DE4224781A1

DE4224781A1 - (alpha)-glycosylquercetine, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung

Info

Publication number: DE4224781A1
Application number: DE4224781A
Authority: DE
Inventors: Masaru Yoneyama; Satoshi Iritani; Toshio Miyake
Original assignee: Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo KK; Hayashibara Biochemical Laboratories Co Ltd
Current assignee: Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo KK
Priority date: 1991-07-26
Filing date: 1992-07-27
Publication date: 1993-02-25
Also published as: GB9215784D0; FR2680368B1; FR2680368A1; US5565435A; GB2258865B; JPH0532690A; KR100228885B1; JP3134233B2; KR930002369A; GB2258865A

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft neue α-Glycosylquercetine, Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung. Insbeson dere betrifft die Erfindung (i) α-Glycosylquercetin, worin ein äquimolarer oder größerer Anteil an D-Glucoseresten an Quercetin über eine α-Bindung gebunden ist; (ii) ein Ver fahren zur Herstellung von α-Glycosylquercetin, bei dem eine Lösung mit einem Gehalt an Quercetin und einem α-Glucosyl saccharid der Wirkung eines saccharidübertragenden Enzyms un ter Bildung von α-Glycosylquercetin unterworfen wird und das erhaltene α-Glycosylquercetin gewonnen wird, und (iii) eine Zusammensetzung, zum Beispiel Nahrungsmittelprodukte, Kosme tika und pharmazeutische Produkte für entsprechende Erkran kungen, wobei diesen Produkten das α-Glycosylquercetin ein verleibt wird.

Üblicherweise ist Quercetin im Pflanzenreich als Glycosid weit verbreitet, d. h. als Rutin, bei dem ein Saccharid über die β-Bindung an Quercetin gebunden ist. Dieses Produkt läßt sich gewinnen, indem man ein derartiges Glycosid aus Pflanzen extrahiert und abtrennt und das erhaltene Glycosid mit einer Säure oder einem Enzym zur Abtrennung von Sacchariden hydro lysiert.

Quercetin weist in bezug auf seine chemische Struktur eine relativ breite Resonanzstruktur auf. Darauf beruht seine Fä higkeit zur Gelbfärbung, Antioxidationswirkung, Vitamin P-Ak tivität und UV-Absorptionsaktivität. Somit ist zu erwarten, daß Quercetin auf den Gebieten der Nahrungsmittel, Pharmazeu tika und Kosmetika Anwendung finden kann.

Jedoch ist Quercetin zwar in leicht wasserlöslichen organi schen Lösungsmitteln löslich, aber unlöslich oder kaum lös lich in Wasser. Somit ist seine Handhabung stark erschwert.

Propolis ist ein Beispiel dafür, daß in der Natur Quercetin in großen Mengen vorkommt. Gemäß "Propolis in Natural Thera peutics" (1983), Herausg. Maloine Editeur S.A., Paris, Frankreich, und gemäß Fragrance Journal, Nr. 83 (1987), S. 36-39 handelt es sich bei Propolis um ein harzähnliches Pro dukt, das von Bienen im Bienenstock gelagert wird. Propolis enthält Harze, Bienenwachs, essentielle Öle, Pollen und Fla vonoide. Es wird seit langer Zeit in der Volksmedizin einge setzt.

Kürzlich wurde festgestellt, daß die Flavonoide in Propolis hauptsächlich aus Flavonaglyconen, wie Chrysin, und Flavo nolaglyconen, wie Galangin und Quercetin, zusammengesetzt sind, wobei festgestellt wurde, daß die Flavonoide einen Hauptwirkstoff von Propolis darstellen.

Die Flavonoide werden gewonnen, indem man Propolis mit einem leicht wasserlöslichen organischen Lösungsmittel, wie Metha nol und Ethanol, extrahiert. Ein auf diese Weise hergestell ter Extrakt ist derzeit im Handel als Propolis-Extrakt oder Propolis-Tinktur erhältlich.

Die Flavonoide lösen sich zwar in wasserlöslichen organischen Lösungsmitteln, sind jedoch in Wasser unlöslich oder kaum löslich, was ihre tatsächliche Anwendungsmöglichkeiten stark einschränkt.

Es besteht ein starkes Bedürfnis, die herkömmlichen Nachteile von Quercetin zu überwinden und ein Quercetinderivat bereit zustellen, das eine zufriedenstellende Wasserlöslichkeit auf weist und eine zufriedenstellende physiologische in vivo-Ak tivität besitzt, ohne daß die Gefahr von Nebenwirkungen be steht.

Aufgabe der Erfindung ist es, die vorstehend geschilderten Nachteile zu überwinden und unter Anwendung einer biochemi schen Technik ein neuartiges Quercetinderivat bereitzustel len.

Erfindungsgemäß werden neuartige α-Glycosylquercetine mit zu friedenstellender Wasserlöslichkeit bereitgestellt, die in vivo leicht hydrolysiert werden, wodurch sich die natürliche physiologische Aktivität von Quercetin ergibt, ohne daß die Gefahr von Nebenwirkungen besteht. Diese Produkte werden her gestellt, indem man eine Lösung mit einem Gehalt an Quercetin und einem α-Glycosylsaccharid der Wirkung eines saccharid übertragenden Enzyms aussetzt. Gegenstand der Erfindung sind somit α-Glycosylquercetine, ein Verfahren zu ihrer Herstel lung und ihre Anwendung in Nahrungsmitteln, Kosmetika und Pharmazeutika, wobei die Pharmazeutika zur Prophylaxe und/oder zur Therapie von Erkrankungen, die auf diese Wirk stoffe ansprechen, dienen.

Erfindungsgemäß wurde auch festgestellt, daß sich ein durch eine Saccharidübertragungsreaktion gebildetes α-Glycosyl quercetin leicht reinigen läßt, indem man eine nach der Reak tion erhaltene Lösung in Kontakt mit einem synthetischen makroporösen Harz bringt, wobei man den Unterschied des Adsorptionsvermögens des Harzes für die Substanzen ausnützt.

Durch die Herstellung der erfindungsgemäßen α-Glycosyl quercetine werden sämtliche Nachteile des Stands der Technik überwunden. Ferner ist die Herstellung von α-Glycosyl quercetin in großtechnischem Maßstab auf einfache Weise mög lich.

Fig. 1 zeigt ein IR-Absorptionsspektrum einer erfindungsgemä ßen α-Glycosylquercetin-Probe (II).

Fig. 2 zeigt zur Kontrolle ein IR-Absorptionsspektrum von Quercetin.

Als Quercetin-Ausgangsprodukte eignen sich erfindungsgemäß sowohl Quercetin-Proben, die durch Hydrolyse von Rutin herge stellt worden sind, sowie Gemische von Quercetin und Flavo noiden, zum Beispiel Propolis.

Das erfindungsgemäß geeignete, aus Propolis hergestellte Quercetin umfaßt hochgereinigtes Quercetin, einen Propolis- Extrakt, der unter Verwendung eines leicht wasserlöslichen organischen Lösungsmittels hergestellt worden ist, ein par tiell gereinigtes Produkt, das durch Entwachsen des Extrakts hergestellt worden ist, eine durch Auskochen von Propolis ge bildete Suspension sowie einen Propolis-Extrakt, der durch Extraktion mit einer alkalischen Lösung hergestellt worden ist.

Gegebenenfalls können handelsübliche Quercetin-Produkte und Produkte, die durch chemische Synthese erhalten worden sind, mit Erfolg für die vorliegende Erfindung eingesetzt werden.

Bei den erfindungsgemäß geeigneten α-Glycosylsacchariden han delt es sich um Produkte, die zur Bildung eines α-Glycosyl quercetins unter Verwendung eines saccharidübertragenden En zyms eingesetzt werden können. Beispielsweise können par tielle Stärkehydrolysate, wie Amylose, Dextrine, Cyclodex trine, und Maltooligosaccharide sowie verflüssigte oder gela tinisierte Stärke ausgewählt werden.

Ein spezielles α-Glycosylsaccharid, das sich für ein saccha ridübertragendes Enzym eignet, wird ausgewählt, um die Bil dung von α-Glycosylquercetin zu erleichtern.

Bei Verwendung von α-Glucosidase (EC 3.2.1.20) als saccharid übertragendes Enzym können mit Erfolg Maltooligosaccharide, wie Maltose, Maltotriose und Maltotetraose, sowie partielle Stärkehydrolysate mit einem Dextroseäquivalent (DE) von etwa 10-70 als α-Glycosylsaccharid eingesetzt werden. Bei Verwen dung von Cyclomaltodextrin-glucanotransferase (EC 2.4.1.19), können Gyclodextrine oder stärkeartige Substanzen mit einem DE-Wert von 60 oder darunter, d. h. gelatinisierte Stärke mit einem DE-Wert von 1 oder weniger und partielle Stärkehydroly sate mit einem DE-Wert von etwa 60, mit Erfolg verwendet wer den. Im Fall von α-Amylase (EC 3.2.1.1), können stärkeartige Substanzen mit einem DE-Wert von etwa 30 oder weniger, d. h. gelatinisierte Stärke mit einem DE-Wert von 1 oder weniger sowie Dextrine oder partielle Stärkehydrolysate mit einem DE- Wert von etwa 30, verwendet werden.

Die für die enzymatische Reaktion geeignete Konzentration eines α-Glucosylsaccharids beträgt etwa das 0,5- bis 100fa che und vorzugsweise das etwa 2- bis 20fache der Konzentra tion von Quercetin.

Bei den Quercetin enthaltenden Lösungen, die für eine enzyma tische Reaktion geeignet sind, handelt es sich um Lösungen, die eine möglichst hohe Konzentration an Quercetin aufweisen, zum Beispiel um Lösungen mit einer relativ hohen Quercetin konzentration in Form einer Suspension oder Lösung, die durch Lösen von Quercetin in Gegenwart eines organischen Lösungs mittels oder bei relativ hohen Temperaturen oder unter alka lischen Bedingungen mit einem pH-Wert von mehr als 7,0 herge stellt worden sind, wobei die Lösungen eine Quercetinkonzen tration von etwa 0,01% (Gew./Vol.) oder mehr und vorzugs weise von etwa 0,1 bis 10,0% (Gew./Vol.) aufweisen.

Zu den erfindungsgemäß geeigneten saccharidübertragenden En zymen gehören solche, die bei Einwirken auf eine Lösung mit einem Gehalt an Quercetin und einem α-Glucosylsaccharid mit den für die Enzyme entsprechenden Eigenschaften ein α-Glyco sylquercetin ohne Zersetzung von Quercetin bilden.

Beispiele für derartige saccharidübertragende Enzyme, die er findungsgemäß verwendet werden können, sind α-Glucosidasen, die sich von tierischen und pflanzlichen Geweben, wie Schweineleber und Buchweizensamen, sowie von durch Züchten in einem Nährmedium enthaltenen Kulturen von Mikroorganismen, unter Einschluß von Bakterien, Pilzen und Hefen, ableiten. Zu den Mikroorganismen gehören solche der Gattung Mucor, Peni cillium und Saccharomyces. Ferner eignen sich Cyclomaltodex trin-glucanotransferasen, die sich von einer Bakterienkultur, z. B. der Gattungen Bacillus und Klebsiella, ableiten; sowie α-Amylasen, die sich von einer Kultur von Pilzen, z. B. solche der Gattung Aspergillus, ableiten.

Die saccharidübertragenden Enzyme müssen vor der Verwendung nicht unbedingt gereinigt werden, sofern sie die vorstehenden Bedingungen erfüllen. Üblicherweise lassen sich mit rohen saccharidübertragenden Enzymen die Ziele der Erfindung errei chen.

Gegebenenfalls können die saccharidübertragenden Enzyme vor ihrer Verwendung durch herkömmliche Methoden gereinigt wer den. Ferner können erfindungsgemäß handelsübliche saccharid übertragende Enzyme eingesetzt werden.

Die Menge des saccharidübertragenden Enzyms und die Reak tionszeit hängen stark voneinander ab. Aus wirtschaftlichen Gesichtspunkten wird ein saccharidübertragendes Enzym übli cherweise in einer Menge verwendet, mit der die enzymatische Reaktion innerhalb von etwa 5 bis 80 Stunden beendet ist.

Immobilisierte, saccharidübertragende Enzyme können in ge eigneter Weise im Chargenbetrieb oder im kontinuierlichen Be trieb eingesetzt werden.

Es ist empfehlenswert, die enzymatische Reaktion unter mög lichst weitgehender Lichtabschirmung vorzunehmen, um eine Zersetzung des Quercetins in der Reaktionslösung zu verhin dern.

Eine auf diese Weise nach der Umsetzung erhaltene Lösung mit einem Gehalt an α-Glycosylquercetin kann direkt als Produkt mit einem Gehalt an α-Glycosylquercetin ohne eine weitere Be handlung eingesetzt werden. Üblicherweise wird die nach der Reaktion erhaltene Lösung durch Filtration und Einengen in einen α-Glycosylguercetin-Sirup übergeführt, der sodann gege benfalls getrocknet und zu einem α-Glycosylquercetin-Pulver pulverisiert wird.

Das auf diese Weise erhaltene Produkt kann in vorteilhafter Weise als an Vitamin P angereichertes Mittel, sowie als sehr sicheres und natürliches Gelbfärbungsmittel, Antioxidations mittel, desodorierendes Mittel, Stabilisator, Qualitätsver besserungsmittel, antiseptisches Mittel, Arzneimittel zur Prophylaxe und Therapie sowie als UV-absorbierendes Mittel in Kombination mit anderen Materialien in Nahrungsmitteln, Ziga retten, Tabak, Futtermitteln, Futter für Haustiere, Mitteln zur Behandlung von darauf ansprechenden Krankheiten, Kosme tika und Kunststoffen eingesetzt werden.

Im Fall der Herstellung eines gereinigten α-Glycosyl quercetin-Produkts läßt sich dieses herstellen, indem man α-Glycosylquercetin aus einem rohem α-Glycosylquercetin mit einem Gehalt an Verunreinigungen, wie α-Glucosylsaccharide, mit einem synthetischen makroporösen Harz abtrennt, wobei man sich der unterschiedlichen Adsorption der Substanzen am Harz bedient.

Der hier verwendete Ausdruck "synthetisches makroporöses Harz" bedeutet nicht-ionogene und poröse synthetische Harze, die eine relativ große Adsorptionsfläche aufweisen, z. B. ein Styrol-Divinylbenzol-Copolymer, Phenol-Formaldehyd-Harz, Acrylharz und Methacrylatharz. Spezielle Beispiele für derar tige Harze sind Amberlite XAD-1, Amberlite XAD-2, Amberlite XAD-4, Amberlite XAD-7, Amberlite XAD-8, Amberlite XAD-11 und Amberlite XAD-12, Produkte der Fa. Rohm & Haas Company, Philadelphia, V.St.A.; Diaion HP-10, Diaion HP-20, Diaion HP- 30, Diaion HP-40 und Diaion HP-50, Produkte der Fa. Mitsu bishi Chemical Industries Ltd., Tokio, Japan; und Imac Syn- 42, Imac Syn-44 und Imac Syn-46, Produkte der Fa. Industrie Maatshappiy Activate N.V., Amsterdam, Niederlande.

Das Verfahren zur Reinigung einer nach der Reaktion erhalte nen Lösung mit einem Gehalt an dem erfindungsgemäßen α-Glyco sylquercetin wird durchgeführt, indem man die Lösung auf eine mit einem synthetischen makroporösen Harz gepackte Säule auf setzt, wobei das α-Glycosylquercetin und das unveränderte Quercetin am Harz adsorbiert werden, während ein großer An teil an verunreinigenden α-Glucosylsacchariden und wasserlös lichen Sacchariden von der Säule ohne Adsorption am Harz elu iert werden.

Nach Beendigung der enzymatischen Reaktion können zwei oder mehr Reinigungsverfahren mit Erfolg in Kombination miteinan der angewandt werden, bevor die nach der Reaktion erhaltene Lösung mit einem synthetischen makroporösen Harz in Kontakt gebracht wird. Bei diesen Reinigungsverfahren handelt es sich beispielsweise um eine Filtrationsentfernung von unlöslichen Substanzen, die in Reaktionslösung durch Neutralisation oder Erwärmen der Lösung entstanden sind; eine Adsorption zur Ent fernung von proteinartigen Substanzen, die in der Reaktions lösung durch Behandlung der Lösung erhalten worden sind, an Magnesiumaluminosilicat oder Magnesiumaluminat; und eine Entionisierung unter Verwendung eines Ionenaustauscherharzes (H- und OH-Formen).

Das α-Glycosylquercetin und das unveränderte Quercetin, die selektiv an dem synthetischen makroporösen Harz in der Säule adsorbiert worden sind, werden zunächst mit einer Lösung, z. B. Wasser, gewaschen. Sodann wird die Säule mit einer Lö sung, z. B. einer wäßrigen Methanol- und Ethanollösung, ver setzt, wonach sich die Elution des α-Glycosylquercetins an schließt. Sodann wird das unveränderte, am Harz adsorbierte Quercetin von der Säule eluiert, wobei sich ein Anstieg des Eluatvolumens oder der Konzentration des organischen Lösungs mittels ergibt.

Ein Sirup mit einem Gehalt an α-Glycosylquercetin als Haupt bestandteil läßt sich erhalten, indem man eine Lösung mit einem hohen Gehalt an α-Glycosylquercetin zur Entfernung von organischen Lösungsmitteln destilliert und die erhaltene Lö sung auf eine vorbestimmte Konzentration einengt. Ein Pulver mit einem Gehalt an α-Glycosylquercetin als Hauptbestandteil läßt sich herstellen, indem man den Sirup trocknet und pulve risiert.

Die Elutionsstufe des α-Glycosylquercetins und von unverän dertem Quercetin mit einem organischen Lösungsmittel ermög licht die Regeneration und die wiederholte Verwendung eines synthetischen makroporösen Harzes.

Die erfindungsgemäße Reinigungsstufe mit einem synthetischen makroporösen Harz ist insofern vorteilhaft, als sie dazu ge eignet ist, gleichzeitig vorhandene Verbindungen, wie α-Glu cosylsaccharide, wasserlösliche Saccharide und wasserlösliche Salze zu entfernen. Das auf diese Weise erhaltene α-Glycosyl quercetin weist folgende Merkmale auf:

1) Es weist im Vergleich zum ursprünglichen Quercetin eine wesentlich höhere Wasserlöslichkeit auf.
2) Es ist im Vergleich zum ursprünglichen Quercetin wesent lich lichtbeständiger und stabiler.
3) Es weist im Vergleich zum ursprünglichen Quercetin im we sentlichen die gleiche oder eine geringfügig bessere Fähig keit zur Gelbfärbung auf.
4) Es wird durch eine enzymatische in vivα-Reaktion zu Quer cetin und Glucose hydrolysiert und zeigt die natürliche phy siologische Aktivität von Quercetin (Vitamin P-Aktivität). Bei Verwendung in Kombination mit Vitamin C wird die physio logische Wirkung verstärkt.
5) Enthält das Produkt ein α-Glucosylsaccharid, so weist es die natürliche Aktivität von α-Glycosylquercetin auf.

Die α-Glucosylsaccharide wirken als Füllstoffe, Verdünnungs mittel oder Süßungsmittel. Wenn es sich um ein gereinigtes Produkt handelt, das frei von α-Glucosylsacchariden ist, zeigt das Produkt die natürliche Aktivität von α-Glycosyl quercetin ohne Füllstoff- oder Verdünnungswirkung.

Diese Merkmale machen das erfindungsgemäße α-Glycosyl quercetin besonders geeignet als sehr sicheres und natürli ches, in bezug auf Vitamin P angereichertes Mittel, gelbfär bendes Mittel, Antioxidationsmittel, desodorierendes Mittel, Stabilisator, qualitätsverbesserndes Mittel, Antiseptikum, prophylaktisches Mittel, therapeutisches Mittel und UV- Absorptionsmittel in Kombination mit anderen Materialien, und zwar Nahrungsmitteln, Zigaretten, Tabak, Futtermitteln, Fut termitteln für Haustiere, Arzneimitteln für darauf anspre chende Erkrankungen, Kunststoffen und Kosmetika, wie Mittel zur Auffrischung sowie zur Aufhellung der Haut.

Insbesondere kann die Vitamin P-Aktivität des erfindungsgemä ßen α-Glycosylquercetins in vorteilhafter Weise erhöht wer den, indem man es mit einem oder mehreren Derivaten von Fla vonoidsacchariden, Rutin, Hesperidin und Naringin, die in letzter Zeit Beachtung als Bioflavonoide gefunden haben, so wie mit deren α-Glycosylsaccharid-Derivaten vereinigt.

Der Geschmack des erfindungsgemäßen α-Glycosylquercetins har moniert gut mit anderen Substanzen, die sauer, salzig, ad stringierend, bitter oder delikat schmecken. Es weist eine zufriedenstellende Säuretoleranz und Wärmebeständigkeit auf. Aufgrund dieser Eigenschaften ist α-Glycosylquercetin in vor teilhafter Weise für allgemeine Nahrungsmittel, Zigaretten und Tabak geeignet, zum Beispiel für Würzmittel, japanische Süßigkeiten, Süßigkeiten vom westlichen Typ, Eiscreme, Sor bets, Getränke, Aufstriche, Pasten, eingelegte Produkte, Do senprodukte, verarbeitete Meeresprodukte, verarbeitete Fleisch- und Fischfleischprodukte, verarbeitete Milch- und Eiprodukte, verarbeitete Nahrungsmittelprodukte, verarbeitete Obstprodukte und verarbeitete Getreideprodukte. Das α-Glyco sylquercetin kann in vorteilhafter Weise zur Verbesserung von Geschmack und Aroma in Kombination mit einem oder mehreren Süßungsmitteln, beispielsweise solche pflanzlichen Ursprungs, wie Steviosid, α-Glycosylsteviosid, Rebaudiosid A, Glycyrrhi zin, α-Glycosylglycyrrhizin und Dihydrochalcon; solche auf Aminosäurebasis wie Glycin, Alanin und L-Aspartyl-L-phenyl alaninmethylester; und solche auf der Basis von Sacchariden, wie Saccharose, partielle Stärkehydrolysate (dicker Malzsi rup), Glycosylsaccharose, Glucose, isomerisierter Zucker, Fructose, Honig, Maltose, Sorbit, Maltit und Lactose, verwen det werden. Das α-Glycosylquercetin verhindert die Kri stallisation und die Sedimentation von in einem Fruchtsaft vorhandenen Flavonoiden und macht sie in vorteilhafter Weise geeignet als trübungsverhinderndes Mittel für Getränke und Gelees mit einem Gehalt an Fruchtsaft. Das α-Glycosyl quercetin kann auch in vorteilhafter Weise in Futtermitteln und Futter für Haustiere, Bienen, Seidenwürmer und Zierfische als in bezug auf Vitamin P angereichertes Mittel oder als Geschmackverbesserungsmittel eingesetzt werden.

Ferner kann das α-Glycosylquercetin in vorteilhafter Weise in Zigaretten, Tabak, pharmazeutischen Präparaten und Kosmetika in Form eines Feststoffs, einer Paste oder einer Flüssigkeit verwendet werden, zum Beispiel in Pastillen, Lebertran, Vitaminkomplexen, sublingualen Tabletten, Cachous, oralen Kühlmitteln, Gurgelmitteln, künstlicher Nahrung, Arzneiroh stoffen, Zahnpastas, internen Arzneimitteln, Injektions präparaten, Lippenstiften, Lippencremes, Sonnenschutzmitteln, prophylaktischen und/oder therapeutischen Mitteln für darauf ansprechende Erkrankungen, Hautauffrischungsmitteln, Hautauf hellungsmitteln und Haarpflegemitteln. Ferner kann das α-Gly cosylquercetin in Kunststoffen als UV-Absorptionsmittel und Mittel zur Verhinderung von Abbau eingesetzt werden.

Der hier verwendete Ausdruck "darauf ansprechende Erkrankun gen" bedeutet Erkrankungen, die mit dem erfindungsgemäßen α-Glycosylquercetin verhindert und/oder behandelt werden kön nen. Beispiele für derartige Erkrankungen sind Viruserkran kungen, bakterielle Erkrankungen, traumatische Erkrankungen, Immunopathien, Rheumatismus, diabetische Erkrankungen von Kreislauforganen, maligne Tumoren und nervöse Erkrankungen. Die Form eines derartigen prophylaktischen und/oder therapeu tischen Mittels für darauf ansprechende Erkrankungen kann frei so gewählt werden, daß sie für den Endverwendungszweck geeignet ist. Beispiele für solche Formen sind flüssige Mit tel, wie Aerosole, Augenwasser, Nasentropfen, Gurgelmittel und Injektionspräparate; Mittel in Form einer Paste, wie Sal ben, Pflaster und Cremes; und Mittel in Form von Feststoffen, wie Pulver, Granulate, Kapseln und Tabletten. Bei der Her stellung dieser Mittel wird das vorliegende α-Glycosyl quercetin gegebenenfalls in geeigneter Weise in Kombination mit einer oder mehreren Substanzen verwendet, z. B. therapeutischen Mitteln, biologischen Wirkstoffen, Antibio tika, Hilfsmitteln, Füllstoffen, Stabilisatoren, farbgebenden Mitteln und Aromastoffen.

Die Dosis der prophylaktischen und/oder therapeutischen Mit tel für darauf ansprechende Erkrankungen kann in geeigneter Weise je nach dem Anteil des erfindungsgemäßen α-Glycosyl quercetins in diesen Mitteln und je nach dem Verabreichungs weg und der Verabreichungshäufigkeit gewählt werden. Üblicherweise wird eine Dosis im Bereich von etwa 0,001 bis 10,0 g/Tag/Erwachsener an α-Glycosylquercetin auf trockener Feststoffbasis (dry solid basis = d.s.b.) angewandt. Im Fall von Kosmetika kann das erfindungsgemäße α-Glycosylquercetin in ähnlicher Weise wie im Fall der vorerwähnten Mittel einge setzt werden.

Das α-Glycosylquercetin kann in vorteilhafter Weise einem Produkt vor der Beendigung der Bearbeitung des Produkts durch übliche herkömmliche Verfahren einverleibt werden, beispiels weise durch Mischen, Kneten , Lösen, Einweichen, Penetrieren, Dispergieren, Auftragen, Sprühen und Einspritzen.

Die folgenden Versuche dienen der näheren Erläuterung des er findungsgemäßen α-Glycosylquercetins.

Versuch 1 Herstellung von α-Glycosylauercetin Versuch 1-(1) Saccharidübertragungsreaktion

1 Gewichtsteil Quercetin und 6 Gewichtsteile Dextrin (DE-Wert 20) wurden mit 500 Gewichtsteilen Wasser versetzt. Das Ge misch wurde auf den pH-Wert von 9,5 eingestellt und durch Er wärmen unter anaeroben Bedingungen gelöst. Anschließend wurde das erhaltene Gemisch auf 60°C gekühlt, pro Gramm Dextrin mit 40 Einheiten Cyclomaltodextrin-glucanotransferase aus Bazil lus stearothermophilus (Handelsprodukt der Fa. Hayashibara Biochemical Laboratories, Inc., Okayama, Japan) versetzt und bei einem pH-Wert von 8,5 oder darüber 18 Stunden bei 60°C einer enzymatischen Reaktion unterworfen. Nach Beendigung der enzymatischen Reaktion wurde die Reaktionslösung erwärmt, um das restliche Enzym zu inaktivieren. Man erhielt eine Lösung mit einem Gehalt an α-Glycosylquercetin.

Versuch 1-(2) Reinigung

Eine gemäß dem Verfahren von Versuch 1-(1) nach der Reaktion erhaltene Lösung wurde filtriert und neutralisiert. Die erhaltene Lösung wurde mit einer Fließgeschwindigkeit von SV 2 auf eine mit Diaion HP-10, einem synthetischen makroporösen Harz (Handelsprodukt der Fa. Mitsubishi Chemical Industries Ltd., Tokio, Japan) gepackte Säule aufgesetzt. Die Säule wurde zunächst mit Wasser gewaschen. Sodann wurden 50% (Vol./Vol.) Ethanol aufgesetzt. Die ausströmende Flüssigkeit wurde zur Entfernung von Ethanol eingeengt und pulverisiert. Man erhielt eine gelbgefärbte α-Glycosylguercetin-Probe (I) in einer Ausbeute von etwa 220% im Vergleich zum Gewicht des als Ausgangsmaterial eingesetzten Quercetins (d.s.b.).

(Versuch 1-(3) Hydrolyse durch Amylase

Eine gemäß dem Verfahren von Versuch 1-(2) hergestellte α-Glycosylquercetin-Probe (I) wurde in Wasser zu einer 1 pro zentigen (Gew./Vol.) Lösung gelöst, die dann pro 1 Gramm Probe (I) mit 100 Einheiten Glucoamylase (EC 3.2.1.3) (Handelsprodukt der Fa. Seikagaku Kogyo Co., Ltd., Tokio, Ja pan) versetzt und 5 Stunden einer enzymatischen Reaktion un terworfen, wobei der pH-Wert auf 5,0 und die Temperatur auf 55°C gehalten wurden. Die Reaktionslösung wurde zur Inakti vierung des restlichen Enzyms erwärmt und in einer Fließge schwindigkeit von SV 2 auf eine mit Diaion HP-10, einem syn thetischen makroporösen Harz (Handelsprodukt der Fa. Mitsu bishi Chemical Industries Ltd., Tokio, Japan), gepackte Säule aufgesetzt. Dabei wurden α-Glycosylquercetin und unveränder tes Quercetin in der Reaktionslösung an dem Harz adsorbiert, während Glucose und Salze von der Säule ohne Adsorption am Harz eluiert wurden. Anschließend wurde die Säule mit Wasser gewaschen und mit einer wäßrigen Ethanollösung versetzt, wo bei die Ethanolkonzentration zur Durchführung der Fraktionie rung stufenweise erhöht wurde. Anschließend erfolgte die Ge winnung einer α-Glycosylquercetin-Fraktion. Die erhaltene Fraktion wurde eigeengt und pulverisiert. Man erhielt eine gelbgefärbte α-Glycosylquercetin-Probe (II) in einer Ausbeute von etwa 50% im Vergleich zum Gewicht des als Ausgangsmate rial eingesetzten Quercetins (d.s.b.).

Versuch 2 Physikochemische Eigenschaften von α-Glycosylauercetin (1) Löslichkeit in Lösungsmitteln

Es ist leicht löslich in Wasser und 0,1 n Natriumhydroxid; geringfügig löslich in Methanol und Ethanol; und unlöslich in Ether, Benzol und Chloroform. Die Löslichkeit der α-Glycosyl quercetin-Probe (I) in Wasser von 25°C (pH-Wert 7) beträgt etwa 10% (Gew./Vol.), während die von ursprünglichem Querce tin 0,0002% (Gew./Vol.) beträgt.

(2) Geschmacks

Ursprüngliches Quercetin und die α-Glycosylquercetin-Proben (I) und (II) wurden jeweils im Mund belassen. Ihre Ge schmacksrichtungen wurden verglichen. Es ergab sich, daß ur sprüngliches Quercetin geschmacklos war und sich wie beim Beißen auf Sand anfühlten. Dies war darauf zurückzuführen, daß das ursprüngliche Quercetin im Mund nicht zum Schmelzen kam, während sowohl die Proben (I) und (II) glatt im Mund schmolzen und eine milde Süße aufwiesen.

(3) UV-Absorptionsspektrum

Um einen Vergleich zwischen den α-Glycosylquercetin-Proben (I) und (II) mit ursprünglichem Quercetin durchzuführen, wur den ihre UV-Absorptionsspektren in Methanollösung gemessen. Die Proben (I) und (II) wiesen in ähnlicher Weise wie ur sprüngliches Quercetin einen ersten und einen zweiten Absorp tionspeak von 153 nm bzw. 373 nm auf.

(4) IR-Absorptionsspektrum

Unter Verwendung eines KBr-Preßlings wurden die IR-Absorp tionsspektren der α-Glycosylquercetin-Probe (II) aufgenommen und studiert. Fig. 1 zeigt das Spektrum dieser Probe. Fig. 2 zeigt das entsprechende Spektrum von ursprünglichem Quercetin als Kontrolle.

(5) Hydrolysestabilität

a) Die α-Glycosylquercetin-Proben werden durch α-Glucosidase (EC 3.2.1.20) aus Schweineleber unter Bildung von Quercetin und D-Glucose hydrolysiert.

1b) Die α-Glycosylquercetin-Proben werden durch β-Glucosidase nicht hydrolysiert.

(6) Analyse durch Hochleistungs-Flüssigchromatographie (HPLC) (a) Analysenverfahren

Apparatur: WATERS MODEL M-6000A, ein von der Fa. Japan Waters Ltd., Tokio, Japan vertriebenes Pumpensystem,
Säule: ODS-M-Säule, ein von der Fa. Shimadzu Techno-Research,
Inc., Kyoto, Japan, vertriebenes Säulenprodukt;
Säulentemperatur: 53°C,
Eluat: Wasser-Methanol-Essigsäure = 60:30:1
Fließgeschwindigkeit: 0,5 ml/min; und
Nachweiswellenlänge: bei 255 nm.

(b) Ergebnisse

Die Probe (I) wies den für Quercetin typischen Peak bei einer Retentionszeit von 62 min auf. Ferner wies sie neue Peaks bei Retentionszeiten von 54, 44, 38, 33, 30, 26, 25, 23, 21 und 19 min auf. Die Probe (II) zeigte zwei relativ breite Peaks bei 54 und 38 min neben einem schmalen Peak, der dem ursprünglichen Peak von Quercetin bei 62 min entsprach.

Aufgrund dieser Ergebnisse wurde die in der Probe (I) enthal tene Substanz mit den neuen Peaks als α-Glycosylguercetin de finiert, worin eine äquimolare oder größere Menge an D-Gluco seresten über eine α-Bindung an Quercetin gebunden ist.

Zwei in Probe (II) enthaltenen Substanzen mit neuen Peaks wurden als α-Glycosylquercetine definiert, worin äquimolare oder größere Anteile an D-Glucoseresten an unterschiedliche Stellungen des Quercetin-Gerüstes gebunden sind.

Wie vorstehend beschrieben, handelt es sich beim erfindungs gemäßen α-Glycosylquercetin um ein neues Saccharidderivat von Quercetin mit einer zufriedenstellenden Wasserlöslichkeit, wobei äquimolare oder darüberliegende Anteile an D-Gluco seresten über eine α-Bindung an Quercetin gebunden sind. Das α-Glycosylquercetin läßt sich leicht durch α-Glucosidase hy drolysieren, wodurch sich bei Verabreichung an einen lebenden Körper die natürliche physiologische Aktivität von Quercetin ergibt.

(7) Antioxidationsaktivität

10 ml einer etwa 1 prozentigen Lösung von Linolsäure in Etha nol, 10 ml 50 milimolarer Phosphatpuffer und 5 ml Wasser wur den vermischt. 5 ml-Aliquotanteile des Gemisches wurden auf 5 ml-Flaschen verteilt. Die einzelnen Flaschen wurden mit den α-Glycosylquercetin-Proben (I) oder (II) in einer Konzentra tion von 200 ppm, versetzt, verschlossen und bei 50°C unter Lichtabschirmung stehen gelassen. Als Kontrolle wurde dl-α- Tokopherol, ein typisches Antioxidationsmittel verwendet. Proben von 0,5 ml Lösung wurden den einzelnen Flaschen in vorbestimmten Zeitabständen entnommen. Die Lösungsproben wur den einer Hochleistungs-Flüssigchromatographie (HPLC) unter zogen, um den Anteil an Wasserstoffperoxid, das durch Oxida tion von Linolsäure entstanden war, zu bestimmen. Die bei der Analyse von Wasserstoffperoxid eingehaltenen Bedingungen sind nachstehend angegeben:
Vorrichtung: WATERS MODEL M-6000A, ein von der Fa. Japan Wa ters Ltd., Tokio, Japan, vertriebenes Pumpensystem;
Säule: ODS-M-Säule, eine von der Fa. Shimadzu Techno-Re search, Inc., Kyoto, Japan, vertriebene Säule;
Säulentemperatur: 35°C,
Eluat: Wasser:Methanol:Essigsäure = 7:25:0,1;
Fließgeschwindigkeit: 0,5 ml/min,
Nachweiswellenlänge: bei 235 nm.

Die Ergebnisse sind in Tabelle 1 zusammengestellt.

Tabelle 1

Antioxidationsaktivität

Wie aus den Ergebnissen von Tabelle 1 hervorgeht, wiesen die α-Glycosylguercetin-Proben (I) und (II) eine höhere Antioxi datiosaktivität als dl-α-Tocopherol auf.

Versuch 3 Akute Toxizität

Eine gemäß dem Verfahren in Versuch 1-(2) hergestellte α-Gly cosylguercetin-Probe (I) wurde an 7 Wochen alten dd-Mäusen auf ihre akute Toxizität untersucht. Bis zu einer Dosis von 5 g der Probe starb keine der Mäuse. Ein Test bei höheren Dosen war nicht durchführbar.

Somit ist die akute Toxizität der Probe äußerst gering. In ähnlicher Weise wurde eine gemäß dem Verfahren von Versuch 1- (3) hergestellte α-Glycosylquercetin-Probe (II) auf akute To xizität untersucht. Man kam zu den gleichen Ergebnissen wie bei der Probe (I). Somit ergab sich, daß die akute Toxizität von Probe (II) äußerst nieder war.

Nachstehend wird die Herstellung und Verwendung des erfin dungsgemäßen α-Glycosylquercetins an Hand der folgenden Bei spiele A und B näher beschrieben.

(Beispiel A-1 α-Glycosylguercetin

200 Gewichtsteile Wasser wurden mit 1 Gewichtsteil Quercetin und 4 Gewichtsteilen Dextrin (DE-Wert 10) versetzt. Die er haltene Suspension wurde auf den pH-Wert 9,8 eingestellt, durch Erwärmen unter anaeroben Bedingungen in eine Lösung übergeführt, auf 60°C gekühlt, pro Gramm Dextrin sofort mit 40 Einheiten Gyclomaltodextrin-glucanotransferase aus Bacil lus stearothermophilus (Handelsprodukt der Fa. Hayashibara Biochemical Laboratories Inc., Okayama, Japan) versetzt und 24 Stunden unter anaeroben Bedingungen und unter Rühren bei einem pH-Wert von 8,5 oder darüber und bei 55°C einer enzyma tischen Reaktion unterworfen. Eine HPLC-Analyse der Reak tionslösung ergab, daß etwa 50% Quercetin in α-Glycosyl quercetine, wie α-Glucosylquercetin, α-Maltosylquercetin und α-Maltotriosylquercetin, übergeführt worden waren. Die Reak tionslösung wurde neutralisiert, zur Inaktivierung des rest lichen Enzyms erwärmt und filtriert. Das Filtrat wurde auf übliche Weise entionisiert und unter Verwendung eines Ionen austauscherharzes (H- und OH-Formen) gereinigt und eingeengt. Man erhielt einen α-Glycosylquercetin-Sirup mit einem Gehalt an α-Glucosylsaccharid in einer Ausbeute von etwa 80% im be zug auf das Gewicht des Ausgangsmaterials (d.s.b.).

Das Produkt kann in vorteilhafter Weise in Kombination mit anderen Materialien in Nahrungsmitteln, Zigaretten, Tabak, Futtermitteln, Futtermitteln für Haustiere, Mitteln für darauf ansprechende Erkrankungen, Kosmetika und Kunststoffen als in bezug auf Vitamin-P angereichertes Mittel mit verbes serter Wasserlöslichkeit sowie als sehr sicheres und natürli ches gelbfärbendes Mittel, Antioxidationsmittel, Stabilisa tor, Qualitätsverbesserungsmittel, prophylaktisches Mittel, therapeutisches Mittel und UV-Absorptionsmittel verwendet werden.

Beispiel A-2 α-Glucosylquercetin

1 Gewichtsteil eines α-Glycosylquercetin-Sirups mit einem Ge halt an α-Glucosylsaccharid, der gemäß dem Verfahren von Bei spiel A-1 hergestellt worden war, wurde in 4 Gewichtsteilen Wasser gelöst, pro 1g α-Glycosylquercetin mit 100 Einheiten Glucoamylase (EC 3.2.1.3) (Handelsprodukt der Fa. Seikagaku- Kogyo Go. Ltd., Tokio, Japan) versetzt und 5 Stunden bei 50°C einer enzymatischen Reaktion unterworfen. Eine HPLG-Analyse der Reaktionslösung ergab, daß das α-Glycosylquercetin in zwei Typen von α-Glucosylquercetin umgewandelt worden war, worin ein D-Glucoserest an einer unterschiedlichen Stellung des Quercetinrests gebunden ist. Die Reaktionslösung wurde zur Inaktivierung des restlichen Enzyms erwärmt und mit einer Fließgeschwindigkeit von SV 2 auf eine mit Diaion HP-10, einem synthetischen makroporösen Harz (Handelsprodukt der Fa. Mitsubishi Chemical Industries, Ltd., Tokio, Japan), gepackte Säule aufgesetzt. Es ergab sich, daß die α-Glucosylquercetine und das ursprüngliche Quercetin in der Reaktionslösung am Harz adsorbiert worden waren, während Glucose und Salze von der Säule ohne Adsorption am Harz eluiert worden waren. An schließend wurde die Säule zunächst mit Wasser gewaschen. So dann wurde eine wäßrige Ethanollösung aufgesetzt, wobei die Ethanolkonzentration stufenweise erhöht wurde, um die α-Glu cosylquercetine zu fraktionieren. Die erhaltene Fraktion mit einem Gehalt an α-Glucosylquercetinen wurde unter verminder tem Druck eingeengt und pulverisiert. Man erhielt ein α-Glu cosylquercetin-Pulver in einer Ausbeute von etwa 50%, bezo gen auf das Gewicht des als Ausgangsmaterial eingesetzten Quercetins (d.s.b.).

Es ergab sich, daß 1 Mol D-Glucose pro 1 Mol Quercetin bei der Hydrolyse der α-Glucosylquercetine mit einer Säure gebil det wurden. Die α-Glucosylquercetine wurden zu Quercetin und D-Glucose hydrolysiert, wenn sie der Wirkung einer teilweise gereinigten α-Glucosidase-Probe, die aus Schweineleber extra hiert und teilweise gereinigt worden war, unterworfen wurde.

Das Produkt kann in vorteilhafter Weise in Kombination mit anderen Materialien in Nahrungsmitteln, Zigaretten, Tabak, Mitteln für darauf ansprechende Erkrankungen, Kosmetika und Kunststoffen als ein hochgereinigtes, in bezug auf Vitamin P angereichertes Mittel mit verbesserter Wasserlöslichkeit so wie als gelbfärbendes Mittel, Antioxidationsmittel, Stabili sator, Qualitätsverbesserungsmittel, prophylaktisches Mittel, therapeutisches Mittel und UV-Absorptionsmittel verwendet werden.

Beispiel A-3 Gemisch aus α-Glvcosvlquercetin und Flavonoid

1 Gewichtsteil eines Flavonoidgemisches mit einem Gehalt an Ghrysin, Galangin und Quercetin, das auf herkömmliche Weise durch Entwachsen eines durch Ethanolextraktion erhaltenen Propolis-Extrakts hergestellt worden war, und 10 Gewichts teile Dextrin (DE-Wert 8) wurden mit 200 Gewichtsteilen Was ser versetzt. Die erhaltene Suspension wurde auf den pH-Wert 9,8 eingestellt und durch Erwärmen unter anaeroben Bedingun gen in Lösung gebracht, sodann auf 60°C gekühlt, mit 50 Ein heiten Gyclomaltodextrin-glucanotransferase pro 1 g Dextrin versetzt und 40 Stunden unter anaeroben Bedingungen und unter Rühren einer enzymatischen Reaktion bei einem pH-Wert von 8,5 oder darüber bei 55°C unterworfen. Die HPLG-Analyse der Reak tionslösung ergab, daß etwa 50% Quercetin in ein α-Glycosyl quercetin umgewandelt worden waren.

Die Reaktionslösung wurde neutralisiert, zur Inaktivierung des restlichen Enzyms erwärmt und filtriert. Auf ähnliche Weise wie in Beispiel A-1 wurde das Filtrat sodann auf übli che Weise gereinigt, eingeengt und sprühgetrocknet. Man er hielt ein pulverförmiges Gemisch aus einem Flavonoid und einem α-Glycosylquercetin mit einem Gehalt an einem α-Gluco sylsaccharid in einer Ausbeute von etwa 85%, bezogen auf das Gewicht des Ausgangsmaterials (d.s.b.).

Beispiel A-4 Gemisch aus α-Glycosylquercetin und Flavonoid

Ein Filtrat einer nach der Reaktion erhaltenen Lösung, die gemäß dem Verfahren von Beispiel A-3 hergestellt worden war, wurde mit einer Fließgeschwindigkeit von SV 1,5 auf eine mit Amberlite XAD-7, einem synthetischen makroporösen Harz (Produkt der Fa. Rohm & Haas Gompany, Philadelphia, V.St.A.), gepackte Säule aufgesetzt. Es ergab sich, daß am Harz α-Gly cosylquercetin und ursprüngliche Flavonoide adsorbiert worden waren, während Dextrin, Oligosaccharide und Salze von der Säule ohne Adsorption am Harz eluiert worden waren. Die Säule wurde zunächst mit Wasser gewaschen. Sodann wurden 50% (Vol./Vol.) Methanol zur Elution von α-Glycosylquercetin und von ursprünglichen Flavonoiden aufgesetzt. Die ausströmende Lösung wurde eingeengt und pulverisiert. Man erhielt ein pul verförmiges Gemisch von α-Glycosylquercetin und Flavonoiden in einer Ausbeute von etwa 55%, bezogen auf das Gewicht des als Ausgangsmaterial eingesetzten Flavonoidgemisches (d.b.s.).

Beispiel A-5 α-Glycosylquercetin Beispiel A-5(1) Herstellung einer α-Glucosidase-Probe

Ein flüssiges Kulturmedium, das aus 4% (Gew./Vol.) Maltose, 0,1% (Gew./Vol.) Kaliumhydrogenphosphat, 0,1% (Gew./Vol.) Ammoniumnitrat, 0,05% (Gew./Vol.) Manesiumsulfat, 0,05% (Gew./Vol.) Kaliumchlorid, 0,2% (Gew./Vol.) Polypepton, 1% (Gew./Vol.) Galciumcarbonat (durch Erwärmen vorsterilisiert und zum Animpfzeitpunkt antiseptisch zum Kulturmedium gege ben) und Wasser bestand, wurde hergestellt. 500 Gewichtsteile des Kulturmediums wurden mit einer Anzuchtkultur von Mucor javanicus IFO 4570 angeimpft und 44 Stunden unter Schütteln bei 30°C inkubiert. Nach Beendigung der Züchtung wurde das erhaltene Myzel gewonnen. 48 Gewichtsteile des feuchten My zels wurden mit 50 Gewichtsteilen einer 4 m Harnstofflösung, die durch Lösen von Harnstoffin 0,5 m Phosphatpuffer (pH- Wert 5.3) hergestellt worden war, versetzt. Man ließ das Ge misch 40 Stunden bei 30°C stehen und zentrifugierte es dann. Der erhaltene Überstand wurde über Nacht gegen fließendes Wasser dialysiert, mit Ammoniumsulfat bis zu einem Sätti gungsgrad von 0,9 versetzt und über Nacht bei 4°C stehen ge lassen. Der ausgesalzte Niederschlag wurde durch Filtration gewonnen und in 50 Gewichtsteilen 0,01 m Acetatpuffer (pH- Wert 5,3) suspendiert und gelöst und sodann zentrifugiert. Anschließend wurde der gebildete Überstand als α-Glucosidase- Probe gewonnen.

Beispiel A-5(2) Herstellung von α-Glycosylquercetin

3 Gewichtsteile Quercetin und 20 Gewichtsteile Dextrin (DE- Wert 30) wurden zu 500 Gewichtsteilen einer 20 prozentigen (Vol./Vol.) wäßrigen Ethanollösung gegeben. Die Suspension wurde auf den pH-Wert 9,0 eingestellt, durch Erwärmen unter anaeroben Bedingungen in Lösung gebracht, auf 55°C gekühlt, sofort mit 15 Gewichtsteilen einer α-Glucosidase-Probe, die gemäß dem Verfahren von Beispiel A-5(1) hergestellt worden war, versetzt und 40 Stunden unter Rühren einer enzymatischen Reaktion bei 50°C und einem pH-Wert von 8,5 oder darüber un terworfen. Die HPLG-Analyse der Reaktionslösung ergab, daß etwa 30% des Quercetins in α-Glycosylquercetin übergeführt worden waren.

Ähnlich wie in Beispiel A-3 wurde die Reaktionslösung gerei nigt, eingeengt und pulverisiert. Man erhielt ein α-Glycosyl quercetin-Pulver mit einem Gehalt an α-Glycosylsaccharid in einer Ausbeute von etwa 80%.

In ähnlicher Weise wie das Produkt von Beispiel A-3 läßt sich dieses Produkt in vorteilhafter Weise in Kombination mit an deren Materialien in einer Reihe von Produkten als ein in be zug auf Vitamin P angereichertes Mittel mit verbesserter Was serlöslichkeit sowie als sehr sicheres und natürliches gelb färbendes Mittel, Antioxidationsmittel, Stabilisator, Quali tätsverbesserungsmittel, prophylaktisches Mittel, therapeuti sches Mittel und UV-Absorptionsmittel verwenden.

Beispiel B-1 Bonbons

1500 Gewichtsteile MABITR, ein hydrierter Maltosesirup der Fa. Hayashibara Go., Ltd., Okayama, Japan, wurden unter ver mindertem Druck auf einen Feuchtigkeitsgehalt von etwa 2% oder darunter eingeengt und sodann mit einer angemessenen Menge an Citronensäure und 1 Gewichtsteil eines gemäß dem Verfahren von Beispiel A-4 hergestellten pulverförmigen Gemi sches von α-Glycosylquercetin und Flavonoid vermischt. Das erhaltene Gemisch wurde auf übliche Weise zu Bonbons verformt und verpackt.

Bei diesem Produkt handelt es sich um relativ kalorienarme, in bezug auf Vitamin P angereicherte Bonbons, die eine rela tiv geringe kariesinduzierende Wirkung aufweisen.

Beispiel B-2 "Fuki-no-mizu-ni" (gekochter Sumpfrhabarber)

Frischer Sumpfrhabarber wurde geschält, in kurze Stücke ge schnitten, mehrere Stunden in einer verdünnten Salzlösung eingeweicht und in einer Lösung mit einem Gehalt an einem grünen farbgebenden Mittel, die durch Mischen von Food Blue Nr. 1 (Brillantblau FGF) und einem gemäß dem Verfahren von Beispiel A-1 hergestellten α-Glycosylquercetin-Sirup herge stellt worden war, gekocht. Man erhielt das Titelprodukt mit blauem Farbton.

Das Produkt, das einen natürlichen Geschmack aufweist, wird in vorteilhafter Weise als Grundmaterial für auf japanische Art zubereitete Speisen verwendet.

Beispiel B-3 "Gyuhi" (Stärkepaste)

1 Gewichtsteil glutinöse Reisstärke wurde mit 1,2 Gewichts teilen Wasser versetzt. Das Gemisch wurde unter Erwärmen ge liert, wobei 1,5 Gewichtsteile Zucker, 0,7 Gewichtsteile SUNMALT®, ein kristallines β-Maltoseprodukt der Fa. Hayashi bara Go., Ltd. Okayama, Japan, 0,3 Gewichtsteile partielles Stärkehydrolysat und 0,02 Gewichtsteile des gemäß dem Verfah ren von Beispiel A-5 hergestellten α-Glycosylquercetin-Pul vers zugemischt wurden. Anschließend wurde das erhaltene Ge misch zur Bildung des Titelprodukts auf übliche Weise geformt und verpackt.

Bei dem Produkt, das einen natürlichen Geschmack aufweist, handelt es sich um eine japanische Süßware, ähnlich wie "kibi-dango" (Hirseknödel).

Beispiel B-4 Gemischtes Süßungsmittel

100 Gewichtsteile Honig, 50 Gewichtsteile isomerisierter Zucker, 1 Gewichtsteil "αG Sweet", ein von der Fa. Toyo Sugar Refining Go., Ltd. Tokio, Japan, vertriebenes α-Glycosylste viosid-Produkt, und 0,02 Gewichtsteile des gemäß dem Verfah ren von Beispiel A-4 hergestellten Gemisches aus α-Glycosyl quercetin und Flavonoid wurden vermischt.

Das Produkt, ein in bezug auf Vitamin P angereichertes Sü ßungsmittel, weist eine geschmacklich zufriedenstellende Qua lität auf und besitzt ein etwa doppelt so hohes Süßungsvermö gen wie Saccharose. Somit kann das Produkt in vorteilhafter Weise als gesundes Nahrungsmittel eingesetzt werden.

Beispiel B-5 Cremefülle

1200 Gewichtsteile FINETOSE®, ein von der Fa. Hayashibara Go., Ltd. Okayama, Japan, vertriebenes, kristallines α-Malto sepulver, 1000 Gewichtsteile Fett, 50 Gewichtsteile Kakao masse, 3 Gewichtsteile des gemäß dem Verfahren von Beispiel A-2 hergestellten α-Glycosylquercetin-Pulvers und 1 Gewichts teil Lecithin wurden auf übliche Weise zu einer Creme ver mischt.

Bei dem Produkt handelt es sich um eine in bezug auf Vitamin P angereicherte Cremefülle mit schokoladeähnlichem Geschmack, die ferner eine zufriedenstellende Beißbeschaffenheit und Schmelzbarkeit aufweist.

Beispiel B-6 Tabletten

10 Gewichtsteile L-Ascorbinsäure wurden mit 19 Gewichtsteilen kristalliner α-Maltose, 10 Gewichtsteilen des gemäß dem Ver fahren von Beispiel A-3 hergestellten pulverförmigen Gemi sches aus α-Glycosylquercetin und Flavonoid und 1 Gewichts teil "α-G Rutin", einem von der Fa. Toyo Sugar Refining Co., Ltd., Tokio, Japan, vertriebenen α-Glycosylrutin-Produkt, versetzt. Nach Herstellung eines homogenen Gemisches wurden unter Verwendung eines 2-OR-Stempels von 12 mm Durchmesser Tabletten hergestellt.

Beim erhaltenen Produkt handelt es sich um ein leicht schluckbares, Vitaminmischpräparat mit einem Gehalt an L-As corbinsäure, α-Glycosylrutin und einem Gemisch aus α-Glyco sylquercetin und Flavonoid, worin die L-Ascorbinsäure in zu friedenstellender Weise stabilisiert ist.

Beispiel B-7 Kapseln

10 Gewichtsteile Calciumacetat-monohydrat, 50 Gewichtsteile Magnesium-L-lactat-trihydrat, 57 Gewichtsteile Maltose, 20 Gewichtsteile eines gemäß dem Verfahren von Beispiel A-4 her gestellten pulverförmigen Gemisches aus α-Glycosylquercetin und Flavonoid und 12 Gewichtsteile eines gamma-Cyclodextrin- Einschlußkomplexes mit einem Gehalt an 20% Eikosapentaen säure wurde homogen vermischt, granuliert und auf übliche Weise zu Gelatinekapseln mit einem Gewicht von jeweils 150 mg verarbeitet.

Das Produkt läßt sich in vorteilhafter Weise als Mittel zur Senkung des Blutcholesterinspiegels, Immunoaktivator, Haut auffrischungsmittel, prophylaktisches oder therapeutisches Mittel für darauf ansprechende Erkrankungen und gesund heitsförderndes Nahrungsmittel verwenden.

Beispiel B-8 Salbe

1 Gewichtsteil Natriumaceat-trihydrat und 4 Gewichtsteile DL- Calciumlactat wurden mit 10 Gewichtsteilen Glycerin homogen vermischt. Das Gemisch wurde mit 50 Gewichtsteilen Petrola tum, 10 Gewichtsteilen pflanzlichem Wachs, 10 Gewichtsteilen Lanolin, 14,5 Gewichtsteilen Sesamöl, 1 Gewichtsteil des ge mäß dem Verfahren von Beispiel A-4 hergestellten pulverförmi gen Gemisches aus α-Glycosylquercetin und Flavonoid und 0,5 Gewichtsteilen Pfefferminzöl versetzt. Nach Vermischen bis zur homogenen Beschaffenheit erhielt man das Titelprodukt.

Das Produkt läßt sich in vorteilhafter Weise als Sonnen schutzmittel, Hautauffrischungsmittel, Hautaufhellungsmittel und heilungsunterstützendes Mittel bei Verletzungen und Ver brennungen einsetzen.

Beispiel B-9 Injektionspräparat

Ein gemäß dem Verfahren von Beispiel A-2 hergestelltes α-Cly cosylquercetinpulver wurde in Wasser gelöst und auf übliche Weise steril filtriert. Man erhielt eine pyrogenfreie Lösung, die sodann auf 20 ml fassende Glasfläschchen in einem α-Cly cosylquercetingehalt von jeweils 10 mg verteilt wurden. Nach Gefriertrocknung und Verschließen erhielt man ein Injektions präparat.

Das Produkt kann allein oder in Kombination mit anderen Vitaminen und Mineralstoffen intramuskulär oder intravenös verabreicht werden. Das Produkt braucht nicht in der Kälte gelagert zu werden und löst sich bei der Verwendung leicht in physiologischer Kochsalzlösung.

Beispiel B-10 Injektionspräparat

6 Gewichtsteile Natriumchlorid, 0,3 Gewichtsteile Kaliumchlo rid, 0,2 Gewichtsteile Calciumchlorid, 3,1 Gewichtsteile Na triumlactat, 45 Gewichtsteile Maltose und 1 Gewichtsteil des gemäß dem Verfahren von Beispiel A-2 hergestellten α-Gluco sylquercetin-Pulvers wurden in 1000 Gewichtsteilen Wasser ge löst. Die erhaltene Lösung wurde auf übliche Weise steril filtriert. Von der erhaltenen pyrogenfreien Lösung wurden Aliquotanteile von jeweils 250 ml auf Kunststoffbehälter ver teilt. Man erhielt das Titelprodukt.

Das Produkt, bei dem es sich um ein Injektionspräparat zur Ergänzung von Vitamin P, Energieträgern und Mineralien han delt, eignet sich in vorteilhafter Weise zur unterstützenden Behandlung bei Krankheiten und während der Erholungsphase.

Beispiel B-10 Intubationsnahrung

Eine Zusammensetzung aus 20 Gewichtsteilen kristalliner Mal tose, 1,1 Gewichtsteilen Glycin, 0,18 Gewichtsteilen Natrium glutamat, 1,2 Gewichtsteilen Salz, 1 Gewichtsteil Citronen säure, 0,4 Gewichtsteilen Calciumlactat, 0,1 Gewichtsteilen Magnesiumcarbonat, 0,01 Gewichtsteilen eines gemäß dem Ver fahren von Beispiel A-3 hergestellten pulverförmigen Gemi sches aus α-Glycosylquercetin und Flavonoid, 0,01 Gewichts teilen Thiamin und 0,01 Gewichtsteilen Riboflavin wurde her gestellt. Aliquotanteile von 24 g dieser Zusammensetzung wur den in beschichtete Aluminiumbeutel gespritzt und heißgesie gelt. Man erhielt das Titelprodukt.

Das Produkt kann in vorteilhafter Weise als orale oder paren terale Intubationsnahrung verwendet werden, indem man einen Beutel des Produkts in etwa 300-500 ml Wasser löst und die Lösung in Nase, Magen oder Darm verabreicht.

Beispiel 12 Badesalz

Ein Gemisch aus 21 Gewichtsteilen DL-Natriumlactat, 8 Ge wichtsteilen Natriumpyruvat, 5 Gewichtsteilen des gemäß dem Verfahren von Beispiel A-1 hergestellten α-Glycosylquercetin- Sirups und 40 Gewichtsteilen Ethanol wurde mit 26 Gewichts teilen aufbereitetem Wasser und entsprechenden Mengen an einem farbgebenden Mittel und einem Aromastoff vermischt. Man erhielt das Titelprodukt.

Das Produkt eignet sich als Hautauffrischungs- und Hautauf hellungsmittel und kann verwendet werden, indem man es mit heißem Wasser in der Badewanne auf das 100- bis 10 000fache verdünnt. Das Produkt kann in vorteilhafter Weise als Reini gungsflüssigkeit oder -lotion verwendet werden, indem man es vor der Verwendung in ähnlicher Weise, wie vorstehend be schrieben, verdünnt.

Beispiel B-13 Milchige Lotion

0,5 Gewichtsteile Polyoxyethylenbehenylether, 1 Gewichtsteil Polyoxyethylensorbit-tetraoleat, 1 Gewichtsteil öllösliches Glycerylmonostearat, 0,5 Gewichtsteile Brenztraubensäure, 0,5 Gewichtsteile Behenylalkohol, 1 Gewichtsteil Avokadoöl, 1 Ge wichtsteil des gemäß dem Verfahren von Beispiel A-1 herge stellten α-Glycosylquercetin-Sirups und geeignete Mengen eines antiseptischen Mittels und an Vitamin E wurden unter Erwärmen auf übliche Weise gelöst. Die erhaltene Lösung wurde mit 1 Gewichtsteil L-Natriumlactat, 5 Gewichtsteilen 1,3-Bu tylenglykol, 0,1 Gewichtsteilen Garboxyvinyl-Polymer und 85,3 Gewichtsteilen aufbereitetem Wasser versetzt. Das erhaltene Gemisch wurde mit einem Homogenisator emulgiert, mit einer geeigneten Menge an Aromastoff versetzt und unter Bildung einer milchigen Lotion gerührt.

Das Produkt kann in vorteilhafter Weise als Sonnenschutzmit tel, Hautauffrischungsmittel und Hautaufhellungsmittel ver wendet werden.

Beispiel B-14 Creme

2 Gewichtsteile Polyoxyethylenglykolmonostearat, 5 Gewichts teile selbst-emulgierendes Glycerinmonostearat, 2 Gewichts teile des gemäß dem Verfahren von Beispiel A-3 hergestellten pulverförmigen Gemisches aus α-Glycosylquercetin und Flavo noid, 1 Gewichtsteil flüssiges Paraffin, 10 Gewichtsteile Glyceryltrioctanoat und eine geeignete Menge an Antiseptikum wurden durch Erwärmen auf übliche Weise gelöst. Die erhaltene Lösung wurde mit 2 Gewichtsteilen L-Milchsäure, 5 Gewichts teilen 1,3-Butylenglykol und 66 Gewichtsteilen aufbereitetem Wasser versetzt. Das erhaltene Gemisch wurde mit einem Homa genisator emulgiert, mit einer geeigneten Menge an Aromastoff versetzt und unter Rühren vermischt. Man erhielt eine Creme.

Das Produkt kann in vorteilhafter Weise als Sonnenschutzmit tel, Hautauffrischungsmittel und Hautaufhellungsmsittel ver wendet werden.

Wie vorstehend beschrieben, weist die vorliegende Erfindung die folgenden vorteilhaften Merkmale auf: (i) α-Glycosylquer cetin wird leicht nach einer biochemischen Technik gebildet, bei der eine Lösung mit einem Gehalt an Quercetin und einem α-Glycosylsaccharid der Wirkung eines saccharidübertragenden Enzyms ausgesetzt wird; (ii) beim α-Glycosylquercetin ist der Nachteil des ursprünglichen Quercetins, daß es in Wasser kaum löslich oder unlöslich ist, vermieden; und (iii) das α-Glyco sylquercetin besitzt wie ursprüngliches Quercetin eine gelb färbende Wirkung und wird in vivo leicht zu Quercetin und D- Glucose hydrolysiert, wonach es die natürliche physiologische Aktivität von Quercetin ausübt, ohne daß die Gefahr von Ne benwirkungen besteht.

Somit kann das erfindungsgemäße α-Glycosylquercetin in vor teilhafter Weise als sehr sicheres und natürliches, in bezug auf Vitamin P angereichertes Mittel, gelbfärbendes Mittel, Antioxidationsmittel, desodoriendes Mittel, Stabilisator, Qualitätsverbesserungsmittel, prophylaktisches Mittel, thera peutisches Mittel, UV-Absorptionsmittel und Mittel zur Ver hinderung von Abbau in Kombination mit anderen Materialien in Nahrungsmitteln, Zigaretten, Tabak, Futtermitteln, Futtermit teln für Haustiere, Mitteln für darauf ansprechende Erkran kungen, Kunststoffen und Kosmetika, wie Hautauffrischungs- und Hautaufhellungsmsitteln, verwendet werden.

Demzufolge hat die Bereitstellung der erfindungsgemäßen α-Glycosylquercetine in großtechnischem Maßstab und deren An wendung eine große Bedeutung auf den Gebieten der Nahrungs mittel, Kosmetika, Pharmazeutika und Kunststoffe.

Claims

1. α-Glycosylquercetin, worin ein äquimolarer oder größerer Anteil an D-Glucoseresten über eine α-Bindung an Quercetin gebunden ist.

2. α-Glycosylquercetin nach Anspruch 1, dadurch gekennzeich net, daß es sich um α-Glucosylquercetin handelt.

3. Verfahren zur Herstellung von α-Glycosylquercetin, worin ein äquimolarer oder größerer Anteil an D-Glucoseresten über eine α-Bindung an Quercetin gebunden ist, dadurch gekenn zeichnet, daß man

a) eine Lösung mit einem Gehalt an Quercetin und einem α-Glucosylsaccharid der Wirkung eines saccharidübertragenden Enzyms unter Bildung von α-Glycosylquercetin unterwirft; und
b) das gebildete α-Glycosylquercetin gewinnt.

4. Verfahren nach Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, daß es sich bei dem α-Glucosylsaccharid um einen Bestandteil aus der Gruppe Amylose, Dextrine, Cyclodextrine, Maltooligosaccharide und partielle Stärkehydrolysate handelt.

5. Verfahren nach Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, daß die Konzentration an Quercetin in Stufe (a) mindestens 0,014% (Gew./Vol.) beträgt.

6. Verfahren nach Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, daß die Konzentration an α-Glucosylsaccharid in (a) das 0,5- bis 100 fache der Konzentration an Quercetin beträgt.

7. Verfahren nach Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, daß es sich beim saccharidübertragenden Enzym in Stufe (a) um einen Bestandteil aus der Gruppe α-Glucosidase (EC 3.2.1.20), Gyclomaltodextrin-glucanotransferase (EC 2.4.1.19) und α-Amylase (EC 3.2.1.1) handelt.

8. Verfahren nach Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, daß die Stufe (a) zusätzlich eine Stufe umfaßt, bei der man die er haltene Lösung mit einem Gehalt an α-Glycosylquercetin zur Reinigung in Kontakt mit einem synthetischen makroporösen Harz bringt.

9. Zusammensetzung, enthaltend eine wirksame Menge an α-Gly cosylquercetin, worin ein äquimolarer oder größerer Anteil an D-Glucoseresten über eine α-Bindung an Quercetin gebunden ist.

10. Zusammensetzung nach Anspruch 9, dadurch gekennzeichnet, daß es sich um einen Bestandteil aus der Gruppe Nahrungsmit tel, Kosmetika und Pharmazeutika handelt.

11. Zusammensetzung nach Anspruch 9, dadurch gekennzeichnet, daß das α-Glycosylguercetin nach einem Verfahren hergestellt worden ist, bei dem man

a) eine Lösung mit einem Gehalt an Quercetin und einem α- Glucosylsaccharid der Wirkung eines saccharidübertragenden Enzyms unterwirft; und
b) das gebildete α-Glycosylguercetin gewinnt.

12. Zusammensetzung nach Anspruch 11, dadurch gekennzeichnet, daß es sich bei dem α-Glucosylsaccharid in Stufe (a) um einen Bestandteil aus der Gruppe Amylose, Dextrine, Gyclodextrine, Maltooligosaccharide und partielle Stärkehydrolysate handelt.

13. Zusammensetzung nach Anspruch 11, dadurch gekennzeichnet, daß die Konzentration an Quercetin in Stufe (a) mindestens 0,01% (Gew./Vol.) beträgt.

14. Zusammensetzung nach Anspruch 11, dadurch gekennzeichnet, daß die Konzentration an α-Glucosylsaccharid in (a) das 0,5- bis 100fache der Konzentration an Quercetin beträgt.

15. Zusammensetzung nach Anspruch 11, dadurch gekennzeichnet, daß es sich beim saccharidübertragenden Enzym in Stufe (a) um einen Bestandteil aus der Gruppe α-Glucosidase (EC 3.2.1.20), Cyclomaltodextrin-glucanotransferase (EC 2.4.1.19) und α-Amylase (EC 3.2.1.1) handelt.

16. Zusammensetzung nach Anspruch 11, dadurch gekennzeichnet, daß die Stufe (a) zusätzlich eine Stufe umfaßt, bei der man die erhaltene Lösung mit einem Gehalt an α-Glycosylquercetin zur Reinigung in Kontakt mit einem synthetischen makroporösen Harz bringt.

17. Zusammensetzung nach Anspruch 10, dadurch gekennzeichnet, daß die pharmazeutische Zusammensetzung dem Empfänger in einer Dosis von 0,001 bis 10,0 g α-Glycosylquerce tin/Tag/Erwachsener verabreicht wird.