DE3920034C3 - Verfahren zum Einführen von DNS - Sequenzen in das Genom von höheren Pflanzen - Google Patents
Verfahren zum Einführen von DNS - Sequenzen in das Genom von höheren PflanzenInfo
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Description
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zum Einführen von beliebigen DNS-Sequenzen, vorzugsweise von
proteinogenen DNS-Sequenzen für die Expression in Pflanzensamen, in das Genom von höheren Pflanzen nach
dem Oberbegriff des Patentanspruches 1.
Ein derartiges gattungsgemäßes Verfahren ist von der Anmelderin bereits vorgeschlagen worden [1]. Dabei
werden in die Expressionskassette die 5'- und 3'-regulativen DNS-Abschnitte eines Samenprotein-Gens einge
baut. Die 5'-regulativen DNS-Abschnitte steuern die entwicklungs- und gewebespezifische Expression; die
3'-regulativen DNS-Abschnitte enthalten die Polyadenylierungs-Signal-Sequenzen für das Transkript.
Polyadenylierungs-Signal-Sequenzen bewirken eine 3'-seitige Polyadenylierung des primären DNS-Trans
kripts. Der polyadenylierte DNS-Abschnitt hat offensichtlich Bedeutung für die Stabilität der mRNS und/oder
für die Häufigkeit der Initiation der Translation [2]. Seine Bedeutung für das Ausschleusen der mRNS aus dem
Kern in das Zytoplasma - einem Ort, an dem Translation initiiert wird, - wird diskutiert [3]; [4]; [5]. Vorausset
zung ist die korrekte Erkennung der Polyadenylierungs-Signal-Sequenzen in der Pflanzenzelle. Das System der
Polyadenylierung ist im Verlauf der Evolution entstanden, so daß mehr oder weniger starke Unterschiede bei
Polyadenylierungs-Signal-Sequenzen der Lebewesen zu beobachten sind. So ist es bekannt, daß pflanzliche
Polyadenylierungs-Signal-Sequenzen von denen in tierischer mRNS abweichen [6] und für eine korrekte und
effektive Expression prokaryotischer Gene in Eukaryoten immer eukaryorische Polyadenylierungs-Signal-Se
quenzen vorgesehen werden müssen [7].
In dem älteren Vorschlag der Anmelderin [1] ist die Benutzung aller oder doch fast aller regulativen DNS-Ab
schnitte vorgesehen - also einschließlich der Polyadenylierungs-Signal-Sequenzen - von dem jeweiligen Gen,
das der Expressionskassette zugrunde liegt. Dadurch kann ein gleichmäßiger Einfluß der Polyadenylierungs-Si
gnal-Sequenzen auf eine erwünscht hohe Expression einer in der Expressionskassette angeordneten beliebigen
DNS-Sequenz nicht gewährleistet werden.
Darüberhinaus ist bisher die Effektivität der Polyadenylierung noch nicht bekannt, welche mit den Polyaden
ylierungs-Signal-Sequenzen der verschiedenen Gene verbunden ist. Demzufolge ist von vornherein nicht sicher
zu bestimmen, welche Polyadenylierungs-Signal-Sequenzen für die durch die 5'-regulativen DNS-Abschnitte
der Expressionskassette verursachte Expression einer darin eingebauten DNS-Sequenz förderlich und welche
hinderlich sind.
Die Erfindung hat das aufgabengemäße Ziel, bei Expressionskassetten der eingangs näher bezeichneten Art
bereits bei ihrer Konstruktion sicherzustellen, daß das Transkript einer eingebauten beliebigen DNS-Sequenz
sicher und mit hoher Effektivität polyadenyliert wird, und hierfür pflanzenspezifische, in ihrer Effektivität
charakterisierte Polyadenylierungs-Signal-Sequenzen zu suchen.
Erfindungsgemäß wird die Aufgabe durch die im kennzeichnenden Teil des Patentanspruches 1 aufgeführten
Merkmale gelöst und durch die in den kennzeichnenden Teilen der Unteransprüche benannten Merkmale
erweitert und ausgestaltet.
Da Polyadenylierungs-Signal-Sequenzen keinen Einfluß auf die entwicklungs- und gewebespezifische Expres
sion haben, müssen sie nicht notwendig aus Genen für Samenproteine stammen. Deshalb können die Polyaden
ylierungs-Signal-Sequenzen des angegebenen Gens 7(g7), die als definierter, 212 Basenpaare langer DNS-Ab
schnitt verfügbar sind [11], ohne weiteres verwendet werden.
Die Erfindung beseitigt die angegebenem Mängel der bekannten Expressionskassette in einfacher Weise. Sie
bietet darüberhinaus den Vorteil, daß eine einfache Lösung für den Ersatz der originalen 3'-regulativen Polya
denylierungs-Signal-Sequenzen gefunden werden konnte.
Die Erfindung wird nachstehend an Hand der Zeichnung und der in den Anlagen 1 bis 4 angegebenen
Nukleotidsequenzen an einem Ausführungsbeispiel näher erläutert. Die einzige Figur der Zeichnung zeigt das
Fließ-Schema der Konstruktion von Expressionskassetten, die auf den 5'-flankierenden Bereichen der Gene für
Legumin und ein unbekanntes Samenprotein (USP) der Ackerbohne sowie auf 3'-flankierenden Bereichen des
Gens 7(g7) der TL-DNS basieren.
Die Wellenlinie und der offene Pfeil (Le-Pr = Legumin-Promotor) kennzeichnen 5'-flankierende Bereiche des
Gens Legumin B4, der schwarze Balken kennzeichnet das Gen der bakteriellen Chloramphenikol-Azetyltransfe
rase, nachfolgend einfach CAT-Gen genannt, weiße Balken die 3'-flankierenden Bereiche des Gens 7(g7) der
TL-DNS. Der schwarze Pfeil kennzeichnet 5'-flankierende Bereiche des USP-Gens. Kodierende Bereiche sind
geschrafft (für Legumin) oder punktiert (für USP) dargestellt. Schwarze Quadrate markieren 5'- und 3'-seitige
Polylinker, schwarze Punkte unikale Restriktionsorte zum Einklonieren von beliebigen DNS-Sequenzen (nach
folgend Fremdgen genannt). Die Bezeichnungen bedeuten: Ba = BamHI; H = HindIII; RI = EcoRI; Bg =
BgIII; P = PstI; B = BalI; C = ClaI; X = XbaI; Sm = SmaI; Amp = Gen der Ampizillin-Resistenz. Die
näherungsweise Größe der Kassette ist in kb = Kilobasen angegeben.
Anlage 1 zeigt die Legumin-Signalpeptid-Kassette Le-Sig.T7. Die Darstellung der Basenfolge erfolgt als Insert
im Plasmid pUC18. Der translatierte Bereich der Kassette ist im Einbuchstaben-Kode ausgewiesen. Der unikale
BamHI-Ort (815-820) dient zum Einligieren von Fremd-DNS, der unikale HindIII-Ort im 3'-Polylinker
(1080-1085) zum Einklonieren der Kassette in den Ti-Vektor pGA471.
Anlage 2 zeigt die USP-Promotor-Kassette USP-Pr.T7-2. Die Darstellung erfolgt als Insert im Plasmid
pUC18. Der unikale BglII-Ort (720-725) dient zum Einligieren von Fremd-DNS, der unikale HindIII-Ort im
3'-Polylinker (1261-1266) zum Einklonieren der Kassette in den Ti-Vektor pGA471.
Anlage 3 zeigt die USP-Promotor-Kassette USP-Pr.T7-1. Die Darstellung erfolgt als Insert im Plasmid
pUC18. Der unikale BglII-Ort (720-725) dient zum Einligieren von Fremd-DNS, der unikale HindIII-Ort im
3'-Polylinker (1032-1037) zum Einklonieren der Kassette in den Ti-Vektor pGA471.
Anlage 4 zeigt die USP-Signalpeptid-Kassette USP-Sig.T7. Die Darstellung erfolgt als Insert im Plasmid
pUC18. Der translatierte Bereich der Kassette ist im Einbuchstaben-Kode ausgewiesen. Der unikale BamHI-Ort
(890-895) dient zum Einligieren von Fremd-DNS, der unikale HindIII-Ort im 3'-Polylinker (1155-1160) zum
Einklonieren der Kassette in den Ti-Vektor pGA471.
Alle im folgenden verwendeten molekularbiologischen Techniken sind bereits bekannt [12]. Auch die Analyse
der kodierenden und regulativen Teile der benutzten Gene für Samenproteine der Ackerbohne ist bereits
vorbeschrieben [1]; [8]; [9]; [10], ebenso wie die des Gens 7(g7) der TL-DNS [11].
Ausgangspunkt sind unter Verwendung des Gens Legumin B4 gewonnene Plasmidscharen mit unterschiedli
cher Länge der Deletion [1]. Daraus wird ein Klon pdelta4'4 ausgewählt und das Ausmaß der Deletion durch
Sequenzanalyse in bekannter Weise bestimmt [13]. Ein weiteres Ausgangsplasmid p12LeCATT7 wird wie folgt
erhalten. Der aus der eingangs genannten Plasmidschar gewonnene Klon pdelta12 wird im unikalen BamHI-Ort
geöffnet, die Enden werden zu blunt ends aufgefüllt. Das CAT-Gen in einem Plasmid pSV2CAT [14] wird als
HindIII-BamHI-DNS-Fragment gewonnen, die Enden werden aufgefüllt und in den geöffneten Klon pdelta12
unter Erhalt eines Plasmids pdelta12CAT ligiert. Aus diesem Plasmid pdelta12CAT wird das NcoI-SalI-DNS-
Fragment (letzterer Ort aufgefüllt) entfernt und durch das NcoI-SnaBI-DNS-Fragment eines Plasmids
pGV1507, einem Abkömmling eines Plasmids pGV1500 [15] ersetzt.
Dieses Plasmid p12LeCATT7 enthält somit pflanzen-spezifische Polyadenylierungs-Signal-Sequenzen des
Transkriptes (T7) des Gens 7(g7) der oktopin-kodierenden TL-DNS des Ti-Plasmids von Agrobacterium tumefa
ciens, welche auf einem 212 Basenpaaren langem ClaI-EcoRV-DNS-Fragment basieren [11]; [7] und die in allen
nachfolgenden Konstruktionen aus diesem Plasmid p12LeCATT7 gewonnen werden.
Aus dem Plasmid p12LeCATT7 wird das BamHI-HindIII-DNS-Fragment gewonnen und in das BamHI-Hin
dIII-geöffnete Plasmid pdelta4'4 unter Erhalt einer Kassette Le-Sig.T7 ligiert (Figur)
In dieser Kassette folgt dem 5'-flankierenden Bereich des Gens Legumin B4 3'-seitig die für das Signalpeptid
[16] kodierende Region sowie ein unikaler BamHI-Ort zum Einklonieren von Fremd-DNS, welcher wiederum
3'-seitig gefolgt wird von T7-Polyadenylierungs-Signalen-Sequenzen. Die Nukleotidfolge der Kassette ist in Anl.
1 wiedergegeben. Diese bereits zur Transformation geeignete Kassette wird im unikalen HindIII-Ort geöffnet
und in den unikalen HindIII-Ort eines binären Ti-Vektors pGA471 [17] kloniert: es entsteht eine Expressionskas
sette für den durch Agrobacterium tumefaciens vermittelten Gentransfer [18]; [19].
Ausgangspunkt sind die Gene für USP sowie das daraus erzeugte Plasmid pUC18/USPP [1], die in der Figur als
"USP-gene" und als pUSP-Pr. bezeichnet sind. Aus dem Plasmid pUSP-Pr. wird ein EcoRI-BglII-DNS-Fragment
gewonnen und in das an den gleichen Stellen geöffnete Plasmid "USP gene" unter Erhalt eines Plasmids pP30.1P
ligiert. Aus diesem wird das HindIII-EcoRI-DNS-Fragment gewonnen (der HindIII-Ort wurde aufgefüllt) und in
das bei BamHI-EcoRI geöffnete Plasmid p12LeCATT7 (der BamHI-Ort wurde aufgefüllt) zum Erhalt einer
Kassette USP-Pr.T7-2 ligiert (Figur und Anl. 2). Aus dem Plasmid p12LeCATT7 wird ferner ein BamHI-HindIII-
DNS-Fragment gewonnen und in das BamHI-Hind-III-geöffnete Plasmid pP30.1P unter Erhalt einer Kassette
USP-Pr.T7-1 ligiert (Figur und Anl. 3).
Die Kassetten USP-Pr.T7-1 und USP-Pr.T7-2 bestehen demzufolge 5'-seitig aus den regulativen flankierenden
Bereichen des USP-Gens, gefolgt von einem unikalen BglII-Ort zum Einklonieren von Fremd-DNS, welcher
3'-seitig von T7-Polyadenylierungs-Signal-Sequenzen flankiert wird. Diese bereits zur Transformation geeigne
ten Kassetten werden am unikalen HindIII-Ort geöffnet und in den unikalen HindIII-Ort des Ti-Vektors
pGA471 kloniert, wodurch Expressionskassetten für den durch Agrobacterium tumefaciens vermittelten Gen
transfer erhalten werden.
Aus dem Plasmid "USP gene" wird ein XbaI-BalI-DNS-Fragment (der XbaI-Ort ist ausgefüllt) gewonnen und
in das SmaI-geöffnete Plasmid pUC18 unter Erhalt eines Plasmids pUSP-Sig. ligiert. In dieses BamI-HindIII-ge
öffnete Plasmid wird das BamHI-HindIII-DNS-Fragment des Plasmids p12LeCATT7 unter Erhalt einer Kasset
te USP-Sig.T7 ligiert (Figur und Anl. 4).
In der Kassette USP-Sig.T7 folgt dem 5'-flankierenden Bereich des USP-Gens die für das Signalpeptid [16]
und die ersten etwa 5 N-terminalen Aminosäuren des USP kodierende Region, gefolgt von einem unikalen
BamHI-Ort zum Einklonieren von Fremd-DNS, welcher wiederum 3'-seitig von T7-Polyadenlierungs-Signal-
Sequenzen gefolgt wird. Diese bereits zur Transformation geeignete Kassette wird am unikalen HindIII-Ort
geöffnet und in den unikalen HindIII-Ort des Ti-Vektors kloniert, womit eine Expressionskassette für den durch
Agrobacterium tumefaciens vermittelten Gentransfer erhalten wird.
Aus dem CAT Gen im Plasmid pSV2CAT wird das 785 Basenpaare große HindIII-SauIIIA-DNS-Fragment
gew1.onnen (beide Orte werden aufgefüllt) und in die bei BglII geöffnete (Orte werden aufgefüllt) Expressionskas
sette USP-Pr.T7-1 ligiert. Das HindIII-SauIIIA-DNS-Fragment trägt den gesamten kodierenden Bereich der
CAT-Gene, der somit 5'-seitig unter der Regulationskontrolle des USP-Promotors steht und 3'-seitig von
pflanzen-spezifischen Polyadenylierungs-Signal-Sequenzen des Gens 7(g7) der TL-DNS flankiert wird.
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Claims (12)
1. Verfahren zum Einführen von beliebigen DNS-Sequenzen,
vorzugsweise von proteinogenen DNS-Sequenzen für die Expression in Pflanzensamen, in das Genom von
höheren Pflanzen,
wobei
zunächst ein vollständiges, einen Signalpeptid kodierenden Abschnitt enthaltendes, beispielsweise pflanzensamenprotein spezifisches Gen isoliert wird, dessen proteinkodierende und regulative DNS-Abschnitte danach durch Sequenzanalyse ermittelt werden,
die proteinkodierenden DNS-Abschnitte ausschließlich der Abschnitte für die Signalpeptidsequenz und für die durch die Signalpeptidase erkennbare Proteinstruktur aus dem in einem Vektorplasmid befindlichen Gen herausgeschnitten werden,
die regulativen DNS-Abschnitte vollständig erhalten bleiben und unter Herbeiführung eines unikalen Restriktionsortes, der im Wirkungsbereich der regulativen DNS- Abschnitte liegt, zu einer Deletionsmutante vereinigt werden,
die Deletionsmutante aus dem Vektorplasmid isoliert und in einen Pflanzen-Transformations-Vektor so ligiert wird, daß der unikale Restriktionsort erhalten bleibt und eine Expressionskassette entsteht, in welcher der Pflanzen-Transformations-Vektor die Transformation dieser gesamten Expressionskassette übernimmt,
in den unikalen Restriktionsort der Expressionskassette eine beliebige DNS-Sequenz ligiert und
die DNS-Sequenz in Zellen von höheren Pflanzen exprimiert wird,
dadurch gekennzeichnet, daß
als pflanzensamenproteinspezifisches Gen das USP- bzw. das Legumingen eingesetzt wird,
ein weiteres vollständiges Gen sich auf einen weiteren Vektorplasmid befindet, wie das erste flankiert von DNS- Abschnitten mit Polylinkern,
die 5'-regulativen und die proteinkodierenden DNS-Abschnitte des USP- bzw. des Legumingens und die 3'-regulativen des zweiten Gens aus ihrem jeweiligen Vektorplasmid gewonnen und unter Bildung des unikalen Restriktionsortes so in ein Vektorplasmid ligiert werden, daß eine für die Transformation von Pflanzen geeignete Kassette mit den Abschnitten 5'-Polylinker - 5'- regulativer DNS-Abschnitt - verbleibender proteinkodierender DNS-Abschnitt des USP- bzw. des Legumingens - unikaler Restriktionsort - 3'-regulativer DNS-Abschnitt - 3'-Polylinker in dieser Reihenfolge entsteht und
die Kassette unter Benutzung der 3'- und/oder 5'-Polylinker isoliert und in den Pflanzen-Transformations-Vektor ligiert wird.
wobei
zunächst ein vollständiges, einen Signalpeptid kodierenden Abschnitt enthaltendes, beispielsweise pflanzensamenprotein spezifisches Gen isoliert wird, dessen proteinkodierende und regulative DNS-Abschnitte danach durch Sequenzanalyse ermittelt werden,
die proteinkodierenden DNS-Abschnitte ausschließlich der Abschnitte für die Signalpeptidsequenz und für die durch die Signalpeptidase erkennbare Proteinstruktur aus dem in einem Vektorplasmid befindlichen Gen herausgeschnitten werden,
die regulativen DNS-Abschnitte vollständig erhalten bleiben und unter Herbeiführung eines unikalen Restriktionsortes, der im Wirkungsbereich der regulativen DNS- Abschnitte liegt, zu einer Deletionsmutante vereinigt werden,
die Deletionsmutante aus dem Vektorplasmid isoliert und in einen Pflanzen-Transformations-Vektor so ligiert wird, daß der unikale Restriktionsort erhalten bleibt und eine Expressionskassette entsteht, in welcher der Pflanzen-Transformations-Vektor die Transformation dieser gesamten Expressionskassette übernimmt,
in den unikalen Restriktionsort der Expressionskassette eine beliebige DNS-Sequenz ligiert und
die DNS-Sequenz in Zellen von höheren Pflanzen exprimiert wird,
dadurch gekennzeichnet, daß
als pflanzensamenproteinspezifisches Gen das USP- bzw. das Legumingen eingesetzt wird,
ein weiteres vollständiges Gen sich auf einen weiteren Vektorplasmid befindet, wie das erste flankiert von DNS- Abschnitten mit Polylinkern,
die 5'-regulativen und die proteinkodierenden DNS-Abschnitte des USP- bzw. des Legumingens und die 3'-regulativen des zweiten Gens aus ihrem jeweiligen Vektorplasmid gewonnen und unter Bildung des unikalen Restriktionsortes so in ein Vektorplasmid ligiert werden, daß eine für die Transformation von Pflanzen geeignete Kassette mit den Abschnitten 5'-Polylinker - 5'- regulativer DNS-Abschnitt - verbleibender proteinkodierender DNS-Abschnitt des USP- bzw. des Legumingens - unikaler Restriktionsort - 3'-regulativer DNS-Abschnitt - 3'-Polylinker in dieser Reihenfolge entsteht und
die Kassette unter Benutzung der 3'- und/oder 5'-Polylinker isoliert und in den Pflanzen-Transformations-Vektor ligiert wird.
2. Verfahren nach Ansprüch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die
Gene für das in Pflanzensamen gespeicherte Protein Legumin
kodieren und aus einer Genbank der Ackerbohne selektiert werden.
3. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die
Gene für das in Pflanzensamen gespeicherte Protein USP
(unbekanntes Samenprotein) kodieren und aus einer Genbank der
Ackerbohne selektiert werden.
4. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß aus
einer cDNS-Bank der Ackerbohne Klone mit spezifischen Inserts
von Legumin- oder USP-DNS selektiert und durch Sequenzanalyse
deren cDNS-Nukleotidsequenzen ermittelt werden.
5. Verfahren nach Anspruch 1 bis 4, dadurch gekennzeichnet, daß
die genomische DNS-Sequenz eines Proteins mit der zugehörigen
cDNS-Nukleotidsequenz verglichen und daraus bestimmt wird, wo
sich die proteinkodierenden, die regulativen DNS-Abschnitte und
die Intronsequenzen befinden.
6. Verfahren nach Anspruch 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, daß
geeignete unikale Restriktionsorte innerhalb der
proteinkodierenden DNS-Abschnitte des USP-
bzw. Legumingens dazu verwendet werden, den 3-seitig davon
gelegenen DNS-Abschnitt bis ausschließlich 3'-seitigem
Polylinker zu entfernen und die Enden durch Linker unter Bildung
des für die Einligierung der beliebigen DNS-Sequenz vorgesehenen
unikalen Restriktionsortes zu einer Deletionsmutante zu re
ligieren.
7. Verfahren nach Anspruch 1 bis 6, dadurch gekennzeichnet, daß
in der Deletionsmutante die Signal-Sequenzen für den intra- und
extrazellulären Transport der Proteine belassen werden.
8. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß ein in
einem Vektorplasmid befindlicher DNS-Abschnitt eines Gens 7(g7)
der oktopin-kodierenden TL-DNS des Ti-Plasmides von
Agrobacterium tumefaciens mit pflanzen-spezifischen
Polyadenylierungs-Signal-Sequenzen des Transkripts über zwei
geeignete Restriktionsorte gewonnen wird.
9. Verfahren nach Anspruch 1 und 7-8, dadurch gekennzeichnet,
daß der DNS-Abschnitt mit den pflanzen-spezifischen
Polyadenylierungs-Signal-Sequenzen in einem Restriktionsort des
3'-Polylinkers der Deletionsmutante unter Beibehaltung des nun
5'-seitig von den Poladenylierungs-Signal-Sequenzen befindlichen
unikalen Restriktionsortes ligiert wird.
10. Verfahren nach Anspruch 1 und 7-9, dadurch
gekennzeichnet, daß die Kassette durch einen Restriktionsort im
5'-Polylinker und/oder 3'-Polylinker linearisiert und in den
kompatibel geöffneten Pflanzen-Transformations-Vektor so ligiert
wird, daß der unikale Restriktionsort zum Einklonieren einer
beliebigen DNS-Sequenz erhalten bleibt.
11. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß der
proteinkodierende DNS-Abschnitt oder Teile davon aus einem auf
einem Vektorplasmid befindlichen Gen mittels Restriktasen
gewonnen wird.
12. Verfahren nach Anspruch 1 und 11, dadurch gekennzeichnet,
daß der proteinkodierende DNS-Abschnitt oder Teile davon in den
unikalen Restriktionsort der Expressionskassette im Pflanzen-
Transformations-Vektor ligiert wird.
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|---|---|---|---|
| DE3943825A DE3943825C2 (de) | 1988-09-19 | 1989-06-20 | Verfahren zum Einführen von DNS-Sequenzen in das Genom von höheren Pflanzen |
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| DE3943825A DE3943825C2 (de) | 1988-09-19 | 1989-06-20 | Verfahren zum Einführen von DNS-Sequenzen in das Genom von höheren Pflanzen |
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| DE3920034A1 DE3920034A1 (de) | 1990-05-31 |
| DE3920034C2 DE3920034C2 (de) | 1993-10-14 |
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| DE19893920034 Expired - Fee Related DE3920034C3 (de) | 1988-09-19 | 1989-06-20 | Verfahren zum Einführen von DNS - Sequenzen in das Genom von höheren Pflanzen |
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| WO1997029200A1 (de) * | 1996-02-08 | 1997-08-14 | Institut für Pflanzengenetik und Kulturpflanzenforschung | Kassetten zur expression von lagerstabilen proteinen in pflanzen |
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| WO1985004899A1 (en) * | 1984-04-19 | 1985-11-07 | Agracetus | Methods and vectors for transformation of plant cells |
| EP0255378A2 (de) * | 1986-07-31 | 1988-02-03 | Calgene, Inc. | Samenspezifische Transkriptionsregulierung |
| DE3702497A1 (de) * | 1986-01-28 | 1988-04-21 | Danske Sukkerfab | Verfahren zur expression von genen in pflanzen, pflanzenteilen und pflanzenzellen, dna-fragmente, plasmide und transformierte mikroorganismen zur durchfuehrung des verfahrens und ihre verwendung sowie die transformierten pflanzen, pflanzenteile u. pflanzenzellen |
| DD263081A1 (de) * | 1987-07-20 | 1988-12-21 | Akad Wissenschaften Ddr | Verfahren zum einfuehren von dns-sequenzen in das genom von hoeheren pflanzen |
| EP0189707B1 (de) * | 1984-12-28 | 1993-08-25 | Plant Genetic Systems N.V. | Rekombinante DNA, die in pflanzliche Zellen eingebracht werden kann |
-
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- 1989-06-20 DE DE19893920034 patent/DE3920034C3/de not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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| Lexikon der Gentechnologie: Springer Verl., 1991, S. 205 * |
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| Mendecki,J. et al., Biochemistry 11(1972),S.792ff * |
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| Velten,J., Schell,J., Nucl. Acids Res. 13(1985), S.6981-6998 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE3920034C2 (de) | 1993-10-14 |
| DE3920034A1 (de) | 1990-05-31 |
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