPD-P5-6-91, und
- ii) Französische Abstammung, SDRP II 8B, durch Dr. E. Albina des "Laboratoire Central de Recherches Avicole et Porcine", Ploufragan, Frankreich, zur Verfügung gestellt.
Die Vakzine, die verwendet wurde, war die Vakzine mit
der Bezeichnung MSD Ref. 1, deren Formel in Beispiel 5
angegeben ist.
Dreißig Mutterschweine, seronegativ gegen die Verur
sacherviren der PRRS, wurden verwendet, in einem repro
duktiven Zyklus, der nicht zwischen 10 Tage vor bis 10
Tage nach der Paarung und auch nicht 10 vor bis 10 Tage
nach dem Werfen bestand.
Vier Gruppen von Tieren wurden gebildet:
- A: 10 Mutterschweine, über den IM-Weg vakziniert und nachvakziniert und über den IN-Weg mit der Spanischen Abstammung PRRS-CY-218-JPD- P5-6-91 des Virus infiziert.
- B: 5 Mutterschweine, keiner Vakzinierung unter zogen und über den IN-Weg mit der Spanischen Abstammung PRRS-CY-218-JPD-P5-6-91 infiziert.
- C: 10 Mutterschweine, über den IM-Weg vakziniert und nachvakziniert und über den IN-Weg mit der Französischen Abstammung SDRP II 8B infi ziert.
- D: 5 Mutterschweine keiner Vakzinierung unter zogen und über den IN-Weg mit der Franzö sischen Abstammung SDRP II 8B infiziert.
Zwanzig Mutterschweine der oben erwähnten Gruppen A und
C wurden mit einer Dosis von 2 ml der Vakzine mit der
Bezeichnung MSD Ref. 1 über den tiefen IM-Weg vakzi
niert und 21 Tage später mit der gleichen Dosis der
Vakzine nachvakziniert.
Danach wurden, zwischen den Tagen 70 und 80 der Träch
tigkeit, alle Mutterschweine experimentell infiziert
mit:
Gruppen A und B: 5 ml des Virus PRRS-CY-218-JPD- PS-6-91, mit einem Titer von 105.8 TCID₅₀/ml, über den IN-Weg, und
Gruppen C und D: 5 ml des Virus SDRP II 8B, mit einem Titer von 105.5 TCID₅₀/ml, über den IN-Weg.
Gruppen A und B: 5 ml des Virus PRRS-CY-218-JPD- PS-6-91, mit einem Titer von 105.8 TCID₅₀/ml, über den IN-Weg, und
Gruppen C und D: 5 ml des Virus SDRP II 8B, mit einem Titer von 105.5 TCID₅₀/ml, über den IN-Weg.
Parameter, die bewertet wurden
- 1. Serologische Reaktion durch IPMA-Analyse, und
zwar:
T₀: Aderlaß und Vakzinierung
T₂₁: Aderlaß und Nachvakzinierung
T₄₁: Aderlaß
TI : Aderlaß und Infektion
TI+7: Aderlaß nach 7 Tagen nach der Infektion. - 2. Bewertung rektale Temperatur, lokale Reaktion und allgemeine Reaktion während der 4 Tage nach der Vakzinierung und Nachvakzinierung, oder bis die Temperatur oder klinische Anzeichen, wenn über haupt, verschwanden.
- 3. Bewertung rektale Temperatur, Futteraufnahme und klinische Anzeichen während der 6 Tage, die der experimentellen Infektion folgten.
- 4. Ermittlung von Antikörpern im Serum und Isolierung des Virus im Serum und in den Monozyten, aus dem gesamten Blut extrahiert.
- 5. Reproduktive Parameter zum Zeitpunkt des Werfens, wie beispielsweise die Anzahl der lebend geborenen Ferkel, die Anzahl der tot geborenen oder mumi fizierten Ferkel und die Anzahl der Ferkel, die lebend, aber schwächlich geboren wurden, die in nerhalb der ersten Woche eingingen.
- 6. Bestimmung des Virusbetrages, der im Serum vor handen ist, mittels Titrierungen an Makrophagen, auf CPE basierend.
- 7. Bestimmung des Virus in der pleuralen Flüssigkeit und in den Lungen der Ferkel.
Die reproduktiven Parameter-Resultate sind in den
Tabellen 11-12 angegeben (Herausforderung mit PRRS-Cy-
218-JPD-P5-6-91) und 13-14 (Herausforderung mit SDRP II
8B).
68% Schutz wird festgestellt, wenn man die Ferkel, die
lebend geboren wurden, mit den Ferkeln, die 7 Tage
überlebten, vergleicht. Die Tatsache, daß eine experi
mentelle Infektion viel stärker ist als eine natürliche
Infektion auf dem Feld, zu den obigen Resultaten hinzu
gerechnet, macht es möglich, vorherzusagen, daß die
Aussichten für einen Schutz sogar noch besser sind.
Die Spanische Abstammung, die für die Infektion verwen
det wurde, hat eine extrem hohe pathogenische Potenz
(90,5%), da nur 4 Ferkel von den 42 Ferkeln, die gebo
ren wurden, die erste Woche überlebten.
24,3% ungefähre Sterblichkeit wird festgestellt. Die
Pathogenizität der Französischen Abstammung ist sehr
schwach (24,3%, im Vergleich zu den Resultaten, die
durch die Herausforderung mit der Spanischen Abstammung
erzielt wurden (Sterblichkeit 90,5%). Die Resultate,
die für die Bewertung der Wirksamkeit verwendet wurden,
wenn man vakzinierte und nichtvakzinierte Mutterschwei
ne vergleicht, sind im Fall der Französischen Abstam
mung nicht sehr signifikant. Jedoch und in jedem Fall
wird die Pathogenizität bei den vakzinierten Tieren auf
17,8% reduziert.
a): Eine andere Krankheit (nicht PRRS), (die Ferkel
sind nicht eingeschlossen)
b): Krank, starb vor Infektion
c): Krank, starb aus einem anderen Grund
(1): Nummer des Mutterschweins
(2): Gesamtzahl der Ferkel
(3): Anzahl der gesunden Ferkel, die geboren wurden
(4): Anzahl der schwächlichen Ferkel, die geboren wurden
(5): Anzahl der lebenden, spreizbeinigen Ferkel, die geboren wurden
(6): Anzahl der totgeborenen Ferkel
(7): Anzahl der Ferkel, die nach der 1. Woche lebten
b): Krank, starb vor Infektion
c): Krank, starb aus einem anderen Grund
(1): Nummer des Mutterschweins
(2): Gesamtzahl der Ferkel
(3): Anzahl der gesunden Ferkel, die geboren wurden
(4): Anzahl der schwächlichen Ferkel, die geboren wurden
(5): Anzahl der lebenden, spreizbeinigen Ferkel, die geboren wurden
(6): Anzahl der totgeborenen Ferkel
(7): Anzahl der Ferkel, die nach der 1. Woche lebten
Claims (26)
1. Virus, welcher der Erreger von PRRS (PRRS = Porcine Repro
ductive and Respiratory Syndrome), Spanische Abstammung,
ist, dessen Charakteristika im wesentlichen jenen des Virus
mit der Bezeichnung PRRS-CY-2IBJPD-P5-6-91 entsprechen, das
bei ECACC mit der Zugangsnummer V93070108 deponiert wurde.
2. DNA-Sequenz des Virus, das Erreger von PRRS, Spanische Ab
stammung, ist, welche im wesentlichen die in den Fig. 1
bis 4 angegebenen DNA-Sequenzen aufweist, wobei die Fig.
1 bis 4 Bestandteil dieses Anspruchs sind.
3. Vakzine gegen PRRS, dadurch gekennzeichnet, daß sie eine
geeignete Menge des Virus gemäß Anspruch 1 in inaktivierter
Form, sowie ein geeignetes Adjuvans enthält.
4. Vakzine gegen PRRS, dadurch gekennzeichnet, daß sie eine
geeignete Menge eines Antigens von PRRSV, sowie ein geeigne
tes Adjuvans enthält, wobei das Antigen mittels einer DNA-
Sequenz gemäß Anspruch 2 erhalten wurde.
5. Vakzine nach den Ansprüchen 3 oder 4, dadurch gekennzeich
net, daß sie ferner ein Konservierungsmittel enthält.
6. Vakzine nach Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, daß sie
eine Menge des inaktivierten Virus von mindestens 105.5
TCID₅₀/Dosis enthält.
7. Vakzine nach einem der Ansprüche 3, 5 oder 6, dadurch ge
kennzeichnet, daß sich das genannte Virus auf einem alveolä
ren Makrophagennährboden der Schweinelunge entwickelt hat.
8. Vakzine nach einem der Ansprüche 3, 5 oder 6, dadurch ge
kennzeichnet, daß sich das genannte Virus an alveolären
Schweinelungen-Makrophagen-Hybridzellen, die durch Hybridis
ierung mit ST-Zellen verschmolzen wurden, entwickelt hat.
9. Vakzine nach einem der Ansprüche 3, 5 oder 6, dadurch ge
kennzeichnet, daß sich das genannte Virus an ST-Zellen oder
irgendeiner anderen Schweine-Zellinie, in welche die Gene
eingebracht wurden, die für alveoläre Schweinelungen-Makro
phagen-Membranrezeptoren für das PRRS-Virus codieren, ent
wickelt hat.
10. Vakzine nach den Ansprüchen 3 bis 9, dadurch gekennzeichnet,
daß das genannte Adjuvans ein öliges Adjuvans ist.
11. Vakzine nach Anspruch 10, dadurch gekennzeichnet, daß das
genannte Öladjuvans aus einer Mischung von Marcol 52, Simul
sol 5100 und Montanide 888 besteht.
12. Vakzine nach einem der Ansprüche 3, oder 5 bis 11, dadurch
gekennzeichnet, daß es eine Emulsion ist mit (i) einer wäß
rigen antigenischen Phase, die das inaktivierte Virus ent
hält, und (ii) einer öligen Phase, die das Adjuvans enthält.
13. Vakzine nach Anspruch 12, dadurch gekennzeichnet, daß sich
die genannte Emulsion aus 53 Volumenprozent einer wäßrigen
Phase, die das inaktivierte Virus enthält, und 47 Gewichts
prozent einer öligen Phase, die das Adjuvans enthält,
zusammensetzt.
14. Vakzine nach den Ansprüchen 3 bis 13, dadurch gekennzeich
net, daß sie geeignet ist, zellulare Immunität in dem vakzi
nierten Tier zu bewirken.
15. Vakzine nach Anspruch 14, dadurch gekennzeichnet, daß sie
zusätzlich Substanzen zur Verstärkung der Zellreaktion (CRP
= Cell Response Potentiation) enthält, welche die Zellimmun
wirkung verstärken.
16. Vakzine nach Anspruch 15, dadurch gekennzeichnet, daß die
Substanzen zur Verstärkung der Zellreaktion IL-1, IL-2, IL-
4, IL-5, IL-6, IL-12, g-IFN oder Zell-Necrose-Faktor sind.
17. Vakzine nach den Ansprüchen 3 bis 16, dadurch gekennzeich
net, daß das Adjuvans ein wäßriges Adjuvans ist.
18. Vakzine nach den Ansprüchen 3 bis 17, dadurch gekennzeich
net, daß das Adjuvans ein Adjuvans ist, das eine Zell
reaktion modulieren und immunstimulieren kann.
19. Vakzine nach Anspruch 18, dadurch gekennzeichnet, daß das
Adjuvans MDP, ISCOM oder Liposome ist.
20. Vakzine nach den Ansprüchen 3 bis 19, dadurch gekennzeich
net, daß sie geeignet ist, Rückkehr zur Pflege bei dem vak
zinierten Tier zu vermeiden.
21. Vakzine nach einem der Ansprüche 4, 5, 10, 11, oder 14 bis
20, dadurch gekennzeichnet, daß sie eine Emulsion ist, die
aufweist:
- a) 53% einer wäßrigen Phase, die das PRRS-Viral-Antigen in DMEM-Nährbodenmedium inaktiviert, mit einer Mindest konzentration von 105.5 TCID₅₀/Dosis, enthält, und
- b) 47% einer öligen Phase, die eine Mischung aus Marcol 52, Simulsol 5100 und Montanide 888 enthält.
22. Vakzine nach Anspruch 21, dadurch gekennzeichnet, daß sie
geeignet ist, Zellimmunität bei dem vakzinierten Tier zu
bewirken.
23. Bi- oder multivalente Vakzine gegen PRRS und andere Infek
tionen bei Schweinen, dadurch gekennzeichnet, daß sie eine
geeignete Menge des PRRS-Viral-Antigens oder -Virus gemäß
den Ansprüchen 1 oder 2 inaktiviert, plus ein oder mehrere
Schweine-Pathogene, enthält.
24. Vakzine nach Anspruch 23, dadurch gekennzeichnet, daß sie
mindestens ein Schweine-Pathogen einschließt, das aus der
Gruppe ausgewählt ist, die aus Actinobacillus pleuro
pneumoniae, Haemophilus parasuis, Schweine-Parvovirus, Lep
tospira, Escherichia coli, Erysipelothrix rhusiopathiae,
Pasteurella multocida, Bordetella bronchiseptica, respirato
risches Schweine-Coronavirus, Rotavirus besteht, oder gegen
die Pathogene, welche die Aujeszkysche Krankheit, Schweine-
Influenza oder die ansteckende Gastroenteritis hervorrufen.
25. Verfahren zur Herstellung einer Vakzine, die geeignet ist,
das reproduktive und respiratorische Syndrom bei Schweinen
(PRRS) zu verhindern, enthaltend eine geeignete Menge des
PRRS-Virus gemäß Anspruch 1 in inaktivierter Form, und ein
geeignetes Adjuvans, dadurch gekennzeichnet, daß es umfaßt:
- 1) Kultivieren des verursachenden Virus von PRRS in einem geeigneten Zellsystem,
- 2) das Sammeln des Virus aus dem genannten Zellsystem, wenn ein Mindesttiter von 105.5 TCID₅₀/ml erreicht wurde,
- 3) die Inaktivierung des Virus durch physikalische oder chemische Methoden, und
- 4) das Mischen des inaktivierten Virus mit dem Adjuvans.
26. Verfahren zur Herstellung einer Vakzine nach Anspruch 25,
dadurch gekennzeichnet, das zusätzlich ein Vorbeugungsmittel
verwendet wird, welches in Stufe 4) mit dem inaktivierten
Virus und mit dem Adjuvans vermischt wird.
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
ES9301973A ES2074950B1 (es) | 1993-09-17 | 1993-09-17 | Vacuna para la prevencion de la enfermedad reproductiva y respiratoria de la cerda. |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
DE4432338A1 DE4432338A1 (de) | 1995-05-04 |
DE4432338C2 true DE4432338C2 (de) | 1997-10-30 |
Family
ID=8283072
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
DE19944432338 Expired - Lifetime DE4432338C2 (de) | 1993-09-17 | 1994-09-10 | Impfstoff zur Verhinderung des reproduktiven und respiratorischen Syndroms bei Schweinen |
Country Status (7)
Country | Link |
---|---|
DE (1) | DE4432338C2 (de) |
DK (1) | DK173128B1 (de) |
ES (1) | ES2074950B1 (de) |
FR (1) | FR2709966B1 (de) |
GB (1) | GB2282811B (de) |
IT (1) | IT1267448B1 (de) |
NL (1) | NL194940C (de) |
Families Citing this family (33)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CA2103460C (en) | 1991-06-06 | 2000-09-26 | Gert Wensvoort | Causative agent of the mystery swine disease, vaccine compositions and diagnostic kits |
US6042830A (en) * | 1992-08-05 | 2000-03-28 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. | Viral agent associated with mystery swine disease |
US5695766A (en) | 1992-10-30 | 1997-12-09 | Iowa State University Research Foundation | Highly virulent porcine reproductive and respiratory syndrome viruses which produce lesions in pigs and vaccines that protect pigs against said syndrome |
US6773908B1 (en) | 1992-10-30 | 2004-08-10 | Iowa State University Research Foundation, Inc. | Proteins encoded by polynucleic acids of porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) |
US6251397B1 (en) | 1992-10-30 | 2001-06-26 | Iowa State University Research Foundation, Inc. | Proteins encoded by polynucleic acids isolated from a porcine reproductive and respiratory syndrome virus and immunogenic compositions containing the same |
US6380376B1 (en) | 1992-10-30 | 2002-04-30 | Iowa State University Research Foundation | Proteins encoded by polynucleic acids of porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) |
US6592873B1 (en) | 1992-10-30 | 2003-07-15 | Iowa State University Research Foundation, Inc. | Polynucleic acids isolated from a porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) and proteins encoded by the polynucleic acids |
GB2289279B (en) * | 1994-05-13 | 1998-09-16 | Iberica Cyanamid | Diagnostic kits and vaccines containing recombinant PRRSV proteins |
ES2078187B1 (es) * | 1994-05-13 | 1996-07-16 | Cynamid Iberica S A | Proteinas recombinantes de prrs, kits de diagnostico y vacunas que contienen dichas proteinas recombinantes. |
US5866401A (en) * | 1996-03-01 | 1999-02-02 | Schering Corporation | Porcine reproductive and respiratory syndrome vaccine |
PL328627A1 (en) * | 1996-03-01 | 1999-02-15 | Schering Corp | Vaccine against the syndrome of reproductive and respiratory disorders among swine |
EP0839912A1 (de) | 1996-10-30 | 1998-05-06 | Instituut Voor Dierhouderij En Diergezondheid (Id-Dlo) | Ansteckende Klone von RNA-Viren und darauf basierende Impfstoffe und diagnostisches Verfahren |
ATE365746T1 (de) | 1997-05-06 | 2007-07-15 | Boehringer Ingelheim Vetmed | Prrsv-antigene, die auf peptidsequenzen des prrs- virus basieren, für die verwendung als impfstoff und für diagnostische tests |
UA78180C2 (uk) | 1997-10-03 | 2007-03-15 | Меріаль | Кільцевий вірус свині типу ii, вакцини та діагностичні реагенти |
NZ513289A (en) | 1998-12-22 | 2003-04-29 | Pfizer Prod Inc | Infectious cDNA clone of north american procine reproductive and respiratory syndrome (PRRS) virus and uses thereof |
CA2366072C (en) | 1999-03-08 | 2007-07-10 | Id-Lelystad, Instituut Voor Dierhouderij En Diergezondheid B.V. | Prrsv vaccines |
ES2348159T3 (es) | 1999-04-22 | 2010-11-30 | United States Department Of Agriculture | Vacuna contra el sindrome respiratorio y reproductivo porcino basada en el aislado ja-142. |
RU2007101725A (ru) | 2004-06-18 | 2008-07-27 | Риджентс Оф Дзе Юниверсити Оф Миннесота (Us) | Идентификация инфицированных вирусом и вакцинированных вирусом организмов |
US7632636B2 (en) | 2004-09-21 | 2009-12-15 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. | Porcine reproductive and respiratory syndrome isolates and methods of use |
EP2460818A3 (de) | 2004-12-30 | 2013-01-09 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. | Immunogene PCV2-Zusammensetzungen und Verfahren zur Herstellung solcher Zusammensetzungen |
CA2894069C (en) | 2005-06-24 | 2019-02-26 | Regents Of The University Of Minnesota | Prrs viruses, infectious clones, mutants thereof, and methods of use |
EP2275132B1 (de) | 2005-12-29 | 2021-03-03 | Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc. | Multivalente PCV2 immunogenische Zusammensetzungen und deren Vorbereitungsverfahren |
TWI627281B (zh) | 2009-09-02 | 2018-06-21 | 百靈佳殷格翰家畜藥品公司 | 降低pcv-2組合物殺病毒活性之方法及具有改良免疫原性之pcv-2組合物 |
EP2558118B1 (de) * | 2010-04-16 | 2019-06-05 | Universiteit Gent | Kreuzschutz-impfstoff für das reproduktions- und atemwegssyndromvirus bei schweinen |
EA038012B1 (ru) | 2011-02-17 | 2021-06-23 | Бёрингер Ингельхайм Ветмедика Гмбх | Композиция на основе нового штамма prrsv или его белков, продукт, их применение, вирус prrsv, выделенная нк и рекомбинантный вектор экспрессии для получения этого вируса |
SG192821A1 (en) | 2011-02-17 | 2013-09-30 | Boehringer Ingelheim Vetmed | Commercial scale process for production of prrsv |
US9187731B2 (en) | 2011-07-29 | 2015-11-17 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | PRRS virus inducing type I interferon in susceptible cells |
EP2737058A1 (de) | 2011-07-29 | 2014-06-04 | Boehringer Ingelheim Vetmedica GmbH | Infektiöser cdna-klon des europäischen prrs-virus und verwendungen dafür |
UA114503C2 (uk) | 2012-04-04 | 2017-06-26 | Зоетіс Сервісіз Ллс | Комбінована вакцина pcv та mycoplasma hyopneumoniae |
US9120859B2 (en) | 2012-04-04 | 2015-09-01 | Zoetis Services Llc | Mycoplasma hyopneumoniae vaccine |
UA114504C2 (uk) | 2012-04-04 | 2017-06-26 | Зоетіс Сервісіз Ллс | Комбінована вакцина pcv, mycoplasma hyopneumoniae та prrs |
US9579373B2 (en) | 2013-03-15 | 2017-02-28 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. | Porcine reproductive and respiratory syndrome virus, compositions, vaccine and methods of use |
JP6886291B2 (ja) | 2013-12-20 | 2021-06-16 | ベーリンガー インゲルハイム フェトメディカ ゲーエムベーハーBoehringer Ingelheim Vetmedica GmbH | PRRSウイルス変異株、ヨーロッパ型PRRSウイルスcDNAクローンおよびそれらの使用 |
Family Cites Families (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CA2103460C (en) * | 1991-06-06 | 2000-09-26 | Gert Wensvoort | Causative agent of the mystery swine disease, vaccine compositions and diagnostic kits |
AU2684792A (en) * | 1991-10-14 | 1993-05-21 | Akzo Nobel N.V. | Porcine reproductive respiratory syndrome vaccine and diagnostic |
FR2686097B1 (fr) * | 1992-01-14 | 1994-12-30 | Rhone Merieux | Preparation d'antigenes et de vaccins de virus de la mystery disease, antigenes et vaccins obtenus pour la prevention de cette maladie. |
ATE197314T1 (de) * | 1993-02-08 | 2000-11-15 | Bayer Ag | Verfahren zum vermehren des das reproduktions- und atemwegs-syndrom verursachenden schweinevirus und dessen verwendung als impfstoff. |
-
1993
- 1993-09-17 ES ES9301973A patent/ES2074950B1/es not_active Expired - Fee Related
-
1994
- 1994-08-31 NL NL9401414A patent/NL194940C/nl not_active IP Right Cessation
- 1994-09-06 DK DK199401028A patent/DK173128B1/da not_active IP Right Cessation
- 1994-09-07 FR FR9410722A patent/FR2709966B1/fr not_active Expired - Fee Related
- 1994-09-09 IT ITTO940713 patent/IT1267448B1/it active IP Right Grant
- 1994-09-10 DE DE19944432338 patent/DE4432338C2/de not_active Expired - Lifetime
- 1994-09-16 GB GB9418775A patent/GB2282811B/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
FR2709966B1 (fr) | 1997-05-23 |
ES2074950A1 (es) | 1995-09-16 |
DE4432338A1 (de) | 1995-05-04 |
GB2282811A (en) | 1995-04-19 |
ITTO940713A1 (it) | 1996-03-09 |
ES2074950B1 (es) | 1996-03-16 |
IT1267448B1 (it) | 1997-02-05 |
NL194940B (nl) | 2003-04-01 |
ITTO940713A0 (it) | 1994-09-09 |
NL9401414A (nl) | 1995-04-18 |
DK102894A (da) | 1995-03-18 |
GB9418775D0 (en) | 1994-11-02 |
GB2282811B (en) | 1998-02-18 |
DK173128B1 (da) | 2000-01-31 |
FR2709966A1 (fr) | 1995-03-24 |
NL194940C (nl) | 2003-08-04 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
DE4432338C2 (de) | Impfstoff zur Verhinderung des reproduktiven und respiratorischen Syndroms bei Schweinen | |
DE69619233T2 (de) | Prrs-(porcine reproductive and respiratory syndrome)-virusvakzin | |
Cook et al. | Preliminary antigenic characterization of an avian pneumovirus isolated from commercial turkeys in Colorado, USA | |
Baer et al. | Oral vaccination of foxes against rabies | |
DE3882599T2 (de) | Hundecoronavirus-Impfstoff. | |
Cover | The early history of infectious laryngotracheitis | |
DE2817299A1 (de) | Verfahren zur herstellung eines attenuierten infektioese-gastroenteritis (tge)-virusstammes zur anwendung in lebendvakzinen | |
DE2717919A1 (de) | Verfahren zur herstellung eines pferde-rhinopneumonievakzins und durch dieses verfahren hergestelltes vakzin | |
CA1184115A (en) | Infectious bronchitis vaccines for poultry and process for the preparation of such vaccines | |
DE69835424T2 (de) | Boviner atmungs- und darmcoronavirus als impfstoff | |
DE2362067C2 (de) | Temperaturempfindliche, nicht-pathogene, infektiöse Rinder-Rhinotracheitis-Virusstämme, Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung zur Herstellung von Lebendimpfstoffen | |
Nuttall et al. | Isolation of a coronavirus during studies on puffinosis, a disease of the Manx shearwater (Puffinus puffinus) | |
Cursiefen et al. | Evaluation of a vaccine against infectious bursal disease in field trials | |
DE69014974T2 (de) | Impfstoff gegen Hundecoronavirus. | |
Johnson et al. | Intracerebral infection of mice with ovine strains of Chlamydia psittaci: an animal screening test for the assay of vaccines | |
RU2269361C2 (ru) | Вакцина ассоциированная эмульсионная инактивированная против репродуктивно-респираторного синдрома и парвовирусной инфекции свиней | |
Stone et al. | Field vaccination of turkeys against exotic viscerotropic Newcastle disease virus | |
Eliás et al. | Studies on Swine Atrophic Rhinitis: I. Investigations into the Epizootiology, Diagnosis, and Specific Prevention of the Disease | |
JPH07121874B2 (ja) | 感染性気管支炎ワクチン | |
DE1253412B (de) | Verfahren zur Gewinnung eines Impfstoffes gegen infektioese Schweinegastroenteritis | |
DE2809343C2 (de) | Impfstoff gegen Eierlege-Krankheit | |
CA1184116A (en) | Infectious bronchitis vaccines for poultry and process for the preparation of such vaccines | |
Mohammed | Pathogenic, antigenic and serologic relationship between fowl pox, pigeon pox, and canary pox viruses | |
Boĭko et al. | Foot and Mouth Disease: Biological-ecological Aspects of the Problem | |
Gitao | The epidemiology of camelpox and the development of camelpox vaccine |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
8110 | Request for examination paragraph 44 | ||
D2 | Grant after examination | ||
8364 | No opposition during term of opposition | ||
R071 | Expiry of right | ||
R071 | Expiry of right |