DE4401546A1 - Streptomyces lavendofoliae DRKS Stamm, Verfahren zur Gewinnung der Aclacinomycine A, B, Y und von Aglycon durch Anwendung dieses Verfahrens - Google Patents
Streptomyces lavendofoliae DRKS Stamm, Verfahren zur Gewinnung der Aclacinomycine A, B, Y und von Aglycon durch Anwendung dieses VerfahrensInfo
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Description
Die Erfindung betrifft einen neuartigen Stamm der Gattung
Streptomyces, sowie ein Verfahren zur Gewinnung der Antitumor
Aclacynomycine A, B, Y und von Aglyconen durch Aufzucht des
Stammes.
Aclacinomycin ist ein Pyrrol enthaltendes Antitumormittel der
Anthrazyklingruppe und besteht aus drei Desoxypyranoseresten.
Bei Interkalierung in die Basenpaare einer DNA, weist es zyto
toxische Aktivitäten auf, indem es die Synthese von Nuklein
säure hemmt. Im Gegensatz zu anderen Anthrazyklinen, wie z. B.
Daunorubicin, Doxorubicin und Carminomycin hemmt es außerdem
selektiv die Synthese von RNA. Darüber hinaus wirkt das Mittel
aktiv gegen akute Leukämie und maligne Lymphome, wobei seine
kardiale Toxizität jedoch gering ist.
Aclacinomycin kann in drei Gruppen eingeteilt werden, nämlich
die Aclacinomycine A, B und Y. Sie weisen im wesentlichen einen
als Aklavin bezeichneten Aglyconrest auf. Von den genannten
Substanzen findet Aclacinomycin B aufgrund seiner Nebenwirkun
gen und der geringen Antitumoraktivität in der klinischen Pra
xis kaum Verwendung. Gründe für die praktische Verwendung von
Aclacinomycin A sind die hohen Anti-Krebs- bzw. Anti-Tumorakti
vität der Substanz, ihre geringen Nebenwirkungen, sowie die
hohe Ausbeute. Aclacinomycin Y gilt aufgrund seiner hohen Anti-
Tumoraktivität und der geringen Nebenwirkungen als das effi
zienteste dieser Antikrebsmittel. Seine Ausbeute aus der
Streptomyces Kulturbrühe ist jedoch gering und muß daher erhöht
werden.
Ein Verfahren zur Gewinnung von Aclacinomycinen durch Fermen
tierung von Streptomyces galilaeus ist bekannt (US 3,988,315
Hamao Umezawa). In dieser Patentschrift wird berichtet, daß
Streptomyces galilaeus etwa 18 Analoge produziert, unter an
derem auch die Aclacinomycine A, B und Y. Die Ausbeute ist je
doch sehr gering: Aclacinomycin A, ein Hauptprodukt wurde in
einer Menge von 46 mg/l Kulturbrühe gewonnen, Aclacinomycin B
in einer Menge von 23 mg/l und andere Produkte, einschließlich
Aclacinomycin Y, nur in verschwindend kleinen Mengen. Es ist
daher problematisch, Aclacinomycine mit Hilfe des o.g. Strepto
myces Stammes in großem Maßstab herzustellen.
Es bestand somit
Bedarf, einen neuen Stamm mit einer hohen Gewinnausbeute an
Aclacinomycinen zur Verfügung zu stellen.
Die Erfinder haben große Forschungsbemühungen unternommen, um
ein Verfahren zur industriellen Gewinnung von Aclacinomycinen
durch Fermentierung zur Verfügung zu stellen. Das Ergebnis die
ser Bemühungen ist der Streptomyces lavendofoliae 12/3A, wel
cher die Fähigkeit aufweist, die Aclacinomycine A und B zu pro
duzieren. Die Forschungsbemühungen der Erfinder wurden fortge
setzt mit dem Ziel, einen verbesserten Stamm, der größere Men
gen Aclacinomycin produziert, zur Verfügung zu stellen. Diese
Aufgabe wurde durch die vom Stamm 12/3A abstammenden Mutante
Streptomyces lavendofoliae DKRS erfüllt.
Es ist daher Aufgabe der Erfindung einen neuen Streptomyces la
vendofoliae DKRS Stamm zur Verfügung zu stellen, der die Fähig
keit aufweist, größere Mengen der Aclacinomycine A, B, Y, sowie
die Aglycone zu produzieren. Des weiteren soll ein Verfahren
zur Gewinnung von Aclacinomycinen durch Aufzucht des
Streptomyces lavendofoliae DKRS Stammes angegeben werden. Fer
ner sollen die Aclacinomycine aus der Flüssigkeit und den Zel
len gesammelt werden. Schließlich soll ein Verfahren zur selek
tiven Gewinnung der Aclacinomycine A oder Y angegeben werden,
nämlich durch Einstellen des pH-Wertes der Kulturbrühe auf
einen bestimmten Wert mit Acetatpuffer bzw. Salzsäure nach Auf
zucht des Streptomyces lavendofoliae DKRS Stammes.
Streptomyces lavendofoliae 12/3A, der Elternstamm für Strepto
myces lavendofoliae DKRS, kann erfindungsgemäß 60 mg/l Aclaci
nomycin A und 10 mg/l Aclacinomycin B produzieren.
Der erfindungsgemäße Stamm Streptomyces lavendofoliae DKRS kann
durch Veränderung des Elternstammes Streptomyces lavendofoliae
12/3A mittels N-Nitrosomethylbiuret (NMB), einem chemischem Mu
tagen, gewonnen werden. Die Mutante ist in der Lage die Aclaci
nomycine A,B,Y und die Aglycone zu produzieren. Im besonderen
ist sie in der Lage eine große Menge Aclacinomycin Y zu produ
zieren.
Die erfindungsgemäße Mutante wurde nach folgender Methode aus
gewählt: Nach Aufzucht eines Streptomyces lavendofoliae 12/3A
Stammes in einem vollständig festen Medium bei 30°C über einen
Zeitraum von 6-7 Tagen wurden die Sporen über einen Glaswolle
filter herausgefiltert, drei mal mit 0.05M Tris-Malat Puffer
(pH 6,5) gewaschen und mit demselben Puffer auf 10⁶-10⁸ Spo
ren/ml verdünnt. Nach Zugabe von NMB zur Suspension mit den
Sporen, so daß sich eine Endkonzentration von 500 µg/ml ein
stellte, lies man die Mischung für 20 min bei 30°C ruhen. Nach
Reaktionsende wurden die Sporen durch Zentrifugieren oder Fil
trieren isoliert, mit steriler physiologischer Kochsalzlösung
dreimal gewaschen und auf das vollständige Agarmedium aufge
tragen. Nach 7 bis 10 Tagen bei 30°C zeigten sich auf dem Agar
Kolonien der Mutante.
Die erfindungsgemäße Mutante Streptomyces lavendofoliae DKRS
wurde am 26. August 1993 bei der Korean Collection for Type
Cultures in Taejon, Korea hinterlegt. Sie erhielt die Regi
strierungsnummer KCTC 8539P. Die Sammlung wurde am 26. August
1993 in die Sammlung unter dem Budapester Vertrag übertragen
und erhielt die Registrierungsnummer KCTC 0092BP.
Das vollständige erfindungsgemäß verwendete Medium hat folgende
Zusammensetzung: Glucose 10%, Kaseinhydrolysat 0,2%, Fleischex
trakt 0,1%, Hefextrakt 0,1% und Agar 1,5%, pH 7,0-7,2.
Der erfindungsgemäße Stamm Streptomyces lavendofoliae DKRS
(KCTC 092BP) weist folgende mikrobiologischen Eigenschaften
auf:
- 1. Morphologische Eigenschaften:
Nach Aufzucht in einem festen Medium zeigt sich unter dem Mi kroskop, daß die Substratmyzele nicht fragmentiert sind und die Sporen sind ellipsoid und bilden eine Kette mittlerer Länge. Die Größe der Sporen beträgt ungefähr 2,3 µm × 1,4 µm. Sie bil den Oidien und ihre Oberfläche ist glatt. - 2. Eigenschaften auf verschiedenen Medien:
Der erfindungsgemäße Stamm zeigt bei Inkubierung bei 28°C auf den folgenden unterschiedlichen, festen Medien folgende Eigen schaften:- (1) Auf Waksmann Medium, grünes Wachstum; rosa-braunes, lös liches Pigment
- (2) Auf Gaus-I Medium, rosa-weißes Wachstum; rot-braunes Substratmyzel; kein lösliches Pigment
- (3) Auf Haferflockenmedium, graues Wachstum; rot-braunes Substratmyzel; kein lösliches Pigment
- (4) Auf Maismedium, dunkelbraunes Wachstum; dunkelbraunes Substratmyzel
- (5) Auf Gaus-II Medium, grün-braunes Wachstum; dunkelbraunes Substratmyzel, dunkelbraunes, lösliches Pigment
- (6) Auf Sojabohnenmedium, hellgrünes Wachstum, braun-grünes Substratmyzel; rot-braunes lösliches Pigment
- (7) Auf Riestrick Medium, braunes Wachstum; dunkelbraunes Pigment
- (8) Auf Czapek-Dock Medium, weiß-rosa Wachstum; rot-braunes Substratmyzel; kein lösliches Pigment
- (9) Auf Bennet Medium, hell sandfarbenes Wachstum; braunes Pigment
- (10) Auf Fleisch-Pepton Agar, hell sandfarbenes Wachstum; braunes lösliches Pigment
- (11) Auf Glucose-Aspargin Medium, grünes Wachstum; kein lös liches Pigment
- 3. Physiologische Eigenschaften:
Bei dem erfindungsgemäßen Stamm handelt es sich um einen aero ben Stamm, der bei 28°C optimales Wachstum zeigt. Unter den Ei genschaften finden sich rot-orangenes Wachstum, Peptonisierung, Stärkehydrolyse und Gelatinverflüssigung auf einem Mais enthal tenden Medium. Mit Maltose und Lactose zeigt der Stamm ergiebi ges Wachstum, mit Rhamnose, Xylose, Arabinose und Galactose ge ringes Wachstums und mit Saccharose, Mannit und Sorbit kein Wachstum.
Die Unterschiede zwischen Elternstamm und vorliegenden Stamm in
Bezug auf Morphologie und physiologische Eigenschaften sind in
Tabelle 1 dargestellt.
Das Verfahren zur Gewinnung von Aclacinomycinen mit Hilfe des
erfindungsgemäßen Stammes umfaßt die folgenden Schritte: die
Aufzucht von Streptomyces lavendofoliae DKRS in einem Medium,
das Kohlenstoffquellen, Stickstoffquellen und andere Nährstoffe
enthält, die im allgemeinen zur Fermentierung von Streptomyces
Stämmen verwendet werden, um in der Brühe und in den Zellen
Aclacinomycine anzusammeln und das Gewinnen der Aclacinomycine
aus dieser Brühe und diesen Zellen.
Die bei der erfindungsgemäßen Aufzucht verwendeten Kohlenstoff
quellen können Stärke und Sojabohnenmehl sein, wobei jedoch an
dere Substanzen nicht ausgeschlossen sind. Die bei der erfin
dungsgemäßen Kultivierung verwendeten Stickstoffquellen können
Sojabohnenmehl und Ammoniumsulfate sein, wobei jedoch andere
Substanzen nicht ausgeschlossen sind. Die bei der erfindungsge
mäßen Fermentierung verwendeten anorganischen Bestandteile kön
nen Kalziumkarbonat, Magnesiumsulfat, Zinksulfat und Natrium
chlorid sein, wobei jedoch andere Substanzen nicht ausgeschlos
sen sind.
Die Fermentierung kann unter aeroben Bedingungen bei 28°-30° C,
pH 7,2 über einen Zeitraum von 4-5 Tagen durchgeführt werden.
Organische oder anorganische alkalische Materialien, Salmiak
geist und Kalziumkarbonat können verwendet werden, um während
der Fermentierung den pH-Wert einzustellen.
Die Aclacinomycine können von der Brühe oder den Zellen mit
Hilfe von herkömmlichen Verfahren zur Trennung von niedermole
kularen Materialien separiert werden, z. B. durch Extraktion mit
organischen Lösungsmitteln wie Aceton oder Chloroform und Säu
lenchromatographie mit Kieselsäure. Vorzugsweise wird zur Iso
lierung und Reinigung der Aclacinomycine und der Agklycone ein
aus Toluol und Isopropanol (30 : 1 - 35 : 1 nach Volumen) bestehen
des Lösungsmittelgemisch verwendet.
In der vorliegenden Erfindung können die in den Zellen ange
sammelten Aclacinomycine durch eine Mischung aus Methanol und
Chloroform (20 : 1) extrahiert und über HPLC analysiert werden.
Für die HPLC können Silika und eine Mischung aus Chloro
form : Methanol : Essigsäure : Wasser : Triethanolamin (68 : 20 : 10 : 2 : 0,01
(v/v)) als stationäre bzw. mobile Phasen verwendet werden. Das
Eluierungsmittel durchfließt die Säule mit einer Geschwindig
keit von 1,0 ml/min und die Extinktionen der gesammelten Frak
tionen werden bei 432 nm gemessen. Die Konzentrationen der
Aclacinomycine A,B,Y und der Aglycone erhält man, indem man die
absorbierenden Verweilzeiten der ursprünglichen Proben mit
denen innerhalb der Zellen vergleicht.
Erfindungsgemäß wird Aclacinomycin A durch Verändern der Isolie
rungsbedingungen und der Reinigungsschritte zu Aclacinomycin Y
umgewandelt und umgekehrt. Diese Konversion ist wahrscheinlich
nicht nur auf die Isolierungsbedingungen zurückzuführen, son
dern auch auf gewisse enzymatische Aktivitäten der Zellen. Der
größte Teil des in der Kulturbrühe und in den Zellen vorhan
denen Aclacinomycin A wird in die Y-Form umgewandelt, wenn die
Kulturbrühe mit Acetatpuffer auf einen pH-Wert von 4,4 einge
stellt wird, wogegen Aclacinomycin Y in die A-Form umgewandelt
wird, wenn die Kulturbrühe mit Salzsäure auf einen pH-Wert von
4,6 eingestellt wird. Demnach ist es möglich durch Einstellen
des pH-Wertes der Kulturbrühe, aus der das Produkt entnommen
wird, selektiv entweder Aclacinomycin A oder Y zu gewinnen.
Die Erfinder haben bestätigt, daß in reiner Form isoliertes
Aclacinomycin Y im Vergleich zu den Aclacinomycinen A oder B
eine größere Anti-Krebsaktivität gegen Darmkrebs und eine nied
rigere Toxizität, selbst bei einer höheren Dosis, aufwies.
Die vorliegende Erfindung soll anhand von Beispielen - bevor
zugte Ausführungsformen der Erfindung - im folgenden näher er
läutert werden. Diese Beispiele dienen lediglich zu Erläute
rung. Die Erfindung ist nicht darauf beschränkt.
Streptomyces lavendofoliae DKRS wurde auf ein Schrägmedium
(Anmerkung 2) aufgegeben und bei 28°C fünf Tage lang inkubiert.
Die so hergestellte Kultur wurde in einer 500ml Sakaguchi-
Schüttelflasche in 50 ml eines Saatkulturmediums (Anmerkung 3),
das vorher auf einen pH-Wert von 7,8 eingestellt und bei 121°C
15 min lang sterilisiert worden war, eingeimpft. Die Inkubie
rung erfolgte in einem Wechsel+72HWechselschüttler bei 250 rpm über
einen Zeitraum von zwei Tagen. Ein Produktionsmedium (Anmerkung 4)
wurde bei pH 7,5 eingestellt und die o.g. Saatkultur wurde ein
geimpft, bis sich eine Konzentration von 10% einstellte. Die
Fermentierung erfolgte dann bei 28°C über vier Tage unter
Schütteln (500 rpm) und Luftzufuhr (2,0 vvm).
Die in der vorliegenden Erfindung verwendeten Medien haben fol
gende Zusammensetzung:
Anmerkung 2: Schrägmedium: Stärke 2%, K₂HPO₄ 0,05%, MgSO₄ 0,05%, KNO₃ 0,1%, Salz 0,05%, Fe₂(SO₄)₃ 0,001%, Agar 1,5-2% (pH 7,2)
Anmerkung 3: Saatkulturmedium: Glucose 2%, Stärke 1,5%, Soja bohnenmehl 1%, Hefeextrakt: 1%, CaCO₃ 0,3%, MgSO₄ 0,2%, NaCl 0.3% (pH 7,8)
Anmerkung 4: Produktionsmedium: Glucose 3%, Stärke 3,5%, Soja bohnenmehl 1%, CaCO₃ 0,5%, MgSO₄ 0,02%, FeSO₄ 0,001%, ZnSO₄ 0,001%, (pH 7,5)
Anmerkung 2: Schrägmedium: Stärke 2%, K₂HPO₄ 0,05%, MgSO₄ 0,05%, KNO₃ 0,1%, Salz 0,05%, Fe₂(SO₄)₃ 0,001%, Agar 1,5-2% (pH 7,2)
Anmerkung 3: Saatkulturmedium: Glucose 2%, Stärke 1,5%, Soja bohnenmehl 1%, Hefeextrakt: 1%, CaCO₃ 0,3%, MgSO₄ 0,2%, NaCl 0.3% (pH 7,8)
Anmerkung 4: Produktionsmedium: Glucose 3%, Stärke 3,5%, Soja bohnenmehl 1%, CaCO₃ 0,5%, MgSO₄ 0,02%, FeSO₄ 0,001%, ZnSO₄ 0,001%, (pH 7,5)
Der Elternstamm und die erfindungsgemäße Mutante wurden gemäß
dem o.g. Verfahren gezüchtet und die pro Kultur anfallenden
Menge Aclacinomycin wurde gemessen. Die Ergebnisse sind in Ta
belle 2 festgehalten.
Aus Tabelle 2 ist ersichtlich, daß der erfindungsgemäße DKRS
Stamm große Mengen an Aclacinomycin Y produziert und darüber
hinaus eine im Vergleich zu dem Elternstamm RS gesteigerte Pro
duktion an Aclacinomycin B aufweist. Es wird folglich davon
ausgegangen, daß es sich hier um eine Mutante handelt, bei wel
cher in einem Teil des Aufbauweges des Aclacinomycins als se
kundären Metabolit eine Veränderung vorliegt.
In diesem Beispiel werden die Aclacinomycine von der Kultur
brühe des Streptomyces lavendofoliae DKRS isoliert. Die aus
Beispiel 1 stammende Kulturbrühe (700 ml) wurde mit Salzsäure
auf einen pH von 4,5 eingestellt und zum Erhalt von Myzelen ge
filtert. Zu den Myzelen wurde Chloroform zugegeben, so daß sich
eine Konzentration von 2 ml/g Myzel einstellte. Die Mischung
wurde eine Stunde lang gut durchgemischt und dann gefiltert.
Dieser Vorgang wurde zweimal wiederholt.
Das Chloroformfiltrat (120 ml) wurde gesammelt und in einem Va
kuumverdampfer konzentriert. Dem Konzentrat wurden 15 ml einer
Lösungsmittelmischung bestehend aus Butylacetat und Aceton
(4 : 1) zugesetzt und darin vollständig gelöst. Zur Extrahierung
von Produkten und Re-Extrahierung mit Chloroform wurde die sich
ergebende Lösung mit Acetatpuffer (pH 3,4) behandelt. Nach dem
Verdampfen des Chloroforms und dem Konzentrieren des Extraktes,
wurde N-Hexan oder Petrolether zugegeben, um Aclacinomycin A
(27 mg), B (35 mg) und Y (41 mg) zu präzipitieren.
Die aus Beispiel 1 stammende Kulturbrühe (700ml) wurde mit
Salzsäure auf einen pH von 4, 6 eingestellt und die Mischung
wurde bei 28°C drei Stunden lang gut durchgemischt. Daraufhin
wurden die Verfahrensschritte aus Beispiel 2 wiederholt und es
ergaben sich folgende Mengen: Aclacinomycin A (50 mg),
B (20 mg), Y (13 mg).
Die aus Beispiel 1 stammende Kulturbrühe (700 ml) wurde mit
Acetatpuffer auf einen pH von 4,4 eingestellt und die Mischung
wurde bei 28°C 3 Stunden lang gut durchgemischt. Daraufhin wur
den die Verfahrensschritte aus Beispiel 2 wiederholt und es er
gaben sich folgenden Mengen: Aclacinomycin A (3 mg), B (40 mg),
Y (50 mg).
Ein Fermentierungsmedium (5 l) mit der Zusammensetzung laut An
merkung 5 wurde in einen 10 l Fermentierer gegeben und auf
einen pH-Wert von 7,5 eingestellt. Eine Saatkultur aus Beispiel
1 wurde auf eine Konzentration von 10% gebracht, und die Fer
mentierung wurde bei 28°C über einen Zeitraum von vier Tagen
unter Schütteln (350 rpm) und Luftzufuhr (1,0 vvm) durchge
führt.
Anmerkung 5: Fermentierungsmedium: Glucose 3%, Stärke 5,5%, Sojabohnenmehl 1,5%, CaCO₃ 0,9%, MgSO₄ 0,25%, ZnSO₄ 0,002%, FeSO₄ 0,002%
Anmerkung 5: Fermentierungsmedium: Glucose 3%, Stärke 5,5%, Sojabohnenmehl 1,5%, CaCO₃ 0,9%, MgSO₄ 0,25%, ZnSO₄ 0,002%, FeSO₄ 0,002%
Die sich ergebende Kulturbrühe (3,5 l) enthält folgende Mengen
an Aclacinomycinen: Aclacinomycin A (245 mg), B (315 mg),
Y (560 mg). Die Brühe wurde mit Salzsäure auf einen pH von 4,6
eingestellt und zum Erhalt von Myzelen zentrifugiert. Den
Myzelen wurden 1,5 l Chloroform zugegeben und es wurde eine
Stunde lang gut durchgemischt. Dies wurde zweimal wiederholt.
Dem Filtrat wurden zum Extrahieren der Aclacinomycine 600 ml
Chloroform zugegeben.
Die so erhaltenen Chloroformextrakte wurden zusammengegeben und
im Vakuum konzentriert. Die Präzipitate wurden in einem Lö
sungsmittel bestehend aus Butylacetat und Aceton (4 : 1 Vol) ge
löst. Die sich ergebende Lösung wurde mit Natriumsulfat ver
setzt und die Mischung wurde filtriert und konzentriert. Zum
Erhalt der Präzipitate wurde dann N-Hexan zugegeben. Die fol
gende Evaporierung führte zu 1,5 g einer Mischung von Aclacino
mycinen.
Die Mischung von Aclacinomycinen (1,5 g) aus Beispiel 5 wurde
in einer Mindestmenge Lösungsmittel bestehend aus Toluol und
Chloroform (8 : 2 Vol.) gelöst, und dann auf einer mit Kiesel
säure beladenen Säule chromatografiert. Das dazu verwendete
Eluierungsmittel war Toluol. Nach dem die Aglykon enthaltenden
Fraktionen eluiert worden waren, wurde das Eluiermittel gewech
selt; es wurde ein Lösungsmittel bestehend aus Toluol und Iso
propanol (35 : 1 Vol) verwendet und man erhielt Aclacinomycin B
enthaltende Fraktionen. Dann wurde Lösungsmittel bestehend aus
Toluol und Isopropanol (30 : 1 Vol) als Eluierungsmittel verwen
det und man erhielt Aclacinomycin Y enthaltende Fraktionen.
Den Fraktionen wurde zum Präzipitieren der jeweiligen Produkte
n-Hexan bzw. Petrolether zugegeben. Die Präzipitate wurden ge
trocknet. Es ergaben sich folgende Mengen: Aglycon (10 mg),
Aclacinomycin B (154 mg), Y (182 mg) und A (75 mg). Alle Sub
stanzen liegen als gelbes Pulver vor.
Claims (7)
1. Eine in reiner Form isolierte Streptomyces lavendofoliae
DKRS Kultur, die aufgrund der Registrierungsnummer KCTC 0092BP
identifiziert werden kann und in der Lage ist, die Aclacinomy
cine A, B, Y und deren Aglycone zu produzieren.
2. Die in reiner Form isolierte Streptomyces lavendofoliae
DKRS Kultur nach Anspruch 1, die in der Lage ist, Aclacinomycin
A in Aclacinomycin Y umzuwandeln, wenn die Kulturbrühe mit Ace
tatpuffer auf einen pH-Wert von 4,4 eingestellt wird, und die
in der Lage ist, Aclacinomycin Y in Aclacinomycin A umzuwan
deln, wenn die Kulturbrühe mit Salzsäure auf einen pH Wert von
4,6 eingestellt wird.
3. Verfahren zur Gewinnung der Aclacinomycine A, B, Y und de
ren Aglycone, umfassend die Aufzucht von Streptomyces lavendo
foliae DKRS (KCTC 0092BP) in einem Medium, so daß sich die
Aclacinomycine A, B, Y und deren Aglycone in der Brühe und in
den Zellen ansammeln, und diese aus der Brühe und den Zellen
entnommen und gereinigt werden.
4. Das Verfahren zur Gewinnung der Aclacinomycine A, B, Y und
deren Aglycone nach Anspruch 3, wobei die Aufzucht bei 28° -
30°C, bei einem pH-Wert von 6,8 - 7,5 und unter aeroben Bedin
gungen erfolgt.
5. Das Verfahren zur Gewinnung der Aclacinomycine A, B, Y und
deren Aglycone nach Anspruch 3, wobei die Aclacinomycine A, B,
Y und deren Aglycone mit Hilfe eines aus Toluol und Isopropanol
(30 : 1 - 35 : 1 Vol) bestehenden Lösungsmittels aus der Brühe und
den Zellen gewonnen und gereinigt werden.
6. Verfahren zur Gewinnung von Aclacinomycin Y, dadurch ge
kennzeichnet, daß es folgende Schritte umfaßt: die Aufzucht von
Streptomyces lavendofoliae DKRS (KCTC 0092BP) in einem Medium,
so daß sich die Aclacinomycine A, B, Y und deren Aglycone in
der Brühe und in den Zellen ansammeln, die Brühe dann mit Ace
tatpuffer auf einen pH-Wert von 4,4 eingestellt und Aclacinomy
cin Y aus der Brühe und den Zellen entnommen wird.
7. Verfahren zur Gewinnung von Aclacinomycin A, dadurch ge
kennzeichnet, daß es folgende Schritte umfaßt: die Aufzucht von
Streptomyces lavendofoliae DKRS (KCTC 0092BP) in einem Medium,
so daß sich die Aclacinomycine A, B, Y und deren Aglycone in
der Brühe und in den Zellen ansammeln, die Brühe dann mit Salz
säure auf einen pH-Wert von 4,6 eingestellt und Aclacinomycin A
aus der Brühe und den Zellen entnommen wird.
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