DE3884145T2

DE3884145T2 - 4h-3,1-benzoxazin-4-on-verbindungen und serin protease-inhibierende arzneimittel.

Info

Publication number: DE3884145T2
Application number: DE88905224T
Authority: DE
Inventors: Katsuhiko Fujii; Masayuki Kokubo; Junichi Oshida; Koji Tomimori; Yasuhide Uejima
Original assignee: Teijin Ltd
Current assignee: Teijin Ltd
Priority date: 1987-06-09
Filing date: 1988-06-09
Publication date: 1994-01-13
Anticipated expiration: 2008-06-10
Also published as: DE3884145D1; KR910001131B1; EP0317645A1; AU1937788A; KR890701571A; US4980287A; DK57489A; AU616420B2; WO1988009790A1; EP0317645B1; EP0317645A4; CA1309556C; DK57489D0

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft 4H-3,1-Benzoxazin-4-on-Verbindungen und pharmazeutische Zusammensetzungen, welche diese als Serin-Protease-inhibierenden Wirkstoff enthalten.
Im einzelnen betrifft die vorliegende Erfindung 4H-3,1-Benzoxazin-4-on-Verbindungen, welche zur Hemmung der durch die Einwirkung von Proteasen, insbesondere Elastase, auf Säugetierproteine wie Elastin verursachte Degeneration, Zerstörung oder Entzündung von Gewebe von Nutzen sind, sowie pharmazeutische Zusammensetzungen, welche dieselben als Serin-Protease- und insbesondere Elastase-inhibierenden Wirkstoff enthalten.

ALLGEMEINER STAND DER TECHNIK

Elastin ist ein faseriges Protein, welches einen Hauptbestandteil der elastischen Fasern im Bindegewebe bildet, eine gummiartige Elastizität aufweist und in groben Mengen in den Lungen, Bronchien und Hauptschlagadern vorkommt.
Elastase umfaßt eine Gruppe von zur Hydrolisierung von Elastin fähigen Proteasen und wird in Bauchspeicheldrüsen und polymorphonuklearen Leukozyten von Säugetieren oder durch eine bestimmte Art von Mikroorganismen erzeugt. Die in den Leukozyten erzeugte Elastase spielt eine wichtige Rolle in der Verdauung der phagozytierten Bakterien, doch wenn sie aus der Zelle nach außen gelengt, greift die Elastese des Elastin im Gewebe an und verursacht Degeneration, Zerstörung oder Entzündung des Gewebes.
Diese übermäßige Verdauung von Elastin durch die Elastase wird als die Ursache von Lungenemphysem, Atemnot (Respiratory Distress Syndrome) bei Erwachsenen, Lungenfibrose, Bronchitis, Lungenentzündung, rheumatischer Arthritis, Arteriosklerose, Sepsis, Schock, Entzündung der Bauchspeicheldrüse oder der Nieren, und gewissen Arten von Hautkrankheiten angesehen.
Folglich wird ein Elastase-Inhibitor als ein nützliches Mittel zur Heilung oder zur Vorbeugung gegen die vorstehend genannten Krankheiten betrachtet.
Eine Gruppe von 4H-3,1-Benzoxazin-4-on-Verbindungen mit einer Grundstruktur gemäß der chemischen Formel
umfaßt Substanzen, welche als Serin-Protease-inhibierend bekannt sind.
Beispielsweise berichteten Teshima et al. (J. BIOL. CHEM., Band 257, Seiten 5085 bis 5091 (1982)) von verschiedenen Arten von 2-Alkyl-4H-3,1-benzoxazin-4-on-Verbindungen, und Hedstrom et al. (BIOCHEMISTRY, Band 23, Seiten 1753 bis 1759) (1984)) berichteten über 2-Ethoxy-4H-3,1-benzoxazin-4-on. Außerdem berichteten Spenser et al. (BIOCHEM. BIOPHYS. RES. COMM., Band 140, Seiten 923 bis 933 (1986)), daß mit einer 5-Methylgruppe substituiertes 2-Alkyl-4H-3,1-benzoxazin-4-on eine starke Elastase-inhibierende Wirkung aufweist.
Ferner offenbart die für Syntex Inc. am 2. September 1985 veröffentlichte Offenlegungsschrift der japanischen Patentanmeldung Nr. 60-169467 2-Amino-Derivate von 4H-3,1-benzoxazin-4-on, und die für Syntex Inc. am 9. Februar 1987 veröffentlichte Offenlegungsschrift der japanischen Patentanmeldung Nr. 62-30770 offenbart 2-Oxy-Derivate von 4H-3,1-benzoxazin-4-on.
Bekanntlich weisen die meisten der vorstehend genannten Verbindungen eine höhere inhibierende Wirkung gegen Chymotrypsin als gegen Elastase auf.

OFFENBARUNG DER ERFINDUNG

Eine Aufgabe der vorliegenden Erfindung liegt in der Schaffung von 4H-3,,1-Benzoxazin-4-on-Verbindungen mit starker inhibierender Wirkung gegen Serin-Proteasen sowie von pharmazeutischen Zusammensetzungen, welche dieselben als Serin-Proteasen-inhibierenden Wirkstoff enthalten.
Eine weitere Aufgabe der vorliegenden Erfindung liegt in der Schaffung von 4H-3,1-Benzoxazin-4-on-Verbindungen mit starker inhibierender Wirkung, die unter den Serin-Proteasen selektiv gegen die Elastase wirkt sowie von pharmazeutischen Zusammensetzungen, welche dieselben als Elastase-inhibierenden Wirkstoff enthalten.
Die vorstehend genannten Aufgaben werden durch die Verbindungen der vorliegenden Erfindung gelöst.
Die 4H-3,1-Benzoxazin-4-on-Verbindungen der vorliegenden Erfindung sind von der Formel (I) umfaßt:
worin R einen Rest repräsentiert, der aus der aus einem Wasserstoffatom und Alkylradikalen mit einem bis 6 Kohlenstoffatomen gebildeten Gruppe ausgewählt ist,
worin A einen Rest repräsentiert, der aus Aminosäureresten von optischen D- und L-Isomeren und razemischen Gemischen von Alanin, Asparagin, Asparaginsäure, Cystein, Cystin, Glutaminsäure, Glutamin, Glycin, Histidin, Isoleucin, Leucin, Lysin, Methionin, Phenylalanin, Prolin, Serin, Threonin, Tryptophan, Tyrosin, Valin, Homoserin, Homocystein, Hydroxyprolin, Ornithin, Thyroxin, Norvalin, Norleucin, Phenylglycin, β-Alanin und γ-Aminobuttersäure sowie aus Peptiden mit 2 bis 3 Resten der vorgenannten Aminosäurereste ausgewählt ist, wobei die Aminosäurereste gegebenenfalls eine ihrer Seitenketten durch eine Schutzgruppe geschützt haben,
worin X einen Rest repräsentiert, der aus der aus Alkylradikalen mit 1 bis 8 Kohlenstoffatomen, Fluoroalkylradikalen mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen und Radikalen der Formeln OR¹ und NHR¹ bestehenden Gruppe ausgewählt ist, wobei R¹ ein Alkylradikal mit einem bis 8 Kohlenstoffatomen repräsentiert,
und worin Y eine Schutzgruppe für ein Aminoradikal repräsentiert;
sowie Salze hiervon.
Die pharmazeutische Zusammensetzung der vorliegenden Erfindung zum Inhibieren von Serin-Proteasen umfaßt eine Mischung aus einer pharmazeutisch wirksamen Menge einer 4H-3,1-Benzoxazin- 4-on-Verbindung nach der vorstehend genannten Formel (I) oder einem pharmazeutisch verträglichen, nicht toxischen Salz hiervon und einem pharmazeutisch verträglichen Trägermaterial.

DIE BESTE METHODE ZUR AUSFÜHRUNG DER ERFINDUNG

In der Formel (I) besitzen die durch R repräsentierten Alkylradikale 1 bis 6 Kohlenstoffatome. Die Alkylradikale sind aus Methyl-, Ethyl-, Propyl-, Butyl-, Pentyl- und Hexylradikalen und isomeren Radikalen der vorstehend genannten Radikale ausgewählt.
Im allgemeinen ist das in der Formel (I) durch R repräsentierte Alkylradikal vorzugsweise das Methyl- oder Ethylradikal.
In der Formel (I) werden die Aminosäurereste bzw. die in den durch A repräsentierten Peptiden enthaltenen Aminosäurereste aus den Resten von optischen D- und L-Isomeren und razemischen Gemischen von Alanin, Asparagin, Asparaginsäure, Cystein, Cystin, Glutaminsäure, Glutamin, Glycin, Histidin, Isoleucin, Leucin, Lysin, Methionin, Phenylalanin, Prolin, Serin, Threonin, Tryptophan, Tyrosin, Valin, Homoserin, Homocystein, Hydroxyprolin, Ornithin, Thyroxin, Norvalin, Norleucin, Phenylglycin, β-Alanin und γ-Aminobuttersäure ausgewählt.
Die Aminosäure wird vorzugsweise aus L-Alanin, Glycin, L-Isoleucin, L-Leucin, L-Phenylalanin, L-Prolin, L-Valin, L-Norvalin, L-Norleucin, L-Phenylglycin, L-Lysin mit einem durch ein Carbobenzoxyradikal geschützten &epsi;-Aminoradikal, L-Asparaginsäure mit einem in Form eines Benzylesters geschützten β-Carboxylradikal und L-Glutaminsäure mit einem in Form eines Benzylesters geschützten γ-Carboxylradikal gewählt.
In der Formel (I) können die durch A repräsentierten Seitenketten der Aminosäurereste von Schutzgruppen geschützt werden. Die verschiedenen Schutzgruppen für die Seitenketten (Amino-, Carboxyl-, Guanidino-, Imidazolyl-, Mercapto- oder Hydroxylradikale) der durch (A) repräsentierten Aminosäurereste sowie die verschiedenen Schutzgruppen der in der Formel (I) durch Y repräsentierten Aminoradikale sind aus dem Stand der Technik bekannt. Beispielsweise sind als Schutzgruppen für das Aminoradikal die Carbobenzoxy-, Succinyl-, Methoxysuccinyl-, Acetyl-, Trifluoroacetyl-, tert-Butoxycarbonyl-, Isonicotinylhydroxycarbonyl- und Tosylradikale bekannt.
Außerdem sind als Schutzgruppen für das Carboxylradikal beispielsweise die Benzylester- und 4-Picolylesterradikale bekannt.
Ferner sind als Schutzgruppen für die Guanidino- und Imidazolylradikale die Carbobenzoxy- und Tosylradikale bekannt.
Desweiteren sind das S-Benzylradikal als Schutzgruppe für das Mercaptoradikal und das O-Benzylradikal als Schutzgruppe für das Hydroxylradikal bekannt.
Die für die vorliegende Erfindung verwendbaren Schutzgruppen sind nicht auf die vorstehend genannten Radikale beschränkt.
In der Formel (I) sind die Schutzgruppen für das durch Y repräsentierte Aminoradikal vorzugsweise aus den Carbobenzoxy-, tert-Butoxycarbonyl und Acetylradikalen gewählt.
In der Formel (I) hat das durch X repräsentierte Alkylradikal 1 bis 8 Kohlenstoffatome und ist aus den Methyl-, Ethyl-, Propyl-, Butyl-, Isobutyl-, Pentyl-, Hexyl-, Heptyl- und Octylradikalen sowie isomeren Radikalen der vorstehend genannten Alkylradikalen gewählt.
In der Formel (I) besitzt das durch X repräsentierte Fluoroalkylradikal 1 bis 4 Kohlenstoffatome und ist beispielsweise ein Trifluoromethylradikal.
In dem durch X in der Formel (I) repräsentierten OR¹-Radikal hat das R¹-Radikal 1 bis 8 Kohlenstoffatome. Das OR¹-Radikal ist aus den Methoxy-, Ethoxy-, Propoxy-, Butoxy-, Pentoxy-, Hexaoxy-, Heptoxy- und Octoxyradikalen sowie den isomeren Radikalen der vorstehend genannten Radikale gewählt.
In dem durch X in der Formel (I) repräsentierten NHR¹-Radikal ist das R¹-Radikal dasselbe wie oben genannt. Das NHR-Radikal ist aus den Monomethylamino-, Monoethylamino-, Monopropylamino-, Monoisopropylamino-, Monobutylamino-, Monopentylamino-, Monohexylamino-, Monoheptylamino und Monooctylaminoradikalen sowie den isomeren Radikalen der vorstehend genannten Radikale gewählt.
Die Salze, insbesondere pharmazeutisch verträgliche Salze, der Verbindungen nach der Formel (I) umfassen Salze von organischen und anorganischen Basen, welche an die in Seitenketten der Aminosäurereste oder Aminosäureresten in Peptiden der Verbindung nach der Formel (I) enthaltenen Carboxylradikale gebunden sind, und Salze von organischen und anorganischen Säuren, welche an die in den vorstehend genannten Seitenketten enthaltenen Amino-, Guanidino- oder Imidazolylradikale gebunden sind.
Die von den anorganischen Basen abgeleiteten Salze umfassen Ammonium-, Kalium-, Natrium-, Calcium- und Magnesiumsalze. Die von den organischen Basen abgeleiteten Salze umfassen Diethylamin-, Isopropylamin-, Ethanolamin- und Piperidinsalze. Die Säure-Additions-Salze umfassen Salze, welche von anorganischen Säuren, beispielsweise Salzsäure, Bromwasserstoffsäure, Schwefelsäure, Salpetersäure und Phosphorsäure, abgeleitet sind, und Salze, welche von organischen Säuren, beispielsweise Essigsäure, Propionsäure, Glycolsäure, Acetylameisensäure, Oxalsäure, Äpfelsäure, Malonsäure, Bernsteinsäure, Maleinsäure, Fumarsäure, Weinsäure, Zitronensäure, Benzoesäure, Zimtsäure, Methansulfonsäure, Ethansulfonsäure, p-Toluolsulfonsäure und Salicylsäure, abgeleitet sind.
Die 4H-3,1-Benzoxazin-4-on-Verbindungen nach der Formel (I) der vorliegenden Erfindung können über den folgenden Syntheseweg künstlich hergestellt werden. (X¹ ist ein Alkyl- oder -OR¹-Radikal) (X² ist ein Fluoroalkylradikal) X³-N=C=O (X³ ist ein Alkylradikal) Reaktion (a) (X ist ein Alkyl-, Fluoroalkyl-, OR¹- oder NHR¹-Radikal) Reaktion
Wenn bei der Reaktion (a) eine Verbindung nach der Formel (I), worin X ein Alkylradikal repräsentiert, hergestellt wird, reagiert eine substituierte oder nichtsubstituierte 4-Nitroanthranilsäure nach der Formel (A) mit einem bestimmten aliphatischen Carboxylsäurechlorid (ClCOX¹), wodurch eine N-Acyl-4- nitroanthranilsäure nach der Formel (B) hergestellt wird.
Wenn bei der Reaktion (a) eine Verbindung nach der Formel (I), worin X ein Fluoroalkylradikal repräsentiert, hergestellt wird, reagiert eine substituierte oder nichtsubstituierte 4-Nitroanthranilsäure nach der Formel (A) mit einem aliphatischen Fluorkohlenwasserstoffsäure-Anhydrid gemäß der Formel:
(X² - - O - - X²)
zur Herstellung einer Verbindung nach der Formel (B).
Die vorstehend genannten Reaktionsabläufe wurden in Teshima et al. (J. BIOL. CHEM., Band 257, Seiten 5085 bis 5090 (1982)) beschrieben.
Wenn bei der Reaktion (a) eine Verbindung nach der Formel (I), worin X ein OR¹-Radikal und R¹ ein Alkylradikal repräsentiert, hergestellt wird, reagiert eine substituierte oder nichtsubstituierte 4-Nitroanthranilsäure nach der Formel (A) mit einem Chlorkohlensäureester (Cl-CO-OR¹), wodurch eine Carbamatverbindung nach der Formel (B) hergestellt wird. Dieser Reaktionsablauf wurde in Hedstrom et al. (BIOCHEMISTRY, Band 23, Seiten 1753 bis 1759 (1984)) bzw. von Blank et al. (J. CHEM. ENG. DAT., Band 13, Seiten 577 bis 579 (1968)) beschrieben.
Wenn bei der Reaktion (a) eine Verbindung nach der Formel (I), worin X ein NHR¹-Radikal repräsentiert, hergestellt wird, reagiert eine substituierte oder nichtsubstituierte 4-Nitroanthranilsäure nach der Formel (A) mit einem bestimmten Alkylisocyanat (X³-N=C=O), wodurch eine 2-(3-Alkylureido)-4-nitroanthranilsäure nach der Formel (B) hergestellt wird. Dieser Reaktionablauf wurde in Papadopoulus et al. (J. HETEROCYCLIC CHEM., Band 19, Seiten 269 bis 272 (1982)) beschrieben.
Falls erforderlich werden bei der Reaktion (b) die substituierten oder nichtsubstituierten 4-Nitroanthranilsäurederivate nach der Formel (B) durch ein bekanntes Verfahren in einen Methylester der 4-Nitroanthranilsäurederivate nach der Formel (C) umgewandelt. Die Reaktion (b) kann durch Behandeln der Verbindung nach der Formel (B) mit Diazomethan in einem inerten organischen Lösemittel bei einer Temperatur von ca. 0º C durchgeführt werden.
Bei der Reaktion (c) wird das substituierte oder nichtsubstituierte 4-Nitroanthranilsäurederivat nach der Formel (C) durch ein herkömmliches Verfahren in ein substituiertes oder nichtsubstituiertes 4-Aminoanthranilsäurederivat nach der Formel (D) umgewandelt. Die Reaktion (c) wird vorzugsweise durch katalytisches Hydrieren (katalytische Reduktion mit Wasserstoffgas) in Gegenwart eines Palladium-Kohlenstoff- Katalysators durchgeführt.
Die Verbindung nach der Formel (D) kann durch die Reaktionen (d) und (e) oder durch die Reaktionen (d') und (e') in eine 4H-3,1-Benzoxazin-4-on-Verbindung nach der Formel (I) umgewandelt werden.
Wenn bei der Reaktion (d) in der Formel (D) X ein NHR¹-Radikal repräsentiert, wird das Anthranilsäurederivat der Formel mit einem Agens zum Dehydrieren und Kondensieren, zum Beispiel H&sub2;SO&sub4;, cyclisiert, wodurch eine 7-Amino-4H-3,1-Benzoxazin-4-on- Verbindung nach der Formel (E) hergestellt wird. Bei der Reaktion (d) wird die Verbindung nach der Formel (D) vorzugsweise in einer konzentrierten Schwefelsäure bei Raumtemperatur behandelt, um die Verbindung der Formel (E) herzustellen.
Danach wird bei der Reaktion (e) das Aminoradikal der Verbindung nach der Formel (E) mit einem Carboxylradikal eines aus Aminosäure oder Peptid mit geschütztem(n) Aminoradikal(en) bestehenden Reaktionsstoffs (Y-A-OH) kondensiert, um eine 7-(N-A-Y)-Amino-4H-3,1-Benzoxazin-4-on-Verbindung nach der Formel (I) zu schaffen.
Die vorstehend genannte Kondensationsreaktion (e) kann durch verschiedene, zur Bildung von Peptidbindungen in einer Peptidsynthese bekannte Verfahren durchgeführt werden (Nobuo Izumiya et al., "BASIS AND EXPERIMENT OF PEPTIDE SYNTHESIS", 1985 von Maruzen veröffentlicht).
Bei dieser Kondensationsreaktion (e) wird vorzugsweise das Carboxylradikal der Aminosäure oder des Peptids mit geschütztem(n) Aminoradikal(en) aktiviert und dann mit der bei der Reaktion (d) hergestellten substituierten oder nichtsubstituierten 4H-3,1Benzoxazin-4-on-Verbindung nach der Formel (E) kondensiert. In einem bevorzugteren Verfahren für eine Kondensationsreaktion wird ein gemischtes Säureanhydrid durch Reagierenlassen einer Aminosäure oder eines Peptids mit geschütztem(n) Aminoradikal(en) mit einem Monoalkylchlorkohlensäureester hergestellt, und dann wird das gemischte Säureanhydrid mit der Verbindung nach der Formel (E) umgesetzt. Ein zur Verwendung für das vorstehend genannte Verfahren bevorzugter Monoalkylchlorkohlensäureester ist Isobutylchlorformiat (IBCF).
Wenn in der Formel (I) A ein Peptid mit 2 oder 3 Aminosäureresten repräsentiert, ist es möglich, dar nach Kondensieren des Aminosäurerests des Reaktionsstoffs Y-A-OH mit geschützten Aminoradikalen mit der Verbindung nach der Formel (E) in der Reaktion (e) wenigstens eine Schutzgruppe durch ein herkömmliches Verfahren selektiv von den geschützten Aminoradikalen entfernt und das freigesetzte freie Aminoradikal der erhaltenen Verbindung noch einmal mit einem Carboxylradikal einer Aminosäure mit geschütztem(en) Aminoradikal(en) kondensiert wird.
Durch Wiederholen der vorstehend genannten Verfahren kann die Peptidkette verlängert werden.
Eine bevorzugte Schutzgruppe für das Aminoradikal ist ein Carbobenzoxyradikal. Das Entfernen des Carbobenzoxyradikals kann durch eine katalytische Reduktion mit Wasserstoffgas in Gegenwart eines Palladium-Kohlenstoff-Katalysators bewirkt werden. Wird jedoch dieses Verfahren des katalytischen Hydrierens auf Lysin mit einem durch ein Carbobenzoxyradikal geschützten &epsi;-Aminoradikal, Asparaginsäure mit einem in Form eines Benzylesters geschützten β-Carboxylradikal und Glutaminsäure mit einem in Form eines Benzylesters hiervon geschützten γ-Carboxylradikal angewandt, wird dadurch das die Seitenkette schützende Radikal unerwünschterweise entfernt. Daher ist das Verfahren des katalytischen Hydrierens nicht für die vorstehend genannten Aminosäuren geeignet.
Eine andere bevorzugte Schutzgruppe für das Aminoradikal ist ein tert-Butoxycarbonylradikal. Diese Schutzgruppe kann durch Behandeln mit Trifluoressigsäure selektiv entfernt werden.
Wenn in der Formel (D) X ein Alkylradikal, ein Fluoroalkylradikal oder ein -OR¹-Radikal repräsentiert, wird in der Reaktion (d') die substituierte oder nichtsubstituierte 4-Aminoanthranilsäureverbindung nach der Formel (D) in eine Verbindung nach der Formel (E') umgewandelt, indem ein Carboxylradikal einer Aminosäure oder eines Peptids (Y-A-OH), welche ein geschütztes (geschützte) Aminoradikal(e) aufweist, mit einem Aminoradikal der Verbindung nach der Formel (D) kondensiert wird. Diese Kondensationsreaktion (d') kann auf dieselbe Weise wie bei der Reaktion (e) bewirkt werden.
Als nächstes wird bei der Reaktion (e') die Anthranilsäureverbindung der Formel (E') mit einem Agens zum Dehydrieren und Kondensieren cyclisiert, um die Endverbindung nach der Formel (I) herzustellen. Bei der Reaktion (e') besteht das Agens zum Dehydrieren und Kondensieren vorzugsweise aus N,N'-Dicyclohexylcarbodiimid (DDC).
Eine Ausgangsverbindung nach der Formel (A), worin R ein Wasserstoffatom repräsentiert, kann leicht im Handel erhalten werden. Auch Aminosäuren mit einem durch ein Carbobenzoxyradikal bzw. ein tert-Butoxycarbonylradikal geschützten Aminoradikal oder andere Aminosäuren mit geschützten Seitenketten sind leicht im Handel erhältlich.
Ferner kann eine Aminosäure mit einem durch ein Methoxysuccinylradikal geschützten Aminoradikal aus einem Monomethylsuccinatester, welcher leicht im Handel erhältlich ist, und einer entsprechenden Aminosäure durch eine herkömmliche Peptidbindungs-Bildungsreaktion hergestellt werden.
Eine Ausgangsverbindung nach der Formel (A), wobei R ein Alkylradikal, d.h. eine 4-Nitro-6-Alkylanthranilsäure, repräsentiert, kann durch die folgenden Reaktionen hergestellt werden. Diethylanilin Reaktion (g) Reaktion
Bei der Reaktion (g) wird das Phenolderivat nach der Formel (G) in eine entsprechende Chlorverbindung nach der Formel (H) durch die in Boothroyd et al. (J. CHEM. SOC., Seiten 1504 bis 1508, (1953)) beschriebene Reaktion umgewandelt.
Als nächstes wird bei der Reaktion (h) die Verbindung nach der Formel (H) mit Pentan-2,4-dion und Natriummethoxid umgesetzt, um (2-Alkyl-4,6-dinitrophenyl)-diacetylmethan nach der Formel (J) gemäß eines in Gambhir et al. (J. Indian Chem. Soc., Band 41, Seiten 43 bis 46 (1964)) beschriebenen Verfahrens zu erhalten. Dann wird bei der Reaktion (j) die Verbindung nach der Formel (J) mit konzentrierter Schwefelsäure cyclisiert, um eine Verbindung nach der Formel (K) zu erhalten.
Schließlich wird bei der Reaktion (k) die Verbindung nach der Formel (K) mit einer wässrigen Natriumcarbonatlösung behandelt, wodurch eine 4-Nitro-6-alkylanthranilsäure nach der Formel (A) hergestellt wird.
Die 4H-3,1-Benzoxazin-4-on-Verbindung der Formel (I) der vorliegenden Erfindung weist eine Serin-Protease-inhibierende Wirkung auf. Insbesondere weist die Verbindung der Formel (I) eine stärkere inhibierende Wirkung gegen Elastase, im Einzelnen die menschliche Leukozytenelastase, als gegen andere Serin-Proteasen wie zum Beispiel Chymotrypsin auf.
Die inhibierende Wirkung der Verbindung der vorliegenden Erfindung gegen Enzymreaktionen kann durch das folgende Verfahren in vitro getestet werden.
Wie in Tomashi et al. beschrieben (J. BIOL. CHEM., Band 252, Seiten 1917 bis 1924 (1977)), wird die im menschlichen eitrigen Sputum auftretende Elastase als dasselbe Enzym wie die menschliche Leukozytenelastase betrachtet und ist leicht im Handel erhältlich.
Methozysuccinyl-L-alanyl-L-alanyl-L-prolyl-L-valyl-para-nitroanilid (AAPVpNA) ist als eines der synthetischen Substrate mit hochselektiver Wirkung gegenüber der menschlichen Leukozytenelastase bekannt (Nakajima et al., J. BIOL. CHEM., Band 254, Seiten 4027 bis 4032 (1979)) und leicht im Handel erhältlich.
Das Ausmaß der Hydrolyse von AAPVpNA durch die im menschlichen eitrigen Sputum auftretende Elastase kann einfach durch Messen der Menge des vom AAPVpNA freigesetzten p-Nitroanilins mittels eines Spektralphotometers bestimmt werden. Daraufhin kann durch einen Vergleich des Ausmaßes der Hydrolyse von AAPVpNA durch die im menschlichen eitrigen Sputum auftretende Elastase in Abwesenheit einer zu testenden Verbindung mit dem in Gegenwart der in verschiedenen Konzentrationen zu testenden Verbindung erhaltenen Ausmaß eine zur Inhibierung von 50 % der Elastasereaktion erforderliche Konzentration (IC50) der zu testenden Verbindung bestimmt werden.
Ein dem vorstehend erwähnten ähnlicher in vitro-Test kann auf Chymotrypsin angewandt werden.
Als Chymotrypsin wird im Handel leicht erhältliches α-Chymotrypsin von Rinderpankreas verwendet. Als eines der synthetischen Substrate mit hochselektiver Wirkung gegen Chymotrypsin wird Succinyl-L-alanyl-L-alanyl-L-prolyl-L-phenylalanyl-paranitroanilid (AAPFpNA) verwendet. Das Ausmaß der Hydrolyse von AAPFpNA wird in Abwesenheit einer zu testenden Verbindung oder in Gegenwart der Verbindung in verschiedenen Konzentrationen davon gemessen, wodurch eine zum Inhibieren von 50 % der Enzymreaktion erforderliche Konzentration (IC50) der Verbindung bestimmt werden kann.
Die spezifischen 4H-3,1-Benzoxazin-4-on-Verbindungen der vorliegenden Erfindung und pharmazeutisch verträgliche nicht-toxische Salze davon sind als ein Wirkstoff für Serin-Proteaseinhibierende pharmazeutische Zusammensetzungen von Nutzen.
Die Zusammensetzung umfaßt ein Gemisch einer pharmazeutisch wirksamen Menge einer Verbindung nach der Formel (I) bzw. eines nicht-toxischen Salzes davon und ein pharmazeutisch verträgliches Trägermaterial, beispielsweise einen Arzneimittelträger, ein Lösungs- oder Verdünnungsmittel.
Die Verabreichung der Zusammensetzung der vorliegenden Erfindung kann in Dosierungsformen zur Einnahme durch den Mund, zur parenteralen Anwendung, oder zur Einnahme über die Atemwege erfolgen. Durch den Mund einzunehmende Arzneimittel können in Gestalt von Tabletten, Pillen, Kügelchen, Körnchen, Pulver, flüssigen Dispersionen oder Kapseln hergestellt werden. Arzneimittel zur parenteralen Anwendung können in Form einer Salbe, einer Creme oder eines Gels auf der Haut oder unter der Haut eingesetzt werden. Die über die Atemwege einzunehmende Form des Arzneimittels kann als Aerosol oder mittels einer geeigneten Zerstäubervorrichtung über die Atemwege verabreicht werden.
Die Tabletten der Zusammensetzung der vorliegenden Erfindung, welche als eine pharmazeutisch wirksame Komponente die Verbindung nach der Formel (I) der vorliegenden Erfindung oder Salze davon enthält, können durch Mischen der Verbindung bzw. des Salzes der vorliegenden Erfindung mit einem Arzneimittelträger, beispielsweise Milchzucker, Stärke oder kristalline Cellulose und, falls erforderlich, einem Bindemittel, beispielsweise Carboxymethylcellulose, Methylcellulose und Polyvinylpyrrolidon, und/oder einem Sprengmittel, beispielsweise Natriumalginat oder Natriumhydrogencarbonat, und durch Formen bzw. Ausbilden der Mischung in Tablettengestalt auf herkömmliche Art hergestellt werden.
Die als Flüssigkeiten oder Dispersionen ausgebildeten Arzneimittel können durch Mischen beispielsweise eines Glykolesters oder Ethylalkohols mit dem Wirkstoff unter Anwendung einer herkömmlichen Methode auf die Mischung hergestellt werden.
Das Arzneimittel in Kapselform kann durch Mischen von den Wirkstoff enthaltenden Körnchen oder Pulver oder Flüssigkeit mit einem kapselbildenden Material, beispielsweise Gelatine, und durch Anwenden eines kapselbildenden Verfahrens auf die Mischung hergestellt werden.
Eine Injektionsflüssigkeit kann durch Auflösen des Wirkstoffs in einem gemäß der Art der Flüssigkeit, d.h. einer wässrigen oder wasserfreien Lösung, beispielsweise einer physiologischen Kochsalzlösung, Ethylalkohol, oder Propylenglykol, gewählten Lösemittel und, falls erforderlich, durch Zugeben eines Antiseptikums und eines Stabilisierungsmittels zu der Lösung hergestellt werden.
Suppositorien werden in der üblichen Zäpfchenform, beispielsweise als den Wirkstoff enthaltende weiche Gelatinekapseln, verwendet.
Eine Salbe oder Creme kann aus dem Wirkstoff und einem erforderlichen Trägermaterial durch ein herkömmliches Verfahren hergestellt werden.
Ein als Aerosol dosiertes Arzneimittel kann aus dem Wirkstoff, einem pharmazeutisch verträglichen, oberflächenaktiven Agens, welches beispielsweise aus einer Fettsäure mit 6 bis 22 Kohlenstoffatomen, einem Fettsäure-Polyalkoholester oder einem cyclischen Anhydrid davon erzeugt wird, und einem Zerstäubungsmittel, beispielsweise Alkan mit 5 oder weniger Kohlenstoffatomen oder fluoriertes Alkan, hergestellt werden.
Wenn eine die spezifische 4H-3,1-Benzoxazin-4-on-Verbindung der vorliegenden Erfindung enthaltende pharmazeutische Zusammensetzung für einen zu Behandelnden verordnet wird, richtet sich die Dosiermenge nach dem Zustand des Patienten und der Verabreichungsmethode des Arzneimittels. Üblicherweise wird die pharmazeutische Zusammensetzung bevorzugt in einer Menge von 1 bis 100 mg des Wirkstoffs für einen Erwachsenen pro Tag verordnet. Außerdem wird die pharmazeutische Zusammensetzung der vorliegenden Erfindung zum einmaligen Einnehmen oder vorzugsweise zum Einnehmen in regelmäßigen Abständen zwei- bis viermal am Tag verordnet.
Die vorliegende Erfindung wird durch die folgenden Beispiele genauer erläutert.

Beispiel 1

Herstellung von 7-(N-Carbobenzoxy-L-prolyl)-amino-2-trifluoromethyl-4H-3,1-benzoxazin-4-on

In Beispiel 1 wurden die folgenden Verfahren durchgeführt:

(A) Synthese von 4-Nitro-N-trifluoroacetylanthranilsäure

4-Nitroanthranilsäure wurde in einer Menge von 18,2 g in 50 ml Trifluoressigsäure gelöst und die erhaltene Lösung auf eine Temperatur von 0º C abgekühlt. Der abgekühlten Lösung wurden 20 ml Trifluoroessigsäureanhydrid tropfenweise zugefügt und die Mischung bei allmählichem Erwärmen auf Raumtemperatur 2 Stunden lang gerührt. Die erhaltene Reaktionsflüssigkeit wurde auf Eis gegossen und der erhaltene Niederschlag durch Filtrieren gesammelt, mit kaltem Wasser gewaschen und dann getrocknet. Das erhaltene Rohprodukt wurde in einer Menge von 27 g aus einem Ethylacetat-Hexan-Lösemittelgemisch umkristallisiert. Die entstandene 4-Nitro-N-trifluoroacetylanthranilsäure wurde in einer Menge von 25,1 g erhalten und wies einen Schmelzpunkt von 198º C auf.

(B) Synthese von 4-Amino-N-trifluoroacetylanthranilsäure

4-Nitro-N-trifluoroacetylanthranilsäure wurde in einer Menge von 5,24 g in 100 ml Ethylalkohol gelöst, der entstandenen Lösung wurden 2 g eines 10prozentigen Palladium-Kohlenstoff- Katalysators zugegeben und die erhaltene Mischung 2,5 Stunden lang bei Raumtemperatur in einem Wasserstoffgasstrom gerührt. Das erhaltene Reaktionsgemisch wurde durch einen Celite-Filter (Handelsname, hergestellt von Johns Manville Sales) gefiltert und der Katalysator im Celite-Filter mit Ethylalkohol gewaschen. Die gesamte Menge des Filtrats wurde gesammelt, konzentriert und unter vermindertem Druck in trockenem Zustand verfestigt, und das entstandene Rohprodukt wurde in einer Menge von 4,7 g aus einem Ethylalkohol-Hexan- oder einem Ethylalkohol-Wasser-Lösemittelgemisch umkristallisiert.
Die erhaltene 4-Amino-N-trifluoroacetylanthranilsäure wurde in einer Menge von 4,25 g gesammelt und wies einen Schmelzpunkt von 228º C auf.

(C) Synthesae von 4-(N-Carbobenzoxy-L-prolyl)-amino-N-trifluoroacetylanthranilsäure

Eine Lösung wurde durch Lösen von 249 mg N-Carbobenzoxy-L- prolin und 101,2 mg N-Methylmorpholin in 5 ml getrocknetem Tetrahydrofuran hergestellt und die erhaltene Lösung auf eine Temperatur von -15º C abgekühlt. Die Lösung wrde mit 136,6 mg Isobutylchlorformiat gemischt, die entstandene Mischung 2 Minuten lang bei einer Temperatur von -15ºC bis -10ºC gerührt und eine Lösung von 250 mg 4-Amino-N-trifluoroacetylanthranilsäure und 101,2 mg N-Methylmorpholin in 2 ml getrocknetem Tetrahydrofuran danach tropfenweise der Mischung zugegeben. Das entstandene Reaktionsgemisch wurde eine Stunde lang bei einer Temperatur von -15ºC bis -10ºC gerührt, allmählich auf Raumtemperatur erwärmt und dann 18 Stunden lang bei Raumtemperatur gerührt. Der erhaltene Niederschlag wurde durch Filtrieren entfernt, das Filtrat unter vermindertem Druck konzentriert und ein öliges Produkt erhalten. Das ölige Produkt wurde in Ethylacetat gelöst und die entstandene Lösung mit einer gesättigten Salzlösung gewaschen. Die entstandene Ethylacetatschicht wurde mit wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck konzentriert, wodurch 240 mg eines hellgelben öligen Produkts erhalten wurden. Dieses ölige Rohprodukt wurde durch Silicagel-Säulenchromatographie gereinigt. Diese gereinigte ölige 4-(N-Carbobenzoxy-L-prolyl)-amino-N-trifluoroacetylanthranilsäure wurde in einer Menge von 110 mg erhalten.

(D) Synthese von 7-(N-Carbobenzoxy-L-prolyl)-amino-2-trifluoromethyl-4H-3,1-benzoxazin-4-on

100 mg 4-(N-Carbobenzoxy-L-prolyl)-amino-N-trifluoroacetylanthranilsäure wurden in 1 ml trockenen Ethylacetat gelöst und die solchermaßen hergestellte Lösung auf eine Temperatur von 0º C abgekühlt. Die Lösung wurde mit 49 mg N,N'-Dicyclohexylcarbodiimid gemischt und die entstandene Mischung bei einer Temperatur von 4º C 18 Stunden lang gerührt. Der entstandene, aus N,N'-Dicyclohexylharnstoff bestehende und von der Mischung getrennte Niederschlag wurde durch Filtration entfernt.
Das Filtrat wurde unter vermindertem Druck konzentriert und eine hellgelbe, ölige Substanz in einer Menge von 90 mg erhalten. Diese ölige Rohsubstanz wurde durch eine Silicagel- Säulenchromatographie gereinigt und aus einem Ethylacetat- Hexan-Lösemittelgemisch umkristallisiert. Das gereinigte 7-(N-Carbobenzoxy-L-prolyl)-amino-2-trifluoromethyl-4H-3,1-benzoxazin-4-on wurde in einer Menge von 12 mg erhalten und wies einen Schmelzpunkt von 68 bis 70º C auf.
¹H - NMR (CDCl&sub3;, δ ppm)
1,8 - 2,1 (4H, m) 3,35 - 3,65 (2H, m)
5,15 - 5,3 (1H, m) 5,23 (2H, s)
7,39 (5H, s) 7,2 - 7,6 (2H, m)
8,14 (1H, d, J = 8,8 Hz)
8,6 - 8,7 (1H, m)
Andere in Tabelle 1 gezeigte 7-(N-A-Y)-Amino-2-trifluoromethyl-4H-3,1-benzoxazin-4-on-Verbindungen können durch dasselbe Verfahren wie oben beschrieben hergestellt werden, außer daß in dem vorstehend genannten Schritt (C) das N-Carbobenzoxy-L-prolin durch die den in Tabelle 1 gezeigten (N-A-Y)-Radikalen entsprechenden N-Carbobenzoxyaminosäuren ersetzt wurde. Tabelle 1 7-(N-A-Y)-Amino-2-trifluoromethyl- 4H-3,1-benzoxazin-4-on-Verbindung 7-(N-A-Y)-Radikal 7-(N-Carbobenzoxy-L-alanyl) 7-(N-Carbobenzoxy-glycyl) 7-(N-Carbobenzoxy-L-isoleucyl) 7-(N-Carbobenzoxy-L-leucyl) 7-(N-Carbobenzoxy-L-phenylalanyl) 7-(N-Carbobenzoxy-L-valyl) 7-(N-Carbobenzoxy-L-norvalyl) 7-(N-Carbobenzoxy-L-norleucyl) 7-(N-Carbobenzoxy-L-phenylglycyl) 7-(N-α,N-&epsi;-dicarbobenzoxy-L-lysyl) 7-(N-Carbobenzoxy-L-aspartyl) 7-(N-Carbobenzoxy-L-glutamyl)

Beispiele 2 bis 14

Herstellung von 7-(N-A-Y)-Amino-2-isopropoxy-4H-3,1-benzoxazin-4-on-Verbindungen

In Beispiel 2 wurden die folgenden Verfahren durchgeführt:

(A) Synthese von 2-Carboisopropoxyamino-4-nitrobenzoesäure

Eine Lösung wurde durch Lösen von 41,23 g 4-Nitroanthranilsäure und 25,30 g N-Methylmorpholin in 600 ml trockenem Tetrahydrofuran und hergestellt und auf eine Temperatur von -10º C abgekühlt. Die Lösung wurde mit 30,65 g Isopropylchlorformiat gemischt und die Mischung auf eine Temperatur von -10º C abgekühlt. Das erhaltene Reaktionsgemisch wurde bei einer Temperatur von 10º C 2 Stunden lang und dann bei Raumtemperatur 60 Stunden lang gerührt. Der in dem Reaktionsgemisch gebildete Niederschlag wurde durch Filtrieren entfernt, das Filtrat konzentriert und unter vermindertem Druck getrocknet, und das entstandene Rohprodukt wurde aus einem Ethylacetat-Hexan-Lösemittelgemisch umkristallisiert. Die entstandene 2-Carboisopropoxyamino-4-nitro-benzoesäure wurde in einer Menge von 55,1 g erhalten und hatte einen Schmelzpunkt von 231º C.

(B) Synthese von 4-Amino-2-carboisopropoxyaminobenzoesäure

Eine Lösung wurde durch Lösen von 13,08 g 2-Carboisopropoxyamino-4-nitrobenzoesäure in 200 ml Ethylalkohol hergestellt und mit 3 g eines 10prozentigen Palladium-Kohlenstoff-Katalysators gemischt. Das erhaltene Reaktionsgemisch wurde bei Raumtemperatur in einer Wasserstoffgasatmosphäre 2 Stunden lang gerührt. Dann wurde das Reaktionsgemisch durch einen Celite-Filter gefiltert und der Katalysator in dem Celite-Filter mit Ethylalkohol gewaschen. Die gesamte Menge des Filtrats wurde gesammelt, konzentriert und unter vermindertem Druck getrocknet, und das erhaltene Rohprodukt wurde aus einem Alkohol-Wasser-Lösemittelgemisch umkristallisiert. Die entstandene 4-Amino-2- carboisopropoxyaminobenzoesäure wurde in einer Ausbeute von 11,3 g erhalten und wies einen Schmelzpunkt von 197º C auf.

(C) Synthese von 2-Carboisopropoxyamino-4-(N-carbobenzoxy-L- prolyl)-aminobenzoesäure

Eine Lösung wurde durch Lösen von 249 mg N-Carbobenzoxy-L- prolin und 101,0 mg N-Methylmorpholin in 5 ml trockenem Tetrahydrofuran hergestellt und auf eine Temperatur von -15º C abgekühlt. Die Lösung wurde mit 136,6 mg Isopropylchlorformiat gemischt und die Mischung bei einer Temperatur von -15º C bis -10º C 2 Minuten lang gerührt. Dann wurde eine Lösung von 238 mg 4-Amino-2-carboisopropoxyaminobenzoesäure und 101,2 mg N-Methylmorpholin in 2 ml trockenem Tetrahydrofuran tropfenweise der vorstehend genannten Mischung zugegeben. Das entstandene Reaktionsgemisch wurde bei einer Temperatur von -15º C bis -10º C eine Stunde lang gerührt, allmählich auf Raumtemperatur erwärmt und dann bei Raumtemperatur 18 Stunden lang gerührt. Der dadurch entstandene, in dem Reaktionsgemisch erzeugte Niederschlag wurde durch Filtrieren entfernt, das Filtrat wurde unter vermindertem Druck konzentriert, und eine ölige gelbe Substanz wurde erhalten.
Die ölige Substanz wurde in Ethylacetat gelöst, die Lösung mit einer 1N-Salzsäure und einer gesättigten Salzlösung gewaschen, die entstandene Ethylacetatfraktion wurde mit wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet, unter vermindertem Druck konzentriert, und eine hellgelbe ölige Substanz wurde in einer Menge von 680 mg erhalten.
Die ölige Substanz wurde durch eine Silicagel-Säulenchromatographie gereinigt. Die erhaltene gereinigte Menge von 125 mg 2-Carboisopropoxyamino-4(N-carbobenzoxy-L-prolyl)-aminobenzoesäure wies einen Schmelzpunkt von 115º C auf.

(D) Synthese einer 7-(N-Carbobenzoxy-L-prolyl)-amino-2-isopropoxy-4H-3,1-benzoxazin-4-on-Verbindung

Eine Lösung wurde durch Lösen von 82 mg 2-Carboisopropoxyamino-4-(N-carbobenzoxy-L-prolyl)-aminobenzoesäure in 1 ml trockenem Ethylacetat hergestellt und auf eine Temperatur von 0º C abgekühlt. Die Lösung wurde mit 40 mg N,N'-Dicyclohexylcarbodiimid gemischt und das entstandene Reaktionsgemisch auf Raumtemperatur erwärmt und 18 Stunden lang gerührt. Der erhaltene, aus N,N'-Dicyclohexylharnstoff bestehende Niederschlag wurde durch Filtrieren entfernt und das übrige Filtrat wurde unter vermindertem Druck konzentriert, wodurch 100 mg einer hellgelben öligen Rohsubstanz erhalten wurden. Die ölige Rohsubstanz wurde durch eine Silicagel-Säulenchromatographie gereinigt und dann aus einem Ethylacetat-Hexan-Lösemittelgemisch umkristallisiert.
Ein gereinigtes 7-(N-Carbobenzoxy-L-prolyl)-amino-2-isopropoxy-4H-3,1-benzoxazin-4-on wurde in einer Ausbeute von 22 mg erhalten und wies einen Schmelzpunkt von 84º C auf.
¹H - NMR (CDCl&sub3;, δ ppm)
1,43 (6H, d, J = 6,1 Hz) 1,8 - 2,1 (4H, m)
3,4 - 3,6 (2H, m) 4,4 - 4,6 (1H, m)
5,2 - 5,35 (1H, m) 5,23 (2H, s)
7,2 - 7,4 (6H, m) 7,7 (1H, m)
8,00 (1H, d, J = 8,8 Hz) 9,7 - 9,85 (1H, m)
In jedem der Beispiele 3 bis 14 wurden dieselben wie die in Beispiel 2 beschriebenen Verfahren durchgeführt, mit der folgenden Ausnahme.
Bei dem vorstehend beschriebenen Schritt (C) wurde eine Aminosäure mit einer Schutzgruppe, beispielsweise einer N-Carbobenzoxyaminosäure, N-Acetylaminosäure oder N-tert-Butoxycarbonylaminosäureverbindung wie in Tabelle 2 gezeigt anstelle des N-Carbobenzoxy-L-prolins verwendet. Die erhaltene 4-(N-A-Y)- Amino-2-carboisopropoxyaminobenzoesäure wurde ohne Reinigung direkt dem nächsten Schritt (D) unterzogen. Tabelle 2 Beispiel Nr. Durch ein Aminoradikal geschützte Aminosäure N-Carbobenzoxy-L-alanin N-Carbobenzoxy-L-valin N-Carbobenzoxy-L-phenylalanin N-α,N-&epsi;-Dicarbobenzoxy-L-lysin N-Carbobenzoxy-L-glutaminsäure-(γ-benzylester) N-Carbobenzoxy-D-phenylalanin N-tert-Butoxycarbonyl-L-phenylalanin N-tert-Butoxycarbonyl-L-prolin N-Acetyl-L-prolin N-Carbobenzoxy-L-alanyl-L-prolin N-Carbobenzoxy-L-prolyl-L-valin N-Carbobenzoxy-L-phenylalanyl-L-valin
Außerdem wurde bei dem oben beschriebenen Schritt (D) eine von der in Tabelle 2 gezeigten, durch ein Aminoradikal geschützte Aminosäureverbindung erhaltene 2-Carboisopropoxyamino-4- (N-A-Y)-aminobenzoesäure anstelle der 2-Carboisopropoxyamino-4-(N-carbobenzoxy-L-prolyl)-aminobenzoesäure verwendet.
Die Art des 7-(N-A-Y)-Radikals und der Schmelzpunkt der erhaltenen 7-(N-A-Y)-Amino-2-isopropoxy-4H-3,1-benzoxazin-4-on-Verbindung sind in Tabelle 3 gezeigt. Tabelle 3 7-(N-A-Y)-Amino-2-isopropoxy-4H-3,1-benzoxazin- 4-on-Verbindung Beispiel Nr. N-(N-A-Y)-Radikal Schmelzpunkt (ºC) 7-(N-Carbobenzoxy-L-prolyl) 7-(N-Carbobenzoxy-L-alanyl) 7-(N-Carbobenzoxy-L-valyl) 7-(N-Carbobenzoxy-L-phenylalanyl) 7-(N-α,N-&epsi;-Dicarbobenzoxy-L-Lysyl) 7-(N-Carbobenzoxy-L-glutamyl) 7-(N-Carbobenzoxy-D-phenylalanyl) 7-(N-tert-Butoxycarbonyl-L-phenylalanyl) 7-(N-tert-Butoxycarbonyl-L-prolyl) 7-(N-Acetyl-L-prolyl) 7-(N-Carbobenzoxy-L-alanyl-L-prolyl) 7-(N-Carbobenzoxy-L-prolyl-L-valyl) 7-(N-Carbobenzoxy-L-phenylalanyl-L-valyl) (Benzylester)
Andere 7-(N-A-Y)-Amino-2-isopropoxy-4H-3,1-benzoxazin-4-on- Verbindungen wie in Tabelle 4 angegeben können durch dieselben Verfahren wie vorstehend beschrieben hergestellt werden, außer daß bei dem obengenannten Schritt (C) das N-Carbobenzoxyprolin durch die den in Tabelle 4 angegebenen (N-A-Y)-Radikalen entsprechenden Aminosäureverbindungen ersetzt wurde. Tabelle 4 7-(N-A-Y)-Amino-2-isopropoxy-4H-3,1- benzoxazin-4-on-Verbindung 7-(N-A-Y)-Radikal 7-(N-Carbobenzoxyglycyl) 7-(N-Carbobenzoxy-L-isoleucyl) 7-(N-Carbobenzoxy-L-leucyl) 7-(N-Carbobenzoxy-L-norvalyl 7-(N-Carbobenzoxy-L-norleucyl) 7-(N-Carbobenzoxy-L-phenylglycyl) 7-(N-Carbobenzoxy-L-aspartyl)

Beispiel 15

Herstellung von 7-(N-Carbobenzoxy-L-phenylalanyl)-amino-2-isopropoxy-5-methyl-4H-3,1-benzoxazin-4-on-Verbindungen

In Beispiel 15 wurden die folgenden Verfahren durchgeführt:

(A) Synthese von 2-Carboisopropoxyamino-6-methyl-4-nitrobenzoesäure

Eine Lösung wurde durch Lösen von 5,3 g 6-Methyl-4-nitroanthranilsäure und 3,1 g N-Methylmorpholin in 20 ml trockenem Tetrahydrofuran hergestellt und auf eine Temperatur von -10º C abgekühlt. Die Lösung wurde mit 3,7 g Isopropylchlorformiat gemischt und das erhaltene Reaktionsgemisch bei einer Temperatur von 10º C 2 Stunden lang und dann bei Raumtemperatur 60 Stunden lang gerührt. Der in dem Reaktionsgemisch ausgefällte Niederschlag wurde durch Filtrieren entfernt und das übrige Filtrat konzentriert und unter vermindertem Druck getrocknet. Das entstandene Rohprodukt wurde aus einem Ethylacetat- Hexan-Lösemittelgemisch umkristallisiert.
Eine gereinigte 2-Carboisopropoxyamino-6-methyl-4-nitrobenzoesäure wurde in einer Ausbeute von 5,3 g erhalten.

(B) Synthese von 4-Amino-2-carboisopropoxyamino- 6-methyl-benzoesäure

Eine Lösung wurde durch Lösen von 5,3 g 2-Carboisopropoxyamino-6-methyl-4-nitrobenzoesäure in 100 ml Ethylalkohol hergestellt und die Lösung dann mit 1 g eines 10prozentigen Palladium-Kohlenstoff-Katalysators gemischt. Das Reaktionsgemisch wurde bei Raumtemperatur in einer Wasserstoffgasatmosphäre 2 Stunden lang gerührt und die Mischung durch einen Celite-Filter gefiltert und der Katalysator in dem Celite-Filter mit Ethylalkohol gewaschen. Die gesamte Menge des Filtrats wurde gesammelt, konzentriert und unter vermindertem Druck getrocknet, und das erhaltene Rohprodukt wurde aus einem Ethylacetat-Hexan-Lösemittelgemisch umkristallisiert.
4-Amino-2-carboisopropoxyamino-6-methyl-benzoesäure wurde in einer Menge von 4,05 g erhalten.

(C) Synthese von 2-Carboisopropoxyamino-4-(N-carbobenzoxy-L- phenylalanyl)-amino-6-methylbenzoesäure

Eine Lösung wurde durch Lösen von 599 mg N-Carbobenzoxy-L- phenylalanin und 202,4 mg N-Methylmorpholin in 2 ml trockenem Tetrahydrofuran hergestellt und auf eine Temperatur von -15º C abgekühlt. Die Lösung wurde mit 237,2 mg Isobutylchlorformiat gemischt und die entstandene Mischung bei einer Temperatur von -15º C bis -10º C 2 Minuten lang gerührt. Dann wurde eine Lösung von 505 mg 4-Amino-2-carboisopropoxyamino-6-methylbenzoesäure und 202,4 mg N-Methylmorpholin in 2 ml trockenem Tetrahydrofuran tropfenweise der Mischung zugegeben, das entstandene Reaktionsgemisch bei einer Temperatur von -15º C bis -10º C eine Stunde lang gerührt, allmählich auf Raumtemperatur erwärmt und dann bei Raumtemperatur noch 18 Stunden lang gerührt. Der dadurch entstandene, in dem Reaktionsgemisch erzeugte Niederschlag wurde durch Filtrieren entfernt und das übrige Filtrat unter vermindertem Druck konzentriert, wodurch eine ölige gelbe Substanz erhalten wurde.
Diese ölige Substanz wurde in Ethylacetat gelöst und die entstandene Lösung mit einer 1N-Salzsäure und dann mit einer gesättigten Salzlösung gewaschen. Die entstandene Ethylacetatschicht wurde mit wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck konzentriert, wodurch 683 mg einer hellgelben öligen Substanz erhalten wurden. Die ölige Rohsubstanz wurde durch eine Silicagel-Säulenchromatographie gereinigt.
2-Carboisopropoxyamino-4-(N-carbobenzoxy-L-phenylalanyl)-amino-6- methylbenzoesäure wurde in einer Menge von 273 mg erhalten.

(D) Synthese von 7-(N-Carbobenzoxy-L-phenylalanyl)-amino- 2-isopropoxy-5-methyl-4H-3,1-benzoxazin-4-on

Eine durch Lösen von 267 mg 2-Carboisopropoxyamino-4-(N-carbobenzoxy-L-phenylalanyl)-amino-5-methylbenzoesäure in 2 ml trokkenem Tetrahydrofuran hergestellte Lösung wurde auf eine Temperatur von 0º C abgekühlt. Die Lösung wurde mit 113,5 mg N,N'- Dicyclohexylcarbodiimid gemischt und die entstandene Mischung auf Raumtemperatur erwärmt und 18 Stunden lang gerührt. Der erhaltene, aus N,N'-Dicyclohexylharnstoff bestehende Niederschlag wurde durch Filtrieren entfernt und das übrige Filtrat unter vermindertem Druck konzentriert, wodurch 300 mg einer hellgelben öligen Rohsubstanz erhalten wurden. Die ölige Rohsubstanz wurde durch eine Silicagel-Säulenchromatographie gereinigt und dann aus einem Ethylacetat-Hexan-Lösemittelgemisch umkristallisiert.
7-(N-Carbobenzoxy-L-phenylalanyl)-amino-2-isopropoxy-5-methyl- 4H-3,1-benzoxazin-4-on wurde in einer Menge von 120 mg erhalten.
Schmelzpunkt: 137º C
¹H - NMR (CDCl&sub3;, δ ppm)
1,41 (6H, d, J = 6,2 Hz) 2,66 (3H, s)
3,16 (2H, d, J = 7,0 Hz) 4,45 - 4,75 (1H, m)
5,12 (2H, m) 5,2 - 5,5 (2H, m)
6,9 - 7,0 (1H, m) 7,32 (10H, s)
7,44 (1H, d, J = 2,0 Hz) 7,95 - 8,1 (1H, m)
IR (KBr, cm&supmin;¹):
3300, 1760, 1680, 1640, 1595, 1535, 1305, 905
Die 7-(N-A-Y)-Amino-2-isopropoxy-5-methyl-4H-3,1-benzoxazin-4-on-Verbindungen wie in Tabelle 5 angegeben können durch dieselben Verfahren wie oben beschrieben hergestellt werden, außer daß bei dem vorstehend genannten Schritt (C) das N-Carbobenzoxy-L-phenylalanin durch eine von einem Aminoradikal geschützte Aminosäure, beispielsweise N-Carbobenzoxyaminosäuren, N-tert-Butoxycarbonylaminosäuren und N-Acetylaminosäuren, entsprechend den in Tabelle 5 angegebenen (N-A-Y)-Radikalen, ersetzt wird. Tabelle 5 7-(N-A-Y)-Amino-2-isopropoxy-5-methyl-4H-3,1-benzoxazin-4-on-Verbindung 7-(N-A-Y)-Radikal 7-(N-Carbobenzoxy-L-alanyl) 7-(N-Carbobenzoxyglycyl) 7-(N-Carbobenzoxy-L-isoleucyl) 7-(N-Carbobenzoxy-L-leucyl) 7-(N-Carbobenzoxy-L-prolyl) 7-(N-Carbobenzoxy-L-valyl) 7-(N-Carbobenzoxy-L-norvalyl) 7-(N-Carbobenzoxy-L-norleucyl) 7-(N-Carbobenzoxy-L-phenylglycyl) 7-(N-α,N-&epsi;-Dicarbobenzoxy-L-lysyl) 7-(N-Carbobenzoxy-L-aspartyl) 7-(N-Carbobenzoxy-L-glutamyl) 7-(N-Carbobenzoxy-D-phenylalanyl) 7-(N-tert-Butoxycarbonyl-L-phenylalanyl) 7-(N-tert-Butoxycarbonyl-L-prolyl) 7-(N-Acetyl-L-prolyl) 7-(N-Carbobenzoxy-L-alanyl-L-prolyl) 7-(N-Carbobenzoxy-L-prolyl-L-valyl) 7-(N-Carbobenzoxy-L-phenylalanyl-L-valyl)

Beispiel 16

Herstellung einer 7-(N-Carbobenzoxy-L-phenylalanyl)-amino- 2-isopropylamino-4H-3,1-benzoxazin-4-on-Verbindung

In Beispiel 16 wurden die folgenden Verfahren durchgeführt:

(A) Synthese von Methyl-2-(3-isopropylureido)-4-nitrobenzoat

Ein Reaktionsgemisch wurde durch Lösen von 5,4 g 4-Nitroanthranilsäure in 50 ml trockenem Tetrahydrofuran und Zugeben von 4,09 g Isopropylisocyanat zu der Lösung hergestellt. Das Reaktionsgemisch wurde erwärmt, während es unter Rückfluß 5 Stunden lang in einer Stickstoffgasatmosphäre gekocht wurde, und das erhaltene Reaktionsgemisch wurde unter vermindertem Druck konzentriert. Die entstandene rohe 2-(3-Isopropylureido)- 4-nitrobenzoesäure wurde in einem Tetrahydrofuran-Aceton-Lösemittelgemisch gelöst und die erhaltene Lösung auf eine Temperatur von 0º C abgekühlt. Dieser Lösung wurde eine Lösung von Diazomethan in Ether allmählich zugegeben. Nach Bestätigung des Reaktionsendes durch eine Dünnschichtchromatographie wurde das Lösemittel entfernt und der erhaltene Rückstand durch eine Silicagel-Säulenchromatographie gereinigt. Methyl-2-(3-isopropylureido)-4-nitrobenzoat wurde in einer Menge von 2,13 g erhalten.
Schmelzpunkt: 201 bis 203º C (Hexan-Ethylacetat)
¹H - NMR (CDCl&sub3;, δ ppm)
1,24 (6H, d, J = 6,4 Hz) 3,97 (3H, s)
3,8 - 4,1 (1H, m, ) 4,4 - 4,7 (1H, m)
7,71 (1H, dd, J = 8,8, 2,2 HZ)
8,12 (1H, d, J = 8,8 Hz)
9,47 (1H, d, J = 2,2 Hz) 10,32 (1H, br, d)
IR (KBr, cm&supmin;¹):
3325, 2980, 1715, 1650, 1560, 1540, 1430, 1350,1260

(B) Synthese von Methyl-2-( 3-isopropylureido)-4-aminobenzoat

Eine Lösung von 99 mg Methyl-2-(3-isopropylureido)-4-nitrobenzoat in 20 ml Ethylacetat wurde mit 60 mg eines 10prozentigen Pd-C-Katalysators gemischt und das erhaltene Reaktionsgemisch wurde bei Raumtemperatur in einer Wasserstoffgasatmosphäre eine Stunde lang gerührt. Danach wurde das Reaktionsgemisch zur Entfernung des Katalysators filtriert und das Filtrat unter vermindertem Druck konzentriert. Das erhaltene Rohprodukt wurde durch eine Silicagel-Säulenchromatographie gereinigt. Methyl-2-(3-isopropylureido)-4-aminobenzoat wurde in einer Menge von 81 mg erhalten.
¹H - NMR (CDCl&sub3;, δ ppm)
1,19 (6H, d, J = 6,4 Hz) 3,82 (3H, s)
3,7 - 4,3 (3H, m, ) 4,4 - 4,7 (1H, m)
6,19 (1H, dd, J = 8,8, 2,4 Hz)
7,77 (1H, d, J = 8,8 Hz)
7,87 (1H, d, J = 2,4 Hz)
10,47 (1H, br s)
IR (KBr, cm&supmin;¹): 3450, 3310, 1695, 1655, 1615, 1580, 1550, 1260

(C) Synthese von 2-Isopropylamino-7-amino-4H-3,1-benzoxazin-4-on

Eine durch Lösen von 98 mg Methyl-2-(3-isopropylureido)-4- aminobenzoat in 1 ml einer konzentrierten Schwefelsäure wurde bei Raumtemperatur eine Stunde lang gerührt. Die Lösung wurde allmählich einer Lösung aus Natriumhydrogencarbonat in 5 ml Ethylacetat und 5 ml Wasser tropfenweise zugegeben, während die Mischung gerührt und mit Eis gekühlt wurde. Das Reaktionsgemisch wurde durch weiteres Zugeben von Natriumhydrogencarbonat neutralisiert und danach mit Ethylacetat extrahiert. Die entstandene organische Schicht wurde mit einer gesättigten Salzlösung gewaschen und dann mit wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet. Diese organische Phase wurde unter vermindertem Druck konzentriert und das erhaltene Rohprodukt durch eine Silicagel-Säulenchromatographie gereinigt. Das gereinigte 2-Isopropylamino-7-amino-4H-3,1-benzoxazin-4-on wurde in einer Menge von 47 mg erhalten.
¹H - NMR (d5-Pyridin, δ ppm)
1,26 (6H, d, J = 6,4 Hz)
4,0 - 4,5 (1H, br, m)
6,5 - 6,8 (2H, br, s)
6,74 (1H, dd, J = 8,6, 2,2 Hz)
6,90 (1H, d, J = 2,2 Hz)
8,09 (1H, d, J = 8,6 Hz)
8,25 - 8,5 (1H, m)

(D) Synthese von 7-(N-Carbobenzoxy-L-phenylalanyl)-amino-2- isopropylamino-4H-3,1-benzoxazin-4-on

Eine durch Lösen von 126 mg N-Carbobenzoxy-L-phenylalanin und 35 ul N-Methylmorpholin in 1 ml trockenem Tetrahydrofuran hergestellte Lösung wurde in einem Stickstoffgasstrom auf eine Temperatur von -17º C abgekühlt. Die Lösung wurde mit 57 ul Isobutylchlorformiat gemischt, die entstandene Mischung bei einer Temperatur von -17º C 3 Minuten lang gerührt, und dann eine Lösung von 92 mg 2-Isopropylamino-7-amino-4H-3,1-benzoxazin-4-on und 46 ul Methylmorpholin in 3,5 ml trockenem Tetrahydrofuran der Mischung allmählich tropfenweise zugegeben. Das erhaltene Reaktionsgemisch wurde bei einer Temperatur von -17º C bis -10º C eine Stunde lang gerührt, allmählich auf Raumtemperatur erwärmt und dann noch 18 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Der entstandene Niederschlag wurde durch Filtrieren aus dem Reaktionsgemisch entfernt und das Filtrat mit Ethylacetat gemischt und nacheinander mit einer 1N-Salzsäure, einer gesättigten wässrigen Natriumhydrogencarbonatsäurelösung und einer gesättigten Salzlösung gewaschen. Die entstandene organische Fraktion der Mischung wurde mit einem wasserfreien Magnesiumsulfat getrocknet und dann unter vermindertem Druck konzentriert. Das erhaltene Rohprodukt wurde durch eine Silicagel-Säulenchromatographie gereinigt. Ein aus 7-(N-Carbobenzoxy-L-phenylalanyl)-amino-2-isopropylamino-4H-3,1-benzoxazin4-on bestehendes Endprodukt wurde in einer Menge von 70 mg erhalten.
Schmelzpunkt 176 - 179º C (n-Hexan-Ethylacetat)
¹H - NMR (CDCl&sub3;, δ ppm)
1,27 (6H, d, J = 6,4 Hz)
3,17 (2H, d, J = 7,0 Hz)
3,85 - 4,30 (1H, m)
4,3 - 4,8 (2H, m)
5,12 (2H, s)
5,34 (1H, br d, J = 7,5 Hz)
7,05 (1H, dd, J = 2,0, 8,6 Hz)
7,25 (5H, s)
7,32 (5H, s)
7,40 (1H, d, J = 2,0 Hz)
7,90 (1H, d, J = 8,6 Hz)
7,75 - 7,9 (1H, br s)
IR (KBr, cm&supmin;¹): 3430, 3210, 2950, 1740, 1615, 1585, 1540, 1275
FD-MS (m/z): 500 (M&spplus;)
EI-MS (m/z): 500 (M&spplus;), 392, 334, 281, 187, 131, 91
Andere in Tabelle 6 angegebene 7-(N-A-Y)-Amino-2-isopropylamino-4H-3,1-benzoxazin-4-on-Verbindungen können durch dieselben Verfahren wie vorstehend genannt hergestellt werden, außer daß im obengenannten Schritt (D) das N-Carbobenzoxy-L-phenylalanin durch eine den in Tabelle 6 angegebenen 7-(N-A-Y)-Radikalen entsprechende N-Carbobenzoxyaminosäure ersetzt wird. Tabelle 6 7-(N-A-Y)-Amino-2-isopropylamino- 4H-3,1-benzoxazin-4-on-Verbindung 7-(N-A-Y)-Radikal 7-(N-Carbobenzoxy-L-phenylalanyl) 7-(N-Carbobenzoxy-L-alanyl) 7-(N-Carbobenzoxyglycyl) 7-(N-Carbobenzoxy-L-isoleucyl) 7-(N-Carbobenzoxy-L-leucyl) 7-(N-Carbobenzoxy-L-prolyl) 7-(N-Carbobenzoxy-L-valyl) 7-(N-Carbobenzoxy-L-norvalyl) 7-(N-Carbobenzoxy-L-norleucyl) 7-(N-Carbobenzoxy-L-phenylglycyl) 7-(N-α,N-&epsi;-Dicarbobenzoxy-L-lysyl) 7-(N-Carbobenzoxy-L-aspartyl) 7-(N-Carbobenzoxy-L-glutamyl)

Beispiel 17

Herstellung einer 7-(N-Carbobenzoxy-L-phenylalanyl)-amino- 5-methyl-2-isopropylamino-4H-3,1-benzoxazin-4-on-Verbindung

In Beispiel 17 wurden die folgenden Verfahren durchgeführt:

(A) Synthese von Methyl-2-(3-isopropylureido)-4-nitro- 6-methylbenzoat

Ein Reaktionsgemisch wurde durch Lösen von 1,0 g 4-Nitro- 6-methylanthranilsäure in 10 ml trockenem Tetrahydrofuran und Zugeben von 1,3 g Isopropylisocyanat zu der Lösung hergestellt. Das Reaktionsgemisch wurde erwärmt, während es unter Rückfluß 20 Stunden lang in einer Stickstoffgasatmosphäre gekocht wurde, und das erhaltene Reaktionsgemisch wurde unter vermindertem Druck konzentriert. Die entstandene rohe 2-(3-Isopropylureido)- 4-nitro-6-methylbenzoesäure wurde in einem Tetrahydrofuran- Methylalkohol-Lösemittelgemisch gelöst und die erhaltene Lösung auf eine Temperatur von 0º C abgekühlt. Dieser Lösung wurde eine Lösung von Diazomethan in Ether allmählich zugegeben. Nach Bestätigung des Reaktionsendes durch eine Dünnschichtchromatographie wurde das Lösemittel entfernt und der erhaltene Rückstand durch eine Silicagel-Säulenchromatographie gereinigt. Methyl-2-(3-isopropylureido)-4-nitro-6-methylbenzoat wurde in einer Menge von 0,36 g erhalten.
Schmelzpunkt: 201 bis 203º C (Hexan-Ethylacetat)
¹H-NMR (CDCl&sub3;, δ ppm)
1,23 (6H, d, J = 6,4 Hz) 2,53 (3H, s)
3,98 (3H, s)
3,75 - 4,15 (1H, m, ) 4,3 - 4,55 (1H, m)
7,66 (1H, d, J = 2,0 HZ)
8,7 - 8,85 (1H, m)
9,03 (1H, d, J = 2,0 Hz)

(B) Synthese von Methyl-2-(3-isopropylureido)-4-amino-6- methylbenzoat

Eine Lösung von 98 mg Methyl-2-(3-isopropylureido)-4-nitro- 6-methylbenzoat in 30 ml Ethylacetat wurde mit 40 mg eines 10prozentigen Pd-C-Katalysators gemischt und das erhaltene Reaktionsgemisch wurde bei Raumtemperatur in einer Wasserstoffgasatmosphäre 4 Stunden lang gerührt. Danach wurde das Reaktionsgemisch zur Entfernung des Katalysators filtriert und das Filtrat unter vermindertem Druck konzentriert. Das erhaltene Rohprodukt wurde durch eine Silicagel-Säulenchromatographie gereinigt. Methyl-2-(3-isopropylureido)-4-amino-6-methylbenzoat wurde in einer Menge von 86 mg erhalten.
¹H - NMR (CDCl&sub3;, δ ppm)
1,18 (6H, d, J = 6,4 Hz) 2,38 (3H, s)
3,83 (3H, s)
3,7 - 4,2 (3H, m), 4,4 - 4,65 (1H, m)
6,10 (1H, d, J = 2,4 Hz)
7,65 (1H, d, J = 2,4 Hz)
9,8 - 10,1 (1H, m,)

(C) Synthese von 2-Isopropylamino-5-methyl-7-amino-4H-3,1- benzoxazin-4-on

Eine durch Lösen von 73 mg Methyl-2-(3-isopropylureido)-4-amino-6-methylbenzoat in 1 ml einer konzentrierten Schwefelsäure wurde bei Raumtemperatur eine Stunde lang gerührt. Die Lösung wurde allmählich einer Lösung von 4 g Natriumhydrogencarbonat in 5 ml Ethylacetat und 5 ml Wasser tropfenweise zugegeben, während die Mischung gerührt und mit Eis gekühlt wurde. Das Reaktionsgemisch wurde durch weiteres Zugeben von Natriumhydrogencarbonat neutralisiert und danach mit Ethylacetat extrahiert. Die entstandene organische Schicht wurde mit einer gesättigten Salzlösung gewaschen und dann mit wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet. Diese organische Phase wurde unter vermindertem Druck konzentriert und das erhaltene Rohprodukt durch eine Silicagel-Säulenchromatographie gereinigt. Das gereinigte 2-Isopropylamino-5-methyl-7-amino-4H-3,1-benzoxazin-4-on wurde in einer Menge von 62 mg erhalten.
¹H - NMR (d5-Pyridin, δ ppm)
1,24 (6H, d, J = 6,4 Hz) 2,75 (3H, m)
4,0 - 4,4 (1H, br, m)
6,2 - 6,6 (3H, br s)
6,65 - 6,8 (1H, br s)
8,0 - 8,3 (1H, m)

(D) Synthese von 7-(N-Carbobenzoxy-L-phenylalanyl)-amino-5- methyl-2-isopropylamino-4H-3,1-benzoxazin-4-on

Eine durch Lösen von 96 mg N-Carbobenzoxy-L-phenylanalin und 35 ul N-Methylmorpholin in 1 ml trockenem Tetrahydrofuran hergestellte Lösung wurde in einem Stickstoffgasstrom auf eine Temperatur von -17º C abgekühlt. Die Lösung wurde mit 44 ul Isobutylchlorformiat gemischt, die entstandene Mischung bei einer Temperatur von -17º C 3 Minuten lang gerührt, und der Mischung dann eine Lösung von 75 mg 2-Isopropylamino-5-methyl- 7-amino-4H-3,1-benzoxazin-4-on und 35 ul Methylmorpholin in 3 ml trockenem Tetrahydrofuran allmählich tropfenweise zugegeben. Das erhaltene Reaktionsgemisch wurde bei einer Temperatur von -17º C bis -10º C eine Stunde lang gerührt, allmählich auf Raumtemperatur erwärmt und dann noch 18 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Der entstandene Niederschlag wurde durch Filtrieren aus dem Reaktionsgemisch entfernt und das Filtrat mit Ethylacetat gemischt und nacheinander mit einer 1N-Salzsäure, einer gesättigten wässrigen Natriumhydrogencarbonatsäurelösung und einer gesättigten Salzlösung gewaschen. Die entstandene organische Fraktion der Mischung wurde mit einem wasserfreien Magnesiumsulfat getrocknet und dann unter vermindertem Druck konzentriert. Das erhaltene Rohprodukt wurde durch eine Silicagel-Säulenchromatographie gereinigt. Ein aus 7-(N-Carbobenzoxy-L-phenylalanyl)-amino-5-methyl-2-isopropylamino-4H-3,1-benzoxazin-4-on bestehendes Endprodukt wurde in einer Menge von 70 mg erhalten.
Schmelzpunkt: 200 - 202º C (n-Hexan-Ethylacetat)
¹H - NMR (CDCl&sub3;, δ ppm)
1,26 (6H, d, J = 6,4 Hz), 2,64 (3H, s)
3,15 (2H, d, J = 6,8 Hz)
3,9 - 4,2 (1H, m)
4,4 - 4,7 (1H, m)
4,8 - 5,0 (1H, m)
5,11 (2H, s)
5,3 - 5,5 (1H, m)
6,89 (1H, d, J = 2,0 Hz)
7,32 (11H, s)
7,8 - 8,2 (1H, m)
FD-MS (m/z): 514 (M&spplus;)
Andere in Tabelle 7 angegebene 7-(N-A-Y)-Amino-5-methyl-2-isopropylamino-4H-3,1-benzoxazin-4-on-Verbindungen können durch dieselben Verfahren wie vorstehend genannt hergestellt werden, außer daß im obengenannten Schritt (D) das N-Carbobenzoxy-L- phenylalanin durch den in Tabelle 7 angegebenen 7-(N-A-Y)-Radikalen entsprechende N-Carbobenzoxy-aminosäuren ersetzt wird. Tabelle 7 7-(N-A-Y)-Amino-5-methyl-2-isopropylamino- 4H-3,1-benzoxazin-4-on-Verbindung 7-(N-A-Y)-Radikal 7-(N-Carbobenzoxy-L-alanyl) 7-(N-Carbobenzoxyglycyl) 7-(N-Carbobenzoxy-L-isoleucyl) 7-(N-Carbobenzoxy-L-leucyl) 7-(N-Carbobenzoxy-L-prolyl) 7-(N-Carbobenzoxy-L-valyl) 7-(N-Carbobenzoxy-L-norvalyl) 7-(N-Carbobenzoxy-L-norleucyl) 7-(N-Carbobenzoxy-L-phenylglycyl) 7-(N-α,N-&epsi;-Dicarbobenzoxy-L-lysyl) 7-(N-Carbobenzoxy-L-aspartyl) 7-(N-Carbobenzoxy-L-glutamyl)

Beispiel 18

Herstellung von 7-(N-Carbobenzoxy-L-phenylalanyl)-amino- 2-methyl-4H-3,1-benzoxazin-4-on-Verbindungen

In Beispiel 18 wurden die folgenden Verfahren durchgeführt:

(A) Synthese von 4-Nitro-N-acetylanthranilsäure

Eine durch Lösen von 1,42 g 4-Nitroacetylanthranilsäure in 5 ml Essigsäureanhydrid hergestellte Lösung wurde erwärmt und bei einer Temperatur von 140º C 2 Stunden lang gerührt. Die erhaltene Reaktionslösung wurde auf Eis gegossen. Der entstandene Niederschlag wurde durch Filtrieren gesammelt, mit kaltem Wasser gewaschen und dann getrocknet. Ein 7-Nitro-2-methyl-4H- 3,1-benzoxazin-4-on enthaltendes Rohprodukt wurde in einer Menge von 1,51 g erhalten. Ein Teil (829 mg) des Rohprodukts wurde in 5 ml Tetrahydrofuran gelöst, die entstandene Lösung mit 2 ml einer wässrigen 1N-Natriumhydroxidlösung gemischt und das Reaktionsgemisch 1,5 Stunden lang unter Rückfluß erhitzt. Das Reaktionsgemisch wurde mit einer 1N-Salzsäure angesäuert und mit Ethylacetat extrahiert. Die erhaltene organische Phase wurde mit einer gesättigten Salzlösung gewaschen und mit wasserfreiem Magnesiuinsulfat getrocknet. Die organische Phase wurde unter vermindertem Druck konzentriert.
Ein aus 4-Nitro-N-acetylanthranilsäure bestehendes Endprodukt wurde in einer Menge von 890 mg erhalten.

(B) Synthese von 4-Amino-N-acetylanthranilsäure

Ein durch Lösen von 575 mg 4-Nitro-N-acetylanthranilsäure in 200 ml Ethylacetat und Mischen der entstandenen Lösung mit 100 mg eines 10prozentigen Pd-C-Katalysators hergestelltes Reaktionsgemisch wurde bei Raumtemperatur in einer Wasserstoffgasatmosphäre 4 Stunden lang gerührt. Dann wurde der Katalysator durch Filtern des Reaktionsgemischs durch einen Celite-Filter entfernt und mit Ethylacetat gewaschen. Die Gesamtmenge des Filtrats wurde gesammelt und unter vemindertem Druck konzentriert, und das erhaltene Rohprodukt wurde durch eine Silicagel-Säulenchromatographie gereinigt. Ein aus 4-Amino-N-acetylanthranilsäure bestehendes Endprodukt wurde in einer Menge von 450 mg erhalten.

(C) Synthese von 2-Acetylamino-4-(N-carbobenzoxy-L- phenylalanyl)-aminobenzoesäure

Eine Lösung wurde durch Lösen von 493 mg N-Carbobenzoxy-L- phenylalanin und 167 mg N-Methylmorpholin in 5 ml trockenem Tetrahydrofuran hergestellt und auf eine Temperatur von -15º C abgekühlt. Die Lösung wurde mit 225 mg Isobutylchlorformiat gemischt und die entstandene Mischung bei einer Temperatur von -15º C bis -10º C 2 Minuten lang gerührt. Dann wurde eine Lösung von 320 mg 4-Amino-N-acetylanthranilsäure und 167 mg N-Methylmorpholin in 10 ml trockenem Tetrahydrofuran und 4 ml trockenem Dimethylsulfoxid tropfenweise der Mischung zugegeben, das entstandene Reaktionsgemisch bei einer Temperatur von -15º C bis -10º C eine Stunde lang gerührt, allmählich auf Raumtemperatur erwärmt und dann bei Raumtemperatur noch 18 Stunden lang gerührt. Der in dem Reaktionsgemisch entstandene Niederschlag wurde durch Filtrieren entfernt und das übrige Filtrat unter vermindertem Druck konzentriert, wodurch eine ölige gelbe Substanz erhalten wurde.
Diese ölige Substanz wurde in Ethylacetat gelöst und die entstandene Lösung mit einer 1N-Salzsäure und dann mit einer gesättigten Salzlösung gewaschen. Die entstandene Ethylacetatfraktion wurde mit wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck konzentriert, wodurch 900 mg einer hellgelben öligen Substanz erhalten wurden. Die ölige Rohsubstanz wurde durch eine Silicagel-Säulenchromatographie gereinigt.
2-Acetylamino-4-(N-carbobenzoxy-L-phenylalanyl)-aminobenzoesäure wurde in einer Menge von 595 mg erhalten.

(D) Synthese von 7-(N-Carbobenzoxy-L-phenylalanyl)- amino-2-methyl-4H-3,1-benzoxazin-4-on

189 mg 2-Acetylamino-4-(N-carbobenzoxy-L-phenylalanyl)-aminobenzoesäure wurden in 10 ml trockenem Tetrahydrofuran gelöst und die solchermaßen hergestellte Lösung auf eine Temperatur von 0º C abgekühlt. Die Lösung wurde mit 167 mg N,N'-Dicyclohexylcarbodiimid gemischt und die entstandene Mischung allmählich auf Raumtemperatur erwärmt und 18 Stunden lang gerührt. Der entstandene, aus N,N'-Dicyclohexxylharnstoff bestehende Niederschlag wurde durch Filtrieren entfernt und das übrige Filtrat unter vermindertem Druck konzentriert, wodurch 261 mg einer hellgelben öligen Substanz erhalten wurden. Diese ölige Rohsubstanz wurde durch eine Silicagel-Säulenchromatographie gereinigt und aus einem Ethylacetat-Hexan-Lösemittelgemisch umkristallisiert.
7-(N-Carbobenzoxy-L-phenylalanyl)-amino-2-methyl-4H-3,1-benzoxazin-4-on wurde in einer Menge von 91 mg erhalten.
¹H - NMR (CDCl&sub3;, δ ppm)
2,42 (3H, s) 3,1 - 3,25 (2H, m)
5,04 (2H, s) 5,2 - 5,6 (2H, m)
7,20 (5H, s) 7,29 (5H, s)
7,1 - 7,55 (3H, m)
7,9 - 8,1 (1H, m)
Andere in Tabelle 7 angegebene 7-(N-A-Y)-Amino-2-methyl- 4H-3,1-benzoxazin-4-on-Verbindungen können durch dieselben Verfahren wie vorstehend genannt hergestellt werden, außer daß im obengenannten Schritt (C) die den in Tabelle 8 angegebenen 7-(N-A-Y)-Radikalen entsprechenden Aminosäureverbindungen anstelle des N-Carbobenzoxy-L-phenylalanins verwendet werden. Tabelle 8 7-(N-A-Y)-Amino-2-methyl- 4H-3,1-benzoxazin-4-on-Verbindung 7-(N-A-Y)-Radikal 7-(N-Carbobenzoxy-L-phenylalanyl) 7-(N-Carbobenzoxy-L-alanyl) 7-(N-Carbobenzoxyglycyl) 7-(N-Carbobenzoxy-L-isoleucyl) 7-(N-Carbobenzoxy-L-leucyl) 7-(N-Carbobenzoxy-L-prolyl) 7-(N-Carbobenzoxy-L-valyl) 7-(N-Carbobenzoxy-L-norvalyl) 7-(N-Carbobenzoxy-L-norleucyl) 7-(N-Carbobenzoxy-L-phenylglycyl) 7-(N-α,N-&epsi;-Dicarbobenzoxy-L-glycyl) 7-(N-Carbobenzoxy-L-aspartyl) 7-(N-Carbobenzoxy-L-glutamyl)

Beispiel 19

Protease-inhibierende Wirkung der 4H-3,1-Benzoxazin-4-on- Verbindung der vorliegenden Erfindung

Die jeweilige inhibierende Wirkung von 7-(N-Carbobenzoxy-L- phenylalanyl)-amino-2-isopropylamino-5-methyl-4H-3,1-benzoxazin- 4-on gegen im menschlichen eitrigen Sputum auftretende Elastase, α-Chymotrypsin, Kathepsin G, Trypsin, Thrombin und Plasmin wurde durch die folgenden Methoden bestimmt und die Ergebnisse sind in Tabelle 9 gezeigt.

(A) Bestimmung der inhibierenden Wirkung gegen im menschlichen eitrigen Sputum auftretende Elastase

Testpuffersubstanz

Die Testpuffersubstanz (pH 7,5) bestand aus 0,1 M N-2-Hydroxyethylpiperazin-N'-2-ethansulfonsäure, 1 M Natriumchlorid und 0,1 Gew.-%/Volumenteile Polyethylenglykol 6000.

Enzym

Im menschlichen eitrigen Sputum vorkommende Elastase wurde von der Elastin Products Co. erhalten und auf 1,5 x 10&supmin;&sup8; M in der Testpuffersubstanz eingestellt.

Substrat

Methoxysuccinyl-L-alanyl-L-prolyl-L-valyl-p-nitroanilid wurde von Bachem Co. erhalten und 10mMolar in Dimethylsulfoxid angesetzt.

Verfahren

Zu 2,4 ml einer Testpuffersubstanz in einer bei 37º C mittels eines temperierbaren Küvettenhalters in ein Spektralphotometer (Hitachi U-3200) eingesetzten Zelle wurden 25 ul der Substratlösung und 25 ul Acetonitril mit oder ohne inhibierende Verbindungen zugegeben und die erhaltene Mischung wurde gerührt. Reaktionen wurden durch Zugeben von 50 ul der Enzymlösung initiiert und die Hydrolyse des Substrats wurde durch Messen der Veränderung der Lichtabsorption bei 410 nm überwacht. Die Konzentration (IC&sub5;&sub0;), bei welcher 50 % der Aktivität der im menschlichen eitrigen Sputum vorkommenden Elastase inhibiert wurde, ließ sich für jede inhibierende Verbindung aufgrund der Geschwindigkeit der Substrathydrolyse im Gleichgewichtszustand bestimmen.

(B) Bestimmung der inhibierenden Wirkung gegen α-Chymotrypsin

Dieselben Verfahren wie die im vorstehenden Punkt (A) beschriebenen bezüglich der im menschlichen Sputum vorkommenden Elastase wurden durchgeführt, mit der folgenden Ausnahme.
Die Enzymtestpufferlösung enthielt 2 x 10&supmin;&sup8; M Rinderpankreas- α-Chymotrypsin (von Sigma Co. erhältlich). Das synthetische Substrat umfaßte Succinyl-L-alanyl-L-alanyl-L-prolyl-L- phenylalanyl-p-nitroanilid (von Bachem Co. erhältlich).
Ein IC&sub5;&sub0;-Wert für das α-Chymotrypsin wurde in derselben Weise wie oben bestimmt.

(C) Bestimmung der inhibierenden Wirkung gegen menschliches Kathepsin G

Dieselben Verfahren wie die im vorstehenden Punkt (A) beschriebenen wurden durchgeführt, mit der folgenden Ausnahme.
Die Enzymtestpufferlösung enthielt 2 pg/ml menschliches Kathepsin G, welches von Protogen Co. erhalten wurde. Das Substrat umfaßte Succinyl-L-alanyl-L-alanyl-L-prolyl-L-phenyl- alanyl-p-nitroanilid (von Bachem Co. erhältlich).
Ein IC&sub5;&sub0;-Wert für das α-Chymotrypsin wurde in derselben Weise wie oben bestimmt.

(D) Bestimmung der inhibierenden Wirkung gegen Trypsin

Dieselben wie die in Punkt (A) beschriebenen Verfahren wurden durchgeführt, außer daß die Enzymtestpufferlösung 8 ug/ml Rinderpankreastrypsin enthielt, welches von Sigma Co. erhalten wurde, und das Substrat bestand aus Benzyl-arginyl-p-nitroanilid (von Bachem Co. erhältlich).
Ein IC&sub5;&sub0;-Wert für das Trypsin wurde in derselben Weise wie oben bestimmt.

(E) Bestimmung der inhibierenden Wirkung gegen Thrombin

-Dieselben wie die in Punkt (A) beschriebenen Verfahren wurden durchgeführt, außer daß die Enzym-Testpufferlösung 0,04 ukat/ml menschliches Thrombin enthielt (von Daiichi Kagaku Yakuhin K.K. erhältlich) und das Substrat aus D-Phenylalanyl-pipecolylarginyl-p-nitroanilid (von Daiichi Kagaku Yakuhin K.K. erhältlich) bestand.
Ein IC&sub5;&sub0;-Wert für das menschliche Thrombin wurde in derselben Weise wie oben erwähnt bestimmt.

(F) Bestimmung der inhibierenden Wirkung gegen Plasmin

Dieselben wie in Punkt (A) beschriebenen Verfahren wurden durchgeführt, außer daß die Enzym-Testpufferlösung 0,6 CasU/ml menschliches Plasmin enthielt (von Daiichi Kagaku Yakuhin K.K. erhältlich) und das Substrat aus D-Valyl-L-leucyl-L-lysyl-p- nitroanilid (von Daiichi Kagaku Yakuhin K.K. erhältlich) bestand.
Ein IC&sub5;&sub0;-Wert für das menschliche Plasmin wurde in derselben Weise wie oben erwähnt bestimmt.
Die Ergebnisse sind in Tabelle Nr. 9 dargestellt. Tabelle 9 Protease-inhibierende Wirkung von 7-(N-Carbobenzoxy-L-phenylalanyl)-amino-2-isopropylamino 5-methyl-4H-3,1-benzoxazin-4-on Enzym Selektivität(*)1 Im menschlichen eitrigen Sputum vorkommende Elastase Rinderpankreas-α-Chymotrypsin Menschliches Kathepsin G Rinderpankreas-Trypsin Menschliches Thrombin Menschliches Plasmin Anmerkung: (*)1 ... "Selektivität" bezieht sich auf das Verhältnis eines IC&sub5;&sub0;-Wertes für jede Protease zu einem IC&sub5;&sub0;-Wert für die im menschlichen eitrigen Sputum vorkommende Elastase.

Beispiele 20 bis 37 und Vergleichsbeispiele 1 bis 4

In jedem der Beispiele 20 bis 37 und der Vergleichsbeispiele 1 bis 4 wurden dieselben wie die in Beispiel 19, Punkte (A) und (B), beschriebenen Versuchsvorgänge für die Feststellung der Enzym-inhibierenden Wirkung verwendet, außer daß die in Tabelle 10 aufgeführte Verbindung als inhibierende Verbindung getestet wurde. Die Ergebnisse sind in Tabelle 10 gezeigt.
In Tabelle 10 bezieht sich der Punkt "Selektivität" auf das Verhältnis eines IC&sub5;&sub0;-Wertes für Rinder-α-Chymotrypsin zu einem IC&sub5;&sub0;-Wert für die im menschlichen eitrigen Sputum vorkommende Elastase. Je größer dieser Verhältniswert, desto höher ist die Selektivität der inhibierenden Wirkung gegen Elastase. Tabelle 10 Inhibierende Verbindung Beispiel Nr. Im menschlichen eitrigen Sputum vorkommende Elastase Rinder-α-Chymotrypsin Selectivität Tabelle 10 Forts. 1 Inhibierende Verbindung Beispiel Nr. Im menschlichen eitrigen Sputum vorkommende Elastase Rinder-α-Chymotrypsin Selectivität Tabelle 10 Forts. 2 Inhibierende Verbindung Beispiel Nr. Im menschlichen eitrigen Sputum vorkommende Elastase Rinder-α-Chymotrypsin Selectivität

Anmerkungen:

(*)&sub1; Z .......... Carbobenzoxyradikal,
(*)&sub2; Pro ........ Prolylradikal
(*)&sub3; OiPr ....... Isopropoxyradikal
(*)&sub4; Ala ........ Alanylradikal
(*)&sub5; Val ........ Valylradikal
(*)&sub6; Phe ........ Phenylalanylradikal
(*)&sub7; Lys(Z) ..... N-&epsi;-Carbobenzoxylysylradikal
(*)&sub8; Glu(OBzl)... Glutaminsäure-γ-benzylester
(*)&sub9; D-Phe ...... D-Phenylalanylradikal
(*)&sub1;&sub0; Boc ........ N-tert-Butoxycarbonylradikal
(*)&sub1;&sub1; Ac ......... Acetylradikal
(*)&sub1;&sub2; NHiPr ...... Isopropylaminoradikal

Beispiel 38

Stabilität der erfindungsgemäßen 4H-3,1-Benzoxazin-4-on- Verbindung im menschlichen Serum

Eine Lösung von 10 mMol 7-(N-Carbobenzoxy-L-phenylalanyl)amino-2-isopropylamino-5-methyl-4H-3,1-benzoxazin-4-on in 50 ul Acetonitril wurde mit 0,45 ml menschlichem Serum gemischt und die entstandene Mischung bei einer Temperatur von 37º C stehengelassen. Die Mischung wurde einer Behandlung mit einer Sep-pac C&sub1;&sub8;-Patrone (Warenzeichen, hergestellt von Waters Co.) zur Eiweißentfernung unterzogen und ein Teil der erhaltenen Acetonitril-eluierten Fraktion wurde einer Hochgeschwindigkeits- Flüssigkeitschromatographie-Analyse unterzogen. In der Analyse wird eine Halbwertszeit der Stabilität der Verbindung durch eine Standzeit bei 37º C repräsentiert, in welcher der Peak- Bereich der Verbindung auf 50 % des ursprünglichen Peak-Bereichs der Verbindung vor dem Stehen bei 37º C abnahm.
Als Ergebnis betrug die Halbwertszeit der Stabilität der getesteten Verbindung im menschlichen Serum 150 Minuten.

INDUSTRIELLE ANWENDBARKEIT

Die spezifischen 4H-3,1-Benzoxazin-4-on-Verbindungen der vorliegenden Erfindung sind als Protease-Inhibitoren, besonders als Elastase-Inhibitoren, von Nutzen und zum Hemmen oder Lindern von Entzündungen, Degeneration und Zerstörung von Gewebe, welche durch Einwirkung von Proteasen, insbesondere von Elastase, auf tierisches und besonders auf menschliches Elastin und andere Proteine verursacht wurden, wirksam.

Claims

1. 4H-3,1-Benzoxazin-4-on-Verbindungen der Formel (I):

worin R einen Rest repräsentiert, der aus der aus einem Wasserstoffatom und Alkylradikalen mit einem bis 6 Kohlenstoffatomen gebildeten Gruppe ausgewählt ist,

worin A einen Rest repräsentiert, der aus Aminosäureresten von optischen D- und L-Isomeren und razemischen Gemischen von Alanin, Asparagin, Asparaginsäure, Cystein, Cystin, Glutaminsäure, Glutamin, Glycin, Histidin, Isoleucin, Leucin, Lysin, Methionin, Phenylalanin, Prolin, Serin, Threonin, Tryptophan, Tyrosin, Valin, Homoserin, Homocystein, Hydroxyprolin, Ornithin, Thyroxin, Norvalin, Norleucin, Phenylglycin, β-Alanin und γ-Aminobuttersäure sowie aus Peptiden mit 2 bis 3 Resten der vorgenannten Aminosäurereste ausgewählt ist, wobei die Aminosäurereste gegebenenfalls eine ihrer Seitenketten durch eine Schutzgruppe geschützt haben,

worin X einen Rest repräsentiert, der aus der aus Alkylradikalen mit 1 bis 8 Kohlenstoffatomen, Fluoroalkylradikalen mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen und Radikalen der Formeln OR¹ und NHR¹ bestehenden Gruppe ausgewählt ist,

wobei R¹ ein Alkylradikal mit einem bis 8 Kohlenstoffatomen repräsentiert,

und worin Y eine Schutzgruppe für ein Aminoradikal repräsentiert;

sowie Salze hiervon.

2. Verbindung nach Anspruch 1, worin die Aminosäurereste oder die in den Peptiden enthaltenen Aminosäurereste, welche durch A in der Formel (1) repräsentiert sind, aus der Gruppe ausgewählt sind, die besteht aus Alanin, Glycin, Isoleucin, Leucin, Phenylalanin, Prolin, Valin, Norvalin, Norleucin, Phenylglycin, Lysin mit einem durch einen Carbobenzoxy-Rest geschütztes &epsi;-Aminoradikal, Asparaginsäure mit einem in Form eines Benzylesters geschützten β-Carboxylradikal und Glutaminsäure mit einem in Form eines Benzylesters geschützten γ-Carboxylradikal.

3. Verbindung nach Anspruch 1, worin die Schutzgruppe des Aminoradikals, welches in Formel (I) durch Y repräsentiert ist, ausgewählt ist aus der aus Carbobenzoxy-, tert-Butoxycarbonyl- und Acetylradikalen bestehenden Gruppe.

4. Verbindung nach Anspruch 1, worin das Alkylradikal, welches durch R in der Formel (I) repräsentiert ist, aus der Gruppe von Methyl- und Ethylradikalen ausgewählt ist.

5. Verbindung nach Anspruch 1, worin das Alkylradikal, welches durch X in der Formel (I) repräsentiert ist, aus der Gruppe ausgewählt ist, die besteht aus Methyl-, Ethyl-, Propyl-, Isopropyl-, Butyl- und Isobutylradikalen.

6. Verbindung nach Anspruch 1, worin das Fluoroalkylradikal, welches durch X in der Formel (I) repräsentiert ist, das Trifluoromethylradikal ist.

7. Verbindung nach Anspruch 1, worin das OR¹-Radikal, welches durch X in der Formel (I) repräsentiert ist, aus der aus den Methoxy-, Ethoxy-, Propoxy-, Isopropoxy-, Butoxy- und Isobutoxyradikalen bestehenden Gruppe ausgewählt ist.

8. Verbindung nach Anspruch 1, worin das durch X in der Formel (I) repräsentierte NHR¹-Radikal aus der aus den Monomethylamino-, Monoethylamino-, Monopropylamino-, Monoisopropylamino-, Monoisopropylamino-, Monobutylamino- und Monoisobutylaminoradikalen bestehenden Gruppe ausgewählt ist.

9. Pharmazeutische Zusammensetzung zum Inhibieren der Serin-Proteasen, umfassend eine Mischung aus einer pharmazeutisch wirksamen Menge der 4H-3,1-Benzoxazin-4-on-Verbindung nach Formel (I) gemäß Anspruch 1 oder eines pharmazeutisch verträglichen, nicht toxischen Salzes hiervon und einem pharmazeutisch verträglichen Trägermaterial.

10. Zusammensetzung nach Anspruch 9, worin die Serin-Protease menschliche Leukozytenelastase ist.